用于保湿皮肤或改善皱纹的外用剂组合物及化妆品组合物.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201380033592.0 (22)申请日 2013.10.18 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104640541 A (43)申请公布日 2015.05.20 (30)优先权数据 10-2012-0145799 2012.12.13 KR (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2014.12.24 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/KR2013/009357 2013.10.18 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2014/092325 KO 2。

2、014.06.19 (73)专利权人 韩国韩医学研究院 地址 韩国大田 (72)发明人 蔡盛旭 李美英 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 代理人 张晶 刘成春 (51)Int.Cl. A61K 31/40(2006.01) A61K 31/56(2006.01) A61K 31/7028(2006.01) A61K 31/70(2006.01) (56)对比文件 WO 2009104913 A2,2009.08.27, WO 2009151762 A2,2009.12.17, JP H08133955 A,1996.05.28, 审查员 刘鑫 (54)发明名称 。

3、用于保湿皮肤或改善皱纹的外用剂组合物 及化妆品组合物 (57)摘要 本发明涉及一种用于保湿皮肤或改善皱纹 的外用剂组合物或化妆品组合物， 所述组合物含 有能够提取于知母的用化学式1表示的化合物或 其药学上可接受的盐作为有效成分。 所述组合物 通过防止皮肤损失水分来抑制由于紫外线诱发 的皮肤组织损伤， 从而具有预防或缓解皮肤皱纹 的效果。 权利要求书1页 说明书10页 附图3页 CN 104640541 B 2016.10.19 CN 104640541 B 1.一种用下述化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于保湿皮肤或改 善皱纹的医药中的应用： 2.根据权利要求1所述的应用， 其特。

4、征在于， 所述用化学式1表示的化合物提取于知母。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述医药是皮肤外用剂。 4.一种用下述化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于保湿皮肤或改 善皱纹的化妆品中的应用： 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 104640541 B 2 用于保湿皮肤或改善皱纹的外用剂组合物及化妆品组合物 技术领域 0001 本发明涉及一种用于保湿皮肤或改善皱纹的外用剂组合物或化妆品组合物， 所述 组合物含有能够提取于知母的用化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成 分。 背景技术 0002 皮肤作为覆盖身体外部的一种膜， 通过执行能够保护身体的。

5、多种生理功能， 使得 身体免受多种外部的刺激、 干扰、 干燥等的环境因素的影响， 从而对内部脏器和其外的体内 器官起到保护并调节的作用。 对皮肤进行组织学上的纵切， 然后用显微镜进行观察的结果， 皮肤由作为上皮组织的表皮、 作为结缔组织的真皮和皮下组织构成， 每个组织都具有特异 性功能， 各个组织之间具有相互关系。 0003 其中， 结缔组织主要由胶原蛋白和弹性蛋白构成， 胶原蛋白对维持皮肤真皮的结 构起到决定性作用。 存在于皮肤真皮层的胶原蛋白占据细胞外基质的大部分， 并且已知有 维持皮肤的机械坚固性、 强化结缔组织的阻力及组织的结合力、 维持细胞粘合、 诱导细胞分 裂及分化等作用。 包含胶。

6、原蛋白而构成真皮的细胞外基质的弹性蛋白和蛋白聚糖、 纤连蛋 白、 层粘连蛋白等的糖蛋白质大部分在成纤维细胞中制成， 然后送到细胞外， 所有营养素和 代谢废弃物通过该细胞外空间运输并代谢。 所述糖蛋白质参与到许多细胞-表面反应中， 并 且将大量的水分保留在细胞外基质中， 从而起到使皮肤维持弹力并防止皱纹的作用(Ko， J.H.， Kyung K.Y.， and Yu， S.M.， J.of the Korean Chemist s， Soc.， 26(2)， 191， 2009)。 0004 并且， 皮肤保湿程度在化妆品、 皮肤科学及医药品等领域中作为重要因素， 角质层 的保湿状态与皮肤的外形(。

7、皮肤的柔韧性及粗糙程度)有直接的关联， 并且成为健康状态的 尺度。 并且， 由于角质层的皮肤水分含量对与皮肤状况及渗透性相关的皮肤膜稳态产生影 响， 因此化妆品或涂抹用医药品的吸湿度可能会改变， 因此皮肤保湿起着重要因素的作用 (Esposito E， Drechsler M， Mariani P， Sivieri E， Bo zzini R， Montesi L， Menegatti E， Cortesi R， Int J Cosmet Sci， 29， p39-47， 2007； Kasting GB， Barai ND， J Pharm Sci， 92， p1624-31， 2003)。。

