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1、10申请公布号CN104131052A43申请公布日20141105CN104131052A21申请号201410385463422申请日20140806C12P19/40200601C07H19/16200601C07H1/06200601C12R1/86520060171申请人西藏金稞集团有限责任公司地址850000西藏自治区拉萨市金珠西路138号A6172发明人张春颖张丽云74专利代理机构北京远大卓悦知识产权代理事务所普通合伙11369代理人史霞54发明名称一种利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法57摘要本发明公开了一种利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，通过改善种子培养基和发酵培养基配方。
2、，并在特定时间添加蔗糖和前体L蛋氨酸，使酵母菌发酵产生大量的腺苷蛋氨酸，腺苷蛋氨酸的发酵水平可达到16G/L以上，生物量干重达到170G/L以上。另外，通过加入三氯乙酸进行破壁，使细胞壁破碎率达到99以上，从而使腺苷蛋氨酸得到充分释放。通过采用苦味酸对腺苷蛋氨酸进行提取，使腺苷蛋氨酸的沉淀得率在95以上。通过萃取及树脂脱色等步骤，使腺苷蛋氨酸产品纯度大于98。本发明具有生产工艺简单、生产成本低、过程易控制且无污染、腺苷蛋氨酸得率高且质量稳定等优点，适合腺苷蛋氨酸的大规模工业化生产。51INTCL权利要求书2页说明书7页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书。
3、7页附图1页10申请公布号CN104131052ACN104131052A1/2页21一种利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，将高表达腺苷蛋氨酸的酵母菌种接入发酵培养基进行好氧发酵培养，并在培养至911H时添加蔗糖至蔗糖终浓度为4045G/L，在培养至2325H时开始以15G/H的速率连续流加前体L蛋氨酸直至发酵完成，得到含有高发酵水平腺苷蛋氨酸的发酵液；此外，还包括以下步骤步骤一、细胞破壁，将所得发酵液与一定的浓度为1530的酸溶液按照体积比081010混合，并于34保持23H，进行沉淀分层后取上层清液得到腺苷蛋氨酸粗提液；步骤二、沉淀提取，将所得腺苷蛋氨酸粗提液与一定量的苦味酸。
4、溶液混合，并调节PH值为2829，进行沉淀分层后得到腺苷蛋氨酸沉淀；步骤三、纯化，将所得腺苷蛋氨酸沉淀进行萃取和脱色既得所述腺苷蛋氨酸。2如权利要求1所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，所用酵母菌种为保藏编号为CGMCC5649的酿酒酵母XJK12。3如权利要求2所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，所述酵母菌种在接种发酵培养基之前先接种于种子培养基进行液体培养，160180R/MIN，2630培养2024H得到种子液；其中所述种子培养基包含以下重量份的组分蔗糖1520，酵母粉46，磷酸氢二铵23，硫酸镁0810，磷酸氢二钾0810，磷酸二氢钾0810及蒸馏水。
5、9001000。4如权利要求3所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，将种子液按照发酵培养基510的比例接种于发酵培养基，发酵培养条件为温度2628，通气量12L/MIN，转速300500R/MIN，发酵时间4650H，溶氧量不低于30；所述发酵培养基包括以下重量份的组分蔗糖2530，酵母粉1015，磷酸氢二铵810，硫酸镁35，玉米浆1216，磷酸氢二钾0810，磷酸二氢钾0810，ZNSO47H2O00801，FESO47H2O00801，CACL200801，MNSO400801及蒸馏水9001000。5如权利要求1所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，步骤。
