6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷衍生的非类固醇矿皮质激素 受体拮抗剂 技术领域 本发明涉及可用作治疗对矿皮质激素受体拮抗剂敏感的生理病症的治疗剂的三 环化合物， 涉及包括该化合物的药物组合物， 使用该化合物治疗患者的生理病症的方法， 和 可用于合成该化合物的中间体和方法。
背景技术 醛甾酮为主要的内原性矿皮质激素， 其通过在与矿皮质激素受体 (MR) 相互作用 之后促进钠和水再吸收以及钾排泄， 来调节血液动力学体内平衡。由于醛甾酮保持电解质 和水平衡的作用， MR 拮抗剂已经用于治疗许多生理病症， 包括高血压、 低钾血症、 心肌心律 不齐、 巴特氏综合征， 以及原发性或继发性高醛甾酮症， 例如 Conn 氏综合症。近年来， MR 拮 抗剂已经用于治疗充血性心脏衰竭和急性心肌梗塞。另外， MR 拮抗剂也已证明在临床前肾 病模型中且与标准治疗结合可有效减少患有肾病， 例如慢性肾病， 包括糖尿病性肾病的患 者的蛋白尿。
但是， 现有 MR 拮抗剂产生相伴的作用， 限制其安全性和 / 或有效性。例如， 螺甾内 酯是一种有效的 MR 拮抗剂， 其是非选择性的并且与作为其它生理学过程的媒介的其它核 激素受体 ( 例如雄激素受体 (AR)、 孕酮受体 (PR) 或糖皮质激素受体 (GR)) 交叉反应。螺甾 内酯疗法已经与高钾血症和男性乳房增大症、 勃起功能障碍、 性欲减退、 月经不调以及胃部 不适相联系。尽管依普利酮 (Eplerenone) 相对于其它核激素受体而言对 MR 是选择性的， 但是其也与高钾血症相关。因此， 本领域中仍然需要现有 MR 拮抗剂疗法的替代方法。
本发明的目的是提供具有 MR 拮抗剂活性的非类固醇 MR 配体。 作为优选实施方案， 目的是提供非类固醇 MR 拮抗剂， 相对于 AR、 PR 和 GR， 其与 MR 结合具有更大的亲合性。作 为更优选实施方案， 目的是提供非类固醇 MR 拮抗剂， 相对于 AR、 PR 和 GR， 其与 MR 结合具有 更大的亲合性， 并且具有有效的肾脏或心脏保护活性。 作为更优选实施方案， 本发明的目的 是提供非类固醇 MR 拮抗剂， 相对于 AR、 PR 和 GR， 其与 MR 结合具有更大的亲合性， 并且其具 有有效的肾脏或心脏保护活性， 但是产生高钾血症的发生率或可能性降低。
任何治疗剂的重要考虑因素为该试剂是否能够引起 QT 间隔延长。治疗剂可以引 起 QT 间隔延长的中心机理为通过阻断心肌中的 hERG 通道。阻断 hERG 通道防止钾离子通 过心脏细胞膜， 导致细胞的动作电位延长， 这可以导致危险的心脏心律不齐。因此， 本发明 的另一个优选实施方案提供阻断 hERG 通道的发生率或可能性降低的 MR 拮抗剂。
三环 MR 配体在本领域中是已知的。例如 WO 04/052847 和 WO05/066161 公开三环 类固醇激素受体调节剂， 其可用于治疗对矿皮质激素受体或糖皮质激素受体调节敏感的病 症。本发明涉及以下发现 ： 如下式 (I) 给出的某些新的三环化合物具有如由体外和体内测 试证明的特定活性概况， 表明它们具有治疗或预防对矿皮质激素受体拮抗剂疗法敏感的病 症的功效。具体地， 示例的式 (I) 的化合物是拮抗矿皮质激素受体的有效 MR 配体。
因此， 本发明提供式 (I) 的化合物
式 (I)
其中， R1 和 R2 各自独立地表示氢或氟 ； L 表示 -(CH2)2-、 -CH(CH3)-CH2- 或直接键接 ； 3 R 表示氢或下式的基团 ：R4 表示 -CN 或 -C(O)NH2， 或其药学可接受盐。
在另一个实施方案中， 本发明提供一种治疗或预防充血性心脏衰竭、 糖尿病性肾 病、 慢性肾病、 高血压、 低钾血症、 心肌心律不齐、 Bartter 氏综合征、 原发性或继发性高醛甾 酮症或 Conn 氏综合症的方法， 包括向有需要的患者施用有效量的式 (I) 的化合物或其药学 可接受盐。作为更具体的方面， 本发明提供一种治疗或预防充血性心脏衰竭、 高血压、 糖尿 病性肾病或慢性肾病的方法。
此外， 本发明提供一种式 (I) 的化合物或其药学可接受盐， 用于治疗或预防充血 性心脏衰竭、 糖尿病性肾病、 慢性肾病、 高血压、 低钾血症、 心肌心律不齐、 Bartter 氏综合 征、 原发性或继发性高醛甾酮症或 Conn 氏综合症。更具体地， 本发明提供一种式 (I) 的化 合物或其药学可接受盐， 用于治疗或预防充血性心脏衰竭、 高血压、 糖尿病性肾病或慢性肾 病。另外， 本发明提供一种式 (I) 的化合物或其药学可接受盐， 用于治疗。
在另一个实施方案中， 本发明提供式 (I) 的化合物或其药学可接受盐的用途， 用 于制备治疗或预防充血性心脏衰竭、 糖尿病性肾病、 慢性肾病、 高血压、 低钾血症、 心肌心律
不齐、 Bartter 氏综合征、 原发性或继发性高醛甾酮症或 Conn 氏综合症的药物。更具体地 说， 本发明提供式 (I) 的化合物或其药学可接受盐的用途， 用于制备治疗或预防充血性心 脏衰竭、 高血压、 糖尿病性肾病或慢性肾病的药物。
另外， 本发明提供一种药物组合物， 包括式 (I) 的化合物或其药学可接受盐， 以及 一种或多种药学可接受载体、 稀释剂或赋形剂。 更具体地， 本发明提供一种用于治疗或预防 充血性心脏衰竭、 高血压、 糖尿病性肾病或慢性肾病的药物组合物， 包括式 (I) 的化合物或 其药学可接受盐， 以及一种或多种药学可接受的载体、 稀释剂或赋形剂。
本发明还包括可用于合成式 (I) 的化合物的新的中间体和方法。