8、 0005 一方面， 皮肤的老化是随着年龄的增加而自然发生的内因性老化(intrinsic aging或者自然老化)和光老化(actinic aging)一起作用而出现的。 两种老化之间具有生 成皱纹、 作为皮肤免疫细胞的胰岛细胞和真皮细胞成分减少等很多共同点， 然而两者的差 别是， 光老化使皮肤变厚、 弹力纤维增加， 相反自然老化使皮肤变薄。 这种自然老化和光老 化联合作用而形成皱纹。 即， 随着皮肤老化， 由于真皮层的成纤维细胞(human skin fibroblast)的老化， 因此纤维质和基质的生成能力下降， 并且基质的量将全面减少， 从而 使皮肤的厚度变薄， 并且皮肤的弹力下降而形。

9、成皱纹， 或者由于暴露在紫外线中而生成自 由基(free radical)和活性氧簇(reactive oxygen species， ROS)， 攻击使皮肤保湿柔软 并维持弹力的胶原质和纤维质， 因此加速皱纹的生成。 另一方面， 在许多研究结果中显示大 部分的皮肤老化， 比起年龄性自然老化， 事实上更多是由于阳光所致。 有的学者还发表过 说 明 书 1/10 页 3 CN 104640541 B 3 80以上的皱纹是由于阳光产生的研究结果。 0006 最能象征性地表示出慢性地暴露在紫外线时的影响的是农夫或渔夫的皮肤。 外观 上， 皮肤粗糙， 有深层皱纹， 并且在容易暴露于紫外线中的后颈部分，。

10、 可以看到特征性的棱 形皱纹。 将这种变化称作光老化， 以与自然老化区分。 出现这种症状较多的部位是经常暴露 于阳光下的脸部。 0007 并且， 近年来， 由于环境污染， 因此到达地表上的紫外线的量在增加， 并且由于休 闲及野外活动等的增加， 因此使皮肤暴露在紫外线中的可能性也在变大。 因此， 对于因光老 化使皮肤变粗糙， 并形成皱纹的护理， 变得越来越重要。 0008 到了秋季， 由于在夏季参加很多野外活动时受到紫外线等的影响， 因此角质层已 变厚， 皮肤已变粗糙， 还形成有很多细纹。 在这种状态下， 与越来越干燥的秋季空气接触， 皮 肤会变得越来越粗糙， 细纹会急剧增加。 并且， 到了冬季。

11、， 由于气温急剧下降而不仅运动量 减少， 而且我们身体里的血液循环不通畅， 使皮肤的新陈代谢周期变长， 因此皮肤会变得更 加粗糙并增加细纹。 并且， 由于与冷风直接接触的皮肤， 为了保护皮肤， 使角质层变厚， 因此 使皮肤变得粗糙。 其中， 由于与外部直接接触的皮肤干燥加深， 因此产生角质， 并且为了对 抗冷风， 皮肤将变得又厚又僵硬。 0009 一方面， 皮肤以约28天为一个周期， 产生新的皮肤细胞， 并将陈旧的细胞推到角质 层。 将这种现象称为细胞再生周期(Cell turn-o ver cycle)。 女性年龄在25岁以后， 由于 各种原因， 细胞再生周期变长， 因此皮肤将产生问题， 皮。

12、肤变得阴暗， 保湿力低下， 变粗糙， 最终细纹极具变多而开始老化。 尤其， 在换季期间， 皮肤由于被又凉又干燥的风夺走大量的 水分， 因此变得既粗糙又干燥。 而且， 由于新陈代谢变迟钝而导致汗和皮脂的分泌量急剧减 少， 因此皮肤变得更加干燥， 皮肤表面还增加不必要的角质， 并且变得干燥。 0010 由于上述复合性原因， 尤其， 在25岁以后， 角质层将变厚， 皮肤将变粗糙， 从而细纹 急剧增加。 从对皮肤管理的关心急剧增加的目前来说， 迫切需要一种能够改善这种粗糙皮 肤和细纹的化妆品。 尤其， 需要一种既能表现出改善细纹及粗糙皮肤的优异效果， 又能让消 费者不排斥而放心使用的安全性得到认证的化。

13、妆品等皮肤外用剂。 0011 对此， 为了改善皮肤皱纹及强化皮肤保湿， 已提出多种方案。 例如， 随着对皮肤老 化的广泛研究的发展， 瞩目于皮肤中胶原蛋白具有的功能， 为了改善皮肤皱纹， 市面上销售 有使用胶原蛋白的化妆品。 然而， 混合胶原蛋白的化妆品是将胶原蛋白涂布于皮肤表面， 但 高分子的胶原蛋白很难通过皮肤吸收而执行其功能， 因此改善皱纹的效果微不足道。 0012 并且， 已知的胶原蛋白合成促进物质有维甲酸(retinoic acid)、 转变生长因子 ( transforming growth factor， TGF )， 致癌增长因子： Cardinale G .et al， Ad。

