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1、(10)申请公布号 CN 103548997 A (43)申请公布日 2014.02.05 CN 103548997 A (21)申请号 201310514231.X (22)申请日 2013.10.25 A23C 9/13(2006.01) A23F 3/14(2006.01) (71)申请人 刘冬 地址 246003 安徽省安庆市经济技术开发区 天柱山东路 99 号 (72)发明人 刘冬 毕璋友 叶明 何清清 (74)专利代理机构 安徽省合肥新安专利代理有 限责任公司 34101 代理人 乔恒婷 (54) 发明名称 一种茯砖茶酸奶及其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种茯砖茶酸奶及其。
2、制备方 法， 其中茯砖茶酸奶的原料由组份 A、 组份 B 和组 份C构成， 其中组份A和组份B按质量百分比构成 为 ： 组份 A ： 鲜奶或复原乳 85-91%， 低聚异麦芽糖 1.0-2%， 低聚果糖 3-4%， 大豆低聚糖 0.5-1%， 燕麦 粉 0.01-0.05% ； 组份 B ： 茯砖茶茶叶 2-10% ； 组份 C ： 乳酸菌酸奶发酵剂， 接种量为 2.0g/L。本发明 茯砖茶酸奶具有良好的抗氧化效果， 在体外可以 不同程度的清除 ABTS 自由基、 DPPH 自由基、 OH 自 由基、 抑制脂质过氧化和鳌合 Fe2+。本发明茯砖茶 酸奶丰富了功能酸奶的品种， 并提高了酸奶的抗 。
3、氧化活性。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 9 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书9页 (10)申请公布号 CN 103548997 A CN 103548997 A 1/1 页 2 1. 一种茯砖茶酸奶， 其特征在于 ： 所述茯砖茶酸奶的原料由组份 A、 组份 B 和组份 C 构成， 其中组份 A 和组份 B 按质量百 分比构成为 ： 组份 A ： 鲜奶或复原乳 85-91%， 低聚异麦芽糖 1.0-2%， 低聚果糖 3-4%， 大豆低聚糖 0.5-1%， 燕麦粉 0.01-0.05% ； 组份 B ： 茯砖茶茶叶 2-。
4、10% ； 组份 C ： 乳酸菌酸奶发酵剂， 接种量为 2.0g/L。 2. 根据权利要求 1 所述的茯砖茶酸奶， 其特征在于 ： 所述乳酸菌酸奶发酵剂由德氏乳杆菌保加利亚亚种、 嗜热链球菌、 嗜酸乳杆菌和双歧 杆菌按质量比 1:1:1:1 的比例组成。 3.一种权利要求1或2所述的茯砖茶酸奶的制备方法， 包括混料和发酵各单元过程， 其 特征在于 ： 所述混料是将组份 A 中各原料按配比量混合均匀， 在 55-60、 18-20MPa 下均质 12-15 分钟， 然后加入茯砖茶茶叶， 杀菌、 过滤后冷却至 42得混合乳液 ； 所述发酵是向所述混合乳液中接种乳酸菌酸奶发酵剂， 接种量为 2.0g。
