载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物及包含该颗粒物的双肠溶固体制剂、其制备方法及用途.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710212881.7 (22)申请日 2017.04.01 (71)申请人 中国科学院上海药物研究所 地址 201203 上海市浦东新区张江祖冲之 路555号 (72)发明人 甘勇 胡磊 范未伟 郭仕艳 朱春柳 王瑞 (74)专利代理机构 北京金信知识产权代理有限 公司 11225 代理人 张皓 徐琳 (51)Int.Cl. A61K 9/50(2006.01) A61K 47/32(2006.01) A61K 47/38(2006.01) A61K 47/18(2006。

2、.01) A61K 38/28(2006.01) A61K 38/22(2006.01) A61K 38/23(2006.01) (54)发明名称 载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物及包含 该颗粒物的双肠溶固体制剂、 其制备方法及用途 (57)摘要 本发明涉及一种载有多肽蛋白类药物的固 体颗粒物、 包含所述固体颗粒物的双肠溶固体制 剂， 及其制备方法及用途。 所述固体颗粒物包含 多肽蛋白类药物、 吸收促进剂和蛋白酶抑制剂。 本发明制备的双肠溶固体制剂在口服时能抵抗 胃酸及胃肠道酶对多肽蛋白类药物的降解， 同时 具有结肠定位效果， 能有效促进多肽蛋白类药物 在肠道的吸收。 权利要求书2页 说明书10。

3、页 附图3页 CN 108653234 A 2018.10.16 CN 108653234 A 1.一种载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物， 其包括： 0.5重量份90重量份的多肽蛋白类药物； 0.5重量份90重量份的吸收促进剂； 0重量份50重量份的蛋白酶抑制剂； 以及 5重量份90重量份的肠溶材料， 并且 其中， 所述固体颗粒物的平均粒径为0.12000 m。 2.根据权利要求1所述的固体颗粒物， 其中， 所述多肽蛋白类药物为具有药理活性的多肽蛋白类药物， 如胰岛素及其类似物、 艾塞 那肽、 降钙素、 重组人甲状旁腺激素、 促红细胞生成素、 人粒细胞集落刺激因子、 人生长激 素、 白细胞介素、。

4、 环孢菌素、 表皮生长因子、 GLP-1类似物或干扰素； 和/或 所述吸收促进剂为N-(8-2-羟基苯甲酰氨基)辛酸及其衍生物、 中链脂肪酸及其盐 类、 胆汁酸及其衍生物、 乙二胺四乙酸或其盐、 或它们的组合； 和/或 所述蛋白酶抑制剂为胰蛋白酶抑制剂、 半胱氨酸蛋白酶抑制剂、 苏氨酸蛋白酶抑制剂、 天冬氨酸蛋白酶抑制剂或金属蛋白酶抑制剂； 和/或 所述肠溶材料为一种肠溶材料或两种以上肠溶材料的组合， 优选为选自邻苯二甲酸乙 酸纤维素、 羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯、 聚乙烯醇醋酸苯二甲酸酯、 Eudragit S100、 Eudragit L100和虫胶的一种或多种。 3.一种制备如权利要求1或。

5、2所述的固体颗粒物的方法， 其包括如下步骤： 1)将多肽蛋白类药物、 吸收促进剂、 蛋白酶抑制剂溶解于水相溶液中， 形成(A)溶液， 其 中多肽蛋白类药物与吸收促进剂质量比为100:11:100， 多肽蛋白类药物与蛋白酶抑制剂 质量比为100:11:100； 2)将肠溶性材料溶于溶剂中， 形成(B)溶液， 肠溶材料的浓度为1mg/mL200mg/mL； 以 及 3)室温下将(A)溶液加入至(B)溶液中， (A)溶液与(B)溶液的体积比为1:101:100， 形 成均一溶液， 后进行干燥制备得到所述固体颗粒物。 4.根据权利要求3所述的方法， 其中， 步骤1)中的水相溶液为水、 磷酸盐缓冲液、 。

6、乙醇水溶液、 酸的水溶液或碱的水溶液， 优 选地， 所述碱的水溶液为氢氧化钠、 氢氧化钾或氨的水溶液， 以及所述酸的水溶液为盐酸、 磷酸或醋酸的水溶液； 和/或 步骤2)中的溶剂为水、 乙醇、 叔丁醇、 二氯甲烷或它们的任意比例的组合。 5.一种制备如权利要求1或2所述的固体颗粒物的方法， 其包括如下步骤： 1)将多肽蛋白类药物、 吸收促进剂、 蛋白酶抑制剂溶解于含表面活性剂的水相溶液中， 形成(A)溶液； 其中多肽蛋白类药物与吸收促进剂质量比为100:11:100； 多肽蛋白类药物 与蛋白酶抑制剂质量比为100:11:100； 2)将肠溶材料溶于溶剂中， 形成(B)溶液， 肠溶材料的浓度为1。

