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1、10申请公布号CN104193796A43申请公布日20141210CN104193796A21申请号201410445537922申请日20140904C07J71/00200601A61K31/7048200601A61P35/0220060171申请人南京标科生物科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边东108号1幢701室72发明人张金芳杨存54发明名称槲果素6的制备方法及其在抗白血病药物中的应用57摘要本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及槲果素6的制备方法及其在抗白血病药物中的应用。制备方法包括以下步骤（1）取埃及槲果的种子粗粉，90的乙醇溶液连续。
2、逆流超声提取，得到提取液；（2）将提取液浓缩，再经氧化铝柱层析；（3）制备型液相色谱分离；（4）丙酮重结晶，得到高纯度的槲果素6结晶产品。采用本发明制备方法，工艺操作简便、得率高，污染小，适合高纯度槲果素6的生产。槲果素6具有抗肿瘤作用，药理实验表明槲果素6在抗肿瘤方面有很好的效果，尤其是对人淋巴细胞白血病P388效果更佳，可用于制备抗白血病药物。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104193796ACN104193796A1/1页21槲果素6的制备方法，其特征在于包括以下步骤（1）提取取埃及槲果的种。
3、子粉碎成粗粉，加入90乙醇溶液，65下进行连续逆流超声提取，得到乙醇提取液；（2）氧化铝柱层析上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿甲醇混合溶液洗脱，薄层检测，收集槲果素6流分，浓缩干燥得到槲果素6粗品；（3）制备型液相色谱分离上述粗品采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集槲果素6组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得槲果素6粗晶；（4）重结晶将槲果素6粗晶用丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度槲果素6结晶。2根据权利要求1所述的槲果素6的制备方法，其特征在于步骤（1）所述乙醇溶液用量为药材的1012倍（V/W）。3根据权利要求1所述的槲果素6的制备方法，其特征在于步骤（1）所述超。
4、声频率为70100KHZ。4根据权利要求1所述的槲果素6的制备方法，其特征在于步骤（1）所述提取时间为60100MIN。5根据权利要求1所述的槲果素6的制备方法，其特征在于步骤（2）所述氧化铝为120目，氯仿甲醇体积比为21，用量为柱体积的6倍。6根据权利要求1所述的槲果素6的制备方法，其特征在于步骤（3）所述制备型液相色谱的流动相为乙腈02乙二胺水溶液，体积比为3367。7根据权利要求1所述的槲果素6的制备方法，其特征在于步骤（3）所述紫外检测波长为254NM。8根据权利要求1所述的槲果素6的制备方法，其特征在于步骤（4）所述丙酮为90100的丙酮水溶液。9根据权利要求18所述方法制备的槲果。
5、素6，在制备抗白血病药物中的应用。10根据权利要求9所述在制备抗白血病药物中的应用，其特征在于在制备防治淋巴性白血病和髓细胞白血病的应用。权利要求书CN104193796A1/3页3槲果素6的制备方法及其在抗白血病药物中的应用技术领域0001本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及槲果素6的制备方法及其在抗白血病药物中的应用。背景技术0002槲果素6（BALANITIN6），是从槲果科BALANITACEAE埃及槲果BALANITESAEGYPTICADEL种子中分离出的一种甾体皂苷类化合物，分子式为C45H72O17，分子量为88505，结构式为药理研究表明，槲果素6具有细胞抑制。
6、活性。对小鼠淋巴细胞白血病P388的ED50为021G/ML。0003白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。克隆性白血病细胞因为增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织中大量增殖累积，并浸润其他组织和器官，同时正常造血受抑制。临床可见不同程度的贫血、出血、感染发热以及肝、脾、淋巴结肿大和骨骼疼痛。据报道，我国各地区白血病的发病率在各种肿瘤中占第六位。发明内容0004为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种槲果素6的制备方法及其在抗白血病药物中的应用。0005为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案槲果素6的制备方法，其特征在于包括以下步骤（1）提取取埃及槲果的种子粉。
