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1、(10)授权公告号 CN 101244036 B (45)授权公告日 2011.07.20 CN 101244036 B *CN101244036B* (21)申请号 200810084259.3 (22)申请日 2008.03.28 A61K 9/107(2006.01) A61K 47/48(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 31/00(2006.01) (73)专利权人 中国人民解放军军事医学科学院 放射与辐射医学研究所 地址 100850 北京市海淀区太平路 27 号 (72)发明人 金义光 邢磊 (54) 发明。
2、名称 含胆固醇基膦酰核苷类似物的高度分散剂型 (57) 摘要 本发明公开了一种含胆固醇基膦酰核苷类似 物的高度分散剂型， 选自脂质体、 非离子表面活性 剂泡囊、 微粒、 纳米粒、 乳剂、 胶束、 纳米凝胶、 树枝 状聚合物或自组装传递系统。胆固醇基膦酰核苷 类似物可作为前药， 具有抗病毒或抗癌作用。 (51)Int.Cl. 审查员 马彦冬 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 2 页 说明书 11 页 附图 1 页 CN 101244036 B1/2 页 2 1. 一种含胆固醇基膦酰核苷类似物的自组装传递系统， 胆固醇基膦酰核苷类似物的核 苷类似物原型分子选自阿昔。
3、洛韦、 更昔洛韦、 泛昔洛韦、 喷昔洛韦、 万乃洛韦、 阿巴卡韦、 利 巴韦林、 索利夫定、 阿糖腺苷、 齐多夫定、 拉米夫定、 去羟肌苷、 扎西他滨、 恩曲他滨、 司他夫 定、 西多福韦、 甲氨蝶呤、 吉西他滨、 卡培他滨、 氟达拉滨、 去氧氟尿苷、 阿糖胞苷、 阿扎胞苷。 2. 如权利要求 1 的自组装传递系统， 其中胆固醇基膦酰核苷类似物的核苷类似物原型 分子是具有抗病毒或抗癌作用的药物。 3. 如权利要求 1 的自组装传递系统， 其粒子含 50 100的胆固醇基膦酰核苷类似 物， 其余为添加剂。 4. 如权利要求 1 的自组装传递系统， 其粒子含 70 100的胆固醇基膦酰核苷类似 物。
4、， 其余为添加剂。 5. 如权利要求 1 的自组装传递系统， 其粒子含 85 100的胆固醇基膦酰核苷类似 物， 其余为添加剂。 6. 如权利要求 1 的自组装传递系统， 其粒子全部由胆固醇基膦酰核苷类似物组成。 7. 如权利要求 2-5 任一项所述的自组装传递系统， 其中添加剂选自脂质分子、 表面活 性剂。 8. 如权利要求 7 所述的自组装传递系统， 脂质分子选自脂肪酸、 脂肪醇、 脂肪胺、 胆固 醇 ； 表面活性剂选自胆酸盐、 去氧胆酸盐、 磷脂、 多元醇酯类表面活性剂、 聚氧乙烯类表面活 性剂、 双十六烷基磷脂酸。 9. 如权利要求 1 的自组装传递系统， 其中胆固醇基膦酰核苷类似物是。
5、胆固醇基膦酰齐 多夫定。 10. 权利要求 9 所述的自组装传递系统的制备方法， 其制备过程如下 ： 取胆固醇基膦酰 齐多夫定溶于四氢呋喃， 得到胆固醇基膦酰齐多夫定 5， w/w 的四氢呋喃溶液， 用微量注 射器缓慢注入到搅拌的水中， 至得到均匀微混悬液， 减压挥去有机溶剂， 并在加热条件下进 一步浓缩产品。 11. 如权利要求 1 的自组装传递系统， 其中胆固醇基膦酰核苷类似物是胆固醇基膦酰 吉西他滨。 12. 权利要求 11 所述的自组装传递系统的制备方法， 其制备过程如下 ： 将含有胆固醇 基膦酰吉西他滨 5， w/w 和泊洛沙姆 P1881， w/w 的四氢呋喃溶液， 用微量注射器缓。
6、慢注 入到搅拌的水中， 至得到均匀微混悬液， 减压挥去有机溶剂， 并在加热条件下进一步浓缩产 品。 13. 一种胆固醇基膦酰阿昔洛韦脂质体， 其制备过程如下 ： 取胆固醇基膦酰阿昔洛韦 25mg、 大豆磷脂 0.1g 于 250ml 烧瓶中， 用 20ml 二氯甲烷溶解， 减压旋转蒸发， 得到一层有机 脂溶性膜， 加入pH7.4的磷酸盐缓冲液10ml， 振荡， 大部分膜脱落， 在50超声， 直至得到均 匀混悬液。 14. 一种胆固醇基膦酰去羟肌苷非离子表面活性剂泡囊， 其制备过程如下 ： 取胆固醇 基膦酰去羟肌苷 30mg、 司盘 600.08g 于 250ml 烧瓶中， 用 20ml 二氯甲。