5、/L， 在 40-42 发酵至 pH 为 4.5-4.7， 再于 6冷藏 12-24 小时， 即得茯砖茶酸奶。 4. 根据权利要求 3 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述杀菌是在 85-95保温 25 分钟 或在 95-100保温 15 分钟。 5. 根据权利要求 3 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述过滤是过无菌洁净的 8 层纱布。 权 利 要 求 书 CN 103548997 A 2 1/9 页 3 一种茯砖茶酸奶及其制备方法 一、 技术领域 0001 本发明涉及一种功能型发酵乳品， 具体地说是一种茯砖茶酸奶及其制备方法。 二、 背景技术 0002 酸奶是由嗜热链球菌、 保加利亚乳。
6、杆以及菌嗜酸乳杆菌、 双歧杆菌等其他益生菌 发酵生产的富含丰富营养成分的乳制品。酸奶具有细腻均匀的组织状态和良好的风味， 不 仅含有丰富的钙、 蛋白质、 核黄素和维生素等营养物质， 而且还含有大量对人体健康有益的 益生菌。酸奶具有平衡肠道菌群、 防治乳糖不耐症、 降低胆固醇吸收及预防心血管疾病、 抗 癌症抗衰老、 提高机体免疫力和促进钙的吸收等作用。 酸奶由于其独特的风味、 较高的营养 价值和良好的保健功能而深受消费者的青睐。随生活水平的提高， 人们对酸奶的功能性需 求日益增加， 促使功能酸奶的研究受到研究人员的关注。 在酸奶中添加益生元、 膳食纤维和 叶酸等功能因子， 可提高酸奶营养价值和强。
7、化酸奶的保健功能。还有报道表明在牛奶中添 加谷物、 果粒、 蔬菜汁或中药等成分， 接种乳酸菌发酵制成地保健型混合酸奶深受消费者的 喜爱。研究人员为提高酸奶的抗氧化活性， 葡萄多酚、 苹果多酚、 绿茶和红茶等被添加到酸 奶中。然而以茯砖茶为抗氧化功能原料制备功能型酸奶未见报道。 0003 茯砖茶属于后发酵型的黑茶， 经杀青、 揉捻、 渥堆、 干燥四个初制工序加工而成。 茯 砖茶在加工中产生的一种独特的金黄色颗粒， 科研报道是优势菌株 “冠突散囊菌” ， 俗称 “金 花” 。茯砖茶的饮用历史悠久。它通过古丝绸之路被源源不断运往中国的青藏高原、 蒙古高 原等西北地区， 以及俄罗斯、 中东、 英国等国。
8、家和地区， 因其具有抗氧化、 降脂减肥改善人体 脂肪代谢， 并具有潜在的治疗心血管疾病和 II 型糖尿病的功效而深受人们的喜爱。研究人 员对茯砖茶加工过过程中的儿茶素、 黄酮类、 茶多酚、 氨基酸等化学成分和生物活性进行了 研究， 并发现茯砖茶具有抗氧化、 降血糖、 降血脂、 改善肠道菌群和酶活性等功能， 但用茯砖 茶为原料开发功能型发酵乳制品未有涉及。 三、 发明内容 0004 本发明旨在提供一种茯砖茶酸奶及其制备方法， 以茯砖茶茶叶为抗氧化功能因 子， 添加于鲜奶或复原乳中， 经杀菌冷却处理后， 接种乳酸菌发酵制备具有抗氧化活性的茯 砖茶酸奶， 以提高酸奶的抗氧化生物活性， 并丰富功能型酸。
9、奶的品种。 0005 本发明解决技术问题采用如下技术方案 ： 0006 本发明茯砖茶酸奶的原料由组份 A、 组份 B 和组份 C 构成， 其中组份 A 和组份 B 按 质量百分比构成为 ： 0007 组份 A ： 鲜奶或复原乳 85-91%， 低聚异麦芽糖 1.0-2%， 低聚果糖 3-4%， 大豆低聚糖 0.5-1%， 燕麦粉 0.01-0.05% ； 0008 组份 B ： 茯砖茶茶叶 2-10% ； 0009 组份 C ： 乳酸菌酸奶发酵剂， 常规市购， 接种量为 2.0g/L。 0010 所述乳酸菌酸奶发酵剂由德氏乳杆菌保加利亚亚种、 嗜热链球菌、 嗜酸乳杆菌和 说 明 书 CN 10。
