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1、10申请公布号CN104127808A43申请公布日20141105CN104127808A21申请号201410337308522申请日20140715A61K36/9066200601A61P35/00200601A61K35/32200601A61K35/5620060171申请人南中兴地址325000浙江省温州市鹿城区上陡门9组团14幢104室申请人南宁72发明人南中兴南宁74专利代理机构温州高翔专利事务所33205代理人陈庆吼54发明名称治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法57摘要一种治疗恶性肿瘤的中药制剂，由下列重量份数的原料药制备而成黄芪1020G，人参515G，夏枯草1025G，。
2、甘草25G，莪术2025G，半枝莲2530G，干蟾510G，猫爪草1520G，猪苓2025G，水牛角2025G，仙鹤草2530G，这种治疗恶性肿瘤的中药制剂成本低、疗效好。51INTCL权利要求书1页说明书29页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书29页10申请公布号CN104127808ACN104127808A1/1页21一种治疗恶性肿瘤的中药制剂，其特征在于由下列重量份数的原料药制备而成黄芪1020G，人参515G，夏枯草1025G，甘草25G，莪术2025G，半枝莲2530G，干蟾510G，猫爪草1520G，猪苓2025G，水牛角2025G，仙鹤草253。
3、0G。2根据权利要求1所述的治疗恶性肿瘤的中药制剂，其特征在于由下列重量份数的原料药制备而成黄芪10G，人参15G，夏枯草10G，甘草5G，莪术25G，半枝莲30G，干蟾10G，猫爪草20G，猪苓25G，水牛角25G，仙鹤草30G。3根据权利要求1所述的治疗恶性肿瘤的中药制剂，其特征在于由下列重量份数的原料药制备而成黄芪20G，人参15G，夏枯草25G，甘草5G，莪术20G，半枝莲25G，干蟾10G，猫爪草15G，猪苓20G，水牛角20G，仙鹤草25G。4权利要求书1至3所述治疗恶性肿瘤的中药制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤A取莪术粉碎过20目筛，加12倍量水浸泡4小时，水蒸气蒸馏5小时。
4、，分取莪术油,加无水乙醇稀释后，在搅拌下滴加入到环糊精饱和溶液中，搅拌2小时，05冷冻24小时，过滤，低温干燥，干燥后密封，提取液备用，药渣转入C；B取人参、猪苓、黄芪、干蟾、水牛角、猫爪草、甘草加12倍量70乙醇加热回流提取2小时，提取3次，2、3次分别用10倍、8倍量70乙醇,合并提取液过滤，回收乙醇，药液备用,药渣转入C；C取仙鹤草、夏枯草、半枝莲及上述A、B药渣加10倍量水煮液提取10小时，提取3次，2、3次分别用8倍、8倍量水,合并提取液过滤，浓缩至相对密度约为12，醇沉24小时，回收乙醇，药液备用,弃去药渣；将A、B、C三步提取液合并减压浓缩至12，减压干燥后粉碎，加入莪术油环糊精。
5、饱和物、辅料适量混合均匀制成颗粒剂。权利要求书CN104127808A1/29页3治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法技术领域0001本发明涉及一种治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法。背景技术0002恶性肿瘤是一类严重威胁人类健康的多发病和常见病，2002年恶性肿瘤发病人数约220万，死亡约160万，预计到2020年，我国癌症发病人数将达到300万，死亡220万；全球新发病例将达L500万，死亡1000万，使人类面临着防治恶性肿瘤新的挑战。现有治疗肿瘤手段有手术、化疗、放疗、生物疗法和中医中药等五大临床治疗方法。中医药治疗是我国治疗恶性肿瘤独特的手段之一，优势明显、疗效确切。它能增强机体免疫力，。
6、减少放化疗的毒副反应，加强放化疗效果，防止肿瘤治疗后复发与转移，在减轻癌症患者症状和痛苦，提高生存质量，延长寿命等方面起着极其重要的意义。0003为此申请人于2007年2月1日申请了一项治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法发明专利，并于2011年6月1日获得授权，专利号为ZL2007100670450,该发明公开了一种治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法，该中药制剂由下列重量份数的原料药制备而成夏枯草1525份，仙鹤草1525份，白花蛇舌草1525份，半枝莲1525份，黄药子1020份，猪苓1020份，苦参515份，猫爪草1020份，海浮石1020份，生晒参510份，生黄芪1020份，灵芝37份，。
