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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810693075.0 (22)申请日 2018.06.20 (71)申请人 吉林农业科技学院 地址 132101 吉林省吉林市吉林经济技术 开发区翰林路77号 (72)发明人 宫敬利 徐浩 (51)Int.Cl. A61K 8/49(2006.01) A61Q 19/00(2006.01) A61Q 19/02(2006.01) A61Q 19/08(2006.01) (54)发明名称 水飞蓟素美白护肤品 (57)摘要 本发明公开了一种水飞蓟素美白护肤品， 该 美白护肤品。
2、中添加有水飞蓟素， 所述飞蓟素通过 以下步骤制备所得： 将水飞蓟经去皮， 机械法去 脂肪后， 用正己烷回流提取三次， 合并滤液， 减压 回收正己烷， 得到水飞蓟粗提取物， 加蒸馏水浓 缩除杂， 然后多次用蒸馏水蒸馏去除正己烷残 留， 取水溶性浓缩液部分冷冻干燥， 即得。 本系列 化妆品系纯天然制品， 含有以水飞蓟素为主的天 然中药成分， 有保湿润肤、 抗过敏、 改善皮肤质 地、 延缓皮肤衰老等功效， 尤其对色素沉着有明 显的防治效果。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 108578263 A 2018.09.28 CN 108578263 A 1.水飞蓟素美白护肤品， 其特征在于， 。
3、该美白护肤品中添加有水飞蓟素， 所述飞蓟素通 过以下步骤制备所得： 将水飞蓟经去皮， 机械法去脂肪后， 用正己烷回流提取三次， 合并滤液， 减压回收正己 烷， 得到水飞蓟粗提取物， 加蒸馏水浓缩除杂， 然后多次用蒸馏水蒸馏去除正己烷残留， 取 水溶性浓缩液部分冷冻干燥， 即得。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108578263 A 2 水飞蓟素美白护肤品 技术领域 0001 本发明涉及日用品领域， 具体涉及一种水飞蓟素美白护肤品。 背景技术 0002 化妆品与人们的日常生活密切相关， 许多人都使用化妆品， 化妆品的消费量与日 俱增。 化妆的主要目的是为了使裸露的皮肤免受大自然的威胁。
4、， 如温度变化、 光线等。 黄褐 斑， 是 一种慢性的、 长期的色素沉积而分布不均的皮肤病。 临床上的表现， 为面部的颜色形 成深浅 不一， 一般呈圆形、 条形或蝴蝶型的黄揭色或深咖啡色斑。 黄褐斑一般是患病部位 是在脸部， 另外在额头部分也会生成黄褐斑， 还有的分布在颧颊部、 或者口鼻部周围。 黄褐 斑的生成与 体内黑色素的生成有着密切的联系， 而黑色素之所以产生， 主要是因为人体皮 肤基底层中具 有的黑色素细胞， 由其产生黑色素。 酪氨酸酶在人体内具有重要的生理功 能， 它与老年斑、 黄褐斑等色素过度沉淀等疾病的发生有关。 0003 酪氨酸酶在人体中， 主要存在于皮肤的黑色素细胞中， 黑色。
5、素在人体皮肤形成需 要酪氨 酸酶的参与， 主要存在两个反应过程： 催化L-酪氨酸羟基化转变L-多巴和氧化L-多 巴形成 多巴醌， 进而生成黑色素， 临床上常见的皮肤病如黄褐斑、 老年斑、 白化病、 白癜风 等， 就 是由于酪氨酸酶活性异常引起的疾病， 因此， 研究酪氨酸酶的活性抑制机理可以用 于美白化 妆品等问题提供理论基础。 美白祛斑剂必须能够透过表皮， 穿透黑素细胞中的黑 素体膜， 并 保持其生物活性。 故而植物来源的美白剂， 迎合人们的安全需求而成为近年来 研究、 应用的 焦点之一。 0004 水飞蓟(Silybum marianum(L.)Gaertn.)是一年生或二年生草本植物， 水。