7、mg/mL200mg/mL； 3)室温下将(A)溶液加入至(B)溶液中， (A)溶液与(B)溶液的体积比为1:11:100， 形 成W/O油包水乳液(C)； 4)将步骤3)得到的乳液(C)缓慢加入到含表面活性剂的溶剂(D)中， 乳液(C)与溶剂(D) 的体积比为1:11:100， 常温下搅拌后加入有机溶剂(E)固化颗粒； 以及 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 108653234 A 2 5)将步骤4)中颗粒干燥后得到所述固体颗粒物。 6.根据权利要求5所述的方法， 其中， 步骤1)中的水相溶液为水、 磷酸盐缓冲液、 乙醇水溶液、 酸的水溶液或碱的水溶液， 优 选地， 所述碱的水溶液为。

8、氢氧化钠、 氢氧化钾或氨的水溶液， 以及所述酸的水溶液为盐酸、 磷酸或醋酸的水溶液； 和/或 步骤2)中的溶剂是叔丁醇、 二氯甲烷、 氯仿等或它们和水、 乙醇的任意比例的组合； 和/ 或 步骤4)中所述含表面活性剂的溶剂(D)中的溶剂为石蜡、 棉籽油、 大豆油； 和/或 步骤4)中的所述有机溶剂(E)选自戊烷、 正己烷或正庚烷。 7.一种口服多肽蛋白类药物的双肠溶固体制剂， 其包含如权利要求1所述的固体颗粒 物和结肠定位材料。 8.根据权利要求7所述的双肠溶固体制剂， 其中， 所述结肠定位材料为选自pH敏感性聚合物、 天然多糖类物质和偶氮聚合物类中的一种 或两种以上的混合物。 9.一种如权利要。

9、求7所述的双肠溶固体制剂的制备方法， 其包括以下任一种方法： a)将权利要求1所述的固体颗粒物， 任选地与药用添加剂， 灌入普通明胶胶囊后， 采用 结肠定位材料中的一种或两种以上混合物进行包衣， 制备成胶囊； b)将权利要求1所述的固体颗粒物， 任选地与药用添加剂， 灌入含结肠定位材料的胶囊 壳， 制备成胶囊； c)将权利要求1所述的固体颗粒物制粒后采用结肠定位材料中的一种或两种以上混合 物进行包衣， 制备成肠溶微丸； d)将权利要求1所述的固体颗粒物， 任选地与药用添加剂混合， 压片后， 采用结肠定位 材料中的一种或两种以上混合物进行包衣， 制备成片剂； 或者 e)将权利要求1所述的固体颗粒。

10、物与结肠定位材料， 任选地及药用添加剂， 混合后压片 制备成肠溶片。 10.一种如权利要求1或2所述的固体颗粒物在药物制备中的用途。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 108653234 A 3 载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物及包含该颗粒物的双肠溶 固体制剂、 其制备方法及用途 技术领域 0001 本发明涉及生物制药领域， 更具体地说， 涉及一种载有多肽蛋白类药物的固体颗 粒物、 包含所述固体颗粒物的双肠溶固体制剂， 及其制备方法及用途。 背景技术 0002 多肽蛋白类药物， 如胰岛素、 人生长激素、 降钙素都是以注射的途径给药。 但注射 给药存在许多缺点， 如胰岛素的生物半衰期短， 。

11、每日1-2次的胰岛素注射会使患者产生局部 红肿、 皮下结节、 皮下脂肪萎缩等副作用， 给患者带来了极大地痛苦和不便。 因此， 研究安全 方便、 价廉有效口服给药制剂以代替注射剂， 将极大方便患者。 0003 但胰岛素等多肽蛋白类药物， 若不经过特殊包埋技术处理而直接口服， 易受胃内 酸性环境降解、 胃肠道内蛋白水解酶降解， 同时药物分子量大， 脂溶性差， 难以透过消化道 上皮细胞屏障， 其生物利用度只有0.12， 因此多肽蛋白类药物的口服给药面临着巨 大的挑战。 0004 近年来研究表明， 采用合适的载药系统再佐以一定的蛋白酶抑制剂、 吸收促进剂， 可以有效提高多肽蛋白类药物在胃肠道的吸收率。。

12、 如Diasome公司研发的脂质体包裹胰岛 素， 具有肝细胞直接靶向功能， 不但可以通过肝脏生理途径迅速降低血糖， 而且使外周血胰 岛素浓度维持正常水平。 但是由于制剂的稳定性较差， 临床应用尚需时日。 Emisphere公司 开发了一系列小分子化合物作为多肽蛋白类药物的吸收促进剂(如N-(8-2-羟基苯甲酰 氨基)辛酸钠(SNAC)， WO 2008/028859)， 其已被多家公司用于口服大分子给药的临床研究， 如诺和诺德公司的口服索马鲁肽和口服胰岛素的研究、 Oramed公司的口服胰岛素的研究， 但其口服片剂也存在吸收促进剂用量大、 在机体内易被稀释从而降低药效等缺点。 还有的 研究者将。

