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1、10申请公布号CN104098524A43申请公布日20141015CN104098524A21申请号201410199491722申请日20140512C07D257/08200601A61K31/395200601A61P35/0020060171申请人浙江工业大学地址310014浙江省杭州市下城区潮王路18号72发明人饶国武靳浩刘瑞菊李晓敏74专利代理机构杭州天正专利事务所有限公司33201代理人黄美娟俞慧54发明名称1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪及制备和应用57摘要本发明公开了1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪及制备和应用，所述1间甲氧基苯甲酰基。
2、3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的结构如式所示。所述的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制备方法包括将式所示的3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪加入有机溶剂A中，再加入碱性催化剂，012条件下滴加间甲氧基苯甲酸酐或间甲氧基苯甲酰氯，滴完后室温反应，反应完毕后反应液经分离纯化得到式所示的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，所述的碱性催化剂为下列之一三乙胺、N,N二甲基苯胺、氢氧化钠、或氢氧化钾。本发明还提供了所述的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪在制备预防或治疗人乳腺癌或人肺癌药物中的应用。51INTCL权利要求书1页说明书7页19中华。
3、人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书7页10申请公布号CN104098524ACN104098524A1/1页211间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，其具有下列结构式2一种如权利要求1所述的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制备方法，所述制备方法包括将式所示的3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪加入有机溶剂A中，再加入碱性催化剂，012条件下滴加间甲氧基苯甲酸酐或间甲氧基苯甲酰氯，滴完后室温反应，反应完毕后反应液经分离纯化得到式所示的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，所述的碱性催化剂为下列之一三乙胺、N,N二甲基苯。
4、胺、氢氧化钠、或氢氧化钾；3如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述有机溶剂A选自下列之一二氯甲烷、氯仿、或甲苯。4如权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于所述的3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪与碱性催化剂、间甲氧基苯甲酸酐或间甲氧基苯甲酰氯的投料摩尔比为101314。5如权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于所述的分离纯化采用如下步骤反应液用水洗，分出有机相，蒸除溶剂后，残留物经重结晶或柱层析得到式所示的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪。6如权利要求5所述的制备方法，其特征在于重结晶溶剂为下列之一乙醇、氯仿或丙酮。7如权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的柱层。
5、析的操作步骤具体如下取蒸除溶剂后的残留物于单口瓶中，加入有机溶剂B将其溶解，获得溶解液，然后向溶解液中加入残留物质量的12倍量的柱层析硅胶，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的残留物与硅胶的混合物，将混合物装柱上样，然后以体积比为05101的石油醚和乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，直接进行洗脱，TLC跟踪检测，根据TLC检测收集含式所示的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的洗脱液，收集液浓缩干燥，获得式所示的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪；所述有机溶剂B为下列之一乙醇、二氯甲烷或乙酸乙酯。8如权利要求1所述的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪在制备预防。
6、或治疗人乳腺癌或人肺癌药物中的应用。权利要求书CN104098524A1/7页31间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪及制备和应用一技术领域0001本发明涉及1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪及其制备方法，以及所述化合物在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的应用。二背景技术0002四嗪类化合物具有许多较好的物理性质、光谱性质以及较高的反应活性，尤其一些特殊结构的四嗪衍生物具有明显的抗病毒活性、抗肿瘤活性，以及可用作为农药及杀虫剂。例如农药目前已有两个品种四螨嗪和氟螨嗪上市，医药已有一个品种抗肿瘤药替莫唑胺上市。00031978年，文献报道3,6二苯炔基六氢1,2,4。