10、3548997 A 3 2/9 页 4 双歧杆菌按质量比 1:1:1:1 的比例组成。 0011 本发明茯砖茶酸奶的制备方法， 包括混料和发酵各单元过程， 其特征在于 ： 0012 所述混料是将组份 A 中各原料按配比量混合均匀， 在 55-60、 18-20MPa 下均质 12-15 分钟， 然后加入茯砖茶茶叶， 杀菌、 过滤后冷却至 42得混合乳液 ； 0013 所述发酵是向所述混合乳液中接种乳酸菌酸奶发酵剂， 接种量为 2.0g/L， 在 40-42发酵至 pH 为 4.5-4.7， 再于 6冷藏 12-24 小时， 即得茯砖茶酸奶。 0014 所述杀菌是在 85-95保温 25 分钟或。
11、在 95-100保温 15 分钟。 0015 所述过滤是过无菌洁净的 8 层纱布。 0016 本发明原料中的茯砖茶是直接以茶叶的形式加入， 在混料的过程中茯砖茶中的有 效成分会溶出， 而茶叶会在过滤的步骤中排出体系。 0017 本发明制得的茯砖茶酸奶主要技术要求符合国家标准 GB 19302-2010 的相关规 定， 其中蛋白质含量 2.5%， 乳酸菌数 1107cfu/mL。 0018 【本发明茯砖茶酸奶抗氧化活性试验】 0019 1、 主要材料和设备 0020 本发明制备的茯砖茶酸奶 ； DPPH（分析纯， Sigma 公司） 、 邻菲啰啉 （分析纯， 广东汕 头西陇化工厂） ； H2O2。
12、（分析纯， 安徽宿州化学试剂厂） 、 SDS（分析纯， 天津市博迪化工有限 公司） 、 2- 硫代巴比妥酸 （生化试剂， 上海沪峰生化试剂有限公司） 、 ABTS（分析纯， Sigma 公 司） 、 FeCl2（分析纯， 合肥工业大学化学试剂厂） 、 菲洛嗪 （生化试剂， 上海沪宇生化试剂有限 公司） 、 磷酸氢二钾 （分析纯， 合肥工业大学化学试剂厂） 、 磷酸二氢钾 （分析纯， 合肥工业大 学化学试剂厂） 。 0021 752UV-Vis 分光光度计 （上海菁华科技仪器有限公司） 、 电子分析天平 （上海浦春计 量有限公司） 、 酸度计 （上海精密仪器仪表有限公司） 、 恒温数显水浴锅 （。
13、金坛市江南仪器厂） 等。 0022 2、 试验方法 0023 ABTS 自由基清除能力测定 ： 将 5mL 7mmol/L 的 ABTS 和 85L140mmol/L 过硫酸 钾混合， 在室温避光条件下， 静置过夜形成 ABTS 自由基储备液， 然后按 1:50 的比例用蒸馏 水稀释ABTS自由基储备液， 使其在30734nm波长下的吸光度为0.70.02， 得到ABTS 自 由基工作液。在 10mL 离心管中分别加茯砖茶酸奶 1mL 和 ABTS 自由基工作液 4mL， 以 1mL 蒸 馏水代替茯砖茶酸奶做对照， 室温 （25水浴） 避光反应 60min， 4000rpm 条件下离心 10m。
14、in， 取上清液于 734nm 测定吸光值。 0024 清除率 E（%） （A0 Ax） /A0100% （1） ； 0025 其中 A0为对照的吸光值， Ax为加茯砖茶酸奶测得的吸光值。 0026 DPPH自由基清除能力测定 ： 取8mL1.010-4mol/L DPPH乙醇溶液与1mL茯砖茶 酸奶混合， 充分震荡后室温下避光反应30min， 然后4000rpm条件下离心10min， 取上清液于 517nm处测吸光值。 空白对照组是将茯砖茶酸奶替换为体积浓度95%的乙醇溶液， 清除率计 算公式同公式 （1） 。 0027 羟基自由基 （OH） 清除能力测定 ： 取 1.5mL5l0-3mol。
