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1、10申请公布号CN104212795A43申请公布日20141217CN104212795A21申请号201410503432422申请日20140926C12N15/1020060171申请人北京市水产科学研究所地址100068北京市丰台区角门路18号72发明人杨晓飞徐绍刚李文通袁丁杨贵强马峻峰74专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君54发明名称一种鱼类脑组织总RNA的提取方法57摘要本发明提供了一种鱼类脑组织总RNA的提取方法，具体为将鱼类脑组织经液氮速冻，TRIZOL裂解液处理后低温高速离心，经硫酸铵、氯仿正丁醇萃取后，加入异丙醇醋酸钠混合，混合液经RNA纯化吸。
2、附柱吸附纯化后，进行DNA酶处理，经洗涤而获得鱼类脑组织总RNA。本发明所述提取方法，可避免鱼脑组织中的脂类磷脂、糖脂和胆固醇和蛋白质等对RNA提取的影响，获得纯度稳定、完整性好、重复性高、无污染的RNA分离纯化方法。51INTCL权利要求书2页说明书6页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书6页附图1页10申请公布号CN104212795ACN104212795A1/2页21一种鱼类脑组织总RNA的提取方法，其特征在于，将鱼类脑组织经液氮速冻，TRIZOL裂解液处理后低温高速离心，经硫酸铵、氯仿正丁醇萃取后，加入异丙醇醋酸钠混合，混合液经RNA纯化吸附柱。
3、吸附纯化后，进行DNA酶处理，经洗涤而获得鱼类脑组织总RNA。2根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述TRIZOL裂解液使用前加入巯基乙醇和8羟基喹啉，使其在所述TRIZOL裂解液中的体积浓度分别为1025和010015。3根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述氯仿正丁醇混合液使用量为1/4TRIZOL体积。4根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述氯仿正丁醇混合液中氯仿与正丁醇的体积比为241。5根据权利要求14任一项所述的提取方法，其特征在于，所述硫酸铵的使用浓度为4MOL/L。6根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，经异丙醇醋酸钠沉淀时，异丙醇与醋酸钠的体积比为。
4、41。7根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述吸附纯化为将混合有异丙醇醋酸钠的混合液加入RNA纯化吸附柱，离心后经乙醇离心洗脱除杂，再经RNASEFREE水离心洗脱得到纯化后的RNA溶液。8根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，DNA酶处理后，对DNA酶进行灭活。9根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，包括以下步骤1取鱼脑组织，无菌RNASEFREE水清洗后放入液氮中速冻，超低温冻存；2将冻存样本转入含有TRIZOL裂解液的RNASEFREEEP管中，匀浆后置于冰中，超声破碎，离心，取上清；3加入硫酸铵溶液，振荡摇匀，离心，取上清；4加入氯仿和正丁醇混合液，振荡摇匀至均匀的乳白。
5、状絮状，室温静置，离心，取上清；5加入与步骤4混合液等体积的异丙醇醋酸钠混合液，振荡摇匀；6吸取步骤5得到的混合液至RNA纯化吸附柱中吸附，离心，弃废液；7向纯化吸附柱中加入预冷的乙醇，离心，弃废液；重复一次；8再次离心除杂弃废物后，将吸附柱晾干；9向吸附柱中加入RNASEFREE水，离心，弃吸附柱；10加入RNASEFREEDNASE缓冲液、RNASEFREEDNA酶、RNA酶抑制剂和RNASEFREE水，处理4050MIN，得到DNA酶处理液；11加入乙二胺四乙酸加热处理，随后依次加入RNASEFREE水、醋酸钠和预冷的无水乙醇，混匀后放置1525MIN，离心，弃上清；12用预冷的乙醇洗涤。
