技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种岩黄连总生物碱，还涉及该岩黄连提取物的 制备方法及其在制备药物中的用途。
背景技术
岩黄连是罂粟科植物岩黄连(Corydalis thalictrifolia Franch.，Radix Corydalis Thalinctrifoliae)，异名岩胡。岩黄连，多年生本草，根倒圆锥形，肉质，茎单一或 丛生，高15-20厘米，叶茎基生，叶片革质，与状复叶，小叶片多为3深裂或3浅裂， 最后裂片先端圆钝，总状花序顶生，蒴果线形，膜质，黄色，成熟时2瓣裂，种子细 小，生长于石岩上。分布与贵州等山区。具有清热解毒、利湿、止痛止血等功能。岩 黄连主要以根入药。具有清热解毒功能，适用于急慢性肝炎肝胆湿热症者。
以岩黄连为原料制成的岩黄连注射液曾用于肝炎、肝纤维化等肝病的治疗。岩黄 连注射液自2001年12月被列入国家标准试行2年，同时被列入的还有岩黄连提取物。 其中提取物的标准中，以测定岩黄连提取物中的岩黄连总生物碱为含量测定，干燥的 提取物中岩黄连总生物碱的含量不低于3.4％。
法定的岩黄连总生物碱提取方法(见于2002年国家药品监督管理局《国家中成药 标准汇编》内科肝胆分册，第325-328页)主要存在的问题是中间过程繁琐、并导致 后期质量制剂产品(注射剂)质量不易控制、稳定性和澄明度较差。除此之外，现有 技术中公开的岩黄连总生物碱还有中国专利CN1185231C中公开的几种方法，如醇提取 法、酸水提取法、有机溶剂提取法，但均需要在得到粗提物后用树脂法、胺盐沉淀法、 大孔树脂法等来纯化，进而提高粗提物中总生物碱的含量。这使得整个提取过程更加 繁琐，而且由于后期使用树脂法等需要大量的有机溶剂，即增加了成本，又使得后期 在制剂中存在有毒有机溶剂的残留。
因此，迫切需要一种提取工艺简单，又保证符合法定质量标准，且不会增加后期 制剂处理难度，成本较低的岩黄连总生物碱提取物及其制备方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的岩黄连总生物碱的提取物及其制备方法。
在第二方面，本发明提供由前述岩黄连总生物碱制得的各种制剂。
在第三方面，本发明提供由前述的岩黄连总提取物及其制剂在制备治疗肝炎疾病 中的用途。
在第四方面，本发明提供由前述的岩黄连总生物碱与医学上有效的肝炎治疗药物 组成的组合物。
在第五方面，本发明提供由上述组合物于药学上可接受载体制成的制剂。
在第六方面，本发明提供将该上述制剂在制备治疗肝炎及其相关疾病的药物中的 用途。
在第七方面，本发明提供由前述的岩黄连总生物碱与医学上有效的肝炎治疗药物 组成的试剂盒。
在第八方面，本发明提供将该上述试剂盒在作为治疗疗肝炎及其相关疾病的药物 中的用途。
本发明提供的岩黄连总生物碱提取物由以下步骤制得：
1取岩黄莲植物全草适量，粉碎至粗粉，加4～15倍量硫酸水溶液(0.1～1％) 常温浸泡提取24小时，过滤。
2取提取液加入10～20％的食盐(NaCl)，在连续搅拌下进行盐析，放置8~12小时， 过滤收集岩黄莲生物碱硫酸盐沉淀。
3将生物碱沉淀溶于20倍的乙醇中，加适量的活性炭，加热回流30分钟进行脱 色，过滤，滤液浓缩并回收乙醇，浓缩干燥品即为岩黄莲生物碱。
4将以上所得岩黄莲生物碱溶于适量的5～10％盐酸水溶液中，过滤，滤液解压浓 缩至干，即得岩黄莲生物碱盐酸盐。
由上述得到的岩黄连总生物碱提取物可以与药学上可接受的载体组合制成合适 的制剂使用。其可以经口服或经非肠道给药。对于口服给药，可以使用已知的给药形 式，例如片剂、胶囊、糖衣片剂等。
同样适合地可以是液体或半液体形式，例如口服液，在此情况下该药剂以溶液或 悬浮液形式存在。可以使用的溶液或悬浮剂为水、水性介质或药学上可接受的油类(植 物油或矿物油)。含有上述岩黄连总生物碱提取物也可制成缓控释制剂，此类制剂可 在较长的时间内以缓控释的方式在体内释放药物。
