一种具有抗痴呆作用的中药提取物及其制备方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201110053682.9

申请日:

20110307

公开号:

CN102119986A

公开日:

20110713

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:

IPC分类号:

A61K36/888,A61P25/28

主分类号:

A61K36/888,A61P25/28

申请人:

北京中医药大学

发明人:

石任兵,刘洋,姜艳艳,陈小虎

地址:

100029 北京市朝阳区北三环东路11号

优先权:

CN201110053682A

专利代理机构:

北京太兆天元知识产权代理有限责任公司

代理人:

张韬;刘伟

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内容摘要

本发明中药提取物由开心散经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到,富集了开心散中的皂苷类成分和酚类成分,同时经过大鼠记忆障碍模型试验证明,本发明中药提取物可改善模型大鼠的学习记忆能力,使模型大鼠错误次数减少,潜伏期延长。

权利要求书

1.一种具有抗痴呆作用的中药提取物,其特征在于该中药提取物的主要由如下方法制成:步骤1:选取如下原料药:茯苓 200-600重量份  人参   100-300重量份远志 100-300重量份  石菖蒲 100-300重量份;步骤2:乙醇提取;步骤3:弱极性或非极性大孔吸附树脂纯化;其中总皂苷含量为10-20%,总酚含量为30-60%。 2.如权利要求1所述的中药提取物,其特征在于步骤1中原料药的组成为: 3.如权利要求1或2所述的中药提取物,其特征在于步骤2中,将原料药用40-80%乙醇回流提取2-4次,每次提取0.5-2小时。 4.如权利要求1或2所述的中药提取物,其特征在于步骤3中,将步骤2所得提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为0.02-0.1g/mL,以2000-4000转/分钟的转速离心10-30min。 5.如权利要求1或2所述的中药提取物,其特征在于步骤3中,离心后取上清液,通过弱极性或非极性大孔吸附树脂,吸附流速为1.0-3.0mL/min,树脂柱径高比为0.5-1.5∶6.7-10.7,上样液浓度为0.02-0.1g/mL,水洗脱1-3倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0-3.0mL/min,70-95%乙醇洗脱3-7倍树脂体积,洗脱流速为1.0-3.0mL/min,收集乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得。 6.一种具有抗痴呆作用的中药提取物的制备方法,其特征在于该方法包括如下步骤:步骤1:选取如下原料药:茯苓  200-600重量份    人参    100-300重量份远志  100-300重量份    石菖蒲  100-300重量份;步骤2:乙醇提取;步骤3:弱极性或非极性大孔吸附树脂纯化。 7.如权利要求6所述的方法,其特征在于步骤2中,将原料药用40-80%乙醇回流提取2-4次,每次提取0.5-2小时。 8.如权利要求6所述的方法,其特征在于步骤3中,将步骤2所得提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为0.02-0.1g/mL,以2000-4000转/分钟的转速离心10-30min。 9.如权利要求6所述的方法,其特征在于步骤3中,离心后取上清液,通过弱极性或非极性大孔吸附树脂,吸附流速为1.0-3.0mL/min,树脂柱径高比为0.5-1.5∶6.7-10.7,上样液浓度为0.02-0.1g/mL,水洗脱1-3倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0-3.0mL/min,70-95%乙醇洗脱3-7倍树脂体积,洗脱流速为1.0-3.0mL/min,收集乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得。 10.如权利要求1-5任一所述的中药提取物在制备具有抗痴呆作用药物中的应用。

说明书



技术领域

本发明涉及一种中药提取物,特别涉及一种具有抗痴呆作用的中药提取物及其制备方法。

背景技术

开心散始见于《备急千金要方》,由人参、远志各四分,茯苓二两,石菖蒲一两组成,“主好忘”。为益气养心、安神定志之代表方剂,主治为中医情志性疾病:心气不足,神志不宁,健忘失眠,心怯怔忡等证。该方中人参益心气,安心神,可治疗心悸怔忡,失眠健忘;远志行气散郁、益智慧;茯苓归心、脾、肾等诸经,主治忧患、惊邪恐悸;石菖蒲开心孔、明耳目,发散药性、引药入经。目前临床上,开心散及其加减方多用于治疗老年痴呆症和抑郁症。

开心散各单味药中主要化学成分有:皂苷(人参,远志)、多糖(人参,茯苓)、寡糖酯(远志)、口山酮(远志)、挥发油(石菖蒲)、三萜、(茯苓、石菖蒲)、酚酸(石菖蒲)等;目前,未见从开心散中纯化制备抗痴呆活性部位的报道,本发明将开心散中的皂苷类成分和酚类成分采用大孔吸附树脂进行富集纯化,得到开心散抗痴呆活性部位,有利于进一步创新药物的研发。

发明内容

本发明的目的在于公开一种具有抗痴呆作用的中药提取物,本发明的另一个目的在于公开其制备方法,本发明的第三个目的在于提供其质量检测方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的:

本发明中药提取物由如下原料药制成:

茯苓 200-600重量份    人参   100-300重量份

远志 100-300重量份    石菖蒲 100-300重量份。

本发明中药提取物优选由如下原料药制成:

茯苓 400重量份        人参   200重量份

远志 200重量份        石菖蒲 200重量份。

本发明中药提取物优选由如下原料药制成:

茯苓 350重量份        人参   280重量份

远志 260重量份        石菖蒲 180重量份。

本发明中药提取物优选由如下原料药制成:

茯苓 560重量份    人参   160重量份

远志 180重量份    石菖蒲 270重量份。

本发明中药提取物的制备方法包括如下步骤:

步骤1:选取上述比例原料药;

步骤2:乙醇提取;

步骤3:大孔吸附树脂纯化;

该中药提取物中总皂苷含量为10-20%,总酚含量为30-60%,优选总酚含量为40-50%。

上述步骤2中,将原料药用40-80%乙醇回流提取2-4次,每次提取0.5-2小时;优选用50%乙醇回流提取3次,每次1.5小时;

上述步骤3中,将步骤2所得提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为0.02-0.1g/mL,以2000-4000转/分钟的转速离心10-30min;优选使水溶液浓度为0.05g/mL,以3000转/分钟的转速离心10min;