6、一中进行细胞破壁的酸溶液可为三氯乙酸、乙酸乙酯、高氯酸或硫酸溶液。6如权利要求5所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，步骤一中进行细胞破壁的酸溶液为1520三氯乙酸溶液，细胞破壁后通过40005000R/MIN离心1020MIN进行沉淀分层，离心时温度保持34。7如权利要求1所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，步骤二中所加苦味酸溶液为含有饱和苦味酸的丁酮溶液，加入苦味酸的量以苦味酸与发酵液中腺苷蛋氨酸的摩尔比为24为准。8如权利要求1所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，步骤三中所述萃取方法为步骤一、将所得腺苷蛋氨酸沉淀、纯丁酮及0405MOL。
7、/L的硫酸溶液按照体积比081008100810混合，得到含有水溶性腺苷蛋氨酸硫酸盐的萃取水相；步骤二、在所得萃取水相中加入纯丁酮进行洗涤，同时在有机相中加入可提高萃取效果的纯乙酸乙酯，得到去除苦味酸的腺苷蛋氨酸硫酸盐。9如权利要求8所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，步骤三权利要求书CN104131052A2/2页3中所述脱色的方法为将经过萃取及洗涤所得腺苷蛋氨酸硫酸盐进行树脂脱色，并将所得脱色液与36倍体积的纯丙酮混合，收集沉淀得脱色后的腺苷蛋氨酸硫酸盐；进行树脂脱色采用的脱色树脂可为D301树脂、D750树脂、D730树脂或SD300树脂，进样速度为1040ML/MIN。
8、。10如权利要求9所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，将所得脱色后的腺苷蛋氨酸硫酸盐于40预冻后进行真空干燥，得到以固体粉末状腺苷蛋氨酸硫酸盐形态存在的所述腺苷蛋氨酸。权利要求书CN104131052A1/7页4一种利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法技术领域0001本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法。背景技术0002腺苷蛋氨酸SADENOSYLLMETHIONINE，简称SAM，又称腺苷甲硫氨酸，化学名称为5【3S3氨基丙基甲基S砜】5脱氧腺苷，分子式C15H22N6O5S，分子量399，其分子结构式为00030004SAM首先由CANT。
9、ONI于1951年发现，广泛存在于动物、植物和微生物体内。SAM是双手性物质，具有2种异构体R，SSAM和S，SSAM，只有S，SSAM具有生物活性。在生物体中，SAM通过S腺苷蛋氨酸合成酶，消耗ATP使蛋氨酸腺苷化而合成。SAM是人体内最重要的甲基供体，在生命活动过程中，使得重要物质如核酸、蛋白质、脂类、碳水化合物等甲基化。SAM还具有转硫和转氨丙基的作用。由于SAM具有广泛的重要生理作用，因此SAM现可用于治疗抑郁症、关节炎、肝功能紊乱等疾病。早在70年代末，SAM作为临床处方药就已出现在欧洲医药市场上，当时是用作治疗关节炎的抗炎止痛药物。国外抗炎药物品种极多，而SAM并未占有什么优势。8。
10、0年代中期，SAM在欧洲被推荐为抗忧郁症的精神病药物。1990年在美国通过了FDA的随机双盲法验证。1999年，美国FDA正式批准其上市，迅速成为畅销的营养保健品之一，年销售额超过十亿美元。我国肝炎、关节炎以及抑郁症患者众多，对SAM的需求量较大。0005SAM的制备始于20世纪50年代，目前，SAM制备方法包括化学合成法、微生物发酵法、体外酶促转化法以及全细胞催化法。化学法合成SAM由于存在产率低、反应条件苛刻、反应产物异构体多、分离纯化困难以及环境污染等不足，很难进行工业化生产；体外酶促合成法存在SAM合成酶活性较低、酶分离纯化繁琐以及酶固定化后活性损失较大等问题；全细胞催化法目前只处于实。