7、烷溶解， 减压旋转蒸 发， 得到一层有机脂溶性膜， 加入 pH7.4 的 Tris 缓冲液 10ml， 振荡， 大部分膜脱落， 超声， 直 至得到胆固醇基膦酰去羟肌苷非离子表面活性剂泡囊的均匀混悬液。 15. 一种胆固醇基膦酰去羟肌苷长循环脂质体， 其制备过程如下 ： 取胆固醇基膦酰去 权 利 要 求 书 CN 101244036 B2/2 页 3 羟肌苷50mg、 大豆磷脂0.15g、 PEG化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)0.02g于烧瓶中， 用 20ml 氯仿异丙醚 1 1， v/v 溶解， 加入适量蒸馏水， 超声使其成为乳剂， 减压旋转蒸发， 得到凝胶态物质， 加入少量水， 。
8、继续减压旋转蒸发， 凝胶态物质脱落并分散成均匀混悬液。 16. 一种胆固醇基膦酰齐多夫定固体脂质纳米粒， 其制备过程如下 ： 取胆固醇基膦酰 齐多夫定50mg、 单硬脂酸甘油酯0.7g、 吐温800.03g于烧杯中加热至80， 逐渐加入含十二 烷基硫酸钠 10mg 的 80水 10ml， 保持温度不变， 呈透明液体， 再将其用注射器注入到高速 搅拌的 0水中。 17. 一种胆固醇基膦酰齐多夫定微球， 其制备过程如下 ： 取胆固醇基膦酰齐多夫定 50mg、 聚乳酸 - 羟基乙酸共聚物 (PLGA)0.5g 溶于 5ml 二氯甲烷中， 加入 3的聚乙烯醇 (PVA) 水溶液 20ml， 高速搅拌，。
9、 形成乳液， 转移至 30ml 的 3 PVA 水溶液中， 在室温下， 搅拌 4 小时， 挥发二氯甲烷， 微球固化， 离心微球混悬液， 所得微球以蒸馏水洗涤 3 次， 加入适量 甘露醇， 冷冻干燥。 18. 一种胆固醇基膦酰拉米夫定乳剂， 其制备过程如下 ： 取胆固醇基膦酰拉米夫定、 泊 洛沙姆 P188、 玉米油、 丙二醇加热， 全溶， 溶液缓慢滴入搅拌着的 pH7.4 磷酸缓冲液中， 得到 乳剂。 19. 一种胆固醇基膦酰吉西他滨纳米乳， 其制备过程如下 ： 取胆固醇基膦酰吉西他滨 50mg溶于5ml油酸乙酯/四氢呋喃混合溶剂中， 加入适量聚氧乙烯蓖麻油和单甘酯， 加热搅 拌成溶液， 在高。
10、速搅拌条件下， 加入 4ml 水， 持续搅拌， 得到半透明状分散液体。 20. 一种胆固醇基膦酰吉西他滨聚合物胶束， 其制备过程如下 ： 取胆固醇基膦酰吉西 他滨 10mg 溶于 5ml 二甲基亚砜 (DMSO) 中， 加入 50mg 乳酸 - 羟基乙酸 - 乙二醇共聚物溶 解， 放入透析袋中， 再放入盛有蒸馏水的烧杯中， 搅拌 24 小时， 透析袋内即为胆固醇基膦酰 吉西他滨聚合物胶束。 权 利 要 求 书 CN 101244036 B1/11 页 4 含胆固醇基膦酰核苷类似物的高度分散剂型 技术领域 0001 本发明涉及生物医药领域， 特别涉及药剂学领域， 涉及一种含胆固醇基膦酰核苷 类似。
11、物的高度分散剂型。 背景技术 0002 核苷 (Nucleosides) 是生物体内的重要化学成分， 由它衍生得到的核苷酸以及核 酸是遗传信息的携带者， 同时也具有重要的生理功能。最重要的遗传物质 DNA 和 RNA 就是 由核苷酸组装而成。核苷和核苷酸也参与生物体内许多重要的反应。自然界中的核苷由一 个嘌呤或嘧啶碱基与一个五碳糖结合而成。碱基包括腺嘌呤、 鸟嘌呤、 胞嘧啶、 尿嘧啶、 胸 腺嘧啶， 五碳糖为核糖和脱氧核糖， 并由它们分别组成腺苷、 鸟苷、 胞苷和尿苷， 以及脱氧腺 苷、 脱氧鸟苷、 脱氧胞苷和脱氧胸苷。 0003 核苷类似物 (Nucleoside analogues， Nu。
12、) 是一类重要的化学物质。它的结构特 征与核苷类似。人们已经合成了多种核苷类似物， 发现其中有许多具有药理活性， 例如抗 病毒作用、 细胞毒作用、 免疫抑制作用等。目前对核苷类似物活性的考查主要集中在抗病 毒和抗癌方面。抗病毒的核苷类似物在体内经过病毒和人体细胞的激酶磷酸化作用后形 成磷酸化核苷类似物， 后者可通过各种途径抑制病毒。根据不同作用功能部位， 它们可以 分为 DNA 聚合酶抑制剂、 DNA 还原酶抑制剂、 胸苷激酶抑制剂、 RNA 酶抑制剂、 逆转录酶抑 制剂等， 临床上用于治疗疱疹病毒、 巨细胞病毒、 水痘病毒、 流感病毒、 肝炎病毒、 SARS 病 毒、 艾滋病毒 (HIV)、。