上述步骤3中,离心后取上清液,通过弱极性或非极性大孔吸附树脂,吸附流速为1.0-3.0mL/min,树脂柱径高比为0.5-1.5∶6.7-10.7,上样液浓度为0.02-0.1g/mL,水洗脱1-3倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0-3.0mL/min,70-95%乙醇洗脱3-7倍树脂体积,洗脱流速为1.0-3.0mL/min,收集乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得;优选80-95%乙醇洗脱;

上述步骤3中,优选1.25L 860021型大孔吸附树脂,吸附流速2.0mL/min,树脂柱径高比为1∶8.7,上样液浓度为0.05g/mL,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得。

将以上所得提取物,加入常规辅料,按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型,包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液。

本发明中药提取物由开心散经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到,富集了开心散中的皂苷类成分和酚类成分,同时经过大鼠记忆障碍模型试验证明,本发明中药提取物可改善模型大鼠的学习记忆能力,使模型大鼠错误次数减少,潜伏期延长。

实验例1本发明抗痴呆活性部位致大鼠记忆障碍模型的改善作用

(一)实验材料

1.实验动物

SD大鼠,雄性,体重256.3±8.4g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,合格证号:SCXK(京)2009-2010;

2.药品与试剂

受试药:开心散抗痴呆活性部位,按实施例5方法制备,给药前用0.5%CMC-Na溶解配成溶液。

东莨菪碱,购于Fluka公司,生产批号:2040506,大鼠剂量为0.5g/kg。

3.器材

大鼠跳台仪,箱内隔成2室,可同时测定2只大鼠。

(二)实验方法与结果

1.分组及给药

大鼠按体重随机分成4组,即模型对照组、正常对照组、开心散抗痴呆活性部位大、小剂量组,每组12只,开心散抗痴呆活性部位大、小剂量组连续给药4天,模型组与正常组给予等容积的0.5%CMC-Na。

2.实验方法

第四天给药后30分钟(准确计时)腹腔注射东莨菪碱造模,30分钟后进行训练(记忆获得实验),24小时后测试(记忆巩固实验)。模型组注射东莨菪碱造模,30分钟进行训练,24小时后测试。正常组直接进行训练,24小时后测试。

跳台行为学实验过程

将同组2只大鼠同时放入跳台仪中,适应环境3分钟,训练5分钟,记录仪记录第一次跳上跳台的时间(潜伏期),安全期时间,5分钟内的跳下次数(错误次数)。24小时后,进行记忆巩固测试,先将大鼠放到跳台上,记录第一次跳下时间(触电潜伏期),安全期时间,5分钟内的跳下次数(错误次数)。

3.统计方法

使用SAS8.0统计软件进行分析,实验结果以均数±标准误表示。采用两样本t检验和非参数检验(Mann-Whitney Test)进行两两比较,采用单因素方差分析(ANOVA)进行多组间比较,组间差异采用LSD(方差齐)或者Games-Howell法(方差不齐),分别将记忆巩固测试阶段各组给药大鼠与模型组大鼠和正常组大鼠进行比较,求得组间差异。

4.实验结果

表1 3-苯甲酰去氢土莫酸抗痴呆实验结果

注:&&P<0.01,与对照组比较;**P<0.01,与模型组比较;*P<0.05,与模型组比较

(三)结论

与模型组相比,开心散抗痴呆活性部位大、小剂量组均可改善模型大鼠的学习记忆能力,使模型大鼠错误次数减少,潜伏期延长。

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1:胶囊剂

茯苓 400g    人参   200g

远志 200g    石菖蒲 200g

按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,使水溶液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),以3000转/分钟的转速离心10min,取上清液,通过1.25L860021型大孔吸附树脂,吸附流速2.0mL/min,树脂柱径高比为1∶8.7,上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,加入常规辅料,按照常规工艺制成胶囊剂;

总皂苷的含量测定方法:

对照品:远志皂苷元;

试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总皂苷含量为14.94%;

总酚含量测定方法:

对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;

试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为45.36%。

实施例2:片剂

茯苓    350g    人参    280g

远志    260g    石菖蒲  180g

按上述比例取原料药饮片1kg,60%乙醇10L回流提取2次,每次提取2小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,使水溶液浓度为0.08g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),以2500转/分钟的转速离心8min,取上清液,通过1.25L860021型大孔吸附树脂,吸附流速3.0mL/min,树脂柱径高比为1∶6.7,上样液浓度为0.02g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),水洗脱1.5倍树脂体积进行除杂,除杂流速为2.0mL/min,95%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为1.0mL/min,收集乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,加入常规辅料,按照常规工艺制成片剂;

总皂苷的含量测定方法:

对照品:远志皂苷元;

试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总皂苷含量为14.94%;

总酚含量测定方法:

对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;

试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为45.36%。

实施例3:丸剂

茯苓560g    人参160g

远志180g    石菖蒲270g

按上述比例取原料药饮片1kg,70%乙醇10L回流提取4次,每次提取1小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,使水溶液浓度为0.03g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),以3800转/分钟的转速离心12min,取使上清液,通过1.25L860021型大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶10.7,上样液浓度为0.1g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),水洗脱3倍树脂体积进行除杂,除杂流速为2.0mL/min,85%乙醇洗脱6倍树脂体积,洗脱流速为3.0mL/min,收集乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,加入常规辅料,按照常规工艺制成丸剂;

总皂苷的含量测定方法:

对照品:远志皂苷元;

试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总皂苷含量为14.94%;

总酚含量测定方法:

对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;

试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为45.36%。

实施例4:口服液体制剂

茯苓 400g    人参   200g

远志 200g    石菖蒲 200g

按上述比例取原料药取饮片1kg,80%乙醇10L回流提取4次,每次提取1小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,使水溶液浓度为0.1g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),以3800转/分钟的转速离心12min,取上清液,通过1.25L860021型大孔吸附树脂,吸附流速2.0mL/min,树脂柱径高比为1∶8.7,上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中:皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,加入常规辅料,按照常规工艺制成口服液体制剂;

总皂苷的含量测定方法:

对照品:远志皂苷元;

试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总皂苷含量为14.94%;

总酚含量测定方法:

对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;

试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为45.36%。

实施例5:注射剂

茯苓450g    人参160g

远志150g    石菖蒲250g

按上述比例取原料药饮片1kg,40%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,使水溶液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),以3000转/分钟的转速离心10min,取上清液,通过1.25L860021型大孔吸附树脂,吸附流速2.0mL/min,树脂柱径高比为1∶8.7,上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中:皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,加入常规辅料,按照常规工艺制成注射剂;

