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1、(10)申请公布号 CN 102525946 A (43)申请公布日 2012.07.04 CN 102525946 A *CN102525946A* (21)申请号 201210007775.2 (22)申请日 2012.01.12 A61K 9/16(2006.01) A61K 31/7048(2006.01) A61K 47/42(2006.01) A61P 11/00(2006.01) A61P 31/04(2006.01) (71)申请人 青岛农业大学 地址 266109 山东省青岛市城阳区长城路 700 号 (72)发明人 刘焕奇 钱泽升 邹明 张启迪 毕可东 曲志娜 (54) 发。
2、明名称 硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种硫氰酸红霉素明胶微球制 剂的制备方法， 该方法利用明胶为载体， 液体石蜡 为油相， Span85和Tween80作为混合乳化剂， 在机 械的搅拌下形成 W/O 乳液， 低温冷却戊二醛交联 固化形成 7-20m 微球， 就静脉给药而言， 微球混 悬剂经静注后， 首先将与直径为 3-11m 的肺部 毛细血管网接触， 而被肺部有效截获， 微球内的药 物缓慢释放， 获得平稳长期的有效浓度。本发明 采用乳化缩聚法制备， 设备要求简单， 制备成本较 低， 易于推广应用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 。
3、附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 1/1 页 2 1. 一种硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法， 其特征在于， 其具体步骤为 ： 精密称 取 1.56g 明胶、 0.357g Tween80 和 0.69g 硫氰酸红霉素溶于 10ml 的经 0.22m 滤膜过滤 的双蒸水中， 于 58水浴中加热搅拌溶解作为水相， 加入到含有 1.743g span85 的 60ml 液 体石蜡中， 1000r/min， 58磁力搅拌25min， 转移到5-10的冰水浴中1000r/min继续搅拌 15min， 加入戊二醛。
4、固化 6h， 2000rpm 离心， 去下层沉淀用石油醚和异丙醇洗涤 2 次， 加入甘 氨酸洗涤 10min， 异丙醇洗涤 2 次， 冷冻干燥得淡黄色粉末。 权 利 要 求 书 CN 102525946 A 2 1/3 页 3 硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法 技术领域 0001 本发明属于农业技术领域， 涉及一种硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法。 背景技术 0002 缓释、 控释制剂又称为缓释控释给药系统， 它们不需频繁给药， 能有效地减少对患 病动物的给药量， 此外， 缓释控释药物能降低血药浓度的波动， 使其在人体内保持平稳血药 浓度， 大大提高了药效和降低毒副作用。 然而国内外肺靶向。
5、微球的研究中， 关于载体材料的 选择和微球的制备还存在一些问题 ： 如白蛋白价格昂贵且储存条件要求较高， 不适合兽药 制剂的研发， PLGA 的降解速度较慢， 不能短期从肺中清除， 韩冰等制备紫杉醇 PLGA 微球研 究发现其体外释药可以维持 30d。 0003 目前微球的制备方法主要有单凝聚法、 乳化化学交联法及喷雾干燥法等。喷雾干 燥法需要特殊的仪器设备， 且制备过程中所需温度较高 ( 100 )， 明胶在此条件下会快 速水解而发生性质的改变， 从而影响微球的机械强度 ； 单凝聚法是用降温或加入凝聚剂等 手段使明胶溶液发生分离， 明胶溶解度降低而析出， 丁素丽等在明胶溶液中滴加丙酮使明 胶。
6、发生凝聚， 再用戊二醛交联得到明胶微球 ； 乳化化学交联法是在搅拌或超声等外力作用 下， 使明胶溶液在不相混溶的油相中分散乳化成小液滴， 再降温冷却交联固化成球。 这种方 法通过对各种影响因素的配比进行优化， 增强乳液稳定性， 改善微球制剂粒径分布， 并降低 变形或聚集的微球数量。 0004 硫氰酸红霉素属于大环内酯类药物， 在临床上主要有注射制剂和可溶性粉两种制 剂类型， 普通的制剂给药吸收后广泛的分布于全身各组织和体液中， 在胆汁中浓度最高， 可 引起肝脏损害等不良反应。 0005 目前硫氰酸红霉素的主要剂型是可溶性粉和肌肉注射制剂， 给药后广泛分布于全 身， 药物利用率较低且对肝脏有毒害。
7、作用， 本发明以微球为载体， 通过被动靶向到肺中发挥 药效， 有效地降低了其余健康组织的含药量， 降低毒副作用。 发明内容 0006 本发明的目的在于克服上述技术缺陷， 提供一种设备要求简单， 成本低的硫氰酸 红霉素明胶微球制剂的制备方法。硫氰酸红霉素主要用于治疗革兰氏阳性菌和支原体感 染， 但该药物被吸收后广泛分布于全身各组织和体液中， 尤其是胆汁中浓度最高。 本发明以 A 型明胶为载体， 采用乳化化学交联法制备粒径为 7-20m 的微球， 通过肺部毛细血管的机 械性截留达到肺靶向的效果， 避免了对肝脏的毒害作用。 0007 其技术方案为 ： 0008 一种硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法。