7、水牛角1020份，羚羊角12份，野菊花515份，金钱草1020份，莪术1020份，干蟾皮37份，生甘草12份。本发明中药制剂具有扶正祛邪、散结消瘤之功效，主治消化系统、泌尿系统及脑胶体瘤等各型肿瘤，防止术后复发，增强化疗作用，减轻化疗、放疗之后的毒副作用，取得较好的疗效。但该发明专利的中药配方药味太多，导致成本太高，不利于推广应用；该中药配方还存在不合理之处，有待进一步改善。发明内容0004本发明所要解决的技术问题是提供一种成本低、疗效好的治疗恶性肿瘤的中药制剂。0005为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案一种治疗恶性肿瘤的中药制剂，由下列重量份数的原料药制备而成黄芪1020G，人参51。
8、5G，夏枯草1025G，甘草25G，莪术2025G，半枝莲2530G，干蟾510G，猫爪草1520G，猪苓2025G，水牛角2025G，仙鹤草2530G。0006优选下列重量份数配比黄芪20G，人参15G，夏枯草25G，甘草5G，莪术20G，半枝莲25G，干蟾10G，猫爪草15G，猪苓20G，水牛角20G，仙鹤草25G。0007本发明治疗恶性肿瘤的中药制剂的型剂可以为颗粒剂。0008本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种本发明颗粒剂的制备方法。0009本发明颗粒制剂的制备方法是0010A取莪术粉碎过20目筛，加12倍量水浸泡4小时，水蒸气蒸馏5小时，分取莪术说明书CN104127808A2/。
9、29页4油,加无水乙醇稀释后，在搅拌下滴加入到环糊精饱和溶液中，搅拌2小时，05冷冻24小时，过滤，低温干燥，干燥后密封，提取液备用，药渣转入C；0011B取人参、猪苓、黄芪、干蟾、水牛角、猫爪草、甘草加12倍量70乙醇加热回流提取2小时，提取3次，2、3次分别用10倍、8倍量70乙醇,合并提取液过滤，回收乙醇，药液备用,药渣转入C；0012C取仙鹤草、夏枯草、半枝莲及上述A、B药渣加10倍量水煮液提取10小时，提取3次，2、3次分别用8倍、8倍量水,合并提取液过滤，浓缩至相对密度约为12，醇沉24小时，回收乙醇，药液备用,弃去药渣；0013将A、B、C三步提取液合并减压浓缩至12，减压干燥后。
10、粉碎，加入莪术油环糊精饱和物、辅料适量混合均匀制成颗粒剂。0014本发明治疗恶性肿瘤的中药制剂对C6脑胶质瘤、S180肉瘤及H22肝癌具有明显的抗肿瘤作用，且与化药环磷酰胺、司莫司汀合用能增强化药的抑瘤作用，还具有改善化药引起的骨髓和免疫抑制等作用，起到增效减毒的疗效。其抗肿瘤作用机制为促进活化的巨噬细胞产生大量的NO，对肿瘤细胞产生细胞毒作用，同时能降低肿瘤组织TNOS、INOS及VEGF，抑制肿瘤血管新生；抑制肿瘤细胞合成和分泌IGF1，抑制肿瘤细胞增殖，诱导凋亡；阻止肿瘤组织产生PGE2，解除其引起的免疫抑制，遏制肿瘤生长；调节体液免疫，增加机体免疫因子的释放，增强对肿瘤的抵抗作用；降低。
11、血液粘度，从而抵抗肿瘤侵袭转移。为临床治疗高尿酸血症提供了依据。0015下面结合具体实施方式来进一步说明本发明药物的有益效果。具体实施方式0016制备实施例10017配方1黄芪20G，人参15G，夏枯草25G，甘草5G，莪术20G，半枝莲25G，干蟾10G，猫爪草15G，猪苓20G，水牛角20G，仙鹤草25G。0018A取莪术20粉碎过20目筛但不能过40目，加12倍量水浸泡4小时，水蒸气蒸馏5小时，分取莪术油,加无水乙醇稀释后，在搅拌下滴加入到环糊精饱和溶液中，搅拌2小时，05冷冻24小时，过滤，低温干燥，干燥后密封，提取液备用，药渣转入C；0019B取人参15G、猪苓20G、黄芪20G、干。
12、蟾10G、水牛角20G、猫爪草15G、甘草5加12倍量70乙醇加热回流提取2小时，提取3次，2、3次分别用10倍、8倍量70乙醇,合并提取液过滤，回收乙醇，药液备用,药渣转入C。0020C取仙鹤草25G、夏枯草25G、半枝莲25及上述A、B药渣加10倍量水煮液提取10小时，提取3次，2、3次分别用8倍、8倍量水,合并提取液过滤，浓缩至相对密度约为12，醇沉24小时，回收乙醇，药液备用,弃去药渣；0021将A、B、C三步提取液合并减压浓缩至12，减压干燥后粉碎，粉碎后加入莪术油环糊精包合物、甜菊甙、可溶性淀粉及乳糖，混合均匀后用95乙醇制粒，4555烘干，制成颗粒剂。0022制备实施例20023。