总皂苷的含量测定方法:

对照品:远志皂苷元;

试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总皂苷含量为14.94%;

总酚含量测定方法:

对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;

试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为45.36%。

实施例6:

茯苓400g    人参200g

远志200g    石菖蒲200g

按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,使水溶液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),以3000转/分钟的转速离心10min,取上清液,通过1.25L860021型大孔吸附树脂,吸附流速2.0mL/min,树脂柱径高比为1∶8.7,上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为本发明中药提取物;

总皂苷的含量测定方法:

对照品:远志皂苷元;

试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总皂苷含量为14.94%;

总酚含量测定方法:

对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;

试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为45.36%。

实施例7:

茯苓 350g    人参   280g

远志 260g    石菖蒲 180g

按上述比例取原料药饮片1kg,60%乙醇10L回流提取2次,每次提取2小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,使水溶液浓度为0.08g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),以2500转/分钟的转速离心8min,取上清液,通过1.25L860021型大孔吸附树脂,吸附流速3.0mL/min,树脂柱径高比为1∶6.7,上样液浓度为0.02g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),水洗脱1.5倍树脂体积进行除杂,除杂流速为2.0mL/min,95%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为1.0mL/min,收集乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为本发明中药提取物;

总皂苷的含量测定方法:

对照品:远志皂苷元;

试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总皂苷含量为14.94%;

总酚含量测定方法:

对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;

试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为45.36%。

实施例8:

茯苓560g    人参160g

远志180g    石菖蒲270g

按上述比例取原料药饮片1kg,70%乙醇10L回流提取4次,每次提取1小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,使水溶液浓度为0.03g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),以3800转/分钟的转速离心12min,取使上清液,通过1.25L860021型大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶10.7,上样液浓度为0.1g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),水洗脱3倍树脂体积进行除杂,除杂流速为2.0mL/min,85%乙醇洗脱6倍树脂体积,洗脱流速为3.0mL/min,收集乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为本发明中药提取物;

总皂苷的含量测定方法:

对照品:远志皂苷元;

试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总皂苷含量为14.94%;

总酚含量测定方法:

对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;

试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为45.36%。

实施例9:

茯苓400g    人参200g

远志200g    石菖蒲200g

按上述比例取原料药取饮片1kg,80%乙醇10L回流提取4次,每次提取1小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,使水溶液浓度为0.1g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),以3800转/分钟的转速离心12min,取上清液,通过1.25L860021型大孔吸附树脂,吸附流速2.0mL/min,树脂柱径高比为1∶8.7,上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中:皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为本发明中药提取物;

总皂苷的含量测定方法:

对照品:远志皂苷元;

试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总皂苷含量为14.94%;

总酚含量测定方法:

对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;

试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为45.36%。

实施例10:

茯苓450g    人参160g

远志150g    石菖蒲250g

按上述比例取原料药饮片1kg,40%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,使水溶液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),以3000转/分钟的转速离心10min,取上清液,通过1.25L860021型大孔吸附树脂,吸附流速2.0mL/min,树脂柱径高比为1∶8.7,上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中:皂苷浓度为0.4009mg/ml,酚类浓度为2.1626mg/ml),水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为本发明中药提取物;

总皂苷的含量测定方法:

对照品:远志皂苷元;

试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总皂苷含量为14.94%;

总酚含量测定方法:

对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;

试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;

显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;

测定方法:将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为45.36%。

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1、(10)申请公布号 CN 102119986 A (43)申请公布日 2011.07.13 CN 102119986 A *CN102119986A* (21)申请号 201110053682.9 (22)申请日 2011.03.07 A61K 36/888(2006.01) A61P 25/28(2006.01) (71)申请人 北京中医药大学 地址 100029 北京市朝阳区北三环东路 11 号 (72)发明人 石任兵 刘洋 姜艳艳 陈小虎 (74)专利代理机构 北京太兆天元知识产权代理 有限责任公司 11108 代理人 张韬 刘伟 (54) 发明名称 一种具有抗痴呆作用的中药提取物及其制。

2、备 方法 (57) 摘要 本发明中药提取物由开心散经过乙醇提取、 大孔吸附树脂纯化得到, 富集了开心散中的皂苷 类成分和酚类成分, 同时经过大鼠记忆障碍模型 试验证明, 本发明中药提取物可改善模型大鼠的 学习记忆能力, 使模型大鼠错误次数减少, 潜伏期 延长。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 10 页 CN 102119991 A1/2 页 2 1. 一种具有抗痴呆作用的中药提取物, 其特征在于该中药提取物的主要由如下方法制 成 : 步骤 1 : 选取如下原料药 : 茯苓 200-600 重量份 人参 100-30。

3、0 重量份 远志 100-300 重量份 石菖蒲 100-300 重量份 ; 步骤 2 : 乙醇提取 ; 步骤 3 : 弱极性或非极性大孔吸附树脂纯化 ; 其中总皂苷含量为 10-20, 总酚含量为 30-60。 2. 如权利要求 1 所述的中药提取物, 其特征在于步骤 1 中原料药的组成为 : 3. 如权利要求 1 或 2 所述的中药提取物, 其特征在于步骤 2 中, 将原料药用 40-80乙 醇回流提取 2-4 次, 每次提取 0.5-2 小时。 4.如权利要求1或2所述的中药提取物, 其特征在于步骤3中, 将步骤2所得提取物加 水分散溶解, 使水溶液浓度为 0.02-0.1g/mL, 以。

4、 2000-4000 转 / 分钟的转速离心 10-30min。 5. 如权利要求 1 或 2 所述的中药提取物, 其特征在于步骤 3 中, 离心后取上清 液, 通过弱极性或非极性大孔吸附树脂, 吸附流速为 1.0-3.0mL/min, 树脂柱径高比为 0.5-1.5 6.7-10.7, 上样液浓度为 0.02-0.1g/mL, 水洗脱 1-3 倍树脂体积进行除杂, 除杂 流速为 1.0-3.0mL/min, 70-95乙醇洗脱 3-7 倍树脂体积, 洗脱流速为 1.0-3.0mL/min, 收 集乙醇洗脱液, 回收溶剂, 减压干燥, 即得。 6. 一种具有抗痴呆作用的中药提取物的制备方法, 。

