一种浒苔寡糖禽畜饲料添加剂.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711412311.9 (22)申请日 2017.12.23 (71)申请人 青岛麦迪尔生物工程有限公司 地址 266000 山东省青岛市胶州市北京东 路时代国际中心5-1-402 (72)发明人 刘希军 (51)Int.Cl. A23K 10/14(2016.01) A23K 10/16(2016.01) (54)发明名称 一种浒苔寡糖禽畜饲料添加剂 (57)摘要 本发明提供一种浒苔寡糖禽畜饲料添加剂， 所述添加剂包括浒苔寡糖70-80份， 大蒜素10-15 份， 蒙脱石。

2、粉5-10份， 维生素C 5-10份。 浒苔寡糖 的制备过程如下： (1)新鲜浒苔晾干； (2)粉碎浒 苔； (3)水提浒苔； (4)醇提浒苔； (5)复合蛋白酶 酶解； (6)复合菌剂发酵； (7)冻干。 本发明操作简 单， 纯天然无污染， 可将浒苔变废为宝， 是一种实 现海洋废弃物高值化， 高质化利用的方式。 权利要求书1页 说明书4页 CN 108354062 A 2018.08.03 CN 108354062 A 1.一种浒苔寡糖禽畜饲料添加剂， 其特征在于： 其包括以下的成份： 浒苔寡糖70-80份， 大蒜素10-15份， 蒙脱石粉5-10份， 维生素C 5-10份。 2.根据权利要。

3、求1所述的一种浒苔寡糖禽畜饲料添加剂， 其特征在于： 主要成分浒苔寡 糖主要由以下步骤制备而成： （1） 新鲜浒苔晾干； (2)粉碎浒苔； (3)水提浒苔； (4) 醇提浒苔； (5)复合蛋白酶酶解； (6)复合菌剂发酵； (7)冻干。 3.根据权利要求2所述的浒苔寡糖禽畜饲料添加剂， 其特征在于： 步骤 （5） 中， 采用的复 合蛋白酶为中性蛋白酶与木瓜蛋白酶。 4.根据权利要求2所述的浒苔寡糖禽畜饲料添加剂， 其特征在于： 步骤 （6） 中， 采用的复 合菌剂为解淀粉芽孢杆菌或地衣芽胞杆菌。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108354062 A 2 一种浒苔寡糖禽畜饲料添加剂 。

4、技术领域 0001 本发明属于饲料添加剂技术领域， 涉及一种浒苔寡糖饲料添加剂。 背景技术 0002 浒苔是青岛等沿海城市夏天一道 “靓丽” 的风景线， 每年夏天大量繁殖的浒苔遮蔽 海水表面的阳光， 影响海底藻类的生长， 即便是死亡的浒苔也会消耗海水中的氧气， 影响海 水中的禽畜的生长； 还有研究表明， 浒苔分泌的化学物质很可能还会对其他海洋生物造成 不利影响， 同时浒苔的爆发也严重影响了城市的形象， 给旅游观光造成很大的经济影响。 0003 但是在浒苔中可溶性多糖和粗纤维占主要部分， 具有巨大的开发潜力。 浒苔中的 可溶性多糖具有抗病毒、 调节血脂、 降血糖的功能， 但是由于其较大的分子量及。

5、其粘度从而 影响了动物肠道对浒苔多糖的吸收， 极大的限制了这一功能食品的应用， 而浒苔寡糖则具 有分子量小， 粘度较低等优点， 从而备受关注。 0004 常见的浒苔多糖的降解方法主要是酸解法、 微波辅助酸解法等， 但通过酸解法得 到的寡糖分子量分布较宽且糖链基团及结构受到一定程度影响， 而通过微波辅助酸解法得 到的寡糖成本较高。 而浒苔多糖是一种聚阴离子异质多糖， 其糖链结构十分特殊， 常见的降 解多糖的工具酶对其没有太大的降解作用。 0005 本发明采用复合蛋白酶酶解去除浒苔中的蛋白成分， 使浒苔多糖纯度更高， 易于 被复合微生物降解。 0006 本发明采用的微生物为筛选的可以降解浒苔的微生。