15、/L 邻菲啰啉溶液于试管 中， 与2.0mL0.05mol/L pH值7.4的磷酸缓冲液混匀后， 加入1.0mL7.510-3mol/L的FeSO4 溶液， 每加一管立即混匀， 然后加入 1mL H2O2溶液 ( 质量浓度 0.1%)， 最后以蒸馏水补充至 说 明 书 CN 103548997 A 4 3/9 页 5 总体积为 10mL。反应液在 37水浴中保温 60min 后， 在 536nm 下测 A损伤。按照上述方法对 茯砖茶酸奶清除 OH 的作用进行试验， 加入茯砖茶酸奶样品 1mL， 然后再加入 lmL H2O2溶液 ( 质量浓度 0.1%)， 37水浴保温 60min 后在 400。
16、0rpm 条件下离心 10min， 取上清液在 536nm 下测吸光度值 A加样； 而不加茯砖茶酸奶和 H2O2溶液 ( 质量浓度 0.1%) 在 536nm 下测定得到 的吸光度值为 A未损伤。 OH 清除率 (%) 按照下式计算 ： 0028 0029 抑制脂质过氧化能力 ： 取 1mL 茯砖茶酸奶与 0.5mL10%(w/v) 的蛋黄匀浆 （用质 量浓度 1.15% 的 KCl 溶液配制成） 在试管中混合均匀， 加 2mL 蒸馏水、 1.5mL 冰醋酸 (20%， pH3.5) 和 1.5mL0.8%(w/v) 的 TBA 溶液 （含有 1.1% 的 SDS） ， 混合均匀后在 95水浴。
17、中保温 60min， 冷却至室温后添加 5mL 正丁醇， 4000rpm 离心 10min， 在 532nm 下测上清液的吸光度 值AT。 以1ml蒸馏水替代1ml茯砖茶酸奶作为空白样品， 按照上述方法同样操作， 并在532nm 下测定空白样品上清液的吸光度值 AC。 0030 0031 其中 ： AT为加茯砖茶酸奶测得的吸光度 ； AC为空白样品吸光度。 0032 Fe2+螯合能力 ： 取 10mL 茯砖茶酸奶与 0.5mL2mmol/L 的 FeCl2溶液混合均匀后 加入 2mL5mmol/L 的 Ferrozine 溶液， 混匀， 静置 20min 后， 于 4000rpm 离心 10m。
18、in， 562nm 波 长处测吸光度。以等量的蒸馏水代替茯砖茶酸奶作为空白对照组， 同法测吸光度。螯合率 按照下式 计算 ： 0033 0034 其中 ： A0为空白样品吸光度， A1为加茯砖茶酸奶测得的吸光度。 0035 3、 结果 0036 从表1可知在相同的冷藏阶段， 茯砖茶酸奶与空白对照组相比其清除ABTS自由基 的能力显著 （P0.05） 提高， 且随着茯砖茶的添加量增加而增加， 最大增幅为 66.5%。此外， 在 0-28 天的冷藏过程中茯砖茶酸奶清除 ABTS 自由基的能力基本稳定， 没有明显变化。类 似的现象在清除 DPPH 自由基的试验中也被观察到。与相同冷藏时期的对照组相比。
19、， 茯砖 茶酸奶清除 OH 自由基的能力有不同程度的增加， 最高增加了 68.5%， 这表明茯砖茶酸奶具 有较好的抗氧化功能。类似的结果在抑制脂质过氧化试验中也被观察到， 即在酸奶中添加 4%-10% 的茯砖茶能够显著 （P0.01） 提高其抑制脂质过氧化的效果。此外， 添加茯砖茶的酸 奶较对照组相比， 其螯合 Fe2+的能力有显著 (P0.01) 的提高， 最高约增加了 63%。 0037 表 1 茯砖茶酸奶抗氧化活性 0038 说 明 书 CN 103548997 A 5 4/9 页 6 0039 0040 注 ： 对照组为在相同条件下发酵制备的普通酸奶 （未添加茯砖茶） ； FZY2%、。
