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利用氨基吡啶治疗中风相关的感觉运动损伤的方法
1.发明领域
本发明涉及与中风有关的损伤，具体地，涉及感觉运动损伤的治疗。
2.背景技术
中枢神经系统(CNS)损伤是严重的健康问题。CNS损伤一般不能完全治愈，从而使受试者遗留一定程度的永久性功能障碍。所遗留的功能障碍可以包括运动、感觉、认知、情绪和自主性异常。
CNS损伤的重要类型包括中风后的脑损伤。在西方国家，中风是第三大死亡原因，并且是造成残疾的主要原因。因此，中风造成了巨大的社会经济负担。中风的病理学可以是缺血性的或出血性的，其中缺血性是中风的主要情形。缺血性中风可以由在体内其他位置形成并通过血流移动至脑的凝块所引起(栓塞性中风)或者通过在脑动脉内部形成的血凝块引起(血栓性中风)。在由于缺乏葡萄糖和氧所造成的快速梗死中心中大量细胞死亡后，梗死区域扩大数日，这是由继发性机制所造成的，如谷氨酸盐兴奋性中毒、凋亡机制和自由基的产生。在神经损伤(例如，缺血性事件)后，在没有任何治疗性干预的情况下，动物和人的功能可能恢复数天、数周和数月。然而，通常这种恢复仅是部分的，并且动物和人遭受长期或永久性残疾，其可以包括运动、感觉和认知缺陷。由于中风所引起的运动、感觉和认知损伤可以对每天日常活动和生活质量产生显著影响。中风存活者通常会留下永久性神经缺陷，据估计15-30％的中风存活者成为终身残疾(Roger等人，Circulation2012；125:22-e220)。
提高个体中风患病可能性的风险因素是熟知的。这些包括并且不局限于不会变化的风险因素：高龄、遗传、种族，性别、先前的中风或心脏病史；和可以变化、治疗和控制的风险因素：高血压、抽烟、糖尿病、颈动脉或其他动脉疾病、心房颤动、其他心脏病、镰刀形红细胞病、高血液胆固醇、不良饮食和身体不活动和肥胖症。
到目前为止，缺血性中风的直接药物疗法限制于中风后的急性期中施用的药物。急性期的范围在从损伤(例如，中风)发病时间起至损伤后约6小时。目前，对于出血性中风尚无药物疗法。
除了适合于急性使用的组织纤维蛋白溶酶原活化因子(“tPA”)和某些机械凝块取出工具外(参见Eesa等人，2011,Expert Rev Neurother.11(8):1125-1139)，目前在美国尚无批准用于中风治疗的疗法。在可用的治 疗之后，患者通常保持一定水平的功能障碍，其最多可以在约60天中稍微发生内源性改善，然后在多至一年或以上的时间内，极轻微地改善。这种恢复仅可以通过物理疗法来提高。不幸的是，多许多患者留下了永久性残疾，并觉得改善的希望渺茫。
急性中风的治疗伴有通过血栓溶解剂(具体地tPA)的时间敏感性使用在阻塞血管中恢复血流。tPA使向脑供给血液的动脉中的血凝块破裂，从而有利于恢复流向脑的血流和氧合作用。然而，仅有较小百分比的中风患者接受了成功的tPA疗法：目前，FDA仅批准在中风症状发病3小时内使用tPA，并且它仅给予了约3％的中风个体。众多患者不是tPA疗法的候选对象，他们不能及时到达医院接受tPA，或者他们随时间具有多次小梗死而不可以用tPA治疗。此外，即使是用tPA成功治疗的那些患者通常也具有一定程度的脑细胞损伤。
tPA是将纤溶酶原转化为胞浆素的丝氨酸蛋白酶。然后，胞浆素使作为堵塞脑血管并导致中风的凝块的成分的纤维蛋白断裂。理想地，在堵塞后的前3小时内施用tPA，但是可能迟至堵塞后6小时才由一些临床医师施用。不幸地，经受中风的绝大多数患者不能及时到达医院来考虑这种疗法。对于在有效时间窗口内到达医院的那些患者，施用tPA以尝试逆转血流堵塞、恢复脑氧合作用并限制脑结构损失的程度。然而，存在一些明显的禁忌征而限制了tPA的使用。3小时后接受tPA的患者具有提高的严重出血风险，从而降低了tPA的有效性。出于这些原因，tPA被限制在急性期内施用以实现任何治疗效力。
到目前为止，尚无其他FDA批准用于中风治疗的药物。目前的实验疗法，如动脉递送尿激酶原，是正在研究的使凝块破裂并恢复血流的可能方式。然而，科学文献已描述了在中风的实验动物模型中已证明对保护脑物质和恢复功能有益处的试剂。这些试剂中的大部分集中在减少急性细胞死亡、炎症和细胞凋亡，并因此必须在缺血性事件后数小时(一些长达24小时)内递送。
当个体具有中风症状时，一些组织还推荐使用阿司匹林(ASA)。使用一些其他抗血小板疗法来帮助降低中风的可能性。
到现在为止，普遍接受的是急切需要中风的治疗方法(Abe等人，2008,J Cereb Blood Flow Metab.Jul23,Epub ahead of print；Sun等人，2008,Stroke Jul10,Epub ahead of print；Dohare等人，2008,Behav Brain Res.193(2):289-97；Belayev等人，2001,Stroke32(2):553-60)。除了少数例外，例如，除了神经胶质生长因子2(GGF2)(参见Iaci等人，2010,Neuropharmacology59:640-649)，在数小时并且至多在一些实验动物中在 中风后约1天的延迟时间后施用时，试剂未显示出限制了脑损伤，恢复了功能并且提高了中风后的恢复。
急性堵塞后，通常存在局部脑物质破坏区，该区域被缺血阴影区围绕，并且如果循环不恢复，则所述缺血阴影区将在数小时内死亡。在实验模型中，可以通过神经保护剂，如NMDA拮抗剂、钙离子通道阻断剂、自由基清除剂和捕集试剂、抗凋亡剂、半胱天冬氨酸酶抑制剂、parp抑制剂等，将该缺血阴影区的死亡时间延长几小时。然而，在24至48小时后，保护细胞不会坏死死亡的希望较小，并且当凋亡死亡持续数日时，未证明抗凋亡疗法的治疗窗比急性保护疗法的更宽(Schulz等人，1998,Cell Death Differ.5(10):847-57；Komjati等人，2004,Int J Mol Med.13(3):373-82)。
通常，通过物理疗法的康复仅部分解决了在中风中存活的个体中的永久性感觉运动功能缺陷。除此之外，很少关注药理学干预来治疗这些患者中永久性功能缺陷的可能。这可能是由于通常所坚持的看法所造成的：无论做什么都不可能替换由于中风而损失的神经细胞和循环。
钾通道阻断剂
某些氨基吡啶的示例性性质是它们是钾通道阻断剂。4-氨基吡啶(4-AP)是具有这类钾通道阻断性质的氨基吡啶的实例。在临床研究所获得的4-AP血浆浓度(其通常为<1微摩尔(94ng/mL-1))下，4-AP的钾通道阻断活性似乎对这些通道中的某些类型是选择性的。有趣地，在高浓度(如毫摩尔浓度)，4-AP是钾通道的广谱阻断剂。4-AP的临床神经病学作用与钾通道阻断的分子机制是一致的。
除了控释或缓释制剂外，已使用静脉内(i.v.)施用和速释(IR)口服胶囊制剂进行了4-氨基吡啶(达伐吡啶、氨吡啶)的研究。IR胶囊的施用导致4-氨基吡啶在血浆中产生了快速并且短时间的峰值。使用口服施用的速释(IR)制剂进行了早期药物动力学研究，所述制剂是由在明胶基胶囊或口服溶液中的4-氨基吡啶粉末组成的。施用导致产生了不能良好耐受的快速改变的4-氨基吡啶血浆水平。然后，开发了缓释基质片剂(被称为氨吡啶-SR或Acorda Therapeutics,Hawthorne,NY)。对于每天两次的剂量施用，缓释基质片剂示出了改善的稳定性和适当的药物动力学谱。在(例如)美国专利5370879、美国专利5540938；美国专利8007826；和美国专利公开US2005-0228030中描述了4-氨基吡啶的缓释组合物以及这些组合物的相关使用。例如，还在2011年8月30日授权的标题为“缓释氨基吡啶组合物(Sustained Release Aminopyridine Composition)”的美国专利No.8007826和2005年10月13日公开的标题为“使用缓释氨基吡啶组合物的方法(Methods of Using Sustained Release Aminopyridine Compositions)” 的美国专利公开No.2005-0228030中描述了适合的制剂、生产方法、缓释氨基吡啶组合物的药物动力学特征和治疗多种神经病症的方法；以上每篇专利的内容以其全部内容作为参考并入本文。
化合物4-氨基吡啶是美国食品药品监督管理局批准的作为MS患者治疗的钾(K+)通道阻断剂。如图1所示，达伐吡啶(Dalfampridine)是化学品4-氨基吡啶(4AP)的美国采用名(USAN)，其分子式为C5H6N2，分子量为94.1；该化合物先前的USAN名为氨吡啶(其保持是国际一般名称)。在整个说明书中，术语“达伐吡啶”、“氨吡啶”和“4-氨基吡啶”将用于表示活性药物物质。
国际公开第WO 89/09600号公开了钾通道阻断剂和胆碱或胆碱源的组合的使用以治疗某些疾病，其包括“影响记忆或认知的中风后或中毒后综合征”(参见第6页)。
有效治疗中风引起的损伤，例如，感觉运动损伤是本领域中长期未满足的需求。具体地，在急性损伤后超过数小时、数天或数周的延迟、非急性情况中需要这种疗法。除了急性期之外的治疗，对于可以在慢性期中递送将改善感觉、运动、认知、情绪或植物神经功能的任何疗法仍存在显著未满足的医学需求。
3.发明概述
本文提供了通过施用治疗有效量的氨基吡啶或其可药用盐来治疗患有中风的患者的方法。在某些实施方式中，本文公开了患有中风的患者中中风相关损伤的治疗。具体地，本文公开了造成与中风有关或由中风引起的一种或多种感觉运动损伤的改善的治疗。具体地，本文公开了在这些治疗中使用氨基吡啶。在一种实施方式中，在本文所公开的方法中使用了一种或多种氨基吡啶。在一种实施方式中，所述氨基吡啶为单氨基吡啶或二氨基吡啶。在一些实施方式中，所述单氨基吡啶为3-氨基吡啶或4-氨基吡啶。在一种实施方式中，所述二-氨基吡啶为3,4-二氨基吡啶。
在某些实施方式中，根据本文所述的方法治疗的患者为哺乳动物。在优选的实施方式中，根据本文所述的方法治疗的患者为人。在某些实施方式中，根据本发明治疗的中风为缺血性中风。可以根据本发明治疗的缺血性中风的亚类无限制地包括大动脉粥样硬化(栓塞/血栓)、心源性脑栓塞(心源性脑栓塞中风)、小血管闭塞(腔隙性中风)以及其他病原学确定或不确定的中风。在某些实施方式中，根据本发明治疗的中风与非动脉粥样硬化血管病、高凝血状态或血液学病症有关。在另一种实施方式中，根 据本发明治疗的中风为出血性中风。可以根据本发明治疗的出血性中风的亚类无限制地包括蛛网膜下出血和脑内出血。
在一些实施方式中，以缓释组合物施用氨基吡啶或其可药用盐。在其他实施方式中，以速释组合物施用氨基吡啶或其可药用盐。在某些实施方式中，根据本发明所述的方法包括每天施用一次，每天施用两次或每天施用三次氨基吡啶或其可药用盐。在具体的实施方式中，氨基吡啶(例如，4-AP)或其可药用盐在缓释组合物中，并且每天施用一次或两次，优选口服施用。在另一个具体的实施方式中，氨基吡啶(例如，4-AP)或其可药用盐在速释组合物中，并且每天施用三次或三次以上，优选地口服施用。
在具体的实施方式中，在任何本文所述的方法中使用氨基吡啶本身而非其可药用盐。
在某些实施方式中，向患者口服、静脉内、肌内或皮下施用氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐。在一种实施方式中，向患者口服施用氨基吡啶或其可药用盐。在其中口服施用氨基吡啶或其可药用盐的一些实施方式中，将其配制成片剂、丸剂或胶囊形式。在一种实施方式中，向患者静脉内施用氨基吡啶或其可药用盐。
在具体的实施方式中，以缓释组合物向患者每天两次(即b.i.d.)口服施用氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐。在某些实施方式中，每天两次施用包括每12小时施用氨基吡啶或其可药用盐。在具体的实施方式中，缓释组合物中的氨基吡啶或其可药用盐在人中提供了约2小时至约6小时的T_max。在另一种具体的实施方式中，以缓释组合物向患者每天一次口服施用氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐。
在某些实施方式中，以约4mg至约17.5mg范围内，或4mg至17.5mg范围内(例如，约4、5、6、7、7.5、8、9、10、11、12、12.5、13、14、15、16、17或17.5mg)的量施用氨基吡啶或其可药用盐，在具体的实施方式中，其每天施用一次或两次，并且优选地处于缓释组合物中。在某些实施方式中，以约8mg至约30mg范围内，或8mg至30mg范围内(例如，约8、9、10、11、12、12.5、13、14、15、16、17、17.5、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mg)的量施用氨基吡啶或其可药用盐，在具体的实施方式中，其每天施用一次或两次，并且优选在缓释组合物中。在一些实施方式中，以4mg至40mg范围内的量施用氨基吡啶或其可药用盐。在一些实施方式中，以约5mg至15mg，5mg与10mg，5mg至7.5mg或7.5mg至10mg之间的量每天施用两次(优选地)在缓释组合物中的氨基吡啶或其可药用盐，或者以约5mg至15mg，5mg与10mg，5 mg至7.5mg或7.5mg至10mg之间的量每天施用两次(优选地)在缓释组合物中的氨基吡啶或其可药用盐。在一种实施方式中，以每天两次5mg剂量施用(优选地)在缓释组合物中的氨基吡啶或其可药用盐。在另一种实施方式中，以每天两次10mg剂量施用(优选地)在缓释组合物中的氨基吡啶或其可药用盐。在另一种实施方式中，以每天一次10mg剂量施用(优选地)在缓释组合物中的氨基吡啶或其可药用盐。在这些实施方式的一些中，所述氨基吡啶为4-氨基吡啶。在其他实施方式中，每天施用一次约8mg至30mg，8mg至20mg，10mg至15mg或10mg至20mg之间的氨基吡啶或其可药用盐(例如，在缓释组合物中)。
在本专利申请中所述的任何剂量和剂量方案可以用作在本发明所述的方法中使用的氨基吡啶或其可药用盐的治疗有效量。
在一些实施方式中，本发明所述的方法包括在中风后的早期慢性期和/或稳定慢性期施用氨基吡啶或其可药用盐。在其他实施方式中，本发明所述的方法包括在中风后的急性期施用氨基吡啶或其可药用盐。在某些实施方式中，在中风后的急性期开始治疗，并在早期慢性期和/或稳定慢性期继续。在一些实施方式中，在早期慢性期开始治疗，并在稳定慢性期继续。在一种实施方式中，在稳定慢性期开始治疗。在具体的实施方式中，在中风后当在患者中预期或观察到感觉运动功能自发恢复时开始治疗。在其他具体的实施方式中，在中风后当在患者中预期或观察到几乎没有可测量的感觉运动功能自发恢复或改善时开始治疗。在一些实施方式中，在中风后当在患者中预期或观察到感觉运动功能自发恢复时开始治疗，并在该阶段之外继续任意时间段(例如，在该阶段之外继续6个月、1年、5年、10年、20年，或者对所治疗的患者持续终生)。
在某些实施方式中，根据本发明的治疗在中风后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周；或者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月之后开始。在某些实施方式中，从治疗开始起，根据本发明的治疗持续超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月；或者1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。在一些实施方式中，根据本发明的治疗在中风后的任何时间开始。
在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少4、5、6、7、8、9、10、11或12个月开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起超过4、 5、6、7、8、9、10、11或12个月开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少8周开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少4周开始。在另一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少1周开始。在另一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起2至7天开始。在一些实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少4个月开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少6个月开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少8个月开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少12个月开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起超过4个月开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起超过6个月开始。
在具体的实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少3、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或48小时开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少6小时开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少12小时开始。在另一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少24小时开始。在另一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起至少48小时开始。在一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起超过6小时开始。在另一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐， 优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起超过24小时开始。
在另一种实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤在中风后立即开始或者从患者患有中风的时间起1小时、2小时、3小时，4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、16小时、20小时、24小时、36小时或48小时内开始。在具体的实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐，优选地治疗有效量的氨基吡啶或盐的施用步骤从患者患有中风的时间起1天内或2天内开始。在某些实施方式中，根据本发明的治疗在中风后立即开始或者在中风后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、36或48小时内开始，并且从治疗开始起继续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月；或者1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。
在某些实施方式中，本文提供了治疗患有中风的患者中一种或多种感觉运动损伤的方法。在某些实施方式中，本文提供了治疗患有中风的患者中一种或多种运动或感觉损伤的方法。根据本文所述的方法治疗的感觉运动损伤无限制地包括：运动性共济失调、全身控制损伤(global body control impairment)、协调性或平衡性损伤、体态感觉损伤、耐力损伤、手部功能损伤、手部精细协调性丧失或损伤、反射亢进、握力损伤、手力损伤、手动作敏捷性损伤、肌肉虚弱、肌张力损伤、活动范围损伤、强直、力量损伤/虚弱、震颤、肢体功能损伤、上肢功能损伤、下肢功能损伤、下肢肌力损伤、行走损伤(例如，行走速度降低或步态异常)、言语损伤(例如，发音困难)、颌功能损伤、咀嚼损伤和颌咬合损伤。
在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为行走损伤，如行走速度降低。在一种实施方式中，根据本文所述的方法治疗的感觉运动损伤为本体感受损伤。在其他实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为全身控制或体态感觉损伤。在另一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是肢体功能损伤(例如，下肢功能损伤、下肢肌力损伤或者上肢功能损伤)。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是下肢功能和/或下肢肌力损伤。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是上肢功能损伤。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是上肢强直损伤。在另一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是手部功能损伤、手部精细协调性损伤或者握力损伤。在另一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是手力损伤。在另一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是手动作敏捷性损伤在具体的实施 方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是口腔运动功能损伤。在具体的实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是言语损伤(例如，发音困难、精神性失用症或发声困难)。在具体的实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是咀嚼和/或吞咽损伤(例如，吞咽困难)。在具体的实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为面神经麻痹。在具体的实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是肢体麻痹。在具体的实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为手部麻痹。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为平衡性损伤。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是感觉损伤。在一些实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是视觉损伤，如视觉功能的感觉和/或眼部运动损伤。
在具体的实施方式中，根据本发明的治疗有效治疗了一种或多种中风相关的感觉运动损伤的症状(例如，改善、改进、减轻症状的严重性或缩短了症状的持续时间)。在一些实施方式中，根据本发明的治疗有效治疗了一种或多种中风相关的运动损伤的症状(例如，改善、改进、减轻症状的严重性或缩短了症状的持续时间)。在一些实施方式中，根据本发明的治疗有效治疗了一种或多种中风相关性感觉损伤的症状(例如，改善、改进、减轻症状的严重性或缩短了症状的持续时间)。在一些实施方式中，根据本发明的治疗恢复了由于中风引起的一种或多种运动、感觉或感觉运动功能损伤。在某些实施方式中，还提供了在反复施用氨基吡啶后(或者之前和之后)评价所述运动、感觉或感觉运动损伤水平的方法。该方法可以是本文所述的或本领域中已知的用于评价运动、感觉或感觉运动功能的任何方法。
在一些实施方式中，在本文所述的方法中使用的治疗有效量的氨基吡啶或其可药用盐使得在人中获得了至少约11、12、13、14、15、16、17、18、19或20ng/ml的C_minss或平均C_minss。在一种实施方式中，治疗有效量的氨基吡啶或其可药用盐使得在人中获得了约12ng/ml至20ng/ml的范围内的C_minss或平均C_minss。在这些实施方式的一些中，所述氨基吡啶为4-氨基吡啶。
在具体的实施方式中，在本专利申请中所述的任何方法、剂量和剂量方案可以用于治疗具有中风后稳定运动缺陷的患者。
3.1术语
为了提供对本说明书和权利要求清楚并且一致的理解，提供了以下定义：
如本文所使用的，术语“约”包括指定值加减指定值的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15％。在一种实施方式中，“约”表示 指定值的98-102％。在一种实施方式中，“约”表示指定值的95-105％。然而，具体地，对于特定ng/ml的“约”值包括正或负0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或0.1ng/ml。基于它所出现的背景，术语“约”的含义将是清楚的。
如本文所使用的，如果未提及液体或者上下文中未另外示出，则C_minss、C_maxss、C_avss值一般是指血浆。
相对于损伤，术语“改善”表示参数在治疗性方向上的变化。如本文所使用的，“改善”还包括否则将会恶化或向非治疗性方向移动的参数的稳定性。
“可药用”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其他成分相容并且管理机构，如食品和药物管理局或者欧洲药物管理局未禁止用于人或兽医施用(视情况而定)。
相对于氨基吡啶，如本文所使用的，术语“可药用盐”是指从可药用无毒酸或碱(包括无机酸或碱，或者有机酸或碱)制备的盐。在一种实施方式中，可药用盐是从可药用无毒酸制备的，所述无毒酸可以是无机酸或有机酸。在一种实施方式中，无毒酸包括，但不限于，无机酸和有机酸，如乙酸、海藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯基磺酸、甲酸、反丁烯二酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸和对甲基苯磺酸。在一种实施方式中，所述无毒酸为盐酸。适合的可药用盐对于本领域技术人员将是显而易见的并且包括S.M.Barge等人“Pharmaceutical Salts,”1977,J.Pharm.Sci.66:1-19中所述的那些，该文献以其全部内容作为参考并入本文。
如本文所使用的，术语“稳态”表示一种或多种性质不随时间变化的系统或者“稳态”表示一种或多种性质随时间在有限范围内变化的系统。通常，稳态是比动态平衡更一般的情况。如果系统处于稳态，那么最近所观察到的系统的行为一般将持续到将来。在多种系统中，直到系统开始或起始后过去一定时间才能实现稳态。这种初始状况通常鉴别为瞬态、滴定期、起始或预热期(warm-up period)。
如本文所使用的，“中风”还可以被称为“脑疾发作”。当流至脑区域的血液阻塞时，发生中风，因而脑细胞的氧和营养物的供给中断，导致部分细胞死亡。存在两种主要类型的中风：缺血性和出血性。缺血性中风是由流至脑的血液阻塞(缺血)所造成的并且几乎总是由阻断血管的血凝块所引起的，而出血性中风则是由破裂血管流血(出血)所造成的。
以下提供了其他术语和/或缩写：

