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1、(10)申请公布号 CN 102298030 A (43)申请公布日 2011.12.28 CN 102298030 A *CN102298030A* (21)申请号 201010215352.0 (22)申请日 2010.06.25 G01N 33/68(2006.01) G01N 21/31(2006.01) G01N 35/00(2006.01) C12Q 1/26(2006.01) (71)申请人 苏州艾杰生物科技有限公司 地址 215006 江苏省苏州市工业园区宏业路 128 号 B2 栋 (72)发明人 王尔中 (54) 发明名称 甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒 (57) 摘要。
2、 本发明涉及利用酶比色法技术的甘氨酸含量 的测定方法、 试剂的组成及成分， 其测定的技术原 理是依据氰化氢合成酶的催化反应完成， 本发明 还涉及一种甘氨酸测定试剂盒。本发明的测定方 法灵敏度高、 误差小， 因此本发明的测定方法与试 剂盒可以广泛地应用于食品检验。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 7 页 CN 102298039 A1/2 页 2 1. 一种利用酶比色法技术的甘氨酸浓度测定方法， 其测定的技术原理是根据下述氰化 氢合成酶的系列催化反应完成 ： 甘氨酸 +2 辅酶氰 化氢合成酶 氰化氢 + 二氧化碳 +。
3、2 还原型辅酶。 2. 一种甘氨酸的测定方法， 其特征在于该方法的步骤如下 ： 2.1 样品准备 ： 2.1.1 标准样品的制备 将一定量的甘氨酸溶于水或缓冲液中， 再将其浓度调整到 1 毫摩尔 / 升 ； 2.1.2 待测样品的制备 待测液体样品直接测试， 无须预处理 ； 将一定量的待测固体样品像制备标准样品一样 溶于水或缓冲液中 ； 2.1.3 空白样品 所述的水或缓冲液作为空白样品， 其甘氨酸浓度为 0 毫摩尔 / 升 ； 2.2 试剂溶液的制备 ： 分别移取或称取缓冲液、 稳定剂、 辅酶、 氰化氢合成酶， 然后将它们混合均匀， 用水溶 解得到所述的试剂溶液， 它们的浓度分别是 20-5。
4、00mmol/L、 0.001-7mol/L、 0.1-5mmol/L、 1000-80000U/L ； 2.3待测样品与在步骤2.2)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/500进行混合， 在温 度 15-45下反应 5-60 分钟， 在主波长 340nm 与副波长 405nm( 如果受仪器限制， 可以不设 副波长 ) 下进行测定， 测定其吸光度随时间的变化 ； 2.4 在与步骤 2.3) 同样的条件下测定步骤 2.1.1) 标准样品的吸光度随时间的变化 ； 2.5 在与步骤 2.3) 同样的条件下测定在步骤 2.1.3) 使用的水或缓冲液作为空白溶液 的吸光度随时间的变化 ； 2.6 数据。
5、处理 由步骤2.3-2.5)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化， 根据下式计算得到 甘氨酸的含量 ： 式中 ： A( 样品 ) 表示步骤 2.3) 得到的待测样品的吸光度变化 ； A( 空白 ) 表示步骤 2.5) 得到的空白溶液的吸光度变化 ； A( 标准 ) 表示步骤 2.4) 标准样品的吸光度变化。 3. 根据权利要求 1、 2 所述的测定方法， 其特征在于使用全自动生化分析仪测定时， 待 测样品、 所述标准样品与所述空白样品由该分析仪在设定条件下自动取样， 然后在下述条 件下进行测定 ： 测定方法为终点法， 温度37， 反应时间10分钟， 测试主波长340nm， 测试副 波。
6、长 405nm， 被测甘氨酸样品与试剂的体积比例为 1/10-1/500， 反应方向为正反应， 延迟时 间 1/0 分钟， 检测时间 4/5 分钟。 4. 根据权利要求 1、 2 或 3 所述的测定方法， 其特征在于， 所述的稳定剂是一种或多种 选自硫酸铵、 氯化钠、 乙二醇、 丙二醇、 甘油或双乙酸钠、 叠氮钠等防腐剂的稳定剂 ； 所述的 权 利 要 求 书 CN 102298030 A CN 102298039 A2/2 页 3 缓冲液是一种或多种选自三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸缓冲液、 磷酸盐缓冲液、 咪唑 - 盐酸 缓冲液、 磷酸氢二钠 - 柠檬酸缓冲液、 硼砂 - 盐酸缓冲。