6、飞蓟具 有抗氧 化、 抗炎、 催乳、 保肝等作用。 水飞蓟素主要由水飞蓟宾、 异水飞蓟宾、 水飞蓟亭、 飞 水蓟 宁等组成， 是强抗氧化剂， 研究表明， 水飞蓟素能稳定肝细胞膜， 维持肝细胞之完整 性， 使 毒素无法穿透破坏肝脏， 并能加速合成肝脏细胞的DNA， 可预防牛皮癣等症， 同时具 有肝癌、 前列腺癌、 乳癌及子宫颈癌细胞的生长及分化抑制作用。 是目前世界上所发现最 具肝疾疗效 的类黄酮。 0005 目前对于水飞蓟素研究较多， 但是都在口服药物和保肝等药物上， 在化妆品上的 研究在 国内和国际上均未提及。 发明内容 0006 本发明的目的是提供了一种水飞蓟素美白护肤品， 含有以水飞蓟素。
7、为主的天然中 药成分， 有保湿润肤、 抗过敏、 改善皮肤质地、 延缓皮肤衰老等功效， 尤其对色素沉着有明 显的防治 效果。 0007 为实现上述目的， 本发明采取的技术方案为： 0008 水飞蓟素美白护肤品， 该美白护肤品中添加有水飞蓟素， 所述飞蓟素通过以下步 骤制备 所得： 0009 将水飞蓟经去皮， 机械法去脂肪后， 用正己烷回流提取三次， 合并滤液， 减压回收 说 明 书 1/6 页 3 CN 108578263 A 3 正己 烷， 得到水飞蓟粗提取物， 加蒸馏水浓缩除杂， 然后多次用蒸馏水蒸馏去除正己烷残 留， 取 水溶性浓缩液部分冷冻干燥， 即得。 0010 本系列化妆品系纯天然制。
8、品， 含有以水飞蓟素为主的天然中药成分， 有保湿润肤、 抗过 敏、 改善皮肤质地、 延缓皮肤衰老等功效， 尤其对色素沉着有明显的防治效果。 附图说明 0011 图1为本发明实施例中水飞蓟素提取工艺流程图。 0012 图2为本发明实施例中面霜制备流程图。 具体实施方式 0013 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白， 以下结合实施例对本发明进行进一步 详细说 明。 应当理解， 此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明， 并不用于限定本发 明。 0014 实施例 0015 一、 如图1所示， 水飞蓟素提取： 水飞蓟经去皮， 机械法去脂肪后， 用正己烷回流提 取 三次， 合并滤液， 减压回收正己烷，。
9、 得到水飞蓟粗提取物， 加蒸馏水浓缩除杂， 然后用蒸 馏 水多次蒸馏去除残留的正己烷， 取水溶性浓缩液部分冷冻干燥， 得到水飞蓟精华粉。 0016 二、 面霜制备： 如图2所示， 包括如下步骤： 0017 (1)按质量比称取： 硬脂酸5， C18醇2， 棕榈酸异丙酯6， 橄榄油0.5， 乳化剂 E1800， 0.3， 尼泊金甲酯0.15， 尼泊金丙酯0.05， 蒸馏水40， 混合搅拌溶解至均匀， 得油相A， 保温备用； 0018 (2)按质量比称取： 氮酮、 三乙醇胺0.3， 甘油8， 蒸馏水29.5， 混合均匀， 作为 B 相， 备用； 0019 (3)按质量比称取3的水飞蓟精华粉溶于B相中。
10、， 并加热至80， 缓慢搅拌， 混合 均 匀， 作为C相； 0020 (4)将所得的C相和乳化剂E1802缓慢加入到A相中， 同时进行高速搅拌35min， 混 合均匀； 降温至6575， 缓慢搅拌， 进行消泡； 继续降温至4050， 继续缓慢搅拌， 待 冷 却至室温， 停止搅拌； 0021 (5)将混合物进行研磨为糊状混合物， 颗粒细度小于5 m； 0022 (6)将研磨后的糊状混合物， 输入高速搅拌机进行高速强力搅拌为乳状半成品； 0023 (7)将步骤(6)所得的乳状半成品进行真空脱气工艺处理， 灌装， 即可。 0024 三、 活性实验 0025 黄褐斑实验模型制备 0026 挑选昆明种普。