13、胰岛素溶于疏水溶剂或油相中， 制成口服制剂， 如专利WO 95/13795中把胰岛素溶 于油相制剂中， 采用旋转蒸发， 喷雾干燥， 或在小于0.1Mpa的真空条件下冷冻48h除去亲水 性溶剂。 总的来说， 制备工艺比较复杂， 限制了生产的规模， 也加大了成本。 0005 因此， 设计出制备方法简易、 温和、 性质稳定、 并能促进多肽蛋白类药物口服吸收 的口服制剂始终是制剂工作者面临的一个难题。 发明内容 0006 本发明的目的是为了解决上述存在的问题， 提供一种安全可靠、 易被患者接受的 并且能用于口服的载有多肽蛋白类药物的双肠溶固体制剂。 0007 根据本发明的一方面， 提供了一种载有多肽蛋。

14、白类药物的固体颗粒物， 其包括： 0008 0.5重量份90重量份， 优选1重量份50重量份的多肽蛋白类药物； 0009 0.5重量份90重量份， 优选5重量份50重量份的吸收促进剂； 0010 0重量份50重量份， 优选1重量份30重量份的蛋白酶抑制剂； 以及 0011 5重量份90重量份， 优选10重量份90重量份的肠溶材料。 说 明 书 1/10 页 4 CN 108653234 A 4 0012 本发明的载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物中， 优选地， 所述固体颗粒物的平均 粒径约为0.12000 m； 和/或所固体颗粒物的90颗粒的粒径不超过2000 m， 更优选地所 述固体颗粒物的平均。

15、粒径约在0.11000 m的范围内。 0013 本发明的载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物中， 优选地， 所述多肽蛋白类药物为 具有药理活性的多肽蛋白类药物， 如胰岛素及其类似物、 艾塞那肽、 降钙素、 重组人甲状旁 腺激素、 促红细胞生成素、 人粒细胞集落刺激因子、 人生长激素、 白细胞介素、 环孢菌素、 表 皮生长因子、 GLP-1类似物或干扰素等， 更优选为胰岛素、 艾塞那肽或鲑降钙素。 0014 本发明的载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物中， 优选地， 所述吸收促进剂可为： N- (8-2-羟基苯甲酰氨基)辛酸及其衍生物(如N-8-(2-羟基苯甲酰基)氨基辛酸钠 (SNAC)、 N-(10-2。

16、-羟基苯甲酰基-氨基)癸酸钠(SNAD)、 中链脂肪酸及其盐类(如癸酸 钠)、 胆汁酸及其衍生物、 乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐、 或它们的组合， 更优选为SNAC、 SNAD 或癸酸钠。 0015 本发明的载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物中， 优选地， 所述蛋白酶抑制剂可为 胰蛋白酶抑制剂、 半胱氨酸蛋白酶抑制剂、 苏氨酸蛋白酶抑制剂、 天冬氨酸蛋白酶抑制剂和 金属蛋白酶抑制剂等。 更优选为大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)、 抑肽酶或卵类粘蛋白。 0016 本发明的载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物中， 优选地， 所述肠溶材料可以使用 所有的肠溶包衣材料而没有限制， 如邻苯二甲酸乙酸纤维素(CAP。

17、)、 羟丙甲纤维素邻苯二甲 酸酯(HPMCP)、 聚乙烯醇醋酸苯二甲酸酯(PVAP)、 丙烯酸树脂类(如Eudragit S100、 Eudragit L100)、 虫胶等中的一种或两种以上混合材料， 优选为Eudragit S100、 Eudragit L100、 HPMCP或它们的组合。 0017 根据本发明的另一方面， 提供所述载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物的制备方 法， 其包括如下步骤： 0018 1)将多肽蛋白类药物、 吸收促进剂、 蛋白酶抑制剂溶解于水相溶液中， 形成(A)溶 液， 其中多肽蛋白类药物与吸收促进剂质量比约为100:11:100， 优选为约1:101:40， 多 肽蛋。

18、白类药物与蛋白酶抑制剂质量比约为100:11:100， 优选为约1:11:10； 0019 2)将肠溶性材料溶于溶剂中， 形成(B)溶液， 肠溶材料的浓度约为1mg/mL200mg/ mL， 优选为约5100mg/mL； 以及 0020 3)室温下将(A)溶液加入至(B)溶液中， (A)溶液与(B)溶液的体积比约为1:101: 100， 优选为约1:51:25， 形成均一溶液， 后进行干燥制备得到所述固体颗粒物。 0021 上述制备方法的步骤1)中的水相溶液可为本领域中的药学上可接受的溶剂中制 备。 所述水相溶液优选为水、 磷酸盐缓冲液、 乙醇水溶液、 酸的水溶液或碱的水溶液； 所述碱 的水溶。