6、沉淀，离心，弃上清，室温封闭静置510MIN，晾干，加入RNASEFREE水或05的SDS溶液充分溶解，80保存。10根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，包括以下步骤1用手术工具取6080MG鱼脑组织，无菌RNASEFREE水清洗后迅速放入液氮中速冻，80超低温冻存；权利要求书CN104212795A2/2页32将冻存样本迅速转入含有1MLTRIZOL裂解液的RNASEFREEEP管中，使用RNASEFREE电动匀浆器匀浆，将EP管放置于冰中，超声破碎810S，间隔1520S，超声破碎810S，1700019000G4离心10MIN，取上清；3加入500L4MOL/L硫酸铵溶液，振荡摇匀。
7、，50007000G4离心35MIN，吸上清液至离心管B中；所述硫酸铵溶液的PH55；4加入氯仿和正丁醇混合液350400L，振荡摇匀至均匀的乳白状絮状，室温静置5MIN，12000G4离心10MIN，取上清；所述氯仿和正丁醇混合液中氯仿与正丁醇的体积比为241；5加入与步骤4混合液等体积的异丙醇醋酸钠混合液，振荡摇匀20放置60MIN；所述异丙醇醋酸钠混合液中异丙醇与醋酸钠的体积比为41，醋酸钠浓度2MOL/L，所述醋酸钠溶液的PH52；6吸取步骤5得到的混合液700L至RNA纯化吸附柱中，12000G4离心1MIN，倒掉收集管中废液；7向纯化吸附柱中加入500LRNASEFREE75的已预。
8、冷乙醇，静置1MIN，12000G4离心1MIN，倒掉收集管中废液；重复一次；812000G4离心2MIN，将吸附柱置于洁净RNASEFREE离心管中，室温封闭静置510MIN，晾干；9向吸附柱中加入2022LRNASEFREE水，室温封闭静置2MIN，12000G4离心1MIN，弃吸附柱；10加入5L的RNASEFREEDNASE缓冲液、2L的RNASEFREEDNA酶、1L的RNA酶抑制剂和22LRNASEFREE水，37处理4050MIN，得到DNA酶处理液；11加入25L浓度为05MOL/L乙二胺四乙酸，混匀7882加热处理3MIN，随后依次加入RNASEFREE水475L、10L浓度。
9、为35MOL/L醋酸钠和250L已预冷的无水乙醇，混匀后80放置1525MIN，12000G4离心10MIN，弃上清；12用75已预冷的乙醇洗涤沉淀，12000G4离心5MIN，弃上清，室温封闭静置510MIN，晾干，加入RNASEFREE水或05的SDS溶液2030L充分溶解，80保存。权利要求书CN104212795A1/6页4一种鱼类脑组织总RNA的提取方法技术领域0001本发明涉及鱼类总RNA的提取，具体地说，涉及一种鱼类脑组织总RNA的提取方法。背景技术0002总RNA分离纯化技术是分子生物学研究技术的基础，从组织中提取纯度稳定、完整性好、重复性高、无污染的总RNA的分离纯化方法，是。
10、决定后续实验结果质量的关键，一些特定的部位使用通用的RNA分离纯化方法，往往不能满足要求，需要相应的处理与提取制备方法。0003鱼类脑组织结构类型基本相同，不同种类成分含量上略有差异，但大体上相近，主要成分是脂类磷脂、糖脂、胆固醇和蛋白质，采用常规RNA分离纯化方法，在抽提的过程中脂类不易去除，且易形成蛋白污染，鱼脑组织单位细胞RNA含量相对较少，采样和操作过程中极易造成RNA降解而使提取失败。诸多问题，使鱼类脑组织总RNA难以稳定的分离和纯化。0004目前，有针对性的分离纯化鱼脑组织总RNA的方法较少，用传统方法提取的鱼脑组织总RNA含量少、稳定性差、容易污染，无法满足后续实验的要求。发明内。