8、， 其具体步骤为 ： 精确称取 1.56g 明 胶、 0357g Tween80和0.69g硫氰酸红霉素溶于10ml的经0.22m滤膜过滤的双蒸水中， 于 58水浴中加热搅拌溶解作为水相， 加入到含有1743g span85的60ml液体石蜡中， 1000r/ min， 58磁力搅拌 25min， 转移到 5-10的冰水浴中 1000r/min 继续搅拌 15min， 加入戊二 说 明 书 CN 102525946 A 3 2/3 页 4 醛固化 6h， 2000rpm 离心， 去下层沉淀用石油醚和异丙醇洗涤 2 次， 加入甘氨酸洗涤 10min， 异丙醇洗涤 2 次， 冷冻干燥得淡黄色粉末。。
9、 0009 与现有技术相比， 本发明的有益效果为 ： 0010 (1) 本发明所述技术方案以微球为载体提高了硫氰酸红霉素的生物利用度， 减少 了药物用量。 0011 (2) 本发明的制备方法简单， 成本较低， 且微球粒径符合要求 (7-30m)， 静脉注 射后被动靶向于肺。 0012 (3) 本发明所述方法制备出的硫氰酸红霉素明胶微球在猪霉形体肺炎的疗效试验 表明， 硫氰酸红霉素明胶微球 ( 相当于硫氰酸红霉素 3mg/kg) 注射组治愈率 80， 有效率 93 ； 普通硫氰酸红霉素常规注射剂 ( 相当于硫氰酸红霉素 3mg/Kg) 治愈率 67， 有效率 为 87 ； 阴性对照组治愈率 0，。
10、 有效率 0， 本发明制备的硫氰酸红霉素明胶微球临床效 果显著好于普通注射剂组和阴性对照组。 附图说明 0013 图 1 硫氰酸红霉素明胶微球的粒径分布范围 ； 0014 图 2 硫氰酸红霉素明胶微球的光学显微镜照片 (*100) ； 0015 图 3 硫氰酸红霉素明胶微球在释放介质中的溶出度曲线。 具体实施方式 0016 下面结合附图与具体实施例对本发明作进一步详细地说明。 0017 精确称取 1.56g 明胶、 0.357g Tween80 和 0.69g 硫氰酸红霉素溶于 10ml 的经 0.22m 滤膜过滤的双蒸水中， 于 58水浴中加热搅拌溶解作为水相， 加入到含有 1.743g s。
11、pan85 的 60ml 液体石蜡中， 1000r/min， 58磁力搅拌 25min， 快速转移到 5-10的冰水浴 中1000r/min继续搅拌15min， 加入戊二醛固化6h， 2000rpm离心， 去下层沉淀用石油醚和异 丙醇洗涤 2 次， 加入甘氨酸洗涤 10min， 异丙醇洗涤 2 次， 冷冻干燥得淡黄色粉末。 0018 取适量微球于载玻片上， 覆以盖玻片， 滴加石油醚轻压使微球分散均匀， 100 倍油 镜下观察， 对微球的粒径和表面形态进行考察， 如图 1 ； 去适量微球均匀分散在 100ml 水中， 取 4ml 于 BT9300-H 激光粒度分布仪下考察其粒径分布范围， 图 2。
12、 所示， 微球平均粒径为 12.51m， 微球的粒径在 3-7m 之间占总数的 10， 7-10m 占总数的 9， 10-20m 占总 数的 73， 20-26m 占总数的 7， 0019 体外释放度的考察 精密称取含药微球和硫氰酸红霉素原料药各 200mg， 分别装 入透析袋中， 加入 5ml 的 PBS 释放介质 (pH 7.4)， 置于加有释放介质 495ml 的烧杯中， 370.5、 100r/min 恒温搅拌， 分别于第 0.083、 0.17、 0.25、 0.5、 0.75、 1、 2、 4、 8、 12、 24、 48h 取样 HPLC 检测， 同时补充等量的释放介质， 检测后。
13、计算累积释放度， 绘制体外释放累积 曲线。 检测发现硫氰酸红霉素微球在1h处药物释放量达到52， 之后释放缓慢， 在第48h释 药率达到 94.5， 其释药曲线见图 3， 由曲线可知该微球具有良好的缓释效果， 以 ln(1-Q) 对时间 t 作图经回归处理得到释药方程， ln(1-Q) -0.0533t+4.1654(R2 0.9573)， Q 为 累积释药百分率， ， 可见 ln(1-Q) 与时间 (t) 相关系良好， 故可推论该微球在 pH 7.4 的缓 冲溶液中属一级释药。 说 明 书 CN 102525946 A 4 3/3 页 5 0020 按照本发明上述的方法制备硫氰酸红霉素明胶微。
14、球临床药效学研究考察。 0021 试验方法 ： 将诊断为猪霉形体肺炎的病猪随机分为三组， 每组 15 头。A 组注射硫 氰酸红霉素明胶微球(相当于硫氰酸红霉素3mg/kg)， 一天一次， 连用三天 ； B组注射硫氰酸 红霉素注射液 ( 相当于硫氰酸红霉素 3mg/kg)， 一天一次， 连用三天 ； C 组为阴性对照组， 不 给任何药物治疗。 0022 疗效判定 0023 治愈 ： 用药后， 猪霉形体各种临床症状消失， 且停药后 20 天内不复发， 称为治愈， 根据各组治愈数计算治愈率 0024 有效 ： 经注射给药后完全治愈的和没有死亡但有临床症状表现者均为有效 ； 试验 结束后， 每组存活的。
15、头数占试验数的百分率为有效率。 0025 数据处理和分析 ： 用生物统计进行数据进行死亡率、 有效率和治愈率的显著性检 验。 0026 实验结果 ： 硫氰酸红霉素肺靶向微球临床药效实验结果见表 1， 0027 表 1 硫氰酸红霉素肺靶向明胶微球和常规注射剂对猪霉形体肺炎的疗效比较 0028 组别 治愈头数 治愈率 死亡率 有效率 A 组 12 80 1 93 B 组 10 67 3 87 C 组 0 0 15 0 0029 实验结果显示 ： 本方法制备的明胶微球的临床效果显著好于对照组及阴性对照组 (P 0.01)， 有显著的差异性。 说 明 书 CN 102525946 A 5 1/1 页 6 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 102525946 A 6 。