14、v.Enzymol.， 41， p.425， 1974)、 来源于动物胎盘的蛋白质(JP8-231370)、 白桦酯酸 (betulinic acid(JP8-208424)、 小球藻提取物(JP9-40823， JP10-36283， 成纤维细胞增殖 促进作用)等， 但使用于皮肤时， 由于刺激和发红等的安全性问题， 因此使用量受到限制， 并 且由于效果微不足道， 因此存在难以期待对皮肤功能的实质性改善效果的缺点， 因此， 需要 开发使用于皮肤时， 既对生物体安全， 又具有优异的改善皱纹的效果的皮肤外用剂。 0013 在上述背景下， 本发明人在研究既对皮肤安全， 又具有优异的保湿效果及改善皱 。

15、纹的效果的物质的过程中， 将从知母提取物中获取的用化学式1表示的化合物涂布于动物 模型的皮肤上的结果， 确认了所述化合物通过改善皮肤屏障的损伤而抑制皮肤损失来缓解 说 明 书 2/10 页 4 CN 104640541 B 4 皱纹的深度和长度等， 从而完成了本发明。 发明内容 0014 要解决的技术问题 0015 本发明的目的在于， 提供一种对保湿皮肤或改善皱纹具有卓越的效果的药学组合 物或化妆品组合物， 所述组合物包含能够提取于知母的用化学式1表示的化合物或其药学 上可接受的盐作为有效成分。 0016 本发明的另一目的在于， 提供一种提取于知母的用化学式1表示的化合物或其药 学上可接受的盐。

16、在制备用于保湿皮肤或改善皱纹的组合物中的应用， 或者一种保湿皮肤或 改善皱纹的方法， 所述方法包括将治疗学有效剂量的提取于知母的用下述化学式1表示的 化合物或其药学上可接受的盐施用于所需对象体的步骤。 0017 技术方案 0018 为了解决所述问题， 本发明提供一种用于保湿皮肤或改善皱纹的药学组合物， 所 述药学组合物含有用下述化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。 0019 化学式1 0020 0021 所述药学组合物优选为皮肤外用剂组合物， 但并不限定于此。 0022 所述用化学式1表示的化合物优选提取于知母。 所述提取可以通过本领域公知的 常规的方法来进行。 在本发明的一。

17、实施例中， 通过下述方法从知母中获取了所述用化学式1 表示的化合物。 0023 用乙醇， 以每次三小时， 对知母共进行三次回流冷却提取， 并减压浓缩， 从而获取 乙醇浓缩液。 将获取的知母乙醇浓缩液， 按照正己烷、 乙酸乙酯及正丁醇的顺序， 逐步进行 分级， 从而得到正丁烷级分之后， 使用水和甲醇的混合溶剂， 通过梯度洗脱柱式色谱法对所 述正丁醇级分进行分离， 从而得到5个小级分。 这时， 使用的水和甲醇的比例为10:0(v/v)至 7:3(v/v)。 所述的5个小级分中， 对第4个小级分， 再次使用水和甲醇的混合溶剂， 通过实施 梯度洗脱反相色谱法来分离出用所述化学式1表示的化合物。 这时，。

18、 使用的水和甲醇的比例 为10:0(v/v)至5:5(v/v)。 0024 一方面， 在本发明中使用的术语 “知母(Anemarrhena asphodeloi des Bunge)” 为 单子叶植物百合目知母科的多年生草， 其根茎干燥后用作药材。 0025 根据本发明的一实施例， 在动物模型的皮肤上， 边照射紫外线， 边涂布所述提取于 知母的用化学式1表示的化合物的结果， 具有缓解由于紫外线增加的皱纹深度和抑制胶原 蛋白组织破坏反应的效果， 所述效果是通过抑制经皮的水分损失来实现的。 0026 本发明的用化学式1表示的化合物可以以药学上可接受的盐的形态使用， 这种盐 说 明 书 3/10 页。

