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1、10申请公布号CN104072557A43申请公布日20141001CN104072557A21申请号201410329611022申请日20140711C07H17/07200601C07H1/0020060171申请人福州大学地址350108福建省福州市闽侯县上街镇大学城学园路2号福州大学新区72发明人陈海军何桂华李财龙董龙嵘谢晓波王旋旋高瑜74专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司35100代理人蔡学俊54发明名称一种制备木蝴蝶苷A的方法57摘要本发明属于医药技术领域，公开了一种制备木蝴蝶苷A的简便方法。该方法是以黄岑苷为起始原料，利用一锅两步法合成木蝴蝶苷A，该方法所用试剂为实验室常。
2、用试剂，且反应中关键步骤的还原反应在室温条件下即可进行，因此，本发明所需材料易得、成本低廉，且反应操作简单，易于处理，可以大量获得木蝴蝶苷A，以供医药研发的使用。51INTCL权利要求书1页说明书4页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页附图1页10申请公布号CN104072557ACN104072557A1/1页21一种制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于以黄岑苷为起始原料，经一锅两步法获得所述木蝴蝶苷A。2根据权利要求1所述制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于包括以下步骤将黄岑苷于有机醇中溶解，0下加入无机酸作为催化剂，混匀后加热回流反应24小时，待反应结。
3、束后将得到的黄色液体冷却至室温；2）0下，在步骤1）得到的黄色液体中分批加入还原试剂，再置于室温下反应14小时；3）步骤2）反应结束后加入乙酸乙酯或丙酮，继续反应1060分钟，再将反应液旋干，加入乙酸乙酯和体积分数为10的醋酸水溶液，搅拌后得到黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A；4）将粗产物用有机溶剂进行重结晶后，抽滤得到高纯度的木蝴蝶苷A。3根据权利要求1所述制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于步骤1）所述有机醇为实验室常用醇溶液，包括甲醇、乙醇、异丙醇。4根据权利要求1所述制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于步骤1）所述无机酸为实验室常用无机酸，包括浓盐酸、浓硫酸、浓硝酸、浓磷酸。5根据权利要求1。
4、所述制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于步骤2）所述还原试剂为硼氢化钠、硼氢化钾、硼氢化锂，或硼氢化钠与氯化锂按摩尔比11混合所得。6根据权利要求1所述制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于步骤4）所述有机溶剂为甲醇或乙醇。权利要求书CN104072557A1/4页3一种制备木蝴蝶苷A的方法技术领域0001本发明属于医药技术领域，具体涉及一种制备木蝴蝶苷A的方法。背景技术0002黄酮类化合物广泛分布于蔬菜、水果和草本药材中，并具有极高的药用价值，如可抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节等，开发意义重大。除了一些常见的黄酮醇苷，如槲皮素苷和山柰酚甙已被证明具有良好的生物活性，近年来，黄酮苷也得到了广泛的研究。例。
5、如，一些黄酮苷具有较好的抗肿瘤、消炎、抗疟原虫或抗锥虫等作用。0003从自然植物中提取黄酮苷是其主要来源，但也使其生产成本较高，成为限制其进一步应用的一大障碍。为了解决这个问题，蛋白质工程、代谢工程和合成生物学已被应用于提高黄酮苷的有效生产率。尽管酶工程、基因工程可以提高产量，但是在实际应用中存在种种困难，例如周期长、效率低，副反应多、分离纯化难等。0004木蝴蝶（OROXYLUMINDICUM）属紫葳科，始载于滇南本草，原名千张纸，是一种常用中药。其味苦、甘，性凉，入肺、肝、胃经，有清肺、利咽、止咳、舒肝、和胃等功效，主治咽痛喉痹、声音嘶哑、咳嗽、肝胃气痛、疮疡久溃不敛、浸淫疮等。木蝴蝶中的。