此外，根据本发明的岩黄连总生物碱提取物还可以制成直肠(例如通过栓剂)， 吸入给药(通过吸入有特定浓度和微粒大小分布的气溶胶)，经皮给药(通过含活性 剂的贴剂、擦剂溶液、凝胶等)，经粘膜给药(通过口和鼻粘膜吸收药物，或通过喷 射进入鼻腔内等)，通过植入剂形式给药(药物被动渗透或通过微泵可控的释放)， 通过静脉、肌肉注射或皮下注射和脑心室内给药。
关于非肠道给药，优选以注射剂和/或冻干粉针形式给药。
根据本发明，岩黄连总生物碱提取物可以以其游离碱和加成盐的形式用于治疗， 优选的盐是岩黄连总生物碱提取物的盐酸盐和岩黄连总生物碱提取物硫酸盐。此外， 还可能使用其它药理上可接受的酸的盐，例如磷酸、氢溴酸、醋酸、甲磺酸、柠檬酸、 酒石酸、富马酸等。
根据本发明的用于岩黄连总生物碱提取物给药的药物制剂可以包括一个或多个 下面的添加剂：a抗氧化剂、增效剂、稳定剂，b防腐剂，c矫味剂，d色素，e溶剂， 增溶剂，f表面活性剂，g影响粘性和稠度的试剂，凝胶形成剂，h吸收促进剂，I吸 收剂，湿润剂，助流剂；j缓释剂。这些添加剂不限于此，为本领域普通技术人员所 熟知的任何适宜的生理上可接受的载体均可采用。
制剂中包含岩黄连总生物碱提取物的比例为0.1-99wt％，在各种情况下活性物 质以游离的岩黄连总生物碱提取物计算。根据本发明所使用的含有岩黄连总生物碱提 取物的药物制剂可以进一步包含添加剂，如非活性成分、赋形剂、媒介物和/或稳定剂， 其量由本领域普通技术人员通过常规技术手段来获知。所制得的岩黄连总生物碱提取 物制剂每日给药剂量为根据给予治疗的个体而定，优选的用量是不产生明显的副作用 且能达到所想要的效果的最优用量，本领域普通技术人员完全可以很好的根据个体的 要求做适当的调整。
本发明所提供的岩黄连总生物碱优选用于各种病毒引起的肝炎及相关症状的治 疗。
本申请中所使用的术语“肝炎”是指由各种病毒(如甲型肝炎、乙性型肝炎、丙 型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎)引起的急、慢肝脏炎症，以及由这些病毒所引起肝部 炎症的并发症。
本申请提供的岩黄连总生物碱提取物与医学上有效的肝炎治疗药物组成的组合 物，包括前面述及的岩黄连总生物碱提取物和下列治疗肝炎的药物中的一种或多种： (a)抑制病毒蛋白结合和/或感染细胞的化合物，包括针对病毒本身的抗体(如单克 隆抗体)和葡萄糖胺多糖(如肝素的硫酸盐或苏拉明)；(b)抑制病毒从病毒外壳中 释放和抑制病毒功能基因表达的化合物，包括IRES抑制剂、蛋白酶抑制剂(如丝氨酸 蛋白酶)；(c)干扰或影响细胞复制的化合物，包括次黄苷单磷酸脱氢酶抑制剂(如 病毒唑、霉酚酸和VX497)和糖蛋白反应抑制剂，如DNJ及其抑制物；(d)改变免疫 功能的化合物(如胸腺素α和α或β干扰素)；(e)起到改善肝炎症状的化合物(如 联本双脂、磷酸胆碱、水飞蓟宾、牛黄酸、甘草酸二胺、硫普罗宁苦参碱、肌醇、挂 蒂素、奥拉米特等)。
这些医学上有效的肝炎治疗药物可以与本发明的岩黄连总生物碱同时、分开、依 次使用。如果非同时给药，治疗肝炎的其它药物不应当降低各组分之间的协同治疗作 用。
优选使用α干扰素，当然还可以使用其它干扰素。
上述组合物还可以任意含有一种药学上可接受的赋形剂。
本发明地岩黄连总生物碱与现有技术中提取地岩黄连总生物碱相比，具有更好地 治疗效果，在降低乙肝患者地黄疸等方面具有更好地疗效，
本发明的组合物优选用于各种病毒引起的肝炎及相关症状的治疗。
另一方面，本发明还提供一种试剂盒，它的基本成分中含有前面任意一项权利要 求中的岩黄连总生物碱和下列化合物中的一种或多种：(a)抑制病毒蛋白结合和/或 感染细胞的化合物，包括针对病毒本身的抗体和葡萄糖胺多糖；(b)抑制病毒从病毒 外壳中释放和抑制病毒功能基因表达的化合物；(c)干扰或影响细胞复制的化合物； (d)改变免疫功能的化合物；(e)起到改善肝炎症状的化合物和/或植物提取物。
该试剂盒中还含有用于治疗肝炎及其相关症状的使用说明书。
本发明的岩黄连总生物碱和医学上有效的肝炎治疗药物可以混装在同一剂型单 元内。
下面结合实施例描述本发明，这些实施例近视对本申请的进一步说明，而不起任 何限定作用。
附图说明
附图1为盐黄连总生物碱的提取工艺流程图
实施例
盐黄连总生物碱的提取
1)与国标记载的法定标准进行对比试验