7、碎成粗粉，加入90乙醇溶液，65下进行连续逆流超声提取，得到乙醇提取液；（2）氧化铝柱层析上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿甲醇混合溶液洗脱，薄层检测，收集槲果素6流分，浓缩干燥得到槲果素6粗品；（3）制备型液相色谱分离上述粗品采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，说明书CN104193796A2/3页4收集槲果素6组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得槲果素6粗晶；（4）重结晶将槲果素6粗晶用丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度槲果素6结晶。0006步骤（1）所述乙醇溶液用量为药材的1012倍（V/W）。0007步骤（1）所述超声频率为70100KHZ。0008步骤（1）所述提取。
8、时间为60100MIN。0009步骤（2）所述氧化铝为120目，氯仿甲醇体积比为21，用量为柱体积的6倍。0010步骤（3）所述制备型液相色谱的流动相为乙腈02乙二胺水溶液，体积比为3367。0011步骤（3）所述紫外检测波长为254NM。0012步骤（4）所述丙酮为90100的丙酮水溶液。0013所述制备的槲果素6，在制备抗白血病药物中的应用，尤其在制备防治淋巴性白血病和髓细胞白血病的应用。0014所述制备的槲果素6，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。0015采用本法制备槲果素6，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且。
9、低污染；添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。0016下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施方式0017实施例1槲果素6的制备取埃及槲果的种子1KG，粉碎成粗粉，从连续逆流超声提取设备头部进料口进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入口加入10倍90乙醇溶液，65下进行连续逆流超声提取60MIN，超声频率为80KHZ，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（120目）拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿甲醇（21）混合溶液洗脱，薄层检测，收集槲果素6流分，浓缩干燥得到槲果素6粗品。以乙腈02乙二胺水溶液为流动相，体积比为。
10、3367，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10M，柱长为15CM、直径为4CM，将粗品加入流动相至刚好溶解，溶解后的溶液经045M微滤膜过滤，得到样品溶液，六通阀进样，进样体积为25ML，控制流速为50ML/MIN，紫外在线检测，检测波长为254NM，收集目标成分，减压回收试剂得槲果素6粗晶，用丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度槲果素6结晶，经HPLC检测，纯度972。0018实施例2槲果素6的其在抗白血病药物中的应用1、材料动物昆明种小鼠，雌雄各半性，体重202G，由南京中医药大学提供。0019细胞株HL60（人髓原细胞白血病）细胞株，由中国科学院上海药物研究所提供。00202、方法在含有10胎。
11、牛血清的RPMI1640培养基中，将被试细胞调成密度为2104细胞/ML。说明书CN104193796A3/3页5将上述细胞株悬液接种于96孔培养板，每孔50L，置于饱和湿度、37和5CO2培养箱中培养24小时。分别加入溶剂对照01二甲基亚砜、阳性对照顺铂（DDP）以及不同浓度单体化合物的二甲亚砜溶液各50L，每组设3个复孔。培养72小时，于培养结束前4小时，各培养孔加入5MG/ML四唑翁盐MTT10L，置于饱和湿度、37和5CO2培养箱中培养4小时，每孔中加入150L二甲亚砜，振荡溶解生成MTT晶体甲臜，用酶标仪测570NMOD值，细胞存活率由样品OD值对于对照品OD值的比值计算。其中，槲果素6对HL60细胞的半数抑制浓度（IC50）有剂量效应曲线得到。00213、结果实现结果（见表1）本发明槲果素6对HL60细胞的生长有明显的抑制作用，其对HL60细胞的生长抑制活性强于阳性对照顺铂（DDP），说明槲果素6具有极佳的急性髓原细胞白血病的活性，在制备抗白血病药物中有良好的应用前景。0022表1本发明槲果素6对HL60细胞的抑制作用（N10，S）组别IC50（M）空白对照组阳性对照组6318槲果素6组5021说明书CN104193796A。