技术领域
本发明涉及一种冬虫夏草与北虫草的提取液及其制备方法和应用，特别是一种具有美白抗氧化效果的冬虫夏草与北虫草的提取液及其制备方法和应用。
背景技术
冬虫夏草(Cordyceps sinensis)，又名中华虫草，是中国历史中传统的名贵中药材，是麦角菌科一种寄生于蝙蝠蛾科昆虫幼虫体上的子囊菌。冬虫夏草主要产于中国青海、西藏、四川、云南、甘肃和贵州等海拔3000公尺至5000公尺的高原。据《本草纲目》记载："冬虫夏草性甘、味平、归肺、肾经、补肺益肾、止血、化痰、用于久咳虚喘、阳萎遗精、腰膝酸痛"。中医认为冬虫夏草：具有养肺阴，补肾阳、止咳化痰、抗癌防老的功效，为平补阴阳之品。据临床研究，冬虫夏草具有抗菌、免疫调节、抗癌功能、滋肾、提高肾上腺皮质醇含量、抗心律失常、抗疲劳等多方面功能。
北冬虫夏草(Cordyceps militaris)又称“蛹虫草”，简称“北虫草”，与冬虫夏草(Cordyceps sinensis)为近缘种，寄生于鳞翅目昆虫幼虫或蛹体，是由子实体(草部分)与菌核(虫体部分)两部分组成的复合体。主要分布中国大陆的东北、华北及西北等地区，临床研究报道有降血脂、防动脉硬化、促进造血功能、抗疲劳、提高机体免疫力、杀灭癌细胞等作用。
冬虫夏草为传统稀有珍贵中药材，原产中国青藏高原海拔3,000米以上的高冷地区，近年来由于人工大量采挖，野生资源已日渐枯竭，加上人工培养困难，不易产生子实体，致价格相当昂贵。北冬虫夏草为冬虫夏草的近缘种，生长模式相近，多量研究报告显示，北冬虫夏草重要功能性成分，大致与冬虫夏草相 近，已被公认为冬虫夏草的替代种，并已逐渐取代应用。
近年，冬虫夏草因为其相传的美白功效成为东方女士们的恩物。冬虫夏草对改善皮肤的功效主要源于中医的理论。明代李时珍的《本草纲目》和清代吴仪洛的《本草从新》描述冬虫夏草有“补肺、益肾”的作用。而在《黄帝内经》内有记载“肺主皮毛、司呼吸”，可见冬虫夏草对改善皮肤的功效主要透过改善肺的功能。然而如果从现代科学的角度来看，目前并未找到任何能证明冬虫夏草有美白及抗氧化功效的证据。
酪氨酸酶活性抑制作用的测试是传统用来筛选美白药品的测试方法。当中酪氨酸会因为酪氨酸酶的作用而转化成左旋多巴(L-DOPA)，再转化成为多巴色素(Dopachrome)。多巴色素在492nm波长下有吸亮度，故此可以量化及计算酪氨酸酶的活性。多巴色素只是暂存物，它会转化成黑色素(Melanin)。人类皮肤上的黑色素是由黑色素细胞(Melanocytes)所产生的多巴色素转化而成的。黑色素会渐渐地在黑色素细胞内的黑色素体(Melanosome)内成熟，成熟后黑色素体便会沿着黑色素细胞的树突(Dentrite)转移到角质细胞(Keratinocytes)，使肤色变深。抑制酪氨酸酶活性能有效减少多巴色素及黑色素的产生，从而使肤色变得更淡更白。现时大部份的美白药品如对苯二酚(Hydroquinone)及熊果苷(Arbutin)等均为针对酪氨酸酶活性而达至美白功效的。虽然对苯二酚的美白功效明显，却于2006年因为致癌的风险而被禁用。及后，熊果苷亦因为化学结构与对苯二酚相似而被禁用。现时科学界正找寻安全性较高的美白药品来取缔对苯二酚等药品。
近年来许多疾病的发生已证实与自由基有关,因此,利用抗氧化机理来治疗许多疾病也陆续受到重视,包括:心血管疾病,慢性肾炎,老年痴呆症(Alzheimer’s disease)及过敏性疾病等。具有抗氧化能力的天然产物,更被广泛用于抗皮肤衰老 的化妆品上。冬虫夏草具有保肺益肾、增强体能的功能。本研究用学界认为可以准确测定抗氧化能力的试剂盒(Total Antioxidant Capacity Colorimetric Assay Kit)来检测冬虫夏草样品的抗氧化能力。
目前市场上有许多冬虫夏草或冬虫夏草提取物所制成的美容产品。但由于近年来人工大量采挖，野生资源已日渐枯竭，加上人工培养困难，价格相当昂贵。因此，有必要努力寻找一种低成本高效率得到安全性较高的美白药品的方法。
发明内容
基于此，本发明的目的之一在于提供一种冬虫夏草和北虫草的提取液的制备方法，该方法成本低，简单易操作，且由该法得到的提取液具有最佳的美白抗氧化效果。
实现上述目的技术方案如下：
一种冬虫夏草与北虫草的提取液的制备方法，包括以下步骤：
a)温浸：将冬虫夏草与北虫草分别磨粉，过筛，分别以冬虫夏草与北虫草重量18-22倍的水温浸搅拌，温浸温度为38-42℃，温浸时间为9-11小时；
b)过滤：将冬虫夏草药液与北虫草药液分别过滤，滤液各自定容至药液浓度为0.05g/ml，再过滤，分别得到冬虫夏草提取液和北虫草提取液；
c)混合：将冬虫夏草提取液与北虫草提取液按1:1-5的质量比混合，得到冬虫夏草与北虫草的提取液。
在其中一个实施例中，所述冬虫夏草提取液与北虫草提取液按1:5的质量比混合。
本发明的另一个目的是提供一种冬虫夏草与北虫草的提取液，该提取液具有美白抗氧化效果。
具体技术方案为：根据上述制备方法得到的冬虫夏草与北虫草的提取液。