本发明还涉及式 (I) 的化合物或式 (I) 的化合物的药学可接受盐的溶剂化物。因 此， 当在此使用时， 术语 “式 (I)” ， 或式 (I) 的任何具体化合物在其含义内包括任何该化合 物的溶剂化物。药学可接受盐及其制备方法的实例充分处于本领域技术人员的知识水平 内。参见例如 Stahl 等， “Handbook of Pharmaceutical Salts ： Properties， Selection and Use( 药 用 盐 手 册 ： 性 质、 选 择 和 用 途 )” ， VCHA/Wiley-VCH， (2002) ； Gould， P.L.， “Salt selection for basic drugs( 基本药物盐的选择 )” ， InternationalJournal of Pharmaceutics， 33 ： 201-217(1986) ； Berge 等， “PharmaceuticalSalts( 药用盐 )” ， Journal of Pharmaceutical Sciences， 66， 第 1 期， (1977 年 1 月 ) ； 和 Bastin 等， “Salt Selection and Optimization Proceduresfor Pharmaceutical New Chemical Entities( 药 用 新 化 学 物 质 的 盐 选 择 和 优 化 过 程 )” ， Organic Process Research and Development， 4： 427-435(2000)。特别提及式 (I) 的化合物的盐酸盐、 马来酸盐和甲磺酸盐。
本发明的化合物可具有一个或多个手性中心， 并因此以各种立体异构的构型存 在。 由于这些手性中心的存在， 本发明的化合物可以以外消旋物、 对映异构体的混合物和单 独的对映异构体以及非对映异构体和非对映异构体的混合物的形式存在。 除非在此特别说 明， 所有这种外消旋物、 对映异构体和非对映异构体都在本发明范围内。 由本发明提供的化 合物的对映异构体可以例如由本领域普通技术人员， 使用标准技术， 如由 J.Jacques 等人， “Enantiomers， Racemates， and Resolutions( 对映体、 消旋物和拆分 )” ， John Wiley and Sons， Inc.， 1981 描述的那些技术， 以及本文中的流程、 制备和实施例中提供的那些技术来， 来进行拆分。
式 I 的化合物的特定立体异构体和对映异构体可以由本领域普通技术人员， 使 用公知技术和方法， 如由 Eliel 和 Wilen， “Stereochemistry ofOrganic Compounds( 有 机 化 合 物 的 立 体 化 学 )” ， John Wiley & Sons， Inc， 1994，第 7 章 ； Separation of Stereoisomers， Resolution， Racemization( 立体异构体的分离、 拆分和外消旋化 ) ； 和 由 Collet 和 Wilen， “Enantiomers， Racemates， and Resolutions( 对映体、 外消旋物和拆 分 )” ， John Wiley & Sons， Inc.， 1981 公开的那些， 以及本文中的流程、 制备和实施例中提 供的那些技术来制备。 例如， 特定立体异构体和对映异构体可以由立体有择合成， 使用对映 异构和几何异构纯， 或对映异构或几何异构富集的起始原料来制备。 另外， 特定立体异构体 和对映异构体可以由一些技术来拆分和回收， 所述技术例如是手性固定相层析、 酶催拆分 或用于此目的的试剂形成的加成盐的分级再结晶。
如在有机化学中通常使用的， 术语 “R” 和 “S” 在这里用来表示手性中心的特定构 型。术语 “(±)” 、 “R/S” 或 “RS” 表示手性中心的外消旋构型。优先物的部分列表和立体化学的论述包含在 “Nomenclature ofOrganic Compounds ： Principles and Practice( 有机 化合物的命名 ： 原理和实践 )” ， (J.H.Fletcher 等编， 1974) 中。 如本领域普通技术人员将理 解的， 含有碳 - 碳或碳 - 氮双键的分子可以几何异构体的形式存在。 通常使用两种方法来表 示特定异构体， “顺式 - 反式” 法和 “E 和 Z” 法， 取决于连接各双键原子的基团相同或不同。 立体异构的论述和特定异构体的命名可以在 March， “Advanced Organic Chemistry( 高等 有机化学 )” ， John Wiley & Sons， 1992， 第 4 章中找到。所有此类几何异构体和单独异构 体的混合物均由本发明预期和提供。
本发明的化合物可以配制为药物组合物的一部分。因此， 包括式 (I) 的化合物或 其药学可接受盐以及可药用载体、 稀释剂或赋形剂的药物组合物是本发明的重要实施方 案。 药物组合物及其制备方法的实例是本领域中公知的。 参见例如 REMINGTON ： THE SCIENCE AND PRACTICEOF PHARMACY( 雷明顿 ： 药学科学和实践 )(A.Gennaro 等编， 第 19 版， Mack Publishing(1995))。包括式 (I) 的化合物的说明性组合物包括例如 ： 净化水中的悬浮体 形式的式 (I) 的化合物， 具有 0.5 ％羧基甲基纤维素、 0.25 ％ Polysorbate 80 和 2.7 ％ NaCl ； 悬浮体形式的式 I 的化合物， 具有 1％羧基甲基纤维素和 0.25％ Polysorbate 80 ； 悬浮体形式的式 I 的化合物， 具有 1％羧基甲基纤维素、 0.25％ Polysorbate 80 和 0.05％ TM AntiFoam1510 。但是应理解本发明的优选组合物包括配制在胶囊或片剂中的式 (I) 的化 合物或其药学可接受盐。
式 (I) 的化合物或包括式 (I) 的化合物的组合物可以由使得该化合物生物可用的 任何途径施用， 包括口服和非肠道途径。
本领域技术人员应理解粒度可能影响药剂的体内溶解， 进而可能影响药剂的吸 收。如在此使用的， “粒度” 表示如通过例如激光散射、 激光衍射、 Mie 散射、 沉降场流分级、 光子相关光谱等常规方法测定的药剂颗粒的直径。当药剂溶解性差时， 小的或减小的粒度 可以帮助溶解， 并因此增加试剂的吸收。Amidon 等， Pharm.Research， 12 ； 413-420(1995)。 减小或控制粒度的方法是常规的并且包括碾磨、 湿磨、 微粉化等。 控制粒度的另一个方法包 括制备纳米悬浮液形式的药剂。本发明的特殊实施方案包括式 (I) 的化合物或包括式 (I) 的化合物的药物组合物， 其中所述化合物具有低于约 50μm 的 d90 粒度 ( 即其中 90％颗粒 小于或等于的尺寸 )。更特殊的实施方案包括 d90 粒度低于约 10μm 的式 I 的化合物。