13、配方2黄芪10G，人参15G，夏枯草10G，甘草5G，莪术25G，半枝莲30G，干蟾10G，猫爪草20G，猪苓25G，水牛角25G，仙鹤草30G。说明书CN104127808A3/29页50024A取莪术25G粉碎过20目筛但不能过40目，加12倍量水浸泡4小时，水蒸气蒸馏5小时，分取莪术油,加无水乙醇稀释后，在搅拌下滴加入到环糊精饱和溶液中，搅拌2小时，05冷冻24小时，过滤，低温干燥，干燥后密封，提取液备用，药渣转入C；0025B取人参15G、猪苓25G、黄芪10G、干蟾10G、水牛角25G、猫爪草20G、甘草5G加12倍量70乙醇加热回流提取2小时，提取3次，2、3次分别用10倍、8倍量。
14、70乙醇,合并提取液过滤，回收乙醇，药液备用,药渣转入C。0026C取仙鹤草30G、夏枯草10G、半枝莲30G及上述A、B药渣加10倍量水煮液提取10小时，提取3次，2、3次分别用8倍、8倍量水,合并提取液过滤，浓缩至相对密度约为12，醇沉24小时，回收乙醇，药液备用,弃去药渣；0027将A、B、C三步提取液合并减压浓缩至12，减压干燥后粉碎，粉碎后加入莪术油环糊精包合物、甜菊甙、可溶性淀粉及乳糖，混合均匀后用95乙醇制粒，4555烘干，制成颗粒剂。0028药效试验例0029一、材料与仪器0030动物0031健康ICR小鼠，雌雄各半，体重18G22G，由浙江省实验动物中心提供，许可证号SCXK。
15、浙20080033；健康雄性WISTAR大鼠，体重130G170G，由上海市西普尔必凯实验动物有限公司提供，许可证号SCXK沪20080016。0032药品0033瘤株0034小鼠肉瘤S180细胞株、小鼠肝癌H22细胞株、大鼠胶质瘤C6细胞株均由浙江中医药大学生命科学院提供。0035受试药0036扶正消瘤提取物FZXLF，即本发明中药制剂，以水配制成浓度为含饮片量02G/ML、04G/ML、06G/ML供小鼠试验用，以及012G/ML、024G/ML、036G/ML的药液供大鼠试验用。0037阳性对照药0038注射用环磷酰胺CTX江苏恒瑞医药股份有限公司，批号为09092321，用生理盐水配制。
16、成浓度为10MG/ML、15MG/ML、20MG/ML，备用。0039司莫司汀胶囊MECCNU，浙江瑞新药业股份有限公司，批号20100112，用蒸馏水配制成浓度为233MG/ML，备用。0040试剂0041血液分析试剂，批号5018，美国ADREWSCIENTICGROUPCO；RPIM1640培养基批号1285082，美国GIBCOBRL；超级新生牛血清批号091025，杭州四季青生物工程材料研究所；骨蜡批号CH5DZTM，美国强生。0042大鼠TNF、IL2、IFN、VEGF、PGE2、IGFELISA检测试剂盒，批号均为09/2011，以上试剂盒均由美国RD公司提供。0043免疫球蛋白。
17、IGA、IGG、IGM、补体C3，C4免疫透射比浊试剂盒，批号均为10/03/2011，以上试剂盒均由北京瑞格博科技发展有限公司提供。说明书CN104127808A4/29页60044NO试剂盒，批号20110119；NOS试剂盒测分型，批号20110214；考马斯亮蓝试剂盒，批号20110111。0045绵羊红细胞SRBC悬液的制备取绵羊血8ML，用生理盐水洗涤3次，每次2000RPM离心5MIN，弃上清液，再用生理盐水以15VV稀释得20的绵羊红细胞悬液20ML。0046补体的制备采集豚鼠血液，分离出血清并混合，将1ML压积SRBC加入到5ML豚鼠血清中，放入4OC冰箱30MIN，经常振荡。
18、，离心取上清液，分装20OC保存。用时以生理盐水按18稀释。0047主要仪器0048HEMAVET950动物血液分析仪，ADREWSCIENTICGROUPCO。0049POWERWAVE340酶标仪，美国BIOTEK公司。0050XHFD高速分散器内切式匀浆机，宁波新芝生物科技股份有限公司。0051MICROC117离心机，THERMO。0052JY10001型电子天平，上海民桥精密仪器有限公司。0053HERAEUS三气细胞培养箱，德国HERAEUS公司。0054SWCJIF层流超净工作台，苏州安泰空气技术公司。0055OLYMPUSIX70倒置荧光显微镜，日本OLYMPUS公司。0056。