11、通的雌性小白鼠50只， 体重在18-20g， 进行喂养， 备用。 40只小鼠以 0.4 的黄体酮注射液按0.02g/kg的剂量对小鼠进行后肢皮下注射， 进行模型的建立， 每 周6次， 连续4周。 0027 动物分组： 从之前准备好的50只健康小白鼠中， 随机选出10只， 作为空白对照组。 造 模结束后， 在其余40只老鼠中选取造模成功的小鼠30只。 10只为模型组10只为模型对照 组， 10只为水飞蓟素组。 说 明 书 2/6 页 4 CN 108578263 A 4 0028 给药方法： 小鼠背部脱毛， 于脱毛处涂抹适量(0.8g左右)的面霜， 每日1次， 每周6 次， 连续涂抹30天。 在。
12、过程中， 需要适时的脱毛， 大约5天左右脱一次毛。 0029 多指标含量测定法 0030 匀浆前准备 0031 末次涂抹霜制品1h后， 取背部脱毛处的皮肤组织0.2-1g， 最少可到2-5mg在冰冷的 生 理盐水中漂洗， 除去血液， 滤纸吸干水分， 称重， 放入10ml的小烧杯内， 标记为1号。 多次 取小鼠背部皮肤组织， 多次换用多个烧杯， 以保证一定的准确性。 0032 准备好充足的0.86的冷生理盐水， 备用。 冷生理盐水的取量体积， 是小鼠截取的 小鼠 皮肤组织重量的九倍， 放入2号烧杯中。 在之前备好的放有组织块的1号烧杯中， 用移 液管 量取2号烧杯中三分之二的冷生理盐水。 快速利。
13、用备好的小剪子将1号中的组织块快 速剪碎。 以此类推， 此后按照此方法进行。 注意： 天热时， 由于温度较高， 影响测定结果， 操 作的时 候， 需要在冰水浴中进行， 只需将盛有组织的小烧杯放入冰水中操作即可。 0033 10组织匀浆液的制备 0034 将剪碎完全的皮肤组织块倒入干净研钵中， 沿同一方向对组织块进行研磨， 直至 组织块 研磨细碎而充分， 移入事先准备好的10ml离心管中， 再将2号烧杯中剩余的三分之 一的冷生 理盐水倒入研钵中， 冲洗残留在研钵中的细碎组织， 同样将其冲洗液移入离心管 中， 制备成 10的组织匀浆液， 备用。 0035 离心 0036 取装有组织匀浆液的离心管，。
14、 离心器以3000r/min室温下离心10min后， 取上清液， 备 用。 0037 测定吸光度 0038 按照酪氨酶、 SOD、 MDA试剂盒的说明书， 谨遵上面的操作步骤和注意事项， 对样品 的吸 光度进行测定， 并记录相关数据。 0039 超氧化物岐化酶(SOD)含量测定 0040 1.按照说明书上的表格进行取样。 0041 2.用漩涡混匀器充分混匀， 置37恒温水浴40min。 0042 3.加入显色剂， 室温放置10min， 于波长550nm处， 1cm光径比色杯， 双蒸水凋零， 比 色， 测定吸光度。 0043 丙二醛(MDA)含量测定 0044 由于测定丙二醛所用到的组织是小鼠的。
15、皮肤组织， 用的方法是微量操作方法。 做 好的组 织匀浆， 最好不要离心。 操作简化后如下： 0045 按操作规范配制试剂盒说明书中用到的MDA 3号试剂。 0046 用50的冰醋酸， 以2 1的比例， 将上述配好的MDA 3号试剂进行稀释。 一次性配置 一 次性使用。 0047 根据试剂盒里面含有的说明书给的表格， 进行试剂的加样， 完成相关操作。 0048 利用漩涡混匀器， 将试剂与测定样品充分混匀， 此过程中试管需要保鲜薄膜将其 管口密 封， 把试管口扎紧后， 再用针头在保鲜膜上扎一个小孔， 在95水浴锅中水浴40分 钟， 取 出后利用流水冷却的方法冷却试管， 然后在3500-4000r。
16、/min的条件下， 离心10min 后。 取出 上清液， 使用721分光光度计， 在532nm， 1cm光径下， 双蒸水凋零后， 测各管吸光度 说 明 书 3/6 页 5 CN 108578263 A 5 值。 0049 计算丙二醛的含量。 0050 酪氨酶含量测定 0051 样本处理及要求： 0052 1.组织标本处理： 截取小鼠背部皮肤组织块， 称取重量， 放入烧杯。 加入一定量的 PH7.4 的PBS， 用眼科小剪剪碎组织块， 这个过程的操作要快速。 手工将烧杯中的组织碎液 匀浆充 分， 转移到离心管中， 在2000-3000r/min条件下离心20分钟左右， 仔细收集上清液。 分装， 。