19、液优选为氢氧化钠、 氢氧化钾或氨的水溶液； 所述酸的水溶液优选为盐酸、 磷酸或醋 酸的水溶液。 其中， 所述水相溶液的酸碱性及浓度可以随材料的改变而做适当的调整。 0022 上述制备方法的步骤2)中的溶剂可以为水、 乙醇、 叔丁醇、 二氯甲烷或它们的任意 比例的组合。 0023 上述制备方法的步骤3)中， 优选地， 所述干燥可以采用喷雾冷冻干燥法、 喷雾干燥 法或真空干燥法等。 0024 可选地， 所述载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物的制备方法还可包括如下步骤： 0025 1)将多肽蛋白类药物、 吸收促进剂、 蛋白酶抑制剂溶解于含表面活性剂的水相溶 说 明 书 2/10 页 5 CN 10865。

20、3234 A 5 液中， 形成(A)溶液； 其中多肽蛋白类药物与吸收促进剂质量比约为100:11:100， 优选为 约1:101:40； 多肽蛋白类药物与蛋白酶抑制剂质量比约为100:11:100， 优选为约1:1 1:10； 0026 2)将肠溶材料溶于溶剂中， 形成(B)溶液， 肠溶材料的浓度约为1mg/mL200mg/ mL， 优选为约5100mg/mL； 0027 3)室温下将(A)溶液加入至(B)溶液中， (A)溶液与(B)溶液的体积比约为1:11: 100， 优选为约1:11:50， 形成W/O油包水乳液(C)； 0028 4)将步骤3)得到的乳液(C)缓慢加入到含表面活性剂的溶剂。

21、(D)中， 乳液(C)与溶 剂(D)的体积比约为1:11:100， 优选为约1:51:25， 常温下搅拌后加入有机溶剂固化颗 粒； 以及 0029 5)将步骤4)中颗粒干燥后得到所述固体颗粒物。 0030 上述制备方法的步骤1)所述多肽蛋白类药物的溶液可以通过将多肽蛋白类药物 溶解于药学上可接受的溶剂中制备。 所述药学上可接受的溶剂优选为水、 磷酸盐缓冲液、 乙 醇水溶液、 酸的水溶液或碱的水溶液； 所述碱的水溶液优选为氢氧化钠、 氢氧化钾或氨的水 溶液； 所述酸的水溶液优选为盐酸、 磷酸或醋酸的水溶液。 0031 上述制备方法的步骤2)中的溶剂可以是叔丁醇、 二氯甲烷、 氯仿等或它们和水、 。

22、乙 醇的任意比例的组合， 并且 0032 上述步骤4)中含表面活性剂的溶剂(D)中的溶剂可为石蜡、 棉籽油、 大豆油等非水 溶剂相溶剂。 0033 上述制备方法的步骤1)和4)中， 优选地， 所述表面活性剂可以为阴离子表面活性 剂、 阳离子表面活性剂或非离子表面活性剂， 更优选为吐温20、 司盘60或司盘80。 0034 上述制备方法的步骤4)中， 优选地， 所述溶剂可以为常见的有机溶剂， 更优选为正 戊烷、 正己烷或正庚烷。 0035 上述制备方法的步骤5)中， 优选地， 所述干燥可以采用喷雾冷冻干燥法、 喷雾干燥 法或真空干燥法等。 0036 根据本发明的另一方面， 提供一种口服多肽蛋白类。

23、药物的双肠溶固体制剂， 其包 含如上所述的固体颗粒物和结肠定位材料。 0037 根据本发明的再一方面， 提供一种口服多肽蛋白类药物的双肠溶固体制剂的制备 方法， 其包括制备上述载有多肽蛋白类药物的固体颗粒物的步骤， 以及将所制备的固体颗 粒物与结肠定位材料制备成固体制剂的步骤。 0038 本发明的双肠溶固体制剂的制备方法中， 优选地， 将所制备的固体颗粒物与结肠 定位材料制备成固体制剂的所述步骤选自下述任何一种方法： 0039 a)将所述固体颗粒物， 任选地与药用添加剂， 灌入普通明胶胶囊后， 采用结肠定位 材料中的一种或两种以上混合物进行包衣， 制备成胶囊。 优选地， a)中所述的药用添加剂。

24、选 自甘露醇、 淀粉、 乳糖、 微晶纤维素等药学上可接受的添加剂； 0040 b)将所述的固体颗粒物， 任选地与药用添加剂， 灌入含结肠定位材料的胶囊壳， 制 备成胶囊。 优选地， b)中所述的药用添加剂选自甘露醇、 淀粉、 乳糖、 微晶纤维素等药学上可 接受的添加剂； 0041 c)将所述固体颗粒物制粒后采用结肠定位材料中的一种或两种以上混合物进行 说 明 书 3/10 页 6 CN 108653234 A 6 包衣， 制备成肠溶微丸； 0042 d)将所述固体颗粒物， 任选地与药用添加剂混合， 压片后， 采用结肠定位材料中的 一种或两种以上混合物进行包衣， 制备成片剂。 优选地， d)中所。