13、 脑炎病毒等感染。因为病毒的复制 在细胞内完成， 所以大多数抑制 病毒复制增殖过程的抗病毒药物需要进入细胞内才能发挥抗病毒作用。核苷类似物的水 溶性一般较强， 使得细胞内的核苷类物质不易渗出， 这是由细胞维持生命本能决定的。同 时外界的核苷类似物也较难进入细胞内部， 即许多核苷类似物的细胞膜渗透性不好。因此 许多核苷类似物药物口服生物利用度差， 细胞内浓度小， 影响了抗病毒作用的发挥， 并且药 物长期在细胞内保持低浓度还有可能使病毒产生耐药性 ( 杨道锋， 等 . 抗病毒核苷类似物 简介 . 医药导报， 2001， 20(2) ： 122 ； 李子成， 等 . 核苷类抗病毒药物的研究进展 . 。
14、化学研 究与应用， 2002， 14(1) ： 15)。艾滋病毒 (HIV) 在感染人体的初期， 就往往已经进入淋巴系 统和脑中， 并进一步感染其它部位。而核苷类似物通常为水溶性， 进入淋巴和脑都较困难， 这也是艾滋病难治的原因之一 (Yazdanlan M， et al.Blood-brain barrier properties ofhuman immunodeficiency virus antiretrovirals.J Pharm Sci， 1999， 88 ： 950)。抗癌 的核苷类似物一般是一种抗代谢物， 通过抑制核酸的合成发挥细胞毒作用 (Galmarini， et al.N。
15、ucleoside analogues and nucleobase in cancer treatment.Lancet， 2002， 3 ： 415)。 同样它们也需要进入细胞内才能发挥作用。因此抗癌核苷类似物也存在生物利用度较低、 穿越细胞膜和血脑屏障较难等问题。 0004 人们设计了很多方法来解决核苷类似物的生物利用度、 细胞摄取和靶向问题， 例 如合成前药和设计药物传递系统 (Drug Delivery Systems， DDS)。 0005 核苷类似物药物必须在人体内转化成磷酸酯， 才能掺入病毒或肿瘤细胞等的核酸 说 明 书 CN 101244036 B2/11 页 5 (DNA 。
16、或 RNA) 合成过程中， 干扰其代谢过程， 从而发挥药理活性 ( 陈新谦， 金有豫， 汤光 . 新 编药物学 . 第 15 版 . 北京 ： 人民卫生出版社， 2004 年 )。但许多核苷类似物药物经过一 段治疗后， 往往会在体内产生抗药性或耐药性， 原因是病毒或肿瘤细胞的核苷激酶不再 对核苷类似物产生磷酸化 (Kimberlin DW， et al.Molecular mechanisms of antiviral resistance.AntiviralRes， 1995， 26 ： 369-401)。有些研究尝试将核苷类似物药物先 与膦酰基连接， 从而克服了耐药性 (Krise JP，。
17、 Stella VJ.Prodrugs of phosphates， phosphonates， and phosphinates.Adv Drug Del Rev， 1996， 19 ： 287-310 ； De Clercq E.Acyclicnucleoside phosphonates ： Past， present and future bridging chemistry to HIV， HBV， HCV， HPV， adeno-， herpes-， and poxvirus infections ： The phosphonate bridge. Biochem Pharmaco。
18、l， 2007， 73 ： 911-922)。 0006 药物的生物膜渗透性除了和生物膜本身性质及药物分子量有关外， 药物的物理化 学性质也是主要影响因素。一般认为， 适当增加药物的脂溶性可以增强生物膜渗透性。人 们已经尝试合成核苷类似物脂溶性前药的方法来增加其生物利用度和细胞摄取。因为核 苷类似物通常连有羟基或氨基， 人们往往利用这些羟基或氨基与疏水性基团相连而获得脂 溶性前药。许多研究证明脂溶性增强的核苷类似物的生物利用度和细胞摄取增加， 在淋巴 系统和脑中的浓度一般也会提高。这些前药可以在细胞内经过酶的作用释放出原药而发 挥抗病毒或抗癌作用 (Yatvin MB， et al.Impro。