11、验室研究阶段。目前SAM的工业化生产主要以酵母发酵为主，国外对发酵法制备SAM进行了较多的研究，并已实现产业化。国内对SAM制备技术的研究起说明书CN104131052A2/7页5步较晚，目前还处于实验室研究阶段，SAM的发酵水平远低于国外。发明内容0006本发明的目的是提供一种利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，通过对高表达腺苷蛋氨酸的保藏编号为CGMCC5649的酿酒酵母XJK12进行好氧发酵，并在发酵培养中通过改善种子培养基和发酵培养基配方，在发酵的特定时间点添加蔗糖和连续流加前体L蛋氨酸，使所用发酵菌种在发酵过程中产生高发酵水平的腺苷蛋氨酸。0007本发明的另一个目的是，通过将发酵液与。
12、一定量的三氯乙酸溶液混合，使细胞壁破碎的效果大幅度提高，从而使腺苷蛋氨酸得到充分释放。通过采用苦味酸对腺苷蛋氨酸进行提取，使腺苷蛋氨酸的提取率得到大幅度提高。0008本发明的技术方案为0009一种利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其中，0010将高表达腺苷蛋氨酸的酵母菌种接入发酵培养基进行好氧发酵培养，并在培养至911H时添加蔗糖至蔗糖终浓度为4045G/L，在培养至2325H时开始以15G/H的速率连续流加前体L蛋氨酸直至发酵完成，得到含有高发酵水平腺苷蛋氨酸的发酵液；0011此外，还包括以下步骤0012步骤一、细胞破壁，将所得发酵液与一定的浓度为1530的酸溶液按照体积比081010混合。
13、，并于34保持23H，进行沉淀分层后取上层清液得到腺苷蛋氨酸粗提液；0013步骤二、沉淀提取，将所得腺苷蛋氨酸粗提液与一定量的苦味酸溶液混合，并调节PH值为2829，进行沉淀分层后得到腺苷蛋氨酸沉淀；0014步骤三、纯化，将所得腺苷蛋氨酸沉淀进行萃取和脱色既得所述腺苷蛋氨酸。0015优选的是，所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，所用酵母菌种为保藏编号为CGMCC5649的酿酒酵母XJK12。0016优选的是，所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，所述酵母菌种在接种发酵培养基之前先接种于种子培养基进行液体培养，160180R/MIN，2630培养2024H得到种子液；0017其中所。
14、述种子培养基包含以下重量份的组分蔗糖1520，酵母粉46，磷酸氢二铵23，硫酸镁0810，磷酸氢二钾0810，磷酸二氢钾0810及蒸馏水9001000。0018优选的是，所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，将种子液按照发酵培养基510的比例接种于发酵培养基，发酵培养条件为温度2628，通气量12L/MIN，转速300500R/MIN，发酵时间4650H，溶氧量不低于30；0019所述发酵培养基包括以下重量份的组分蔗糖2530，酵母粉1015，磷酸氢二铵810，硫酸镁35，玉米浆1216，磷酸氢二钾0810，磷酸二氢钾0810，ZNSO47H2O00801，FESO47H2O00801，。