7、,5四嗪具有抗肿瘤活性参阅EREMEEV,AV；TIKHOMIROVA,DA；TYUSHEVA,VA；LIEPINS,FKHIMGETEROTSIKLSOEDIN,1978,753，这是1,2,4,5四嗪类化合物首次被报道可能有潜在的抗肿瘤活性。之后，陆续报道了一些1,2,4,5四嗪类化合物具有抗肿瘤活性，例如具有抗肿瘤活性的3,6双2羟基5氯苯基1,2,4,5四嗪参阅RAO,GW；HU,WXBIOORGMEDCHEMLETT2006,1614,3702、N1,N4二间甲基苯基3,6二甲基1,2,4,5四嗪1,4二甲酰胺参阅RAO,GW；GUO,YM；HU,WXCHEMMEDCHEM,2012。
8、,76,973等。当然大多数1,2,4,5四嗪类化合物并不具有抗肿瘤活性。三发明内容0004本发明的第一个目的在于提供一种具有抗人乳腺癌和人肺癌活性的新型四嗪化合物1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪。0005本发明的第二个目的是提供所述1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制备方法，该制备方法简便，易于操作，原料易得，且生产成本较低，适于工业化应用。0006本发明的第三个目的是提供所述1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪在制备预防或治疗人乳腺癌或人肺癌药物中的应用。0007下面对本发明采用的技术方案做具体说明。0008本发明提供了一种新型四嗪化。
9、合物1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，其具有下列结构式0009说明书CN104098524A2/7页40010本发明还提供了所述的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制备方法，所述制备方法包括将式所示的3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪加入有机溶剂A中，再加入碱性催化剂，012条件下滴加间甲氧基苯甲酸酐或间甲氧基苯甲酰氯，滴完后室温反应，反应完毕后反应液经分离纯化得到式所示的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，所述的碱性催化剂为下列之一三乙胺、N,N二甲基苯胺、氢氧化钠、或氢氧化钾；00110012本发明所述制备1间甲氧基苯甲酰基3苯基1。
10、,4二氢1,2,4,5四嗪的反应如下列反应式A所示，反应式A是未有文献报道的00130014进一步，所述的3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪与碱性催化剂、间甲氧基苯甲酸酐或间甲氧基苯甲酰氯的投料摩尔比为101314。0015进一步，所述有机溶剂A选自下列之一二氯甲烷、氯仿、或甲苯。所述有机溶剂A用量以能够溶解3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪、碱性催化剂和间甲氧基苯甲酸酐或间甲氧基苯甲酰氯即可。0016进一步，反应过程采用TLC跟踪检测展开剂为体积比为05101的石油醚和乙酸乙酯混合溶液，以确定反应终点，反应时间一般在0510小时。0017进一步，所述的分离纯化采用如下步骤反应液用水洗，分出有。
11、机相，蒸除溶剂后，残留物经重结晶或柱层析得到式所示的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪。0018更进一步，重结晶溶剂为下列之一乙醇、氯仿或丙酮。0019更进一步，所述的柱层析的操作步骤具体如下取蒸除溶剂后的残留物于单口瓶中，加入有机溶剂B将其溶解，获得溶解液，然后向溶解液中加入残留物质量的12倍量的柱层析硅胶，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的残留物与硅胶的混合物，将混合物装柱上样，然说明书CN104098524A3/7页5后以体积比为05101的石油醚和乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，直接进行洗脱，TLC跟踪检测展开剂为体积比为05101的石油醚和乙酸乙酯混合溶液，根据TLC检测收集含式。
12、所示的化合物的洗脱液，收集液浓缩干燥，获得式所示的化合物；所述有机溶剂B为下列之一乙醇、二氯甲烷或乙酸乙酯；所述有机溶剂B用量以能够溶解残留物即可。0020本发明所述的有机溶剂A、有机溶剂B，所表示的都是指用于反应或柱层析的有机溶剂，这里的字母并没有特指某一些有机溶剂的含义，字母只是为了便于表答清楚，用来区分这些出现在不同的步骤中的有机溶剂。0021本发明提供的1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪对人乳腺癌细胞株MCF7或人肺癌细胞株A549具有较好的抑制率，可应用于制备预防或治疗人乳腺癌或人肺癌的药物。0022本发明的有益效果主要体现在1提供了一种新型的、具有好的抗癌尤其人乳。
13、腺癌、人肺癌活性的四嗪化合物；2提供了该四嗪化合物的制备方法，该制备方法简单，易于操作，原料易得且生产成本较低，适于实用，有望应用于制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中。四具体实施方式0023本发明结合具体实施例作进一步的说明，以下的实施例是说明本发明的，而不是以任何方式限制本发明。0024间甲氧基苯甲酰氯购买得到。间甲氧基苯甲酸酐的制备参照文献WOOD,WJL；PATTERSON,AW；TSURUOKA,H；JAIN,RK；ELLMAN,JAJAMCHEMSOC,2005,12744,1552115527的方法，以间甲氧基苯甲酸为原料与三光气反应制备得到。0025实施例13苯基1,4二氢1,2,4。