11、容0005为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种适用于鱼类脑组织总RNA的提取方法。0006为了实现本发明目的，本发明采用如下技术方案0007一种鱼类脑组织总RNA的提取方法，具体为将鱼类脑组织经液氮速冻，TRIZOL裂解液处理后低温高速离心，经硫酸铵、氯仿正丁醇萃取后，加入异丙醇醋酸钠混合，混合液经RNA纯化吸附柱吸附纯化后，进行DNA酶处理，经洗涤而获得鱼类脑组织总RNA。0008进一步地，所述TRIZOL裂解液使用前加入巯基乙醇和/或8羟基喹啉，使其在所述TRIZOL裂解液中的体积浓度分别为1025和010015。由于TRIZOL裂解液本身含有010的8羟基喹啉，因此也可不。
12、再加入8羟基喹啉。但为了更好的抑制内源RNA酶活性，减少RNA的降解，还可有效的排除核蛋白、色素等物质的干扰，在TRIZOL裂解液使用前加入0058羟基喹啉，使其在TRIZOL裂解液中的体积浓度达到015。0009进一步地，所述氯仿正丁醇混合液使用量为1/4TRIZOL体积。0010进一步地，所述氯仿正丁醇混合液中氯仿与正丁醇的体积比为241。0011作为优选，所述硫酸铵的使用浓度为4MOL/L。，0012进一步地，经异丙醇醋酸钠沉淀时，异丙醇与醋酸钠的体积比为41。0013进一步地，所述吸附纯化具体为将混合有异丙醇醋酸钠的混合液加入RNA纯化吸附柱，离心后经乙醇离心洗脱除杂，再经RNASEF。
13、REE水离心洗脱得到纯化后的RNA溶液。0014进一步地，DNA酶处理后，对DNA酶进行灭活。说明书CN104212795A2/6页50015进一步地，所述提取方法具体包括以下步骤00161取鱼脑组织，无菌RNASEFREE水清洗后放入液氮中速冻，超低温冻存；00172将冻存样本转入含有TRIZOL裂解液的RNASEFREEEP管中，匀浆后置于冰中，超声破碎，离心，取上清；00183加入硫酸铵溶液，振荡摇匀，离心，取上清；00194加入氯仿和正丁醇混合液，振荡摇匀至均匀的乳白状絮状，室温静置，离心，取上清；00205加入与步骤4混合液等体积的异丙醇醋酸钠混合液，振荡摇匀；00216吸取步骤5得。
14、到的混合液至RNA纯化吸附柱中吸附，离心，弃废液；00227向纯化吸附柱中加入预冷的乙醇，离心，弃废液；重复一次；00238再次离心除杂弃废物后，将吸附柱晾干；00249向吸附柱中加入RNASEFREE水，离心，弃吸附柱；002510加入RNASEFREEDNASE缓冲液、RNASEFREEDNA酶、RNA酶抑制剂和RNASEFREE水，处理4050MIN，得到DNA酶处理液；002611加入乙二胺四乙酸加热处理，随后依次加入RNASEFREE水、醋酸钠和预冷的无水乙醇，混匀后放置1525MIN，离心，弃上清；002712用预冷的乙醇洗涤沉淀，离心，弃上清，室温封闭静置510MIN，晾干，加入。
15、RNASEFREE水或05的SDS溶液充分溶解，80保存。0028更进一步地，所述提取方法具体包括以下步骤00291用手术工具取6080MG鱼脑组织，无菌RNASEFREE水清洗后迅速放入液氮中速冻，80超低温冻存；00302将冻存样本迅速转入含有1MLTRIZOL裂解液的RNASEFREEEP管中，使用RNASEFREE电动匀浆器匀浆，将EP管放置于冰中，超声破碎810S，间隔1520S，超声破碎810S，1700019000G4离心10MIN，取上清；00313加入500L4MOL/L硫酸铵溶液，振荡摇匀，50007000G4离心35MIN，吸上清液至离心管B中；所述硫酸铵溶液的PH55；。
16、00324加入氯仿和正丁醇混合液350400L，振荡摇匀至均匀的乳白状絮状，室温静置5MIN，12000G4离心10MIN，取上清；所述氯仿和正丁醇混合液中氯仿与正丁醇的体积比为241；00335加入与步骤4混合液等体积的异丙醇醋酸钠混合液，振荡摇匀20放置60MIN；所述异丙醇醋酸钠混合液中异丙醇与醋酸钠的体积比为41，醋酸钠浓度2MOL/L，所述醋酸钠溶液的PH52；00346吸取步骤5得到的混合液700L至RNA纯化吸附柱中，12000G4离心1MIN，倒掉收集管中废液；00357向纯化吸附柱中加入500LRNASEFREE75的已预冷乙醇，静置1MIN，12000G4离心1MIN，倒掉。