15、CACL200801，MNSO400801及蒸馏水9001000。0020优选的是，所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，步骤一中进行细胞破壁的酸溶液可为三氯乙酸、乙酸乙酯、高氯酸或硫酸溶液。0021优选的是，所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，步骤一中进行细胞破壁的酸溶液为1520三氯乙酸溶液，细胞破壁后通过40005000R/MIN离心1020MIN进说明书CN104131052A3/7页6行沉淀分层，离心时温度保持34。0022优选的是，所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，步骤二中所加苦味酸溶液为含有饱和苦味酸的丁酮溶液，加入苦味酸的量以苦味酸与发酵液中腺苷蛋氨酸的。
16、摩尔比为24为准。0023优选的是，所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，步骤三中所述萃取方法为0024步骤一、将所得腺苷蛋氨酸沉淀、纯丁酮及0405MOL/L的硫酸溶液按照体积比081008100810混合，得到含有水溶性腺苷蛋氨酸硫酸盐的萃取水相；0025步骤二、在所得萃取水相中加入纯丁酮进行洗涤，同时在有机相中加入可提高萃取效果的纯乙酸乙酯，得到去除苦味酸的腺苷蛋氨酸硫酸盐。0026优选的是，所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，步骤三中所述脱色的方法为0027将经过萃取及洗涤所得腺苷蛋氨酸硫酸盐进行树脂脱色，并将所得脱色液与36倍体积的纯丙酮混合，收集沉淀得脱色后的腺苷蛋氨。
17、酸硫酸盐。0028进行树脂脱色采用的脱色树脂可为D301树脂、D750树脂、D730树脂或SD300树脂，进样速度为1040ML/MIN。0029优选的是，所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，将所得脱色后的腺苷蛋氨酸硫酸盐于40预冻后进行真空干燥，得到以固体粉末状腺苷蛋氨酸硫酸盐形态存在的所述腺苷蛋氨酸。0030本发明具有以下有益效果通过对一定的酵母菌种进行诱导和筛选，得到高表达腺苷蛋氨酸的保藏编号为CGMCC5649的酿酒酵母XJK12，将菌种在发酵培养中进行好氧发酵，通过改善种子培养基和发酵培养基配方，并在发酵的特定时间点添加蔗糖和连续流加前体L蛋氨酸，使所用菌种在发酵过程中产生高。
18、发酵水平的腺苷蛋氨酸，本发明中腺苷蛋氨酸的发酵水平可达到16G/L以上，生物量干重达到170G/L以上，分别比国内现有技术提高15以上。0031另外，通过将发酵液与一定量的三氯乙酸溶液混合，使细胞壁破碎的效果大幅度提高，破碎率达到99以上，比常规破壁方法提高10左右，从而使腺苷蛋氨酸得到充分释放。通过采用苦味酸对腺苷蛋氨酸进行提取，使腺苷蛋氨酸的提取率得到大幅度提高，从而提高腺苷蛋氨酸的得率，沉淀得率在95以上。通过萃取及树脂脱色等步骤，使所得腺苷蛋氨酸得到高度的纯化，本发明所得腺苷蛋氨酸产品纯度大于98，远远高于目前一般方法所达到的纯度。0032本发明具有生产工艺简单、生产成本低、过程易控制。
19、且无污染、腺苷蛋氨酸产率高且质量稳定等优点，适合腺苷蛋氨酸的大规模工业化生产。附图说明0033图1为所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法工艺流程图。具体实施方式0034下面结合附图对本发明做详细说明，以令本领域普通技术人员参阅本说明书后能说明书CN104131052A4/7页7够据以实施。0035如图1所示，一种利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其中，将经过诱导和筛选得到的高表达腺苷蛋氨酸的酵母菌种接入发酵培养基进行好氧发酵培养，所述酵母菌种主要为酿酒酵母。在培养至911H时检测发酵物料中蔗糖浓度，适量添加蔗糖至蔗糖终浓度为4045G/L；在培养至2325H时开始以15G/H的速率向发酵。