缩写或专业术语解释b.i.d.(bid)每天两次cm厘米C_max最大测量的血浆浓度C_maxss稳态时的最大测量的血浆浓度C_min最小测量的血浆浓度C_minss稳态时的最小测量的血浆浓度CNS中枢神经系统达伐吡啶氨吡啶，4-氨基吡啶DAP二-氨基吡啶氨吡啶达伐吡啶，4-氨基吡啶g,kg,mg,μg,ng克，千克，毫克，微克，纳克GLP良好实验室规范h,hr小时HPLC高效液相色谱IR速释IV、i.v.或iv静脉内K⁺离子钾L,mL升，毫升LEMMT下肢手法肌力试验LCMS,LC/MS/MS液相色谱/质谱MCAO大脑中动脉闭塞Min分钟mM,μM毫摩尔，微摩尔MS多发性硬化MSWS-1212-项多发性硬化行走量表NF国家处方集p.o.口服q.d.(qd)一天一次SR缓释SS稳态T25FW定时25英尺步行t.i.d.(tid)每天三次T_max剂量施用后最大测量的血浆浓度的时间USP美国药典WS步行速度3AP或3-AP3-氨基吡啶4AP或4-AP4-氨基吡啶3,4DAP或3,4-DAP3,4-二-氨基吡啶
4.附图说明
图1示出了4-氨基吡啶的相关信息。
图2是显示剂量施用和行为测试的时间表的简图。
图3示出了前肢放置测试的结果：X轴代表中风事件后的天数(即，MCAO后的天数)。Y轴代表行为得分(0至12，其中0为正常功能，12代表最大损伤)。该图示出了如实施例中所述，在D-1、D1、D7、D14、D21、D28、D30、D32、D42、D44、D46、D56、D58、D60时每个测试组(即组1-3)中动物的平均行为得分(“D”＝天)。
图4A-图4D示出了后肢放置测试的结果：X轴代表中风事件后的天数(即MCAO后的天数)。Y轴代表行为得分(0至6，其中0为正常功能，6代表最大损伤)。图4A示出了如实施例中所述，在D-1、D1、D7、D14、D21、D28、D30、D32、D42、D44、D46、D56、D58、D60时每个测试组(即组1-3)中动物的平均行为得分。图4B示出了如实施例中所述，在D-1、D1、D7、D14、D21、D28、D30、D32、D42、D44、D46、D56、D58、D60时组1中动物的平均行为得分。图4C示出了如实施例中所述，在D-1、D1、D7、D14、D21、D28、D30、D32、D42、D44、D46、D56、D58、D60时组2中动物的平均行为得分。图4D示出了如实施例中所述，在D-1、D1、D7、D14、D21、D28、D30、D32、D42、D44、D46、D56、D58、D60时组3中动物的平均行为得分。
图5示出了身体摇摆测试的结果：X轴代表中风事件后的天数(即，MCAO后的天数)。Y轴代表行为得分。该图示出了如实施例中所述，在D-1、D1、D7、D14、D21、D28、D30、D32、D42、D44、D46、D56、D58、D60时每个测试组(即组1-3)中动物的平均行为得分。
图6示出了中风事件(即MCAO)后，在一定天数(即D-1、D1、D7、D14、D21、D28、D30、D32、D42、D44、D46、D56、D58、D60)在每个测试组(即组1-3)中动物的平均体重(g)。
图7示出了圆筒测试的结果：X轴代表中风事件后的天数(即，MCAO后的天数)。Y轴代表行为得分。该图示出了如实施例中所述，在-1天(操作前)、第7天、第21天、第30天、第32天、第44天、第46天、第58天、第60天时每个测试组(即组1-3)中动物的平均行为得分。
图8示出了进行圆筒测试的动物的总移动得分：X轴代表中风事件后的天数(即，MCAO后的天数)。Y轴代表行为得分。该图示出了在-1天(操作前)、第7天、第21天、第30天、第32天、第44天、第46天、第58天、第60天时每个测试组(即组1-3)中动物的平均行为得分。
图9示出了MCAO后组1、2和3中动物的平均梗死体积(％)。
图10示出了实施例16中所述的临床规程的研究设计。
图11示出了前肢放置测试的结果：X轴代表中风事件后的天数(即，MCAO后的天数)。Y轴代表行为得分(0至12，其中0为正常功能，12代表最大损伤)。该图示出了如实施例17中所述，每个测试组(即载体和4-AP)中动物的平均行为得分(“D”＝天)。数据表示为平均值±SEM。*＝p<0.05；
图12示出了后肢放置测试的结果：X轴代表中风事件后的天数(即，MCAO后的天数)。Y轴代表行为得分(0至6，其中0为正常功能，6代表最大损伤)。该图示出了如实施例17中所述，每个测试组(即载体和4-AP)中动物的平均行为得分(“D”＝天)。数据表示为平均值±SEM。*＝p<0.05；
图13示出了身体摇摆测试的结果：X轴代表中风事件后的天数(即，MCAO后的天数)。Y轴代表行为得分。该图示出了如实施例17中所述，每个测试组(即载体和4-AP)中动物的平均行为得分(“D”＝天)。数据表示为平均值±SEM。*＝p<0.05；
5.发明详述
作为中风的后遗症，个体患有神经损伤，并因此通常会遗留一定程度的运动、感觉或感觉运动损伤。实验治疗集中在缺血期间和缺血后不久保护神经元不会死亡。除了在人中恢复中风、TIA或多发性梗死综合征后的功能的时间限制性tPA施用外，FDA没有批准药物。
本发明提供了患有中风的患者的治疗，并且在一些实施方式中，提供了患有由于中风所造成的神经损伤的患者的治疗。具体地，本发明提供了中风后遗留一定程度的运动、感觉或感觉运动损伤的患者的治疗。这种损伤的范围可以在极轻微至严重和无行为能力。这种损伤可以是由于在缺血性患病期之后由于缺血性事件或者由于炎症和免疫应答所造成的神经元和髓磷脂的损失所引起的。这种损伤可以是由于中风所导致的调控感觉运动功能的脑区域(例如，皮层、皮质下、非皮层(noncortical))中神经元或髓磷脂的损失或损伤所引起的。例如，这种损伤可以是由于皮层运动区、感觉皮层或体感皮质中神经元或髓磷脂的损失或损伤所引起的，或者是由于感觉运动皮层或负责感觉运动功能的皮层区域中神经元或髓磷脂的损失或损伤所引起的。在一些实施方式中，根据本文所述的方法治疗的患者患有缺血性中风。在一种实施方式中，根据本文所述的方法治疗的患者患有大脑中动脉中风(如由大脑中动脉闭塞引起)。在其他实施方式中，根据本文所述的方法治疗的患者患有出血性中风。在一些实施方式中，根据本 文所述的方法治疗的患者患有由于中风(如出血性中风或缺血性中风，例如，大脑中动脉中风)所引起的稳定或慢性感觉运动功能缺陷。在一种实施方式中，根据本文所述的方法治疗的患者未患有多发性硬化。
本文公开了氨基吡啶(例如，4-AP或者3,4-DAP)或其可药用盐在治疗中风相关的神经元损失或损伤，具体地调控感觉运动功能的脑区域(例如，皮层、皮质下、非皮层(noncortical))中中风相关的神经元损失或损伤中的使用。具体地，本文公开4-AP及其他氨基吡啶或其可药用盐在恢复中风事件后感觉运动功能丧失中是有用的。如本文所述的，在优选的实施方式中，将氨基吡啶(例如，4-AP)或其可药用盐施用于已表现出与中风事件有关或在中风事件后的感觉运动功能丧失的个体。在某些实施方式中，本文描述了氨基吡啶(例如，4-AP或者3,4-DAP)或其可药用盐在治疗中风相关的神经学功能损伤中的应用。在这些实施方式的一些中，用有效量的氨基吡啶治疗患者使由于中风所引起的神经学功能损伤得到恢复或改善。
在具体的实施方式中，根据本文所述的方法治疗的损伤不影响记忆力或认知。在其他具体的实施方式中，根据本发明施用于患者的包含氨基吡啶的组合物不含胆碱、胆碱源、乙酰胆碱前体或胆碱前体。
通过本发明所述的方法治疗的患者或受试者包括，但不限于，人和非人脊椎动物，如野生动物、家养动物和农畜。在某些实施方式中，根据本发明治疗的患者为哺乳动物，例如，人、牛、狗、猫、山羊、绵羊、马或猪。在优选的实施方式中，所述患者为人。
如本文所述，本发明人表明氨基吡啶，并且具体地，4-氨基吡啶在作为人缺血性中风模型的大鼠大脑中动脉闭塞后在恢复神经学功能中是有效的。实施例2和实施例17中所述的研究使用了中风的大鼠永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型来评价4-氨基吡啶对内源恢复稳定时感觉运动功能的作用。如本文所述，本发明人已出人意料地发现4-氨基吡啶对于治疗缺血性事件后感觉运动损伤是有效的。本发明人获得的和本文所述的数据示出了甚至在缺血性事件后的慢性期内(例如，缺血性事件后4周或8周)开始剂量施用时的效力。因此，在某些实施方式中，本文描述了使用氨基吡啶，例如，4-氨基吡啶，或其可药用盐治疗患者中中风相关的感觉运动损伤的方法。在具体的实施方式中，所述治疗是在中风后的早期慢性期和/或稳定慢性期期间。在一些实施方式中，本文描述了在中风后1、2、3、4、5、6、7、8周；1、2、3、4、5、6个月；或1、2、3、4、5、10、15、20年或之后，或者在任何时候根据本文所公开的方法的患者治疗。在其他实施方式中，本文描述了在中风后1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 或22小时；或1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天内或之后根据本文所公开的方法的患者治疗。
5.1 氨基吡啶和包含氨基吡啶的组合物
氨基吡啶的结构在本领域中是熟知的。如美国专利No.5952357中所示，单或二氨基吡啶具有以下结构：