如在此使用的， 术语 “患者” 表示人类或非人类哺乳动物， 例如狗、 猫、 奶牛、 猴子、 马或绵羊。更具体地， 术语 “患者” 表示人类。如在此使用的， 术语 “治疗” 包括阻止、 预防、 限制、 减缓、 终止或逆转现有症状或病症的进展或严重性。如在此使用的， 术语 “预防” 表示 阻止、 限制或抑制症状或病症的发生或出现。 如本领域技术人员理解的， 生理病症可以表现 为 “慢性” 状态， 或 “急性” 发作。因此， 病症的治疗预期急性事件和慢性状态。在急性事件 中， 化合物在症状开始时施用并在症状消失时停用， 而慢性状态是在整个疾病过程期间进 行治疗。
如在此使用的， 术语 “有效量” 表示向患者施用单一剂量或多个剂量时， 在诊断或 治疗的患者中提供所需效果的式 (I) 的化合物的量或剂量。有效量可以由作为本领域技 术人员的主治诊断医师， 通过考虑以下许多因素， 容易地确定 ： 哺乳动物的种类 ； 其体型、 年龄和一般健康 ； 所涉及的特定疾病 ； 疾病的程度或严重性 ； 个别患者的反应 ； 施用的特定 化合物 ； 施用方式 ； 施用的制剂的生物可用性特征 ； 选择的给药方案 ； 和任何相伴药物的使用。 当结合本发明的方法和用途使用时， 本发明的化合物和组合物可以单独施用， 或 者与用来治疗特定病症或状态的常规治疗剂联合施用。 当本发明的化合物或组合物作为组 合的一部分使用时， 化合物或包括式 (I) 的组合物可以单独施用， 或者作为包括要与其组 合的治疗剂的配方的一部分施用。
如在此使用的， 符号 表示向前突出页面平面的键， 而符号 表 示向后突出页面平面的键。
本发明的特殊方面
以下清单列出式 (I) 的化合物的特定构型、 取代基和可变物的若干分组。应理解 具有这种特定构型、 取代基或可变物满足条件式 (I) 的化合物， 以及方法、 用途和包括这种 化合物的组合物代表本发明的特定方面。
因此， 本发明的一个特定方面为其中式 (I) 的化合物为 L、 R3 和 R4 具有在此定义的 值的任一个， 和满足以下条件的化合物 ：
(a)R1 表示氢， R2 表示氢或氟 ； 或 1 2
(b)R 表示氢， R 表示氢或氟 ； 或 1 2
(c)R 表示氢或氟， R 表示氢 ； 或 1 2
(d)R 表示氢或氟， R 表示氟 ； 或 1 2
(e)R 和 R 各自独立地表示氢。
本发明的其它特定方面为其中式 (I) 的化合物为 R1、 R2、 R3 和 R4 具有在此定义的 值的任一个， 和满足以下条件的那些化合物 ：
(a)L 表示 -CH(CH3)-CH2- 或直接键接 ； 或
(b)L 表示 -CH(CH3)-CH2- ； 或
(c)L 表示直接键接。
本发明的其它特定方面为其中式 (I) 的化合物为 R1、 R2、 L 和 R4 具有在此定义的值 的任一个， 和满足以下条件的那些化合物 ：
(a)R3 表示氢或下式的基团 ：
(b)R3 表示下式的基团本发明的其它特定方面为其中式 (I) 的化合物为 R1、 R2、 L 和 R4 具有在此定义的值 的任一个， 和满足以下条件的那些化合物 ：
(a)R3 表示氢或下式的基团 ：
(b)R3 表示下式的基团
(c)R3 表示下式的基团本发明的其它特定方面为其中式 (I) 的化合物为 R1、 R2、 L 和 R3 具有在此定义的值 的任一个， 和满足以下条件的那些化合物 ：
(a)R4 表示 -CN 或
(b)R4 表示 -C(O)NH2。
本发明的更特定的方面为式 (I) 的化合物为以下化合物， 其中 R1 和 R2 各自独立地 表示氢或氟 ；
L 表示 -CH(CH3)-CH2- 或直接键接 ； R3 表示氢或下式的基团 ：
R4 表示 -CN 或 -C(O)NH2， 或其药学可接受盐。 本发明的更特定方面为式 (I) 的化合物， 其中， 1 2 R 和 R 各自独立地表示氢或氟 ；L 表示 -CH(CH3)-CH2- 或直接键接， 条件是当 L 表示 -CH(CH3)-CH2- 时， 则 R3 表示下 式的基团 ：
和当 L 表示直接键接时， 则 R3 表示下式的基团 ：R4 表示 -CN 或 -C(O)NH2， 或其药学可接受盐。
本发明的其它特定方面由以下式 I(a) 和式 I(b) 的化合物提供。应理解式 I(a) 和式 I(b) 的化合物， 以及使用这种化合物的方法和用途， 和包括这种化合物的组合物代表 本发明的特定的其它方面。
因此， 本发明的一个特定方面由式 I(a) 的化合物提供 ：
式 I(a)
其中， R1 和 R2 各自独立地表示氢或氟 ； L 表示 -CH(CH3)-CH2- 或直接键接 ； 和 3 R 表示氢或下式的基团 ：或其药学可接受盐。
本发明的更特定方面由式 I(a) 的化合物提供， 其中 ： 1 2
R 和 R 各自独立地表示氢或氟 ； 和 3 2
L 表示 -CH(CH )-CH - 或直接键接， 条件是当 L 表示 -CH(CH3)-CH2- 时， 则 R3 表示下 式的基团 ：
和当 L 表示直接键接时， 则 R3 表示下式的基团 ：
或其药学可接受盐。 本发明的另一个特定方面由式 I(b) 的化合物提供 ：
式 I(b)
其中， R1 和 R2 各自独立地表示氢或氟 ； L 表示 -CH(CH3)-CH2- 或直接键接 ； 和 3 R 表示下式的基团 ：
或其药学可接受盐。 本发明的更特定方面由式 I(b) 的化合物提供， 其中 ： 1 2 R 和 R 各自独立地表示氢或氟 ； 和L 表示 -CH(CH3)-CH2- 或直接键接， 条件是当 L 表示 -CH(CH3)-CH2- 时， 则 R3 表示下 式的基团 ：
和当 L 表示直接键接时， 则 R3 表示下式的基团 ：或其药学可接受盐。