19、ved uptake and retention oflipophilic prodrug to improve treatment of HIV.Adv Drug Del Rev， 1999， 39 ： 165)。 0007 药物制剂的剂型有很多种， 如常用的片剂、 胶囊、 微丸、 混悬液等， 但高度分散剂型 对于脂溶性药物的给药有特殊优势。 高度分散剂型包括脂质体、 非离子表面活性剂泡囊、 微 粒、 纳米粒、 乳剂、 胶束、 纳米凝胶、 树枝状聚合物、 自组装传递系统等。 0008 脂质体 (Liposomes) 是一种由磷脂双分子层构成的泡囊 (Vesicles)， 是一种可 以在水溶液。
20、中高度分散的传递系统， 可以作为很多种药物的载体。它的高度分散性使其在 体内具有靶向、 缓释等效果， 口服具有淋巴趋向性， 较易携带药物穿越血脑屏障， 容易通过 融合、 内吞等途径进入细胞内 (Lasic DDand Papahadjopoulos D.Liposomes revisited. Science， 1995， 267 ： 1275)。修饰后的磷脂组成的脂质体还可以有体内长循环、 温度靶向、 pH靶向、 磁靶向、 主 动靶向等功能。 脂质体的局部(眼、 鼻、 皮肤)给药有生物相容性好、 促 进药物渗透的作用。 脂质体还是生物化学和分子生物学研究领域中经常使用的一种转染试 剂， 现在。
21、还是基因治疗的一种重要载体 (Kikuchi H， et al.Genedelivery using liposome technology.J Controlled Rel， 1999， 62 ： 269)。 0009 脂质体泡囊的磷脂双分子层膜将内部包裹的水相和外部水相隔开， 双分子层内呈 疏水性。药物根据其物理化学性质的不同分别包裹在内水相或膜中。一般地， 水溶性药物 在内水相中 ； 脂溶性药物在膜层中。 脂质体的制备是磷脂分子在水中自组装的过程， 内外水 相的体积比例不能很大。这些因素决定了大部分水溶性药物的包裹率较低 ( 50 )， 有 时还会很低 ( 5 )， 并且包裹的药物有渗漏。
22、到外水相的可能。如果有合适的脂溶性基团 ( 如脂肪链 )， 脂溶性药物分子就可插入到磷脂双分子层中， 结合比较牢固， 药物分子不容 易脱掉， 所以药物的包裹率较高。 因此为了增加某些水溶性药物在脂质体中的包裹率， 人们 往往采用了制备成带有长脂肪链的脂溶性前体药物的方式 (Gulati M， et al.Lipophilic drug derivatives in liposomes.Int J Pharm， 1998， 165 ： 129)。 说 明 书 CN 101244036 B3/11 页 6 0010 目前合成的核苷类似物水溶性普遍较强， 脂溶性较差， 有的药物甚至水溶性和脂 溶性都。
23、不好。因此它们的脂质体包裹率较低， 往往无法达到给药浓度。如果在制备得到 核苷类似物脂溶性前药的基础上， 再制备成脂质体， 可以增加包裹率， 也同时具有了脂质体 的高度分散性和脂溶性前药易渗透进入细胞的特点 (Tong P， et al.Preparation and in viro antiviral activity of liposomesof lipophilic esters of acyclovir. 药学学 报， 1991， 27 ： 15)。 0011 非离子表面活性剂泡囊 (Niosomes) 是指某些非离子表面活性剂 ( 如司盘 60) 在一定条件下在水中自组装成泡囊结构，。
24、 类似脂质体。它同样可以作为药物载体， 具有 类似脂质体的一些体内外特征 (Uchegbu IF， Vyas SP.Non-ionic surfactant based vesicles(niosomes)in drug delivery.Int J Pharm， 1998， 172 ： 33-70)。 0012 微粒 (Microparticles) 一般指粒径在微米级的粒子， 范围可从 1 微米到 1000 微 米。由于其高度分散性， 在体内可产生黏附， 高的表面积也有助于药物特别是脂溶性药物 的溶出， 也能产生控释效果 (Hombreiro-Perez M， et al.Non-degr。
25、adable microparticles containing a hydrophilic and/or a lipophilic drug ： preparation， characterization and drug release modeling.J Controlled Rel， 2003， 88 ： 413-428)。 微球(Microspheres) 一般指药物溶解或分散在基质中的微粒 (Freiberg S， Zhu XX.Polymer microspheres for controlled drug release.Int JPharm， 2004， 282 ： 1-1。