19、 5 CN 104640541 B 5 有根据药学上可接受的游离酸(free acid)形成的酸加成盐或根据碱形成的金属盐。 所述 游离酸， 可使用无机酸和有机酸， 可使用的无机酸有盐酸、 硫酸、 溴酸、 亚硫酸或磷酸等， 可 使用的有机酸有柠檬酸、 醋酸、 马来酸、 富马酸、 葡萄糖酸、 甲基磺酸等。 所述金属盐有碱金 属盐或碱土金属盐， 优选为钠、 钾或钙盐。 0027 并且， 本发明除了包含提取于知母的用化学式1表示的化合物或其药学上可接受 的盐之外， 还可以进一步包含具有保湿皮肤或改善皱纹功能的物质， 例如， 视黄醇、 棕榈酸 视黄酯、 腺苷酸、 聚乙氧基化维甲酸(polyethoxy。

20、lated retinamide)、 胶原蛋白、 TGF或来源 于动物胎盘的蛋白质， 但并不限定于此。 0028 本发明的组合物， 为了施用， 除了包含上述记载的有效成分以外， 还可以包含药学 上可接受的载体、 赋形剂或稀释剂。 对于所述载体、 赋形剂及稀释剂， 可以列举乳糖、 右旋 糖、 蔗糖、 山梨糖醇、 甘露糖醇、 木糖醇、 赤藓糖醇、 麦芽糖醇、 淀粉、 阿拉伯胶、 藻朊酸盐、 明 胶、 磷酸钙、 硅酸钙、 纤维素、 甲基纤维素、 微晶纤维素、 聚乙烯吡咯烷酮、 水、 羟基苯甲酸甲 酯、 羟基苯甲酸丙酯、 滑石、 硬脂酸镁及矿物油。 0029 本发明的组合物分别可以根据通常的方法制成散。

21、剂、 颗粒剂、 片剂、 胶囊剂、 悬浮 液、 乳剂、 糖浆、 气雾剂等口服剂型， 还可以制成外用剂、 栓剂或灭菌注射溶液的形态而使 用。 更具体地， 可以使用制剂化时通常使用的填充剂、 增重剂、 粘合剂、 润湿剂、 崩解剂、 表面 活性剂等稀释剂或者赋形剂来制备。 用于口服的固体剂型包括片剂、 丸剂、 散剂、 颗粒剂、 胶 囊剂等， 但并不限定于此。 这种固体制剂， 可以通过在所述用化学式1表示的化合物或其药 学上可接受的盐中混合至少一种以上的选自淀粉、 碳酸钙、 蔗糖、 乳糖、 明胶等的赋形剂来 进行制备。 并且， 除了使用单纯的赋形剂以外， 还可以使用硬脂酸镁、 滑石等润滑剂。 用于口 服。

22、的液态物的情况下， 除了使用液状石蜡之外， 还可以添加润湿剂、 甜味剂、 芳香剂、 保存剂 等各种赋形剂来进行制备。 非口服的制剂包括灭菌的水溶液、 非水性溶剂、 悬浮剂、 乳剂、 冷 冻干燥制剂及颗剂()。 非水性溶剂及悬浮剂， 可以使用丙二醇、 聚乙二醇、 橄榄油等植 物油和油酸乙酯等可注射的酯。 栓剂的基质， 可以使用饱和脂肪酸混合物的甘油酯 (Witepsol)、 马克罗索(Macrosol)、 吐温61、 可可脂、 三月桂酸甘油酯、 甘油明胶等。 0030 本发明的组合物的适合的施用量(治疗学上的有效量)， 虽然根据患者(对象体)的 状态及体重、 疾病的程度、 药物形态、 时间有所不。

23、同， 但本领域技术人员可以适当地进行选 择。 所述用化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的每日施用量优选为1mg/kg至 500mg/kg， 可以根据需要一天一次或分几次给药。 0031 并且， 本发明提供一种用于保湿皮肤或改善皱纹的化妆品组合物， 所述化妆品组 合物包含所述药学合物的。 0032 本发明的组合物除了包含所述有效成分以外， 还可以包括常用的成分， 例如， 抗氧 化剂、 稳定剂、 溶解剂、 维生素、 颜料及香料等常用的辅助剂， 并且还可以包含载体。 0033 本发明的组合物可以制成本领域常用的任何剂型， 例如， 溶液、 悬浮液、 乳状液、 膏、 凝胶、 霜、 洗剂、 粉末、 。

24、香皂、 含有表面活性剂的洁肤剂、 油、 粉末粉底、 乳状液粉底、 蜡状 粉底及喷雾剂等剂型， 但并不限定于此。 更具体地， 可以制成柔软化妆水(skin)、 营养化妆 水(奶类乳液)、 营养霜、 按摩霜、 精华液、 眼霜、 洁面霜、 洁面泡沫、 洁肤水、 面膜、 喷雾剂或粉 末的剂型。 0034 本发明的剂型是膏、 霜或凝胶时， 可以将动物油、 植物油、 蜡、 石蜡、 淀粉、 黄芪胶、 说 明 书 4/10 页 6 CN 104640541 B 6 纤维素衍生物、 聚乙二醇、 硅胶、 皂土、 硅石、 滑石或氧化锌等用作载体成分。 0035 当本发明的剂型是粉末或喷雾剂时， 可以将乳糖、 滑石、。