5、其特征在于该方法包括如下步骤 : 步骤 1 : 选取如下原料药 : 茯苓 200-600 重量份 人参 100-300 重量份 远志 100-300 重量份 石菖蒲 100-300 重量份 ; 步骤 2 : 乙醇提取 ; 步骤 3 : 弱极性或非极性大孔吸附树脂纯化。 7. 如权利要求 6 所述的方法, 其特征在于步骤 2 中, 将原料药用 40-80乙醇回流提取 2-4 次, 每次提取 0.5-2 小时。 8. 如权利要求 6 所述的方法, 其特征在于步骤 3 中, 将步骤 2 所得提取物加水分散溶 解, 使水溶液浓度为 0.02-0.1g/mL, 以 2000-4000 转 / 分钟的转速。

6、离心 10-30min。 9. 如权利要求 6 所述的方法, 其特征在于步骤 3 中, 离心后取上清液, 通过弱极性或非 极性大孔吸附树脂, 吸附流速为 1.0-3.0mL/min, 树脂柱径高比为 0.5-1.5 6.7-10.7, 上 样液浓度为 0.02-0.1g/mL, 水洗脱 1-3 倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为 1.0-3.0mL/min, 70-95乙醇洗脱 3-7 倍树脂体积, 洗脱流速为 1.0-3.0mL/min, 收集乙醇洗脱液, 回收溶 权 利 要 求 书 CN 102119986 A CN 102119991 A2/2 页 3 剂, 减压干燥, 即得。 10. 如。

7、权利要求 1-5 任一所述的中药提取物在制备具有抗痴呆作用药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102119986 A CN 102119991 A1/10 页 4 一种具有抗痴呆作用的中药提取物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种中药提取物, 特别涉及一种具有抗痴呆作用的中药提取物及其制 备方法。 背景技术 0002 开心散始见于 备急千金要方 , 由人参、 远志各四分, 茯苓二两, 石菖蒲一两组成, “主好忘” 。为益气养心、 安神定志之代表方剂, 主治为中医情志性疾病 : 心气不足, 神志不 宁, 健忘失眠, 心怯怔忡等证。 该方中人参益心气, 安心神, 可治疗心悸怔忡,。

8、 失眠健忘 ; 远志 行气散郁、 益智慧 ; 茯苓归心、 脾、 肾等诸经, 主治忧患、 惊邪恐悸 ; 石菖蒲开心孔、 明耳目, 发散药性、 引药入经。目前临床上, 开心散及其加减方多用于治疗老年痴呆症和抑郁症。 0003 开心散各单味药中主要化学成分有 : 皂苷 ( 人参, 远志 )、 多糖 ( 人参, 茯苓 )、 寡 糖酯 ( 远志 )、 口山酮 ( 远志 )、 挥发油 ( 石菖蒲 )、 三萜、 ( 茯苓、 石菖蒲 )、 酚酸 ( 石菖蒲 ) 等 ; 目前, 未见从开心散中纯化制备抗痴呆活性部位的报道, 本发明将开心散中的皂苷类成 分和酚类成分采用大孔吸附树脂进行富集纯化, 得到开心散抗痴呆。

9、活性部位, 有利于进一 步创新药物的研发。 发明内容 0004 本发明的目的在于公开一种具有抗痴呆作用的中药提取物, 本发明的另一个目的 在于公开其制备方法, 本发明的第三个目的在于提供其质量检测方法。 0005 本发明的目的是通过如下技术方案实现的 : 0006 本发明中药提取物由如下原料药制成 : 0007 茯苓 200-600 重量份 人参 100-300 重量份 0008 远志 100-300 重量份 石菖蒲 100-300 重量份。 0009 本发明中药提取物优选由如下原料药制成 : 0010 茯苓 400 重量份 人参 200 重量份 0011 远志 200 重量份 石菖蒲 200。

10、 重量份。 0012 本发明中药提取物优选由如下原料药制成 : 0013 茯苓 350 重量份 人参 280 重量份 0014 远志 260 重量份 石菖蒲 180 重量份。 0015 本发明中药提取物优选由如下原料药制成 : 0016 茯苓 560 重量份 人参 160 重量份 0017 远志 180 重量份 石菖蒲 270 重量份。 0018 本发明中药提取物的制备方法包括如下步骤 : 0019 步骤 1 : 选取上述比例原料药 ; 0020 步骤 2 : 乙醇提取 ; 0021 步骤 3 : 大孔吸附树脂纯化 ; 说 明 书 CN 102119986 A CN 102119991 A2/。

11、10 页 5 0022 该中药提取物中总皂苷含量为 10-20, 总酚含量为 30-60, 优选总酚含量为 40-50。 0023 上述步骤 2 中, 将原料药用 40-80乙醇回流提取 2-4 次, 每次提取 0.5-2 小时 ; 优选用 50乙醇回流提取 3 次, 每次 1.5 小时 ; 0024 上述步骤 3 中, 将步骤 2 所得提取物加水分散溶解, 使水溶液浓度为 0.02-0.1g/ mL, 以 2000-4000 转 / 分钟的转速离心 10-30min ; 优选使水溶液浓度为 0.05g/mL, 以 3000 转 / 分钟的转速离心 10min ; 0025 上述步骤 3 中,。

12、 离心后取上清液, 通过弱极性或非极性大孔吸附树脂, 吸附流速为 1.0-3.0mL/min, 树脂柱径高比为 0.5-1.5 6.7-10.7, 上样液浓度为 0.02-0.1g/mL, 水洗 脱 1-3 倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为 1.0-3.0mL/min, 70-95乙醇洗脱 3-7 倍树脂体 积, 洗脱流速为 1.0-3.0mL/min, 收集乙醇洗脱液, 回收溶剂, 减压干燥, 即得 ; 优选 80-95 乙醇洗脱 ; 0026 上述步骤 3 中, 优选 1.25L 860021 型大孔吸附树脂, 吸附流速 2.0mL/min, 树脂 柱径高比为 1 8.7, 上样液浓度为 。