其中x为1或2。
具有以上结构式(其中x为1)的氨基吡啶为，例如，2-氨基吡啶、3-氨基吡啶和4-氨基吡啶。具有上述结构式(其中x为2)的氨基吡啶化合物为，例如，2,3-二氨基吡啶；2,5-二氨基吡啶；2,6-二氨基吡啶；3,4-二氨基吡啶；4,5-二氨基吡啶和4,6-二氨基吡啶。
在一种实施方式中，所述氨基吡啶为单或二氨基吡啶在一种实施方式中，所述单氨基吡啶为3-氨基吡啶或4-氨基吡啶。在一种实施方式中，所述二-氨基吡啶为3,4-二氨基吡啶。
如将理解的，在本文所讨论的任何或全部治疗方法中，代替氨基吡啶或除氨基吡啶之外，可以使用氨基吡啶的可药用盐。因此，在具体的实施方式中，在本文所提供的治疗中风相关损伤，例如，感觉运动损伤的方法中使用了氨基吡啶的可药用盐(即以上所列的任何氨基吡啶化合物的任何可药用盐)。这些盐可以(例如)在化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过将处于其游离碱形式的纯化化合物与适合的有机或无机酸单独反应并分离因此所形成的盐来制备。在一些实施方式中，在本发明所述的方法中使用了单或二-氨基吡啶的盐。在另一种实施方式中，使用了3-氨基吡啶或4-氨基吡啶的盐。在另一种实施方式中，使用了3,4-二氨基吡啶的盐。在一些实施方式中，使用乙酸、海藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯基磺酸、甲酸、反丁烯二酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸和对甲基苯磺酸制备了氨基吡啶的可药用盐。在一种实施方式中，如本文所使用的，1当量的氨基吡啶可以与小于1当量或与1当量或多于1当量的酸形成酸性盐。在一种实施方式中，如本文所使用的，氨基吡啶可以形成二盐酸盐在一种实施方式中，如本文所使用的，氨基吡啶可以 形成磷酸盐。对于可以在本文所述的方法中使用的可药用盐的其他说明，参见，例如，S.M.Barge等人，“Pharmaceutical Salts,”1977,J.Pharm.Sci.66:1-19，该文献以其全部内容作为参考并入本文。
在优选的实施方式中，在任何治疗本文所述的中风相关损伤的方法中使用氨基吡啶本身而非其可药用盐。
用于根据本发明的使用的优选的氨基吡啶或其可药用盐是特异性抑制钾通道的化合物。这些化合物优选地显示出相对于其他组织，选择性抑制神经元钾通道的谱或类型，类似于4-氨基吡啶或3,4-二氨基吡啶的抑制谱，或者显示出相对于其他组织，选择性抑制神经元钾通道的谱，类似于和3,4-二氨基吡啶以及4-二氨基吡啶的共同的抑制谱。优选的氨基吡啶无限制地包括4-氨基吡啶和3,4-二氨基吡啶。
用于根据本发明的使用的氨基吡啶或其可药用盐可以处于缓释或速释组合物中。在某些实施方式中，用于根据本发明的使用的氨基吡啶或其可药用盐配制用于口服、皮下、肌内或静脉内施用。
在具体的实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐的缓释组合物导致氨基吡啶或其可药用盐从剂量制剂中以缓释速率释放，从而将治疗有益的血液水平维持至少约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30小时，或超过18小时，或超过24小时，或超过30小时的一段时间。优选地，通过药物组合物的t.i.d.、b.i.d.或q.d.施用，将根据本发明的实施方式的口服剂量制剂中氨基吡啶或其可药用盐的量建立在治疗有用的血浆或CNS浓度。除非上下文中明确指出，否则术语“缓释”和“延长释放”通常是同义的。
在某些实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐的治疗有效量在4mg至17.5mg之间(例如，4、5、6、7、7.5、8、9、10、11、12、12.5、13、14、15、16、17或17.5mg)，或者在4至40mg的范围内，并且在具体的实施方式中，其每天施用一次或每天施用两次，优选地处于缓释组合物中。在具体的实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐在缓释组合物中施用。在其他具体的实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐在速释组合物中施用。在某些实施方式中，4-氨基吡啶或其可药用盐的治疗有效量在4mg至17.5mg之间(例如，4、5、6、7、7.5、8、9、10、11、12、12.5、13、14、15、16、17或17.5mg)，或者在4至40mg的范围内，并且在具体的实施方式中，其每天施用一次或每天施用两次，优选地处于缓释组合物中。在一种实施方式中，每天两次施用为每12小时施用氨基吡啶或其可药用盐。
在某些实施方式中，以4mg至17.5mg(例如，4、5、6、7、7.5、8、9、10、11、12、12.5、13、14、15、16、17或17.5mg)，或4mg至17.5mg， 或4mg至40mg的范围内的量施用氨基吡啶或其可药用盐，每天施用一次或两次，并且优选地处于缓释组合物中。在具体的实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐在缓释组合物中施用。在其他具体的实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐在速释组合物中施用。在某些实施方式中，在4mg至17.5mg(例如，4、5、6、7、7.5、8、9、10、11、12、12.5、13、14、15、16、17或17.5mg)，或4mg至17.5mg，或4mg至40mg的范围内施用一定量的4-氨基吡啶或其可药用盐，每天施用一次或两次，并且优选地处于缓释组合物中。在一种实施方式中，每天两次施用为每12小时施用氨基吡啶或其可药用盐。
在本文所述的任何治疗方法的具体实施方式中，以4至17.5mg范围内的量(例如，4、5、6、7、7.5、8、9、10、11、12、12.5、13、14、15、16、17或17.5mg)在缓释组合物中每天施用两次氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)，或者以8至40mg范围内的量(例如，8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40mg)在缓释组合物中每天施用一次。
在一种实施方式中，提供了根据本发明的方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(如3,4-二氨基吡啶、4-氨基吡啶等)或其可药用盐在缓释组合物中为10毫克，每天两次。
在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐在缓释组合物中为5毫克，每天两次。在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐在缓释组合物中为7.5毫克，每天两次。在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐在缓释组合物中为10毫克，每天两次。在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐在缓释组合物中为12.5毫克，每天两次。在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐在缓释组合物中为15毫克，每天两次。在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐在缓释组合物中为17.5毫克，每天两次。
在一些实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐在缓释组合物中为20毫克，每天一次。在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐在缓释组合物中为8、10、11、12、12.5、13、 14、15、16、17、17.5、18、19、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27.5、30或35毫克，每天一次。
在另一种实施方式中，根据本发明的方法包括以每天8、10、11、12、12.5、13、14、15、16、17、17.5、18、19、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27.5、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40毫克的总量在缓释组合物中施用治疗有效量的4-氨基吡啶或其可药用盐。示例性实施方式包括每天两次施用，其中早晨在缓释组合物中施用15毫克；并且晚上在缓释组合物中施用10毫克。示例性实施方式包括每天两次施用，其中早晨在缓释组合物中施用12.5毫克；并且晚上在缓释组合物中施用7.5毫克。另一个示例性实施方式包括在每天一次的组合物中每天总量的施用。
在另一种实施方式中，根据本发明的方法包括以每天8、10、11、12、12.5、13、14、15、16、17、17.5、18、19、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27.5、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40毫克的总量在速释组合物中施用治疗有效量的4-氨基吡啶或其可药用盐。在一些实施方式中，每天施用3次或3次以上的包含氨基吡啶或其可药用盐的速释组合物(例如，每天4、5或6次)。
在某些实施方式中，将氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐配制成不同强度(例如，4至40mg，其中在本发明中5-、7.5-、10-、12.5-、15-和17.5是优选的)的缓释(SR)或延长释放(ER)的基质片剂，4-氨基吡啶-SR的一种实施方式是10mg，其优选地每天剂量施用两次，其他剂量施用方案也在本发明的范围内；因此，缓释制剂中活性成分的其他的量也涵盖在本发明的范围内。
在其他实施方式中，在本文所述的方法中使用的缓释制剂为4-氨基吡啶-SR或(Acorda Therapeutics,Hawthorne,NY)，或者在美国专利5,370,879、美国专利5,540,938；美国专利8,007,826；或者美国专利公开US2005-0228030(以上每篇专利的内容以其全部内容作为参考并入本文)中描述的4-氨基吡啶的缓释组合物。
在某些实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐可以存在于药物组合物中，如片剂、咀嚼片剂、丸剂、胶囊、微胶囊、溶液、混悬剂、肠胃外溶液、糖锭、粉剂、颗粒剂、锭剂、糖浆、栓剂、注射剂或泡罩包装。可以将组合物以剂量单位(其可以是单个片剂或胶囊或者适量的液体)配制成含有日剂量、半日剂量或者日剂量的适当部份。在一种实施方式中，从水溶性盐(如盐酸盐)制备溶液。一般地，根据药物化学中已知的方法制备所有组合物。可以通过将氨基吡啶或其可药用盐与适合的载体或稀释剂混合并 将适量的混合物填充到胶囊中来制备胶囊。常用的载体和稀释剂包括(但不限于)惰性粉末物质，如多种不同种类的淀粉、粉末纤维素，特别是结晶和微晶纤维素、糖如果糖、甘露糖醇和蔗糖、颗粒面粉和类似的可食用粉末。
可以通过通常使用常规有机或无机添加剂的方法制备适合的制剂，所述添加剂如以下中的一种或多种：赋形剂(例如，蔗糖、淀粉、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙或碳酸钙)、粘结剂(例如，纤维素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、聚丙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、阿拉伯树胶、聚乙二醇、蔗糖或淀粉)、崩解剂(例如，淀粉、羧甲基纤维素、羟丙基淀粉、低取代的羟丙基纤维素、碳酸氢钠、磷酸钙或柠檬酸钙)、润滑剂(例如，硬脂酸镁、轻质无水硅酸、滑石或月桂基硫酸钠)、调味剂(例如，柠檬酸、薄荷脑、甘氨酸或橙味粉末)、防腐剂(例如，苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、羟苯甲酯或羟苯丙酯)、稳定剂(例如，柠檬酸、柠檬酸钠或乙酸)、助悬剂(例如，甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸铝)、分散剂(例如，羟丙基甲基纤维素)、稀释剂(例如，水)和基质蜡(base wax)(例如，可可脂、白凡士林或聚乙二醇)。在一些实施方式中，可以使用以下添加剂中的一种、两种、三种或更多种来制备氨基吡啶或其可药用盐的适合制剂：胶体二氧化硅、羟丙基甲基纤维素、硬脂酸镁、微晶纤维素、聚乙二醇和二氧化钛。
在一种实施方式中，将在本发明所述的方法中使用的氨基吡啶或其可药用盐配制为片剂。可以通过直接挤压、通过湿法成粒，或者通过干法成粒制备片剂。在某些实施方式中，它们的制剂掺入了稀释剂、粘结剂、润滑剂和崩解剂以及所述化合物。典型的稀释剂包括，例如，多种类型的淀粉、乳糖、甘露糖醇、高岭土、磷酸钙或硫酸盐、无机盐，如氯化钠和糖粉。粉末纤维素衍生物也是有用的。在一种实施方式中，所述药物组合物是不含乳糖的。典型的片剂粘结剂是如淀粉、明胶和糖(如乳糖、果糖、葡萄糖等)的物质。天然和合成树胶也是适合的，其包括阿拉伯胶、海藻酸盐、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。聚乙二醇、乙基纤维素和蜡也可以用作粘结剂。在某些实施方式中，可以将以下赋形剂包括在片剂中：羟丙基甲基纤维素，USP；微晶纤维素，USP；胶体二氧化硅，NF；硬脂酸镁，USP；和/或白色欧巴代(opadry white)。
在本文所述的方法中使用的药物组合物可以如(例如)2005年12月15日公开的美国专利申请公开No.2005/0276851和2005年10月13日公开的美国专利申请公开No.2005/0228030中所述，以上每篇专利的内容以其全部内容作为参考并入本文。根据本发明的氨基吡啶可以以非溶剂化形式 以及与可药用溶剂(如水、乙醇等)以溶剂化形式存在。一般地，出于本发明的目的，溶剂化形式认为等价于非溶剂化形式。
在另一种实施方式中，描述了根据本发明的方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶，例如，4-氨基吡啶，或其可药用盐实现了至少或超过：5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20ng/mL的C_minss。在另一种实施方式中，描述了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐实现了至少或超过：5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20ng/ml的平均C_minss。在一些实施方式中，描述了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐实现了约20ng/ml的平均C_minss，其包括11、12、13、14、15、16、17、18、19或20ng/ml的平均下限值和20、21、22、23、24、25、26或27ng/ml的平均上限值。在一种实施方式中，向个体患者给予一定量的药物(例如，剂量的量)，其中剂量的量对应于当施用于标准或参考群体时获得至少或超过：10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20ng/ml的平均C_minss的量。参考群体中液体或组织水平(例如，C_minss、C_maxss、C_avss)可以称为标准值。在另一种实施方式中，描述了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶或其可药用盐实现了范围在约5至25ng/ml、10至18ng/ml、13至15ng/ml或15至30ng/ml之间的C_minss。在另一种实施方式中，描述了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶或其可药用盐实现了约20ng/ml的C_minss。在另一种实施方式中，描述了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶或其可药用盐实现了约20ng/ml的C_minss；在某些实施方式中，约20ng/ml的C_minss包括11、12、13、14、15、16、17、18、19或20g/ml的下限值和20、21、22、23、24、25、26或27ng/ml的上限值。
在替代性实施方式中，提供了治疗患者中中风相关的运动、感觉或感觉运动损伤的方法，其包括将治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐施用至所述患者从而获得5至25ng/ml、10至20ng/ml、15至30ng/ml或12至20ng/ml范围内的C_minss。在另一种实施方式中，治疗患者中中风相关的运动、感觉或感觉运动损伤的方法包括将治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐施用至所述患者从而获得至少12ng/ml至15ng/ml范围内的C_minss。在另一种实施方式中，治疗患者中中风相关的运动、感觉或感觉运动损伤的方法包括将治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐施用至所述患者从而获得至少13ng/ml至15ng/ml范围内的C_minss。在一种实施方式中，向个体患者给予一定量的药物(例如，剂量的量)，其中剂量的量对应于当施用于标准或参考群体时获得至少或超过：5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19或20ng/ml的平均C_minss的剂量；参考群体中的血浆水平(例如，C_minss、C_maxss、C_avss)可以称为标准值。在一种实施方式中，根据本发明的方法包括向患者施用治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐从而获得至少11或12ng/ml的C_minss。
在某些实施方式中，提供了根据本发明的方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶或其可药用盐在患者中实现了约2小时至约6小时的T_max。在这些实施方式的一些中，施用了缓释组合物中的氨基吡啶或其可药用盐(例如，每天一次、每天两次或每天三次)。在这些实施方式的一个中，所述氨基吡啶是4-氨基吡啶。所述4-氨基吡啶的治疗有效量可以是本文所公开的任何量。在一种实施方式中，所述患者是人。在一些实施方式中，在缓释组合物中每天施用一次、每天施用两次或每天施用三次治疗有效量的4-氨基吡啶在人中实现了约2小时至约6小时的T_max。
在另一种实施方式中，提供了根据本发明的方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶，例如，4-氨基吡啶，或其可药用盐实现了以下值，或小于以下值：60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21或20ng/ml的C_maxss。在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐实现了以下值，或小于以下值：50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21或20ng/ml的平均C_maxss。在一种实施方式中，向个体患者给予一定量的药物(例如，剂量的量)，其中剂量的量对应于当施用于标准或参考群体时获得以下值，或小于以下值：50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21或20ng/ml的平均C_maxss的量。参考群体中液体或组织水平(例如，C_minss、C_maxss、C_avss)可以称为标准值。在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐实现了约15至30ng/ml、25至35ng/ml、25至40ng/ml或35至55ng/ml范围内的C_maxss。在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶或其可药用盐实现了约30ng/ml的C_maxss。在另一种实施方式中，提供了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐实现了包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30ng/ml的下限值和25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、 41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60ng/ml的上限值的范围内的C_maxss。
在另一种实施方式中，描述了方法，其中所述治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐实现了以下值或小于以下值：50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21或20ng/ml的平均C_maxss。在一种实施方式中，向个体患者给予一定量的药物(例如，剂量的量)，其中剂量的量对应于当施用于标准或参考群体时获得以下值，或小于以下值：50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21或20ng/ml的平均C_maxss的剂量；参考群体中的血浆水平(例如，C_minss、C_maxss、C_avss)可以称为标准值。
在另一种实施方式中，使用了基本如本文所述的单位剂量的组合物。
施用于受试者的氨基吡啶、其可药用盐或包含氨基吡啶的组合物的真实剂量可以通过身体或生理学因素确定，如年龄、性别、体重、病况严重程度、待治疗的疾病类型、先前或同时的治疗干预、受试者的原发症以及施用途径。这些因素通过技术人员是容易确定的。负责施用的医师通常将确定组合物中活性成分的浓度和用于个体受试者的适当剂量。如果患者状态出现任何并发症或变化，个体医师可以调节剂量。
将胃肠外组合物配制成剂量单位形式是尤其有利的，以便于施用和剂量均匀性.如本文所使用的剂量单位形式是指适用于待治疗受试者的单一剂量的物理上离散的单元；每个单元含有与所需药物载体相关联的经计算产生所需治疗效果的预定量的治疗化合物。本发明剂量单位形式的规格由(a)治疗化合物和待实现的具体治疗效果，以及(b)制备治疗化合物以用于患者中所选病况的治疗的领域中固有的限制所决定，并且直接取决于它们。单位剂量形式可以是片剂或泡罩包装。在某些施用规程中，患者每次可以使用不止一个单一单位，例如，使用包含在泡罩包装的单独泡罩中的两片片剂。
光学异构体-非对应异构体-几何异构体-互变异构体：本文所述的化合物可以含有不对称中心并因此可以作为对映异构体存在。当根据本发明的化合物具有两个或更多个不对称中心时，它们另外可以作为非对应异构体存在。本发明包括作为基本纯的分辨的对映异构体、其外消旋混合物以及非对应异构体的混合物的所有这些可能的立体异构体。所显示的化学式在某些位置没有确定的立体化学。本发明包括这些化学式的所有立体异构体及其可药用盐。对映异构体的非对映异构体对可以通过(例如)从适合溶 剂中分级结晶来分离，并且因此获得的对映异构体对可以通过传统方法，例如通过使用光学活性的酸或碱作为拆解试剂，或者在手性HPLC柱上分离成单个立体异构体。此外，可以使用光学纯起始材料或构形已知的试剂通过立体定向合成获得通式所表示的化合物的任何对映异构体或非对应异构体。
将本发明的氨基吡啶或其可药用盐以足以治疗患者中与中风有关的损伤的治疗有效剂量施用。在某些实施方式中，相对于未治疗的受试者，所述治疗将患者中损伤症状的量降低了至少约10％、更优选地20％，更优选地至少约40％、更优选地至少约60％，并且更优选地至少约80％。优选地，将这种百分比变化定量应用于在连续线性标度中提供结果测量的感觉运动功能测定，如T25FW等。其他感觉运动功能测试将不会表示为百分比变化，但是将通过适当的统计比较来预测导致显著变化。这些测试包括将值分配给实施某些技能的能力的半定量测量。在一些实施方式中，与对照相比，根据本发明的治疗导致产生了中风相关的感觉运动损伤的统计学显著改善(例如，如通过患者实施某些任务或技能的能力所测量的)。这种对照可以是治疗开始前患者实施所评价的任务或技能的能力。
5.2 感觉运动损伤和根据本发明的氨基吡啶施用的结果
本发明提供了治疗哺乳动物中由中风引起的神经损伤的方法，并且具体地，治疗中风相关的感觉运动损伤的方法。在一些实施方式中，根据本文所述的方法治疗的患者患有一种或多种感觉运动损伤(例如，已诊断为或表现出感觉运动损伤的一种或多种症状)。在某些实施方式中，根据本文所述的方法治疗的患者具有由于负责或涉及感觉运动功能的脑皮层区域或其他区域中神经元损伤(例如，神经元损失或脱髓鞘)所引起的损伤。本发明优选的实施方式涉及使用4-氨基吡啶治疗由中风所引起的感觉运动功能损伤的方法。这种治疗可以通过施用本发明申请中所述的任何剂量和剂量施用方案。
根据本发明治疗的感觉运动损伤或感觉运动功能损伤无限制地包括：运动性共济失调、全身控制损伤(global body control impairment)、协调性或平衡性损伤、体态感觉损伤、本体感受损伤、步态损伤、反应能力损伤、灵活性损伤、耐力损伤、手部功能损伤、手部精细协调性丧失或损伤、反射亢进、手力损伤、手动作敏捷性损伤、握力损伤、肌肉虚弱、肌张力损伤、活动范围损伤、强直、力量损伤/虚弱、震颤、肢体功能损伤、上肢功能损伤、下肢功能损伤、下肢肌力损伤、行走损伤(例如，行走速度降低)、言语损伤(例如，发音困难)、颌功能损伤、咀嚼损伤或颌咬合损伤。在一种实施方式中，根据本文所述的方法治疗的感觉运动损伤为本体感受损 伤。在一种实施方式中，根据本文所述的方法治疗的感觉运动损伤为口腔运动功能损伤。在具体的实施方式中，根据本文所述的方法治疗的感觉运动损伤是言语损伤(例如，发音困难、精神性失用症或发声困难)，或咀嚼和/或吞咽损伤(例如，吞咽困难)。在一种实施方式中，根据本文所述的方法治疗的感觉运动损伤是视觉损伤，如视觉功能的感觉和/或眼部运动损伤。在其他具体的实施方式中，根据本文所述的方法治疗的感觉运动损伤是步行速度损伤、手动作敏捷性损伤、手力损伤或上肢强直。在一些实施方式中，根据本文所述的方法治疗的感觉运动损伤是运动和/或感觉功能损伤，如使用Fugl-Meyer评价所测量的。在具体的实施方式中，根据本文所述的方法治疗的感觉运动损伤是运动功能损伤、平衡性损伤、感觉损伤或关节功能损伤。在具体的实施方式中，根据本文所述的方法治疗的感觉运动损伤是面神经麻痹、肢体麻痹或手部麻痹。
在某些实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤包括(但不限于)步行损伤、肢体功能损伤、下肢功能损伤、下肢肌力损伤、肌张力损伤、强直、上肢功能损伤、手部功能损伤、手部精细协调性损伤、握力损伤、平衡性或协调性损伤、全身控制损伤、颌功能损伤、咀嚼损伤或颌咬合损伤。
在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是下肢功能和/或下肢肌力损伤。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是下肢运动功能损伤。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为行走损伤(如行走速度降低)。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是上肢功能损伤(例如，上肢运动功能)。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是肢体麻痹。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是肌张力损伤或强直(例如，上肢强直)。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为平衡性或协调性损伤。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是感觉损伤。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为口腔运动功能损伤。在具体的实施方式中，口腔运动功能损伤是嘴唇和/或舌的肌肉力量损伤(如在发音困难中)。在另一个具体的实施方式中，口腔运动功能损伤是嘴唇和/或舌的肌肉协调性损伤(如在精神性失用症中)。在另一个具体的实施方式中，口腔运动功能损伤是参与呼吸的肌肉力量的损伤。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为言语损伤(例如，发音困难、精神性失用症、发声困难)。在一些实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是面部、舌和/或舌咽肌的感觉运动异常。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是咀嚼和/或吞咽损伤(例如，吞咽困难)。在一 种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为颌功能或颌咬合损伤。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为面神经麻痹。在一种实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤为手部功能损伤、手部协调性损伤(例如，手部精细协调性损伤)、握力损伤、手动作敏捷性损伤或手部麻痹。在一些实施方式中，根据本发明治疗的感觉运动损伤是视觉损伤或异常。根据本文所述的方法治疗的视觉损伤可以是视觉功能的感觉和/或眼部运动损伤。在一种实施方式中，根据本文所述的方法治疗的视觉损伤是视觉功能的感觉损伤。在一种实施方式中，根据本文所述的方法治疗的视觉损伤是视觉功能的眼部运动损伤。
在一种实施方式中，氨基吡啶的施用使一种或多种感觉运动功能恢复。这表现为或测量为(例如)行走能力、平衡性、站立能力、手力、灵巧性、反应能力、对本领域接受的生活质量测量的回答中的改善，或者本文所述的或本领域中已知的任何其他感觉运动功能的改善。
在某些实施方式中，通过施用一定量的氨基吡啶或其可药用盐治疗患者对于改善或预防中风相关的感觉运动损伤是有效的。在一种实施方式中，通过施用一定量的氨基吡啶或其可药用盐治疗患者对于预防感觉运动损伤症状的发生是有效的。在其他实施方式中，通过施用一定量的氨基吡啶或其可药用盐治疗患者对于减轻中风相关的感觉运动损伤的症状(例如，降低严重性)是有效的。在其他实施方式中，通过施用一定量的氨基吡啶或其可药用盐治疗患者对于缩短中风相关的感觉运动损伤的持续时间是有效的。在具体的实施方式中，通过施用一定量的氨基吡啶或其可药用盐治疗患者对于消除中风相关的感觉运动损伤是有效的，和/或对恢复由中风所损伤的感觉运动功能是有效的。在某些实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐的施用对于恢复由中风所损伤的感觉运动功能是有效的。在这些实施方式的一些中，中风是缺血性中风。在一种实施方式中，中风是大脑中动脉中风(如由大脑中动脉闭塞引起)。在其他实施方式中，中风为出血性中风。
在另一种实施方式中，提供了维持患者中感觉运动功能改善的方法，其中这种功能是由中风所损伤的，所述方法包括：在先前施用4-氨基吡啶期间在所述患者中实现了这种受损伤的感觉运动功能的改善后，将治疗有效量的氨基吡啶(如3,4-二氨基吡啶、4-氨基吡啶等)或其可药用盐施用于所述患者。
在一种实施方式中，在患有这种功能的中风相关损伤的患者中维持感觉运动功能改善的方法包括在延长的一段时间内向所述患者施用治疗有效量的氨基吡啶或其可药用盐。在另一种实施方式中，在患有中风相关的感觉运动损伤的患者中实现持续改善的方法包括在延长的一段时间内将治疗 有效量的氨基吡啶(如3,4-二氨基吡啶、4-氨基吡啶等)或其可药用盐连续施用至所述患者。
在具体的实施方式中，经受中风相关的感觉运动损伤的患者中的改善在至少或超过：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22周；3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个月；或者1、2、3、4、5、6或大于5年的治疗期内发生。
可以使用本领域中已知的任何方法评价感觉运动功能，其包括感觉运动功能损伤和感觉运动功能改善。例如，评价测试可以无限制地包括用于下肢功能的定时25英尺步行(T25FW)、2分钟步行、6分钟步行(6MW)、Box&Block测试、6点踏阶测试、手法肌力试验、用于上肢功能的LEMMT、Ashworth得分、改良Ashworth量表、握力测试、9孔插棒测试、手指精细运动、快速手指交替、用于感觉功能的功能性系统得分和用于运动性共济失调的指鼻测试和脚跟至胫骨测试(heel-to-shin)。具体地，T25W可以用于测量步行、LEMMT可以用于测量下肢肌力、改良Ashworth量表可以用于测量强直。本领域所接受的上肢功能评价无限制地包括表现量表-自我报告测量、手持式肌力测定法和上肢指数(UEI)。可以用于测量感觉运动功能的其他评价测试包括(但不限于)Berg平衡量表(BBS)、Kela协调性测试、姿势稳定性测试、定时10米步行测试、肩部牵引测试、握力、膝伸肌的最大等长收缩力、肌肉耐力测试、被动伸直抬腿测试、TEMPA(老年人上肢表现测试)、Jebsen-Taylor手部功能测试、臂、肩和手残疾(DASH)问卷调查表和手功能测量-36(MAM-36)。可以用于测量感觉运动功能的另一种评价测试为Fugl-Meyer评价。在一些实施方式中，Fugl-Meyer评价可以用于测量运动功能(例如，下肢运动功能和/或上肢运动功能)、平衡性、感觉和/或关节功能性。在具体的实施方式中，Fugl-Meyer评价用于测量下肢运动功能、上肢运动功能和/或感觉。根据本文所公开的方法，这些评价可以在氨基吡啶或其可药用盐施用至患者之前和之后进行。例如，可以在施用氨基吡啶之前和/或施用氨基吡啶之后评价患有这种功能的中风相关损伤的患者的感觉运动功能，例如，在从根据本文所述的方法的治疗开始起的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10天；1、2、3、4、5、6、7、8周；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个月；或者1、2、3、4、5年时或之后。
在具体的实施方式中，在以下任意一个、两个、三个、四个、五个或更多个或每个时间点，和/或在晚于以下时间点中任一个的时间点测定和检测中风相关的感觉运动损伤的治疗结果：在用氨基吡啶或其可药用盐治疗 开始后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60和66个月；.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6和6.5年。
5.3 氨基吡啶的施用方式
在一些实施方式中，根据本发明所述的方法包括每天施用一次，每天施用两次或每天施用三次氨基吡啶或其可药用盐。在某些实施方式中，口服施用氨基吡啶或其可药用盐。在其他实施方式中，静脉内施用氨基吡啶或其可药用盐。在其他实施方式中，例如，肌内或皮下施用氨基吡啶或其可药用盐。