本发明的另一个目的是提供上述冬虫夏草与北虫草的提取液的应用。
具体技术方案为：上述制备方法得到的冬虫夏草与北虫草的提取液在制备 美白和/或抗氧化的产品中的应用。
所述美白和/或抗衰老产品为药品、保健品、食品、饮料、食品添加剂、营养强化剂或美容用品。
本发明所述的冬虫夏草与北虫草提取液及其制备方法具有以下优点和有益效果：
本发明找到了适合冬虫夏草与北虫草的提取方法，应用于工业，具有简单易操作的特点，该工艺仅需温水浸泡和搅拌两个主要步骤，极大地简化了制备工艺。而且，北虫草替代部分冬虫夏草，节约了大量的生产成本，更重要的是，本发明通过优化冬虫夏草与北虫草不同配比的提取液,冬虫夏草与北虫草的提取液具有最佳的美白和抗氧化效果。本发明得到的提取液还不会刺激皮肤细胞增生，可安全应用在美容及相关的产品。
本发明可以用于各种以冬虫夏草与北虫草为原料的冬虫夏草与北虫草的提取液制备，冬虫夏草与北虫草的提取液可加工为各种产品，使冬虫夏草这种珍贵稀少、价格昂贵的中药材以相对较低的原料成本和产品价格，广泛地用于药品、保健品、食品和美容产品中，具有巨大的市场潜力。
附图说明
图1为实施例1冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液工艺流程。
图2为实施例2冬虫夏草提取液,北虫草提取液及冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液对酪氨酸酶活性的抑制作用结果。
图3为实施例2不同配比的冬虫夏草与北虫草提取液对酪氨酸酶活性的抑制作用结果。
图4为实施例2冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液与熊果苷水溶液对酪氨酸酶活性的抑制作用结果。
图5为实施例3Trolox在570nm下的吸亮度的标准曲线。
图6为实施例3冬虫夏草提取液、北虫草提取液及冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液的抗氧化能力测试结果。
图7为实施例3不同配比的冬虫夏草与北虫草提取液的抗氧化能力测试结 果。
图8为实施例4冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液对HaCaT皮肤细胞的生长状态和密度的结果。
图9为实施例4冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液对HaCaT皮肤细胞的生长曲线的结果。
具体实施方式
以下将结合附图和具体实施例，对本发明进行进一步的详细说明。
实施例1
本实施例所述的冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液的制备方法，工艺流程请参阅图1，包括以下步骤：
a)温浸：将冬虫夏草与北虫草分别磨粉，过筛，分别以冬虫夏草与北虫草重量20倍的水温浸搅拌，温浸温度为40℃，温浸时间为10小时；
b)过滤：将冬虫夏草药液与北虫草药液分别过滤，滤液各自定容至药液浓度为0.05g/ml，再过滤，分别得到冬虫夏草提取液和北虫草提取液；
c)混合：将冬虫夏草提取液与北虫草提取液按1:5的质量比混合，得到冬虫夏草与北虫草提取液。
由该制备方法制得的冬虫夏草与北虫草提取液，可用于美白抗衰老产品，包括药品、保健品、食品、饮料、食品添加剂、营养强化剂或美容用品。
实施例2
本实施例所述的酪氨酸酶抑制作用实验，包括以下步骤：
a)以不同比例的冬虫夏草提取液和北虫草提取液混合，得到不同配比的冬虫夏草与北虫草提取液，分别为5:1、3:1、1:1、1:3、1:5、1:7和1:10。
b)将各提取液分别用于酪氨酸酶活性抑制作用测试，同时加入没有任何抑制剂的测试结果作为实验对照、维生素C和熊果苷(美白作用)的测试结果作为实验阳性对照。
同时还以实施例1的制备方法分别得到冬虫夏草提取液和北虫草提取液，分别用于酪氨酸酶活性抑制作用实验。
酪氨酸酶活性抑制作用测试是筛选美白药品的传统测试方法。由于酪氨酸酶可以将酪氨酸转化为多巴色素，故此在该测试中，多巴色素生成量越低，则说明提取液对酪氨酸酶的抑制作用越好。
请参阅图2。冬虫夏草提取液,北虫草提取液及冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液，对酪氨酸酶均有的抑制作用，而冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液比同等量的单用冬虫夏草提取液或北虫草提取液更好。
请参阅图3，不同配比的冬虫夏草与北虫草提取液对酪氨酸酶均有的抑制作用，其中以冬虫夏草与北虫草(1:1)提取液、冬虫夏草与北虫草(1:3)提取液、冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液的作用较佳，冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液的作用最佳。