13、0.05g/mL, 水洗脱 2 倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为 1.0mL/min, 90乙醇洗脱 5 倍树脂体积, 洗脱流速为 2.0mL/min, 收集乙醇洗脱液, 回收溶 剂, 减压干燥, 即得。 0027 将以上所得提取物, 加入常规辅料, 按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意 常规剂型, 包括胶囊剂、 片剂、 颗粒剂、 凝胶剂、 缓释剂、 口服液。 0028 本发明中药提取物由开心散经过乙醇提取、 大孔吸附树脂纯化得到, 富集了开心 散中的皂苷类成分和酚类成分, 同时经过大鼠记忆障碍模型试验证明, 本发明中药提取物 可改善模型大鼠的学习记忆能力, 使模型大鼠错误次数减少, 潜伏期。

14、延长。 0029 实验例 1 本发明抗痴呆活性部位致大鼠记忆障碍模型的改善作用 0030 ( 一 ) 实验材料 0031 1. 实验动物 0032 SD 大鼠, 雄性, 体重 256.38.4g, 由北京维通利华实验动物技术有限公司提供, 合格证号 : SCXK( 京 )2009-2010 ; 0033 2. 药品与试剂 0034 受试药 : 开心散抗痴呆活性部位, 按实施例 5 方法制备, 给药前用 0.5 CMC-Na 溶 解配成溶液。 0035 东莨菪碱, 购于 Fluka 公司, 生产批号 : 2040506, 大鼠剂量为 0.5g/kg。 0036 3. 器材 0037 大鼠跳台仪,。

15、 箱内隔成 2 室, 可同时测定 2 只大鼠。 0038 ( 二 ) 实验方法与结果 0039 1. 分组及给药 0040 大鼠按体重随机分成 4 组, 即模型对照组、 正常对照组、 开心散抗痴呆活性部位 大、 小剂量组, 每组12只, 开心散抗痴呆活性部位大、 小剂量组连续给药4天, 模型组与正常 组给予等容积的 0.5 CMC-Na。 0041 2. 实验方法 0042 第四天给药后 30 分钟 ( 准确计时 ) 腹腔注射东莨菪碱造模, 30 分钟后进行训练 说 明 书 CN 102119986 A CN 102119991 A3/10 页 6 ( 记忆获得实验 ), 24 小时后测试 (。

16、 记忆巩固实验 )。模型组注射东莨菪碱造模, 30 分钟进 行训练, 24 小时后测试。正常组直接进行训练, 24 小时后测试。 0043 跳台行为学实验过程 0044 将同组 2 只大鼠同时放入跳台仪中, 适应环境 3 分钟, 训练 5 分钟, 记录仪记录第 一次跳上跳台的时间 ( 潜伏期 ), 安全期时间, 5 分钟内的跳下次数 ( 错误次数 )。24 小时 后, 进行记忆巩固测试, 先将大鼠放到跳台上, 记录第一次跳下时间 ( 触电潜伏期 ), 安全期 时间, 5 分钟内的跳下次数 ( 错误次数 )。 0045 3. 统计方法 0046 使用 SAS8.0 统计软件进行分析, 实验结果以。

17、均数 标准误表示。采用两样本 t 检验和非参数检验 (Mann-Whitney Test) 进行两两比较, 采用单因素方差分析 (ANOVA) 进 行多组间比较, 组间差异采用 LSD( 方差齐 ) 或者 Games-Howell 法 ( 方差不齐 ), 分别将记 忆巩固测试阶段各组给药大鼠与模型组大鼠和正常组大鼠进行比较, 求得组间差异。 0047 4. 实验结果 0048 表 1 3- 苯甲酰去氢土莫酸抗痴呆实验结果 0049 0050 注 : &P 0.01, 与对照组比较 ; *P 0.01, 与模型组比较 ; *P 0.05, 与模型组 比较 0051 ( 三 ) 结论 0052 与。

18、模型组相比, 开心散抗痴呆活性部位大、 小剂量组均可改善模型大鼠的学习记 忆能力, 使模型大鼠错误次数减少, 潜伏期延长。 0053 下述实施例均能实现上述实验例的效果。 具体实施方式 0054 实施例 1 : 胶囊剂 0055 茯苓 400g 人参 200g 0056 远志 200g 石菖蒲 200g 0057 按上述比例取原料药饮片 1kg, 50乙醇 10L 回流提取 3 次, 每次提取 1.5 小时, 减压回收溶剂, 得提取物 ; 加水分散溶解, 使水溶液浓度为 0.05g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓度为 2.1626mg/ml), 以 。

19、3000 转 / 分钟的转速离心 10min, 取上清液, 通过 1.25L860021 型大孔吸附树脂, 吸附流速 2.0mL/min, 树脂柱径高比 为 1 8.7, 上样液浓度为 0.05g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类 浓度为 2.1626mg/ml), 水洗脱 2 倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为 1.0mL/min, 90乙醇洗 说 明 书 CN 102119986 A CN 102119991 A4/10 页 7 脱 5 倍树脂体积, 洗脱流速为 2.0mL/min, 收集 90乙醇洗脱液, 回收溶剂, 减压干燥, 加入 常规辅料, 按。

20、照常规工艺制成胶囊剂 ; 0058 总皂苷的含量测定方法 : 0059 对照品 : 远志皂苷元 ; 0060 试剂 : 0.5香草醛 - 冰醋酸溶液, 高氯酸, 冰醋酸 ; 0061 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于西林瓶中, 蒸干后放冷, 空白随行, 依次加入 0.2ml 5香草醛 - 冰醋酸溶液及 0.8ml 高氯酸后, 于 60恒温水浴中保温 15min, 取出放 冷, 加 5ml 冰醋酸后, 摇匀, 以备测定 ; 0062 测定方法 : 将上述显色后样品于 5802nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总皂苷含量为 14.94 ; 0063 总酚含量测定方法 : 0。

21、064 对照品 : 3, 6 - 二芥子酰基蔗糖 ; 0065 试剂 : 0.6三氯化铁溶液, 0.9铁氰化钾溶液, 0.3十二烷基硫酸钠溶液, 70 甲醇溶液, 0.1mol/L 盐酸溶液 ; 0066 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中, 加70甲醇至5ml, 再加 入 0.3十二烷基硫酸钠溶液 2ml, 以及 1 1 的 0.6三氯化铁 -0.9铁氰化钾混合溶液 1ml, 暗处放置 5min, 用 0.1mol/L 盐酸加至 25ml 刻度线, 摇匀, 暗处放置 30min, 以备测定 ; 0067 测定方法 : 将上述显色后样品于 7602nm 波长范围内测定, 。