7、液、 巴比妥钠 - 盐酸缓冲液、 硼酸 - 硼 砂缓冲液、 二乙醇胺缓冲液或 “PBS” 缓冲液的缓冲液 ； 所述的辅酶是一种或多种选自NADP+、 NAD+或 thio-NAD+的辅酶。 5. 根据权利要求 1、 2 或 3 所述的测定方法， 其特征在于 ： 5.1 所述的试剂溶液配制成如下单剂试剂 ： 它是由所述的缓冲液、 稳定剂、 辅酶与氰化氢合成酶组成的 ； 5.2 所述的试剂溶液配制成如下双剂试剂 ： 试剂 1， 它是由所述的缓冲液、 稳定剂、 辅酶组成的 ； 试剂 2， 它是由所述的缓冲液、 稳定剂与氰化氢合成酶组成的 ； 其中辅酶、 氰化氢合成酶在试剂 1 或试剂 2 中的位置是。
8、不限定的。 6. 一种甘氨酸测定试剂盒， 其特征在于 ： 6.1 它由下述粉状试剂组成， 在使用时用水将它们溶解得到具有下述浓度范围的可直 接使用的液体试剂 ： 缓冲液 20-500mmol/L 稳定剂 0.001-7mol/L 辅酶 0.1-5mmol/L 氰化氢合成酶 1000-80000U/L。 6.2 根据权利要求 6.1 所述的甘氨酸测定试剂盒， 其特征在于它有 ： 组成如下的试剂 1 ： 缓冲液 20-500mmol/L 稳定剂 0.001-7mol/L 辅酶 0.1-5mmol/L ； 组成如下的试剂 2 ： 缓冲液 20-500mmol/L 稳定剂 0.001-7mol/L 氰。
9、化氢合成酶 1000-80000U/L。 权 利 要 求 书 CN 102298030 A CN 102298039 A1/7 页 4 甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒 【技术领域】 0001 本发明涉及食品检验测定技术领域， 更具体地， 本发明涉及甘氨酸测定方法及其 试剂盒。 【背景技术】 0002 甘氨酸为非人体必需氨基酸。甘氨酸有独特的甜味， 能缓和酸、 碱味， 掩盖食品中 添加糖精的苦味并增强甜味。 人体若摄入甘氨酸的量过多， 不仅不能被人体吸收利用， 而且 会打破人体对氨基酸的吸收平衡而影响其它氨基酸的吸收， 导致营养失衡而影响健康。甘 氨酸不能被人体利用， 只能分解转化为热能， 。
10、这样会增加肝脏负担。 而分解产物中的含氮化 合物要通过尿液排出体外， 又会增加肾脏负担。如果大量、 长期食用这类食品， 可能造成肝 肾损伤。 部分含乳饮料企业为提高产品中蛋白质含量， 在生产加工中违规使用甘氨酸， 对青 少年及儿童的正常生长发育很容易带来不利影响。 0003 按照我国 食品添加剂使用卫生标准 GB2760 规定， 甘氨酸在作为食品添加剂只允 许在调味剂与豆奶中使用， 且最高限量为每公斤 1 克， 但在含乳饮料中不允许使用。 【发明内容】 0004 要解决的技术问题 0005 本发明的目的是提供一种甘氨酸的测定方法。 0006 本发明的另一个目的是提供一种甘氨酸测定试剂盒。 00。
11、07 技术方案 0008 本发明是通过下述技术方案实现的。 0009 本发明的方法是一种采用酶比色法 (Enzymatic Colorimetric Method) 技术， 利 用测定还原型烟酰胺辅酶 ( 还原型辅酶 ) 在 340nm 波长处的吸光度变化测定甘 氨酸的方 法。 0010 本发明甘氨酸测定方法的的技术原理是根据下述氰化氢合成酶的系列催化反应 完成 ： 0011 甘氨酸 +2 辅酶 氰化氢合成酶 氰化氢 + 二氢化碳 +2 还原型辅酶 0012 本发明的方法利用氰化氢合成酶(hydrogen cyanide synthase ； EC 1.4.99.5)酶 促反应终点法。氰化氢合。