26、8)。将固体药物或液体药物作囊 心物包裹而成药库型微小胶囊称微囊 (Microcapsules)( 陆彬主编 . 药物新剂型与新技 术 . 北京 ： 人民卫生出版社， 1998)。 0013 纳米粒 (Nanoparticles) 一般指是纳米级分散的固体粒子， 由于其高度分散性， 它作为药物载体有提高药物生物利用度、 增强靶向性等特点。固体脂质纳米粒 (SLN) 采 用人体相容的脂质材料作为主要辅料形成纳米粒， 具有普通纳米粒的特点和生物相容性 好的特点， 近年来研究较多。纳米囊 (Nanocapsules) 特指药物包裹在成膜材料中形成的 纳米粒子， 同样具有纳米粒的体内外特点。(Kreu。
27、ter J.Nanoparticles-a historical perspective.Int JPharm， 2007， 331 ： 1-10) 0014 乳剂常用作脂溶性药物的传递系统， 在体内具有靶向性、 缓释和控释效果。乳剂 的粒径分布范围很广， 从数微米到纳米级。纳米乳 (Nanoemulsions) 是指粒径在 200 纳 米以下的乳滴组成的体系， 可以将脂溶性药物包裹在乳滴中。由于其高度分散性， 它作 为药物载体同样有提高药物生物利用度、 增强靶向性等特点。而微乳 (Microemulsions) 是指粒径在 100 纳米以下的乳滴组成的体系， 同样具有纳米乳的特点。(Sola。
28、ns C， et al.Nano-emulsions.Curr OpinColloid Interface Sci， 2005， 10 ： 102-110 ； Kawakami K， et al.Microemulsion formulation for enhanced absorption of poorly soluble drugs II.In vivo study.JControlled Rel， 2002， 81 ： 75-82) 0015 胶束 (Micelles) 对药物， 特别是脂溶性药物有很好的增溶作用， 可用作药物传递 系统 (Rangel-Yagui CO， et al。
29、.Micellar solubilization of drugs.J PharmPharmaceut Sci， 2005， 8 ： 147-163)。近年来， 聚合物胶束作为传递系统的作用越来越受到重视 (Torchilin VP.Micellar nanocarriers ： Pharmaceuticalperspectives.Pharm Res， 2007， 24 ： 1-16)。 0016 纳米凝胶 (Nanogels) 是近年来开始被研究的一种纳米传递系统， 药物包裹 说 明 书 CN 101244036 B4/11 页 7 在内部， 并显示出纳米粒子的体内外特点 (Xu D-M，。
30、 et al.Size-dependentproperties of M-PEIs nanogels for gene delivery in cancer cells.Int J Pharm， 2007， 338 ： 291-296)。树枝状聚合物 (Dendrimer) 是人工合成的高分子， 具有完美的纳米级结构， 内部 可包裹药物 (Boas U， Heegaard PMH.Dendrimers in drugresearch.Chem Soc Rev， 2004， 33， 43-63)。 0017 自组装药物传递系统 (Self-assembled drug delivery syst。
31、ems， SADDS) 是 两亲前药在水中自组装形成的高度分散的聚集体。它与传统的药物传递系统相比， 有 载药量大、 无药物渗漏、 稳定性好、 靶向作用强、 有控释作用等特点 (Yiguang Jin， et al.Self-assembled drug delivery systems.1.Properties and invitro/in vivo behavior of acyclovir self-assembled nanoparticles(SAN).Int JPharm， 2006， 309(1-2) ： 199-207)， 适合于抗病毒和抗癌治疗。 发明内容 0018 本发明人。