20、 FZY4%、 FZY6%、 FZY8%和 FZY10%分别表示添加了 2%-10% 的茯砖茶酸奶 ； 0041 a， A 分别表示添加茯砖茶的酸奶较相应行的对照组， 清除 ABTS 自由基的能力有显 著性 (P0.05) 和高度显著性 (P0.01) 差异 ； 0042 b， B 分别表示添加茯砖茶的酸奶较相应行的对照组， 清除 DPPH 自由基的能力有显 著性 (P0.05) 和高度显著性 (P0.01) 差异 ； 0043 c， C 分别表示添加茯砖茶的酸奶较相应行的对照组， 清除 OH 自由基的能力有显著 说 明 书 CN 103548997 A 6 5/9 页 7 性 (P0.05)。
21、 和高度显著性 (P0.01) 差异 ； 0044 d、 D 分别表示添加茯砖茶的酸奶较相应行的对照组， 抑制脂质过氧化的能力有显 著性 (P0.05) 和高度显著性 (P0.01) 差异 ； 0045 e、 E 分别表示添加茯砖茶的酸奶较相应行的对照组， 螯合 Fe2+的能力有显著性 (P0.05) 和高度显著性 (P0.01) 差异。 0046 以上结果表明， 本发明制备的抗氧化茯砖茶酸奶具有良好的抗氧化效果， 可以体 外清除 ABTS 自由基、 DPPH 自由基和 OH 自由基， 抑制脂质过氧化和鳌合 Fe2+。 四、 具体实施方式 0047 非限定实施方式叙述如下 ： 0048 本发明。
22、实施例中使用的乳酸菌酸奶发酵剂购自哈尔滨美华生物技术股份有限公 司， 茯砖茶茶叶购自安化怡清源茶业有限公司。 0049 实施例 1 ： 0050 1、 备料 0051 组份 A ： 鲜奶 91%， 低聚异麦芽糖 2%， 低聚果糖 3.95%， 大豆低聚糖 1%， 燕麦粉 0.05% ； 0052 组份 B ： 茯砖茶茶叶 2% ； 0053 组份 C ： 市售乳酸菌酸奶发酵剂， 由德氏乳杆菌保加利亚亚种、 嗜热链球菌、 嗜酸 乳 杆菌和双歧杆菌按质量比 1:1:1:1 的比例组成， 接种量为 2.0g/L。 0054 2、 制备 0055 a、 将组份 A 中各原料混匀， 在 55、 18MP。
23、a 下均质 15 分钟， 加入茯砖茶茶叶， 在 90保温 25 分钟杀菌， 用无菌纱布过滤后冷却至 42得混合乳液 ； 0056 b、 向所述混合乳液中接种乳酸菌酸奶发酵剂， 接种量为 2.0g/L， 在 40发酵至 pH 为 4.6， 再于 6冷藏 24 小时， 即得茯砖茶酸奶， 记为 FZY2%。其主要技术要求符合国家标准 GB 19302-2010 的相关规定， 其中蛋白质含量为 3.0%， 乳酸菌数为 7.8107cfu/mL。 0057 实施例 2 ： 0058 1、 备料 0059 组份 A ： 鲜奶 89%， 低聚异麦芽糖 2%， 低聚果糖 3.95%， 大豆低聚糖 1%， 燕麦。
24、粉 0.05% ； 0060 组份 B ： 茯砖茶茶叶 4% ； 0061 组份 C ： 市售乳酸菌酸奶发酵剂， 由德氏乳杆菌保加利亚亚种、 嗜热链球菌、 嗜酸 乳杆菌和双歧杆菌按质量比 1:1:1:1 的比例组成， 接种量为 2.0g/L。 0062 2、 制备 0063 a、 将组份 A 中各原料混匀， 在 55、 20MPa 下均质 13 分钟， 加入茯砖茶茶叶， 在 96保温 15 分钟杀菌， 用无菌纱布过滤后冷却至 42得混合乳液 ； 0064 b、 向所述混合乳液中接种乳酸菌酸奶发酵剂， 接种量为 2.0g/L， 在 42发酵至 pH 为 4.6， 再于 6冷藏 24 小时， 即得。