另外， 本发明的最特定方面由在此举例说明的那些式 (I) 的化合物提供， 最特别 为 (E)-N-(5-((E)-3- 氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-1-(1- 甲基 - 氮杂 环丁烷 -3- 基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 氰酰胺 ； (E)-N-(5-((E)-(3- 氟二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11(6H)- 亚基 ) 甲基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟基 -1- 甲基吡咯烷 -3- 基 )-1H- 苯 并 [d] 咪唑 -2(3H)- 亚基 ) 氰酰胺 ； 顺丁烯二酸 (E)-N-(5-((E)-(3- 氟二苯并 [b， e] 氧 杂环庚烷 -11(6H)- 亚基 ) 甲基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟基 -1- 甲基吡咯烷 -3- 基 )-1H- 苯 并 [d] 咪唑 -2(3H)- 亚基 ) 氰酰胺 ； (E)-N-[5-((E)-3- 氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚 烷 -11- 亚 基 甲 基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟 基 -1- 甲 基 - 吡 咯 烷 -3- 基 )-1， 3- 二 氢 - 苯 并 咪唑 -2- 亚基 ]- 脲 ； (E)-N-(5-((E)-3- 氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲 基 )-1-((R)-1- 甲基 -2- 吗啉 -4- 基 - 乙基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 脲 ； 或 (E)-N-(5-((E)-3- 氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-1-((7S， 8aR)- 六 氢 - 吡咯并 [2， 1-c][1， 4] 噁嗪 -7- 基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 脲。
式 (I) 的化合物可以由本领域中已知的各种方法和以下流程、 制备和实施例中描 述的那些方法制备。但是， 以下论述并不希望以任何方式限制本发明的范围。例如， 所述各 途径的特定合成步骤可以以不同的方式组合， 或与不同流程的各步骤相结合， 以制备其它 式 (I) 的化合物。以下流程中各步骤的产物可以由包括萃取、 蒸发、 沉淀、 层析、 过滤、 研磨、 结晶等的常规方法回收。
除非另有说明， 取代基如前面所定义。试剂和起始原料对于本领域普通技术人员 来说是容易获得的。其它必要试剂和起始原料可以通过选自以下的程序来制备 ： 有机和杂 环化学的标准技术、 与已知的在结构上相似的化合物的合成方法类似的技术， 和在下列制 备和实施例中描述的程序， 包括任何新颖程序。
如在此使用的， 以下术语具有标明的含义 ： “MeOH” 表示甲醇 ； “EtOH” 表示乙醇 ； “EtOAc” 表示乙酸乙酯 ； “DMF” 表示二甲基甲酰胺 ； “DMSO” 表示二甲基亚砜 ； “TFA” 表示三 氟乙酸 ； “THF” 表示四氢呋喃 ； “DEAD” 表示偶氮二甲酸二乙酯 ； “DIAD” 表示二偶氮二甲酸 二异丙酯 ； “NBS” 表示 N- 溴琥珀酰亚胺 ； “MCPBA” 表示间 - 氯过氧苯甲酸 ； “tBOC” 或 “boc” 表示叔丁氧基羰基 ； “rac” 表示外消旋 ； “prep” 表示制备例 ； “ex” 表示实施例 ； 和 “HPLC” 表示高效液相层析。
流程 1可以根据流程 1 中描绘的反应形成式 (3) 的中间体。
在流程 1 中， 式 (1) 的胺在亲核性芳香取代 (SNAr) 置换中与 4- 溴 -1- 氟 -2- 硝 基 - 苯反应， 提供式 (3) 的氨基 - 硝基 - 苯基溴化物。例如， 胺 (1) 可以在例如乙酸乙酯、 THF 的惰性溶剂， 或例如乙醇的质子溶剂中， 在室温至溶剂的回流温度下反应。
本领域技术人员应理解式 (1) 的化合物可以由与在此描述的那些方法相似的方 法或者通过使用本领域中确定的方法来容易地制备。例如， 可以通过 N- 叔丁基羧基乙醇胺 的甲磺酸化， 和随后用吗啉置换甲磺酸酯产生所需吗啉基 - 乙胺， 获得甲基取代或未取代 的吗啉基乙胺。
同样应认识到适当保护基的选择和使用是本领域中公知和了解的 ( 参见例如 Protecting Groups in Organic Synthesis， Theodora Greene(Wiley-Interscience))。 胺官能团， 例如氮杂环丁烷基部分中存在的胺官能团， 可以去保护并且随后进一步反应产 生本发明的其它化合物。例如， 3-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 氮杂环丁烷 -1- 甲酸叔丁 酯在酸性条件下去保护之后， 氮杂环丁烷可以在还原性胺化中， 例如利用甲醛烷基化， 产生 N- 甲基氮杂环丁烷基中间体。
流程 2
可以根据流程 2 中描绘的反应形成式 (9) 的中间体。 在流程 2 步骤 1 中， 式 (4) 的酯还原成式 (5) 的醇。本领域技术人员将认识到存在许多还原酯的方法。例如， 式 (4) 的酯用硼氢化锂在约 0 至 40℃下在例如二乙醚的惰性 溶剂中加以处理。 10 分钟之后结束反应， 分离式 (5) 的叠氮醇， 其随后在步骤 2 中被还原成 胺。叠氮化物的还原可以使用本领域中常用的催化氢化条件进行， 以获得式 (6) 的氨基醇。