19、ALCH动物脑立体定位仪，上海奥尔科特生物科技有限公司。0057ALCIP微量注射泵，上海奥尔科特生物科技有限公司。0058ALCCED动物颅骨钻，上海奥尔科特生物科技有限公司。0059统计学处理0060计量资料数据结果以表示，组间差异采用TTEST。P95。0211122动物模型制备0212麻醉和鼠颅固定WISTAR大鼠称重，按45MGKG1体重腹腔注射浓度为3戊巴比妥钠溶液麻醉后，术区剃毛，碘酒消毒、酒精脱碘各三遍，手术过程中注意保温。用脑立体定位仪固定大鼠头部，鼠颅依靠两耳棒及切牙钩三点固定。在向外耳道内插入耳棒时，鼠眼球向外凸出。一旦进入鼓膜环沟内，穿破鼓膜，则会发出轻微的“嘭”声响，。
20、同时出现眨眼反射，眼球不再凸出，说明耳棒进位正确。固定左、右侧耳棒，拧紧耳棒固定旋扭。接着，用定位仪上的切牙钩，钩住大鼠的切牙，要钩至牙根部，并固定之。鼠颅前固定点的正确与否，决定着鼠颅固定的前仰度是否合适。至此，鼠头应平稳地固定于立体定位仪上。0213靶点定位大鼠头部正中纵向切口，用止血钳将头部皮肤左右分开，以刀片刮去颅盖骨膜，暴露颅骨，以大鼠颅顶的前囟点为定点，当微量注射器的针尖对准此点时，读取立体定位仪三维坐标上标尺数值，此数值即是“0”点坐标。靶点定位大鼠右侧大脑尾状核，坐标为前囟中点前10MM，正中矢状线右侧旁开30MM处，然后，在此点用铅笔作一标记。用颅钻在靶点钻孔一枚，勿伤及硬脑。
21、膜，直径10MM。将注射器及其针头移至骨孔，核对骨孔的准确度，修正骨孔。0214细胞注射用微量注射器吸取10L细胞悬液，使其达到2106个细胞，垂直刺入硬脑膜6MM，退针1MM距硬脑膜下50MM，微量注射泵将细胞悬液以1L/MIN的速度注入靶区，注射时间为10MIN，留针5MIN，使细胞充分沉积，避免返流。将针缓慢拔出之后，用骨蜡封闭骨孔，生理盐水冲洗手术部位，缝合皮肤后消毒皮肤，待大鼠苏醒之后单笼饲养。假手术组以PBS代替细胞悬液进行同样操作。术后三天腹腔注射青霉素预防感染。021513给药方法0216本发明中药制剂各剂量组每日灌胃给药，连续14日。MECCNU组每周给药一次。说明书CN10。
22、4127808A1615/29页17给药容积均为1ML/100G。假手术组、模型组和正常对照组每日给予等体积的蒸馏水。021714指标测定0218141肿瘤相关指标0219抑瘤率末次给药后下腔静脉取血，处死大鼠，取脑，20冷冻10分钟，沿注射针孔冠状切开，游标卡尺测定肿瘤长径A、短径B，按以下公式计算肿瘤体积及抑瘤率。肿瘤体积AB2/2，抑瘤率1治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重1000220肿瘤组织血管内皮生长因子VEGF、前列腺素E2PGE2、胰岛素样生长因子IGF、一氧化氮合成酶NOS含量取瘤块制成10组织匀浆，检测肿瘤组织VEGF、PGE2、IGF含量，NOS活性。0221血清一氧化氮NO。
23、、NOS含量末次给药后下腔静脉取血，分离血清。测NO含量、NOS活性。0222142免疫相关指标0223血清肿瘤坏死因子TNF、白介素2IL2、干扰素IFN含量末次给药后下腔静脉取血，分离血清，测定TNF、IL2、IFN含量。0224血清免疫球蛋白GIGG、免疫球蛋白AIGA、免疫球蛋白MIGM及补体C3，C4含量末次给药后下腔静脉取血，分离血清。测定血清IGG、IGA、IGM及补体C3，C4、TNF、IL2、IFN、NO含量，NOS活性。0225血液流变学测定末次给药后后下腔静脉取血，血流变仪测定低、中、高切变率下全血粘度及血浆粘度。02262实验结果022721对脑胶质瘤大鼠肿瘤及相关指标。
24、的影响0228211对脑胶质瘤大鼠肿瘤体积及抑瘤率的影响0229与模型组相比，本发明中药制剂FZXLF12、24、36GKG1对肿瘤体积均有明显的抑制作用，抑瘤率分别为4310、5313、5466；FZXLF12、24、36GKG1与MECCNU合用对脑胶质瘤大鼠肿瘤体积均有明显的抑制作用P005。与假手术组相比，模型组血清TNOS含量显著降低。与模型组相比，FZXLF36GKG1组、FZXLF12、24、36GKG1与MECCNU合用组、MECCNU组血清TNOS含量均升高P005，作用较MECCNU组强。各组组织TNOS含量无明显变化。结果见表33。0241表33对肿瘤组织TNOS、INO。