22、记录其最大吸光度 值, 经测定总酚含量为 45.36。 0068 实施例 2 : 片剂 0069 茯苓 350g 人参 280g 0070 远志 260g 石菖蒲 180g 0071 按上述比例取原料药饮片1kg, 60乙醇10L回流提取2次, 每次提取2小时, 减压 回收溶剂, 得提取物 ; 加水分散溶解, 使水溶液浓度为 0.08g/mL( 以折生药材量计, 其中皂 苷浓度为0.4009mg/ml, 酚类浓度为2.1626mg/ml), 以2500转/分钟的转速离心8min, 取上 清液, 通过 1.25L860021 型大孔吸附树脂, 吸附流速 3.0mL/min, 树脂柱径高比为 1 。

23、6.7, 上样液浓度为 0.02g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓度为 2.1626mg/ml), 水洗脱1.5倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为2.0mL/min, 95乙醇洗脱4倍 树脂体积, 洗脱流速为 1.0mL/min, 收集乙醇洗脱液, 回收溶剂, 减压干燥, 加入常规辅料, 按 照常规工艺制成片剂 ; 0072 总皂苷的含量测定方法 : 0073 对照品 : 远志皂苷元 ; 0074 试剂 : 0.5香草醛 - 冰醋酸溶液, 高氯酸, 冰醋酸 ; 0075 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于西林瓶中, 蒸干后放冷, 空白随行, 依次加入。

24、 0.2ml 5香草醛 - 冰醋酸溶液及 0.8ml 高氯酸后, 于 60恒温水浴中保温 15min, 取出放 冷, 加 5ml 冰醋酸后, 摇匀, 以备测定 ; 0076 测定方法 : 将上述显色后样品于 5802nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总皂苷含量为 14.94 ; 0077 总酚含量测定方法 : 说 明 书 CN 102119986 A CN 102119991 A5/10 页 8 0078 对照品 : 3, 6 - 二芥子酰基蔗糖 ; 0079 试剂 : 0.6三氯化铁溶液, 0.9铁氰化钾溶液, 0.3十二烷基硫酸钠溶液, 70 甲醇溶液, 0.1mol/。

25、L 盐酸溶液 ; 0080 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中, 加70甲醇至5ml, 再加 入 0.3十二烷基硫酸钠溶液 2ml, 以及 1 1 的 0.6三氯化铁 -0.9铁氰化钾混合溶液 1ml, 暗处放置 5min, 用 0.1mol/L 盐酸加至 25ml 刻度线, 摇匀, 暗处放置 30min, 以备测定 ; 0081 测定方法 : 将上述显色后样品于 7602nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总酚含量为 45.36。 0082 实施例 3 : 丸剂 0083 茯苓 560g 人参 160g 0084 远志 180g 石菖蒲 270g 00。

26、85 按上述比例取原料药饮片 1kg, 70乙醇 10L 回流提取 4 次, 每次提取 1 小时, 减 压回收溶剂, 得提取物 ; 加水分散溶解, 使水溶液浓度为 0.03g/mL( 以折生药材量计, 其中 皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓度为 2.1626mg/ml), 以 3800 转 / 分钟的转速离心 12min, 取使上清液, 通过 1.25L860021 型大孔吸附树脂, 吸附流速 1.0mL/min, 树脂柱径高比为 1 10.7, 上样液浓度为 0.1g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓 度为2.1626mg/ml), 水洗。

27、脱3倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为2.0mL/min, 85乙醇洗脱6 倍树脂体积, 洗脱流速为 3.0mL/min, 收集乙醇洗脱液, 回收溶剂, 减压干燥, 加入常规辅料, 按照常规工艺制成丸剂 ; 0086 总皂苷的含量测定方法 : 0087 对照品 : 远志皂苷元 ; 0088 试剂 : 0.5香草醛 - 冰醋酸溶液, 高氯酸, 冰醋酸 ; 0089 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于西林瓶中, 蒸干后放冷, 空白随行, 依次加入 0.2ml 5香草醛 - 冰醋酸溶液及 0.8ml 高氯酸后, 于 60恒温水浴中保温 15min, 取出放 冷, 加 5ml 冰醋酸后, 摇匀, 以备。

28、测定 ; 0090 测定方法 : 将上述显色后样品于 5802nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总皂苷含量为 14.94 ; 0091 总酚含量测定方法 : 0092 对照品 : 3, 6 - 二芥子酰基蔗糖 ; 0093 试剂 : 0.6三氯化铁溶液, 0.9铁氰化钾溶液, 0.3十二烷基硫酸钠溶液, 70 甲醇溶液, 0.1mol/L 盐酸溶液 ; 0094 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中, 加70甲醇至5ml, 再加 入 0.3十二烷基硫酸钠溶液 2ml, 以及 1 1 的 0.6三氯化铁 -0.9铁氰化钾混合溶液 1ml, 暗处放置 5mi。

29、n, 用 0.1mol/L 盐酸加至 25ml 刻度线, 摇匀, 暗处放置 30min, 以备测定 ; 0095 测定方法 : 将上述显色后样品于 7602nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总酚含量为 45.36。 0096 实施例 4 : 口服液体制剂 0097 茯苓 400g 人参 200g 0098 远志 200g 石菖蒲 200g 说 明 书 CN 102119986 A CN 102119991 A6/10 页 9 0099 按上述比例取原料药取饮片 1kg, 80乙醇 10L 回流提取 4 次, 每次提取 1 小 时, 减压回收溶剂, 得提取物 ; 加水分散溶解。

30、, 使水溶液浓度为 0.1g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓度为 2.1626mg/ml), 以 3800 转 / 分钟的转速离心 12min, 取上清液, 通过 1.25L860021 型大孔吸附树脂, 吸附流速 2.0mL/min, 树脂柱径高比 为 1 8.7, 上样液浓度为 0.05g/mL( 以折生药材量计, 其中 : 皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚 类浓度为 2.1626mg/ml), 水洗脱 2 倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为 1.0mL/min, 90乙醇 洗脱 5 倍树脂体积, 洗脱流速为 2.0mL/min, 收集 9。