25、茯砖茶酸奶， 记为 FZY4%。其主要技术要求符合国家标准 GB 19302-2010 的相关规定， 其中蛋白质含量为 2.7%， 乳酸菌数为 8.1107cfu/mL。 0065 实施例 3 ： 说 明 书 CN 103548997 A 7 6/9 页 8 0066 1、 备料 0067 组份 A ： 鲜奶 87%， 低聚异麦芽糖 1.98%， 低聚果糖 4%， 大豆低聚糖 1%， 燕麦粉 0.02% ； 0068 组份 B ： 茯砖茶茶叶 6% ； 0069 组份 C ： 乳酸菌酸奶发酵剂， 由德氏乳杆菌保加利亚亚种、 嗜热链球菌、 嗜酸乳杆 菌和双歧杆菌按质量比 1:1:1:1 的比例组。
26、成， 接种量为 2.0g/L。 0070 2、 制备 0071 a、 将组份 A 中各原料混匀， 在 60、 20MPa 下均质 12 分钟， 加入茯砖茶茶叶， 在 96保温 15 分钟杀菌， 用无菌纱布过滤后冷却至 42得混合乳液 ； 0072 b、 向所述混合乳液中接种市售乳酸菌酸奶发酵剂， 接种量为 2.0g/L， 在 42发酵 至 pH 为 4.6， 再于 6冷藏 18 小时， 即得茯砖茶酸奶 FZY6%。其主要技术要求符合国家标准 GB19302-2010 的相关规定， 其中蛋白质含量为 2.6%， 乳酸菌数为 8.3107cfu/mL。 0073 实施例 4 ： 0074 1、 备。
27、料 0075 组份 A ： 鲜奶 85%， 低聚异麦芽糖 2%， 低聚果糖 3.95%， 大豆低聚糖 1%， 燕麦粉 0.05% ； 0076 组份 B ： 茯砖茶茶叶 8% ； 0077 组份 C ： 市售乳酸菌酸奶发酵剂， 由德氏乳杆菌保加利亚亚种、 嗜热链球菌、 嗜酸 乳杆菌和双歧杆菌按质量比 1:1:1:1 的比例组成， 接种量为 2.0g/L。 0078 2、 制备 0079 a、 将组份 A 中各原料混匀， 在 55、 18MPa 下均质 15 分钟， 加入茯砖茶茶叶， 在 90保温 25 分钟杀菌， 用无菌纱布过滤后冷却至 42得混合乳液 ； 0080 b、 向所述混合乳液中接种。
28、乳酸菌酸奶发酵剂， 接种量为 2.0g/L， 在 40发酵至 pH 为 4.6， 再于 6冷藏 24 小时， 即得茯砖茶酸奶 FZY8%。其主要技术要求符合国家标准 GB19302-2010 的相关规定， 其中蛋白质含量为 2.5%， 乳酸菌数为 8.7107cfu/mL。 0081 实施例 5 ： 0082 1、 备料 0083 组份 A ： 鲜奶 85%， 低聚异麦芽糖 2%， 低聚果糖 1.95%， 大豆低聚糖 1%， 燕麦粉 0.05% ； 0084 组份 B ： 茯砖茶茶叶 10% ； 0085 组份 C ： 市售乳酸菌酸奶发酵剂， 由德氏乳杆菌保加利亚亚种、 嗜热链球菌、 嗜酸 乳。
29、杆菌和双歧杆菌按质量比 1:1:1:1 的比例组成， 接种量为 2.0g/L。 0086 2、 制备 0087 a、 将组份 A 中各原料混匀， 在 56、 18MPa 下均质 15 分钟， 加入茯砖茶茶叶， 在 93保温 25 分钟杀菌， 用无菌纱布过滤后冷却至 42得混合乳液 ； 0088 b、 向所述混合乳液中接种乳酸菌酸奶发酵剂， 接种量为 2.0g/L， 在 41发酵至 pH 为 4.6， 再于 6冷藏 24 小时， 即得茯砖茶酸奶， 记为 FZY10%。其主要技术要求符合国家标准 GB 19302-2010 的相关规定， 其中蛋白质含量为 2.5%， 乳酸菌数为 8.6107cfu。