25、S含量的影响02420243与正常对照组相比，P005。与假手术组相比，模型组肿瘤组织IGF含量明显升高P005。与假手术组相比，模型组肿瘤组织PGE2含量显著升高P005。与假手术组相比，模型组肿瘤组织VEGF含量显著升高P005。与假手术组相比，模型组血清IGA有降低趋势P005。与模型组相比，FZXLF12、24、36GKG1与MECCNU合用组及MECCNU单用组血清IGA均显著升高P005。与假手术组相比，模型组血清总IG含量显著升高P005。与假手术组相比，模型组血清IGG比例显著升高P005。与假手术组相比，模型组血清IGA比例显著降低P005。与假手术组相比，模型组血清IGM比。
26、例显著降低P005。与假手术组相比，模型组血清补体C3含量无明显变化P005。与模型组相比，FZXLF12GKG1，FZXLF12、24、36GKG1与MECCNU合用组及MECCNU单用组血清补体C3含量均明显升高P005。与假手术组相比，模型组血清TNF含量降低P005。与假手术组相比，模型组血清IL2含量降低P005。与假手术组相比，模型组血清IFN含量降低P001。与模型组相比，FZXLF12、24KG1，FZXLF24、36GKG1与MECCNU合用组及MECCNU单用组血清IFN升高P005001。结果见表38。0267表38对血清TNF、IL2、IFN含量的影响02680269与。
27、正常对照组相比，P005，P001；与假手术组相比P005，P001；与模型组相比P005，P001027023对脑胶质瘤大鼠血液流变学的影响说明书CN104127808A2221/29页230271231对脑胶质瘤大鼠全血粘度的影响0272与正常对照组相比，假手术组全血粘度无明显变化。与假手术组相比，模型组低切下全血粘度明显升高P005。与模型组相比，FZXLF36GKG1，FZXLF12、24、36GKG1与MECCNU合用及MECCNU单用能明显降低低切下全血粘度P005。各组血浆粘度没有明显差异。结果见表39。0273表39对血液流变学的影响027402750276与正常对照组相比，P。
28、005，P001；与假手术组相比P005，P001；与模型组相比P005，P00102773小结0278综上所述，本发明中药制剂FZXKF12、24、36GKG1对C6大鼠脑胶质瘤均有明显的抑制作用，作用机制可能为能促进活化的巨噬细胞产生大量的NO，从而对肿瘤细胞产生强大的细胞毒作用，同时能降低肿瘤组织TNOS、INOS及VEGF，抑制肿瘤血管新生，对肿瘤生长产生强大的抑制作用；抑制脑胶质瘤细胞合成和分泌IGF1，从而抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡；阻止肿瘤组织产生PGE2，从而解除PGE2引起的免疫抑制，遏制脑胶质瘤生长；调节体液免疫，增加机体免疫因子的释放，从而增强荷瘤大鼠对肿瘤的抵抗。
29、作用；降低荷瘤大鼠血液粘度，从而抵抗肿瘤侵袭转移。0279本发明中药制剂FZXLF12、24、36GKG1与化疗药MECCNU合用，能增强MECCNU的抗肿瘤作用，同时改善MECCNU引起的免疫抑制及血清NO生成减少，降低肿瘤组织TNOS、INOS及VEGF，抑制脑胶质瘤细胞合成和分泌IGF1，阻止肿瘤组织产PGE2，增加机体免疫因子TNF、IL2、IFN的释放，对MECCNU抗肿瘤有减毒增效作用。0280四本发明中药制剂单用对CTX致骨髓抑制的荷瘤小鼠血液学的作用研究02811实验方法028211动物分组0283ICR小鼠，雌雄各半。随机分为5组正常对照组、模型对照组、FZXLF60GKG1。
30、组、FZXLF40GKG1组、FZXLF20GKG1组，每组10只。说明书CN104127808A2322/29页24028412模型制备0285121肿瘤接种取肝癌H22细胞腹腔内接种8天的ICR小鼠，无菌条件下用5ML注射器取吸出12ML牛奶状、较粘稠的腹水，用生理盐水14倍稀释，得到约10106个/ML的瘤株稀释液，每只小鼠01ML接种左前肢腋窝皮下4。0286122白细胞减少模型除正常对照组外，各组动物注射50MGKG1CTX，1次/D，连续7天。028713给药方法0288本发明中药制剂FZXLF各给药组分别按60GKG1、40GKG1、20GKG1灌胃给予肿瘤小鼠。正常对照组、模型。
31、对照组均灌相应体积的水，每日1次，连续7D，灌胃体积01ML/10G体重。028914指标测定0290血液学指标动物血液分析仪检测血中红细胞数量RBC、平均红细胞血红蛋白含量MCH、血小板数量PLT、白细胞数量WBC。02912实验结果与正常对照组比较，模型对照组小鼠的WBC、MCH、PLT均出现下降P005；与模型对照组比较，FZXLF60、40GKG1能升高WBC、PLT，40GKG1可升高MCHP005001。结果见表41。0292表41对小鼠红细胞、白细胞、平均血红蛋白、血小板的影响N1002930294与正常对照组比较P005P001与模型对照组比较P005P00102953小结02。