12、成酶酶解甘氨酸， 将辅酶 ( 在 340nm 处没有吸收峰 ) 还原成为还 原型辅酶 ( 在 340nm 处有吸收峰 )， 从而得以测定还原型辅酶在 340nm 处吸光度上升的程 度， 这样可以通过测量 340nm 处吸光度上升的程度， 可以测算甘氨酸的浓度大小。 0013 本发明是通过下述技术方案实现的。 0014 本发明涉及一种甘氨酸的测定方法。该甘氨酸测定方法的步骤如下 ： 0015 A、 样品准备 ： 0016 A.1 标准样品的制备 0017 将一定量的甘氨酸溶于水或缓冲液中， 再将甘氨酸浓度调整到1毫摩尔/升， 得到 说 明 书 CN 102298030 A CN 10229803。
13、9 A2/7 页 5 的溶液作为标准样品 ； 0018 A.2 待测样品的制备 0019 待测液体样品直接测试， 无须预处理 ； 将一定量的待测固体样品像制备标准样品 一样溶于水或缓冲液中 ； 0020 A.3 空白样品 0021 所述的水或缓冲液作为空白样品， 其甘氨酸浓度为 0 毫摩尔 / 升 ； 0022 B、 试剂溶液的制备 ： 0023 分别移取或称取缓冲液、 稳定剂、 辅酶、 氰化氢合成酶， 然后将它们混合均匀， 用水 溶解得到所述的试剂溶液， 它们的浓度分别是 20-500mmol/L、 0.001-7mol/L、 0.1-5mmol/L、 1000-80000U/L ； 002。
14、4 C、 待测样品与在步骤 B) 得到的试剂溶液按照体积比 1/10 至 1/500 进行混合， 在 温度15-45下反应5-60分钟， 在主波长340nm与副波长405nm(如果受仪器限制可以不设 副波长 ) 下进行测定， 测定其吸光度随时间的变化 ； 0025 D、 在与步骤 C) 同样的条件下测定步骤 A) 标准样品的吸光度随时间的变化 ； 0026 E、 在与步骤 C) 同样的条件下测定在步骤 A) 空白样品的吸光度随时间的变化 ； 0027 F、 数据处理 0028 由步骤C-E)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化， 根据下式计算得到 甘氨酸的含量 ： 0029 0030。
15、 式中 ： 0031 A( 样品 ) 表示步骤 C) 得到的待测样品的吸光度变化 ； 0032 A( 空白 ) 表示步骤 E) 得到的空白样品的吸光度变化 ； 0033 A( 标准 ) 表示步骤 D) 标准样品的吸光度变化。 0034 根据本发明， 在所述的甘氨酸测定方法中， 所述的缓冲液应该理解是能够使其测 定介质的 pH 基本保持稳定 ( 一般是 6.5-8.5) 的溶液。如果该 pH 高于 8.5 或 pH 低于 6.5， 则该测定方法使用的酶的活性达不到预期的活性效果， 因此需要添加更多的介质与酶， 才 有可能达到预期的活性效果。 0035 在本发明中， 所述的缓冲液是一种或多种选自三。
16、 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸缓冲 液、 磷酸盐缓冲液、 咪唑 - 盐酸缓冲液、 磷酸氢二钠 - 柠檬酸缓冲液、 硼砂 - 盐酸缓冲液、 巴 比妥钠 - 盐酸缓冲液、 硼酸 - 硼砂缓冲液、 二乙醇胺缓冲液或 “PBS” 缓冲液的缓冲液。 0036 优选地， 所述的缓冲液例如选自三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲液、 磷酸盐缓冲液或 “PBS” 缓冲液。 0037 更优选地， 所述的缓冲液例如选自三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸 (Tris-HCl) 缓冲 液或磷酸盐缓冲液。 0038 根据本发明， 在所述的甘氨酸测定方法中， 所述的稳定剂应该理解是一种能保护 试剂。
17、中的介质 ( 底物 ) 与酶， 使其不会随着时间推移而改变其性质， 进而失去活性的物质， 说 明 书 CN 102298030 A CN 102298039 A3/7 页 6 它会使得试剂具备很长的活性寿命， 通常长达数月， 甚至一、 二年。 如果没有所述的稳定剂， 则试剂的活性在溶液中只能维持数十小时， 顶多数 天， 就会逐渐失去活性而不再具备检测 性能。在本发明中， 所述的稳定剂使用量是 0.01-7mol/L。如果所述的稳定剂使用量不够， 则试剂活性的寿命就会缩短 ； 如果所述的稳定剂使用量过高， 则会增加成本。 0039 在本发明中， 所述的稳定剂是一种或多种选自硫酸铵、 氯化钠、 乙。