30、/mL。 0089 【本发明茯砖茶酸奶抗氧化活性试验】 说 明 书 CN 103548997 A 8 7/9 页 9 0090 1、 主要材料和设备 0091 本发明制备的茯砖茶酸奶 ； DPPH（分析纯， Sigma 公司） 、 邻菲啰啉 （分析纯， 广东汕 头西陇化工厂） ； H2O2（分析纯， 安徽宿州化学试剂厂） 、 SDS（分析纯， 天津市博迪化工有限 公司） 、 2- 硫代巴比妥酸 （生化试剂， 上海沪峰生化试剂有限公司） 、 ABTS（分析纯， Sigma 公 司） 、 FeCl2（分析纯， 合肥工业大学化学试剂厂） 、 菲洛嗪 （生化试剂， 上海沪宇生化试剂有限 公司） 、 磷。
31、酸氢二钾 （分析纯， 合肥工业大学化学试剂厂） 、 磷酸二氢钾 （分析纯， 合肥工业大 学化学试剂厂） 。 0092 752UV-Vis 分光光度计 （上海菁华科技仪器有限公司） 、 电子分析天平 （上海浦春计 量有限公司） 、 酸度计 （上海精密仪器仪表有限公司） 、 恒温数显水浴锅 （金坛市江南仪器厂） 等。 0093 2、 试验方法 0094 ABTS 自由基清除能力测定 ： 将 5mL7mmol/L 的 ABTS 和 85L140mmol/L 过硫酸 钾混合， 在室温避光条件下， 静置过夜形成 ABTS 自由基储备液， 然后按 1:50 的比例用蒸馏 水稀释 ABTS 自由基储备液， 。
32、使其在 30 734nm 波长下的吸光度为 0.70.02， 得到 ABTS 自 由基工作液。在 10mL 离心管中分别加茯砖茶酸奶 1mL 和 ABTS 自由基工作液 4mL， 以 1mL 蒸 馏水代替茯砖茶酸奶做对照， 室温 （25水浴） 避光反应 60min， 4000rpm 条件下离心 10min， 取上清液于 734nm 测定吸光值。 0095 清除率 E（%） （A0 Ax） /A0100% （1） ； 0096 其中 A0为对照的吸光值， Ax为加茯砖茶酸奶测得的吸光值。 0097 DPPH自由基清除能力测定 ： 取8mL1.010-4mol/L DPPH乙醇溶液与1mL茯砖茶 。
33、酸奶混合， 充分震荡后室温下避光反应30min， 然后4000rpm条件下离心10min， 取上清液于 517nm处测吸光值。 空白对照组是将茯砖茶酸奶替换为体积浓度95%的乙醇溶液， 清除率计 算公式同公式 （1） 。 0098 羟基自由基 （OH） 清除能力测定 ： 取 1.5mL5l0-3mol/L 邻菲啰啉溶液于试管 中， 与2.0mL0.05mol/L pH值7.4的磷酸缓冲液混匀后， 加入1.0mL7.510-3mol/L的FeSO4 溶液， 每加一管立即混匀， 然后加入 1mL H2O2溶液 ( 质量浓度 0.1%)， 最后以蒸馏水补充至 总体积为 10mL。反应液在 37水浴中。
34、保温 60min 后， 在 536nm 下测 A损伤。按照上述方法对 茯砖茶酸奶清除 OH 的作用进行试验， 加入茯砖茶酸奶样品 1mL， 然后再加入 lmL H2O2溶液 ( 质量浓度 0.1%)， 37水浴保温 60min 后在 4000rpm 条件下离心 10min， 取上清液在 536nm 下测吸光度值 A加样； 而不加茯砖茶酸奶和 H2O2溶液 ( 质量浓度 0.1%) 在 536nm 下测定得到 的吸光度值为 A未损伤。 OH 清除率 (%) 按照下式计算 ： 0099 0100 抑制脂质过氧化能力 ： 取 1mL 茯砖茶酸奶与 0.5mL10%(w/v) 的蛋黄匀浆 （用质 量浓。