31、0乙醇洗脱液, 回收溶剂, 减压干燥, 加 入常规辅料, 按照常规工艺制成口服液体制剂 ; 0100 总皂苷的含量测定方法 : 0101 对照品 : 远志皂苷元 ; 0102 试剂 : 0.5香草醛 - 冰醋酸溶液, 高氯酸, 冰醋酸 ; 0103 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于西林瓶中, 蒸干后放冷, 空白随行, 依次加入 0.2ml 5香草醛 - 冰醋酸溶液及 0.8ml 高氯酸后, 于 60恒温水浴中保温 15min, 取出放 冷, 加 5ml 冰醋酸后, 摇匀, 以备测定 ; 0104 测定方法 : 将上述显色后样品于 5802nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测。

32、定总皂苷含量为 14.94 ; 0105 总酚含量测定方法 : 0106 对照品 : 3, 6 - 二芥子酰基蔗糖 ; 0107 试剂 : 0.6三氯化铁溶液, 0.9铁氰化钾溶液, 0.3十二烷基硫酸钠溶液, 70 甲醇溶液, 0.1mol/L 盐酸溶液 ; 0108 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中, 加70甲醇至5ml, 再加 入 0.3十二烷基硫酸钠溶液 2ml, 以及 1 1 的 0.6三氯化铁 -0.9铁氰化钾混合溶液 1ml, 暗处放置 5min, 用 0.1mol/L 盐酸加至 25ml 刻度线, 摇匀, 暗处放置 30min, 以备测定 ; 0109 。

33、测定方法 : 将上述显色后样品于 7602nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总酚含量为 45.36。 0110 实施例 5 : 注射剂 0111 茯苓 450g 人参 160g 0112 远志 150g 石菖蒲 250g 0113 按上述比例取原料药饮片 1kg, 40乙醇 10L 回流提取 3 次, 每次提取 1.5 小时, 减压回收溶剂, 得提取物 ; 加水分散溶解, 使水溶液浓度为 0.05g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓度为 2.1626mg/ml), 以 3000 转 / 分钟的转速离心 10min, 取上清液, 通过。

34、 1.25L860021 型大孔吸附树脂, 吸附流速 2.0mL/min, 树脂柱径高比 为 1 8.7, 上样液浓度为 0.05g/mL( 以折生药材量计, 其中 : 皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚 类浓度为 2.1626mg/ml), 水洗脱 2 倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为 1.0mL/min, 90乙醇 洗脱 5 倍树脂体积, 洗脱流速为 2.0mL/min, 收集 90乙醇洗脱液, 回收溶剂, 减压干燥, 加 入常规辅料, 按照常规工艺制成注射剂 ; 0114 总皂苷的含量测定方法 : 0115 对照品 : 远志皂苷元 ; 0116 试剂 : 0.5香草醛 - 冰醋酸溶。

35、液, 高氯酸, 冰醋酸 ; 说 明 书 CN 102119986 A CN 102119991 A7/10 页 10 0117 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于西林瓶中, 蒸干后放冷, 空白随行, 依次加入 0.2ml 5香草醛 - 冰醋酸溶液及 0.8ml 高氯酸后, 于 60恒温水浴中保温 15min, 取出放 冷, 加 5ml 冰醋酸后, 摇匀, 以备测定 ; 0118 测定方法 : 将上述显色后样品于 5802nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总皂苷含量为 14.94 ; 0119 总酚含量测定方法 : 0120 对照品 : 3, 6 - 二芥子酰基蔗糖 ; 0。

36、121 试剂 : 0.6三氯化铁溶液, 0.9铁氰化钾溶液, 0.3十二烷基硫酸钠溶液, 70 甲醇溶液, 0.1mol/L 盐酸溶液 ; 0122 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中, 加70甲醇至5ml, 再加 入 0.3十二烷基硫酸钠溶液 2ml, 以及 1 1 的 0.6三氯化铁 -0.9铁氰化钾混合溶液 1ml, 暗处放置 5min, 用 0.1mol/L 盐酸加至 25ml 刻度线, 摇匀, 暗处放置 30min, 以备测定 ; 0123 测定方法 : 将上述显色后样品于 7602nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总酚含量为 45.36。 。

37、0124 实施例 6 : 0125 茯苓 400g 人参 200g 0126 远志 200g 石菖蒲 200g 0127 按上述比例取原料药饮片 1kg, 50乙醇 10L 回流提取 3 次, 每次提取 1.5 小时, 减压回收溶剂, 得提取物 ; 加水分散溶解, 使水溶液浓度为 0.05g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓度为 2.1626mg/ml), 以 3000 转 / 分钟的转速离心 10min, 取上清液, 通过 1.25L860021 型大孔吸附树脂, 吸附流速 2.0mL/min, 树脂柱径高比 为 1 8.7, 上样液浓度为 0.05。

38、g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类 浓度为 2.1626mg/ml), 水洗脱 2 倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为 1.0mL/min, 90乙醇洗 脱 5 倍树脂体积, 洗脱流速为 2.0mL/min, 收集 90乙醇洗脱液, 回收溶剂, 减压干燥, 即为 本发明中药提取物 ; 0128 总皂苷的含量测定方法 : 0129 对照品 : 远志皂苷元 ; 0130 试剂 : 0.5香草醛 - 冰醋酸溶液, 高氯酸, 冰醋酸 ; 0131 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于西林瓶中, 蒸干后放冷, 空白随行, 依次加入 0.2ml 5香草醛 - 冰醋酸。

39、溶液及 0.8ml 高氯酸后, 于 60恒温水浴中保温 15min, 取出放 冷, 加 5ml 冰醋酸后, 摇匀, 以备测定 ; 0132 测定方法 : 将上述显色后样品于 5802nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总皂苷含量为 14.94 ; 0133 总酚含量测定方法 : 0134 对照品 : 3, 6 - 二芥子酰基蔗糖 ; 0135 试剂 : 0.6三氯化铁溶液, 0.9铁氰化钾溶液, 0.3十二烷基硫酸钠溶液, 70 甲醇溶液, 0.1mol/L 盐酸溶液 ; 0136 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中, 加70甲醇至5ml, 再加 入 0。