6、物， 可以分泌多种纤维素酶对 浒苔多糖具有很好的降解效果。 发明内容 0007 本发明涉及一种浒苔寡糖禽畜饲料添加剂， 其主要成分浒苔寡糖主要由以下步骤 制备而成： (1)新鲜浒苔晾干； (2)粉碎浒苔； (3)水提浒苔； (4)醇提浒苔； (5)复合蛋白酶酶 解； (6)复合菌剂发酵； (7)冻干。 0008 进一步， 浒苔在研磨成粉后， 使用80-100目的网筛筛选。 0009 进一步， 水提浒苔时按照料液比50-100g的浒苔粉： 200-400mL的蒸馏水， 100煮 沸3-4h， 重复4-5次； 0010 进一步， 水提后的抽提液旋蒸1-2h， 收集旋蒸后的浓缩液； 0011 进一步。

7、， 浓缩液与乙醇按照料液比1:4-5倍浸提， 离心。 0012 进一步， 晾干浸提物， 除去乙醇。 0013 进一步， 将冷冻干燥后的浸提物按照料液比为1g:100-200mL蒸馏水。 0014 进一步， 将溶解后的浸提物加入复合蛋白酶， 30-40酶解3-4h。 0015 进一步， 将酶解液使用用Sevag法除去剩余的蛋白。 0016 进一步， 将除蛋白后的浒苔粗多糖,高温灭菌除去蛋白酶酶活等。 0017 进一步， 使用复合菌剂发酵粗多糖， 发酵温度为30-40， 时间为60-72h。 说 明 书 1/4 页 3 CN 108354062 A 3 0018 本发明的浒苔寡糖添加剂主要由浒苔寡。

8、糖70-80份， 大蒜素10-15份， 蒙脱石粉5- 10份， 维生素C 5-10份组成。 0019 本发明与现有技术的优势： 0020 1.所述浒苔寡糖添加剂的制备方法简单、 易操作， 成本低。 0021 2.与酸降解等传统方法相比， 采用本发明的方法制备浒苔寡糖作用条件温和， 时 间周期较短。 0022 3.本发明所得的浒苔寡糖添加剂， 可以明显的提高动物的免疫能力。 具体实施方式 0023 下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。 0024 实施例1 0025 本发明涉及的一种浒苔寡糖禽畜饲料添加剂中的浒苔寡糖主要由以下步骤制备 而成： 0026 步骤一， 将采集来的新鲜浒苔晾干，。

9、 在50-60的烘箱中烘干除尽水分。 0027 步骤二， 浒苔在研磨机中研磨成粉后， 使用80-100目的网筛筛选， 颗粒较大部分继 续研磨。 0028 步骤三， 按照料液比50-100g的浒苔粉： 200-400mL的蒸馏水溶解干浒苔粉， 100 煮沸3-4h， 重复4-5次； 0029 步骤四， 合并水提后的抽提液， 将抽提液在旋转蒸发仪中旋蒸1-2h， 温度为40-50 ， 浓缩体积为原抽提液的1/2， 收集旋蒸后的浓缩液； 0030 步骤五， 浓缩液与95的乙醇按照料液比1:4-5倍浸提， 浸提6-8h， 10000g离心20- 30min。 0031 步骤六， 醇提后， 在空气中晾1。

10、-2h， 除去乙醇。 0032 步骤七， 将浸提物按照料液比为1g:100-200mL溶于蒸馏水中。 0033 步骤八， 将溶解后的浸提物加入复合蛋白酶， 30-40酶解3-4h， 离心除去沉淀， 收 集上清。 0034 步骤九， 上清液按总体积的1/3-1/4加入Sevage试剂， 摇床充分震荡30-60min， 10000g离心， 重复3-4次。 0035 步骤十， 将除蛋白后的浒苔粗多糖冷冻干燥。 0036 步骤十一， 取10-20g粗多糖， 5-10g牛肉膏， 3-5g NaCl， 加100-200mL的蒸馏水溶解 后， 121灭菌20min。 0037 步骤十二， 接种复合菌剂发酵温。