在流程 2 步骤 3 中， 4- 溴 -1- 氟 -2- 硝基 - 苯与式 (6) 的胺经历如先前流程 1 所 述的 SNAr 反应。
在步骤 4 中， 式 (7) 的苯基 - 氨基 - 吡咯烷使用酸性条件， 例如氯化氢或三氟乙酸 进行去保护， 并且产物在步骤 5 中环化为式 (8) 的噁嗪酮 (oxezinone)。使用氯乙酰氯， 在 例如氢氧化钠的无机碱存在下， pH 保持在 pH ＝ 10 至 12， 完成环化。反应在 THF 和水的混 合物 ( 约 1 ∶ 1) 中进行。
在流程 2 步骤 6 中， 式 (8) 的噁嗪酮还原成式 (9) 的噁嗪。使用硼烷 - 四氢呋喃 络合物或硼烷 - 二甲基硫醚络合物， 在例如 THF 的惰性溶剂， 在约 0℃至溶剂的回流温度下 还原羰基官能团。
式 (4) 的手性吡咯烷是本领域中已知的， 并且可以由 3- 羟基脯氨酸的立体异构体 容易地制备。醇可以进行甲磺酸化， 然后利用反转立体化学置换为叠氮化物。可选地， 醇可 以在 Mitsinobu 条件下， 使用四溴化碳， 利用反转立体化学转化成溴化物， 随后用叠氮化物 离子置换， 再次反转立体化学。 反式 - 羟基脯氨酸可以通过在 90℃下用乙酸和乙酸酐处理， 转化成顺式构型 (C.G.Levins 和 C.E.Schafmeister J.Org.Chem.， 2005， 70， 9002-9008)。
流程 3
可以根据流程 3 中描绘的反应形成式 (14a 和 b) 或 (17a 和 b) 的中间体。在流程 3 步骤 1a 中， 式 (10) 的外消旋反式 - 羟基苯甲基胺吡咯烷可以使用适当 的对映纯酸来拆分。 例如， 在例如具有约 1％水的乙腈的适当溶剂中用 (+)- 扁桃酸处理， 使 得极高非对映过量的 (S， S) 羟基苯甲基胺 (+)- 扁桃酸盐选择性再结晶。该盐然后可以通 过使用适当的碱， 例如碳酸钾水溶液来中和。在步骤 1b 中， 现在富集 (R， R) 对映异构体的 来自以上再结晶的母液可以蒸发并用例如含有约 2.5％水的乙腈的溶剂中的 (-)- 扁桃酸 处理， 获得净化的 (R， R) 对映异构体。
在步骤 2 中， 使用例如碳上的钯的常用催化剂， 在例如甲醇、 正丁醇或四氢呋喃的 常用溶剂中， 使游离 (S， S) 或 (R， R) 羟基苯甲基胺经历标准氢化条件， 获得相应的 (S， S) 或 (R， R) 羟胺。
在流程 3 步骤 3 中， 所得式 (12a 或 b) 的氨基吡咯烷与 4- 溴 -1- 氟 -2- 硝基 - 苯 进行 SNAr 反应， 得到式 (13a 或 b) 的苯基 - 氨基吡咯烷。该反应可以在例如三乙胺的适当 的碱存在下， 在例如四氢呋喃或乙酸乙酯的常用溶剂中进行。
在流程 3 步骤 4 中， 式 (13a 或 b) 的吡咯烷的羟基的手性分别由 (S， S) 和 (R， R) 转换为 (3R， 4S) 和 (3S， 4R)。手性转化使用 Mitsunobu 反应实现。本领域技术人员将认识 到存在各种本领域中使用的 Mitsunobu 条件。例如， 式 (15a 或 b) 的醇溶于适当的无水溶 剂， 例如 THF、 CH2Cl2、 甲苯等， 并用三烷基或三芳基膦， 例如 Me3P、 Bu3P 或 Ph3P 和二烷基偶 氮 - 二甲酸酯， 例如 DEAD 或 DIAD 处理。
在步骤 5 中， 式 (15a 或 b) 的 3S， 4R 和 4S， 3R- 氯乙酰氧基酯水解为式 (16a 或 b) 的羟基吡咯烷。使用例如氢氧化锂水溶液的无机碱， 在例如甲醇的溶剂中， 在 0 至 50℃下 4 至 24 小时， 实现水解。
在流程 3 步骤 6 中， 使用酸性条件对式 (13a 或 b) 和式 (16a 或 b) 的四个非对映 氨基吡咯烷进行去保护。叔丁氧基羰基基团的去保护是本领域公知的。优选的条件使用惰 性溶剂， 例如用无水氯化氢气体处理的乙酸乙酯， 在约 0℃下持续 10 分钟。 所得 NH- 吡咯烷 经受还原性胺化条件， 获得式 (14a 或 b) 和式 (17a 或 b) 的 N- 甲基吡咯烷。反应在惰性溶 剂， 例如二氯甲烷、 THF 或优选乙腈中进行反应， 并用甲醛水溶液处理。反应用还原剂， 例如 硼氢化钠、 氰基硼氢钠或优选三乙酰氧基硼氢化钠， 在约 0 至 40℃处理 4 至 24 小时。
本领域技术人员应理解式 (10) 的化合物可以由与在此描述的那些方法相似的方 法或者通过使用本领域中确定的方法来容易地制备。例如， 3- 吡咯啉可以用二 - 叔丁基重 碳酸酯加以保护， 随后在 DMSO/ 水中溴化， 得到反式 -3- 溴 -4- 羟基吡咯烷 (A.Kamal 等， Tetrahedron Lett.， 2004， 45， 8057-8059 ； A.Kamal 等， Tetrahedron Asymmetry， 2006， 17， 2876-2883)。与氢氧化钠反应原位形成环氧化物， 其与苯甲基胺反应得到式 (10) 的外消 旋反式 - 羟基苯甲基胺吡咯烷。以更直接的方式， 可以直接形成环氧化物并通过用 MCPBA 氧化 3- 吡咯啉来进行分离。在另一个合成备选方案中， 2， 4- 二氯 -2- 丁烯可以与氨基甲 酸叔丁酯反应， 产生 1-Boc-3- 吡咯啉 (Y.Tsuzuki 等， Tetrahedron Asymmetry， 2001， 12， 2989-2997)。可以通过与甲胺而不是氨基甲酸叔丁酯反应完全避免 t-Boc 保护基。随后用 MCPBA 氧化为环氧化物， 用氨气开环， 产生外消旋反式 -4- 氨基 -1- 甲基 - 吡咯烷 -3- 醇。 其可以与 1- 溴 -4- 氟 -3- 硝基苯反应得到对映异构体混合物形式的式 (14a 和 b) 的化合 物。可以通过本领域中已知的方法拆分该对映异构体混合物， 所述方法例如是手性 HPLC 或 用对映纯羧酸， 例如 D-(-) 或 L-(+)- 酒石酸等的盐再结晶。流程 4在流程 4 步骤 1 中， 式 (18) 的反式氨基 - 羟基 - 哌啶用苯甲醛经历还原性胺化， 得 到式 (19) 的苯甲基氨基哌啶。本领域技术人员将认识到存在各种适合于实现还原性胺化 的条件。例如， 反应在例如乙醇的溶剂中， 在乙酸和例如氰基硼氢钠的还原剂存在下进行。
