一种亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂培养基及其应用.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201410477910.9

申请日:

2014.09.18

公开号:

CN104212876A

公开日:

2014.12.17

当前法律状态:

公开

有效性:

审中

法律详情:

公开

IPC分类号:

C12Q1/06

主分类号:

C12Q1/06

申请人:

青岛润鑫伟业科贸有限公司

发明人:

王雪梅; 孟宪斌

地址:

266000 山东省青岛市市南区中国香港中路18号A栋804室

优先权:

专利代理机构:

北京市百伦律师事务所 11433

代理人:

姜莹

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内容摘要

本发明为微生物领域,特别涉及一种亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础,所述培养基的组分包括21g/L疱肉培养基、3.0g/L乳糖、1.54g/L亚硫酸氢钠、1.5g/L柠檬酸铁、0.88g/L磷酸二氢钾,pH值为6.9-7.1。所述疱肉培养基为每升疱肉培养基中含有蛋白胨20.0g、牛肉浸粉3.0g、酵母浸粉5.0g、可溶性淀粉1.5g、葡萄糖3g、枸橼酸钠5.8g、去氧胆酸钠0.33g、磷酸二氢钠2.0g。本发明培养基组方简单,制备操作方便,成本低,利于推广应用;菌生长迅速,变异率低;便于观察,分析。

权利要求书

1.  一种亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂培养基,其特征在于所述培养基的组分包括21g/L疱肉培养基、3.0g/L乳糖、1.54g/L亚硫酸氢钠、1.5g/L柠檬酸铁、0.88g/L磷酸二氢钾,pH值为7.5-7.7。

2.
  根据权利要求1所述的亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂培养基,其特征在于所述疱肉培养基为每升疱肉培养基中含有蛋白胨20.0g、牛肉浸粉3.0g、酵母浸粉5.0g、可溶性淀粉1.5g、葡萄糖3g、枸橼酸钠5.8g、去氧胆酸钠0.33g、磷酸二氢钠2.0g。

3.
  一种根据权利要求1所述的亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂培养基的应用,其特征在于用于产气荚膜梭菌的平板计数。

说明书

一种亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂培养基及其应用
技术领域
本发明为微生物领域,特别涉及一种亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂培养基及其应用。
背景技术
产气荚膜梭菌(C.perfringens)是临床上气性坏疽病原菌中最多见的一种梭菌,因能分解肌肉和结缔组织中的糖,产生大量气体,导致组织严重气肿,继而影响血液供应,造成组织大面积坏死,加之本菌在体内能形成荚膜,故名产气夹膜梭菌。
肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的细菌,在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力,是毒性最强的毒素之一。肉毒杆菌是一种致命病菌,在繁殖过程中分泌毒素,是毒性最强的蛋白质之一。军队常常将这种毒素用于生化武器。人们食入和吸收这种毒素后,神经系统将遭到破坏,出现头晕、呼吸困难和肌肉乏力等症状。
培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素,用于单种微生物培养和鉴定。培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在3~6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管,现在均改制成粉末。
培养基根据化学分类为天然培养基、组合培养基和半组合培养基;根据物理分类为液体培养基、固定培养基和脱水培养基;根据微生物分类为选择性培养基、鉴别培养基。
发明内容
本发明克服现有技术中的不足,提供一种亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂培养基及其应用。
本发明运用生物化学,微生物学及无机、有机、分析化学和荧光技术的原理,对不同的碳源、氮源、无机盐类、维生素、生长促进剂等诸类营养组分的组合进行筛选,对培养基的pH值、离子强度、氧化-还原电势、表面张力、气体环境等物化因子进行了比较,研究出了本发明的培养基。
本发明所采用的技术方案为:
一种亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础,所述培养基的组分包括21g/L疱肉培养基、3.0g/L乳糖、1.54g/L亚硫酸氢钠、1.5g/L柠檬酸铁、0.88g/L磷酸二氢钾,pH值为7.5-7.7。
在以上方案的基础上,所述疱肉培养基为每升疱肉培养基中含有蛋白胨20.0g、牛肉浸 粉3.0g、酵母浸粉5.0g、可溶性淀粉1.5g、葡萄糖3g、枸橼酸钠5.8g、去氧胆酸钠0.33g、磷酸二氢钠2.0g。
本发明还公开了所述的亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础的应用,用于产气荚膜梭菌的平板计数。
胰酪蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子;亚硫酸钠和柠檬酸铁用于检测硫化氢的产生,使菌落中心呈黑色;琼脂是培养基的凝固剂;多粘菌素B和磺胺嘧啶钠抑制非梭菌的细菌。
称取本品41.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,却至50℃时,每100ml培养基加入1支多粘菌素B硫酸盐溶液(1.2mg)和1支磺胺嘧啶钠溶液(12mg),混匀,倾入无菌平皿,备用。
本发明的有益效果:
1、培养基组方简单,制备操作方便,成本低,利于推广应用;
2、菌生长迅速,变异率低;
3、便于观察,分析。
具体实施方式
实施例1:
一种亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础,所述培养基的组分包括21g/L疱肉培养基、3.0g/L乳糖、1.54g/L亚硫酸氢钠、1.5g/L柠檬酸铁、0.88g/L磷酸二氢钾,pH值为7.5-7.7。
在以上方案的基础上,所述疱肉培养基为每升疱肉培养基中含有蛋白胨20.0g、牛肉浸粉3.0g、酵母浸粉5.0g、可溶性淀粉1.5g、葡萄糖3g、枸橼酸钠5.8g、去氧胆酸钠0.33g、磷酸二氢钠2.0g。
本发明还公开了所述的亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础的应用,用于产气荚膜梭菌的平板计数。
胰酪蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子;亚硫酸钠和柠檬酸铁用于检测硫化氢的产生,使菌落中心呈黑色;琼脂是培养基的凝固剂;多粘菌素B和磺胺嘧啶钠抑制非梭菌的细菌。
称取本品41.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,却至50℃时,每100ml培养基加入1支多粘菌素B硫酸盐溶液(1.2mg)和1支磺胺嘧啶钠溶液(12mg),混匀,倾入无菌平皿,备用。
在36±1℃培养18-24小时

