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1、10申请公布号CN104193763A43申请公布日20141210CN104193763A21申请号201410445588122申请日20140904C07D498/1820060171申请人南京标科生物科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边东108号1幢701室72发明人张金芳杨存54发明名称一种滑桃树新的分离纯化方法57摘要本发明涉及植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种滑桃树新的分离纯化方法。本发明的技术方案包括以下步骤将滑桃树种子粉碎，用饱和石灰水浸泡，浸提液浓缩成浸膏，再用乙醇回流提取，减压回收乙醇，通过大孔吸附树脂，乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩后通过氧化铝柱层。
2、析，乙酸乙酯乙醇混合溶液梯度洗脱，收集目标成分，减压回收试剂，放置沉淀，收集沉淀物用无水乙醇回流溶解，结晶，二氯甲烷丙酮重结晶得到产品。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104193763ACN104193763A1/1页21一种滑桃树新的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤（1）提取将原料药材粉碎，加入饱和石灰水浸泡48小时，然后用乙醇溶液回流提取，减压回收乙醇，得到提取浓缩液；（2）大孔树脂柱层析将提取浓缩液加水分散，再通过大孔吸附树脂吸附柱中，柱径高比为18120，室温下以3095乙醇梯度洗脱，。
3、收集滑桃树新洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，得乙醇洗脱液；（3）氧化铝柱层析将乙醇洗脱液加入氧化铝柱顶端，以乙酸乙酯乙醇混合溶液梯度洗脱，收集滑桃树新流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀；（4）重结晶将步骤（3）所得沉淀物用无水乙醇回流溶解，过滤，结晶，二氯甲烷丙酮重结晶得滑桃树新。2根据权利要求1所述的一种滑桃树新的分离纯化方法，其特征在于所述步骤（2）中3095乙醇梯度洗脱，先用3055乙醇洗脱，再用8095乙醇洗脱，收集8095乙醇洗脱液，洗脱流速为125BV/H，洗脱用量为36BV。3根据权利要求1所述的一种滑桃树新的分离纯化方法，其特征在于所述步骤（3）中氧化铝柱为中压柱，氧化铝为10。
4、0300目的中性氧化铝。4根据权利要求1所述的一种滑桃树新的分离纯化方法，其特征在于所述步骤（3）中乙酸乙酯乙醇溶液梯度洗脱按乙酸乙酯乙醇体积比10、11、13、15依次洗脱。5根据权利要求1所述的一种滑桃树新的分离纯化方法，其特征在于所述步骤（4）中二氯甲烷丙酮体积比为51。权利要求书CN104193763A1/3页3一种滑桃树新的分离纯化方法技术领域0001本发明属于植物有效成分提取技术领域，涉及一种滑桃树新的分离纯化方法。背景技术0002滑桃树新（TREWIASINE），分子式为C37H52CLN3O11，分子量为75029，MP173175，是从大戟科EUPHORBIACEAEISOT。
5、HECIUMSUBDIVERSOFORME滑桃树TREWIANUDIFLORAL种子中分离得到的一种生物碱类活性物质。实验研究表明，滑桃树新具有广泛的生理活性，25G/KG时，对小鼠艾氏癌的延命率为183，2510G/KG时，对P388白血病小鼠的治愈率为5675。对多种实验动物肿瘤如腹水型S180、肝癌、U14及LEWIS肺癌等均有明显疗效。对4种人体肿瘤细胞有明显细胞毒活性，尤以U937最为敏感，1G/ML时，抑制率90。0003目前尚未见滑桃树新的提取纯化方法方面的报道。发明内容0004本发明要解决的技术问题是提供一种滑桃树新的分离纯化方法，该方法能够提取分离得到高含量的滑桃树新晶体，方。
6、法简单可行、晶型好。0005本发明的分离纯化技术方案如下一种滑桃树新的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤（1）提取将原料药材粉碎，加入饱和石灰水浸泡48小时，然后用乙醇溶液回流提取，减压回收乙醇，得到提取浓缩液；（2）大孔树脂柱层析将提取浓缩液加水分散，再通过大孔吸附树脂吸附柱中，柱径高比为18120，室温下以3095乙醇梯度洗脱，收集滑桃树新洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，得乙醇洗脱液；（3）氧化铝柱层析将乙醇洗脱液加入氧化铝柱顶端，以乙酸乙酯乙醇混合溶液梯度洗脱，收集滑桃树新流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀；（4）重结晶将步骤（3）所得沉淀物用无水乙醇回流溶解，过滤，结晶，二氯甲烷丙酮。