18、二醇、 丙二醇、 甘 油或双乙酸钠或叠氮钠防腐剂的稳定剂。 0040 优选地， 所述的稳定剂例如是一种或多种选自硫酸铵、 氯化钠、 丙二醇、 甘油或双 乙酸钠或叠氮钠的稳定剂。 0041 更优选地， 所述的稳定剂例如是一种或多种选自甘油、 硫酸铵或双乙酸钠的稳定 剂。 0042 在本发明中， 所述的辅酶是一种或多种选自 NADP+、 NAD+或 thio-NAD+的辅酶。 0043 根据一种本发明的优选实施方式， 本发明使用全自动生化分析仪测定甘氨酸时， 待测样品、 所述标准样品与所述空白样品由该分析仪在设定条件下(参数)自动取样， 然后 在下述条件下进行测定 ： 测定方法为二点终点法 / 终。
19、点法， 温度 37， 反应时间 10 分钟， 测 试主波长 340nm， 测试副波长 405nm， 被测甘氨酸样品与试剂的体积比例为 1/10-1/500， 反 应方向为正反应， 延迟时间 1/0 分钟， 检测时间 4/5 分钟。 0044 根据另一种本发明的优选实施方式， 本发明使用的试剂溶液配制成如下双剂试 剂 ： 0045 由所述的缓冲液、 稳定剂、 辅酶组成的试剂 1 ； 0046 由所述的缓冲液、 稳定剂与氰化氢合成酶组成的试剂 2 ； 0047 其中辅酶、 氰化氢合成酶在试剂 1 或试剂 2 中的位置是不限定的。 0048 在本发明甘氨酸测定方法中使用的测定仪器可以是紫外 / 可见。
20、光分析仪， 例如 上海精密仪器仪表有限公司销售的紫外可见分光光度计、 天津喀纳斯光学分析仪器有限 公司销售的 723 可见分光光度计 ； 半自动生化分析仪， 例如上海伟思医用设备有限公司的 BTS-330 半自动生化分析仪 ； 全自动生化分析仪， 例如 ： 由迈瑞公司以商品名 BS-300、 奥林 帕斯公司以商品名 AU400、 东芝公司以商品名 120、 日立公司以商品名 7600、 雅培公司以商 品名 CB8000 或贝克曼公司以商品名 CX20 销售的全自动生化分析仪。 0049 本发明还涉及甘氨酸测定试剂盒。该甘氨酸测定试剂盒由下述粉状试剂组成， 在 使用时用水将它们溶解得到具有下述浓。
21、度范围的可直接使用的液体试剂 ： 0050 缓冲液 20-500mmol/L 0051 稳定剂 0.001-7mol/L 0052 辅酶 0.1-5mmol/L 0053 氰化氢合成酶 1000-80000U/L。 0054 根据一种本发明的优选实施方式， 本发明的甘氨酸测定试剂盒有 ： 0055 试剂 1 ： 0056 缓冲液 100mmol/L 0057 稳定剂 500mmol/L 0058 辅酶 1.25mmol/L ； 0059 组成如下的试剂 2 ： 说 明 书 CN 102298030 A CN 102298039 A4/7 页 7 0060 缓冲液 100mmol/L 0061 。
22、稳定剂 500mmol/L 0062 氰化氢合成酶 16000U/L。 0063 根据另一种本发明的优选实施方式， 在本发明的甘氨酸测定试剂盒中， 所述的缓 冲液是一种或多种选自三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸缓冲液、 磷酸盐缓冲液、 咪唑 - 盐酸缓 冲液、 磷酸氢二钠 - 柠檬酸缓冲液、 硼砂 - 盐酸缓冲液、 巴比妥钠 - 盐酸缓冲液、 硼酸 - 硼砂 缓冲液、 二乙醇胺缓冲液或 “PBS” 缓冲液的缓冲液。 0064 优选地， 所述的缓冲液例如选自三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲液、 磷酸盐缓冲液或 “PBS” 缓冲液。 0065 更优选地， 所述的缓冲液例如选。
23、自三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸 (Tris-HCl) 缓冲 液或磷酸盐缓冲液。 0066 在本发明中， 所述的稳定剂是一种或多种选自硫酸铵、 氯化钠、 乙二醇、 丙二醇、 甘 油或双乙酸钠或叠氮钠防腐剂的稳定剂。 0067 优选地， 所述的稳定剂例如是一种或多种选自硫酸铵、 氯化钠、 丙二醇、 甘油、 双乙 酸钠或叠氮钠的稳定剂。 0068 更优选地， 所述的稳定剂例如是一种或多种选自甘油、 硫酸铵或双乙酸钠的稳定 剂。 0069 在本发明中， 无论是单剂试剂、 双剂试剂， 在本发明测定甘氨酸的方法中， 所述的 辅酶可以是一种或多种选自 NADP+、 NAD+或 thio-NAD+的。