40、.3十二烷基硫酸钠溶液 2ml, 以及 1 1 的 0.6三氯化铁 -0.9铁氰化钾混合溶液 说 明 书 CN 102119986 A CN 102119991 A8/10 页 11 1ml, 暗处放置 5min, 用 0.1mol/L 盐酸加至 25ml 刻度线, 摇匀, 暗处放置 30min, 以备测定 ; 0137 测定方法 : 将上述显色后样品于 7602nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总酚含量为 45.36。 0138 实施例 7 : 0139 茯苓 350g 人参 280g 0140 远志 260g 石菖蒲 180g 0141 按上述比例取原料药饮片1kg, 。

41、60乙醇10L回流提取2次, 每次提取2小时, 减压 回收溶剂, 得提取物 ; 加水分散溶解, 使水溶液浓度为 0.08g/mL( 以折生药材量计, 其中皂 苷浓度为0.4009mg/ml, 酚类浓度为2.1626mg/ml), 以2500转/分钟的转速离心8min, 取上 清液, 通过 1.25L860021 型大孔吸附树脂, 吸附流速 3.0mL/min, 树脂柱径高比为 1 6.7, 上样液浓度为 0.02g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓度为 2.1626mg/ml), 水洗脱1.5倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为2.0mL/min, 95乙。

42、醇洗脱4倍 树脂体积, 洗脱流速为 1.0mL/min, 收集乙醇洗脱液, 回收溶剂, 减压干燥, 即为本发明中药 提取物 ; 0142 总皂苷的含量测定方法 : 0143 对照品 : 远志皂苷元 ; 0144 试剂 : 0.5香草醛 - 冰醋酸溶液, 高氯酸, 冰醋酸 ; 0145 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于西林瓶中, 蒸干后放冷, 空白随行, 依次加入 0.2ml 5香草醛 - 冰醋酸溶液及 0.8ml 高氯酸后, 于 60恒温水浴中保温 15min, 取出放 冷, 加 5ml 冰醋酸后, 摇匀, 以备测定 ; 0146 测定方法 : 将上述显色后样品于 5802nm 波长范围内。

43、测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总皂苷含量为 14.94 ; 0147 总酚含量测定方法 : 0148 对照品 : 3, 6 - 二芥子酰基蔗糖 ; 0149 试剂 : 0.6三氯化铁溶液, 0.9铁氰化钾溶液, 0.3十二烷基硫酸钠溶液, 70 甲醇溶液, 0.1mol/L 盐酸溶液 ; 0150 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中, 加70甲醇至5ml, 再加 入 0.3十二烷基硫酸钠溶液 2ml, 以及 1 1 的 0.6三氯化铁 -0.9铁氰化钾混合溶液 1ml, 暗处放置 5min, 用 0.1mol/L 盐酸加至 25ml 刻度线, 摇匀, 暗处放置 3。

44、0min, 以备测定 ; 0151 测定方法 : 将上述显色后样品于 7602nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总酚含量为 45.36。 0152 实施例 8 : 0153 茯苓 560g 人参 160g 0154 远志 180g 石菖蒲 270g 0155 按上述比例取原料药饮片 1kg, 70乙醇 10L 回流提取 4 次, 每次提取 1 小时, 减 压回收溶剂, 得提取物 ; 加水分散溶解, 使水溶液浓度为 0.03g/mL( 以折生药材量计, 其中 皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓度为 2.1626mg/ml), 以 3800 转 / 分钟的转速离心 1。

45、2min, 取使上清液, 通过 1.25L860021 型大孔吸附树脂, 吸附流速 1.0mL/min, 树脂柱径高比为 1 10.7, 上样液浓度为 0.1g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓 说 明 书 CN 102119986 A CN 102119991 A9/10 页 12 度为2.1626mg/ml), 水洗脱3倍树脂体积进行除杂, 除杂流速为2.0mL/min, 85乙醇洗脱6 倍树脂体积, 洗脱流速为 3.0mL/min, 收集乙醇洗脱液, 回收溶剂, 减压干燥, 即为本发明中 药提取物 ; 0156 总皂苷的含量测定方法 : 0157。

46、 对照品 : 远志皂苷元 ; 0158 试剂 : 0.5香草醛 - 冰醋酸溶液, 高氯酸, 冰醋酸 ; 0159 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于西林瓶中, 蒸干后放冷, 空白随行, 依次加入 0.2ml 5香草醛 - 冰醋酸溶液及 0.8ml 高氯酸后, 于 60恒温水浴中保温 15min, 取出放 冷, 加 5ml 冰醋酸后, 摇匀, 以备测定 ; 0160 测定方法 : 将上述显色后样品于 5802nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总皂苷含量为 14.94 ; 0161 总酚含量测定方法 : 0162 对照品 : 3, 6 - 二芥子酰基蔗糖 ; 0163 试剂 。

47、: 0.6三氯化铁溶液, 0.9铁氰化钾溶液, 0.3十二烷基硫酸钠溶液, 70 甲醇溶液, 0.1mol/L 盐酸溶液 ; 0164 显色方法 : 精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中, 加70甲醇至5ml, 再加 入 0.3十二烷基硫酸钠溶液 2ml, 以及 1 1 的 0.6三氯化铁 -0.9铁氰化钾混合溶液 1ml, 暗处放置 5min, 用 0.1mol/L 盐酸加至 25ml 刻度线, 摇匀, 暗处放置 30min, 以备测定 ; 0165 测定方法 : 将上述显色后样品于 7602nm 波长范围内测定, 记录其最大吸光度 值, 经测定总酚含量为 45.36。 0166 实施例 9 : 0167 茯苓 400g 人参 200g 0168 远志 200g 石菖蒲 200g 0169 按上述比例取原料药取饮片 1kg, 80乙醇 10L 回流提取 4 次, 每次提取 1 小 时, 减压回收溶剂, 得提取物 ; 加水分散溶解, 使水溶液浓度为 0.1g/mL( 以折生药材量计, 其中皂苷浓度为 0.4009mg/ml, 酚类浓度为 2.1626mg/ml), 以 3800 转 / 分钟的转速离心 12min, 取上清液, 通过 1.25L860021 型大孔吸附树脂, 吸附流速 2.0mL/min, 树脂柱径高比 为 1 8.7, 上样液浓度为 0.05g/。

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