35、度 1.15% 的 KCl 溶液配制成） 在试管中混合均匀， 加 2mL 蒸馏水、 1.5mL 冰醋酸 (20%， pH3.5) 和 1.5mL0.8%(w/v) 的 TBA 溶液 （含有 1.1% 的 SDS） ， 混合均匀后在 95水浴中保温 60min， 冷却至室温后添加 5mL 正丁醇， 4000rpm 离心 10min， 在 532nm 下测上清液的吸光度 值AT。 以1ml蒸馏水替代1ml茯砖茶酸奶作为空白样品， 按照上述方法同样操作， 并在532nm 说 明 书 CN 103548997 A 9 8/9 页 10 下测定空白样品上清液的吸光度值 AC。 0101 0102 其中 。
36、： AT为加茯砖茶酸奶测得的吸光度 ； AC为空白样品吸光度。 0103 Fe2+螯合能力 ： 取 10mL 茯砖茶酸奶与 0.5mL2mmol/L 的 FeCl2溶液混合均匀后 加入 2mL5mmol/L 的 Ferrozine 溶液， 混匀， 静置 20min 后， 于 4000rpm 离心 10min， 562nm 波 长处测吸光度。以等量的蒸馏水代替茯砖茶酸奶作为空白对照组， 同法测吸光度。螯合率 按照下式计算 ： 0104 0105 其中 ： A0为空白样品吸光度， A1为加茯砖茶酸奶测得的吸光度。 0106 3、 结果 0107 从表1可知在相同的冷藏阶段， 茯砖茶酸奶与空白对照组。
37、相比其清除ABTS自由基 的能力显著 （P0.05） 提高， 且随着茯砖茶的添加量增加而增加， 最大增幅为 66.5%。此外， 在 0-28 天的冷藏过程中茯砖茶酸奶清除 ABTS 自由基的能力基本稳定， 没有明显变化。类 似的现象在清除 DPPH 自由基的试验中也被观察到。与相同冷藏时期的对照组相比， 茯砖 茶酸奶清除 OH 自由基的能力有不同程度的增加， 最高增加了 68.5%， 这表明茯砖茶酸奶具 有较好的抗氧化功能。类似的结果在抑制脂质过氧化试验中也被观察到， 即在酸奶中添加 4%-10% 的茯砖茶能够显著 （P0.01） 提高其抑制脂质过氧化的效果。此外， 添加茯砖茶的酸 奶较对照组。
38、相比， 其螯合 Fe2+的能力有显著 (P0.01) 的提高， 最高约增加了 63%。 0108 表 1 茯砖茶酸奶抗氧化活性 0109 0110 说 明 书 CN 103548997 A 10 9/9 页 11 0111 注 ： 对照组为在相同条件下发酵制备的普通酸奶 （未添加茯砖茶） ； FZY2%、 FZY4%、 FZY6%、 FZY8%和 FZY10%分别表示添加了 2%-10% 的茯砖茶酸奶 ； 0112 a， A 分别表示添加茯砖茶的酸奶较相应行的对照组， 清除 ABTS 自由基的能力有显 著性 (P0.05) 和高度显著性 (P0.01) 差异 ； 0113 b， B 分别表示添。
39、加茯砖茶的酸奶较相应行的对照组， 清除 DPPH 自由基的能力有显 著性 (P0.05) 和高度显著性 (P0.01) 差异 ； 0114 c， C 分别表示添加茯砖茶的酸奶较相应行的对照组， 清除 OH 自由基的能力有显著 性 (P0.05) 和高度显著性 (P0.01) 差异 ； 0115 d、 D 分别表示添加茯砖茶的酸奶较相应行的对照组， 抑制脂质过氧化的能力有显 著性 (P0.05) 和高度显著性 (P0.01) 差异 ； 0116 e、 E 分别表示添加茯砖茶的酸奶较相应行的对照组， 螯合 Fe2+的能力有显著性 (P0.05) 和高度显著性 (P0.01) 差异。 0117 以上结果表明， 本发明制备的抗氧化茯砖茶酸奶具有良好的抗氧化效果， 可以体 外清除 ABTS 自由基、 DPPH 自由基和 OH 自由基， 抑制脂质过氧化和鳌合 Fe2+。 说 明 书 CN 103548997 A 11 。