17、收集管中废液；重复一次；0036812000G4离心2MIN，将吸附柱置于洁净RNASEFREE离心管中，室温封闭静置510MIN，晾干；00379向吸附柱中加入2022LRNASEFREE水，室温封闭静置2MIN，12000G4离说明书CN104212795A3/6页6心1MIN，弃吸附柱；003810加入5L的RNASEFREEDNASE缓冲液、2L的RNASEFREEDNA酶、1L的RNA酶抑制剂和22LRNASEFREE水，37处理4050MIN，得到DNA酶处理液；003911加入25L浓度为05MOL/L乙二胺四乙酸，混匀7882加热处理3MIN，随后依次加入RNASEFREE水4。
18、75L、10L浓度为35MOL/L醋酸钠和250L已预冷的无水乙醇，混匀后80放置1525MIN，12000G4离心10MIN，弃上清；004012用75已预冷的乙醇洗涤沉淀，12000G4离心5MIN，弃上清，室温封闭静置510MIN，晾干，加入RNASEFREE水或05的SDS溶液2030L充分溶解，80保存。0041本发明的有益效果在于0042本发明提供一种鱼类脑组织总RNA的提取方法，可避免鱼脑组织中的脂类磷脂、糖脂和胆固醇和蛋白质等对RNA提取的影响，获得纯度稳定、完整性好、重复性高、无污染的RNA分离纯化方法。0043本发明通过在TRIZOL中加入25的巯基乙醇和005的8羟基喹啉。
19、，可在裂解过程中有效抑制内源RNA酶活性，减少RNA的降解，还可有效的排除核蛋白、色素等物质的干扰。TRIZOL中加入巯基乙醇和8羟基喹啉，用来抑制RNA酶活性，本申请根据实验发现，在处理富含RNA酶的组织时，TRIZOL加入25的巯基乙醇和005的8羟基喹啉协同作用效果最好，可有效的抑制内源性RNA酶，并有效排除核蛋白和色素等的干扰。0044本发明将冷冻样本在TRIZOL中匀浆后，使用超声破碎进行处理，能够更好的裂解细胞，使RNA充分游离到液相中。液氮研磨法破碎样本，由于液氮极易挥发，研磨过程中要不断的向研钵中加入液氮，耗费时间长，操作不方便，有安全隐患，而对冻存样本进行电动匀浆，匀浆后再使。
20、用超声破碎，细胞破碎速度快，匀浆彻底，操作简单安全，缩短了处理时间，有效减少RNA的降解。0045本发明在TRIZOL裂解液处理后，将离心力增加至1700019000G，可有效沉降破碎细胞壁、杂质等。0046本发明在TRIZOL处理液中加入4MOL/L硫酸铵，可使蛋白脱水沉淀，有效去除提取过程中的蛋白污染。针对组织中蛋白含量较高，加入硫酸铵沉淀蛋白一次，硫酸铵沉淀蛋白的效率一般大于85，降低蛋白对后续实验的影响，再进行氯仿正丁醇抽提，可以充分去除蛋白。0047本发明使用氯仿与正丁醇混合液241，可提高蛋白、DNA和RNA的分离效果，保证RNA的纯度和完整性。常规提取过程中，抽提时使用氯仿或氯仿。
21、异戊醇混合物，使用量约为1/5TRIZOL体积，改用氯仿与正丁醇混合物，比例为241，使用量增加至1/4体积可以有效提高处理效率，利于水相、蛋白相和有机相的分离，且异戊醇的毒性较大，改用正丁醇可降低毒性，保护操作人员。0048本发明将常规方法中的异丙醇沉淀步骤改为使用异丙醇醋酸钠混合液异丙醇醋酸钠41沉淀，处理条件为20放置60MIN，沉淀RNA。在加入异丙醇同时加入醋酸钠，沉淀RNA的同时溶解多糖类物质，使它们有效分离。醋酸钠等高盐溶液可在提取过程中加入，用于去除多糖和析出RNA，一般加入的体积为10，浓度一般为3MOL/L终浓度03MOL/L，处理条件一般为20放置3小时，本申请根据实验发。
22、现在加入异丙醇阶说明书CN104212795A4/6页7段，醋酸钠加入量增加至20且浓度降低至2MOL/L终浓度04MOL/L，处理条件为20放置60MIN，可提高沉淀并溶解多糖类物质的效率，而DNA酶处理阶段醋酸钠浓度也增加至35MOL/L，可有效析出RNA。0049本发明使用RNA纯化吸附柱进行吸附和洗脱，可有效缩短提取时间，有效减少RNA的降解。0050本发明利用纯化吸附柱处理混合液，RNA容易富集于吸附膜上，可有效的提高总RNA产量。传统方法中，异丙醇处理，离心后的沉淀为总RNA，本发明将异丙醇醋酸钠处理液加入纯化吸附柱，离心后，RNA富集于吸附膜上，而残留的蛋白和脂肪等被有效的分离，。