在某些实施方式中，本发明所述的方法包括在中风后的急性期内施用氨基吡啶或其可药用盐。中风后的急性期的特征在于中风后脑组织的持续损伤(例如，缺血性病变的扩大)。例如，在急性期内，脑组织的持续损伤可以发生在围绕中心区的缺血阴影区中，在此已发生了由于中风所引起的初始损伤。这种损伤可以包括细胞死亡，例如，由于缺氧引起。通常，急性期从中风发病起持续至中风后约6小时。在一些实施方式中，根据本发明的治疗包括在其中脑组织损伤持续的中风后期间向患者施用氨基吡啶或其可药用盐。在一种实施方式中，这种治疗是在缺血性病变仍在扩大的中风后期间。例如，可以在中风后的1、2、3、4、5或6小时内的急性期期间根据本发明治疗患者。
在一些实施方式中，本发明所述的方法包括在中风后的早期慢性期内施用氨基吡啶或其可药用盐。在中风后的急性期之后，存在神经学功能的自发恢复期—早期慢性期—它在啮齿类物种中可以持续数周(例如，多至4、5或6周)并且在人中可以持续数月(例如，多至4、5、6、7、8、10、11或12个月)。早期慢性期的特征在于由中风所损伤的神经学功能，并且具体地，感觉运动功能的不断、持续内源性恢复。在一些实施方式中，根据本发明的治疗包括在观察到神经学功能，例如，感觉运动功能的自发或内源恢复的中风后期间向患者施用氨基吡啶或其可药用盐。例如，可以在中风后6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10天；1、2、3、4、5、6周或1、2、3或4个月时或之后并且在中风后4、5、6、7、8、9、10、11、12个月或1年之前，在早期慢性期期间根据本发明治疗人患者。
在其他实施方式中，本发明所述的方法包括在中风后的稳定慢性期内施用氨基吡啶或其可药用盐。中风后的稳定慢性期的特征在于很少或没有通过中风所损伤的神经学功能(具体地感觉运动功能)的可测量的自发或内源改善。通常，在啮齿类物种中，在中风后4-6周达到稳定慢性期；而在人物种中，在中风后4-8个月达到(并且，有时，在1年后达到)。稳定慢性期通常表现为稳定的终生残疾，并且具体地，稳定的终生感觉运动损伤，其在不进行治疗时不会有可测量的改善。在某些实施方式中，当在中风后的稳定慢性期施用时，氨基吡啶或其可药用盐对于改善患者中中风相关的感觉运动损伤是有效的。在一些实施方式中，根据本发明的治疗包括在很少或未观察到神经学功能，例如，感觉运动功能的可测量的自发或内源改善的中风后期间向患者施用氨基吡啶或其可药用盐。例如，可以在中风后的4、5、6、7、8、9、10、11、12个月；1、2、3、4、5、7、10、12、15、20年或之后或者任意时间，在稳定慢性期内根据本发明治疗人患者。
在本发明的一种实施方式中，在中风后的急性期之后开始治疗。在本发明的一种实施方式中，在中风后的急性期内开始治疗并在此之后继续。在一种实施方式中，在中风后的早期慢性期之后开始治疗。在另一种实施方式中，在中风后的早期慢性期内开始治疗并在此后继续。在另一种实施方式中，在中风后的稳定慢性期内开始治疗。
可以通过将治疗有效量施用至哺乳动物来实现氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐的治疗益处。在某些实施方式中，在中风后1小时、2小时、6小时、8小时、12小时、24小时、30小时、36小时、42小时、2天、3天、4天、5天、1周、2周、3周、4周之前、时或之后或者以后进行治疗。在某些实施方式中，在中风后3小时、6小时、8小时、12小时、24小时、30小时、36小时、42小时、2天、3天、4天、5天、1周、2周、3周、4周、8周时或之后或者以后进行治疗。在一种实施方式中，在中风后的6小时或之后进行治疗。在一种实施方式中，在中风后的24小时或之后进行治疗。在一种实施方式中，在中风后的7天(1周)或之后进行治疗。在一种实施方式中，在中风后的14天(2周)或之后进行治疗。在一种实施方式中，在中风后的1个月或之后进行治疗。在一种实施方式中，在中风后的4个月或之后进行治疗。在一种实施方式中，在中风后的6个月或之后进行治疗。在一种实施方式中，在中风后的8个月或之后进行治疗。在一种实施方式中，在中风后的12个月或之后进行治疗。在具体的实施方式中，本发明所述的方法包括向哺乳动物施用氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐，其中在哺乳动物中缺血性事件后的早期慢性期内和/或稳定慢性期内，在缺血性事件后至少2、3、4、7或10天并且以足以促进感觉 运动功能改善的治疗有效量进行施用。在某些实施方式中，根据本发明的治疗是在中风后的任意时间进行的。在具体的实施方式中，本发明所述的方法包括以足以促进感觉运动功能改善的量向哺乳动物施用氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐，其中所述施用是在中风后的任意时间进行的。
在某些实施方式中，本发明包括从中风后的1、2或3并且多至并包括4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14天；中风后1周或超过1周、中风后2周或超过2周；中风后3周或超过3周；中风后4周或超过4周；中风后1个月或超过1个月；中风后2个月或超过2个月；中风后3个月或超过3个月；中风后4个月或超过4个月；中风后5个月或超过5个月；中风后6个月或超过6个月开始向哺乳动物施用氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐。在某些实施方式中，在中风后1、2、3、4、5、6、7或8周时或之后向患者施用氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐。
根据本发明的另一个方面，提供了在哺乳动物中在缺血性事件后的急性期之外的期间内促进神经学功能，例如，感觉运动功能改善的方法。在具体的实施方式中，根据本发明的治疗可以在急性期内开始，但包括急性期之外的至少一次、两次、三次、四次、五次、六次或六次以上的治疗。
在某些实施方式中，所述施用步骤在中风后的以下时间内开始：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、7、8、9、10、12、15、20、25或30年或者以后。在其他实施方式中，所述施用步骤在中风后的以下时间之后开始：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、7、8、9、10、12、15、20、25或30年或者以后。
在本发明的一些实施方式中，治疗患者中中风相关的感觉运动损伤的方法：包括将治疗有效量的氨基吡啶(如3,4-二氨基吡啶，4-氨基吡啶等)或其可药用盐施用于所述患者一段时间。在某些实施方式中，施用步骤在中风事件后的以下时间内开始：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、7、8、9、10、12、15、20、25或30年或者以后。在以上其他实施方式中，施用步骤持续至少或超过：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60和66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30或35年的一段时间。
在一些实施方式中，治疗方案(具体的施用剂量和频率，其可以选自本文所述的任何剂量和频率)在一段时间内是稳定的，例如，至少4天、至少1周、至少2周、至少3周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月或至少6个月。
在具体的实施方式中，本发明包括在短期、初始或非慢性期有效治疗患者中中风相关的感觉运动损伤的方法，其包括施用治疗有效量的氨基吡啶(如3,4-二氨基吡啶、4-氨基吡啶等)或其可药用盐至所述患者。在本文所提供的某些实施方式中，用氨基吡啶或其可药用盐治疗患者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15周；1、2、3或4个月的一段时间。应理解可以在该时间段之外继续并且这仍在本发明的范围内。
在另一种实施方式中，本发明包括在早期慢性期和/或稳定慢性期内有效治疗患者中中风相关的感觉运动损伤的方法，其包括将治疗有效量的氨基吡啶(如3,4-二氨基吡啶、4-氨基吡啶等)或其可药用盐施用至所述患者延长的一段时间。在另一种实施方式中，本发明包括长久治疗中风相关的感觉运动损伤的方法，其包括：将治疗有效量的氨基吡啶(如3,4-二氨基吡 啶、4-氨基吡啶等)或其可药用盐施用至所述患者延长的一段时间。在一些实施方式中，延长的一段时间为至少或超过：10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22周；3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个月；或者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或大于10年。
在某些实施方式中，在中风后的急性期内静脉内施用治疗有效量的氨基吡啶，例如，4-氨基吡啶，或其可药用盐。在一些实施方式中，在中风后的1、2、3、4、5、6、7天或1、2、3、4、8周内静脉内施用治疗有效量的氨基吡啶，例如，4-氨基吡啶，或其可药用盐。静脉内施用可以每天发生一次、每天发生两次、每天发生三次，两天发生一次、每三天发生一次或每周发生一次。在一种实施方式中，用氨基吡啶或其可药用盐的单次静脉内施用治疗患者。
在另一种实施方式中，在中风后的急性期、早期慢性期和/或稳定慢性期口服施用治疗有效量的氨基吡啶，例如，4-氨基吡啶，或其可药用盐。在具体的实施方式中，仅在中风后的早期慢性期和/或稳定慢性期口服施用治疗有效量的氨基吡啶，例如，4-氨基吡啶，或其可药用盐。口服施用可以在速释组合物或在缓释组合物中每天发生一次、每天发生两次、每天发生三次或每天发生三次以上。
可以通过如本文所述的多种技术完成氨基吡啶化合物的施用。可以(例如)通过将所述化合物施用至靶标组织中或上；通过(例如)静脉注射(例如，肠胃外)或口服施用(例如，肠内)或局部施用(例如，透皮、经皮、贴剂、栓剂)或吸入(例如，经粘膜)，借此使所述化合物达到靶标组织来向患者全身性提供化合物，从而实施根据本发明的氨基吡啶或其可药用盐的施用。向患者施用氨基吡啶或其可药用盐可以通过患者本人或通过护理人员，如医学专业人员来进行；包括患者的吞咽动作或应用于患者等，其中所述化合物可以发挥其作用。
在一种实施方式中，局部施用氨基吡啶或其可药用盐，即在病痛、病症或感觉疼痛的位点处或附近通过非全身途径的直接施用。
在某些实施方式中，从中风后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、16、18、20、22小时开始或者1、2、3、4、5、6或7天开始，以每次剂量0.01至1.0mg/kg的剂量用氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐每天一次、每天两次、每隔一天一次或每周一次静脉内治疗患者，治疗超过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天，超过1、2、3、4、5、6、7或8周，或者超过1、2、3、4、5个月(或者在1天至5天之间、2天至10天之间、10天至1个月之间、10天至6个月之间或者10天至1年之间)。
作为另外一种选择，从中风后的1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天(或者1、2、3、4、5、6或7天之后)开始，或者在1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周或之后开始，或者在1个月、2个月、3个月、4个月、6个月、8个月、10个月或12个月或之后开始，用4mg至17.5mg(例如，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17mg)之间的量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)或其可药用盐每天一次或每天两次来口服治疗患者，治疗超过5、10、15、20天，超过1、2、3、4、5、6、7、8周，超过1、2、3、4、5、6、9个月，或超过1、2、3、4、5、10、15、20年(或者10天至3个月之间、10天至6个月之间、10天至1年之间、3个月至1年之间、6个月至1年之间、6个月至5年之间或1年至50年之间)。在一些实施方式中，在中风后4周(或中风后4周之后)开始用5mg、7.5mg、10mg或12.5mg4-氨基吡啶每天两次来治疗患者。在其他实施方式中，在中风后4个月(或中风后4个月之后)开始用5mg、7.5mg、10mg或12.5mg4-氨基吡啶每天两次来治疗患者。在其他实施方式中，在中风后的4、5、6、7、8周，或者3、4、5、6、7或8个月或之后开始用8mg、10mg、12mg、12.5mg、15mg、20mg或25mg的4-氨基吡啶每天一次来治疗患者。
5.4 组合治疗
本发明所述的组合物和方法可以在一些治疗性或预防性应用的背景中使用。为了提高使用氨基吡啶的治疗的效果或者为了增加另一种疗法(第二疗法)的保护，可以期望将这些组合物和方法与在与中风有关的疾病和病理情况(例如，感觉运动损伤)的治疗中有效的其他试剂和方法合并。
因此，在具体的实施方式中，可以将氨基吡啶或其可药用盐与用于中风相关损伤(例如，感觉运动损伤)的治疗的一种或多种其他试剂和/或物理或职业疗法结合。在一些实施方式中，将氨基吡啶或其可药用盐与一种或多种其他药物或疗法一起或顺序施用于患者。例如，可以在施用对中风相关损伤有效的另一种药物的同时、之前或之后向患者施用氨基吡啶或其可药用盐。这种其他药物可以是(例如)胆碱酯酶抑制剂，如多奈哌齐、利凡斯的明或加兰他敏，或免疫调节剂，如干扰素。在具体的实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐和一种、两种或多种其他药物的组合是固定剂量组合。例如，可以将氨基吡啶或其可药用盐和一种或多种其他药物(如任何上述那些其他药物)配置成一种组合物，如丸剂、片剂或胶囊。在其他实施方式中，将氨基吡啶或其可药用盐与物理疗法、职业疗法或语言矫正等一起(例如，同时、之前或之后)施用于患有中风的患者。在一些实施方式中，将氨基吡啶或其可药用盐施用于使用矫形支架、站立架或其他矫形 装置，如助行器(rolling walker)，或者沟通辅助工具，如具有连接的语音合成器的计算机的患者。在具体的实施方式中，氨基吡啶(或其盐)和其他药物或疗法在相同的医生随访时施用，或者彼此之间在1、2、3、4、5、6或12小时或者在1、2、3、4、5、6或7天内。
可以使用多种组合；例如，氨基吡啶或其可药用盐为“A”，而第二疗法(例如，胆碱酯酶抑制剂，如多奈哌齐、利凡斯的明和加兰他敏，和免疫调节剂，如干扰素等)为“B”，非限制性组合循环包括：
A/B/A  B/A/B  B/B/A  A/A/B  A/B/B  B/A/A  A/B/B/B  B/A/B/B
B/B/B/A  B/B/A/B  A/A/B/B  A/B/A/B  A/B/B/A  B/B/A/A
B/A/B/A  B/A/A/B  A/A/A/B  B/A/A/A  A/B/A/A  A/A/B/A
本发明的组合物向受试者的施用将按照本文所述的施用的一般规程进行，并且还将遵守特定第二疗法施用的一般规程，考虑治疗的毒性(如果有)。预期根据需要，治疗循环将重复。还考虑多种标准疗法可以与所述疗法结合应用。
在一些实施方式中，氨基吡啶或其可药用盐与职业疗法或物理疗法一起施用于患者。在其他实施方式中，在患者已进行了中风后的职业疗法或物理疗法之后，将氨基吡啶或其可药用盐施用于患者。在另一种实施方式中，将氨基吡啶或其可药用盐施用于未进行职业疗法或物理疗法的患者。在一种实施方式中，根据本文所述的方法治疗的患者不一起接受职业疗法或物理疗法。在另一种实施方式中，根据本文所述的方法治疗的患者未进行中风后的职业疗法或物理疗法。在某些实施方式中，根据本发明的治疗(使用或未使用职业疗法或物理疗法)比单独的职业疗法或物理疗法更有效。
5.5 试剂盒
试剂盒包括本发明的示例性实施方式。试剂盒可以包括外层贮器或容器，其配置以容纳一个或多个内层贮器/容器、器皿和/或说明书。根据本发明的器皿可以包括施用药物的项目，如贴片、吸入装置、液体容器杯、注射器或针。含有氨基吡啶或其可药用盐的组合物可以包含在本发明的贮器内。本发明的贮器可以含有足够量的氨基吡啶或其可药用盐以用于多剂量，或者可以处于单位或单一剂量形式。在某些实施方式中，试剂盒包括处于片剂、丸剂、泡罩包装或胶囊形式的含有氨基吡啶或其可药用盐的组合物。
本发明的试剂盒一般包括根据本发明施用的说明书。所述说明书可以包括治疗以下疾病中的一种或多种：运动性共济失调、全身控制损伤(global body control impairment)、协调性或平衡性损伤、体态感觉损伤、耐力损伤、手部功能损伤、手部精细协调性丧失或损伤、反射亢进、握力损伤、 肌肉虚弱、肌张力损伤、活动范围损伤、强直、力量损伤/虚弱、震颤、肢体功能损伤、上肢功能损伤、下肢功能损伤、下肢肌力损伤、行走损伤(例如，行走速度降低)、发音困难、颌功能损伤、咀嚼损伤或颌咬合损伤。本文所述或支持的任何施用形式可以构成说明书的一些部分。
在一种实施方式中，说明书显示每天服用氨基吡啶或其可药用盐两次。在一种实施方式中，说明书显示每天服用氨基吡啶或其可药用盐一次。在一种实施方式中，说明书显示在中风后的急性期内服用含有氨基吡啶或其可药用盐的组合物一次或多于一次。在一种实施方式中，说明书显示在中风后的早期慢性期和/或稳定慢性期内服用所述组合物一次或多于一次。
可以将说明书贴在本发明的任何容器/贮器上。在一种实施方式中，说明书显示服用氨基吡啶或其可药用盐从而或以实现根据本发明的治疗范围。可以将说明书贴在本发明的任何容器/贮器上或者可以是本发明的容器或贮器内的单独纸页。作为另外一种选择，可以将说明书作为本发明的贮器的部分印刷、压印或形成。作为另外一种选择，可以将说明书印刷到材料上，并将所述材料包装在本发明的试剂盒的贮器或容器内。在一种实施方式中，试剂盒具有外层贮器，如箱，其中有容器，如瓶；并且将说明书提供在外层贮器和/或所述瓶上和/或之内。试剂盒还可以包括使用试剂盒组分以及使用未包含在该试剂盒内的任何其他试剂的说明书；考虑这些试剂是本发明的试剂盒的实施方式。根据本发明，试剂盒不局限于以上所鉴别的特定项目并且可以包括在治疗探索中直接或间接使用的任何试剂。
5.6 其他实施方式：
本发明的实施方式包括在长期或延长或延期或拖长或持续的一段时间内有效治疗患者中中风相关的感觉运动损伤的方法；这还称为“持久”治疗或“持久”治疗方法；这还称为“持续”治疗或“持续”治疗方法。本发明的另一种实施方式涉及维持患者中中风相关的感觉运动损伤改善的方法，其包括在氨基吡啶的相邻或连续或先前施用期间，在先前实现所述患者中中风相关的感觉运动损伤改善之后，向所述患者施用治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)。任何这些方法包括向所述患者施用延长、延期、拖长、持续或长期(如本文所使用的，除非上下文中明确指出，否则延长、延期、拖长、持续或长期是同义词)的一段时间的治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)。在某些实施方式中，延长、延期、拖长或长期或持续的一段时间为至少或超过：8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22周；3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个月；或者1、2、3、4、5、6年或超过5年。在某些实施方式中，延长、延期、拖长、长期或持续的一段时间是患者的终生。这些方法还可 以包括根据本发明以治疗性水平(如C_minss或平均C_minss)或范围(如C_minss范围或平均C_minss值的参考范围)施用氨基吡啶。
在一种实施方式中，向个体患者给予一定量的药物(例如，剂量的量)，其中剂量的量对应于当施用于标准或参考群体时获得至少或超过：6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20ng/ml的平均C_minss的剂量。
在某些实施方式中，4-氨基吡啶的治疗有效量在每天施用两次的缓释组合物中为10毫克。施用方法还可以包括根据本发明以治疗性水平(如C_minss)或范围(如C_minss范围)施用4-氨基吡啶。
本发明的另一种实施方式涉及在具有这些感觉运动功能中的一种的中风相关损伤的患者中维持感觉运动功能改善的方法，所述感觉运动功能，例如，全身控制、协调性、平衡性、体态感觉、耐力、手部功能、手部精细协调性、握力、肌张力、活动范围、力量、肢体功能、上肢功能、下肢功能、下肢肌力、行走(例如，步行速度)、发音困难、颌功能、咀嚼或颌咬合，其包括在延长的一段时间内向所述患者施用治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)。在某些实施方式中，延长、延期、拖长、持续或长期的一段时间为至少或超过：8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22周；3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个月；或者1、2、3、4、5、6年或超过5年。在某些实施方式中，延长、延期、拖长、长期或持续的一段时间是患者的终生。这种维持可以是相对稳定的，其中相对于参考或标准群体，存在基本均匀的百分比改善，或者这种维持可以是相对不同的，其中相对于参考或标准群体，百分比改善存在波动；当所述维持相对改变时，这可以包括相对于参考或标准群体受试患者可能做的更差的时期。
本发明的其他实施方式涉及在中风的任何一种或多种病征或症状中实现持续或相对持续改善的方法，如由中风所引起或与中风有关的任何一种或多种感觉运动损伤，其包括将治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)向所述患者继续施用延长的一段时间。相对于对照或标准量或值，应理解有时中风后患者中感觉运动功能存在进行性下降，并且可以就与中风相关感觉运动病理的固有发展相伴的功能下降而言来适当地考虑提高或相对提高。在某些实施方式中，持续改善发生了延长的一段时间，如，至少或超过：8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22周；3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个月；或者1、2、3、4、5、6年或超过5年。在某些实施方式中，延长的一段时间是患者的终生。在某些实施方式中，4-氨基吡啶的治疗有效量在缓释组合物 中为10毫克。在某些实施方式中，所述缓释组合物可以每天施用两次。在某些实施方式中，所述缓释组合物可以每天施用一次。这些方法还可以包括根据本发明以治疗性水平(如C_minss)或范围(如C_minss范围)施用氨基吡啶。这种持续改善可以是相对增加，其中相对于参考或标准群体，存在百分比改善的不断增长，或者这种改善可以是相对不同的，其中相对于参考或标准群体，百分比改善存在波动，从而存在比标准组做的更好的倾向；当所述改善相对改变时，这可以包括相对于参考或标准群体受试患者可能做的更差的时期。
在某些实施方式中，治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)是稳定的或恒定的或一致的或不变的或不动的或不改变的剂量施用方案，其包括以均匀方式(例如，以每天具体的次数的毫克量或具体的毫克量，例如，在早上可能剂量较高并且在晚上可能剂量较低，或者反之亦然)和以均匀的时间表(例如，每天两次)施用的治疗有效量的氨基吡啶，其中在稳定的或恒定的或一致的或不变的或不动的剂量施用方案中剂量的量或时间表未发生变化。如本文所使用的，除非上下文中明确指出，否则术语“稳定的”或“恒定的”或“一致的”或“不变的”或“不动的”或“不改变的”是同义词。应理解(例如)偶然的患者不顺从性或与稳定的、恒定的、一致的、不变的、不动的或不改变的治疗过程的偏离是在这种治疗的定义内的。在某些实施方式中，在整个稳定剂量施用方案期间未发生氨基吡啶的剂量(例如，毫克量)的滴定(无论是增加或减少)。
本发明的实施方式还涉及治疗或改善患者中中风相关的感觉运动损伤的方法，其包括向所述患者施用一定量或范围的4-氨基吡啶从而获得至少5ng/ml至20ng/ml，10ng/ml至20ng/ml或12ng/ml至20ng/ml范围内的最小稳态浓度(C_minss)，或者获得20ng/ml范围的C_minss。本发明的实施方式还涉及治疗或改善患者中中风相关的感觉运动损伤的方法，其包括向所述患者施用一定量或范围的4-氨基吡啶从而获得至少7ng/ml至20ng/ml或12ng/ml至20ng/ml范围内的平均最小稳态浓度(平均C_minss)，或者获得20ng/ml范围的平均C_minss。在某些实施方式中，20ng/ml范围的C_minss实现了约20ng/ml的C_minss。在其他实施方式中，获得了约20ng/ml的C_minss；在某些实施方式中，20ng/ml范围的C_minss包括11、12、13、14、15、16、17、18、19或20ng/ml的下限值和20、21、22、23、24、25、26或27ng/ml的上限值。在某些实施方式中，获得了至少12ng/ml至15ng/ml范围的C_minss。在某些实施方式中，获得了至少13ng/ml至15ng/ml范围的C_minss。在某些实施方式中，获得了至少15ng/ml至25ng/ml范围的C_minss。在某些实施方式中，获得了至少或超过11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20、21、22、23、24或25ng/ml的C_minss。在其他实施方式中，获得了约20ng/ml的平均C_minss；在某些实施方式中，20ng/ml范围内的平均C_minss包括11、12、13、14、15、16、17、18、19或20ng/ml的平均下限值和20、21、22、23、24、25、26或27ng/ml的平均上限值。在某些实施方式中，获得了至少12ng/ml至15ng/ml范围的平均C_minss。在某些实施方式中，获得了至少13ng/ml至15ng/ml范围的平均C_minss。在某些实施方式中，获得了至少15ng/ml至25ng/ml范围的平均C_minss。在某些实施方式中，获得了至少或超过11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25ng/ml的平均C_minss。
作为另外一种选择，根据本发明的方法(例如，治疗中风相关的感觉运动损伤的方法，或者改善患者中中风相关的感觉运动损伤症状的方法，或者在患有中风相关的感觉运动损伤的患者中获得氨基吡啶的治疗有效水平的方法)包括向所述患者施用氨基吡啶(例如，4-氨基吡啶)从而获得5-12ng/ml范围的C_minss；获得10-20ng/ml范围的C_minss；获得15-25ng/ml范围的C_minss；获得15-30ng/ml范围的C_minss；获得17-23ng/ml范围的C_minss；获得18-22ng/ml范围的C_minss；或获得19-21ng/ml范围的C_minss。在具体的实施方式中，C_minss在其中下限值选自5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20ng/ml并且上限值选自20、21、22、23、24、25、26或27ng/ml的范围中，应理解这表示无限制地考虑了任何特定的组合，例如，以下范围：16-23ng/ml、12-24ng/ml、13-27ng/ml等。
在某些实施方式中，施用治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-AP)以获得延长的一段时间的C_minss或平均C_minss(或其各自的范围)，其至少为或超过8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22周；3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个月；或者1、2、3、4、5、6年或超过5年。在某些实施方式中，延长的一段时间是患者的终生。
本发明的其他实施方式为治疗中风相关的感觉运动损伤或其症状的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的4-氨基吡啶从而获得约13ng/ml至约15ng/mL的平均血浆浓度并且平均最大血浆浓度不大于约15ng/ml。
在某些实施方式中，本文描述了治疗中风相关的感觉运动损伤或其症状的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的4-氨基吡啶从而获得约15ng/ml至约27ng/ml的平均稳态血浆浓度(C_avss)。在一些实施方式中，本文描述了治疗中风相关的感觉运动损伤或其症状的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的4-氨基吡啶从而获得约20ng/ml至约40ng/ml的平均稳态血浆浓度(C_avss)。在一种实施方式中，本文描述了治疗中风相关的感 觉运动损伤或其症状的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的4-氨基吡啶从而获得约10ng/ml至约20ng/ml的平均稳态血浆浓度(C_avss)。在另一种实施方式中，本文描述了治疗中风相关的感觉运动损伤或其症状的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的4-氨基吡啶从而获得约5ng/ml至约15ng/ml的平均稳态血浆浓度(C_avss)。
在本发明方法的某些实施方式中，根据本文所述的方法鉴别并治疗患有或怀疑患有中风相关的感觉运动损伤并且未患有或未怀疑患有多发性硬化的患者。
在某些实施方式中，中风相关的感觉运动损伤的改善可以至少为约(或超过)4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约(或超过)20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约20％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约25％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约(或超过)30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约40％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约45％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约(或超过)40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约50％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约或超过55％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约60％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约或超过65％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约或超过70％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约或超过75％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约或超过80％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约或超过85％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约或超过90％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约或超过95％。在某些实施方式中，所述改善可以至少为约100％。在某些实施方式中，所述改善可以超过约100％。在某些实施方式中，所述改善可以超过约150％。在某些实施方式中，所述改善可以超过约200％。在某些实施方式中，所述改善可以超过约250％。在某些实施方式中，所述改善可以超过约300％。在某些实施方式中，所述改善可以为：4-100％、4-20％、5-20％、6-20％、7-20％、8-20％、9-20％、10-20％、10-30％、10-60％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-100％、30-100％、50-100％、30-150％、50-150％、100-150％、100-200％、50-250％、100-250％或100-300％.优选地，将这种百分比变化定量应用于在连续线性标度中提供结果测量的感觉运动功能测定，如T25FW等。
本发明的实施方式还涉及单调地改善患者中中风相关的感觉运动损伤的方法，其包括将治疗有效量的氨基吡啶(例如，4-AP)向所述患者施用延长的一段时间。在某些实施方式中，延长的一段时间为至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22周；3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个月；或者1、2、3、4、5、6年或超过5年。在某些实施方式中，延长的一段时间是患者的终生。如本文所使用的，参数的单调增加是持续增加而没有任何相对于基线(即，在用氨基吡啶治疗之前)的降低。
被称为生活质量或每天日常活动的多种参数是本领域已知的。可以测量这些参数以评价在根据本发明的一段时间的治疗之后患有中风的患者的病况(例如，感觉运动功能)的改善。这些包括，例如，损伤对日常生活的影响：
●在自己家中的房间之间的行走
●走至浴室
●淋浴
●照顾儿童
●安全过马路
●保持被雇佣
●购买食品杂货
●做法
●上楼梯
●锻炼
●参与社会活动。
在一些实施方式中，根据本发明的方法使受试者能够实现任何上述活动，而他们之前无法实现这些活动。在具体的实施方式中，根据本发明的方法使受试者能够更好地实现任何上述活动，而他们之前受能力所限来实现这些活动。
在某些实施方式中，通过向所述患者施用治疗有效量的氨基吡啶(在先前实现了这些症状、参数、特性、值、发现或表现的改善之后)，根据本发明的方法允许维持中风相关的感觉运动损伤的症状、参数、特性、值、发现或表现的改善，其中氨基吡啶先前有效地应对了这些症状、参数、特性、值、发现或表现。效力的先前时期可以是10、11、12、13、14、15、16、17或18周；3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个月；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10年或超过10年。
6.实施例
6.1 实施例1：啮齿类中风模型
对雄性大鼠(约300-400g，Sprague-Dawley)进行手术以引起脑缺血性损伤。在缺血性损伤后1天、10天和4周开始，动物口服施用单剂量的4-AP(0.1、0.3和1mg/kg)，或者每天施用，施用2周。在剂量施用(对于单次治疗)或上一次剂量施用(对于多次治疗)后，在4小时[等于Cmax(约3小时)后1小时]通过进行前肢放置测试、后肢放置测试、身体摇摆测试、圆筒测试和活动箱测试来评价神经学行为。在停药一段时间后，还评价了神经学功能。此外，还在载体或4-AP剂量后在多个时间点从侧尾静脉采集小血液样品(100μL)以使用HPLC-MS/MS方法建立4-AP的血浆浓度。这种采血使得能够确定当动物正在评价神经学改善时的血浆暴露。
实验结束时，用戊巴比妥使动物深度麻醉并用PBS和多聚甲醛穿心灌注以用于脑梗死体积测量，分别用H&E染色和Luxol固蓝染色评价神经元损伤程度。
表1示出了对处理组和终点的总结。
表1.处理组和终点的总结