请参阅图4，冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液对酪氨酸酶的抑制作用,与熊果苷水溶物相近。由此可知，本发明公开的冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液制备方法，对酪氨酸酶活性具有显著抑制而起到美白作用,其功效媲美熊果苷，可用于制备各种美白产品。
实施例3
本实施例所述的抗氧化能力实验，包括以下步骤：
a)以不同比例的冬虫夏草提取液和北虫草提取液混合，得到不同配比的冬虫夏草与北虫草提取液，分别为5:1、3:1、1:1、1:3、1:5、1:7和1:10。
b)以Trolox(一种维生素E的类似物)的抗铜离子氧化能力来建立标准曲线。
c)将各提取液分别用于抗氧化能力的试剂盒测试，同时以没有加入任何提取液的测试结果为实验阴性对照。
同时还以实施例1的制备方法分别得到冬虫夏草提取液和北虫草提取液，分别用于抗氧化能力实验。
请参阅图5。此图以Trolox(一种维生素E的类似物)的抗铜离子氧化能力建立标准曲线，并根据该标准曲线来计算不同虫草提取液的总抗氧化能力。在此测试中，Trolox等值越高，则说明提取液抗氧化能力越好。
请参阅图6。冬虫夏草提取液,北虫草提取液及冬虫夏草与北虫草(1:5)提取 液，均有的抗氧化作用。而冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液比同等量的单用冬虫夏草提取液或北虫草提取液更好。
请参阅图7，不同配比的冬虫夏草与北虫草提取液具有抗氧化作用，其中以冬虫夏草与北虫草(1:1)提取液、冬虫夏草与北虫草(1:3)提取液、冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液的作用较佳，冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液的作用最佳。由此可知，本发明公开的配比为1:1-5的冬虫夏草与北虫草提取液，有抗氧化作用，可广泛用于抗皮肤衰老的化妆品上。
实施例4
有些美容药品可刺激皮肤细胞增生,可能会增加患皮肤癌的潜在风险,本发明将冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液与HaCaT皮肤细胞一起培养,对其细胞的生长状态,密度和生长曲线进行测试,确认冬虫夏草与北虫草(1:5)对皮肤角质细胞的活性,从而间接评估冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液的安全性。
本实施例所述的HaCaT皮肤细胞的活性作用实验，包括以下步骤：
a)冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液过滤，稀释。
b)向a)所得溶液加入HaCaT皮肤细胞一起培养，在不同时间收取细胞。
c)使用显微镜观察b)所得细胞的生长状态和密度，在不同时值拍下照片，与没有加入提取液的阴性对照做比较。
d)在不同时间收取细胞,应用MTT试验测试细胞存活率,建立生长曲线,与没有加入提取液的阴性对照作比较。
请参阅图8。冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液对于皮肤细胞的生长状态和密度与对照没有明显分别,细胞密度适中，生长形态没有异常。不会影响细胞的存活率和生长形态,也不会刺激皮肤细胞增生。
请参阅图9。冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液对于皮肤细胞的生长曲线与对照没有明显分别,生长曲线正常。不会影响细胞的生长率,也不会刺激皮肤细胞增生。
由此可知，冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液可安全用于各种产品中。
由上述实验可知，本发明所述的冬虫夏草与北虫草提取液对酪氨酸酶有抑制作用而起到美白作用，同时具有抗氧化作用而起到抗衰老效果。提取液对细胞生长不会产生影响,也不会刺激皮肤细胞增生,可安全应用在美白抗衰老产品中，包括药品、保健品、食品、饮料、食品添加剂、营养强化剂或美容用品。
本发明所公开冬虫夏草与北虫草提取液的制备方法，其工艺流程简化、减少使用冬虫夏草。保护日渐枯竭的野生资源之余，又大大降低成本。按照该方法所制得的冬虫夏草与北虫草(1:5)提取液，具有最佳的美白及抗氧化效果，其美白功效可媲美熊果苷,同时不会刺激皮肤细胞增生。本发明所得的冬虫夏草与北虫草提取液可加工为各种产品，使冬虫夏草这种珍贵稀少、价格昂贵的天然补品以相对较低的原料成本和产品价格，广泛地用于药品、保健品、食品和美容产品，具有巨大的市场潜力。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。