23、从而达到纯化RNA的目的，同时提高了产量，且使用吸附柱时间短，可减少RNA的降解。0051本发明采用75乙醇清洗吸附膜，并在洗脱过程中将离心力增加至12000G，可提高清洗效果，有效去除残留的蛋白和脂肪。0052本发明引入DNA酶处理步骤，在DNA处理前，已经通过氯仿正丁醇分离，可去掉部分DNA片段，但并不彻底，加入DNA酶处理步骤，将消化时间延长至4050MIN，可提高DNA酶处理效率，更彻底的去除基因组DNA污染。DNA酶的失活使用7882热处理3MIN，使DNA酶失活更加彻底，利于后续的分离与纯化，相对于氯仿抽提法，缩短了处理时间，有效减少RNA在纯化中的降解。附图说明0053图1为本发。
24、明所述方法提取的鱼类脑组织总RNA的琼脂糖凝胶电泳图；0054图2为本发明所述方法提取的鱼类脑组织总RNA经反转录后，对ACTIN基因进行PCR扩增的琼脂糖凝胶电泳图。具体实施方式0055以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。0056实施例100571用手术工具取60MG鱼脑组织，无菌RNASEFREE无RNA酶水清洗后迅速放入液氮中速冻，超低温80冻存。00582将冻存样本迅速转入含有1MLTRIZOL裂解液的RNASEFREEEP管中，使用RNASEFREE电动匀浆器匀浆，将EP管放置于冰中，超声破碎8S，间隔15S，超声破碎8S，17000G4离心10MIN，吸上清至离心管。
25、A中。0059注TRIZOL裂解液TRIZOL的主要成分是苯酚，还包含异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、醋酸钠等，LIFETECHNOLOGIES公司，TRIZOL裂解液使用前加入25L巯基乙醇和05L的8羟基喹啉。00603向离心管A中加入500L4MOL/L硫酸铵PH55，振荡摇匀，5000G4离心3MIN，吸上清液至离心管B中。00614向离心管B中加入氯仿和正丁醇混合液氯仿正丁醇241350L混合液体积的1/4，振荡摇匀至均匀的乳白状絮状，室温静置5MIN，12000G4离心10MIN，吸取上清液至离心管C中。00625向离心管C中加入上清等体积的异丙醇醋酸钠混合液异丙醇醋酸钠41，说明书。
26、CN104212795A5/6页8醋酸钠浓度2MOL/L，振荡摇匀20放置60MIN。00636吸取混合液700L至RNA纯化吸附柱中EZ10SPINCOLUMN总RNA纯化吸附柱，吸附柱置于废液收集管中，BBI公司，12000G4离心1MIN，倒掉收集管中废液。00647向纯化吸附柱中加入500LRNASEFREE75的已预冷乙醇，静置1MIN，12000G4离心1MIN，倒掉收集管中废液。00658重复上述步骤，向纯化吸附柱中加入500LRNASEFREE75的已预冷乙醇，静置1MIN，12000G4离心1MIN，倒掉收集管中废液。0066912000G4离心2MIN，将吸附柱置于RNAS。
27、EFREE离心管D中，室温封闭静置510MIN，晾干。006710向吸附柱中加入20LRNASEFREE水，室温封闭静置2MIN，12000G4离心1MIN，弃吸附柱。006811向离心管D中加入5L的RNASEFREEDNASE缓冲液10DNASEIBUFFER，宝生物公司、2L的RNASEFREEDNA酶5U/LRNASEFREERECOMBINANTDNASEI，宝生物公司、1L的RNA酶抑制剂40U/LRECOMBINANTRNASEINHIBITOR，宝生物公司和22LRNASEFREE水，37处理4050MIN，得到DNA酶处理液。006912向DNA酶处理液中加入25L浓度为05。
28、MOL/LEDTA，混匀78加热处理3MIN，随后依次加入RNASEFREE水475L、10L浓度为35MOL/LRNASEFREE醋酸钠和250L已预冷的无水乙醇，混匀后80放置1525MIN，12000G4离心10MIN，弃上清。007013用75已预冷的乙醇洗涤沉淀，12000G4离心10MIN，弃上清，室温封闭静置5MIN，晾干，加入RNASEFREE水或05的SDS溶液20L充分溶解，80保存。0071实施例200721用手术工具取80MG鱼脑组织，无菌RNASEFREE无RNA酶水清洗后迅速放入液氮中速冻，超低温80冻存。00732将冻存样本迅速转入含有1MLTRIZOL裂解液的R。