32、96本发明中药制剂FZXLF60、40GKG1能够拮抗CTX所造成的血小板和白细胞下降作用，提示FZXLF可以改善放化疗引起的骨髓造血损伤，提高造血功能。0297五本发明中药制剂单用对CTX致免疫抑制的荷瘤小鼠免疫功能的作用研究02981实验方法029911动物分组0300ICR小鼠，雌雄各半。随机分为5组正常对照组、模型对照组、FZXLF60GKG1组、FZXLF40GKG1组、FZXLF20GKG1组，每组10只。030112模型制备0302121肿瘤接种取肝癌H22细胞腹腔内接种8天的ICR小鼠，无菌条件下用5ML注射器取吸出12ML牛奶状、较粘稠的腹水，用生理盐水14倍稀释，得到约10。
33、106个/ML的瘤株稀释液，每只小鼠01ML接种左前肢腋窝皮下。说明书CN104127808A2423/29页250303122免疫抑制模型第4D后，除正常对照组外，各组动物注射50MGKG1CTX，隔日注射，连续3天。0304123免疫反应制备第10D后，除正常对照组外，其余各组小鼠IP20SRBC02ML进行免疫，免疫3天。030513给药方法0306本发明中药制剂FZXLF各给药组分别按60GKG1、40GKG1、20GKG1灌胃给予肿瘤小鼠。正常对照组、模型对照组均灌相应体积的水，每日1次，连续14D，灌胃体积为01ML/10G体重。030714指标测定0308141血清溶血素在末次给。
34、药后第2天，摘除眼球取血于离心管内，放置1H，离心2000RMIN1，10MIN，收集血清，用生理盐水做200倍稀释；取稀释的血清1ML、10SRBC05ML、18稀释的补体05ML混合于试管中，对照管以生理盐水代替血清。所有试管在37水浴1H中间摇动1次，冰浴终止反应，离心3000RMIN1，10MIN，取上清液1ML，加都氏试剂3ML。同时取10SRBC025ML，加都氏试剂至4ML，充分混匀，放置10MIN后，于波长540NM处以对照管做空白，分别测定各管光密度值，按下面公式计算半数溶血值HC50。0309HC50样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值血清稀释倍数。0310142抗体。
35、形成细胞在末次给药后第2天，取脾，按15MGML1制成脾细胞悬液，每管依次加入脾细胞悬液、02SRBC、18豚鼠血清各05ML，混匀，以生理盐水代替豚鼠血清作空白对照，所有试管在37水浴1H，冰浴终止反应，离心3000RMIN1，10MIN，取上清液。用酶标仪于波长413NM测吸光度值。03112实验结果031221对免疫功能低下小鼠血清溶血素的影响0313与正常对照组比较，CTX可以明显抑制机体的免疫功能，肿瘤小鼠血清溶血素水平HC50显著降低P001；与模型对照组比较，FZXLF三个剂量组60GKG1、40GKG1、20GKG1均有提高小鼠血清溶血素含量的趋势。结果见表51。0314表51。
36、对免疫功能低下小鼠血清溶血素的影响03150316与正常对照组比较P005P001；与模型对照组比较P005P001031722对免疫功能低下小鼠抗体形成细胞的影响0318与正常对照组比较，CTX可以明显抑制机体的免疫功能，抗体形成细胞生成的水平降低P005；与模型对照组比较，FZXLF三个剂量组60GKG1、40GKG1、20GKG1均有提高小鼠T淋巴细胞增殖的趋势，呈剂量正相关关系，其中高剂量组升高明显。结果见表52。说明书CN104127808A2524/29页260319表52对免疫功能低下小鼠抗体形成细胞的影响03200321注与正常对照组比较P005P001；与模型对照组比较P00。
37、5P00103223小结0323本实验研究FZXLF三个不同剂量组对环磷酰胺所致的免疫功能低下血清溶血素、抗体形成细胞水平的影响。结果表明FZXLF三个不同剂量组对CTX免疫抑制小鼠的血清溶血素有升高趋势，其中高剂量组具有统计学意义；能提高CTX免疫抑制小鼠的抗体形成细胞，与剂量呈一定程度的正相关。说明FZXLF具有升高血清溶血素、抗体形成细胞的趋势，从而起到了增强肿瘤小鼠的免疫力而抑制肿瘤的生长。0324三、分析与讨论0325一本发明中药制剂对S180及H22荷瘤小鼠的影响03261对H22、S180荷瘤小鼠抗肿瘤的分析0327本实验主要观察灌胃给药后，研究本发明中药制剂FZXLF不同剂量对。