质控菌株生长情况其它特征大肠埃希氏菌-/产气荚膜梭菌+++变黑

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1、10申请公布号CN104212876A43申请公布日20141217CN104212876A21申请号201410477910922申请日20140918C12Q1/0620060171申请人青岛润鑫伟业科贸有限公司地址266000山东省青岛市市南区中国香港中路18号A栋804室72发明人王雪梅孟宪斌74专利代理机构北京市百伦律师事务所11433代理人姜莹54发明名称一种亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂培养基及其应用57摘要本发明为微生物领域,特别涉及一种亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂基础,所述培养基的组分包括21G/L疱肉培养基、30G/L乳糖、154G/L亚硫酸氢钠、15G/L柠檬酸铁、088G。

2、/L磷酸二氢钾,PH值为6971。所述疱肉培养基为每升疱肉培养基中含有蛋白胨200G、牛肉浸粉30G、酵母浸粉50G、可溶性淀粉15G、葡萄糖3G、枸橼酸钠58G、去氧胆酸钠033G、磷酸二氢钠20G。本发明培养基组方简单,制备操作方便,成本低,利于推广应用;菌生长迅速,变异率低;便于观察,分析。51INTCL权利要求书1页说明书2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页10申请公布号CN104212876ACN104212876A1/1页21一种亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂培养基,其特征在于所述培养基的组分包括21G/L疱肉培养基、30G/L乳糖、154G/。

3、L亚硫酸氢钠、15G/L柠檬酸铁、088G/L磷酸二氢钾,PH值为7577。2根据权利要求1所述的亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂培养基,其特征在于所述疱肉培养基为每升疱肉培养基中含有蛋白胨200G、牛肉浸粉30G、酵母浸粉50G、可溶性淀粉15G、葡萄糖3G、枸橼酸钠58G、去氧胆酸钠033G、磷酸二氢钠20G。3一种根据权利要求1所述的亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂培养基的应用,其特征在于用于产气荚膜梭菌的平板计数。权利要求书CN104212876A1/2页3一种亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂培养基及其应用技术领域0001本发明为微生物领域,特别涉及一种亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂培养基及其应用。。