32、出乎意料地发现将胆固醇基膦酰核苷类似物制备成高度分散剂型后， 具 有突出的优势。由于高度分散剂型的特点， 胆固醇基膦酰核苷类似物可以充分发挥其治疗 特点， 例如增强生物利用度、 缓控释、 靶向等， 根据具体剂型和处方组成呈现不同的特点。 0019 本发明中高度分散剂型中的胆固醇基膦酰核苷类似物的核苷类似物原型分子一 般是有药理活性的分子， 优选的是具有抗病毒或抗癌作用的药物。本发明所采用的核苷类 似物原型分子选自阿昔洛韦、 更昔洛韦、 泛昔洛韦、 喷昔洛韦、 万乃洛韦、 阿巴卡韦、 利巴韦 林、 索利夫定、 阿糖腺苷、 齐多夫定、 拉米夫定、 去羟肌苷、 扎西他滨、 恩曲他滨、 司他夫定、 西。
33、 多福韦、 甲氨蝶呤、 吉西他滨、 卡培他滨、 氟达拉滨、 去氧氟尿苷、 阿糖胞苷、 阿扎胞苷， 更优 的选自阿昔洛韦、 阿巴卡韦、 利巴韦林、 阿糖腺苷、 齐多夫定、 拉米夫定、 去羟肌苷、 扎西他 滨、 恩曲他滨、 司他夫定、 西多福韦、 吉西他滨、 去氧氟尿苷、 阿糖胞苷。需要指出的是， 本发 明的范围并不仅限于上述药物， 能够形成胆固醇基膦酰化衍生物的核苷类似物药物都是本 发明的范围。 0020 由核苷类似物获得胆固醇基膦酰核苷类似物的方法可参考很多已公开的文献， 例如某些制备膦酰核苷类似物和连接脂肪基团的通用合成方法 ( 如 ： KrlkovS， et al.Geminal hydr。
34、oxy phosphonate derivatives of nucleosides ： Anovel class of nucleoside 5 -monophosphate analogues.Tetrahedron Lett， 2000， 41 ： 955-958 ； Kim A， et al.Synthesis and anti-HCMV activity of novel cyclopropylphosphonic acid nucleosides.Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids， 2006， 25 ： 1399-1406 ； Prisbe。
35、 EJ， et al.Synthesis and Antiherpes Virus Activity of Phosphateand Phosphonate Derivatives of 9-(1， 3-Dihydroxy-2-propoxy)methylguanine.JMed Chem， 1986， 29 ： 671-675)。由于各种核苷类似物结构间存在相似性， 这些反应可推广到本发明所述的核苷 类似物。又由于胆固醇呈脂溶性， 所以在膦酰核苷类似物上连接脂肪链的反应基本可适用 于胆固醇的连接。 0021 本发明中的胆固醇基膦酰核苷类似物， 其一般结构为 ： 0022 Nu-L-Ch 00。
36、23 其中 Nu 是核苷类似物基团， L 是膦酰基， Ch 是胆固醇基团。具体分子结构选自 说 明 书 CN 101244036 B5/11 页 8 胆固醇基膦酰阿昔洛韦、 胆固醇基膦酰更昔洛韦、 胆固醇基膦酰泛 昔洛韦、 胆固醇基膦酰 喷昔洛韦、 胆固醇基膦酰万乃洛韦、 胆固醇基膦酰阿巴卡韦、 胆固醇基膦酰利巴韦林、 胆固 醇基膦酰索利夫定、 胆固醇基膦酰阿糖腺苷、 胆固醇基膦酰齐多夫定、 胆固醇基膦酰拉米夫 定、 胆固醇基膦酰去羟肌苷、 胆固醇基膦酰扎西他滨、 胆固醇基膦酰恩曲他滨、 胆固醇基膦 酰司他夫定、 胆固醇基膦酰西多福韦、 胆固醇基膦酰甲氨蝶呤、 胆固醇基膦酰吉西他滨、 胆 固醇。
37、基膦酰卡培他滨、 胆固醇基膦酰氟达拉滨、 胆固醇基膦酰去氧氟尿苷、 胆固醇基膦酰阿 糖胞苷、 胆固醇基膦酰阿扎胞苷， 以及相应的在膦酰基继续酰化成酯或酰胺的情况 ； 更优的 选自胆固醇基膦酰阿昔洛韦、 胆固醇基膦酰阿巴卡韦、 胆固醇基膦酰利巴韦林、 胆固醇基膦 酰阿糖腺苷、 胆固醇基膦酰齐多夫定、 胆固醇基膦酰拉米夫定、 胆固醇基膦酰去羟肌苷、 胆 固醇基膦酰扎西他滨、 胆固醇基膦酰恩曲他滨、 胆固醇基膦酰司他夫定、 胆固醇基膦酰西多 福韦、 胆固醇基膦酰吉西他滨、 胆固醇基膦酰去氧氟尿苷、 胆固醇基膦酰阿糖胞苷， 以及相 应的在膦酰基继续酰化成酯或酰胺的情况。这些胆固醇基膦酰核苷类似物可作为。