在流程 4 步骤 2a 中， 式 (19) 的外消旋反式 - 羟基苯甲基胺哌啶可以使用适当的 对映纯酸来拆分。例如， 在例如具有约 5％水的乙腈的适当溶剂中用 (+)- 酒石酸处理， 使 得极高非对映过量的式 (20a) 的 (3R， 4R) 的羟基苯甲基胺 (+) 酒石酸盐选择性再结晶。类 似地， 在步骤 2b 中， 外消旋材料在例如含有约 2.5％水的乙腈的溶剂中， 用 (-) 酒石酸再结 晶， 获得净化的式 (20b) 的 (S， S) 对映异构体。
在步骤 3 中， 拆分的式 (20a) 和 (20b) 的 3R， 4R 和 3S， 4S 对映异构体可以分别通 过催化氢化而去苯甲基化为式 (21a 或 b) 的氨基羟基哌啶。最初酒石酸盐用碳酸钠或碳酸 钾溶液洗涤， 随后用二氯甲烷萃取去除酒石酸。 然后在例如乙醇或甲醇的惰性溶剂中， 使用 5 或 10％碳上的钯氢化游离的苯甲基胺。
在流程 4 步骤 4 中， 如流程 3 步骤 3 中一样将式 (21a 或 b) 的氨基羟基哌啶转化 成式 (22a 或 b) 的苯基 - 氨基哌啶。
在步骤 5 中， 将式 (22a 或 b) 的苯基 - 氨基哌啶去保护和通过还原性胺化烷基化 为式 (23a 或 b) 的 N- 甲基哌啶。反应在乙酸和水的溶剂混合物中， 在甲醛和例如氰基硼氢 钠的还原剂存在下进行。
式 (18) 的 4- 氨基 -3- 羟基哌啶在本领域中是已知的， 并且可以由 4- 哌啶酮通过 还原成 4- 羟基哌啶， 用 boc 或其它保护基保护来容易地制备。醇可以甲磺酸化， 消除为烯 烃， 然后环氧化形成外消旋顺式 -7- 氧杂 -3- 氮杂 - 二环 [4.1.0] 庚烷 -3- 甲酸叔丁酯。 环 氧化物随后用叠氮化物阴离子开环， 引起反式区位化学， 随后还原， 得到式 (18) 的氨基羟 基哌啶。
流程 5
可以根据流程 5 中描绘的反应形成式 (30) 或 (31) 的化合物。适当的式 (24) 的 化合物是其中 R1 和 R2 如式 (I) 中定义， 并且 X ＝ Br 或 I 的化合物。适当的式 (30) 或 (31) 1 2 3 的化合物是其中 R 、 R、 L 和 R 如式 (I) 定义的化合物。
在流程 5 步骤 1 和步骤 2 中， 式 (24) 的卤苯甲基苯基醚经历与丙烯酸甲酯或丙烯 酸乙酯的双 Heck 偶联， 产生在双键处具有 E 区位化学的式 (26) 的乙烯基酯。该反应在钯 催化剂， 例如四 ( 三苯基膦 ) 钯 (0)、 氯化钯， 或优选乙酸钯 (II) 存在下发生。包括例如三 乙胺、 碳酸钾、 乙酸钠， 或季铵盐， 例如溴化四 - 正丁基铵的碱。反应在例如 DMF 或 N- 甲基 吡咯烷的惰性溶剂中， 在约 40 至 130℃下进行 4 至 48 小时， 得到式 (25) 的中间体。将其分 离并随后在例如 90 至 150℃的高温下， 在基本相似的反应条件下环化为式 (26) 的乙烯基 酯。可选地， 式 (24) 的卤苯甲基苯基醚可以在单釜法中直接转化为式 (26) 的乙烯基酯， 而 无需在约 90 至 150℃下分离式 (25) 的中间体。
在步骤 3 中， 式 (26) 的酯水解并转化为式 (27) 的乙烯基溴。水解可以使用无机 碱， 例如氢氧化钾、 氢氧化钠， 或优选氢氧化锂来实现。所得羧酸随后可以用乙酸和 NBS， 在 40 至 100℃下处理。
在流程 5 步骤 4 中， 式 (27) 的乙烯基溴转化成式 (28) 的乙烯基频哪醇硼酸酯。 乙 烯基溴与双 ( 频哪醇 ) 二硼， 在例如乙酸铯或乙酸钾的碱存在下， 在例如 THF、 1， 2- 二甲氧 基乙烷， 或优选 1， 4- 二噁烷的惰性溶剂中反应。反应在约 40℃至溶剂的回流温度下， 在钯 催化剂， 例如二氯化 1， 1′ - 双 ( 二苯基膦基 ) 二茂铁钯 (II)(Pd2(dppf)Cl2)， 或三 ( 二亚 苯甲基丙酮 ) 二钯 (0)(Pd2(dba)3) 存在下， 在例如三环己基膦的膦配体存在下进行。
在步骤 5 中， 式 (28) 的乙烯基频哪醇硼酸酯与氨基硝基溴苯在 Suzuki 交叉偶合 条件下反应， 形成式 (29) 的乙烯基硝基苯基中间体。本领域技术人员将认识到存在各种可 用于促进这种交叉偶合反应的条件。反应条件使用适当的溶剂， 例如二噁烷 / 水或 THF/ 甲
醇。反应在例如碳酸钠、 甲醇钠、 碳酸钾或乙酸钾的碱存在下完成。反应在钯催化剂， 例如 四 ( 三苯膦 ) 钯 (0) 存在下， 在惰性气氛下在约 70 至 120℃进行约 8 至 24 小时。
在流程 5 步骤 6 和 7 中， 式 (29) 的乙烯基硝基苯基中间体在标准氢化条件下， 在例 如四氢呋喃、 乙酸乙酯或异丙醇的适当溶剂中， 用 5 或 10％的碳上铂或 5 或 10％的碳上钯 还原为二氨基苯基中间体 ( 未示出 )。去除催化剂之后， 二氨基苯基中间体可以利用 N- 氰 基碳酰亚胺二苯酯在室温至 100℃下转化为式 (30) 的氰基胍。 使用例如异丙醇、 吡啶或 THF 的惰性溶剂， 有或没有例如碳酸氢钠的无机碱。 可以通过本领域技术人员常用的方法， 例如 层析或再结晶来净化最终产品。
在流程 5 步骤 8 中， 式 (30) 的氰基胍在酸性条件下水解为式 (31) 的脲。反应用 二噁烷 / 水或 TFA/ 水中的 4N 盐酸在室温至约 80℃下进行 4 至 72 小时。
本领域技术人员应理解式 (24) 化合物可以由与在此描述的那些方法相似的方法 或者通过使用本领域中确定的方法来容易地制备。例如， 2- 溴 -5- 氟苯酚或 2- 溴 -5- 氯酚 用 2- 碘或 2- 溴苯甲基溴烷基化， 得到式 (24) 的苯基醚。其中 R1 或 R2 ＝ F 的式 (24) 的化 合物， 所需苯甲基溴通过例如 1- 溴 -3- 氟苯加以锂化， 并与 N- 甲基 -N- 苯基甲酰胺反应形 成醛来获得。随后还原为苯甲醇， 并与例如三溴化磷的溴化剂反应， 得到 1- 溴 -3- 氟苯甲 基溴。
测定生物活性 ：
