技术领域
本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及闭花木酮Cleistanone的 O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物、制备方法及其用途。
背景技术
引起肝损伤的原因有多个：1、病毒感染：由多种肝炎病毒引起，具有传染 性强，传播途径复杂，流行面广泛，发病率高等特点。2、药物或化学毒物：许 多药物和化学毒物都可引起肝脏损伤，发生药物性肝炎或中毒性肝炎。3、酗酒： 酒精对肝脏的损害是很严重的，损害的后果包括酒精性肝炎、酒精性脂肪肝、酒 精性肝硬化，主要是由于酒精(乙醇)及其代谢产物乙醛的毒性对肝细胞直接损害 造成的。4、其他原因：原发和继发的肝脏肿瘤、心功能不全导致肝脏淤血、某 些先天性肝脏疾病、静脉高价营养等，都可以造成不同程度的肝损害，这些肝损 害的早期表现往往是ALT(转氨酶)或胆红素的升高，不祛除病因，肝脏的损害会 进一步加重。目前在我国由于上述原因每年发生肝损伤的人数众多，形势不容乐 观。急需研发高效低毒的防治肝脏损伤药物。
肝脏损伤的治疗目前已有的药物存在毒性大、安全性低的问题，从天然产物 中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的 潜在药物具有重要价值。
本发明涉及的化合物闭花木酮Cleistanone是一个2011年发表(Van Trinh Thi Thanh et al.,2011.Cleistanone:A Triterpenoid from Cleistanthus indochinensis with a New Carbon Skeleton.Volume 2011,Issue 22,pages 4108–4111,August 2011)的化 合物，我们对化合物闭花木酮Cleistanone进行了结构修饰，获得了一个新的闭 花木酮Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物，并对其抗肝脏损伤活性进行 了评价，其具有抗肝脏损伤活性。
发明内容
本发明公开了一个闭花木酮Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物，其 结构为：
本发明闭花木酮Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物(III)可通过下 面方法制备：
(1)闭花木酮Cleistanone(I)与1,2-二溴乙烷反应得到闭花木酮Cleistanone 的O-溴乙基衍生物(II)；
(2)闭花木酮Cleistanone的O-溴乙基衍生物(II)与1H-四氮唑发生取代反 应制得闭花木酮Cleistanone衍生物(III)。
进一步的闭花木酮Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物(III)的制备 方法为：
(1)将440mg化合物闭花木酮Cleistanone(I)溶于10mL苯，向溶液中加入 0.04g的四丁基溴化铵，3.760g的1,2-二溴乙烷和6mL的50％氢氧化钠溶液； 混合物在25摄氏度搅拌24h；24h之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷 萃取两次，合并有机相溶液；然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤3 次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶剂得到产物粗品；产物粗品用硅 胶柱层析纯化，流动相为：石油醚/丙酮＝100:1，v/v，收集黄色集中洗脱带即得 到闭花木酮Cleistanone的O-溴乙基衍生物(II)的黄色固体。
(2)将273mg的闭花木酮Cleistanone的O-溴乙基衍生物溶于15mL乙腈当 中，向其中加入345mg的无水碳酸钾，84mg的碘化钾和1401mg的1H-四氮唑， 混合物加热回流10h；反应结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三 次，合并有机相；依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸 钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品；因为互变异构作用，在反应条件下会 生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑基两种取代产物；产物粗品用硅胶柱层析纯化， 流动相为：石油醚/丙酮＝100:1，v/v，收集淡黄色集中洗脱带；再将洗脱带浓缩， 用硅胶柱层析纯化，流动相为：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v，，浓缩前1个洗脱带 即得到闭花木酮Cleistanone衍生物(III)的淡黄色固体。
本发明公开的化合物可以制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
药效学实验表明，本发明的闭花木酮Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍 生物(III)具有较好的抗肝脏损伤作用。本发明的药学上可接受的盐与其化合物 具有同样的药效。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具 体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
具体实施方式
实施例1 化合物闭花木酮Cleistanone的制备
化合物闭花木酮Cleistanone(I)的制备方法参照Van Trinh Thi Thanh等人发表 的文献(Van Trinh Thi Thanh et al.,2011.Cleistanone:A Triterpenoid from Cleistanthus indochinensis with a New Carbon Skeleton.Volume 2011,Issue 22, pages 4108–4111,August 2011)的方法。
实施例2 闭花木酮Cleistanone的O-溴乙基衍生物(II)的合成
将化合物I(440mg，1.00mmol)溶于10mL苯，向溶液中加入四丁基溴化 铵(TBAB)(0.04g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氢氧 化钠溶液。混合物在25摄氏度搅拌24h。24h之后将反应液倒入冰水中，立即 用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液。然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐 水洗涤3次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物 粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:1，v/v)，收集黄色集中洗 脱带即得到化合物II的黄色固体(344mg，63％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.04(s,1H),4.82(s,1H),3.94(d,J＝26.5Hz, 1H),3.87(d,J＝26.5Hz,2H),3.57(s,2H),2.40(d,J＝14.0Hz,1H),2.39(d,J＝ 14.0Hz,1H),2.27(s,1H),2.21(s,1H),2.15(s,1H),1.82(s,1H),1.62(s,2H),1.57 (d,J＝3.3Hz,1H),1.54(d,J＝3.3Hz,1H),1.50(d,J＝1.2Hz,1H),1.47(d,J＝1.2 Hz,1H),1.39(d,J＝15.3Hz,2H),1.34(d,J＝15.3Hz,1H),1.26(dd,J＝32.6,13.7 Hz,4H),1.13(d,J＝18.0Hz,2H),1.05(s,6H),0.98(s,1H),0.88(s,12H),0.78(s, 3H),0.74(s,1H)。
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ216.59(s),154.50(s),105.23(s),74.63(s), 69.85(s),59.71(s),52.55(s),51.21(s),47.92(s),44.10(s),42.25(s),41.73(s), 40.64(s),40.16(s),38.88(s),38.65(s),37.21(s),36.23(s),33.34(d,J＝1.1Hz), 32.96(s),29.91(s),27.18(s),26.03(s),24.23(s),23.96(s),20.77(s),18.48(s), 17.98(s),16.93(s)。
HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for C32H52BrO2:547.3151；found 547.3159.