25、 硅石、 氢氧化铝、 硅酸钙或 聚酰胺粉末用作载体成分， 尤其， 剂型是喷雾剂时， 可以进一步包含氟氯代烃、 丙烷/丁烷或 二甲醚等推进剂。 0036 当本发明的剂型是溶液或乳状液时， 将溶剂、 溶剂化剂或乳液化剂用作载体成分， 例如有水、 乙醇、 异丙醇、 碳酸乙酯、 乙酸乙酯、 苯甲醇、 苯甲酸苄酯、 丙二醇、 1,3-丁基乙二 醇油、 甘油脂肪酸酯、 聚乙二醇或山梨聚糖的脂肪酸脂。 0037 当本发明的剂型是悬浮液时， 可以将水、 乙醇或丙二醇等液态稀释剂， 乙氧基化异 硬脂醇、 聚氧乙烯山梨糖醇酯及聚氧乙烯山梨聚糖酯等悬浮剂， 微晶纤维素、 甲羟基铝 (aluminum methahy。

26、droxide)、 皂土、 琼脂或黄芪胶等用作载体成分。 0038 当本发明的剂型是含有表面活性剂的清洁剂时， 可以将脂肪醇硫酸盐、 脂肪醇醚 硫酸盐、 磺基琥珀酸单酯、 羟乙基磺酸盐、 咪唑啉衍生物、 甲基牛磺酸盐、 肌氨酸盐、 脂肪酸 酰胺醚硫酸酯、 烷基酰胺甜菜碱、 脂肪醇、 脂肪酸甘油酯、 脂肪酸二乙醇酰胺、 植物油、 羊毛 脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等用作载体成分。 0039 有益效果 0040 根据本发明的包含提取于知母的用化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐 的组合物， 具有保湿皮肤或改善皱纹的效果， 尤其， 通过防止皮肤水分损失来抑制紫外线诱 发的皮肤组织损伤， 从而具。

27、有预防或缓解皱纹的效果。 0041 因此， 所述组合物可以有益地适用于具有保湿皮肤或改善皱纹效果的皮肤外用剂 或化妆品。 附图说明 0042图1示出根据本发明的一实施例的利用模拟实验板()的无毛大鼠皮肤的 皱纹形成程度的图像。 0043 图2示出根据本发明的一实施例的无毛大鼠皮肤的皱纹长度的变化结果。 0044 图3示出根据本发明的一实施例的无毛大鼠皮肤的皱纹深度的变化结果。 0045 图4示出根据本发明的一实施例的通过实施苏木精伊红(H&E)染色的无毛大鼠皮 肤组织的角质层厚度的测定结果。 0046 图5示出根据本发明的一实施例的通过实施梅森三色染色法( M assons trichome)。

28、染色的无毛大鼠皮肤组织的胶原纤维的观察结果。 0047 图6示出根据本发明的一实施例的经过H&E染色处理的无毛大鼠皮肤组织的表皮 厚度的测定结果。 0048 图7示出根据本发明的一实施例的无毛大鼠皮肤组织的经皮水分损失量的测定结 果的图表。 具体实施方式 0049 下面， 通过下述制备例及实施例， 对本发明进行更加详细的说明。 然而， 下述制备 例及实施例仅是用于例示本发明， 本发明的范围并不限定于此。 0050 实施例： 从知母提取用化学式1表示的化合物 说 明 书 5/10 页 7 CN 104640541 B 7 0051 知母购自OMNIHERB公司， 并保存在维持5.50.3的温度和。

29、555的湿度的药 材存储用冰箱中。 对3kg的知母， 使用其10倍量(体积)的70乙醇， 按每次3小时， 进行3次回 流冷却提取而制备提取物。 将利用滤纸得到的滤液， 利用减压浓缩仪去除溶剂后制备出知 母乙醇提取物。 对所述知母乙醇提取物， 按照正己烷、 乙酸乙酯及正丁醇的顺序， 逐步进行 处理， 从而获得正丁醇馏分。 对于获得的正丁醇馏分， 使用甲醛系(diaion)HP-20树脂， 用水 和甲醇的混合溶液， 通过梯度洗脱柱式色谱法分离出5个小馏分。 这时， 使用的水和甲醇的 比例为10:0(v/v)至7:3(v/v)。 5个小馏分中， 对于第4个小馏分， 再次利用RP-18反相树脂 (Li。