24、辅酶。 0070 使用本发明的甘氨酸测定试剂盒时， 可以使用紫外 / 可见光分析仪， 例如上海精 密仪器仪表有限公司销售的紫外可见分光光度计、 天津喀纳斯光学分析仪器有限公司销售 的723可见分光光度计 ； 半自动生化分析仪， 例如上海伟思医用设备有限公司的BTS-330半 自动生化分析仪 ； 全自动生化分析仪， 例如 ： 由迈瑞公司以商品名 BS-300、 奥林帕斯公司以 商品名 AU400、 东芝公司以商品名 120、 日立公司以商品名 7600、 雅培公司以商品名 CB8000 或贝克曼公司以商品名 CX20 销售的全自动生化分析仪。 0071 在采用本发明方法测定甘氨酸时， 根据实验要。
25、求进行多次试验， 然后将得到的这 些试验结果按照下式计算出精密度 (CV) ： 0072 0073 式中 ： 0074 - 试验结果平均值 ； 0075 Xi- 各次试验结果 ； 0076 n- 试验次数 .N 10 0077 0078 将得到的这些试验结果按照下式计算出相对极差 ： 0079 0080 - 第一批各次试验结果平均值 说 明 书 CN 102298030 A CN 102298039 A5/7 页 8 0081 - 第二批各次试验结果平均值 0082 - 第三批各次试验结果平均值 0083 - 为 X， Y， Z 中的最大值 0084 为 X， Y， Z 中的最小值 0085 。
26、每批试样数取 n 3 0086 经过大量试验确定， 对于甘氨酸含量为 0-2mmol/L 的样品， 其分析误差可以达到 5。 0087 本发明方法的灵敏度可以达到 0.0001mmol/L。 0088 通过大量试验确定， 本发明方法测定甘氨酸含量范围是 0-2mmol/L， 本发明方法适 合于食品检测。 【具体实施方式】 0089 下述实施例说明本发明而不限制本发明的保护范围。 0090 实施例 1 ： 牛奶中甘氨酸含量的测定 0091 1) 标准样品的制备 0092 将一定量的甘氨酸溶于水或缓冲液中， 再将甘氨酸浓度调整到 1 毫摩尔 / 升 ； 0093 2) 待测样品预处理 0094 牛。
27、奶样品作为待测样品， 无须预处理 ； 0095 3) 空白样品 0096 所述的水或缓冲液作为空白样品， 其甘氨酸浓度为 0 毫摩尔 / 升 ； 0097 B、 试剂溶液的制备 ： 0098 本实施例的甘氨酸测定试剂为单剂试剂， 它含有 ： 0099 三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸缓冲液 100mmol/L 0100 甘油 1mol/L 0101 NADP+ 1.25mmol/L 0102 氰化氢合成酶 16000U/L。 0103 按照上述浓度将这些试剂加入去离子水全部溶解配制好待用。 0104 C、 待测牛奶样品， 与在步骤B)得到的试剂溶液按照体积比1/50进行混合， 在温度 3。
28、7下反应 5 分钟， 在主波长 340nm 与副波长 405nm 下进行测定， 测定其吸光度随时间的变 化 A( 样品 ) 为 0.0598 ； 0105 D、 在与步骤 C) 同样的条件下测定步骤 A) 标准样品的吸光度随时间的变化 A( 标准 ) 为 0.1838 ； 0106 E、 在与步骤C)同样的条件下测定在步骤A)使用的水作为空白溶液的吸光度随时 间的变化 A( 空白 ) 为 0.0011 ； 0107 F、 数据处理 0108 由步骤C-E)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化， 根据下式计算得到 甘氨酸的含量 ： 0109 说 明 书 CN 102298030 A C。
29、N 102298039 A6/7 页 9 0110 式中 ： 0111 A( 样品 ) 表示步骤 C) 得到的待测样品的吸光度变化 ； 0112 A( 空白 ) 表示步骤 E) 得到的空白样品的吸光度变化 ； 0113 A( 标准 ) 表示步骤 D) 标准样品的吸光度变化。 0114 通 过 上 式 计 算 得 到 该 牛 奶 样 品 的 甘 氨 酸 含 量 为 0.32mmol/L， 其 误 差 是 0.002mmol/L。 0115 实施例 2 ： 牛奶中甘氨酸含量的测定 0116 1) 标准样品的制备 0117 将一定量的甘氨酸溶于水中， 再将甘氨酸浓度调整到 1 毫摩尔 / 升， 作为。