25、述的所述药用添加剂选自微 晶纤维素、 淀粉、 聚维酮和硬脂酸镁等药学上可接受的添加剂； 或者 0043 e)将所述固体颗粒物与结肠定位材料， 任选地及药用添加剂， 混合后压片制备成 肠溶片。 优选地， e)中所述的所述药用添加剂选自微晶纤维素、 淀粉、 聚维酮和硬脂酸镁等 药学上可接受的添加剂。 0044 上述双肠溶固体制剂的制备方法中， 优选地， 所述结肠定位材料可以为pH敏感性 聚合物(如丙烯酸树脂类， 例如Eudragit S100、 Eudragit L100)、 天然多糖类物质(如壳聚 糖、 果胶、 果胶钙)和偶氮聚合物类等中的一种或两种以上混合物。 优选为Eudragit S100。

26、、 果胶或果胶钙。 0045 根据本发明的另一个方面， 提供所述固体颗粒物在药物制备中的用途。 0046 根据本发明的又一个方面， 提供一种药物组合物， 其包含所述固体颗粒物或所述 双肠溶固体制剂。 0047 有益效果 0048 本发明所述的载有多肽蛋白类药物的双肠溶固体制剂具有在酸性条件下稳定， 在 pH7的条件下溶解的特点。 而消化道胃、 十二指肠、 小肠上部的pH均小于6.5， 所以所述双 肠溶固体制剂在上述部位不能被溶解破坏， 避免了制剂的提前释药， 有效地保护多肽蛋白 类药物免受肠道内的蛋白酶降解， 提高药物在肠道内的稳定性。 0049 在所述固体颗粒物中加入吸收促进剂和蛋白酶抑制剂。

27、， 能有效促进多肽蛋白类药 物跨膜， 抑制多肽蛋白类药物被肠道内蛋白酶的降解， 从而提高多肽蛋白类药物的口服生 物疗效。 0050 本发明所述的方法具有制备工艺简单， 容易实现， 所需成本低等特点。 附图说明 0051 图1显示制备实施例1中制备的胰岛素颗粒的SEM图； 0052 图2显示在制备实施例9中制备的胰岛素颗粒肠溶胶囊的体外释放结果图； 0053 图3显示在制备实施例9中制备的胰岛素颗粒肠溶胶囊的体内降血糖效果图； 0054 图4显示在制备实施例9中制备的胰岛素颗粒肠溶胶囊的体内促吸收效果图； 0055 图5显示在制备实施例10中制备的艾塞那肽颗粒肠溶胶囊的体内降血糖图。 具体实施方。

28、式 0056 下面结合具体的实施例， 并参照数据进一步详述本发明。 应理解， 这些实施例只是 为了举例说明本发明， 旨在说明本发明的具体配方组成、 制备方法及其功能和效果， 而非以 任何方式限制本发明的范围。 在以下实施例中， 未详细描述的各种过程和方法是本领域中 公知的常规方法。 0057 本发明中， 所用试剂、 设备的来源和商品名， 均在首次出现时标明， 其后所用相同 试剂如无特殊说明， 均与首次标明的内容相同， 常规未标注试剂购自国药集团化学试剂有 限公司。 其中， 胰岛素购自徐州万邦金桥制药有限公司， N-8-(2-羟基苯甲酰基)氨基辛酸 说 明 书 4/10 页 7 CN 10865。

29、3234 A 7 钠(SNAC)购自上海博氏医药有限公司， 艾塞那肽、 鲑降钙素购自阿拉丁试剂有限公司， 抑肽 酶、 胰蛋白酶抑制剂购自阿拉丁试剂有限公司， 胆酸钠购自国药试剂基团有限公司， 羟丙甲 纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)购自信越化学工业株式会社直江津工厂， 尤特奇(Eudragit S100、 L100)购自赢创工业集团， 果胶钙购自上海信帆生物科研所。 0058 实验动物： 健康SD大鼠36只， 雄性， 体重200-220g， 来源为上海药物研究所实验动 物中心。 受试动物在试验日前1-2周在试验场所进行适应性饲养。 所有动物实验均得到上海 药物研究所IACUC委员会的批准。 0。

30、059 制备实施例 0060 制备实施例1 Eudragit S100包裹的胰岛素颗粒的制备 0061 将100mg SNAC溶于1mL 0.01M的NaOH， 并将10mg胰岛素(Ins)溶于1mL 0.01M的 NaOH水溶液后加入到SNAC溶液中形成均一溶液(A)； 将500mg Eudragit S100加入到48mL的 叔丁醇中(含5mL水)， 适当加热， 使其充分溶解形成均一溶液(B)； 将A缓慢加入到B中， 以 500r/min涡旋混合形成均一溶液后， 采用喷雾冷冻干燥技术制备Eudragit S100包裹的胰 岛素颗粒。 0062 制备实施例2 Eudragit S100包裹的。