根据岩黄连中主要有效成分生物碱易溶于酸水的性质，采用正交设计筛选出岩黄 连硫酸水提取的最佳工艺条件，并与盐析、乙醇溶解脱杂和活性炭脱色等单元技术操 作有效组合，使提取操作更加合理有效，还与相应的法定工艺(2002年国家药品监督 管理局《国家中成药标准汇编》内科肝胆分册，第325～328页)进行比较研究，确定新 工艺的可行性和优越性。
一、岩黄连碱的含量测定
照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水 (含0.34％磷酸二氢钾和0.1％十二烷基磺酸钠)(32∶68)为流动相；检测波长为347nm。 理论板数按岩黄连碱峰计算应不低于8000。
对照品溶液的制备：精密称取岩黄连碱对照品适量，加流动相制成每1ml含 0.13mg的溶液。
供试品溶液的制备：精密称取本品10mg(或相当的试验样品量)，加流动相使 溶解，定容至10ml，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测 定，计算既得。
二、岩黄连不同提取方法和工艺参数的比较研究
2.1含量测定和质量评价方法的建立：参照2002年国家药品监督管理局《国家 中成药标准汇编》内科肝胆分册，第325～328页的有关技术要求进行。
2.2原法定提取工艺验证
将岩黄连粉碎成粗粉，称取岩黄连粗粉500g加90％乙醇4.5L，浸渍24小时， 热回流提取4次，每次1小时。合并提取液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为0.92～ 1.02(60℃)的清膏，放冷，过滤滤液浓缩至相对密度为1.16～1.20(60℃)的绸膏。 于绸膏中加入适量蒸馏水，用10％盐酸溶液，调节PH值至2～3，搅拌充分，过滤， 用10％盐酸溶液洗4～5次，合并酸水液，用碳酸钠调节PH值至9～10，析出棕褐色 沉淀，滤过滤渣用氯仿提取5～6次，合并氯仿液，加无水硫酸钠脱水，滤过，回收氯 仿至近干，再加少量酒精，减压回收溶剂，干燥，即得岩黄连提取物，重复5次，平 均得到岩黄连提取物8.8g。
表1.原法定提取工艺验证试验
验证过程中发现原法定提取工艺在生产实施过程中的有诸多不完善方面：
用90％乙醇浸渍、热回流提取岩黄连粉，所得清膏叶绿素和油性成分太多，从 而导致后续过滤极为困难，叶绿素和油性成分难以分离彻底；
由于以上原因，氯仿提取物中的叶绿素和油性成分含量偏高，导致后续的制剂产 品(注射剂)质量难以控制，溶液沉明度和稳定性不理想。
2.3正交试验硫酸水浸渍提取工艺(流程参见说明书附图1)
2.3.1浓度硫酸与提取率的关系初步预试验：分别取50g岩黄连粉4份，再用0.1 ％、0.5％、1.0％、1.5％硫酸水溶液1000ml浸渍提取48小时，过滤，测定提取液中 岩黄连碱的含量，计算提取率(见表2.)，试验表明0.5％硫酸提取率高。
表2.不同浓度硫酸与提取率的关系
药材中含量以0.8％记
2.3.2正交试验设计：根据初步预试验的结果，拟定3种因素，每种因素选择3 个水平(表3)，按L9(33)正交设计(表4)对岩黄连进行浸渍提取实验。
表3.因素水平表
2.3.3提取操作方法：分别称取岩黄连粉50g，按正交试验表3选择的因素和水 平，加0.5％硫酸水溶液浸渍提取，滤液供测试。
2.3.4硫酸水浸渍提取工艺的确定：就实验所得结果进行直观分析见表4。根据 极差值Rk可以看出，各因素对岩黄连中岩黄连碱提取量的影响按C、A、B顺序递减， 较好的工艺条件是A3B2C3。以此提取岩黄连，岩黄连碱提取量为312.9mg/500g，与表 4中试验7仅提取1次相比，虽然提取量略有增加，但提取液增加1倍量，时间也增 加1倍量。因此，从生产中降低成本、节省原材料和时间考虑，硫酸水浸渍提取的最 佳工艺条件应为A3B1C3，即将岩黄连药材粉碎成粗粉，加16倍量0.5％硫酸水溶液浸 渍提取48小时，提取1次，即可。
表4.L9(33)试验安排及实验结果
改进提取工艺与相应的法定提取工艺比较试验：
取岩黄连粗粉40公斤，混匀，均分为4等份，任选两份按改进工艺提取，另外 按法定工艺提取，以岩黄莲碱含量，溶解性，溶液澄明度等指标进行比较.
