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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610679361.2 (22)申请日 2016.08.17 (71)申请人 江苏微康生物科技有限公司 地址 215200 江苏省苏州市吴江经济技术 开发区龙桥路1033号 (72)发明人 方曙光 杨帆 姜甜 占英英 冯胜鹏 (74)专利代理机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 代理人 刘洪勋 (51)Int.Cl. A23L 33/135(2016.01) A61K 35/747(2015.01) A61P 37/04(2006.01) A61K 3。
2、5/745(2015.01) (54)发明名称 灭活型乳酸菌微生态制剂及其制备方法和 应用 (57)摘要 本发明涉及灭活型乳酸菌微生态制剂及其 制备方法和应用， 所述灭活型乳酸菌微生态制剂 包括灭活菌及辅料， 所述灭活菌包括灭活双歧杆 菌与灭活乳杆菌。 本发明灭活微生态制剂安全性 更高、 耐噬菌体感染、 且不受菌量限制、 产品质量 稳定性高， 可以和抗生素合用， 且本发明所述灭 活型乳酸菌具有高效粘附肠道上皮细胞能力， 耐 高温、 高酸及胆汁， 与抗生素协同使用能够安全 有效解决活菌制剂所出现的问题， 此外本发明灭 活乳酸菌可通过对有害微生物产生竞争性抑制、 吸附有害物、 调节免疫应答反应提高。
3、机体免疫 力。 本发明制备方法具有操作简单、 条件温和的 特点， 有利于降低成本及推广生产。 权利要求书1页 说明书3页 CN 106307549 A 2017.01.11 CN 106307549 A 1.一种灭活型乳酸菌微生态制剂， 其特征在于： 包括灭活双歧杆菌、 灭活乳杆菌及辅 料， 所述灭活双歧杆菌重量百分比315， 所述灭活乳杆菌重量百分比310， 余下 为辅料。 2.如权利要求1所述的灭活型乳酸菌微生态制剂， 其特征在于： 所述乳杆菌包括植物乳 杆菌、 嗜酸乳杆菌、 罗伊氏乳杆菌、 鼠李糖乳杆菌、 干酪乳杆菌、 保加利亚乳杆菌中的一种或 几种。 3.如权利要求1所述的灭活型乳酸菌。
4、微生态制剂， 其特征在于： 所述双歧杆菌包括长双 歧杆菌、 短双歧杆菌、 乳双歧杆菌、 婴儿双歧杆菌、 青春双歧杆菌、 两歧双歧杆菌中的一种或 几种。 4.如权利要求1所述的灭活型乳酸菌微生态制剂， 其特征在于： 所述灭活型乳酸菌微生 态制剂中菌体细胞数为1091010cfu/g。 5.如权利要求1所述的灭活型乳酸菌微生态制剂， 其特征在于： 所述辅料包括但不限于 赋形剂、 食品添加剂或营养强化剂的一种或几种。 6.如权利要求1至5任一项所述的灭活型乳酸菌微生态制剂在制备粉剂、 颗粒剂、 片剂、 胶囊、 丸剂或软膏剂中的应用。 7.如权利要求1至5任一项所述的灭活型乳酸菌微生态制剂在食品、 保。
5、健品以及药品中 的应用。 8.一种灭活型乳酸菌微生态制剂的制备方法， 其特征在于包括下述步骤： S1、 乳杆菌及双歧杆菌分别发酵培养； S2、 发酵培养结束后， 分别将发酵液离心， 离心后收集乳杆菌及双歧杆菌菌体， 加入保 护剂乳化得到乳化液； S3、 乳化液灭活， 灭活后的乳化液真空冷冻干燥得灭活菌粉， S4、 将灭活菌粉与辅料复配得到灭活型乳酸菌微生态制剂。 9.根据权利要求8所述的灭活型乳酸菌微生态制剂的制备方法， 其特征在于： 所述发酵 培养方法包括一级种子液培养和二级种子液培养两步骤， 所述二级种子液是将一级种子液转接至培养基中， 在38和厌氧培养10h条件下制得， 所述二级种子液接。
6、至培养基中的接种量为28。 10.根据权利要求8所述的灭活型乳酸菌微生态制剂的制备方法， 其特征在于： 所述保 护剂包括海藻糖。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106307549 A 2 灭活型乳酸菌微生态制剂及其制备方法和应用 技术领域 0001 本发明涉及微生态制剂技术领域， 特别是涉及一种灭活型乳酸菌微生态制剂及其 制备方法和应用。 背景技术 0002 微生态制剂， 是利用正常微生物或促进微生物生长的物质制成的活的微生物制 剂。 也就是说， 一切能促进正常微生物群生长繁殖的及抑制致病菌生长繁殖的制剂都称为 “微生态制剂” 。 其主要成分益生菌是一类对宿主有益的活性微生物， 是。