14、,5四嗪的制备00263苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制备参照文献BOHLE,MSCIENCEOFSYNTHESIS,2004,17,585和RAO,GW；HU,WXBIOORGMEDCHEMLETT2006,1614,3702的方法按以下反应路线B制备得到，00270028在100ML的三口瓶中加入1030G的醋酸甲脒，125ML苯甲腈，0066G硫粉和4ML甲醇，冰浴条件下磁力搅拌，3时开始滴加2ML的80水合肼，2MIN滴加结束，反应温度为0，继续磁力搅拌，黄色固体析出后撤去冰浴，室温反应22H后，冷却，过滤，洗涤，干燥得3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪。0029实施例21间甲氧基。
15、苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制说明书CN104098524A4/7页6备0030用40ML的氯仿溶解064G4MMOL3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，转移至50ML的三口瓶中，加109G108MMOL三乙胺，冰浴条件下磁力搅拌，12开始滴加114G4MMOL间甲氧基苯甲酸酐，2MIN滴加结束，温度为8，撤冰浴，室温反应4H后反应过程采用TLC跟踪检测，展开剂为12的石油醚和乙酸乙酯混合溶液，反应液用水20ML2洗涤，分出有机相，蒸除溶剂后，残留物柱层析，即取蒸除溶剂后的残留物加入20毫升乙醇溶剂将其溶解，获得溶解液，然后向溶解液中加入24克硅胶300400目粗孔ZCXII型。
16、柱层析硅胶，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的残留物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比12的石油醚和乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测展开剂为11的石油醚和乙酸乙酯混合溶液，根据TLC检测收集含式所示的化合物的洗脱液，收集液蒸除溶剂，干燥得到固体产物，即1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，收率418以3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪物质的量计，下同，熔点131132。1HNMR500MHZ,CDCL33859S,3H,70827105M,H,7305S,H,73667398M,H,74427554M,5H,76337649M,2H,7690S,HIRKBR,CM。
17、13304,1758,1642,1627,1473,1434,1388,1046,9660031实施例31间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制备0032用40ML的二氯甲烷溶解064G4MMOL3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，转移至50ML的三口瓶中，加0022G04MMOL氢氧化钾，冰浴条件下磁力搅拌，0开始滴加212G74MMOL间甲氧基苯甲酸酐，10MIN滴加结束，温度为3，撤冰浴，室温反应1H后反应过程采用TLC跟踪检测，展开剂为101的石油醚和乙酸乙酯混合溶液，反应液用水20ML2洗涤，分出有机相，蒸除溶剂后，残留物加入20毫升乙醇，搅拌加热，回流510MIN，。
18、趁热过滤除去不溶物，滤液冷却，析出固体，过滤，干燥得到固体产物，即1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，收率445，熔点131132。1HNMR和IR同实施例2。0033实施例41间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制备0034用40ML的甲苯溶解064G4MMOL3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，转移至50ML的三口瓶中，加145G12MMOLN,N二甲基苯胺，冰浴条件下磁力搅拌，10开始滴加458G16MMOL间甲氧基苯甲酸酐，20MIN滴加结束，温度为7，撤冰浴，室温反应2H后反应过程采用TLC跟踪检测，展开剂为101的石油醚和乙酸乙酯混合溶液，反应液用。
19、水20ML2洗涤，分出有机相，蒸除溶剂后，残留物加入20毫升氯仿，搅拌加热，回流510MIN，趁热过滤除去不溶物，滤液冷却，析出固体，过滤，干燥得到固体产物，即1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，收率406，熔点131132。1HNMR和IR同实施例2。0035实施例51间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制备0036用40ML的甲苯溶解064G4MMOL3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，转移至50ML的三口瓶中，加145G12MMOLN,N二甲基苯胺，冰浴条件下磁力搅拌，6开始滴说明书CN104098524A5/7页7加273G16MMOL间甲氧基苯甲酰氯。