30、Chroporep)， 用水和甲醇的混合液， 实施梯度洗脱反相色谱法， 从而分离出用所述化学 式1表示的化合物， 这时， 使用的水和甲醇的比例为10:0(v/v)至5:5(v/v)。 0052 1H核磁共振(NMR)(400MHZ， 吡啶(Pyridine)-d5) :0.83(3H， s， H-18)， 0.98(3H， s， H-19)， 1.09(3H， d， J6.8Hz， H-21)， 1.17(3H， d， J6.4Hz， H-27)， 3.39(1H， d， J10.8Hz， H-26 )， 4.94(1H， d， J7.6Hz， H-1 )， 5.31(1H， d， J7.6H。

31、z， H-1 )。 0053 13C核磁共振(NMR)(100MHz， 吡啶-d5) :110.0(C-22)， 106.5(C-1 )， 102.9(C-1 )， 82.2(C-2 )， 81.7(C-16)， 78.7(C-5 )， 78.3(C-3 )， 77.3a(C-2 )， 76.9(C-5 )， 75.8a(C- 3)， 75.5a(C-3 )， 72.0(C-4 )， 70.2(C-4 )， 65.4(C-26)， 63.3(C-17)， 63.1(C-6 )， 62.5(C- 6 )， 56.8(C-14)， 42.8(C-20)， 41.2(C-13)， 40.6b(C-1。

32、2)， 40.5b(C-9)， 37.3(C-5)， 35.8c (C-10)， 35.6c(C-8)， 32.5(C-15)， 31.3(C-1和C-4)， 27.9(C-25)， 27.3(C-2)， 27.1(C-6和C- 7)， 26.7(C-23)， 26.5(C-24)， 24.3(C-19)， 21.5(C-11)， 16.9(C-18)， 16.6(C-27)， 15.2(C- 21)。 0054 实验例： 对保湿及改善皱纹的效果的分析 0055 将所述实施例中制备的用化学式1表示的化合物涂布于无毛大鼠的皮肤上而对保 湿及改善皱纹的效果进行了确认。 0056 1)实验动物及试料。

33、给药 0057 从中央实验动物中购入实验动物， 7周龄的雄性无毛大鼠(雄性HR-1， 无毛小鼠 (hairless mice)， 日本SLC公司)， 适应1周之后进行使用。 适应期间， 对普通状态进行观察， 将状态健康的动物用于试验。 饲养环境维持在233的温度、 505的湿度、 12小时(7: 00-19:00/照明时间)的明暗周期。 试验期间， 将实验动物进行分组， 每个实验组为7只。 将它 们放在聚碳酸酯笼子中(200320145mm， Three shine有限公司， 韩国大田市)进行饲养， 使小鼠自由摄取专用饲料5L79(查尔斯河， 美国)及经过紫外线消毒的自来水。 0058 试料给。

34、药是分为对照组(Con)、 紫外线处理组(UV)、 赋形剂处理组(Vehicle)及所 述实施例中制备的用化学式1表示的化合物处理组进行实验。 通过皮肤涂布共实施12周试 料给药。 对于化合物处理组(TM)， 使化合物溶解于二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide)后， 在 1:1:1比例的丙二醇(Propylene glycol)、 乙醇(ethanol)、 聚乙二醇(Poly ethylene glycol)的混合溶液中进行溶解而制得剂型(化合物的最终浓度是0.25(w/v)， 以每6cm2 的皮肤面积为40ul的用量， 将上述制得的剂型涂抹于皮肤上， 一周中涂抹5天， 每天涂抹一。

35、 次。 赋形剂处理组， 除了不加入化合物以外， 其它与所述化合物处理组相同。 0059 紫外线照射是使用紫外线(UVB)灯(Mineralight UV Display lamp， UVP， 美国)实 施。 对于除了对照组以外的其它实验组， 按每周3次， 进行8周的紫外线照射。 对于紫外线的 照射量， 按照1-2周期间为60mJ/cm2、 3-5周期间为90mJ/cm2、 6-8周期间为120mJ/cm2进行8周 说 明 书 6/10 页 8 CN 104640541 B 8 的照射， 紫外线照射量是利用光测定仪(意大利德尔特(Delta OHM)， 意大利)测定光量之 后， 通过照射时间来调。