研究完成时，对于神经学功能改善、相对梗死减少、相对髓鞘化和/或轴突存活测定了脑梗死后的神经病学功能(如表1所述)。
6.2 实施例2：口服4-AP的效果：大鼠中MCA堵塞(MCAO)后的功能恢复。盲法、载体对照的双交叉研究。
在具有稳定运动缺陷的大鼠中，在距它们的缺血性事件较远的时间，评价了4-AP促进缺血性中风后功能性感觉运动改善的能力。动物模型模拟了人缺血性中风中的情况，并且是通过大脑中动脉闭塞(MCAO)产生的，其导致在大脑皮层和纹状体(包括皮质脊髓束(白质))中产生了大量的梗死。
具体地，在以下实验中使用的Sprague Dawley大鼠中的MCAO模型模拟了人缺血性中风中的情况。在该模型中，使用修改的Tamura等人的方法， 通过近端右大脑中动脉(MCA)的永久性闭塞以造成局灶性脑梗死(No To Shinkei1986；38:747-51)。简要地，将颞肌分成两半并折返通过由眼和耳道之间半路所造的切口。通过颞下颅骨切除术而不去除颧弓和不横切面部神经使近端MCA暴露。然后，通过微双极性凝结物从紧邻近嗅束至大脑下静脉将动脉闭塞并且横切断。
本实施例中所述的MCAO模型导致产生了在许多方面与中风后典型的人神经学恢复类型相似的恢复类型。MCAO后，在术后第1天存在感觉运动功能的快速和完全丧失，如通过具体的触觉、本体感受和感觉检查(前肢和后肢放置以及身体摇摆对称性)所测量的。在此之后是前几周内的相对快速的部分恢复期。在所述的MCAO模型中，到MCAO后4周时，恢复开始达到平台期，此时仍有感觉运动功能可测量的缺陷。在中风后的前几个月内，在人中发生了类似但更缓慢的恢复类型(参见Cramer,Ann Neurol2008；63:272-87)。
试验设计
在该实验中，将Sprague Dawley大鼠麻醉，进行手术从而导致大脑中动脉闭塞(MCAO)，使用和不使用4-氨基吡啶处理并且如下所述进行行为评价。在中风后4周时开始治疗。
动物：使用了45只雄性Sprague Dawley大鼠，300-400g(得自Charles River Laboratories，在手术前7-10天来到实验室，体重250-275g)。将动物随机分配至处理组。
术语：用于研究天数的术语如下所示：第0天是MCAO当天，并且随后的天数依次编号(第1天、第2天、第3天等)；第-1天代表MCAO前一天。
分组详情：本研究中一些程序所需的时间量要求将3个处理组(如下所列)分成8个工作组(如时间表中所写，参见下文)。每天6只动物接受中风手术。如果动物在本研究的8天手术期内死亡，则用备用替代。如果未死亡，则不替换动物。大部分动物死亡(<整体的5％)发生在op后立即至7天的一段时间内。
麻醉：1-3％异氟烷在N₂O:O₂(2:1)中。在具有在N₂O:O₂(2:1)中的2-3％的异氟烷的吸气室中引起麻醉，并且通过面具维持1-1.5％的异氟烷。通过对后肢掐捏缺少缩回以及眨眼反射的丧失来评价麻醉足够的深度。一旦麻醉，动物接受头孢唑啉钠(40mg/kg，i.p.)和丁丙诺啡(0.1mg/kg，s.c.)。头孢唑啉用作该程序的预防抗生素(因为它确保了可忽略的感染率)。将兽医用眼科软膏剂Lacrilube应用于眼部。
手术程序：通过大脑中动脉闭塞(MCAO)在脑表面(大脑皮层)的右侧造成小局灶性中风(梗死)。用电动剪毛刀在头部右侧剃毛(在眼和耳之间，约3×5cm的片)。用消毒液体肥皂小心清洗该区域。使用无菌技术，在眼和耳膜道中间造成切口。将颞肌分离、切成两半并折返。通过钻和骨钳(颞下颅骨切除术)除去小骨窗以暴露出大脑中动脉(MCA)。小心不要除去颧弓或横切面部神经，否则术后将损伤动物的咀嚼能力。使用解剖显微镜，切割硬膜，并且使用微双极电烙术使MCA从紧邻近嗅束至大脑下静脉(小心不要使该静脉破裂)电凝聚。然后，横切MCA。然后，使颞肌复位，并且通过缝合使切口皮下闭合。用外科钉(需要2-3枚)闭合皮肤切口。在整个手术期间，使用连接到肛门温度计的自动调节加热板将体温维持在37.0±1℃。
术后监控：术后，动物仍保留在加热板上直至它们从麻醉中醒来。然后，将它们返回至清洁的饲养笼中。在MCAO手术当天(第0天)经常观察它们并且此后至少每天一次。
饲养、手术和注射时间表：除非表现出严重的攻击性或者笼中同伴死亡，否则在手术前后，每个笼中放置2-3只动物。术前，将动物饲养7天。术前，立即i.p.(40mg/kg)施用头孢唑啉钠。术前，立即s.c.施用(0.1mg/kg)丁丙诺啡。
剂量施用和治疗：根据如表2A、2B、3和图2所示的剂量施用时间表治疗大鼠，其中每个阶段为两周的一段时间。在该实验中使用了4-AP的溶液。在缺血性事件后4周开始剂量施用。将4-氨基吡啶溶于注射用水(WFI,Cellgro)并无菌过滤。以2mL/kg，通过灌胃递送最终浓度0.315mg/mL或1.0mg/mL的4-氨基吡啶，从而分别导致产生了0.63mg/kg和2mg/kg的最终剂量。载体对照治疗为通过灌胃以2mL/kg递送的WFI。将本研究分为三个治疗期(1-3)，其中在每个治疗期内，每个随机动物群组接受不同的剂量水平。从MCAO后的第30天开始(第30天，1期开始)，每隔约12小时，动物接受灌胃剂量施用的溶液(2mL/kg)，共接受5个剂量。对于2期和3期研究，分别在第44天和第58天用不同的治疗重复相同的时间表。在每期之间的10天内不治疗动物(清除期)。
表2A：
治疗ID治疗(剂量TBD)V载体(水)L低4-AP(0.63mg/kg,b.i.d,p.o)H高4-AP(2.0mg/kg,b.i.d,p.o)
表2B：
组(n＝15)1期治疗2期治疗3期治疗1HLV2LVH3VHL
治疗组：在MCAO手术后4周开始剂量施用。在这4周期间，每周进行如以下所定义的行为评价。评价了4-AP的两个剂量水平加载体对照，其中在缺血性事件后4周开始治疗。所有剂量施用是通过灌胃进行的，体积不超过2mL/kg。给予动物第一次剂量，并且从剂量施用后60分钟开始进行行为评价。然后，动物在当天的适当时间接受第二次剂量，并且此后每天施用两次(优选地每12小时)，再施用2天(总计剂量施用3天，共5次剂量)。在第5次剂量后1小时，对动物进行如以下所定义的行为评价。在最终的行为评价后，停药10天或11天，再次评价行为，然后如表2A，2B和3中所述，用交叉治疗再次攻击动物(表2B的2期)，然后进行相同的行为测试和剂量施用方案。同样，将该交叉治疗再重复1次(表2B的3期)(参见图2)。
行为测试详情：通过对治疗分配未知的评价者进行行为评价。使用肢体放置和身体摇摆行为测试，在MCAO手术前立即、MCAO手术后24小时以及此后每周进行感觉运动功能的盲法评价，直至剂量施用的1期。如上所述，行为评价时间准确地随剂量施用时间进行。在每一期的第1和第5剂量后1小时测试动物(即第1期的第30天和32天，第二期的第44和46天；以及第三期的第58和第60天)；还在清除期第42和56天，测试了动物。给予动物第一剂量，60分钟后开始进行行为评价，并在剂量施用后90分钟采集血液。然后，动物在当天的适当时间接受第二次剂量，并且此后每天施用两次(优选地每12小时)，再施用2天(总计剂量施用3天，共5次剂量)。在第5次剂量后1小时，对动物进行行为测试。在最终的行为评价后，停药10天或11天，再次评价行为，然后如表2A，2B、3和图2中所述，用交叉治疗再次攻击动物，然后进行相同的行为测试和剂量施用方案。
肢体放置：在第-1天(手术前)、第1天、第7天、第14天、第21天、第28天、第30天、第32天、第42天、第44天、第46天、第56天、第58天、第60天评价。肢体放置测试分为前肢和后肢测试。对于前肢放置测试，检查者保持大鼠接近于桌面并对大鼠对胡须、视觉、触觉或本体感受刺激反应而将前肢放置在桌面上的能力进行评分。类似地，对于后肢放置测试，检查者评价了大鼠对触觉和本体感受刺激反应而将后肢放置在桌面上的能力。这些测试综合起来反映了感觉运动系统的功能和恢复(De Ryck等人，Brain Res1992；573:44-60)。对于每种感觉输入形式获得了单独的分项分数，并将它们相加以得到总分(对于前肢放置测试：0＝正常，12＝最大程度损伤；对于后肢放置测试0＝正常，6＝最大程度损伤)。得分以0.5分增量给出(参见下文)。通常，在中风后的第一个月内肢体放置行为缓慢而稳定地恢复。
前肢放置测试(0-12)：
胡须放置(0-2)；
视觉放置(正向(0-2)，侧向(0-2))
触觉放置(背部(0-2)、侧部(0-2))
本体感受放置(0-2)。
后肢放置测试(0-6)：
触觉放置(背部(0-2)、侧部(0-2))
本体感受放置(0-2)。
对于每个分项测试，动物的得分如下所示：
0.0＝立即反应
0.5＝在2秒钟内反应
1.0＝2-3秒反应
1.5＝>3秒反应
2.0＝无反应
身体摇摆：在第-1天(手术前)、第1天、第7天、第14天、第21天、第28天、第30天、第32天、第42天、第44天、第46天、第56天、第58天、第60天评价。当通过尾部悬吊时，通过对头部移动至一侧或另一侧计数来评价身体摇摆。对于该测试，将大鼠保持距其尾根部约1英寸。然后，将其升高至桌子表面上方1英寸。将大鼠保持在垂直轴，垂直轴的定义是偏向左侧或右侧不超过10°。每当大鼠将其头部移动偏离垂直轴至任一侧时，记录摇摆。在尝试再一次摇摆前，大鼠必需返回至垂向位置以进行下一次要计数的摇摆。计数得到总计30次摇摆。本测试反映了纹状体功能的对称性(Borlongan等人，J.Neurosci1995；15:5372-8)，并且正常大鼠通常向任一侧摇摆的次数相等。在局灶性缺血后，大鼠倾向于向对侧摇摆(在这种情况下为左侧)。身体摇摆得分表示为右侧相对于总摇摆的百分比。在中风后第一个月内，存在身体摇摆得分的自发部分恢复(达到50％)。与肢体放置测试同时进行身体摇摆测试。
圆筒测试：在第-1天(手术前)、第7天、第21天、第30天、第32天、第44天、第46天、第58天、第60天进行评价。该试验评价了肢体使用的不对称性。将大鼠放置在透明圆筒(直径20cm，高30cm)内3-6 分钟。将镜子放置在圆筒后方以确定当动物转身远离照相机时的前肢运动。通过后腿站立期间对左前肢或右前肢接触壁的次数计数来确定动物所表现出的前肢使用不对称性的程度。还对后腿站立期间接触壁时左右前肢的同时使用进行评分。在测试期间，计数得到总计20次前肢放置。数据根据对壁运动的观察以相对于肢体使用总数的未损伤和/或损伤的前肢的百分比使用来表示。
血液采样：在用药(on-drug)行为评价完成后(第30、32、44、46、58和60天)，在施用剂量以评价此时的4-AP血浆水平后整90分钟时采集约300微升血液样品。从每种动物的隐静脉采集血液。将血液采集到K3EDTA管中，在4℃以10000rpm离心10分钟。获得血浆、冷冻并在约-80℃储存。分析样品的4-AP水平。使用电喷雾正离子模式的验证性液相色谱串联质谱检测法确定4-AP浓度。
安乐死和死后处理：梗死体积分析。在第63天，在最后一次行为评价后，用氯胺酮/赛拉嗪(100mg/kg氯胺酮，10mg/kg赛拉嗪，i.p.)使大鼠深度麻醉，并用生理盐水(用2单位/ml的肝素)，再用4％多聚甲醛或福尔马林穿心灌注。收获脑并处理用于组织学评价。处理每组中10个脑的亚组以进行梗死体积测量(H&E染色)。
梗死测量：将脑包埋在石蜡中并使用切片机切割5微米厚的冠状切片。使用标准方法，用苏木精和伊红(H&E)对切片染色。通过数字照相机对每个脑的七个冠状切片(与前卤相比，分别为+4.7、+2.7、+0.7、-1.3、-3.3、-5.3和-7.3)照像，使用修正脑水肿的“间接法”(完整对侧[左侧]半球面积-同侧[右侧]半球完整区域面积)通过NIH Image(Image J)确定每个切片上的梗死面积。然后，将各个切片的梗死面积相加并乘以切片厚度(切片间的距离)以给出总梗死体积，其可以表示为完整对侧半球体积的百分比。
法规遵从性：本研究在非GLP环境中，在AAALAC认证的机构中并根据标准优良科学原理和实践进行。
质量保证(QA)：在研究进行期间，由本实验室不参与该数据集采集的第二位科学家验证采集的数据。在原始数据内记录该验证，并将其与该研究的数据包一起保存。研究完成时，针对最终报告验证并复核整个数据包(所有原始数据、测量、笔记本和计算)。
统计方法
统计方法：对于每一期中每个处理组计算了相对于基线行为值的变化。基线定义为当动物在剂量施用期开始前未接受治疗时测量的行为值(对于1、2和3期，分别为第28、42和56天)。将每个完整剂量施用期的平均行为参数数据进行方差分析(ANOVA)。还使用平均法的最小二乘方中的 差异，使用每对处理之间的SAS成对比较，对数据进行混合模型分析以检验作为协变量的剂量、顺序、残余效应和实验期。p<0.005的值认为是统计学显著的。
在每一期内，将基线定义为该期第一天的测量，它是第28天、第42天和第56天。将相对于基线的变化作为其他天的测量距基线的差异。对于每个受试者，通过将每一期内相对于基线值的两个变化(例如，1期中第30天和第32天)相加并处以2来计算相对于基线的平均变化。
对于不同的行为终点，在excel页中提供了描述性统计(平均值和标准偏差)。计算了每个处理组在不同期的相对于基线的变化(N＝15)，不考虑该期中进行测量的天数。在一期中，将治疗作为仅有的协变量的单因素ANOVA用于比较不同治疗下的平均值。零假设是在不同治疗下均相同的平均值。当p值<0.01(对于身体摇摆)和<0.0001(对于后肢和前肢)时，强烈表明了统计学显著性。在99％置信水平时，零假设被否定，因此，得到结论：三种剂量水平对所研究的肌肉功能显示出显著不同的处理效果。
两组混合模型已用于进一步研究对结果的其他作用。在第一组混合模型中，结果变量是一期内两个基线后测量的平均变化。固定影响包括协变量：“剂量(dose)”、“顺序(seq)”、“残余效应(co)”和“期(phase)”。“剂量”是指三种处理，而“顺序”是指分配给每个组的处理顺序(即“高-低-载体”)。“co”是残余效应，其定义为来自前一期的剂量，其中1期的残余效应设置为0。仅有一个随机影响，id，它是嵌套在顺序中的受试者id。在第二组混合模型中，结果变量是一期内相对于基线的原始变化(未对两个基线后测量计算平均值)。将天数作为固定影响添加到模型中，从而使固定影响包括协变量：“剂量(dose)”、“顺序(seq)”、“残余效应(co)”、“期(phase)”和“天数(day)”。“天数”是进行测量的日子，它嵌套在期中。其余的固定影响与上述混合模型中的那些相同。仅有一个随机影响，id，它是嵌套在顺序中的受试者id。在两个混合模型中，从SAS提供了两部分输出。第一部分为“固定影响的第3类型测试”。通过统计学显著性P-值(<＝0.05)，可以得到以下结论：影响显著预测了结果。第二部分是“最小二乘方平均值的差异”，其中在每对处理(即高对于低)之间进行成对比较。小于或等于0.05的p值主张在不同处理下结果差异的统计学显著性。
对于前肢功能，第一模型表明期、剂量和残余效应是显著影响，而顺序不是。相比于低剂量(p＝0.0334)和载体(p＝0.001)，高剂量显著改善前肢功能；而相比于0.05水平的载体，低剂量未显示出统计学显著性改善。在第二混合模型中，天数显示为另一个显著影响，并且所有三种处理显示彼此差异显著(即，高对于低、高对于载体和低对于载体)，p<0.0001。总 的来说，对于前肢功能，两个模型显示期、剂量和残余效应是显著影响，但顺序不是。两个模型显示与低剂量和载体相比，高剂量将显著改善前肢功能。根据较小的p值，第二混合模型似乎检测处理影响时更灵敏。
将相同的分析过程应用于每个结果测量，其包括前肢、后肢和身体摇摆。
对于后肢功能，第一模型表明期和剂量是显著影响，但顺序或残余效应不显著。与载体相比(p<0.0001)，高剂量显著改善后肢功能，同样与载体相比(p＝0.0027)，低剂量显著改善后肢功能，而与低剂量相比，高剂量的确未显示出统计学显著性，其水平为0.05。在第二混合模型中，除顺序之外，所有影响显示出显著影响，并且所有三种处理显示彼此差异显著(即，高对于低、高对于载体和低对于载体)，p<0.0001。总的来说，对于后肢功能，两个模型显示期和剂量是显著影响。两个模型还表明与载体相比，高剂量和低剂量将显著改善后肢功能。根据较小的p值，第二混合模型似乎检测处理影响时更灵敏。
对于身体摇摆功能，第一模型表明仅剂量是显著影响。与载体相比(p＝0.0131)，高剂量显著改善身体摇摆功能，同样与载体相比(p＝0.033)，低剂量显著改善身体摇摆功能，而与低剂量相比，高剂量的确未显示出统计学显著性，其水平为0.05。在第二混合模型中，期显示为另一个显著影响。与低剂量(p＝0.006)和载体(p<0.0001)相比，高剂量显著改善了身体摇摆功能；而与载体相比，低剂量未显示出统计学显著改善，其水平为0.05。总的来说，对于身体摇摆功能，两个模型显示剂量是显著影响。
混合模型是相对于基线的变化＝剂量、顺序、残余效应、期、天数，其中id作为随机影响嵌套在顺序中。对于每一期，基线分别定义为第28天、第46天和第56天。剂量具有三个稳定的水平，高、低和载体；seq(顺序)具有作为三种不同剂量施用顺序的三个固定值，即“hlv”、“lvh”和“vhl”；co(残余效应)定义为上一期的剂量，其中1期的残余效应设置为0。id是来自数据的大鼠id。*表示根据基于α＝0.05的双侧检验的统计学显著性。
结果
表3示出了动物在处理组之间的分配。表4-6分别示出了组1-3中前肢放置测试的总分。表7-9分别示出了组1-3中后肢放置测试的总分。表10-12分别示出了组1-3中身体摇摆测试的总分。表13-15分别示出了组1-3中动物在不同时间点的体重。表16-18分别示出了组1-3中圆筒测试的总分(％整体不对称性)。表19-21分别示出了组1-3中圆筒测试的总运动得分。 表3：动物在处理组中的分配