如在此使用的， “Kd” 表示配体 - 受体络合物的平衡解离常数 ； “Ki” 表示药物 - 受体 络合物的平衡解离常数， 并且是平衡时将与一半结合位点结合的药物浓度的指示 ； “Kd” 表 示拮抗剂 - 受体络合物的平衡解离常数 ； “IC50” 表示产生试剂可能的最大抑制反应的 50％ 的试剂浓度或者表示产生与受体结合的配体的 50％置换的试剂浓度 ； “EC50” 表示产生试 剂可能的最大反应的 50％的试剂浓度 ； 和 “ED50” 表示产生试剂可能的最大反应的 50％的 施用的治疗剂剂量。
类固醇激素核受体结合检测 ：
来自过度表现 (over expressing) 人类 MR( 矿皮质激素受体 )、 GR( 糖皮质激素受 体 )、 AR( 雄激素受体 ) 或 PR( 孕酮受体 ) 的人类胚肾 HEK293 细胞的细胞溶解产物用于受 体 - 配体竞争结合检测以测定 Ki 值。
简要地， 类固醇受体竞争结合检测在含有 20mM HEPES 缓冲液 (pH ＝ 7.6)， 0.2mM EDTA， 75mM NaCl， 1.5mM MgCl2， 20％甘油， 20mM 钼酸钠， 0.2mM DTT( 二硫苏糖醇 )， 20μg/mL 抑肽酶 (aprotinin) 和 20μg/mL 亮肽素 (leupeptin) 的缓冲液 ( 检测缓冲液 ) 中进行。 通 3 常， 类固醇受体结合检测包括放射性标记配体， 例如每个孔 0.25nM 用于 MR 结合的 [ H]- 醛 3 甾酮， 0.3nM 用于 GR 结合的 [ H]- 地塞米松， 0.36nM 用于 AR 结合的 [3H]- 甲基去甲雄二烯醇 酮 (methyltrienolone)， 和 0.29nM 用于 PR 结合的 [3H]- 甲基去甲雄二烯醇酮， 以及 20μg 293-MR 溶解产物， 20μg293-GR 溶解产物， 22μg 293-AR 溶解产物， 或 40μg 293-PR 溶解产 物。检测通常以 96- 孔格式 (well format) 进行。竞争测试化合物以约 0.01nM 至 10μM 的各种浓度范围添加。在 500nM 用于 MR 结合的醛甾酮， 500nM 用于 GR 结合的地塞米松， 或 500nM 用于 AR 和 PR 结合的甲基去甲雄二烯醇酮存在下测定非特异性结合。将结合反应物 (140μL) 在 4℃培养一夜， 然后向各反应物中添加 70μL 冷炭 - 葡聚糖缓冲液 ( 每 50mL 检 测缓冲液含有 0.75g 炭和 0.25g 葡聚糖 )。将培养盘在 4℃在轨道振荡器上混合 8 分钟。培养盘然后在在 4℃以 3,000rpm 离心 10 分钟。然后将 120μL 结合反应混合物的等分试样转 移至另一个 96 孔培养盘中并向各孔中添加 175μL 的 Wallac Optiphase Hisafe 3TM 闪烁 流体。将培养盘密封并在轨道振荡器上剧烈振荡。培养 2 小时之后， 以 Wallac Microbeta 计数器读取培养盘。
数据用来计算 IC50 估计值和 10μM 下的抑制百分比。通过饱和结合测定用于 MR 结合的 [3H]- 醛甾酮， 用于 GR 结合的 [3H]- 地塞米松， 用于 AR 结合的 [3H]- 甲基去甲 雄二烯醇酮， 或用于 PR 结合的 [3H]- 甲基去甲雄二烯醇酮的 Kd。化合物的 IC50 值使用 Cheng-Prusoff 公式转化为 Ki。
按照基本如上所述的规程， 实施例 1-50 的化合物在 MR 结合检测中显示 Ki ≤ 10nM。 优选， 本发明的化合物在 MR 结合检测中显示 Ki ≤ 5nM， 和更优选 Ki ≤ 1nM。特别地， 实施例 1、 8 和 23 的化合物在 MR 结合检测中显示 Ki 分别为约 0.79nM、 0.08nM 和 0.23nM( 以 n ＝ 2 的几何平均值报告的值 )， 因此证明本发明范围内的化合物是有效的人类 MR 配体。
类固醇核激素受体调节的功能检测 ：
醛甾酮经由其与矿皮质激素受体的相互作用而发挥其生理学作用。醛甾酮与 MR 细胞质结合之后， 配体受体络合物移位至细胞核， 在那里与 DNA 上的激素响应基元结合， 引发目标基因的表现。为了证明本发明化合物调节类固醇激素受体活性的能力 ( 即激发 (agonize)、 部分激发、 部分拮抗或拮抗 )， 进行生物检测， 从而检测用核受体蛋白质和激素 响应基元 - 指示基因构造瞬时转染的细胞中目标基因表现的功能调节。用于功能检测的溶 剂、 试剂和配体能够容易地从商业来源获得， 或可以由本领域普通技术人员制备。 A. 核激素受体面板筛检 (Panel Screen)
用类固醇激素受体和指示基因质体， 使用合适的转染试剂， 例如 FugeneTM 转染人 类胚肾 HEK293 细胞。简要地， 使用病毒 CMV( 巨细胞病毒 ) 促进剂， 用构成性表现人类雄激 素受体 (AR) 的质体， 将莹光素酶指示 cDNA 上游的含有 probasin ARE 和 TK( 胸苷激酶 ) 促 进剂的两个副本的指示质体转染进入 HEK293 细胞中。使用病毒 CMV 促进剂， 用构成性表现 人类糖皮质激素受体 (GR)、 人类矿皮质激素受体 (MR) 或人类孕酮受体 (PR) 的质体， 转染莹 光素酶指示 cDNA 上游的含有 GRE 和 TK 促进剂的两个副本的指示质体。细胞在 T150cm 烧 瓶中， 在具有 5％炭 - 剥离胎牛血清 (FBS) 的 DMEM 介质中转染。培养一夜之后， 使转染的细 胞胰蛋白酶化， 涂覆在 96 孔盘中的含有 5％炭 - 剥离 FBS 的 DMEM 介质中， 培养 4 小时， 然 后暴露于约 0.01nM 至 10μM 的各种浓度的测试化合物。在拮抗剂检测模式中， 将低浓度的 0.25nM 用于 GR 的地塞米松， 各相应受体的促效剂加入到介质 (0.08nM 用于 MR 的醛甾酮， 0.66nM 用于 AR 的甲基去甲雄二烯醇酮， 和 0.08nM 用于 PR 的普美孕酮 (promegestone) 中。 用测试化合物培养 24 小时之后， 使细胞溶解并使用标准技术测定萤光素酶活性。