4、背景技术0002产气荚膜梭菌CPERFRINGENS是临床上气性坏疽病原菌中最多见的一种梭菌,因能分解肌肉和结缔组织中的糖,产生大量气体,导致组织严重气肿,继而影响血液供应,造成组织大面积坏死,加之本菌在体内能形成荚膜,故名产气夹膜梭菌。0003肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的细菌,在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力,是毒性最强的毒素之一。肉毒杆菌是一种致命病菌,在繁殖过程中分泌毒素,是毒性最强的蛋白质之一。军队常常将这种毒素用于生化武器。人们食入和吸收这种毒素后,神经系统将遭到破坏,出现头晕、呼吸困难和肌肉乏力等症状。0004培养基MEDIUM是供微生物、植物和动物组织生长和维持用。

5、的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐包括微量元素以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素,用于单种微生物培养和鉴定。培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基如组织培养基,较长时间的贮存,必须放在36的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管,现在均改制成粉末。0005培养基根据化学分类为天然培养基、组合培养基和半组合培养基;根据物理分类为液体培养基、固定培养基和脱水培养基;根据微生物分类为选择性培养基、鉴别培养基。发明内容0006本发。

6、明克服现有技术中的不足,提供一种亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂培养基及其应用。0007本发明运用生物化学,微生物学及无机、有机、分析化学和荧光技术的原理,对不同的碳源、氮源、无机盐类、维生素、生长促进剂等诸类营养组分的组合进行筛选,对培养基的PH值、离子强度、氧化还原电势、表面张力、气体环境等物化因子进行了比较,研究出了本发明的培养基。0008本发明所采用的技术方案为0009一种亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂基础,所述培养基的组分包括21G/L疱肉培养基、30G/L乳糖、154G/L亚硫酸氢钠、15G/L柠檬酸铁、088G/L磷酸二氢钾,PH值为7577。0010在以上方案的基础上,所述疱肉培养基。

7、为每升疱肉培养基中含有蛋白胨200G、牛肉浸粉30G、酵母浸粉50G、可溶性淀粉15G、葡萄糖3G、枸橼酸钠58G、去氧胆酸钠033G、磷酸二氢钠20G。说明书CN104212876A2/2页40011本发明还公开了所述的亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂基础的应用,用于产气荚膜梭菌的平板计数。0012胰酪蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子;亚硫酸钠和柠檬酸铁用于检测硫化氢的产生,使菌落中心呈黑色;琼脂是培养基的凝固剂;多粘菌素B和磺胺嘧啶钠抑制非梭菌的细菌。0013称取本品410G,加热溶解于1000ML蒸馏水中,分装,121高压灭菌15分钟,却至50时,每100ML培养基加入1支多粘菌。

8、素B硫酸盐溶液12MG和1支磺胺嘧啶钠溶液12MG,混匀,倾入无菌平皿,备用。0014本发明的有益效果00151、培养基组方简单,制备操作方便,成本低,利于推广应用;00162、菌生长迅速,变异率低;00173、便于观察,分析。具体实施方式0018实施例10019一种亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂基础,所述培养基的组分包括21G/L疱肉培养基、30G/L乳糖、154G/L亚硫酸氢钠、15G/L柠檬酸铁、088G/L磷酸二氢钾,PH值为7577。0020在以上方案的基础上,所述疱肉培养基为每升疱肉培养基中含有蛋白胨200G、牛肉浸粉30G、酵母浸粉50G、可溶性淀粉15G、葡萄糖3G、枸橼酸钠58。

9、G、去氧胆酸钠033G、磷酸二氢钠20G。0021本发明还公开了所述的亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂基础的应用,用于产气荚膜梭菌的平板计数。0022胰酪蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子;亚硫酸钠和柠檬酸铁用于检测硫化氢的产生,使菌落中心呈黑色;琼脂是培养基的凝固剂;多粘菌素B和磺胺嘧啶钠抑制非梭菌的细菌。0023称取本品410G,加热溶解于1000ML蒸馏水中,分装,121高压灭菌15分钟,却至50时,每100ML培养基加入1支多粘菌素B硫酸盐溶液12MG和1支磺胺嘧啶钠溶液12MG,混匀,倾入无菌平皿,备用。0024在361培养1824小时0025质控菌株生长情况其它特征大肠埃希氏菌/产气荚膜梭菌变黑说明书CN104212876A。

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