表4：组1的前肢放置总分

表5：组2的前肢放置总分

表6：组3的前肢放置总分

表7：组1的后肢放置总分

表8：组2的后肢放置总分

表9：组3的后肢放置总分

表10：组1的身体摇摆测试(％右侧摇摆)

表11：组2的身体摇摆测试(％右侧摇摆)

表12：组3的身体摇摆测试(％右侧摇摆)

表13：组1的体重(g)

表14：组2的体重(g)

表15：组3的体重(g)

表16：组1的圆筒测试得分(总体不对称性(％))

表17：组2的圆筒测试得分(总体不对称性(％))

表18：组3的圆筒测试得分(总体不对称性(％))

表19：组1的圆筒测试(总运动)

表20：组2的圆筒测试(总运动)

表21：组3的圆筒测试(总运动)

MCAO导致感觉运动功能大量急性丧失，到第4周预处理结束时，在所有动物中感觉运动功能部分恢复，并达到稳定缺陷的平台期。
所有组(1-3)对MCAO引起的缺血显示出典型恢复反应，其中在正要手术前(第-1天)为正常得分0，而在闭塞后24小时内(第1天)功能完全丧失(前肢，得分12；后肢，6)。在随后的4周未处理期内，前肢和后肢得分分别改善为约5.5和3，并且达到恢复的平台水平(图3和图4)。在身体摇摆测试中，在手术后当天动物显示出小于5％的偏向右侧的摇摆，而在4周未处理期结束时恢复至约25％右侧摇摆(图5)。尽管不显著，但是在1期和2期之间以及2期和3期之间的无药物期内，相对于预处理水平，基线行为测量轻微改善。这可能是由于缓慢连续的内源恢复、反复行为评价的训练作用以及可能的处理残余效应所造成的。
在研究结束时，所有动物接受每一种处理。每天向大鼠施用两次4-AP(在本研究中和实施例17所提供的研究中)。由于1-1.5小时的清除半衰期(Hayes等人，J.Clin.Pharmacol.2003；43:379-85)，该方案不能保持所述化合物长期的血浆水平，但是它的确使得每天在动物中反复暴露。在剂量施用后1小时进行行为评价从而在评价期间确保足够的暴露，并且每个剂量施用期的三天间隔可以在进行行为评价前帮助动物适应口服喂食的压力。行为评价完成后30分钟，抽血以确认动物中剂量相关的达伐吡啶水平(表22)。应注意将本文所使用的剂量或所获得的血浆浓度等同于用所述药物的缓释制剂处理的患者中预期的浓度是不可能的，其中它们的药物动力学相差很大。与血液相比，脑脊髓液中测量的峰值浓度也存在延迟，在人受试者中为约1小时(Donovan等人，Spinal Cord2000；38:7-15)。因此，与长期保持的类似浓度相比，在喂食后，对于给定血浆水平在中枢神经系统中实现的4-AP的浓度很可能比瞬时血浆峰值低得多。
前肢放置测试示出了治疗对前肢功能的作用。图3显示缺血性脑损伤后4周，用低剂量或高剂量4-氨基吡啶治疗对改善大鼠中前肢功能是有效的。图3还显示这种作用是剂量响应的。由于停药后该作用减弱，因此它还是可逆的。
后肢放置测试示出了治疗对后肢功能的作用。图4A-D显示缺血性脑损伤后4周，用低剂量或高剂量4-氨基吡啶治疗对改善大鼠中后肢功能是有效的。图4A-D还显示该作用是可逆的。值得注意地，由于相对于用低剂量或载体对照治疗，用高剂量治疗导致行为得分改善，因此该作用是剂量响应的。
身体摇摆测试示出了治疗对全身控制的作用。图5显示使用低剂量或高剂量4-氨基吡啶的治疗对改善大鼠中相对于总摇摆的右偏百分比是有效的，并因此，对改善缺血性中风症状之一是有效的。因此，图5显示4-氨 基吡啶对改善大鼠中全身控制是有效的。图5还显示这种作用是可逆的和剂量依赖的。
与预处理基线得分相比，在第一剂量施用期接受2mg/kg4-氨基吡啶的组1动物(图3-5)显示出前肢、后肢和身体摇摆得分的显著改善(第28天相对于第32天；p值<0.05)。在剂量施用1期和2期之间(清除期，第33-42天)，对肢体放置的影响返回至接近基线水平。在第2剂量施用期，组1中的动物接受0.63mg/kg的4-氨基吡啶。相比于在马上要剂量施用之前的清除期内的得分，所有行为得分显著改善(第42天相对于第46天；p<0.05)，尽管它们未实现与第一高剂量施用期相同程度的改善。在第2和第3期之间的清除期内(第47-56天)，行为得分下降至类似于基线得分的水平(第56天)。本组中的动物在第三剂量施用期内接受载体，并且与马上要剂量施用前的那天相比，未发现行为得分的变化(在第56天)。
与预处理基线得分相比，在第一剂量施用期接受0.63mg/kg4-氨基吡啶的组2动物(图3-5)在所有测量中显示出显著改善的行为得分(第28天相对于第32天；p值<0.05)。在剂量施用1期和2期之间，当动物未接受药物时，对行为的影响下降至类似于前期剂量施用时的水平(第42天)。在剂量施用2期内，本组中的动物接受载体，并且在行为测试得分中未显示出变化。在2期和3期之间的清除期内(第47-56天)，它们仍保持在基线功能水平。本组中的动物在剂量施用3期接受2mg/kg的4-氨基吡啶，并且相比于前期基线得分，所有行为测试得分显著改善(第56天相对于第60天；p值<0.05)。
在不同治疗期，组3中的动物(图3-5)具有与组1和2中所观察到的那些类似的结果。这些动物在1期接受载体。在1期和2期之间的清除期内，没有任何行为得分的变化并且动物保持在该功能水平。与紧邻每期之前的停药评价相比，2期中2mg/kg和3期中0.63mg/kg的4-氨基吡啶治疗在肢体放置中产生了显著改善(分别为第42天相对于第46天，和第56天相对于第60天；p值<0.05)。在2期中的高剂量治疗期间，身体摇摆得分得到改善(第42天相对于第46天；p<0.05)，但是对于第3治疗期内的低剂量治疗来说未发生改变。在2期和3期之间的清除期内，返回至基线行为(第56天)。
总之，不考虑它们的治疗顺序，所有动物对各自治疗的反应类似。在所有情况下，与载体和低剂量相比，任何剂量施用期内的最高剂量导致了显著的改善(p值<0.05)，并且根据所使用的统计模式(ANOVA或混合模型分析，参见以上统计方法一节)，与载体相比，低剂量是统计学较好的并且倾向于显著。
除了治疗前每周评价外，在任何给定剂量施用期内实施两次评价(第1和第5次剂量之后)。注意到了这些得分之间的轻微改善(例如，组3，在第30天和第32天之间，当动物接受载体治疗时)。这可以是由于对口服喂药压力的适应所造成的，或者可能由于动物对测试的熟悉和预测，而成为了学习反应的指示。在实施例17所提供的研究中未观察到这种作用(参见对照小组，第56天等)，其中分别在3天剂量施用期内对动物测试1次。由于基线仍轻微改善并且未测试所有可能的剂量施用顺序，因此不可能确定上述4-AP暴露会使动物在随后一期中施用4-AP时倾向于较大或较小的反应。为了消除由于剂量顺序差异所造成的这种可能的残余效应，将实施例17中提供的研究设计成没有清除期的剂量递增研究。
圆筒测试示出了治疗对全身控制方面的作用，如身体对称性和协调性。通过显示大鼠中受损伤前肢的使用相对于肢体总使用的百分比的增加，图7显示4-氨基吡啶的治疗对改善由中风所产生的肢体使用不对称性是有效的。因此，图7显示4-氨基吡啶对改善大鼠中身体的对称性和协调性是有效的。图7还显示这种作用是可逆的和剂量依赖的。
图9显示在组1-3之间，未观察到梗死体积差异。具体地，在任何这些组之间，平均梗死体积(对侧半球的％)是相同的。组1中平均梗死体积(％)为45.0(±1.8)，组2中为41.4(±2.3)，组3中为39.0(±3.3)。
4-氨基吡啶血浆水平：当动物接受载体治疗时，抽取的血液样品中4-氨基吡啶的水平低于该方法的定量下限。当动物接受4-氨基吡啶时，抽取的样品确认行为测试时的暴露与剂量水平适当相关。4-氨基吡啶血浆水平如表22所示。
表22：4-氨基吡啶的血浆水平。

SE，标准偏差
*BLOQ＝低于定量下限(<1.0ng/mL)
数据显示在每个单独的治疗期和总治疗期期间，4-氨基吡啶治疗导致前肢、后肢和身体摇摆功能显著改善。此外，本发明人所使用的几个交叉统计模型显示在相同的基础上，与载体对照和低剂量相比，高剂量显著更好(对于肢体放置测试，p<0.0001，对于身体摇摆，p<0.001)。相比于载体对照，对于改善来说，低剂量显示出强烈的趋势或达到显著。另外，在剂 量施用期内第二评价期间的得分比第一用药评价显著更好。因此，本实施例示出了当在动物中4-AP处于可检测的血浆水平时前肢和后肢感觉运动功能中可逆和剂量依赖性改善。身体摇摆测试数据还示出了对体态功能恢复的剂量依赖性作用。这可能是对纹状体中的束的作用或者可能是对皮质下白质区的作用的迹象。此外，本实施例示出了每个组内以及在每一期时各个组之间对使用4-AP治疗的明显和剂量依赖性反应。
另外，图3-8中的结果显示用4-氨基吡啶连续治疗可以在感觉运动行为结果中产生进一步改善。具体地，平均来说，相对于单剂量4-氨基吡啶后的行为得分，施用多剂量4-氨基吡啶后的行为得分得到改善。
这些结果显示用4-氨基吡啶治疗对改善患有这些功能的中风相关损伤的哺乳动物中的感觉运动功能是有效的。这些结果还表明了当在中风事件后具有稳定运动缺陷的慢性期开始治疗时中风相关感觉运动损伤中的改善。基于该数据，可以得到结论：4-氨基吡啶显著改善了中风后慢性感觉运动功能缺陷。
6.3 实施例3：缺血性中风的治疗
进入医疗机构的患者具有缺血性中风的体征和症状。用tPA或其他疗法使患者血运重建以恢复血流。尽管血流已恢复，但是已发生了一定水平的脑损伤。中风后3天，在神经学方面评价患者并且显示患者具有可测量的感觉运动功能缺陷。在第2天之后和第3天之后，从第4天开始，以每次剂量0.01至1.0mg/kg之间的剂量用4-氨基吡啶静脉内处理该患者，处理10天至3个月。在治疗期间和治疗后，评价感觉运动功能。
6.4 实施例4：中风和所造成的右手麻痹的治疗
进入急诊部的患者患有右手麻痹。在评价和成像后，确定该患者患有缺血性中风。根据批准的方法，患者接受tPA，并且血流恢复通过血栓。然而，tPA治疗1周后，该患者具有残留的右手麻痹，如通过手部运动活动的标准神经学测量所测量的。在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或更长的时间，该患者开始用4-氨基吡啶处理(0.01至1.0mg/kg，IV)，每周一次，处理4周。由神经学家或其他医师用标准神经学测试(包括测力计及其他力量测试)定期测量手部功能的改善。在治疗期间和治疗后，评价右手的感觉运动功能。
6.5 实施例5：缺血性中风的治疗
进入医疗机构的患者具有缺血性中风的体征和症状。发现他们患有左侧麻痹。患者未能及时到达以进行血运重建疗法。通过临床评价，发现发生了一些脑损伤。中风后3天，在神经学方面评价患者并且显示患者具有可测量的感觉运动功能缺陷。在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或更长的时间，该患者开始每天以每次剂量0.01至1.0mg/kg之间的剂量用4-氨基吡啶静脉内处理，处理4周；此后，它们接受每周剂量6个月。他们还接受了物理疗法。治疗期间(例如，2周后)和治疗后，评价了左侧感觉运动功能。
6.6 实施例6：缺血性中风的治疗
进入急诊的患者患有左手麻痹。患者报告他们手部的问题“在一周前”开始。在评价和成像后，确定该患者患有缺血性中风。患者未接受tPA。通过神经学检查发现患者具有残留的左手麻痹，如通过手部运动活动的标准神经学测量所测量的；患者还患有感觉缺陷。患者拒绝参加物理或职业疗法。在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或更长的时间，该患者开始用4-氨基吡啶处理(0.01至1.0mg/kg，IV)，每周一次，处理12周。由神经学家或其他医师用标准神经学测试(包括测力计及其他力量测试)定期测量手部功能的改善。治疗期间(例如，治疗2周后)和治疗后，评价了左手感觉运动功能。
6.7 实施例7：出血性中风的治疗
进入医疗机构的患者具有与缺血性中风或脑溢血一致的体征和症状。稳定患者。通过神经学评价，发现发生了一定水平的脑损伤。中风后1周，再次在神经学方面评价患者并且显示患者具有可测量的感觉运动功能缺陷。在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或更长的时间，该患者开始每天以0.01至1.0mg/kg之间的剂量用4-氨基吡啶静脉内处理，处理10天，然后每周施用该剂量，施用2个月，此时停止所有治疗。评价感觉运动功能(例如，中风后1、2、3、4、5、6周和/或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月后和/或从疗法开始起)。
6.8 实施例8：中风相关损伤的4-氨基吡啶治疗，包括慢性期中的治疗
对于综合试验，入选标准包括：成年人，男性和女性，具有神经损伤的临床迹象。
要研究的指征：
使用血栓溶解剂的缺血性中风，
不使用血栓溶解剂的缺血性中风，
出血性中风。
要研究的剂量范围：
每次剂量0.001mg/kg至10.0mg/kg。
要研究的剂量频率：
每天
每隔一天
每4天
每周1次
每隔1周1次
每月1次。
混合的周期性方案：
-每日一次，进行1或2周，然后每周、每两周或每月1次，进行剩余的研究。
-每隔一天1次，进行1或2周，此后每周、每两周或每月1次。要研究的治疗的开始：
在中风事件后，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、 54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或者更长的时间。
要研究的治疗持续时间：
治疗1、2、4、10、30周。
治疗1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月
治疗1、2、3、4、5、6、7、8、9、10年。
要研究的功能：
手部运动功能，
面部运动功能，
存活，
返回工作岗位的时间。
通过标准神经学测量来测量恢复。
结果：通过如上所述的治疗，使用本领域中已知的方法评价了用4-氨基吡啶处理的患者和用安慰剂处理的患者的感觉运动功能，并且比较了测试结果。
在替代性实施方式中，研究了少于上述所有参数的组合。
6.9 实施例9：单侧手无力和/或麻痹的缺血性中风的4-氨基吡啶治疗(未使用血栓溶解)
入选标准包括：成年人，男性和女性，基于意识丧失、定向障碍、言语困难、面部或肢体麻痹的中风迹象。用放射照相成像确认缺血性中风。
患者选择那些单侧手无力和/或麻痹并且出于任何原因不是tPA(或其他血栓溶解剂)候选或者先前未接受tPA的患者。从患者和/或授权替患者签字的某个人处获得同意。
在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或者更长的时间，招募患者并将他们随机分配以接受4-氨基吡啶或安慰剂，并且他们一进入医疗机构(包括医院或医生办公室)、诊断并获得成像就开始治疗。
对于该试验，在损伤后1小时至7天之间开始治疗。治疗持续3个月，每隔一天施用剂量，施用1周，然后对于治疗期剩下的时间，每周一次。向患者静脉内、肌内或皮下施用0.0001mg/kg至1.0mg/kg的剂量。
在研究期间，每隔一周通过手部感觉运动活动的标准神经学测量来测量恢复。
结果：通过如上所述的治疗，使用本领域中已知的方法评价了用4-氨基吡啶处理的患者和用安慰剂处理的患者的手部功能，并且比较了测试结果。
6.10 实施例10：不使用血栓溶解剂，单侧面部神经麻痹的中风的4-氨基吡啶治疗
患者选择那些单侧面部神经麻痹并且未接受或不能接受血栓溶解剂的患者。在3个月的剂量施用期内，每隔一周通过本领域中已知的方法评价功能。从患者和/或授权替患者签字的某个人处获得同意。
招募患者并随机分配接受4-氨基吡啶或安慰剂。在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或者更长的时间开始治疗。治疗持续3个月，每隔一天施用剂量，施用1周，然后对于治疗期剩下的时间，每周一次。向患者静脉内、肌内或皮下施用0.0001至1.0mg/kg的剂量。
结果：通过如上所述的治疗，评价了用4-氨基吡啶处理的患者和用安慰剂处理的患者的面部运动；并且比较了测试结果。
6.11 实施例11：缺血性中风的4-氨基吡啶治疗(使用血栓溶解)
入选标准包括：成年人，男性和女性，基于意识丧失、定向障碍、言语困难、面部或肢体麻痹的中风迹象。用放射照相成像确认缺血性中风。
患者选择那些单侧手无力和/或麻痹并且已用tPA或其他血栓溶解剂治疗的患者。从患者和/或授权替患者签字的某个人处获得同意。
招募患者，并且患者一进入医疗机构、诊断并完成成像后就将他们随机分配以接受4-氨基吡啶或安慰剂。
在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或者更长的时间开始治疗。治疗持续3个月，每隔一天施用剂量，施用1 周，然后对于治疗期剩下的时间，每周一次。向患者静脉内、肌内或皮下施用0.0001mg/kg至1.0mg/kg的剂量。
在研究期间，每隔一周通过手部感觉运动活动的标准神经学测量来测量恢复。
结果：通过如上所述的治疗，通过本领域中已知的方法测量了用4-氨基吡啶处理的患者的手部功能，并与用安慰剂处理的患者相比较。
6.12 实施例12：不使用血栓溶解剂，发音困难的中风的4-氨基吡啶治疗
患者选择那些发音困难并且未接受或不能接受血栓溶解剂的患者。在3个月的剂量施用期内，每隔一周通过本领域中已知的方法评价功能。从患者和/或授权替患者签字的某个人处获得同意。
招募患者并随机分配接受4-氨基吡啶或安慰剂。在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或者更长的时间开始治疗。治疗持续3个月，每隔一天施用剂量，施用1周，然后对于治疗期剩下的时间，每周一次。向患者静脉内、肌内或皮下施用0.0001至1.0mg/kg的剂量。
结果：通过如上所述的治疗，使用本领域中已知的方法评价了用4-氨基吡啶处理的患者由于发音困难所造成的言语损伤，并与用安慰剂处理的患者相比较。
6.13 实施例13：发音困难的患者的4-氨基吡啶治疗(使用血栓溶解剂)
入选标准包括：成年人，男性和女性，基于意识丧失、定向障碍、言语困难、面部或肢体麻痹的中风迹象。用放射照相成像确认缺血性中风。患者选择那些发音困难并且确实接受了血栓溶解剂的患者。
在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或者更长的时间开始治疗。治疗持续3个月，每隔一天施用剂量，施用1 周，然后对于治疗期剩下的时间，每周一次。向患者静脉内、肌内或皮下施用0.0001至1.0mg/kg。
在3个月的剂量施用期内，每隔一周通过本领域中已知的方法评价功能。
结果：通过如上所述的治疗，评价并比较了用4-氨基吡啶处理的患者和用安慰剂处理的患者由于发音困难所造成的言语损伤。
6.14 实施例14：出血性中风患者的4-氨基吡啶治疗
入选标准包括：成年人，男性和女性，基于意识丧失、定向障碍、言语困难、面部或肢体麻痹的中风迹象。用放射照相成像确认出血性中风。从患者和/或授权替患者签字的某个人处获得同意。
患者选自那些单侧手无力的患者。
招募患者，并且患者一进入医疗机构(包括医院或医生的办公室)、诊断、成像并获得同意后就将他们随机分配以接受4-氨基吡啶或安慰剂。
在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或者更长的时间开始治疗。治疗持续3个月，每隔一天施用剂量，施用1周，然后对于治疗期剩下的时间，每周一次。向患者静脉内、肌内或皮下施用0.0001mg/kg至1.0mg/kg的剂量。
在研究期间，每隔一周通过手部感觉运动活动的标准神经学测量来测量恢复。
结果：通过如上所述的治疗，通过本领域中已知的方法测量了用4-氨基吡啶处理的患者的手部功能，并与用安慰剂处理的患者相比较。
6.15 实施例15：出血性中风患者的4-氨基吡啶治疗
在人中，使用以下规程评价了以0.05至0.1的剂量水平施用单次剂量或多次日剂量的4AP对血栓性中风后的功能性结果的影响。
目的：评价在慢性缺血性中风中口服或静脉内施用4AP的效力和安全性。
设计：多中心、随机、双盲、安慰剂对照的安全性和效力研究
入选标准：患有缺血性中风和肢体无力并且在中风前功能性完全独立的患者
排除标准：患有严重疾病并且预期寿命小于6个月患有已知的严重 肾病、目前已知酗酒或滥用非法药物或对它们有依赖性的患者。排除出血性中风患者。
患者参与：在中风事件后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24周；2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、42、48、54、60或66个月；0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或6.5年或者更长的时间开始，将患者随机分配以接受单剂量4AP或安慰剂，或2周日剂量的4AP或安慰剂。在4AP治疗后的多个时间点采集血液样品以确定大致在评价感觉运动功能结果时的血浆药物浓度。
主要结果：通过改良Rankin量表和NIH量表测量了治疗后2天(单次剂量施用)或2周(多剂量施用)时的整体恢复和感觉运动功能的恢复。
通过4-AP治疗，测量了单次或多次施用后中风患者中的感觉运动功能并与基线功能和安慰剂治疗相比较。
6.16 实施例16：缺血性中风后慢性缺陷受试者中10mg达伐吡啶缓释片剂的研究
6.16.1 缩写表
在本研究规程中使用了以下缩写和专业术语：
缩写或专业术语解释ADL日常生活活动AE不良事件AST天冬氨酸转氨酶BDI白氏抑郁症量表BMI体重指数BUN血液尿素氮C摄氏CFB相对于基线的变化CGI临床医生总体印象CP大脑性麻痹CRF病例报告表EOS早期癫痫发病ER缓释F华氏FAP全分析群体FIM功能独立性测量FMAFugl-Meyer评价
缩写或专业术语解释GCP优良临床规范HDPE高密度聚乙烯HEENT头、耳、眼、鼻、喉ICH国际协调会议IEC独立的伦理委员会IND试验性新药INN国际非专利名称IRB机构审查委员会LOS晚期癫痫发病LEMMT下肢手法肌肉测试mg毫克MRI磁共振成象MS多发性硬化MSWS-1212-项多发性硬化行走量表PPP符合方案的群体RBC红细胞SAE严重不良事件SGI受试者总体印象SSRI血清素重吸收抑制剂T25FW定时25英尺步行TMS经颅磁刺激UPT尿妊娠试验US美国USAN美国采用的名称UTI尿路感染WBC白细胞
6.16.2研究目标
检验每天间隔约12小时施用两次10mg达伐吡啶-ER(即，10mg4-氨基吡啶的缓释制剂)对以下临床功能的影响：
●通过定时25英尺步行测试(T25FW)测量的步行速度
●通过积木与盒子测试测量手部敏捷性
●通过握力测试和挤捏测试来测量手部力量
●通过Fugl-Meyer评价(FMA)来测量运动和感觉功能
●任选地，通过失能评估量表(DAS)来测量上肢强直
●通过功能独立性测量(FIM)量表测量进行日常生活活动(ADL)所需的辅助
●受试者总体印象(SGI)量表
●临床医生总体印象(CGI)量表
●任选地，通过白氏抑郁症量表(BDI)来测量抑郁(以排除严重抑郁)
6.16.3研究计划
这是在缺血性中风后患有慢性稳定感觉运动功能缺陷的受试者中每天间隔约12小时服用两次10mg达伐吡啶-ER的研究。本研究设计为双盲、安慰剂对照、2阶段交叉研究。本研究将在多个位置进行，计划对66位受试者进行。8周的研究时间包括2周筛选期、2周第一期治疗、1周清除期、2周第二期治疗和1周治疗后后续电话跟踪。在整个研究期间将监控不良事件。另外，在每个研究期内将进行简单的身体检查和生命指征测量以评价相对于基线的可能变化。如下所述，还将施用一组功能性和主观临床评价。
获得受试者知情同意后，通过病史检查、先前脑成像结果、SMA-12化学测试，包括肌酐清除率估计、尿分析和有分娩可能的妇女的尿妊娠试验(UPT)，在筛选访问(访问1)将确定资格。将实施白氏抑郁症量表(BDI)以排除严重抑郁。在筛选时，还将实施步行速度(T25FW)、手部敏捷性(积木和盒子测试)、手部力量(握力和挤捏测试)、上下肢运动功能(FMA)、上肢运动强直(DAS)和进行日常生活活动所需的辅助(FIM)测量。将在访问2完成筛选期(第-14天至第-1天)，其标志着合格受试者1期的开始。
在访问2(第1天)，受试者将以2：1的比值随机分配至两个盲法处理顺序之一：安慰剂然后达伐吡啶-ER(顺序A)或达伐吡啶-ER然后安慰剂(顺序B)。将进行先前访问中所实施的相同临床评价。向受试者提供1周它们所分配的试验治疗，然后出院回家。将指示它们在当晚服用第1次剂量，并且约每12小时服用1次剂量直至下次访问的上午。在此期间，将以1周间隔对他们另外访问两次：访问3(第8天)和访问4(第15天)。在这些访问的每次中，将进行类似的一组临床评价，加入了受试者总体印象(SGI)和临床医生总体印象(CGI)。每次访问时，详细的评价计划表参见表23。在访问3，在研究程序完成时，将分配新的实验产品。
在访问4，在研究程序完成时(1期结束时)，将开始1周的清除期，所有受试者将服用安慰剂。将向受试者提供单盲安慰剂并出院回家，指示他们在当晚服用第1次剂量，并且约每12小时服用1次剂量直至下次访问的上午。
对于两个组来说，访问5(第22天)标志着2期的开始。在这次访问期间，受试者将具有一套新的临床评价，之后他们将根据对每组所建立的顺序开始交叉治疗。在此期间，将在两次额外的每周访问时：访问6(第 29天)和访问7(第36天)进行类似的一组评价。除2期结束时的访问7之外，在每次访问时，在研究程序完成时，将分配试验产品。
电话跟踪访问，访问8(第43天)，将在1周后发生以评价不良事件。在跟踪电话后，将完成研究参加。
将指示受试者具有针对在治疗评价访问(访问3、4、6和7)期间，在所安排的研究评价开始前2小时服用早晨剂量的试验产品的剂量施用计划表，以对应于达伐吡啶-ER大致的峰值血浆浓度。
为了监控治疗的配合性，将获得血液样品以确定筛选访问后的所有临床访问时的血浆研究药物浓度。
图10中图示地示出了研究设计。表23提供了研究程序的附带访问(by-visit)计划表并且下文可见对程序的说明。
表23：评价计划表