31、含蛋白酶抑制剂的胰岛素颗粒的制备 0063 将100mg SNAC溶于1mL 0.01M的NaOH， 并将10mg Ins和10mg抑肽酶溶于1mL 0.01M 的NaOH水溶液后加入到SNAC溶液中形成均一溶液(A)； 将500mg Eudragit S100加入到23mL 的叔丁醇中(含2mL水)， 适当加热， 使其充分溶解形成均一溶液(B)； 将A缓慢加入到B中， 以 500r/min涡旋混合形成均一溶液后， 采用喷雾冷冻干燥技术制备Eudragit S100包裹的胰 岛素颗粒。 0064 制备实施例3 Eudragit S100包裹的含蛋白酶抑制剂的胰岛素颗粒的制备 0065 将200。

32、mg SNAC溶于1mL 0.01M的NaOH， 并将10mg Ins和10mg抑肽酶溶于1mL 0.01M 的NaOH水溶液后加入到SNAC溶液中形成均一溶液(A)； 将400mg Eudragit S100加入到23mL 的叔丁醇中(含2mL水)， 适当加热， 使其充分溶解形成均一溶液(B)； 将A缓慢加入到B中， 以 500r/min涡旋混合形成均一溶液后， 采用喷雾冷冻干燥技术制备Eudragit S100包裹的胰 岛素颗粒。 0066 制备实施例4 HPMCP包裹的含蛋白酶抑制剂的胰岛素颗粒的制备 0067 将200mg SNAC溶于1mL 0.01M的NaOH， 并将10mg In。

33、s和10mg抑肽酶溶于1mL 0.01M 的NaOH水溶液后加入到SNAC溶液中形成均一溶液(A)； 将400mg HPMCP加入到48mL水中， 适 当加热， 使其充分溶解形成均一溶液(B)； 将A缓慢加入到B中， 以500r/min涡旋混合形成均 一溶液后， 采用喷雾干燥技术制备HPMCP包裹的胰岛素颗粒。 0068 制备实施例5 Eudragit S100包裹的含蛋白酶抑制剂的艾塞那肽颗粒的制备 0069 将200mg SNAC溶于1mL 0.01M的NaOH， 并将10mg艾塞那肽和100mg抑肽酶溶于4mL 0.01M的NaOH水溶液后加入到SNAC溶液中形成均一溶液(A)； 将40。

34、0mg Eudragit S100加入 到25mL的叔丁醇中(含2mL水)， 适当加热， 使其充分溶解形成均一溶液(B)； 将A缓慢加入到B 中， 以500r/min涡旋混合形成均一溶液后， 采用喷雾冷冻干燥技术制备Eudragit S100包裹 的艾塞那肽颗粒。 0070 制备实施例6 Eudragit S100包裹的含蛋白酶抑制剂的艾塞那肽颗粒的制备 0071 将400mg SNAC溶于1mL 0.01M的NaOH， 并将10mg艾塞那肽和100mg抑肽酶溶于4mL 说 明 书 5/10 页 8 CN 108653234 A 8 0.01M的NaOH水溶液后加入到SNAC溶液中形成均一溶液。

35、(A)； 将400mg Eudragit S100加入 到25mL的叔丁醇中(含2mL水)， 适当加热， 使其充分溶解形成均一溶液(B)； 将A缓慢加入到B 中， 以500r/min涡旋混合形成均一溶液后， 采用喷雾冷冻干燥技术制备Eudragit S100包裹 的艾塞那肽颗粒。 0072 制备实施例7 乳化法制备Eudragit S100包裹的含蛋白酶抑制剂的胰岛素颗粒 0073 将40mg SNAC溶于0.5mL 0.01M的NaOH水溶液， 并将2mg Ins和2mg抑肽酶溶于 0.5mL 0.01M的NaOH水溶液(含1吐温20)后加入到SNAC溶液中形成均一溶液(A)； 将80mg 。

36、Eudragit S100加入到4mL的乙醇/二氯甲烷中(乙醇： 二氯甲烷1:4)， 其充分溶解形成均 一溶液(B)； 将A缓慢加入到B中， 以500r/min涡旋混合形成W/O乳液后(C)后， 将(C)缓慢滴加 至50mL液体石蜡中(含1司盘80)形成W/O/O微球； 加入正己烷固化微球， 继续搅拌1.5h， 正 己烷清洗3遍， 将微球放入真空干燥箱干燥24h后得到Eudragit S100包裹的胰岛素颗粒。 0074 制备实施例8 Eudragit L100包裹的鲑降钙素颗粒的制备 0075 将300mg胆酸钠溶于5mL H2O， 并将10mg鲑降钙素和100mg胰蛋白酶抑制剂溶于5mL 。