38、前药， 优 选的是有抗病毒或抗癌作用的胆固醇基膦酰核苷类似物。 如果胆固醇基膦酰核苷类似物能 形成盐， 如钠盐、 钾盐、 盐酸盐、 硫酸盐、 醋酸盐、 马来酸盐， 也同样适用于本发明。具体分子 并不限于上述举例， 只要满足上述通式即可。 0024 本发明中含胆固醇基膦酰核苷类似物的高度分散剂型， 其粒子成高度分散状态， 一般地粒子直径小于 1000 微米， 优选的粒子直径小于 100 微米， 更优选的粒子直径小于 1 微米， 进一步优选的是小于 0.5 微米， 更进一步优选的是小于 0.2 微米。高度分散剂型一 般以水性分散液的形式存在并给药， 也可以经过适当处理如干燥过程获得固态或半固态形 。
39、式。 高度分散剂型具体选自脂质体、 非离子表面活性剂泡囊、 微粒、 纳米粒、 乳剂、 胶束、 纳米 凝胶、 树枝状聚合物或自组装传递系统。 高度分散剂型根据其具体组成和给药途径， 在体内 会表现出促吸收、 靶向、 缓释或控释等作用。 0025 本发明中含胆固醇基膦酰核苷类似物的乳剂， 其粒子大小没有限制， 优选自微乳 或纳米乳。本发明中含胆固醇基膦酰核苷类似物的胶束， 优选的是聚合物胶束。 0026 含胆固醇基膦酰核苷类似物的脂质体制备方法可参考相关文献和专业技术 ( 如 ： New RRC ed.Liposome ： a practical approach.Oxford ： OxfordU。
40、niversity Press， 1990 ； 邓英杰 . 脂质体技术 . 北京 ： 人民卫生出版社， 2007)。一般地， 如果采用薄膜分散法制备 脂质体， 可以将胆固醇基膦酰核苷类似物与磷脂等膜材共同溶于有机溶剂， 盛入烧瓶中， 减 压旋转蒸发， 得到一层薄膜， 然后加入水或适当缓冲液， 进行振荡和超声， 直至形成均匀的 混悬液。如果超声时间延长， 还可能得到纳米级分散系统。如果采用反相蒸发法制备脂质 体， 可以将胆固醇基膦酰核苷类似物与磷脂等膜材共同溶于有机溶剂， 加入水或缓冲液， 高 速搅拌或超声制备成乳剂， 然后减压旋转蒸发， 得到凝胶态物质， 然后加入水或适当缓冲液 或不加， 继续。
41、减压旋转蒸发， 直至形成均匀的脂质体混悬液。 脂质体混悬液还可以选择适当 处方并在适当条件下进行冷冻干燥或喷雾干燥， 形成固态， 这样可以保证制剂的稳定性， 临 用前加入水溶液振摇即可得到脂质体混悬液。 运用相近的技术可以获得含胆固醇基膦酰核 苷类似物的非离子表面活性剂泡囊。 选择合适的处方和工艺就可以得到较理想的含胆固醇 基膦酰核苷类似物的脂质体和非离子表面活性剂泡囊。 0027 含胆固醇基膦酰核苷类似物的微粒包括微球和微囊。微球的制备方法可参 考相关文献和专业技术 ( 如 ： Perez MH， et al.The preparation and evaluationof 说 明 书 CN。
42、 101244036 B6/11 页 9 poly(e-caprolactone)microparticles containing both a lipophilic and ahydrophilic drug.J Controlled Rel， 2000， 65 ： 429-438)。 一般地， 可将药物与聚合物共 同溶于有机溶剂中， 然后利用 O/W 乳化法制备得到微球。还有很多其他制备微球的方法， 在 许多文献中都可以找到(如 ： Freiberg S， Zhu XX.Polymer microspheres for controlled drug release.Int J Phar。
43、m， 2004， 282 ： 1-18)， 包括单体聚合法、 溶剂挥发法、 喷雾干燥 法。微囊的制备方法包括相分离法、 液中干燥法、 喷雾干燥法等 ( 如 ： 陆彬主编 . 药物新剂 型与新技术 . 北京 ： 人民卫生出版社， 1998)。选择合适的处方和工艺就可以得到较理想的 含胆固醇基膦酰核苷类似物的微粒。 0028 含胆固醇基膦酰核苷类似物的纳米粒制备方法有很多种， 文献也很多， 根据纳米 粒的材料和要求不同， 可参考相关文献和专业技术(如 ： NanoparticlesA Review.Mohanraj VJ， Chen Y.Tropic J Pharm Res， 2006， 5(1)。
