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1、10申请公布号CN104072417A43申请公布日20141001CN104072417A21申请号201410266448822申请日20140616C07D221/10200601A61K31/473200601A61K47/12200601A61K47/28200601A61K47/36200601A61P35/0020060171申请人南京泽朗医药科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼72发明人刘东锋杨成东54发明名称一种泡泡西酮的制备方法及抗肿瘤应用57摘要本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及一种泡泡西酮的制备方法及抗肿瘤应用。
2、。制备方法包括以下步骤（1）取小花泡泡的小枝粗粉，90的乙醇溶液连续逆流超声提取，得到提取液；（2）将提取液浓缩，再经氧化铝柱层析；（3）制备型液相色谱分离；（4）丙酮重结晶，得到高纯度的泡泡西酮结晶产品。采用本发明制备方法，工艺操作简便、得率高，污染小，适合高纯度泡泡西酮的生产。泡泡西酮具有抗肿瘤作用，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，利于提高生物利用度。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104072417ACN104072417A1/1页21一种泡泡西酮的制备方法，其特征在于包括以下步骤（1）提取取。
3、小花泡泡的小枝粉碎成粗粉，加入90乙醇溶液，65下进行连续逆流超声提取，得到乙醇提取液；（2）氧化铝柱层析上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿甲醇混合溶液洗脱，薄层检测，收集泡泡西酮流分，浓缩干燥得到泡泡西酮粗品；（3）制备型液相色谱分离上述粗品采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集泡泡西酮组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得泡泡西酮粗晶；（4）重结晶将泡泡西酮粗晶用丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度泡泡西酮结晶。2根据权利要求1所述的泡泡西酮的制备方法，其特征在于步骤（1）所述乙醇溶液用量为药材的1012倍（V/W）。3根据权利要求1所述的泡泡西酮的制备方法，其特征在于步骤。
4、（1）所述超声频率为70100KHZ。4根据权利要求1所述的泡泡西酮的制备方法，其特征在于步骤（1）所述提取时间为60100MIN。5根据权利要求1所述的泡泡西酮的制备方法，其特征在于步骤（2）所述氧化铝为120目，氯仿甲醇体积比为21，用量为柱体积的6倍。6根据权利要求1所述的泡泡西酮的制备方法，其特征在于步骤（3）所述制备型液相色谱的流动相为乙腈02乙二胺水溶液，体积比为3367。7根据权利要求1所述的泡泡西酮的制备方法，其特征在于步骤（3）所述紫外检测波长为254NM。8根据权利要求1所述的泡泡西酮的制备方法，其特征在于步骤（4）所述丙酮为90100的丙酮水溶液。9根据权利要求18所述方。
5、法制备的泡泡西酮，在其口服配方中添加肠吸收促进剂。10根据权利要求4所述的泡泡西酮，其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。权利要求书CN104072417A1/3页3一种泡泡西酮的制备方法及抗肿瘤应用技术领域0001本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种泡泡西酮的制备方法及抗肿瘤应用。背景技术0002泡泡西酮（ASIMICILONE）为喹啉生物碱类化合物，CAS号14701060，分子式C16H15NO4，分子量2853，分子结构式为泡泡西酮来源于番荔枝科ANNONACEAE小花泡泡ASIMINAPARVIFLORAMI。
6、CHXDUNAL的小枝，具有抗肿瘤作用，对肺癌A549、乳腺癌MCF7和结肠癌HT29细胞的LC50分别为213G/ML、722G/ML和325G/ML。0003通过文献检索，现有生物碱类活性物质的提取大都是采用硅胶、凝胶色谱法进行分乙醇提回流提取，硅胶、凝胶色谱法进行分离等步骤。由于操作复杂，制备量较小，样品得率低，不适合泡泡西酮的工业化制备。发明内容0004为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种泡泡西酮的制备方法及抗肿瘤应用。0005为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种泡泡西酮的制备方法，其特征在于包括以下步骤（1）提取取小花泡泡的小枝粉碎成粗粉，加入90乙醇溶液，。
7、65下进行连续逆流超声提取，得到乙醇提取液；（2）氧化铝柱层析上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿甲醇混合溶液洗脱，薄层检测，收集泡泡西酮流分，浓缩干燥得到泡泡西酮粗品；（3）制备型液相色谱分离上述粗品采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集泡泡西酮组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得泡泡西酮粗晶；（4）重结晶将泡泡西酮粗晶用丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度泡泡西酮结晶。0006步骤（1）所述乙醇溶液用量为药材的1012倍（V/W）。0007步骤（1）所述超声频率为70100KHZ。0008步骤（1）所述提取时间为60100MIN。0009步骤（2）所述氧化铝为120目，氯仿。
8、甲醇体积比为21，用量为柱体积的6倍。说明书CN104072417A2/3页40010步骤（3）所述制备型液相色谱的流动相为乙腈02乙二胺水溶液，体积比为3367。0011步骤（3）所述紫外检测波长为254NM。0012步骤（4）所述丙酮为90100的丙酮水溶液。0013所述制备的泡泡西酮，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。0014采用本法制备泡泡西酮，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染；添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。0015下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列。
9、实施方式。具体实施方式0016实施例1泡泡西酮的制备取小花泡泡的小枝1KG，粉碎成粗粉，从连续逆流超声提取设备头部进料口进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入口加入10倍90乙醇溶液，65下进行连续逆流超声提取60MIN，超声频率为80KHZ，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（120目）拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿甲醇（21）混合溶液洗脱，薄层检测，收集泡泡西酮流分，浓缩干燥得到泡泡西酮粗品。以乙腈02乙二胺水溶液为流动相，体积比为3367，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10M，柱长为15CM、直径为4CM，将粗品加入流动相至刚好溶解，溶解后的溶液经045M微。
10、滤膜过滤，得到样品溶液，六通阀进样，进样体积为25ML，控制流速为50ML/MIN，紫外在线检测，检测波长为254NM，收集目标成分，减压回收试剂得泡泡西酮粗晶，用丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度泡泡西酮结晶，经HPLC检测，纯度972。0017实施例2泡泡西酮的抗肿瘤应用1、材料动物昆明种小鼠，雌雄各半性，体重202G，由南京中医药大学提供。0018细胞株SARCOMA180腹水型瘤株（S180），由中国科学院上海药物研究所提供。00192、方法取50只小鼠，每只小鼠左腋下接种S180瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为生理盐水对照组（NS组）、阳性对照组、泡泡西酮低剂量组（1MG/KG。
11、）、中剂量组（2MG/KG）、高剂量组（4MG/KG）。接种24H后泡泡西酮给药组灌胃给药，连续7，阳性对照组试验期间腹腔注射2次，隔日给药。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药24H后断颈处死，称重，并计算抑瘤率。00203、结果本发明植物提取组合物对小鼠S180皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为68327594，结果见表1。0021抑瘤率（）（1治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重）说明书CN104072417A3/3页5表1本发明植物提取组合物对S180皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（N10，S）组别给药剂量（MG/KG）试验前体重（G）试验后体重（G）瘤重（G）抑瘤率（）空白对照组20201522635312212021阳性对照组30202015224753180850195991泡泡西酮低剂量组1202015227004281330153726泡泡西酮中剂量组2202015227432950970255425泡泡西酮高剂量组4202015227253220510237594注与阳性对照组相比，P001。说明书CN104072417A。