7、重结晶得滑桃树新。0006所述步骤（2）中3095乙醇梯度洗脱，先用3055乙醇洗脱，再用8095乙醇洗脱，收集8095乙醇洗脱液，洗脱流速为125BV/H，洗脱用量为36BV。0007所述步骤（3）中氧化铝柱为中压柱，氧化铝为100300目的中性氧化铝。0008所述步骤（3）中乙酸乙酯乙醇溶液梯度洗脱按乙酸乙酯乙醇体积比10、11、13、15依次洗脱。0009所述步骤（4）中二氯甲烷丙酮体积比为51。0010本发明的有益效果是本发明采用大孔树脂和中压氧化铝柱层析结合，分离效果好，上样量大，生产周期短；通过无水乙醇结晶，二氯甲烷丙酮重结晶，所得产品晶型好；所用试剂毒性较低，是一种高效、低污染、。
8、低耗能的分离纯化滑桃树新的方法。说明书CN104193763A2/3页4具体实施方式0011下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。0012实施例1将滑桃树种子干燥、粉碎，取5KG投入提取罐中，加入5倍量饱和石灰水室温浸泡5H，然后加入4倍量75乙醇加热回流提取2次，每次2H，合并提取液，提取液减压回收乙醇，得到提取浓缩液，加水分散，通过大孔吸附树脂柱（柱径高比为110），室温条件下先用40乙醇洗脱，再用85乙醇洗脱，收集85乙醇洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，取200300目的中性氧化铝装柱，将乙醇洗脱浓缩液从顶端注入，加压条件下将乙酸乙酯乙醇混合溶液。
9、按体积比10、11、13、15依次注入柱中，收集滑桃树新流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀，滤出沉淀，用无水乙醇回流溶解，结晶，再以二氯甲烷丙酮（51）重结晶，干燥得滑桃树新576MG，含量957。0013实施例2将滑桃树种子干燥、粉碎，取5KG投入提取罐中，加入8倍量饱和石灰水室温浸泡6H，然后加入6倍量80乙醇加热回流提取3次，每次15H，合并提取液，提取液减压回收乙醇，得到提取浓缩液，加水分散，通过大孔吸附树脂柱（柱径高比为118），室温条件下先用50乙醇洗脱，再用80乙醇洗脱，收集85乙醇洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，取100200目的中性氧化铝装柱，将乙醇洗脱浓缩液从顶端注入，加压。
10、条件下将乙酸乙酯乙醇混合溶液按体积比10、11、13、15依次注入柱中，收集滑桃树新流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀，滤出沉淀，用无水乙醇回流溶解，结晶，再以二氯甲烷丙酮（51）重结晶，干燥得滑桃树新543MG，含量973。0014实施例3将滑桃树种子干燥、粉碎，取5KG投入提取罐中，加入10倍量饱和石灰水室温浸泡4H，然后加入3倍量65乙醇加热回流提取2次，每次15H，合并提取液，提取液减压回收乙醇，得到提取浓缩液，加水分散，通过大孔吸附树脂柱（柱径高比为120），室温条件下先用55乙醇洗脱，再用90乙醇洗脱，收集85乙醇洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，取100200目的中性氧化铝装柱，将。
11、乙醇洗脱浓缩液从顶端注入，加压条件下将乙酸乙酯乙醇混合溶液按体积比10、11、13、15依次注入柱中，收集滑桃树新流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀，滤出沉淀，用无水乙醇回流溶解，结晶，再以二氯甲烷丙酮（51）重结晶，干燥得滑桃树新572MG，含量959。0015实施例4将滑桃树种子干燥、粉碎，取5KG投入提取罐中，加入6倍量饱和石灰水室温浸泡8H，然后加入5倍量70乙醇加热回流提取3次，每次2H，合并提取液，提取液减压回收乙醇，得到提取浓缩液，加水分散，通过大孔吸附树脂柱（柱径高比为18），室温条件下先用30乙醇洗脱，再用95乙醇洗脱，收集85乙醇洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，取200300目的中性氧化铝装柱，将乙醇洗脱浓缩液从顶端注入，加压条件下将乙酸乙酯乙醇混合溶液按体积比10、11、13、15依次注入柱中，收集滑桃树新流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀，滤出沉淀，用无水乙醇回流溶解，结晶，再以二氯甲烷丙酮（51）重结晶，干燥得滑说明书CN104193763A3/3页5桃树新557MG，含量963。说明书CN104193763A。