38、H22、S180荷瘤小鼠的影响。由实验结果可看出FZXLF对H22实体瘤、S180腹水瘤瘤重都具有抑制作用，与上述体重变化相对应，对H22实体瘤最高抑制率为3237，对S180腹水瘤的最高抑制率为3310，抑制率相当但均不高，同时一定程度上能延长小鼠的生存时间。FZXLF三个给药组对荷瘤小鼠的脾指数、胸腺指数无明显的影响，但与阳性组比较，对荷瘤小鼠均有升高作用，提示单用FZXLF对免疫器官的影响不大，但相比与化疗药，其有改善免疫的功能。总体而言，FZXLF对两种肿瘤均具有抑制作用，相比于化疗药，可能还具有提高免疫功能的作用。03282对荷瘤小鼠生命延长率的分析0329生命延长率是验证一种药物是。
39、否有效的一个药效学的整体评估指标。实验期间逐日记录动物的死亡情况。对照组动物通常在23周内全部死亡，个别存活时间太长需剔除，但各组相应地剔除一只。如在给药期间给药组动物于7日内死亡超过20，表示实验失败。如对照组内20动物存活4周以上，实验亦应作废，治疗组观察时间一般为50D左右。分别记录对照组和各给药组平均生存时间，以生命延长率为其评价标准。0330药物对荷瘤小鼠存活期的影响，有着直接抑瘤和减毒两方面的意义。很多中药都有文献报道有延长荷瘤小鼠存活期的作用。本实验中FZXLF各剂量组与模型对照组相比，均有延长H22、S180肿瘤小鼠存活天数的趋势，60G/KG对两种肿瘤模型的作用最佳，其中对H。
40、22最高生命延长率为2722，对S180为1656。03313对荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖的分析0332淋巴细胞增殖活性的检测在评价细胞免疫功能中具有重要意义。MTT法是通过颜色反应观察细胞代谢活化的程度，直接检测活性细胞的比例。利用该法可反映从受试机体说明书CN104127808A2625/29页27分离的淋巴细胞、或体外培养的受试淋巴细胞受特异性刺激时的增殖情况。又因为该法排除形态观察法的主观差异性，避免同位素掺入法的不稳定性和放射性污染，具有大量样本快速检测的优点，所以可用于检测外源性受试物在体内和体外试验中对淋巴细胞增殖功能的影响及剂量效应和时间效应关系的观察，从而评价受试物对淋巴细胞或机。
41、体免疫功能的作用。0333本实验检测结果显示，FZXLF60、40、20GKG1对H22、S180荷瘤小鼠均具有提高脾T淋巴细胞转化增殖的能力，提示可能具有增强免疫的功效，其中FZXLF60GKG1对H22、S180荷瘤小鼠的增殖率具有统计学差异，其他给药组具有升高趋势，说明FZXLF可能存在剂量正相关性，有待进一步研究。0334综上所述可知，对于H22荷瘤小鼠相比于单用的化疗组，FZXLF60、40、20GKG1三个剂量合用不同剂量CTX10、15、20MGKG1瘤重明显下降，抑瘤率显著升高，其中以联用CTX10MGKG1效果最为明显；各给药组均具有升高脾指数、胸腺指数的作用。不同剂量CTX。
42、之间对于H22小鼠的影响无明显差异，故随着FZXLF与CTX的联用，抑制肿瘤的生长明显升高，提示可能是因为FZXLF可以与CTX合用产生增效的作用。60GKG1还能延长小鼠生存时间，提示在这个剂量下，FZXLF可能还具有一定的解毒功效。0335对于S180荷瘤小鼠FZXLF三个剂量组与不同剂量CTX10、15、20MGKG1合用可以看出，FZXLF合并CTX20MGKG1抑瘤效果明显最好，其中FZXLF60GKG1合并CTX15、20MGKG1能下降瘤重，升高抑瘤率P005；各合并给药组相比于化疗组，有升高脾指数、胸腺指数的作用，说明对于肿瘤小鼠免疫器官有很好的改善作用。不同剂量的CTX之间对。
43、于S180小鼠的影响无明显差异，故随着FZXLF与CTX的联用，抑制肿瘤的生长明显升高，提示可能是因为FZXLF可以与CTX合用产生增效的作用。60、40GKG1还能延长小鼠生存时间，提示FZXLF4060GKG1的剂量可能还具有一定的解毒功效。03364对荷瘤小鼠血液学的分析0337放化疗引起的骨髓造血抑制，其骨髓病理改变主要表现为造血总面积减少，红髓被脂肪组织所替代或间质水肿；造血细胞单位面积内细胞数减少；基质水肿、出血、细胞外溢；脂肪组织比例明显增多，可见液性脂肪坏死区及坏死细胞；非造血细胞相对增加。CTX是通过DNA为靶点杀伤肿瘤细胞的，对肿瘤细胞和正常细胞没有选择性，因此在杀伤肿瘤细。