37、0.01M的NaOH水溶液后加入到胆酸钠溶液中形成均一溶液(A)； 将400mg Eudragit L100加 入到50mL的叔丁醇中(含10mL水)， 适当加热， 使其充分溶解形成均一溶液(B)； 将A缓慢加入 到B中， 以500r/min涡旋混合形成均一溶液后， 采用喷雾冷冻干燥技术制备Eudragit L100 包裹的鲑降钙素颗粒。 0076 制备实施例9 装有胰岛素颗粒的肠溶胶囊的制备 0077 取制备实施例2、 3中制备的胰岛素颗粒灌装9号Pccaps临床前胶囊(Capsugel， 美 国)， 随后将胶囊放入包衣锅用15的Eudragit S100乙醇溶液进行包衣。 平均增重为15。。

38、 0078 制备实施例10 装有艾塞那肽颗粒的肠溶胶囊的制备 0079 取制备实施例5、 6中制备的艾塞那肽颗粒灌装9号Pccaps临床前胶囊(Capsugel， 美国)， 随后将胶囊放入包衣锅用10的果胶溶液进行包衣。 平均增重为10。 0080 制备实施例11 装有胰岛素颗粒的肠溶片的制备 0081 取制备实施例2中制备的胰岛素颗粒与淀粉、 微晶纤维素和硬脂酸镁混合后用压 片机压制成片剂， 随后将片剂放入包衣锅用15的Eudragit S100乙醇溶液进行包衣。 平均 增重为15。 0082 制备实施例12装有胰岛素颗粒的肠溶片的制备 0083 取制备实施例2中制备的胰岛素颗粒与果胶钙、 。

39、淀粉、 微晶纤维素和硬脂酸镁混合 后过40目筛， 用压片机压制成片剂。 0084 在以下表1中列出制备实施例1-8中制备的固体颗粒物中各个药用成分及其含量 以及制备实施例9-12制备的双肠溶固体制剂的制备方法及最终剂型。 0085 表1 说 明 书 6/10 页 9 CN 108653234 A 9 0086 说 明 书 7/10 页 10 CN 108653234 A 10 0087 0088 实验实施例 0089 实验实施例1 0090 胰岛素颗粒形态及粒径 0091 取制备实施例1中制备的Eudragit S100包裹的胰岛素颗粒进行离子溅射法镀膜 后用扫描电镜电镜SEM(Phenom 。

40、XL， Netherlands)观察， 发现胰岛素颗粒呈球形形态， 具体 结果请参见图1。 其中固体颗粒物的90颗粒的粒径不超过500 m， 平均粒径大小为约10 m。 0092 实验实施例2 0093 胰岛素颗粒包封率和载药量测定 0094 1、 仪器： Agilent 1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)； 高速离心机(Allegra 64R， Beckman Coulter， 美国)。 试剂： 胰岛素颗粒(根据本申请所述方法制备)； 乙腈(色谱 纯， sigma， 美国)； 水为Milli-Q超纯水， 磷酸等其它试剂均为分析纯。 0095 2、 色谱条件： 色谱柱： Grac。

41、e Vydac 218TP C18柱(250mm4.6mm， 5 m， 美国格雷斯 公司)； 流动相： 0.1M磷酸氢二钠缓冲液(磷酸调pH3.0):乙腈(72:28， v/v)； 流速： 1mL/ min； 柱温： 40； 检测波长： 214nm。 0096 3、 测定方法： 取本发明制备实施例1中制得的胰岛素颗粒10mg溶于1mL 95乙醇 (含100 L 0.01M NaOH)， 使微球溶解释放出Ins， 加流动相酸化后用HPLC检测被包裹的胰岛 素含量。 0097 测定结果： 制备实施例1中制备的胰岛素颗粒药物的包封率约为90.66， 载药量 约为14.68。 0098 实验实施例3 。

42、0099 将制备实施例2中的胰岛素固体颗粒及制备实施例9中制备的肠溶胶囊装入透析 袋中分别放入500mL pH值为1.2的缓冲液中， 将缓冲液置于37条件下以100rpm搅拌， 2h内 分别于30min、 60min、 90min、 120min时间点取样以实验实施例2中所述的HPLC方法测定缓冲 液中的胰岛素含量。 2h后将透析袋取出放入pH 4.5的缓冲液中检测不同时间点胰岛素释放 说 明 书 8/10 页 11 CN 108653234 A 11 量。 相同的方法分别检测胰岛素在pH 6.8、 7.4缓冲液中的释放量。 0100 结果示于图2， 胰岛素固体颗粒物在pH 6.8的缓冲液环境。