7、定植于人体肠道、 生 殖系统内， 能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、 发挥有益作用的活性有益微生 物。 益生菌可以帮助人体维持及调节肠道菌群的平衡， 具有提高机体免疫力， 促进机体健康 等功效。 研究表明发挥益生作用的包括生理活性菌， 同样也包括死细胞及细胞代谢产物。 益 生菌制剂经口及其他粘膜途径进入， 可以改善粘膜表面微生物的平衡， 并有效刺激机体的 特异性及非特异性免疫机制， 进而发挥作用。 0003 目前， 益生菌制剂往往容易受生产、 运输等环境因素的影响， 导致活力损失， 且活 菌制剂进入消化道后不能有效抵抗胃酸及胆盐的影响， 无法长时间定植发挥功效。 并且， 现 有益生菌制。
8、剂活性成分单一， 长期使用易导致噬菌体感染与暴发的风险增加。 因此， 如何让 研发一种耐噬菌体感染、 稳定、 高效的灭活型乳酸菌微生态制剂成为亟待解决的问题。 发明内容 0004 鉴于上述现有技术存在的缺陷， 本发明的目的是提出一种耐噬菌体感染、 稳定、 高 效的灭活型乳酸菌微生态制剂， 以灭活双歧杆菌与灭活乳杆菌为主要有效成分。 本发明的 目的之二是提供上述灭活型乳酸菌微生态制剂的制备方法及其应用。 为实现上述目的， 本 发明采用如下技术方案： 0005 一种灭活型乳酸菌微生态制剂， 包括灭活菌及辅料， 所述灭活菌包括重量百分比 315的灭活双歧杆菌与重量百分比310的灭活乳杆菌， 其余为辅。
9、料。 0006 本发明灭活型乳酸菌微生态制剂， 进一步地， 所述乳杆菌包括植物乳杆菌、 嗜酸乳 杆菌、 罗伊氏乳杆菌、 鼠李糖乳杆菌、 干酪乳杆菌、 保加利亚乳杆菌中的一种或几种。 0007 本发明灭活型乳酸菌微生态制剂， 进一步地， 所述双歧杆菌包括长双歧杆菌、 短双 歧杆菌、 乳双歧杆菌、 婴儿双歧杆菌、 青春双歧杆菌、 两歧双歧杆菌中的一种或几种。 0008 本发明灭活型乳酸菌微生态制剂， 进一步地， 所述灭活型乳酸菌微生态制剂中菌 体细胞数为1091010cfu/g。 0009 本发明灭活型乳酸菌微生态制剂， 进一步地， 所述辅料包括但不限于赋形剂、 食品 添加剂或营养强化剂的一种或几。
10、种。 0010 应当说明的是， 所述辅料包括但不限于赋形剂、 食品添加剂或营养强化剂。 0011 所述食品添加剂包括填充剂、 矫味剂、 粘合剂、 崩解剂、 润滑剂、 抗酸剂、 以及营养 强化剂中的一种或多种； 所述赋形剂等还必须是 “可接受的” ， 其含义是， 与制剂的其它成分 说 明 书 1/3 页 3 CN 106307549 A 3 相容， 所述填充剂包括淀粉、 蔗糖、 乳糖、 微晶纤维素、 三硅酸镁、 以及氢氧化铝中的一种或 多种； 所述矫味剂为乳糖和/或蔗糖； 所述崩解剂为淀粉； 所述粘合剂为蔗糖； 所述抗酸剂为 三硅酸镁和/或氢氧化铝； 所述润滑剂为滑石粉； 所述营养强化剂包括维生。
11、素、 矿物质、 益生 元和/或膳食纤维。 0012 且， 本发明提供所述灭活型乳酸菌微生态制剂在制备粉剂、 颗粒剂、 片剂、 胶囊、 丸 剂或软膏剂中的应用。 0013 且， 本发明提供所述灭活型乳酸菌微生态制剂在食品、 保健品以及药品中的应用。 0014 上述灭活型乳酸菌微生态制剂的制备方法， 包括下述步骤： 0015 S1、 乳杆菌及双歧杆菌分别发酵培养； 0016 S2、 发酵培养结束后， 分别将发酵液离心， 离心后收集乳杆菌及双歧杆菌菌体， 加 入保护剂乳化得到乳化液； 0017 S3、 乳化液灭活， 灭活后的乳化液真空冷冻干燥得灭活菌粉。 0018 S4、 将灭活菌粉与辅料复配得到灭。
12、活型乳酸菌微生态制剂。 0019 本发明灭活型乳酸菌微生态制剂的制备方法， 进一步地， 所述发酵培养方法包括 一级种子液培养和二级种子液培养两步骤， 所述二级种子液是将一级种子液转接至培养基 中， 在38和厌氧培养10h条件下制得， 所述二级种子液接至培养基中的接种量为2 8。 0020 本发明灭活型乳酸菌微生态制剂的制备方法， 进一步地， 所述保护剂包括海藻糖。 0021 借由上述方案， 本发明至少具有以下优点： 相比活性菌制剂， 本发明灭活微生态制 剂安全性更高、 耐噬菌体感染、 且不受菌量限制、 产品质量稳定性高， 可以和抗生素合用； 本 发明所述灭活型乳酸菌具有高效粘附肠道上皮细胞能力。