36、节光量。 下述表1中示出各实验组的紫外线照射及试料使用量。 0060 表1 0061 实验组紫外线照射试料使用量 对照组(Con) 紫外线处理组(UV) 赋形剂处理组(Vehicle) 用化学式1表示的化合物处理组(TM)0.25(w/v) 0062 2)皮肤皱纹的测定 0063 通过使用硅橡胶在各实验组的无毛老鼠的背部皮肤部位上， 制作模拟实验板来测 定皱纹的形成程度。 使用Repliflo卡盘附件包(Cart ridge kit)(CuDerm公司， 美国)， 薄薄 地涂布在背部， 完全晾干之后， 将圆盘小心取下， 从而制成模拟实验板。 模拟实验板的制作 在20-22的温度和40-50的湿。

37、度的恒温恒湿状态下实施。 之后， 在通过特殊光源制得的 卡盘中插入制作的模拟实验板， 以35度的入射角通过光源而根据模拟实验板的厚度生成影 子的明暗影像， 利用CCD摄像机进行文档化后， 利用作为电脑影像分析系统的皮肤粘度计 (Skin Visiometer)VL650软件对皱纹的深度和长度进行测定， 并在图1至图3中示出其结 果。 0064 如图1所示， 可以确认紫外线照射组(UV)与对照组(CON)相比， 诱发了又粗又深的 皱纹和细纹； 与紫外线照射组(UV)相比， 用化学式1表示的化合物处理组(TM)的粗皱纹得到 了缓解。 0065 如图2所示， 可以确认紫外线照射组(UV)与对照组(C。

38、ON)相比， 皱纹长度增加(p 0.0001)。 与此相反， 可以确认用化学式1表示的化合物处理组(TM)与紫外线照射组(UV)和 载体相比， 皱纹的平均长度显著减少(p0.0001)。 0066 并且， 如图3所示， 可以确认紫外线照射组(UV)与对照组(CON)相比， 皱纹的深度增 加(p0.0001)； 用化学式1表示的化合物处理组(TM)与紫外线照射组(UV)相比， 皱纹的深 度显著减少(p0.0001)。 0067 通过上述结果可以确认， 使用实施例中制备的用化学式1表示的化合物来进行处 理的情况下， 能够显著减少由于紫外线而增加的皱纹的长度及深度。 因此， 可以确认用所述 化学式1。

39、表示的化合物对改善皮肤皱纹有效， 尤其， 具有缓解由于紫外线产生的皱纹的效 果。 0068 3)皮肤的组织学上的观察 0069 为了确认抑制皱纹的功效， 取出各实验组的无毛大鼠背部的皮肤组织， 固定在 10的中性福尔马林溶液中后， 通过常规方法经过水洗、 脱水、 透明化、 渗透过程后， 用石蜡 包埋， 并以4 m厚度制成切片后， 实施苏木精伊红(Hematoxylin&Eosin(H&E)染色及梅森三 色(Massons trichome)染色。 将其结果表示在图4及图5中。 0070 如图4所示， 实施H&E染色的结果可以确认， 紫外线照射组(UV)和载体与对照组 (CON)相比， 产生角质。

40、层， 表皮厚度也加厚。 相反， 用化学式1表示的化合物处理组(TM)与紫 外线照射组(UV)和载体相比， 角质层得到缓解， 表皮厚度也减少。 这说明， 用所述化学式1表 说 明 书 7/10 页 9 CN 104640541 B 9 示的化合物表现出具有缓解角质层及减少表皮厚度的效果。 0071 并且， 如图5所示， 梅森三色染色结果， 可以观察到， 对照组(CON)的大部分组织， 胶 原蛋白部位均匀分布到真皮层， 但是紫外线照射组(UV)和载体， 没有明显观察到胶原蛋白 纤维。 相反， 可以确认用化学式1表示的化合物处理组(TM)与紫外线照射组(UV)相比， 胶原 蛋白纤维有增加。 因此， 。

41、可以看出用所述化学式1表示的化合物具有抑制由于紫外线产生的 破坏胶原组织的反应的效果。 0072 4)根据表皮厚度变化的皱纹抑制功能的分析 0073 利用安装在显微镜上的尺子测定所述实验例3)的实施H&M染色的从组织的角蛋白 层到表皮细胞基底膜(epidermal basement mem brane)的厚度， 并将其结果表示在图6中。 0074 如图6所示， 可以从紫外线照射组(UV)中确认， 由于紫外线的照射， 表皮厚度有增 加(p0.0001)。 并且， 可以在用化学式1表示的化合物处理组(TM)中确认表皮厚度显著减 少(p0.05)。 0075 5)经皮水分损失量(TEWL： tran。