29、NASEFREEEP管中，使用RNASEFREE电动匀浆器匀浆，将EP管放置于冰中，超声破碎10S，间隔20S，超声破碎10S，19000G4离心10MIN，吸上清至离心管A中。0074注TRIZOL裂解液TRIZOL的主要成分是苯酚，还包含异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、醋酸钠等，LIFETECHNOLOGIES公司，TRIZOL裂解液使用前加入25L巯基乙醇和05L的8羟基喹啉。00753向离心管A中加入500L4MOL/L硫酸铵PH55，振荡摇匀，7000G4离心5MIN，吸上清液至离心管B中。00764向离心管B中加入氯仿和正丁醇混合液氯仿正丁醇241400L混合液体积的1/4，振荡摇匀。
30、至均匀的乳白状絮状，室温静置5MIN，12000G4离心10MIN，吸取上清液至离心管C中。00775向离心管C中加入上清等体积的异丙醇醋酸钠混合液异丙醇醋酸钠41，醋酸钠浓度2MOL/L，振荡摇匀20放置60MIN。00786吸取混合液700L至RNA纯化吸附柱中EZ10SPINCOLUMN总RNA纯化吸附柱，吸附柱置于废液收集管中，BBI公司，12000G4离心1MIN，倒掉收集管中废液。00797向纯化吸附柱中加入500LRNASEFREE75的已预冷乙醇，静置1MIN，说明书CN104212795A6/6页912000G4离心1MIN，倒掉收集管中废液。00808重复上述步骤，向纯化吸。
31、附柱中加入500LRNASEFREE75的已预冷乙醇，静置1MIN，12000G4离心1MIN，倒掉收集管中废液。0081912000G4离心2MIN，将吸附柱置于RNASEFREE离心管D中，室温封闭静置10MIN，晾干。008210向吸附柱中加入22LRNASEFREE水，室温封闭静置2MIN，12000G4离心1MIN，弃吸附柱。008311向离心管D中加入5L的RNASEFREEDNASE缓冲液10DNASEIBUFFER，宝生物公司、2L的RNASEFREEDNA酶5U/LRNASEFREERECOMBINANTDNASEI，宝生物公司、1L的RNA酶抑制剂40U/LRECOMBIN。
32、ANTRNASEINHIBITOR，宝生物公司和22LRNASEFREE水，37处理4050MIN，得到DNA酶处理液。008412向DNA酶处理液中加入25L浓度为05MOL/LEDTA，混匀82加热处理3MIN，随后依次加入RNASEFREE水475L、10L浓度为35MOL/LRNASEFREE醋酸钠和250L已预冷的无水乙醇，混匀后80放置1525MIN，12000G4离心10MIN，弃上清。008513用75已预冷的乙醇洗涤沉淀，12000G4离心10MIN，弃上清，室温封闭静置10MIN，晾干，加入RNASEFREE水或05的SDS溶液30L充分溶解，80保存。0086本发明提取并。
33、纯化获得的鱼脑组织总RNA的琼脂糖凝胶电泳如图1所示，28S条带亮度是18S亮度的二倍，同时测得的鱼脑总RNA浓度为200300NG/L，同时吸光度OD260/OD280的比值稳定在1820之间，说明获得的总RNA纯度高、完整性佳、无DNA和蛋白污染。0087本发明提取后的鱼脑组织总RNA经反转录后，对ACTIN基因进行了PCR扩增，琼脂糖电泳凝胶检测结果如图2电泳条带完整、清晰、特异性好，说明此总RNA能满足后续的RTPCR、REALTIMERTPCR、NORTHERNBLOT、体外翻译和分子克隆等多种下游实验。0088虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。说明书CN104212795A1/1页10图1图2说明书附图CN104212795A10。