¹所有测量将在第1天第1次治疗开始和第22天交叉治疗开始前进行。
²仅在筛选时进行完整的身体、身高和体重检查；后续访问时进行简单的身体检查。
³所有取样在已进行了临床功能评价后进行。
⁴如果结果为阳性，则需要确认性培养
⁵测试每只手，先测试优势手
⁶对于每只手，握力测试、指尖捏、钥匙捏和手掌测试进行三次试验
⁷分配1周的试验产品，并指示受试者在家约每12小时服用1次剂量，在访问当晚开始
⁸电话跟踪访问以评价不良事件
6.16.4受试者的选择和退出
(a)入选标准
如果它们满足所有下列标准，则受试者可以入选本研究：
1.由于缺血性中风所造成的稳定感觉运动功能缺陷病史，如通过先前成像发现(MRI/CT扫描)由评价人员所确认的
2.中风后≥6个月
3.包括年龄在18至85岁的男性或女性
4.体重指数(BMI)在18.0-35kg/m²的范围内入选
5.先前未使用过Ampyra、达伐吡啶、氨吡啶或4-氨基吡啶(4AP)
6.具有足够的步行能力，从而根据需要在筛选访问和所有其他访问时能完成T25FW
7.下肢运动Fugl-Meyer得分≤27
8.进行所有所需研究程序的能力
9.足够的认知能力以提供知情同意，如通过评价人员所确定的。
10.在4周筛选访问内，稳定的伴随药物疗法方案。
(b)排除标准
满足任何以下排除标准的受试者不适合参加本研究：
1.具有分娩可能的性活跃妇女，其未手术绝育、经绝后小于两年或者未使用有效的节育方法
2.怀孕或哺乳
3.癫痫史，单纯性热性癫痫除外
4.中度或重度肾损伤，如通过使用Cockcroft-Gault公式所计算的肌酐清除率≤50mL/分钟所定义的
5.筛选访问时或筛选访问前4周内有活动性尿路感染(UTI)的迹象
6.筛选访问前4周内开始的处方药物治疗方案或疗法，和/或在研究过程中伴随的药物治疗方案或伴随的疗法预期会改变
7.筛选访问前4周内开始的巴氯芬或替扎尼定或者筛选访问前4周内的任何剂量施用方案的变化
8.筛选访问前3个月内开始的血清素重吸收抑制剂(SSRI)，或者筛选访问前3个月内剂量施用方案的任何变化
9.筛选访问前2个月内肉毒毒素的使用
10.过去一年内药物滥用或酗酒史
11.过去6个月内肢体中任一个进行了整形外科手术程序
12.受试者具有异常实验室值，在评价人员的判断中，该值是临床显著的并且有可能影响受试者安全完成研究的能力
13.如评价人员所认为的，不稳定性绞痛、不受控制的高血压或任何其他显著的心血管异常
14.如白氏抑郁症量表(BDI)中得分≥30所指示的严重抑郁
15.根据评价人员判断的任何其他医学病况，它将干扰研究的进行或对研究结果的解释
16.在筛选访问前4周内参加了试验性介入性试验
17.诊断有多发性硬化
(c)受试者退出标准
退出标准是任选的，其包括下列理由中的一个或多个：
●受试者经受不良事件(如癫痫发作)
●妊娠
●受试者不配合该规程
●受试者无法跟踪
●受试者酗酒或滥用药物或者不再满足另一个合格标准
6.16.5受试者的治疗
(a)要施用的治疗
每位受试者将接受28次剂量的(A)10mg达伐吡啶-ER，和42次剂量的(B)安慰剂(包括在安慰剂清除期内的14次剂量)。将在家用水服用片剂。将如以下部分(b)中所述确定治疗顺序。
将在访问2、3、4、5和6时，在评价完成后将试验产品分配给受试者。将指示受试者在访问当晚服用第1次剂量，并且在约12小时后，在接下来的早晨服用下一次剂量。将指示受试者在尽可能一致的时间每12小时继续进行剂量施用。将告知受试者他们不能补偿错过的剂量。
每次分配的最后一次剂量将是下一次计划访问的早晨所服用的剂量。将指示受试者具有针对在治疗评价访问：访问3、4、6和7期间，在所安排的研究评价开始前2小时服用早晨剂量的试验产品的剂量施用计划表。
(b)将受试者分配至处理组的方法
在访问1时，根据研究开始前所产生的随机方案，分别以2：1的比值将受试者随机分配至两个盲法处理顺序(A或B)中的一个中。
A：安慰剂，然后达伐吡啶-ER
B：达伐吡啶-ER，然后安慰剂
(c)盲法
药物施用将是双盲的，这表示治疗顺序是受试者和试验点人员都不知道的。
清除期将是单盲的，这表示试验点人员将知道在此期间正在施用安慰剂，但受试者不知道。
(d)治疗配合性
将鼓励受试者服用所有所开的剂量。将通过返回的药瓶中药片计数的清单并通过获得血液样品以确定每个治疗期内血浆达伐吡啶浓度来监控治疗配合性。将记录任何不配合的原因。
(e)先前和伴随的药物
出于维持稳定症状的目的，在研究期间并且还对于研究前的一段时间，排除以下药物：
●在筛选访问前不到4周开始或剂量施用改变的巴氯芬或替扎尼定
●在筛选访问前不到3个月开始或剂量改变的SSRI
●在筛选访问前不到2个月施用的肉毒毒素
●在筛选访问前不到4周开始或改变的其他处方药物(或疗法)
除了根据需要出于受试者的安全之外，在研究期间将不会改变伴随的治疗。
6.16.6 试验产品的描述
活性剂：将使用商品化药物。AMPYRA(达伐吡啶)缓释片剂是白色至米白色，双凸面，卵形，涂覆薄膜，具有平边的非刻痕片剂，其一侧有“A10”凹痕，含有10mg达伐吡啶。非活性成分包括胶体二氧化硅、羟丙基甲基纤维素、硬脂酸镁、微晶纤维素、聚乙二醇和二氧化钛。
安慰剂：安慰剂片剂的外形与AMPYRA片剂相同并且含有相同的非活性成分。
6.16.7 研究程序
以下部分描述了将在本研究中获得的基线和临床功能测量。下文提供并在表23中总结了研究访问的详细程序计划表。
参加任何研究程序前，受试者必需提供书面知情同意。
(a)血浆达伐吡啶浓度
在完成所有临床功能评价后，将获得用于确定血浆达伐吡啶浓度的血液样品。这些测量的目的是为了评价治疗配合性。将最少7mL全血收集到适当标记的肝素管中并保持低温(即在湿冰上)直至离心。收集后立即将所述管低速离心并将约3mL血浆从每个样品中转移到标记的管中。将血浆在-20℃保存直至要求运输至中心实验室。此时，将冷冻血浆样品收集在一起并在保温容器中在干冰上通过快递过夜送至指定的中心实验室。
(b)临床评价
定时25英尺步行(T25FW)
T25FW测试是步行功能的定量测量。指示受试者尽可能快速地从明显标记的，无障碍的25英尺路程的一端步行至另一端。将根据the National Multiple Sclerosis Society出版的“施用和评分手册(Administration and Scoring Manual)”中提供的详细指示进行T25FW(Fischer J等人，National Multiple Sclerosis Society.2001；1-410)。受试者将以他们的鞋尖位于标记出发线上站立，并且以受试者足部任何部分超过该线开始计时。当受试者足部任何部分超过标记终点线时，结束计时。使用为本研究所提供的跑表，以秒记录时间并将其圆整至最接近的十分之一秒。以两次试验之间允许最长5分钟的休息期，通过让受试者从相同距离步行返回，再次实施任务。如果需要，受试者可以使用适当的辅助装置。要求受试者维持其正常活动，不能排练或练习测量从而不公平地改善它们在访问之间的表现得分。对于T25FW，在每次评价时尽量使用相同的测试房间和相同的指定区域。尽可能将外部干扰的可能保持在最低限度。
步行速度的标准数据是可用的(Bohannon R.，Age and Ageing.1997；26:15-19)。对于≥18岁并且<20岁的受试者，将使用20-30岁年龄组(20s decade age group)的标准数据。
盒子与积木测试
盒子与积木测试(Mathiowetz V等人，Am J Occup Ther.1985；36(6):386-391)已用作有效并且可靠的手部敏捷性测量。指示受试者从盒子的一侧快速拾起积木，每次一个，并将每个积木运输通过隔板至盒子的另一侧，并扔下积木。该测试起初是开发用于评价大脑性麻痹的成年人的手部粗糙灵活性的。正常成年人的数据是可用的(Bohannon R.，Age and Ageing. 1997；26:15-19)。对于≥18岁并且<20岁的受试者，将使用20-24岁年龄组的标准数据。
将统一在挤捏测试和握力测试前进行积木与盒子测试以最大程度减少疲劳的影响。将测试优势手和非优势手，从优势手开始。
通过握力和挤捏测试的手部力量
握力测试(Mathiowetz V，等人，Arch Phys Med Rehabil.1985；66:69-72)用作简单、有效并且可靠的测量以鉴别手部力量问题，检测可以由职业疗法程序、疾病或损伤的过程所引起的变化，或者显示患者力量与一般群体之间的关系。使用测力计测量手部力量。
挤捏测试(Mathiowetz V，等人，Arch Phys Med Rehabil.1985；66:69-72)用作简单、有效并且可靠的测量以鉴别挤捏力量问题，检测可以由职业疗法程序、疾病或损伤的过程所引起的变化，或者显示患者力量与一般群体之间的关系。它具有三个部分，指尖捏、钥匙捏和手掌捏。使用指捏力计测量挤捏强度。
每次测量时，对于每只手的握力测试、指尖捏、钥匙捏和手掌测试进行三次试验。
成年人中握力和挤捏测试的标准数据是可用的(Mathiowetz V，等人，Arch Phys Med Rehabil.1985；66:69-72)。对于≥18岁并且<20岁的受试者，将使用20-24岁年龄组的标准数据。
Fugl-Meyer评价(FMA)
FMA是基于表现的损伤评价，其设计用于评价中风后半身不遂的患者中的运动功能、平衡性、感觉和关节功能(Fugl-Meyer AR等人，Scand J Rehabil Med.1975；7(1):13-31)。对于该研究，将评价上肢(UE)运动功能、下肢(LE)运动功能和感觉的区域(参见表24)。
表24：Fugl-Meyer评价得分表



在严重性的3分量表上对项目评分。可以单独确定每个区域的总分，并且可以将总UE和LE得分合并得到总运动得分。
失能评估量表(DAS)
任选地，进行DAS。
开发了DAS以评价一般在中风后上肢强直患者中受影响的4个功能区域中的损伤：个人卫生、穿衣、疼痛和肢体位置。临床医师将使用范围从“未失能”至“严重失能”的4分量表对这些区域的每一个中受试者的损伤水平进行评分。将根据以下指南进行4个功能区域的评价(Brashear A等人，ArchPhys Med Rehabil.2002；83(10):1349-54)：
卫生：评分人将评价患者日常生活中浸渍、溃疡和/或手掌感染的程度；手掌和手的清洁度；易清洁度；指甲修剪的容易性；和由卫生相关失能所引起的干扰程度。
穿衣：评分人将评价患者日常生活中可以穿上衣服(例如，衬衫、夹克、手套)的困难性或容易性和由穿衣相关失能所引起的干扰程度。
肢体位置：评分人将评价上肢异常位置的量。
疼痛：评分人将评价与上肢强直有关的疼痛或不适的强度。
将使用以下量表对4个功能区域中的每一个进行打分：0＝未失能；1＝轻度失能(明显，但是不显著干扰正常活动)；2＝中度失能(正常活动需要提高努力和辅助)；3＝重度失能(正常活动受限)。
功能独立性测量(FIM)
FIM量表是广泛使用的失能评价，其测量了个体进行日常生活活动(ADL)所需的辅助程度。它由18个项目组成：13个是身体领域的，5个是认知领域的。评分是基于临床医师的直接观察，每个项目在范围从“完全辅助”至“完全独立”的7分量表上打分。所评价的范围为：吃饭、打扮、洗澡、上身穿衣、下身穿衣、如厕、膀胱控制、肠控制、床向椅子移动、厕 所转移、淋浴转移、移动力(步行或轮椅水平)、上下楼梯、认知理解、表达、社会相互作用、问题解决、记忆力。
评分标准如下所示(参见康复措施数据库网页)：
7完全独立6条件独立5监督或协助4最小接触辅助(任务时患者可以进行75％或以上)3中度辅助(患者可以进行50％至74％的任务)2最大辅助(患者可以进行25％至49％的任务)1完全辅助
受试者总体印象(SGI)
SGI是治疗反应的常用测量，其使用范围从“极差”至“很好”的7分量表，通过询问受试者从而对上一周试验药物对其身体健康性的影响打分。
给受试者发放表格来完成，表格上说明：“我们想知道你对研究药物对你身体健康性的影响的感觉如何”。在过去7天中，你对研究药物的作用的感觉如何。受试者对反应给出以下选择：“极差”、“不好”、“多半让人失望”、“中立/混合”、“多半让人满意”、“良好”和“很好”。要求受试者用自己的话解释反应。
临床医生总体印象(CGI)
CGI是治疗反应的常用测量，它询问临床医师以提供与基线受试者情况相比(并且不与前一次访问相比)，对治疗后受试者的神经学状况和一般健康状况的变化的整体印象。CGI根据范围从“改善很多”至“恶化很多”的7分量表进行评分。
向临床医师发放表格来完成，表格上说明：“总体上，考虑到受试者的症状及其他神经学功能，相对于他们筛选访问时，你将如何对受试者当前的神经学状态进行评分？”请仅考虑神经学变化，而不管其他因素。临床医师对反应给出以下选择：“改善很多”、“改善较多”、“有些改善”、“无变化”、“有些恶化”、“恶化较多”和“恶化很多”。如果可能，要求临床医师解释变化的任何指征。
白氏抑郁症量表(BDI)
BDI(参见表25)是广泛使用的测量抑郁症状严重性的自我报告抑郁问卷表。在范围从最小至严重的4分量表上对21个项目中的每一个进行评分。将如筛选时得分≥30所指示的严重抑郁的受试者排除在本研究之外。还将在其他访问时作为临床评价之一来实施BDI。
表25：白氏抑郁症量表(BDI)