6、化学成分主要为黄酮类化合物，如黄芩素（BAICALEIN），白杨素（CHRYSIN），木蝴蝶苷A（OROXINA），木蝴蝶苷B（OROXINB），木蝴蝶定（OROXINDIN），千层纸苷（TETUIN），黄芩苷（BAICALIN）等。近年来，木蝴蝶苷的药用价值受到了越来越多的关注，其中OROXINA，OROXINB和OROXYLINA70GLUCURONIDE具有抗氧化、抗炎、免疫调节等功能以及抗金黄色葡萄球菌感染等生理活性。但是由于从木蝴蝶中分离纯化OROXINA，OROXINB较困难，因此其价格相当昂贵，例如1G纯度为97的OROXINA需要1500，严重影响了该类化合物在体内体外药效评价。
7、研究等领域的应用。0005目前，国内外科研人员已采用多种方法来获得OROXIN系列化合物，如LIU等人采用高速逆流色谱法从天然的木蝴蝶中分离纯化得到纯度为991的OROXINA，但是这种方法成本很高，不适用于大量提纯JOURNALOFSEPARATIONSCIENCE2010,33,10581063。SOHNG等人通过构建具有尿苷二磷酸葡萄糖（UDP葡萄糖）途径和糖基转移酶的大肠杆菌菌株，开发了一种可以从黄酮苷元黄芩素生物转化为黄芩素7O葡萄糖苷（OROXINA）的生物合成方法，但是该方法容易产生非常复杂的副产物，给分离纯化带来了诸多困难PROCESSBIOCHEMISTRY2013,48,1。
8、7441748。因此，是否能通过化学合成从根本上解决这些问题，开发一种简洁的合成路线来大量合成OROXINA，成为当前亟待解决的问题。0006根据黄酮苷的生源途径，我们发现黄芩苷（BAICALIN）和OROXINA几乎具有相同的结构，BAICALIN是黄芩素7O葡萄糖醛酸苷，而OROXINA是黄芩素7O葡萄糖苷。黄芩苷是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，是黄芩的主要有效成分，含量占10以上，因此，其来源非常丰富，价格便宜，以BAICALIN作为起始原料用来合成OROXINA，可有效解决OROXINA原料不足的难题，同时也可为其他同类化合物的合成提供新的解决思说明书CN104072557。
9、A2/4页4路和方案。发明内容0007本发明的目的在于提供一种制备木蝴蝶苷A的方法，针对现有各种方法制备和提取木蝴蝶苷A较困难，例如收率低，提取成本高等缺点，我们进行了本发明。本发明的目的在于提供一种半合成制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于极大地提高了收率，降低了生产成本。0008为实现上述目的，本发明采用如下技术方案一种制备木蝴蝶苷A的方法，是以黄岑苷为起始原料，经一锅两步法获得所述木蝴蝶苷A。0009包括以下步骤1）将黄岑苷于有机醇中溶解，0下加入无机酸作为催化剂，混匀后加热回流反应24小时，溶液颜色开始变黄后点TLC板确定反应程度，待确定反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温；2）0下，在步。
10、骤1）得到的黄色液体中分批加入还原试剂，再置于室温下反应14小时；3）步骤2）反应结束后加入乙酸乙酯或丙酮，继续反应1060分钟，再将反应液旋干，加入乙酸乙酯和体积分数为10的醋酸水溶液，搅拌后得到大量黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A；4）将粗产物用有机溶剂进行重结晶后，抽滤得到高纯度的木蝴蝶苷A。0010步骤1）所述有机醇为实验室常用醇溶液，包括甲醇、乙醇、异丙醇；所述无机酸为实验室常用无机酸，包括浓盐酸、浓硫酸、浓硝酸、浓磷酸。0011步骤2）所述还原试剂为硼氢化钠、硼氢化钾、硼氢化锂，或硼氢化钠与氯化锂按摩尔比11混合所得。0012步骤4）所述有机溶剂为甲醇或乙醇。0013本发明的显著。
11、优点在于针对现有方法制备和提取木蝴蝶苷A出现的收率低、提取成本高等问题，本发明提供了一种半合成制备木蝴蝶苷A的方法，是以黄岑苷为起始原料，利用一锅两步法合成木蝴蝶苷A，该方法所用试剂为实验室常用试剂，且反应中关键步骤的还原反应在室温条件下即可进行，因此，本发明所需材料易得、成本低廉，反应操作简单，易于处理，且提取率较高，可以大量获得木蝴蝶苷A，以供医药研发的使用。附图说明0014图1为本发明的合成路线。具体实施方式0015为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。0016实施例1一种制备木蝴蝶苷A的方法，包括以下步骤说明。