44、胞的同时，导致增殖旺盛的骨髓造血细胞DNA结构破坏或阻止DNA合成，引起骨髓造血功能损伤，主要表现为外周血白细胞总数，血小板数，骨髓有核细胞数，骨髓白细胞系淋巴细胞数显著减少，血红蛋白含量降低。0338本实验肿瘤H22模型小鼠白细胞总数、血小板数、平均血红蛋白均显著下降，而FZXLF60、40GKG1给药组能够拮抗CTX所造成的血小板和白细胞下降作用，提示FZXLF可以改善放化疗引起的骨髓造血损伤，提高造血功能。03395总结0340本发明中药制剂由人参、半枝莲、莪术、夏枯草等11味中药组成。现代药理研究表明，人参PANAXGINSENGCAMEY，为五加科多年牛草本植物，主要活性成分为人参皂。
45、苷和人参多糖，性甘、微苦；微温、有大补元气、补气益肺、生津止渴、安神益之功效。半枝莲SCUTELLARIABARBATADDON，又名狭叶韩信草，具有良好的抗肿瘤活性，其主要功能为清热解毒，利尿消肿，止血化瘀等，研究表明可提高小鼠溶血素水平，抑制S180荷瘤小鼠肿说明书CN104127808A2726/29页28瘤的生长。莪术RHIZOMACURCUMAECURCUMAZEDOARIABERGROSC，辛、苦，性温，归肝、脾经，具行气破血、消积止痛之效，具有抗病毒、抗肿瘤、抗菌、消炎止痛、增强免疫等药理作用13。另外对于其他成分夏枯草等也均有文献报道在提高免疫、预防和治疗肿瘤方面具有较好的药理。
46、活性。0341二本发明中药制剂对C6荷瘤大鼠的影响03421对荷瘤大鼠抗肿瘤作用的分析034311肿瘤体积和抑瘤率0344对肿瘤生长的抑制作用是评价药物抗肿瘤药效最直观、最有力的指标。本实验研究中，FZXLF12、24、36GKG1三个剂量对大鼠C6脑胶质瘤肿瘤体积均有明显的抑制作用，抑制率分别达4310、5313、5466；FZXLF12、24、36GKG1与MECCNU合用对脑胶质瘤大鼠肿瘤体积均有明显的抑制作用，抑制率分别为7041、7060、7095，能增强MECCNU的抑瘤作用；同时对脑指数无明显影响。提示FZXLF单用即对C6脑胶质瘤有显著的抑制作用，与MECCNU合用能增强MEC。
47、CNU的抑瘤作用，有协调增效作用。034512NO及NOS0346NO是作为一种活跃的信使分子，通过多种机制影响着脑胶质瘤的生长、分化及脑肿瘤屏障的开放。一方面，NO是近年来新发现的一种血管形成调节因子，肿瘤组织可通过自分泌细胞因子诱导INOS产生而调节NO的合成，NO可诱导内皮的分裂、增生，调节肿瘤血管新生，调控肿瘤血流量，因而NO可能是肿瘤生长必要的血管形成开关；没有NO，生长中的肿瘤其大小将会因血供的缺乏而受到限制。另一方面，活化的巨噬细胞产生的NO可抑制肿瘤细胞的呼吸链、DNA复制等而发挥细胞毒性作用，抑制细胞生长，导致细胞死亡。本实验研究中，模型组血清NO含量显著升高，TNOS含量显。
48、著降低，INOS含量无明显变化；肿瘤组织TNOS和INOS含量均有升高趋势。提示肿瘤的入侵，诱导活化了机体巨噬细胞，使其产生了大量NO以抵抗肿瘤的入侵；同时，肿瘤组织通过自分泌细胞因子诱导INOS产生而增加NO的合成，促进肿瘤组织血管生成，从而促进肿瘤生长。FZXLF12、24、36GKG1能显著升高血清NO含量，高剂量还能显著升高血清TNOS含量，但对血清INOS无明显影响；FZXLF12、24、36GKG1对肿瘤组织TNOS和INOS均有一定的降低作用；提示FZXLF各剂量能促进活化的巨噬细胞产生大量的NO，从而对肿瘤细胞产生强大的细胞毒作用，同时能降低肿瘤组织TNOS和INOS，抑制肿瘤。
49、血管新生，对肿瘤生长产生强大的抑制作用。MECCNU组NO含量显著降低，FZXLF12、24、36GKG1与MECCNU合用组血清NO含量显著升高，MECCNU单用及与FZXLF12、24、36GKG1合用组血清TNOS含量均显著升高，对INOS含量无明显影响，提示MECCNU对巨噬细胞释放细胞毒性NO有明显的抑制作用，FZXLF可改善其对巨噬细胞的抑制作用。MECCNU单用及与FZXLF各剂量合用对瘤组织TNOS及INOS含量均有不同程度的降低作用，FZXLF与MECCNU合用较MECCNU单用作用更强，提示MECCNU对肿瘤组织血管增生有一定的抑制作用，FZXLF与其有协同增效作用。034713瘤组织VEGF0348肿瘤的持续生长和转移有赖于血管生成新生血管供给肿瘤生长所需要的氧、营养物质。肿瘤需要功能性的血管网络提供氧气、养料并清除代谢产物，因此,肿瘤必须通过形成新生血管网构建自己的血管系统，这样才能持续地生长和发展。如果没有血管系统提供。