(c)研究顺序
以下部分描述了研究期间每次临床访问时要进行的评价。
访问1，第-14天至第-1天(筛选访问)
评价人员将在进行了下列程序后评价研究的资格。将在随机访问前14天内完成这些程序。它们将以下列顺序进行。
●获得签字的知情同意
●完整病史，包括人口统计信息
●检查先前和伴随的药物治疗
●受试者完成BDI
●完成完整身体检查
●进行常规坐姿生命指征测量，包括身高和体重。
●计算BMI
●实施T25FW
●实施积木与盒子测试(优势手和非优势手，先进行优势手)
●实施握力测试、指尖捏、钥匙捏和手掌捏测试。将对每只手实施三次这些测试。
●实施FMA、DAS和FIM
●采集血液和尿液样品用于实验室评价(SMA-12、计算的肌酐清除率、尿分析和有分娩可能的妇女的尿妊娠试验)
●检查不良事件
●如果受试者合格，安排受试者在14天内返回试验中心。
访问2，第1天(随机访问，1期开始)
将以下列顺序进行以下评价和程序：
●完成简单的身体检查
●进行坐姿生命指征测量
●实施T25FW
●实施积木与盒子测试(优势手和非优势手，先进行优势手)
●实施握力测试、指尖捏、钥匙捏和手掌捏测试。将对每只手实施三次这些测试。
●实施FMA、DAS和FIM
●受试者完成BDI
●获得用于血浆达伐吡啶浓度的血液样品
●有分娩可能的妇女的尿妊娠试验
●检查不良事件和伴随的药物
●随机分配至两个处理顺序之一
●分发已分配的1周双盲试验产品，指示当晚服用第1次剂量。有关受试者剂量施用方案的其他指示，参见6.16.5(a)节。
●让受试者出院，并安排1周内下一次访问的日期和时间(±1天)。
访问3、第8天
将以下列顺序进行以下评价和程序：
●完成简单的身体检查
●进行坐姿生命指征测量
●受试者完成SGI
●实施T25FW
●实施积木与盒子测试(优势手和非优势手，先进行优势手)
●实施握力测试、指尖捏、钥匙捏和手掌捏测试。将对每只手实施三次这些测试。
●实施FMA、DAS和FIM
●完成CGI
●获得用于血浆达伐吡啶浓度的血液样品
●检查不良事件和伴随的药物
●收集上次访问的试验产品，并进行药物可计数性
●分发已分配的新1周双盲试验产品，指示当晚在上1次剂量后约12小时服用剂量。有关受试者剂量施用方案的其他指示，参见6.16.5(a)节。
●让受试者出院，并安排1周内下一次访问的日期和时间(±1天)。
访问4，第15天(1期结束，清除期开始)
将以下列顺序进行以下评价和程序：
●完成简单的身体检查
●进行坐姿生命指征测量
●受试者完成SGI
●实施T25FW
●实施积木与盒子测试(优势手和非优势手，先进行优势手)
●实施握力测试、指尖捏、钥匙捏和手掌捏测试。将对每只手实施三次这些测试。
●实施FMA、DAS和FIM
●完成CGI
●受试者完成BDI
●获得用于血浆达伐吡啶浓度和SMA-12的血液样品
●检查不良事件和伴随的药物
●收集上次访问的试验产品，并进行药物可计数性
●分发1周的单盲安慰剂，指示当晚服用第1次剂量。有关受试者剂量施用方案的其他指示，参见6.16.5(a)节。
●让受试者出院，并安排1周内下一次访问的日期和时间(±1天)。
访问5，第22天(清除期结束，2期开始)
将以下列顺序进行以下评价和程序：
●完成简单的身体检查
●进行坐姿生命指征测量
●受试者完成SGI
●实施T25FW
●实施积木与盒子测试(优势手和非优势手，先进行优势手)
●实施握力测试、指尖捏、钥匙捏和手掌捏测试。将对每只手实施三次这些测试。
●实施FMA、DAS和FIM
●完成CGI
●受试者完成BDI
●获得用于血浆达伐吡啶浓度的血液样品
●检查不良事件和伴随的药物
●收集上次访问的试验产品，并进行药物可计数性
●分发1周的交叉治疗药，指示当晚服用第1次剂量。有关受试者剂量施用方案的其他指示，参见6.16.5(a)节。
●让受试者出院，并安排1周内下一次访问的日期和时间(±1天)。
访问6，第29天
将以下列顺序进行以下评价和程序：
●完成简单的身体检查
●进行坐姿生命指征测量
●受试者完成SGI
●实施T25FW
●实施积木与盒子测试(优势手和非优势手，先进行优势手)
●实施握力测试、指尖捏、钥匙捏和手掌捏测试。将对每只手实施三次这些测试。
●实施FMA、DAS和FIM
●完成CGI
●获得用于血浆达伐吡啶浓度的血液样品
●检查不良事件和伴随的药物
●收集上次访问的试验产品，并进行药物可计数性
●分发新1周的交叉治疗药，指示当晚在上1次剂量后约12小时服用剂量。有关受试者剂量施用方案的其他指示，参见6.16.5(a)节。
●让受试者出院，并安排1周内下一次访问的日期和时间(±1天)。
访问7、第36天(2期结束)
将以下列顺序进行以下评价和程序：
●完成简单的身体检查
●进行坐姿生命指征测量
●受试者完成SGI
●实施T25FW
●实施积木与盒子测试(优势手和非优势手，先进行优势手)
●实施握力测试、指尖捏、钥匙捏和手掌捏测试。将对每只手实施三次这些测试。
●实施FMA、DAS和FIM
●完成CGI
●受试者完成BDI
●获得用于血浆达伐吡啶浓度和SMA-12的血液样品
●检查不良事件和伴随的药物
●收集上次访问的试验产品，并进行药物可计数性。不再分发试验产品。
●让受试者出院，并安排1周内下一次访问(电话访问)的日期和时间(±1天)。
电话跟踪，第43±1天
研究点将打跟踪电话以检查任何不良事件或药物的变化。由于周末/假日，跟踪电话可以在第43天前后多至2天进行。
●最终状况评价
6.16.8 统计结果
(a)统计功效
六十六(66)位受试者将以2：1的比值随机分配至两个处理顺序之一：安慰剂然后达伐吡啶-ER(顺序A)或达伐吡啶-ER然后安慰剂(顺序B)。该样本容量将提供足够的计划估值以有助于今后的研究设计。
(b)推导的终点和数据处理
用于分析的基线将定义为在双盲药物的第1次剂量之前的最后一次未错过的评价。
根据知情同意的日期，将计算年龄和从缺血性中风起的时间
年龄将计算为：年龄＝[通知同意的日期-出生日期]/365.25，圆整至前一个整数。
从缺血性中风起的天数将计算为：天数＝知情同意的日期-中风日期
基线测量的推导将按照以下标题为“推导变量和数据处理”一节中所列的推导进行。
(c)功能评价的分析
本节中所有适用变量推导的计算详情可见于以下标题为“推导变量和数据处理”一节。
功能评价
在本研究中，将研究的功能评价为：
●通过定时25英尺步行测试(T25FW)测量的步行速度
●通过积木与盒子测试测量手部敏捷性
●通过握力测试和挤捏测试来测量手部力量
●在Fugl-Meyer评价(FMA)上的整体运动功能得分和单项运动得分：
-上肢功能
-下肢功能
通过失能评估量表(DAS)测量的上肢强直
●通过功能独立性测量(FIM)量表测量进行日常生活活动(ADL)所需的辅助
●受试者总体印象(SGI)量表
●临床医生总体印象(CGI)量表
●通过白氏抑郁症量表(BDI)测量的抑郁
推导变量和数据处理
用于分析的基线将定义为在双盲药物的第1次剂量之前的最后一次未错过的评价。
步行速度
每次访问时，将进行两次T25FW测试试验。通过将完成步行的时间(秒)的倒数乘以25(英尺)来推导出单次试验的步行速度(英尺/秒)。通过计算特定研究访问中试验1和试验2的步行速度的平均值来推导出该研究访问的步行速度。如果错过其中一次试验，那么该访问的步行速度将是未错过的试验的步行速度。
握力和挤捏测试
每次访问时，对于握力和挤捏测试将分别进行三次试验。特定研究访问的反应是特定测试的三次试验的平均值。将分别以优势手和非优势手总结握力测试和挤捏测试。
积木与盒子测试
对积木与盒子测试的反应是60秒内运输至间隔另一侧的积木数。对于反应变量，不需要推导。将分别以优势手和非优势手总结积木与盒子测试。
Fugl-Meyer评价(FMA)
FMA是上肢和下肢运动和感觉损伤的测量，其包括5个领域中的155个项目。可以通过将相关各项的得分相加确定每个领域的分项分数。可以通过将各个领域的分项分数相加来产生整体FMA得分。将分别总结FMA整体得分和各个领域的分项分数。
失能评估量表(DAS)
DAS用于评价中风后上肢强直患者中通常受影响的4个功能区域中的损伤。将分别分析4个功能区域。对于反应变量，不需要推导。
功能独立性测量(FIM)量表
FIM量表是身体和认知失能的评价，其包括18个项目。对于每次访问，FIM量表上的反应是对18个项目的单个反应的总和。总分的范围可以在18(最低功能水平)至126(最高功能水平)之间。
受试者总体印象(SGI)量表
对于每次访问，SGI上的反应是受试者对上一周试验产品对其身体健康性的评分。对于反应变量，不需要推导。
临床医生总体印象(CGI)量表
对于每次访问，CGI上的反应是临床医师与基线相比，对使用试验产品治疗后受试者的神经学状况和一般健康状况的变化的整体印象。对于反应变量，不需要推导。
白氏抑郁症量表(BDI)
BDI是测量抑郁症状严重性的自我报告的21项抑郁问卷表。对于每次访问，BDI上的反应是对21个项目的单个反应的总和。总分的范围可以从0至63。
统计方法
将进行分析以确定达伐吡啶-ER对功能评价的影响。对于每次功能评价，除SGI和CGI之外，将计算每个治疗期内同一受试者相对于基线的变化。
1期：访问4评价-访问2评价
2期：访问7评价-访问5评价
对于SGI和CGI，在分析中将使用访问4评价和访问7评价。
对于任何功能评价，如果错过访问4评价，则将使用访问3评价估算。如果错过访问7评价，则将使用访问6评价估算。
对于除了SGI和CGI之外的所有临床测量，将进行以下两种类型的分析。第1种类型将基于使用随机分配至顺序A的44位受试者，对于1期(安慰剂)相对于2期(达伐吡啶-ER)来说，受试者内相对于基线变化的差异。将使用配对t检验比较两种治疗之间相对于基线的变化第2种类型的分析将基于仅1期内处理组之间相对于基线变化的比较。将使用两样本t检验比较两种治疗之间相对于基线的变化
对于SGI和CGI，同样将进行两种类型的分析。然而，将使用访问4和访问7的SGI和CGI结果而不是基于相对于基线的变化来进行分析。如上所述的统计方法还将用于SGI和CGI的分析。
6.16.9实施例16的参考文献
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6.17 实施例17：口服4-AP的效果：大鼠中MCA堵塞(MCAO)后的功能恢复。盲法、载体对照的剂量递增研究。
在具有稳定运动缺陷的大鼠中，在距它们的缺血性事件较远的时间，评价了4-AP促进缺血性中风后功能性感觉运动改善的能力。本实施例中使用的缺血性中风的动物模型，即MCAO模型与实施例2中所述的动物模型相同。
在MCAO模型中，到MCAO后4周时，恢复开始达到平台期，此时仍有感觉运动功能可测量的缺陷。然而，MCAO后4周仍可以缓慢地继续 内源恢复。出于这些原因，在MCAO后56天开始本实施例中的治疗，这是距初始缺血性事件更远的时间点，从而允许动物在内源恢复后达到更稳定的感觉运动功能缺陷水平。
试验设计
在该实验中，对Sprague Dawley大鼠进行手术从而导致大脑中动脉闭塞(MCAO)，如下所述使用载体(水)或4-氨基吡啶处理，并且如下所述进行行为评价。
动物：使用了30只雄性Sprague Dawley大鼠，300-400g(得自Charles River Laboratories，在手术前7-10天来到实验室，体重250-275g)。将动物随机分配至处理组。
术语：用于研究天数的术语如下所示：第0天是MCAO当天，并且随后的天数依次编号(第1天、第2天、第3天等)；第-1天代表MCAO前一天。
分组详情：本研究中一些程序所需的时间量要求将2个处理组(参见下表26)分成4个工作组。每天6只动物接受中风手术。如果动物在本研究的8天手术期内死亡，则用备用替代。如果未死亡，则不替换动物。大部分动物死亡(<整体的5％)发生在op后立即至7天的一段时间内。
麻醉：如以上实施例2所述进行麻醉。
温度：37.0±1℃。
手术程序：如以上实施例2中所述进行手术程序。
术后监控：如以上实施例2所述进行术后监控。
饲养、手术和注射时间表：饲养、手术和注射时间表与以上实施例2所述的相同。
治疗和剂量：根据表26中所示的治疗时间表对大鼠进行治疗。表27示出了剂量。将4-氨基吡啶溶于注射用水(WFI,Cellgro)并无菌过滤。以2mL/kg，通过灌胃递送0.25mg/mL、0.5mg/mL和1.0mg/mL4-氨基吡啶的溶液，从而分别产生了0.5mg/kg、1mg/kg或2.0mg/kg的最终剂量。载体对照治疗为通过灌胃以2mL/kg递送的WFI。在MCAO后第56天开始，每隔约12小时，动物接受溶液灌胃(2mL/kg)。在第56-65天，对于所有剂量，用水处理载体对照组。对于治疗组，在第56-59天以0.5mg/kg递送6剂量的4-氨基吡啶，然后在第59-62天以1.0mg/kg递送6剂量，并且在第62-65天以2.0mg/kg递送6剂量。在第66-70天期间，所有组中的动物均不处理。p.o.＝口服。
表26：

表27：
治疗ID治疗V载体(水)低剂量0.5mg/kg4-AP，b.i.d,p.o.中剂量1mg/kg4-AP，b.i.d.,p.o.高剂量2.0mg/kg4-AP，b.i.d,p.o.
处理组：动物进行MCAO手术并允许恢复56天。然后，基于它们的基线行为，将动物随机分配至2组中。在MCAO后第56天的晚上，开始口服剂量施用，1天2次。剂量施用后1小时，开始剂量施用期的行为测试。在刚进行完行为测试(剂量施用后90分钟)后的治疗期之前或期间，通过隐静脉采集血液。所有剂量施用是通过灌胃进行的，体积不超过2mL/kg。
血液采样：在第56天的第1次剂量之前，并且然后在每个剂量水平的第6次剂量后整90分钟时从每只动物的隐静脉采集300微升血液样品。如以上实施例2所述，采集血液，离心、储存和分析。
行为测试详情：通过对治疗分配未知的评价者进行行为评价。使用肢体放置和身体摇摆行为测试，在MCAO手术前立即、MCAO手术后24小时以及此后每周进行感觉运动功能的盲法评价，直至剂量施用的1期。如上所述，行为评价时间准确地随剂量施用时间进行。给予动物第一次剂量，并且60分钟后开始进行行为评价。在每个剂量水平的第6次剂量后1小时(第59、62和65天)并且在第70天在5天清除期结束时，测试动物。
肢体放置：在第-1天(手术前)、第1天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天、第49天、第56天、第59天、第62天、第65天、第70天评价。肢体放置测试分为前肢和后肢测试。在以上实施例2中描述了前肢和后肢放置测试以及对这些测试的评分。
身体摇摆：在第-1天(手术前)、第1天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天、第49天、第56天、第59天、第62天、 第65天、第70天评价。在以上实施例2中描述了身体摇摆测试以及对该测试的评分。
安乐死和死后处理：在MCAO后第70天，如以上实施例2所述，将大鼠麻醉。
梗死测量：如以上实施例2所述，进行梗死测量。
统计方法：在剂量施用后所评价的每个时间点，对每个行为得分计算相对于预处理基线值(第56天)的变化。将平均行为参数数据进行方差分析(ANOVA)。通过ANOVA分析梗死体积数据。所有数据表示为平均值±SEM。
法规遵从性：本研究的法规遵从性与以上实施例2所述的相同。
质量保证(QA)：本研究的QA与以上实施例2所述的相同。
结果
两组动物(载体和4-氨基吡啶处理)对MCAO引起的缺血显示出典型恢复反应，其中在正要手术前(第-1天)为正常得分0，而在闭塞后24小时内(第1天)功能完全丧失(前肢，得分12；后肢，6)。在随后的8周未处理期内，前肢和后肢得分分别改善为约4.5和2.5，并且达到恢复的平台水平(参见图11和图12)。具体地，在功能完全丧失后，动物部分恢复并在约30天达到平台期。动物维持在该功能水平至开始治疗的第56天。
使用前肢和后肢放置以及身体摇摆测试评价感觉运动功能。前肢放置测试示出了治疗对前肢功能的作用(参见图11)。后肢放置测试示出了治疗对后肢功能的作用(参见图12)。身体摇摆测试示出了治疗对全身控制的作用(参见图13)。
与剂量开始前的最后一次评价相比，载体组表现出较小并且统计学不显著的行为变化。相反，与载体相比，接受0.5mg/kg4-氨基吡啶(低剂量)的动物显著改善了前肢放置(p<0.001)(参见图11，第59天)。用低剂量改善了后肢放置得分，但未达到显著(参见图12，第59天)。与载体相比，将4-氨基吡啶的剂量提高至1mg/kg导致前肢和后肢测试产生了可测量的改善(分别p<0.001和p<0.05，图11和图12，第62天)。与载体治疗的动物相比，最终剂量递增至2mg/kg4-氨基吡啶与前肢和后肢功能中的显著改善有关(分别p<0.0001和p<0.001，图11和图12，第65天)。当治疗停止5天时，改善的原始得分部分下降，尽管后肢得分仍大于载体治疗组(p<0.05，图12，第70天)。可能与载体治疗组相比，延长并且稳定的剂量期需要额外的时间来完全清除。然而，考虑到4-氨基吡啶短暂的血清半衰期，似乎更可能的是在相对短时期内发生的反复测试的训练作用。由 于在整个治疗过程中在载体治疗的动物中仅观察到了轻微的改善，因此载体治疗动物的缺陷保持稳定。
因此，图11显示缺血性脑损伤后8周，用低剂量、中剂量或高剂量4-氨基吡啶治疗对改善大鼠中前肢功能是有效的。图11还显示这种作用是剂量响应的。由于停药后该作用减弱，因此它还是可逆的。图12显示缺血性损伤后8周，用低剂量4-氨基吡啶治疗对改善大鼠中后肢功能可以是有效的，并且显示缺血性脑损伤后8周，用中剂量或高剂量4-氨基吡啶治疗对改善大鼠中后肢功能是有效的。此外，图12显示由于相对于用低剂量或载体对照治疗，用高剂量治疗导致行为得分改善，因此该作用是剂量响应的。图12还显示该作用至少是部分可逆的。
在评价时间点，未广泛鉴定身体摇摆表现。尽管与第56天的预处理得分相比，起初药物评价时在身体摇摆表现中似乎有处理作用，但是根据在治疗开始前在载体和4-氨基吡啶组之间所观察到的身体摇摆不对称性的分歧，不能整体地从所述数据得到结论(图13)。应注意在本实施例中所使用的动物的年龄和大小显著大于实施例2中所提供的研究，它可以在该具体测试中在动物的一般积极性和表现能力中起作用。
4-氨基吡啶血浆水平：当动物接受载体治疗时，抽取的血液样品中4-氨基吡啶的水平低于该方法的定量下限。当动物接受4-氨基吡啶时，抽取的样品确认行为测试时的暴露与剂量水平适当相关。4-氨基吡啶血浆水平如表28所示。
表28：4-氨基吡啶的血浆水平。

SE，标准偏差；*BLOQ＝低于定量下限(<1.0ng/mL)
因此，数据示出了当在动物中4-AP处于可检测的血浆水平时前肢和后肢感觉运动功能中显著可逆和剂量依赖性的改善。
表29示出了在载体(水))和4-氨基吡啶之间未观察到梗死体积的差异。SE＝标准偏差
表29：
组平均(SE)梗死体积(％)载体(水)38.5(2.4)4-AP40.0(2.3)
在本研究中，作为临床前中风研究的典型结果测量包括了脑组织的梗死体积分析。在本研究内的任何组之间未观察到梗死体积的差异，并且在本实施例和实施例2中所提供的研究之间梗死体积也是类似的。
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