44、 ： 561-573 ； Yiguang Jin.Nanotechnology in pharmaceutical manufacturing，in ： (Shayne CoxGad，ed.)Pharmaceutical Manufacturing Handbook.John Wiley and Sons， Inc.， 2008， 1251-1290) 一般地， 聚合物 纳米粒的制备方法包括聚合法、 沉淀法、 溶剂挥发法、 盐析法 ； 固体脂质纳米粒 (SLN) 的制 备方法包括高压乳匀法、 微乳法、 溶剂挥发法 ； 无机纳米粒的制备方法包括沉淀法。纳米囊 的方法一般地包括单体界面聚合法和聚合。
45、物界面纳米沉积法。 含胆固醇基膦酰核苷类似物 的纳米粒混悬液还可以选择适当处方并在适当条件下进行冷冻干燥或喷雾干燥， 形成固体 粉末状， 这样可以保证制剂的稳定性， 临用前加入水溶液振摇即可得到纳米粒混悬液。 选择 合适的处方和工艺就可以得到较理想的含胆固醇基膦酰核苷类似物的纳米粒。 0029 固体脂质纳米粒作为含胆固醇基膦酰核苷类似物的纳米粒剂型的优选。一般地， 将胆固醇基膦酰核苷类似物与常温下为固态的脂质， 如磷脂、 脂肪酸、 甘油酯， 共同加热熔 融， 然后加入水或适当缓冲液， 在加热情况下在高压乳匀机上循环乳化多次， 形成纳米分散 的乳滴， 迅速冷却， 使之固化， 即得到含胆固醇基膦酰。
46、核苷类似物的固体脂质纳米粒。用微 乳法也可制得含胆固醇基膦酰核苷类似物的固体脂质纳米粒。 0030 含胆固醇基膦酰核苷类似物的乳剂制备方法可参考相关文献和专业技术 ( 如 ： 陆彬主编 . 药物新剂型与新技术 . 北京 ： 人民卫生出版社， 1998)。一 般地， 需要添加 乳化剂、 油相， 采用各种乳化设备 ( 如电动搅拌器、 胶体磨、 超声波乳化器、 高速搅拌器、 高压乳匀机 ) 进行分散制得。选择适当处方后， 乳剂还可以干燥形成干乳， 临用前配 置重新形成乳剂。设计适当处方后， 还可以制备得到自乳化系统 ( 如 ： Gursoy RN， et al.Self-emulsifying dr。
47、ug deliverysystems(SEDDS)for improved oral delivery of lipophilic drugs.BiomedPharmacother， 2004， 58 ： 173-182)。 纳米乳和微乳是较特殊的乳 剂。纳米乳的粒径主要分布在 200nm 以下 ； 而微乳的粒径主要分布在 100nm 以下。含胆固 醇基膦酰核苷类似物的纳米乳制备参考相应文献 ( 如 ： Solans C， et al.Nano-emulsions. Curr Opin Colloid Interface Sci， 2005， 10 ： 102-110)。 含胆固醇基膦酰核苷类。
48、似物的微 乳制备可以参考相应文献。 一般地， 在微乳中包括乳化剂、 助乳化剂、 助溶剂、 油相、 水相、 药 物。一般在选择合适的处方后， 即可容易地形成微乳。如果选择合适的处方， 一般包括乳化 剂、 助乳化剂、 助溶剂、 油相， 还可以组成自微乳化系统， 在加入适量水溶液后， 系统可以自 行分散成微乳。 选择合适的处方和工艺就可以得到较理想的含胆固醇基膦酰核苷类似物的 乳剂。 说 明 书 CN 101244036 B7/11 页 10 0031 含胆固醇基膦酰核苷类似物的胶束制备可以参考相应文献。聚合物胶束在本发 明中作为优选， 其制备方法参考相应文献 ( 如 ： Torchilin VP.。
49、Micellarnanocarriers ： Pharmaceutical perspectives.Pharm Res， 2007， 24 ： 1-16 ； Liu J，LeeH，Allen C.Formulation of Drugs in Block Copolymer Micelles ： Drug Loadingand Release.Curr Pharm Des， 2006， 12， 4685-4701)， 一般地包括透析法、 乳化法、 薄膜分散法。选择合适的处 方和工艺就可以得到较理想的含胆固醇基膦酰核苷类似物的胶束。 0032 含胆固醇基膦酰核苷类似物的纳米凝胶制备可以参考相应文献 ( 如 ： ShinY， et al.Hybrid nanogels for sustainable positive thermosensitive drug release. JControlled Rel， 2001， 73 ： 1-6)。一般采用具有两亲性的共聚物分散在水中形成。 0033 含胆固醇基膦酰核苷类似物的树枝状聚合物可以参考相应文献 ( 如 ： M。