30、标准样 品 ； 0118 2) 待测样品的制备 0119 牛奶样品作为待测样品， 无须处理 ； 0120 3) 空白样品 0121 所述的水作为空白样品， 其甘氨酸浓度为 0 毫摩尔 / 升 ； 0122 B、 试剂溶液的制备 ： 0123 甘氨酸测定试剂为双剂试剂， 它含有 ： 0124 组成如下的试剂 1 ： 0125 磷酸盐缓冲液 100mmol/L 0126 NAD+ 2.25mmol/L ； 0127 组成如下的试剂 2 ： 0128 磷酸盐缓冲液 100mmol/L 0129 乙二醇 5mol/L 0130 氰化氢合成酶 26000U/L。 0131 按照上述浓度将这些试剂加入去离。
31、子水全部溶解配制好待用。 0132 C、 样品使用日立 7080 全自动生化分析仪测定 0133 该全自动生化分析仪主要操作参数如下 ： 0134 计量方法 ： 两点终点法 0135 测试计量时间点 ： 21， 31 0136 主波长 ： 340 0137 副波长 ： 405 0138 反应温度 ： 37 0139 样品体积 ： 5 0140 试剂 1(R1) 体积 ： 200 0141 试剂 2(R3) 体积 ： 50 0142 反应方向 ： 正 0143 标准样品 1 ： 0.00 说 明 书 CN 102298030 A CN 102298039 A7/7 页 10 0144 标准样品 。
32、2 ： 1.00 0145 定标结果显示 K 值为 511， 换算成灵敏度为 0.1957A/mmol/L。 0146 测试结果显示该牛奶中含有甘氨酸为 0.45mmol/L。其误差是 0.003mmol/L。 0147 实施例 3 ： 稳定性试验 0148 该实施例的操作方式与实施例 1 相同， 只是在实施例 1 实施后， 实施例 1 使用的试 剂在密闭试剂瓶中在 2-8下存放了半年与一年。 0149 使用同样的标准样品， 使用与实施例 2 同样的新试剂与上述存放半年与一年的试 剂分别进行了测定， 其它条件都与实施例 2 相同， 其测定结果如下 ： 0150 表 1 0151 甘氨酸含量 分。
33、析误差 新试剂 1.03mmol/L 0.001mmol/L 存放半年的试剂 1.02mmol/L 0.001mmol/L 存放一年的试剂 1.00mmol/L 0.001mmol/L 0152 表 1 结果表明， 使用本发明的试剂盒， 采用本发明的测定方法可以保证获得稳定 的结果， 其稳定性至少一年以上。 0153 实施例 4 ： 线性试验 0154 该实施例的操作方式与实施例 2 相同， 只是配制新的标准样品浓度达到 2.50mmol/L， 将 2.50mmol/L 的甘氨酸依倍比稀释， 然后进行测试， 其测定结果如下 ： 0155 表 2 0156 甘氨酸预期值 甘氨酸测试值 0.00 。
34、0.05 0.25 0.25 0.50 0.51 0.75 0.77 1.00 1.01 1.25 1.25 1.50 1.49 2.00 2.00 2.50 2.40 0157 表 2 结果表明， 使用本发明的试剂盒， 采用本发明的测定方法可以保证线性可以 达到 2.00mmol/L。 0158 申请人经过实验验证， 采用以上发明内容中记载的其他测定方法均能达到本发明 的目的， 鉴于测定步骤等情况与以上实施例类同， 不另一一例举。 0159 总之， 实验证明 ： 采用本发明的测定方法完全可以通过一般生化分析仪器得出所 需的测定结果空白试剂吸光度变化 (A) 0.002 ； 吸光度时间反应曲线应呈上升曲 线 ； 试剂可测有效 (R 0.99) 线形范围可达 2.00mmol/L ； 试剂测试的不准确度， 其相对偏 差不超过 5 ； 试剂测试的精密度 ( 重复性 ) 的变异系数 (CV) 5 ； 试剂的灵敏度可 达0.16000.0080A/mmol/L ； 试剂在2-8下保存， 活性可以稳定一年 ； 本发明灵敏度 高、 精确度好， 线形范围宽广， 稳定期长， 足以便于推广应用。 说 明 书 CN 102298030 A 。