42、sepidermal water loss)分析 0076 为了确认保湿效果， 对各实验组的无毛大鼠的背部皮肤实施经皮水分损失量的分 析。 经皮水分损失量的数值为从皮肤散发的水分量， 数值越高表示皮肤的保湿功能降低， 并 表示皮肤固有的屏障功能受到损伤。 对于经皮水分蒸发量， 在恒温、 恒湿条件(23， 相对湿 度： 50)下， 通过水分流失测试仪(Tewameter Courage&Khazaka， 德国)， 根据面积和时间 计算出从皮肤中蒸发的水分量， 对于蒸发的水分量(g/m2/hr)， 用保湿电子传感器读取， 然 后将其数值化， 从而测定皮肤的保湿力。 结果表示在图7中。 0077 如。

43、图7所示， 可以确认由于紫外线照射， 皮肤屏障受损， 从而皮肤保湿功能降低(p 0.0001)， 并且确认了通过用化学式1表示的化合物处理， 明显防止由于紫外线诱发的皮 肤水分损失(p0.01)。 因此， 可以确认， 用所述化学式1表示的化合物具有保湿皮肤的效 果。 0078 对于上述所有实验的结果值， 通过利用方差分析(one-way AN OVA)和t检验 (Student t-test)来鉴定对照组和实验组之间的显著性(p0.05)。 0079 下面， 对本发明的含有用所述化学式1表示的化合物的化妆品组合物的剂型例进 行说明， 然而， 剂型例仅是示例性的， 本发明的化妆品组合物的剂型并不。

44、限定于此。 0080 剂型例1： 柔软化妆水(skin)的制备 0081 在本发明的含有化学式1的化合物的化妆品中， 将柔软化妆水(skin)的制备例示 于下述表2中。 0082 表2 说 明 书 8/10 页 10 CN 104640541 B 10 0083 0084 所述表2中， 在原料物质11中， 按顺序投入原料物质2、 3、 4及8， 并进行搅拌而使其 溶解后， 将原料物质5在60下进行加热而使其溶解之后将原料物质10投入到其中并进行 搅拌， 然后将其投入到所述原料物质11(投入有原料物质2、 3、 4及8)中。 最后， 将原料物质1 和6 、 7及9投入到所述原料物 质11中而充分。

45、进行搅拌后 ， 使其通过高压均 质机 (Microfludizer)后进行熟化。 0085 剂型例2： 营养化妆水(洗剂)的制备 0086 在本发明的含有化学式1的化合物的化妆品中， 将营养化妆水(洗剂)的制备例示 于下述表3中。 0087 表3 0088 0089 所述表3中， 使原料物质2、 3、 4及5在一定的温度下均质化， 并将其称作非离子系两 亲性脂质。 将所述非离子系两亲性脂质和原料物质1和6、 7及13进行混合， 使其在一定的温 度下均质化， 并使其通过高压均质机(Microfludizer)， 接着在一定的温度下慢慢地添加原 说 明 书 9/10 页 11 CN 1046405。

46、41 B 11 料物质8， 并使其均质化之后， 再次使其通过高压均质机(Microflud izer)。 然后， 投入原料 物质9、 10、 11及12， 并进行分散， 从而使其稳定并熟化。 0090 剂型例3： 营养霜的制备 0091 在本发明的含有化学式1的化合物的化妆品中， 将营养霜的制备例示于下述表4 中。 0092 表4 0093 0094 所述表4中， 使原料物质2、 3、 4及5在一定的温度下均质化， 并将其称作非离子系两 亲性脂质。 将所述非离子系两亲性脂质和原料物质1和6、 7及13进行混合， 使其在一定的温 度下均质化， 并使其通过高压均质机(Microfludizer)，。

47、 接着在一定的温度下慢慢地添加8， 并使其均质化之后， 再次使其通过高压均质机(Microfludizer)。 然后， 投入原料物质9、 10、 11及12， 并进行分散， 从而使其稳定并熟化。 0095 工业实用性 0096 根据本发明的一种含有提取于知母的用化学式1表示的化合物或其药学上可接受 的盐的组合物具有保湿皮肤或改善皱纹的效果， 尤其， 通过防止皮肤损失水分来抑制由于 紫外线诱发的皮肤组织损伤， 从而具有预防或缓解皱纹的效果。 0097 因此， 所述组合物可以有益地适用于具有保湿皮肤或改善皱纹的效果的皮肤外用 剂或化妆品中。 说 明 书 10/10 页 12 CN 104640541 B 12 图1 图2 说 明 书 附 图 1/3 页 13 CN 104640541 B 13 图3 图4 图5 说 明 书 附 图 2/3 页 14 CN 104640541 B 14 图6 图7 说 明 书 附 图 3/3 页 15 CN 104640541 B 15 。