17、一份待检测， 其余冷冻备用。 0053 2.标本采集后应该马上进行实验， 不方便立即实验的， 标本需要保存在-20条件 下， 而 且要尽量避免反复冻融。 0054 操作步骤： 按照酪安酶试剂盒说明书， 对样品进行稀释、 .加样、 温育、 配液、 洗涤、 加 酶、 显色、 终止、 450nm波长测定等操作步骤对小鼠皮肤组织中酪氨酶的含量进行测定。 0055 四、 实验结果及分析 0056 水飞蓟素霜涂抹小鼠后， 皮肤组织中SOD、 MDA和酪氨酶的含量进行测定， 其含量变 化如 表1至表3所示， 四种药品的祛斑效果对比如表1-表3所示。 0057 表1 水飞蓟素对小鼠皮肤组织SOD含量的影响 0。
18、058 0059 表1中表示的是小鼠在建模前后和涂抹水飞蓟素霜后， 皮肤组织中SOD的含量变 化。 从 表中可以看出， 空白组与模型组对比， 小鼠皮肤组织中的SOD含量降低， 而且是明显 的降低。 模型组与水飞蓟素组比较， SOD的含量升高， 并且趋近于空白组， 说明水飞蓟素可 以使小鼠 皮肤组织中SOD的含量升高。 0060 表2 水飞蓟素对小鼠皮肤组织中MDA含量的影响 说 明 书 4/6 页 6 CN 108578263 A 6 0061 0062 表2中表示的是小鼠在建模前后和涂抹水飞蓟素霜后， 皮肤组织中MDA的含量变 化。 从 表中可以看出， 空白组与模型组对比， 小鼠皮肤组织中的。
19、MDA含量升高， 而且变化是 明显的。 模型组与水飞蓟素组比较， MDA的含量降低了， 并且趋近于空白组的， 甚至比正常 值还要低， 说明水飞蓟素可以使小鼠皮肤组织中MDA的含量降低。 0063 表3 水飞蓟素对小鼠皮肤组织酪氨酶含量的影响 0064 0065 表3中表示的是小鼠在建模前后和涂抹水飞蓟素霜后， 皮肤组织中酪氨酶的含量 变化。 从表中可以看出， 空白组与模型组对比， 小鼠皮肤组织中的酪氨酶含量升高， 前后差 异明显。 模型组与水飞蓟素组比较， 酪氨酶的含量降低了， 并且趋近于空白组， 说明水飞蓟 素可以使 小鼠皮肤组织中酪氨酶的含量降低。 0066 对患有黄褐斑的小鼠使用水飞蓟素。
20、面霜后， 得到的结果显示出， 在相同的涂抹时 间、 涂 抹量以及其他变量保持不变的情况下。 模型组和给药对比分析， 可以看出， 患有黄褐 斑的小 鼠在涂抹水飞蓟素霜后， 前后变化明显： 皮肤组织中的SOD含量有一定的升高， 而 说 明 书 5/6 页 7 CN 108578263 A 7 且上升 程度是明显的， 而SOD是抗氧化作用的一种物质， 这种天然的抗氧化剂能够与氧自 由基发生 氧化还原反应， 使氧自由基被彻底清除， 达到抑制黑色素生成的目的。 皮肤组 织中酪氨酶 含量有所降低， 其含量的降低可以抑制络氨酸的分解， 从而减少黑色素的生 成。 生物体内， 自由基作用于脂质发生过氧化反应， 。
21、氧化的最终产物为丙二醛， 会引起蛋 白质、 核酸等生命 大分子的交联聚合， 且具有细胞毒性， 小鼠皮肤组织中MDA的含量是降低 的， 从侧面看出小 鼠皮肤组中的黑色素生成减少。 本系列化妆品系纯天然制品， 含有以水 飞蓟素为主的天然中 药成分， 有保湿润肤、 抗过敏、 改善皮肤质地、 延缓皮肤衰老等功效， 尤其对色素沉着有明 显的防治效果。 0067 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人 员来说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以作出若干改进和润饰， 这些改进和润饰也 应视为本发 明的保护范围。 说 明 书 6/6 页 8 CN 108578263 A 8 图1 说 明 书 附 图 1/2 页 9 CN 108578263 A 9 图2 说 明 书 附 图 2/2 页 10 CN 108578263 A 10 。