43、中会释放胰岛素。 为了防 止胰岛素提前释放， 故将胰岛素固体颗粒物装入普通胶囊进行二次包衣。 结果表明 Eudragit S100肠溶包衣胶囊在pH 1.4、 4.5的酸性环境中以及pH6.8的弱酸性环境中并不 释放胰岛素， 而在pH 7.4的环境中可以顺利释放出胰岛素， 1h内释放约90的胰岛素。 结果 表明本发明胰岛素颗粒肠溶胶囊能够保护胰岛素制剂抵抗胃内的酸性环境， 在胃内不释 放， 而在进入结肠后开始释放胰岛素。 0101 实验实施例4 0102 将12只Sprgue-dawley大鼠称体重后， 按65mg/kg的剂量称取STZ(链脲佐菌素)， 用 0.1M枸橼酸缓冲液(pH4.5)溶。

44、解， 立即腹腔注射到大鼠体内。 饲养一周后， 测血糖， 血糖值 高于16.67mM的大鼠用于后续实验。 实验动物被随机分成3组， 给药前禁食12h， 不禁水。 第一 组为口服胰岛素对照组(30IU/kg)(对照组)， 给予装有胰岛素、 吸收促进剂、 抑肽酶物理混 合物的Eudragit S100肠溶包衣肠溶胶囊； 第二组为制备实施例9制备的胰岛素颗粒 Eudragit S100肠溶包衣胶囊组(30IU/kg， SNAC:Ins10:1)； 第三组为制备实施例9制备的 胰岛素颗粒Eudragit S100肠溶包衣胶囊组(30IU/kg， SNAC:Ins20:1)； 分别在0h、 1h、 2h、。

45、 3h、 4h、 5h、 6h、 7h、 8h、 9h、 10h、 11h、 12h尾静脉取血， 用血糖仪测定血糖水平， 统计胰岛素降 血糖效果。 0103 结果示于图3， 与未制备成肠溶颗粒的对照组相比， 载有胰岛素颗粒的Eudragit S100包衣胶囊(双肠溶胶囊)存在显著的降血糖效果， 12h内血糖降低了约40。 并且这种降 血糖的效果可持续10小时。 0104 实验实施例5 0105 将12只Sprgue-dawley大鼠称体重后， 按65mg/kg的剂量称取STZ(链脲佐菌素)， 用 0.1M枸橼酸缓冲液(pH4.5)溶解， 立即腹腔注射到大鼠体内。 饲养一周后， 测血糖， 血糖值。

46、 高于16.67mM/L的大鼠用于后续实验。 实验动物被随机分成4组， 给药前禁食12h， 不禁水。 第 一组为皮下注射胰岛素溶液组(5IU/kg)； 第二组为制备实施例9制备的胰岛素颗粒 Eudragit S100肠溶包衣胶囊组(30IU/kg， SNAC:Ins10:1)； 第三组为制备实施例9制备的 胰岛素颗粒Eudragit S100肠溶包衣胶囊组(30IU/kg， SNAC:Ins20:1)。 分别在0h、 1h、 2h、 3h、 4h、 5h、 6h、 8h、 10h和12h时眼眶静脉丛取血， 用胰岛素ELISA试剂盒检测血清中胰岛素的 浓度， 绘制药代动力学曲线。 0106 结果。

47、示于图4， 结果表明载有胰岛素颗粒的Eudragit S100包衣双肠溶胶囊在 SNAC:Ins20:1时显著提高血清中胰岛素的浓度， 4h时可检测到血清中胰岛素浓度显著上 升， 5h时达到峰值。 相对胰岛素溶液皮下注射组其生物利用度约为7。 0107 实验实施例6 0108 将12只正常Sprgue-dawley大鼠称体重后， 随机分成4组， 给药前禁食12h， 不禁水。 第一组为空白对照组， 不给药； 第二组为皮下注射艾塞那肽生理盐水组(10ug/kg)； 第三组 为口服制备实施例10制备的艾塞那肽颗粒Eudragit S100肠溶包衣胶囊组(30IU/kg， SNAC: 艾塞那肽20:1。

48、)； 第四组为口服制备实施例10制备的艾塞那肽颗粒Eudragit S100肠溶包 衣胶囊组(30IU/kg， SNAC:艾塞那肽40:1)。 各组大鼠于0h灌胃1g/kg的葡萄糖溶液模拟餐 后状态， 并对注射组大鼠进行10 g/kg的注射给药。 口服组于灌胃葡萄糖前2h灌胃肠溶胶 说 明 书 9/10 页 12 CN 108653234 A 12 囊。 各组大鼠分别于分别在0h、 0.5h、 1h、 1.5h、 2h、 3h、 4h时尾静脉取血， 用血糖仪测定血糖 水平， 统计各个组的降血糖效果。 0109 结果示于图5， 载有艾塞那肽颗粒的Eudragit S100包衣胶囊(双肠溶胶囊)其控制 血糖效果与注射组类似， 其中SNAC:艾塞那肽40:1组控制血糖效果最佳。 说 明 书 10/10 页 13 CN 108653234 A 13 图1 图2 说 明 书 附 图 1/3 页 14 CN 108653234 A 14 图3 图4 说 明 书 附 图 2/3 页 15 CN 108653234 A 15 图5 说 明 书 。