20、物料中连续流加前体L蛋氨酸直至发酵完成，得到含有高发酵水平腺苷蛋氨酸的发酵液。整个发酵时间4650H，发酵条件控制为温度2628，通气量为23L/MIN，转速为300500R/MIN，保持溶氧在30以上。通过检验，本发明中腺苷蛋氨酸的发酵水平可达到16G/L以上，生物量干重达到170G/L以上。0036此外，还包括以下步骤0037步骤一、细胞破壁。腺苷蛋氨酸是细胞内产物，成熟的酵母菌细胞壁较厚，不易被破碎，本发明采用三氯乙酸破碎酿酒酵母细胞壁，能有效地溶解细胞壁上的类脂物质，改变细胞壁的通透性或使细胞壁破裂，从而使细胞内的腺苷蛋氨酸充分释放。本发明中进行细胞破壁的具体方法为将所得发酵液与一定的。
21、浓度为1530酸溶液按照体积比081010混合，并于34保持23H。进行细胞破壁的酸溶液可为三氯乙酸、乙酸乙酯、高氯酸或硫酸溶液，本发明中采用与发酵液等体积的1520三氯乙酸溶液效果最佳。细胞破壁后通过40005000R/MIN离心1020MIN进行沉淀分层，离心时温度保持34，进行沉淀分层后取上层清液得到腺苷蛋氨酸粗提液。通过实验检验，通过采用三氯乙酸进行破壁，破碎率达到99以上。0038步骤二、沉淀提取。苦味酸是一种选择性较好的沉淀剂，将所得腺苷蛋氨酸粗提液与一定量的苦昧酸溶液混合，优选含有饱和苦味酸的丁酮溶液，并调节PH值为2829并不停搅拌，使腺苷蛋氨酸与苦味酸结合生成沉淀，通过离心进。
22、行沉淀分层后得到腺苷蛋氨酸沉淀；其中加入苦味酸的量以苦味酸与发酵液中腺苷蛋氨酸的摩尔比为24为准，其中发酵液中腺苷蛋氨酸的含量按照16G/L计算。通过实验检验，本发明中采用苦味酸进行腺苷蛋氨酸的沉淀提取，腺苷蛋氨酸沉淀得率在95以上。0039步骤三、纯化，将所得腺苷蛋氨酸沉淀进行萃取和脱色既得所述腺苷蛋氨酸。0040所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，所用酵母菌种为保藏编号为CGMCC5649的酿酒酵母XJK12。所述酿酒酵母XJK12为本实验室以从安琪酵母购买的酿酒酵母为出发菌株，经紫外线照射等物理方法进行诱变并筛选获得，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址北京市。
23、朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期2011年12月27日；分类命名SACCHAROMYCESCEREVISIAE。0041所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，所述酵母菌种在接种发酵培养基之前先接种于种子培养基进行液体培养，具体方法为以经诱变筛选获得的酿酒酵母XJK12为出发菌株，无菌条件下接入内装100ML种子培养基的250ML三角瓶内，160180R/MIN，2630培养2024H得到种子液。0042其中所述种子培养基包含以下重量份的组分蔗糖1520，酵母粉46，磷酸氢二铵23，硫酸镁0810，磷酸氢二钾0810，磷酸二氢钾0810及蒸馏水9001000，调节PH值为6575，121。
24、灭菌20MIN。0043所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，将种子液按照发酵培养基说明书CN104131052A5/7页8510的比例接种于内装6L发酵培养基的10L发酵罐中进行好氧发酵，发酵培养条件为温度2628，通气量12L/MIN，转速300500R/MIN，溶氧量不低于30。0044所述发酵培养基包括以下重量份的组分蔗糖2530，酵母粉1015，磷酸氢二铵810，硫酸镁35，玉米浆1216，磷酸氢二钾0810，磷酸二氢钾0810，ZNSO47H2O00801，FESO47H2O00801，CACL200801，MNSO400801及蒸馏水9001000，调节PH值为6575，1。