11、度为30-40， 时间为60-72h。 0038 步骤十三， 离心除菌， 发酵液冻干。 0039 进一步作为一种优选的方案， 上述Sevage试剂正丁醇 氯仿1： 4； 0040 进一步作为一种优选的方案， 上述符合菌剂为解淀粉芽孢杆菌： 地衣芽孢杆菌 1： 3； 0041 进一步作为一种优选的方式， 上述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶： 中性蛋白酶1： 1； 0042 进一步作为一种优选的方式， 上述复合蛋白酶的添加比例为1g： 500mL浸提液； 0043 进一步作为一种优选的方式， 上述取粗多糖为10-20g中分任意份； 说 明 书 2/4 页 4 CN 108354062 A 4 0044 进。

12、一步作为一种优选的方式， 上述牛肉膏为5-10g中的任意份； 0045 进一步作为一种优选的方式， 上述NaCl为3-5g中的任意份。 0046 实施例2 0047 本发明的浒苔寡糖添加剂主要由浒苔寡糖70-80份， 大蒜素10-15份， 蒙脱石粉5- 10份， 维生素C 5-10份组成。 0048 进一步作为一种优选的方式， 上述浒苔寡糖为70-80份中的任意份； 0049 进一步作为一种优选的方式， 上述大蒜素为10-15份中的任意份； 0050 进一步作为一种优选的方式， 上述蒙脱石粉为5-10份中的任意份。 0051 实施例3 0052 本实施例在实施例1-2的基础上作为一种优选的实施。

13、方式， 0053 本发明所得的浒苔寡糖免疫添加剂在饲料中的添加比例为饲料干重的3-7。 0054 实施例4 0055 浒苔寡糖的免疫活性采用小鼠脾淋巴细胞作为靶细胞。 采用MTS-PMS比色法， 测算 浒苔寡糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。 将小鼠的脾细胞悬液加入96孔细胞培养板内， 每 孔180 L， 浒苔寡糖使用PBS缓冲液稀释成浓度为： 4、 8、 16、 32、 64、 128mg/L的待测寡糖悬液， 每个浓度3个重复， 空白对照组以等体积的PBS代替。 置37， 5CO2饱和湿度培养箱中培养 72h。 取出， 加入20 L的MTS-PMS继续培养4h， 用酶标仪测定A492nm值。 0。

14、056 测定结果见表1。 0057 表1浒苔寡糖对脾淋巴细胞增殖的影响 0058 0059 *p0.05*p0.01vs control 0060 从表1中看出， 浒苔寡糖在4-128mg/L的浓度范围内可显著刺激小鼠脾淋巴细胞增 殖， 并且随着寡糖浓度增加， 促进细胞生长的效应呈增强趋势。 因此本方法制备的浒苔寡糖 可以促进免疫细胞的增殖从而提升动物免疫能力。 0061 实施例5 0062 对细胞白介素的诱导作用： 制备小鼠脾细胞悬浮液， 加入48孔板中， 保证每孔 1000 L， 每个浓度下做3个平行， 浒苔寡糖使用PBS缓冲液稀释成浓度为： 4、 8、 16、 32、 64、 128mg。

15、/L的待测寡糖悬液， 培养48h取上清用ELISA法测细胞白介素含量， 测定结果见表2。 0063 表2浒苔寡糖对小鼠脾细胞白介素分泌的影响 0064 说 明 书 3/4 页 5 CN 108354062 A 5 0065 0066 *p0.05*p0.01vs control 0067 从表2中看出浒苔多糖在4-128mg/L的浓度范围内， 细胞白介素分泌量随着浒苔 寡糖浓度增加而增加， 说明浒苔寡糖可以刺激免疫细胞产生免疫因子提升自身免疫力。 0068 本发明的浒苔寡糖添加剂能够显著刺激动物免疫细胞的增殖， 并促进免疫因子的 生产， 提升动物机体的抗病能力。 说 明 书 4/4 页 6 CN 108354062 A 6 。