13、， 且耐高温、 高酸及胆汁， 与抗生素 协同使用能够安全有效解决活菌制剂所出现的问题； 本发明灭活乳酸菌可通过对有害微生 物产生竞争性抑制、 吸附有害物、 调节免疫应答反应提高机体免疫力； 本发明制备方法操作 简单、 条件温和， 有利于降低成本及推广生产。 0022 上述说明仅是本发明技术方案的概述， 为了能够更清楚了解本发明的技术手段， 并可依照说明书的内容予以实施， 以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。 具体实施方式 0023 下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、 完整的描述， 显然， 所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例， 不用来限制本发 。
14、明的范围。 基于本发明的实施例， 本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获 得的所有其他实施例， 都属于本发明保护的范围。 0024 本发明所述灭活型益生菌制剂可用于胃肠道疾病的预防及保健， 所述胃肠道疾病 为便秘、 腹泻及胃肠道菌群失衡所引起的各类疾病。 0025 本发明灭活型乳酸菌微生态制剂， 包括灭活菌及辅料， 所述灭活菌包括重量百分 比315的灭活双歧杆菌， 重量百分比310的灭活乳杆菌， 其余为辅料。 该乳杆菌 包括植物乳杆菌、 嗜酸乳杆菌、 罗伊氏乳杆菌、 鼠李糖乳杆菌、 干酪乳杆菌、 保加利亚乳杆菌 中的一种或几种。 该双歧杆菌包括长双歧杆菌、 短双歧杆菌、 乳双歧杆菌、。
15、 婴儿双歧杆菌、 青 春双歧杆菌、 两歧双歧杆菌中的一种或几种。 该灭活型乳酸菌微生态制剂中菌体细胞数为 说 明 书 2/3 页 4 CN 106307549 A 4 1091010cfu/g。 该辅料包括但不限于赋形剂、 食品添加剂或营养强化剂的一种或几种。 0026 本发明实施例中使用的短双歧杆菌BBr60、 植物乳杆菌Lp90、 乳双歧杆菌BLa80、 长 双歧杆菌BL21、 嗜酸乳杆菌LA85由江苏微康生物科技公司生产。 0027 【实施例一】 0028 S1、 分别将短双歧杆菌BBr60、 植物乳杆菌Lp90于MRS培养基的试管中活化， 得到一 级种子液， 再将一级种子液分别转接至种。
16、子培养基中得到二级种子液， 培养条件为38， 厌 氧培养10h。 将二级种子液分别接入发酵培养基中进行高密度发酵， 二级种子液接至发酵培 养基中的接种量为5， 培养条件为38， 厌氧培养12h， 分别收集发酵液。 0029 S2、 将所述发酵液分别离心， 收集菌体后加入海藻糖保护剂乳化， 得到乳化液于80 下高温持续灭活50min， 然后进行真空冷冻干燥， 得到灭活益生菌菌粉。 0030 S3、 每公斤制剂中添加灭活菌粉80g， 其中， 灭活短双歧杆菌与灭活植物乳杆菌按 照重量比1:1添加， 并添加低聚果糖、 菊粉920g(低聚果糖与菊粉的重量比1:1)复配， 得到灭 活型乳酸菌微生态制剂中总。
17、菌体细胞数为1091010个/g。 0031 【实施例二】 0032 S1、 分别将乳双歧杆菌BLa80、 长双歧杆菌BL21、 嗜酸乳杆菌LA85于MRS培养基的试 管中活化， 得到一级种子液， 再将一级种子液分别转接至种子培养基中得到二级种子液， 培 养条件为38， 厌氧培养10h。 将二级种子液分别接入发酵培养基中进行高密度发酵， 二级 种子液接至发酵培养基中的接种量为5， 培养条件为38， 厌氧培养12h， 分别收集发酵 液。 0033 S2、 将所述发酵液分别离心， 收集菌体后加入海藻糖保护剂乳化， 得到乳化液于80 下高温灭活50min， 然后进行真空冷冻干燥， 得到灭活益生菌菌粉。 0034 S3、 每公斤制剂中添加灭活菌粉100g， 其中灭活双歧杆菌与灭活嗜酸乳杆菌按照 重量比3:2比例进行混合， 并添加低聚果糖、 菊粉900g(低聚果糖与菊粉的重量比为1:1)复 配， 得到灭活型乳酸菌微生态制剂中总菌体细胞数为1091010个/克。 0035 显然， 本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精 神和范围。 这样， 倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围 之内， 则本发明也意图包含这些改动和变型在内。 说 明 书 3/3 页 5 CN 106307549 A 5 。