25、21灭菌20MIN。0045所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，步骤三中所述萃取方法为0046步骤一、将所得腺苷蛋氨酸沉淀、纯丁酮及0405MOL/L的硫酸溶液按照体积比081008100810混合，得到含有水溶性腺苷蛋氨酸硫酸盐的萃取水相；0047步骤二、在所得萃取水相中加入适量纯丁酮进行洗涤，纯丁酮的加入量为水相体积的1/101/5，洗涤23次，同时在有机相中加入适量的可提高萃取效果的纯乙酸乙酯，纯乙酸乙酯的加入量为有机相体积的1/101/5，通过多次洗涤除去苦味酸，得到去除苦味酸的腺苷蛋氨酸硫酸盐。0048所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，步骤三中所述脱色的方法为004。
26、9将经过萃取及洗涤所得腺苷蛋氨酸硫酸盐进行树脂脱色，并将所得脱色液与36倍体积的纯丙酮混合，收集沉淀得脱色后的腺苷蛋氨酸硫酸盐。进行树脂脱色采用的脱色树脂可为D301树脂、D750树脂、D730树脂或SD300树脂，优选的是用SD300树脂进行脱色，效果最佳。脱色中进样速度为1040ML/MIN。0050所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法中，将所得脱色后的腺苷蛋氨酸硫酸盐于40预冻后进行真空干燥，得到以固体粉末状腺苷蛋氨酸硫酸盐形态存在的所述腺苷蛋氨酸。0051实施例100521发酵以经诱变筛选获得的酿酒酵母XJK12为出发菌株，无菌条件下接入内装100ML种子培养基的250ML三角瓶内。
27、，180R/MIN，28培养24H，获得种子液；将种子液按5的接种量接入内装6L发酵培养基的10L发酵罐中，28，通气量为12L/MIN，转速为300500R/MIN，保持溶氧在30以上，发酵10H后开始添加蔗糖，将蔗糖的浓度控制在4045G/L；发酵24H时后，以15G/H的速率连续流加前体L蛋氨酸至发酵完成，发酵总时间48H，得到含有腺苷蛋氨酸的发酵液，其中，腺苷蛋氨酸发酵水平达到1625G/L，生物量干重达到17146G/L；0053种子培养基由下列重量份的组分组成蔗糖20，酵母粉6，磷酸氢二铵3，硫酸镁08，磷酸氢二钾10，磷酸二氢钾10，蒸馏水1000，121灭菌20MIN。0054。
28、发酵培养基组由下列重量份的组分组成蔗糖30，酵母粉15，磷酸氢二铵10，硫酸镁5，玉米浆16，磷酸氢二钾10，磷酸二氢钾10，ZNSO47H2O01，FESO47H2O01，CACL201，MNSO401，蒸馏水定容，121灭菌20MIN。00552细胞破壁在发酵液中加入等体积的20三氯乙酸，于4破碎2H，5000R/MIN，4离心10MIN收集上清液，获得腺苷蛋氨酸粗提液；00563苦味酸沉淀向所得腺苷蛋氨酸粗提液中加入含有饱和苦味酸的丁酮溶液，并不停搅拌，控制溶液PH值为29，4000R/MIN离心，分离沉淀得到腺苷蛋氨酸沉淀，其中苦味酸与腺苷蛋氨酸的摩尔比为2。说明书CN10413105。
29、2A6/7页900574萃取向所得腺苷蛋氨酸沉淀中加入等体积的纯丁酮及05MOL/L硫酸溶液，腺苷蛋氨酸沉淀转化为易溶于水的腺苷蛋氨酸硫酸盐，萃取水相再用少量的纯丁酮洗涤3次，除去苦味酸，得到不含苦味酸的腺苷蛋氨酸硫酸盐。00585脱色不含苦味酸的腺苷蛋氨酸硫酸盐经SD300树脂脱色，进样速度2ML/MIN，收集脱色液，向脱色液中加入3倍体积纯丙酮，使SAM以硫酸盐沉淀析出。00596冷冻干燥收集沉淀，40预冻后真空干燥，得到白色晶状粉末，得到以腺苷蛋氨酸硫酸盐存在的纯度9811的腺苷蛋氨酸产品。0060实施例200611发酵以经诱变筛选获得的酿酒酵母XJK12为出发菌株，无菌条件下接入内装1。
30、00ML种子培养基的250ML三角瓶内，180R/MIN，28培养24H，获得种子液；将种子液按8的接种量接入内装6L发酵培养基的10L发酵罐中，28，通气量为12L/MIN，转速为300500R/MIN，保持溶氧在30以上，发酵10H后开始添加蔗糖，将蔗糖的浓度控制在4045G/L；发酵24H时后，以15G/H的速率连续流加前体L蛋氨酸直至发酵完成，发酵总时间48H，得到含有腺苷蛋氨酸的发酵液，其中，腺苷蛋氨酸发酵水平达到1682G/L，生物量干重达到17129G/L；0062种子培养基由下列重量份的组分组成蔗糖20，酵母粉6，磷酸氢二铵3，硫酸镁08，磷酸氢二钾10，磷酸二氢钾10，蒸馏水。