表5.改进提取工艺与相应的法定提取工艺技术指标比较
结论：根据岩黄莲碱含量，溶解性，溶液澄明度对两种提取工艺比较，改进工艺 要明显优于法定工艺，而且还规避了氯仿等有毒试剂，有效地保证了终端制剂中无有 毒试剂残留.
工艺稳定性试验
每次取岩黄连粗粉10按改进工艺提取工艺连续提取试验生产5批，对提取 物的岩黄莲碱含量，溶解性，溶液澄明度等指标进行检测，以此判定改进提取工艺的 稳定性.
表6.工艺稳定性试验记录
提取试 验序号 岩黄莲碱含 量 溶解性 溶液澄明度 备注 1 21.75 水溶性良好 澄明度好 2 19.60 水溶性良好 澄明度好 3 22.09 水溶性良好 澄明度好 4 20.53 水溶性良好 澄明度好 5 22.59 水溶性良好 澄明度好
结论：连续提取试验生产5批结果说明，改进工艺提取工艺比较稳定可靠，提取 生产操作顺利流畅.
具体实施例
具体实施例一
1、取岩黄莲植物全草40Kg，粉碎至粗粉，加400Kg硫酸水溶液(0.1～1％)常 温浸泡提取24小时，过滤。
2、取提取液，在连续搅拌下加入60Kg食盐(NaCl)，进行盐析，放置10小时， 过滤，收集得到岩黄莲生物碱硫酸盐沉淀412g。
3、将生物碱沉淀溶于1升乙醇中，加50g活性炭，加热回流30分钟进行脱色， 过滤，滤液解压浓缩并回收乙醇，浓缩得到岩黄莲生物碱干燥品301g。
4、将以上所得岩黄莲生物碱溶于2升的20％盐酸水溶液中，过滤，滤液浓缩至 干，得到岩黄莲生物碱盐酸盐316g。
具体实施例二
1、取岩黄莲植物全草80Kg，粉碎至粗粉，加800Kg硫酸水溶液(0.1～1％)常 温浸泡提取24小时，过滤。
2、取提取液，在连续搅拌下加入120Kg食盐(NaCl)，进行盐析，放置10小时， 过滤，收集得到岩黄莲生物碱硫酸盐沉淀833g。
3、将生物碱沉淀溶于2升乙醇中，加100g活性炭，加热回流30分钟进行脱色， 过滤，滤液解压浓缩并回收乙醇，浓缩得到岩黄莲生物碱干燥品635g。
4、将以上所得岩黄莲生物碱溶于4升的20％盐酸水溶液中，过滤，滤液解压浓 缩至干，得到岩黄莲生物碱盐酸盐641g。
具体实施例三
1、取岩黄莲植物全草120Kg，粉碎至粗粉，加1200Kg硫酸水溶液(0.1～1％) 常温浸泡提取24小时，过滤。
2、取提取液，在连续搅拌下加入180Kg食盐(NaCl)，进行盐析，放置10小时， 过滤，收集得到岩黄莲生物碱硫酸盐沉淀1305g。
3、将生物碱沉淀溶于3升乙醇中，加150g活性炭，加热回流30分钟进行脱色， 过滤，滤液解压浓缩并回收乙醇，浓缩得到岩黄莲生物碱干燥品910g。
4、将以上所得岩黄莲生物碱溶于6升的20％盐酸水溶液中，过滤，滤液解压浓 缩至干，得到岩黄莲生物碱盐酸盐964g。
结论：使用以上的方法均可相对与国家标准中的方法更加有效的提取盐黄连总生 物碱。
岩黄莲总生物碱的制剂
片剂： mg/片
盐黄连总生物碱提取物 105
乳糖 100
淀粉 25
聚维酮 2
硬脂酸镁 2
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结论：盐黄连总生物碱提取物可以很好的压制成片剂。
在本发明中一些特定的实施方案已经被描述和阐明，本领域普通技术人员可以理 解的是在本发明的精神和范围之内可进行对试验的各种改变、变化、修饰、取代、去 除或添加。因此，这意味着本发明可以以下列的权利要求来定义和这些权利要求以尽 可能宽的合理解释。