实施例3 闭花木酮Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物(III)的合 成
将化合物II(273mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈当中，向其中加入无水碳 酸钾(345mg，2.5mmol)，碘化钾(84mg，0.5mmol)和1H-四氮唑(1401mg， 20mmol)，混合物加热回流10h。反应结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯 甲烷萃取三次，合并有机相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再 用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。因为互变异构作用，在反 应条件下会生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑基两种取代产物。产物粗品用硅胶柱 层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:1，v/v)，收集黄色集中洗脱带，再将洗 脱带浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，依次收 集两个淡黄色的洗脱带，浓缩前1个洗脱带即得到化合物III的淡黄色固体(56.5 mg,21％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),4.63(s,1H),4.53(s,1H),4.33(d,J ＝4.7Hz,2H),4.26(s,1H),3.88(s,2H),2.37(d,J＝3.0Hz,2H),2.26(d,J＝13.0 Hz,2H),2.20(s,1H),1.89(s,2H),1.81(s,1H),1.65(d,J＝15.0Hz,3H),1.56(s, 2H),1.54–1.47(m,3H),1.42(s,1H),1.30(dd,J＝26.0,22.6Hz,3H),1.22(s,1H), 1.04(s,6H),0.96(s,12H),0.87(d,J＝5.4Hz,4H),0.63(s,1H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ216.58(s),154.48(s),145.25(s),105.20(s), 74.64(s),65.63(s),59.74(s),52.54(s),51.19(s),47.89(s),47.02(s),44.11(s), 42.27(s),41.76(s),40.63(s),40.14(s),38.85(s),38.66(s),37.23(s),36.26(s), 33.33(s),32.94(s),29.88(s),27.19(s),26.05(s),24.26(s),23.95(s),20.75(s), 18.45(s),17.99(s),16.95(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C33H53N4O2:537.4169；found:537.4161。
实施例4 Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物防治肝损伤的作用
(一)Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物对D-氨基半乳糖胺 (D-galactosamine，D-GalN)诱导的小鼠急性肝损伤的防护作用
小鼠分3组。对照组以生理盐水灌胃(0.3mL·d-1)，连续7d；且于第7d还 要腹腔注射生理盐水(0.15mL·10g-1)，腹腔注射16h后取血，测AST及ALT活力。 D-GalN组、Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物3.0mg·kg-1组分别以生理 盐水、Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物灌胃(0.3mL·d-1)，连续7d； 且于第7d还要腹腔注射D-GalN(800mg·kg-1，0.15mL·10g-1)，腹腔注射16h后 取血，测AST及ALT活力。
表1 Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物对D-GalN诱导的急性肝损伤的防 护作用
注：1)p<0.01vs对照组，2)p<0.01vs D-GalN组
由表1可知，Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物能有效抑制D-GalN 引起的小鼠AST及ALT活性的显著上升。
(二)Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤 的防护作用
小鼠分3组，对照组以生理盐水灌胃(0.3mL·d-1)，连续5d，第6d腹腔注 射植物油每只0.1mL·10g-1；CCl4组及Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物 给药组(3.0mg·kg-1)分别以生理盐水及不同浓度的Cleistanone的O-(1H-四氮唑 基)乙基衍生物灌胃(0.3mL·d-1)，连续5d，于第6d腹腔注射0.1％CCl40.1mL·10g-1。 24h后处死动物，取血清测AST及ALT活力。
表2 Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物对CCl4诱导的急性肝损伤的防护 作用
注：1)p<0.01vs对照组，2)p<0.01vs CCl4组
由表2可知，Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物能抑制CCl4引起的 小鼠AST及ALT活性的显著上升。
结论：Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物能有效保护D-GalN引起的 小鼠肝损伤，Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物能有效保护CCl4引起的 小鼠肝损伤，可以用来制备抗肝损伤药物。
实施例5 本发明所涉及Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物片剂 的制备
取20克Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物或者其药学上可接受的盐 当中的一种，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。
实施例6 本发明所涉及Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物胶囊 的制备
取20克Cleistanone的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物或者其药学上可接受的盐当 中的一种，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000 粒。