31、1000，121灭菌20MIN。0063发酵培养基组由下列重量份的组分组成蔗糖30，酵母粉15，磷酸氢二铵10，硫酸镁5，玉米浆16，磷酸氢二钾10，磷酸二氢钾10，ZNSO47H2O01，FESO47H2O01，CACL201，MNSO401，蒸馏水定容，121灭菌20MIN。00642细胞破壁在发酵液中加入等体积的20三氯乙酸，于4破碎25H，5000R/MIN，4离心15MIN收集上清液，获得腺苷蛋氨酸粗提液；00653苦味酸沉淀向所得腺苷蛋氨酸粗提液中加入含有饱和苦味酸的丁酮溶液，并不停搅拌，控制溶液PH值为29，4000R/MIN离心，分离沉淀得到腺苷蛋氨酸沉淀，其中苦味酸与腺苷蛋氨。
32、酸的摩尔比为3。00664萃取向所得腺苷蛋氨酸沉淀中加入等体积的纯丁酮及05MOL/L硫酸溶液，腺苷蛋氨酸沉淀转化为易溶于水的腺苷蛋氨酸硫酸盐，萃取水相再用少量的纯丁酮洗涤3次，除去苦味酸，得到不含苦味酸的腺苷蛋氨酸硫酸盐。00675脱色不含苦味酸的腺苷蛋氨酸硫酸盐经SD300树脂脱色，进样速度2ML/MIN，收集脱色液，向脱色液中加入5倍体积纯丙酮溶液，使SAM以硫酸盐沉淀析出。00686冷冻干燥收集沉淀，40预冻后真空干燥，得到白色晶状粉末，得到以腺苷蛋氨酸硫酸盐存在的纯度9815的腺苷蛋氨酸产品。0069实施例300701发酵以经诱变筛选获得的酿酒酵母XJK12为出发菌株，无菌条件下接入。
33、内装100ML种子培养基的250ML三角瓶内，180R/MIN，28培养24H，获得种子液；将种子液按10的接种量接入内装6L发酵培养基的10L发酵罐中，28，通气量为12L/MIN，转速为300500R/MIN，保持溶氧在30以上，发酵10H后开始添加蔗糖，将蔗糖的浓度控制在4045G/L；发酵24H时后，以15G/H的速率连续流加前体L蛋氨酸直至发酵完成，发酵总时间48H，得到含有腺苷蛋氨酸的发酵液，其中，腺苷蛋氨酸发酵水平达到1638G/L，生物说明书CN104131052A7/7页10量干重达到17159G/L；0071种子培养基由下列重量份的组分组成蔗糖20，酵母粉6，磷酸氢二铵3，。
34、硫酸镁08，磷酸氢二钾10，磷酸二氢钾10，蒸馏水1000，121灭菌20MIN。0072发酵培养基组由下列重量份的组分组成蔗糖30，酵母粉15，磷酸氢二铵10，硫酸镁5，玉米浆16，磷酸氢二钾10，磷酸二氢钾10，ZNSO47H2O01，FESO47H2O01，CACL201，MNSO401，蒸馏水定容，121灭菌20MIN。00732细胞破壁在发酵液中加入等体积的20三氯乙酸，于4破碎3H，5000R/MIN，4离心15MIN收集上清液，获得腺苷蛋氨酸粗提液；00743苦味酸沉淀向所得腺苷蛋氨酸粗提液中加入含有饱和苦味酸的丁酮溶液，并不停搅拌，控制溶液PH值为29，4000R/MIN离心，。
35、分离沉淀得到腺苷蛋氨酸沉淀，其中苦味酸与腺苷蛋氨酸的摩尔比为3。00754萃取向所得腺苷蛋氨酸沉淀中加入等体积的纯丁酮及0SMOL/L硫酸溶液，腺苷蛋氨酸沉淀转化为易溶于水的腺苷蛋氨酸硫酸盐，萃取水相再用少量的纯丁酮洗涤3次，除去苦味酸，得到不含苦味酸的腺苷蛋氨酸硫酸盐。00765脱色不含苦味酸的腺苷蛋氨酸硫酸盐经SD300树脂脱色，进样速度3ML/MIN，收集脱色液，向脱色液中加入5倍体积纯丙酮溶液，使SAM以硫酸盐沉淀析出。00776冷冻干燥收集沉淀，40预冻后真空干燥，得到白色晶状粉末，得到以腺苷蛋氨酸硫酸盐存在的纯度9821的腺苷蛋氨酸产品。0078尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。说明书CN104131052A101/1页11图1说明书附图CN104131052A11。