20、，20MIN滴加结束，温度为2，撤冰浴，室温反应05H后反应过程采用TLC跟踪检测，展开剂为101的石油醚和乙酸乙酯混合溶液，反应液用水20ML2洗涤，分出有机相，蒸除溶剂后，残留物加入20毫升丙酮，搅拌加热，回流510MIN，趁热过滤除去不溶物，滤液冷却，析出固体，过滤，干燥得到固体产物，即1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，收率422，熔点131132。1HNMR和IR同实施例2。0037实施例61间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制备0038用40ML的氯仿溶解064G4MMOL3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，转移至50ML的三口瓶中，加0016G。
21、04MMOL氢氧化钠，冰浴条件下磁力搅拌，4开始滴加068G4MMOL间甲氧基苯甲酰氯，10MIN滴加结束，温度为6，撤冰浴，室温反应10H后反应过程采用TLC跟踪检测，展开剂为101的石油醚和乙酸乙酯混合溶液，反应液用水20ML2洗涤，分出有机相，蒸除溶剂后，残留物柱层析洗脱剂为石油醚乙酸乙酯101体积比，残留物用20毫升二氯甲烷溶解，其他操作同实施例2，得到固体产物，即1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，收率413，熔点131132。1HNMR和IR同实施例2。0039实施例71间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪的制备0040用30ML的二氯甲烷溶解064。
22、G4MMOL3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，转移至50ML的三口瓶中，加040G4MMOL三乙胺，冰浴条件下磁力搅拌，2开始滴加043G4MMOL间甲氧基苯甲酰氯，4MIN滴加结束，温度为9，撤冰浴，室温反应8H后反应过程采用TLC跟踪检测，展开剂为61的石油醚和乙酸乙酯混合溶液，反应液用水20ML2洗涤，分出有机相，蒸除溶剂后，残留物柱层析洗脱剂为石油醚乙酸乙酯61体积比，残留物用20毫升乙酸乙酯溶解，其他操作同实施例2，得到固体产物，即1间甲氧基苯甲酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪，收率410，熔点131132。1HNMR和IR同实施例2。0041实施例8抗癌活性体外测试0042。
23、1将实施例27制得的化合物进行了人乳腺癌和人肺癌细胞株生物活性测试。顺铂DDP作为对照药品，顺铂是癌症治疗的常用化学药物，具有较高疗效。结果显示化合物对人乳腺癌细胞株MCF7和人肺癌细胞株A549具有好的抗癌活性，化合物对人乳腺癌细胞株MCF7的抑制活性与顺铂相当。0043测试方法四氮唑盐METHYLTHIAZOLTETROZOLIUM，MTT还原法。0044细胞株人乳腺癌细胞株MCF7和人肺癌细胞株A549。上述肿瘤细胞株购自中国科学院上海生命科学院细胞库。0045实验步骤如下00461样品的准备对于可溶样品，每1MG用40LDMSO溶解，取2UL用1000L培养液稀释，使浓度为50G/ML。
24、，再用培养液连续稀释至使用浓度。00472细胞的培养0048A培养基的配制每1000ML培养基中含80万单位青霉素，10G链霉素，10灭说明书CN104098524A6/7页8活胎牛血清。0049B细胞的培养将肿瘤细胞接种于培养基中，置37，5CO2培养箱中培养，35D传代。0050C测定样品对肿瘤细胞生长的抑制作用0051将细胞用EDTA胰酶消化液消化，并用培养基稀释成1106/ML，加到96孔细胞培养板中，每孔100UL，置37，5CO2培养箱中培养。接种24H后，加入用培养基稀释的样品，每孔100L，每个浓度加3孔，置37，5CO2培养箱中培养，72H后在细胞培养孔中加入5MG/ML的M。
25、TT，每孔10L，置37孵育3H，加入DMSO，每孔150L，用振荡器振荡，使甲臢完全溶解，用酶标仪在570NM波长下比色。以同样条件用不含样品，含同样浓度DMSO的培养基培养的细胞作为对照，计算样品对肿瘤细胞生长的IC50。0052测试的结果如表1所示0053表1化合物对MCF7和A549癌细胞生长的抑制作用005400552根据实施例1和2，以乙酸酐替代间甲氧基苯甲酸酐，其他操作同实施例1和2，合成了化合物1乙酰基3苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪。参照实施例2，以1,4二氢1,2,4,5四嗪为原料，分别与乙酸酐和丙酸酐反应得到了1乙酰基1,4二氢1,2,4,5四嗪和1丙酰基1,4二氢1,。
26、2,4,5四嗪。参照实施例7，以3,6二苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪为原料与间甲氧基苯甲酰氯反应得到了1间甲氧基苯甲酰基3,6二苯基1,4二氢1,2,4,5四嗪。根据上述方法，将制得的化合物、和进行了人乳腺癌细胞株MCF7和人肺癌细胞株A549生物活性测试，测试结果表明化合物、和对人乳腺癌细胞株MCF7和人肺癌细胞株A549抑制效果均较差，化合物、和对人乳腺癌细胞株MCF7和人肺癌细胞株A549的抗癌活性远不如化合物。具体结果如表2和表3所示0056表2化合物对MCF7和A549癌细胞生长的抑制作用0057说明书CN104098524A7/7页900580059表3化合物、和对MCF7和A549癌细胞生长的抑制作用00600061上述抗癌活性体外测试实验表明化合物对人乳腺癌细胞株MCF7和人肺癌细胞株A549生长的抑制作用显著。而其它4个结构类似的化合物、和对人乳腺癌细胞株MCF7和人肺癌细胞株A549生长的抑制作用均不明显。说明书CN104098524A。