12、书CN104072557A3/4页51）在100ML烧瓶中加入09G黄芩苷和50ML乙醇，0下滴入催化量的浓硫酸，将反应瓶置于油浴中，加热回流反应2小时；溶液颜色开始变黄后点TLC板确定反应程度，待确定反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温；2）0下，在步骤1）的黄色液体中分批加入380MG还原试剂硼氢化钠，置于室温下反应1小时；3）步骤2）反应结束后加入5ML乙酸乙酯，室温继续反应20分钟，将反应液旋干，再加入5ML乙酸乙酯和5ML体积分数为10的醋酸水溶液，搅拌后得到大量黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A；4）将粗产物用10ML甲醇进行重结晶后，抽滤得到淡黄色固体颗粒065G，收率为752。。
13、0017实施例2一种制备木蝴蝶苷A的方法，包括以下步骤1）在100ML烧瓶中加入09G黄芩苷和50ML甲醇，0下滴入催化量的浓硫酸，将反应瓶置于油浴中，加热回流反应3小时；溶液颜色开始变黄后点TLC板确定反应程度，待确定反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温；2）0下，在步骤1）的黄色液体中分批加入380MG还原试剂硼氢化钠，置于室温下反应2小时；3）步骤2）反应结束后加入5ML乙酸乙酯，室温继续反应10分钟，将反应液旋干，再加入5ML乙酸乙酯和5ML体积分数为10的醋酸水溶液，搅拌后得到大量黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A；4）将粗产物用10ML乙醇进行重结晶后，抽滤得到淡黄色固体颗粒054。
14、G，收率为625。0018实施例3一种制备木蝴蝶苷A的方法，包括以下步骤1）在100ML烧瓶中加入09G黄芩苷和50ML甲醇，0下滴入催化量的浓硫酸，将反应瓶置于油浴中，加热回流反应2小时；溶液颜色开始变黄后点TLC板确定反应程度，待确定反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温；2）0下，在步骤1）的黄色液体中分批加入540MG还原试剂硼氢化钾，置于室温下反应3小时；3）步骤2）反应结束后加入5ML乙酸乙酯，室温继续反应30分钟，将反应液旋干，再加入5ML乙酸乙酯和5ML体积分数为10的醋酸水溶液，搅拌后得到大量黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A；4）将粗产物用10ML甲醇进行重结晶后，抽滤得到淡。
15、黄色固体颗粒060G，收率为694。0019实施例4一种制备木蝴蝶苷A的方法，包括以下步骤1）在100ML烧瓶中加入09G黄芩苷和50ML甲醇，0下滴入催化量的浓硫酸，将反应瓶置于油浴中，加热回流反应4小时；溶液颜色开始变黄后点TLC板确定反应程度，待确定反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温；说明书CN104072557A4/4页62）0下，在步骤1）的黄色液体中分批加入380MG硼氢化钠和420MG氯化锂，置于室温下反应1小时；3）步骤2）反应结束后加入5ML乙酸乙酯，室温继续反应60分钟，将反应液旋干，再加入5ML乙酸乙酯和5ML体积分数为10的醋酸水溶液，搅拌后得到大量黄色固体，抽滤得到。
16、粗产物木蝴蝶苷A；4）将粗产物用10ML甲醇进行重结晶后，抽滤得到淡黄色固体颗粒062G，收率为718。0020将实施例中所得的淡黄色固体进行氢谱1HNMR、碳谱13CNMR、高分辨率质谱及高效液相色谱HPLC测定，确定为木蝴蝶苷A，其含量均大于99，相关测定数据如下1HNMR400MHZ，DMSOD61257S,1H,859S,1H,808D,2H,J80HZ,757763M,3H,704D,2H,J160HZ,542D,1H,J40HZ,516D,1H,J40HZ,511D,1H,J40HZ,502D,1H,J80HZ,468T,1H,J40HZ,374378M,1H,348352M,2H,318324M,1H。002113CNMR100MHZ，DMSOD61831,1640,1521,1497,1470,1325,1313,1311,1296,1269,1066,1052,1015,948,778,764,737,702,612。0022HRMSESICALCDFORC21H19O104310984MH,FOUND4310973。0023以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。说明书CN104072557A1/1页7图1说明书附图CN104072557A。