将数据拟合为四参数拟合对数曲线， 以测定 EC50 值。测定相对于用以下参考促效 剂得到的最大刺激的功效百分比 ( 具有饱和最大响应的化合物 ) 或最大刺激百分比 ( 具有 不饱和最大响应的化合物 ) ： 30nM 用于 MR 检测的醛甾酮， 100nM 用于 AR 检测的甲基去甲雄 二烯醇酮， 30nM 用于 PR 检测的普美孕酮， 和 100nM 用于 GR 检测的地塞米松。使用拮抗剂测 试模式数据类似地测定 IC50 值。 在拮抗剂模式中， 通过在低浓度促效剂 (0.08nM 用于 MR 的 醛甾酮， 0.25nM 用于 GR 的地塞米松， 0.66nM 用于 AR 的甲基去甲雄二烯醇酮， 和 0.08nM 用 于 PR 的普美孕酮 ) 存在下， 比较测试化合物活性和在没有测试化合物的情况下相同低浓度
促效剂产生的反应来测定抑制百分比。
B.hMR 竞争性拮抗剂检测 ：
使用如上所述对于核激素受体面板筛检 (Panel Screen) 相同的转染试剂、 质体、 促进剂、 指示构成物、 缓冲液和方法， 用人类 MR 转染人类胚肾 HEK293 细胞。使转染的细胞 胰蛋白酶化， 放置在 96 孔盘中的含有 5％炭 - 剥离 FBS 的 DMEM 介质中， 培养 4 小时然后暴 露于各种浓度 (10 次稀释 ) 的醛甾酮 ( 约 0.001nM 至 0.03μM)。在没有和存在固定浓度 的测试化合物的情况下测定醛甾酮促效 hMR 的能力， 并通过使用标准技术测量萤光素酶活 性来加以监控。然后可以使用以下公式， 使用 log( 剂量比 -1) 对拮抗剂浓度的对数绘图的 Schild 分析测定测试化合物 Kb ： Log(DR-1) ＝ Log[ 拮抗剂 ]-Log Kb， 其中剂量比 (DR) 表 示存在测试化合物的情况下的醛甾酮 EC50 对没有测试化合物的情况下的醛甾酮 EC50 的比 率。
按照基本如上所述的规程， 本发明的示例化合物在 MR 竞争性拮抗剂分析中显示 Kb ≤ 200nM。优选， 本发明的化合物在 MR 竞争性拮抗剂分析中显示 Kb ≤ 50nM， 和更优选 Kb ≤ 10nM。
特别地， 实施例 1、 8 和 23 的化合物在 MR 竞争性拮抗剂分析中显示 Kb 分别为约 1.2nM、 1.1nM 和 2.5nM( 以 n ＝ 2 的几何平均值报告的值 )， 因此证明本发明范围内的化合 物是有效的人类 MR 拮抗剂。
醛甾酮介导型肾病的体内模型
将雄性单肾切除 Sprague Dawley 鼠 (240-280g) 在随意取用舍内水和啮齿动物 5001 饵料的情况下单独舍饲一周。 适应环境之后， 收集基准 24 小时尿样并分析总尿蛋白和 肌酸酐。借助于体重和基准尿蛋白将动物随机分入研究组。由尾部 - 钳 (tail-clip) 采集 基准血浆， 并分析血液尿素氮 (BUN)、 肌酸酐和电解质。 采集基准试样之后， 在整个研究持续 时间期间， 除对照组之外的所有鼠维持含有 6％盐的饵料和含有 0.3％ KCl 的饮用水。在整 个研究持续时间期间， 对照动物维持 5001 饵料和舍内水并且不接受醛甾酮。在异氟烷麻醉 下， 将 Alza 微型泵植入非对照动物 ( 例如测试化合物组和仅赋形剂组 ) 中， 经皮下 (s.c.) 以 0.75μg/h 输送 2.5μl/h×28 天的 0.01％ DMSO 中的 d- 醛甾酮。然后从醛甾酮植入次 日开始， 通过每天一次口服填喂法 (10mL/kg)， 给予包含 1％羧基甲基纤维素 (CMC)/0.25％ 聚山梨酸酯 80 的赋形剂中的测试化合物或仅赋形剂。在化合物或仅赋形剂给药 2 和 4 周 之后， 收集重复尿样并分析总尿蛋白和肌酸酐。研究终止时， 在 8 个时间点 (0.5、 1、 2、 3、 6、 8、 12 和 24 小时 ) 获得药物动力学试样。另外， 去除心脏和肾脏， 并在 10％缓冲福尔马林中 固定， 用于苏木精和曙红 (H&E) 和 Masson 氏三色染色， 以检测心脏和肾脏组织中的结构损 伤。研究终止时通过心脏穿刺采集血浆， 用于血浆 BUN、 肌酸酐和电解质的额外分析。
按照基本如上所述的规程， 在以 10mg/kg/ 天 ×14 天给药时， 实施例 1、 8 和 23 的 化合物与赋形剂治疗的动物相比， 使尿蛋白排泄分别降低约 49、 83 和 64mg/ 天 ( 对于各化 合物， 该值表示 n ＝ 8 的平均值 )， 由此证明本发明范围内的化合物具有有效的体内肾脏保 护活性。
为了证明化合物具有降低的产生高钾血症的发生率或可能性， 可以使用以下模 型。
电解质调节的体内检测对雄性 Sprague Dawley 鼠 (240-280g) 进行肾上腺切除， 然后在手术之后 6 天内 维持 5001 啮齿动物食物和 1％ NaCl 饮用溶液。然后将动物禁食一夜， 用随意舍内水替代 1％盐水饮用水。研究当天早晨， 基于禁食体重随机治疗禁食动物。通过口服填喂法向对照 动物 ( 例如未接受醛甾酮或测试化合物的那些 ) 提供 10mL/kg 包含 0.5％ CMC/0.25％聚山 梨酸酯 80/2.7％ NaCl 的测试化合物赋形剂， 以及通过皮下注射提供 1mL/kg 醛甾酮赋形剂 (0.01％ DMSO/ 水 )。 通过口服填喂法向赋形剂动物提供相同的测试化合物赋形剂和经皮下 提供醛甾酮 3μg/kg。将测试材料悬浮于羧基甲基纤维素 /NaCl 赋形剂中。测试化合物治 疗组经皮下接受悬浮在羧基甲基纤维素 /NaCl 赋形剂中的测试材料和醛甾酮 3μg/kg。给 药之后立即将动物置于可随意取用舍内水的代谢支架上。剂量给药之后 5 小时收集尿样并 检测电解质排泄。数据以 log Na/K 排泄比的形式提供。化合物可以在各种剂量下进行测 试， 以测定化合物是否引起尿 Na/K 比增加 ( 血清钾浓度增加的指数 )。
不用进一步详细描述， 据信本领域技术人员可以使用上述说明最大程度地实施本 发明。提供以下制备例和实施例来更进一步详细说明本发明并且表示式 (I) 的化合物的典 型合成。但是， 它们并不意图以任何方式限制本发明。试剂和起始原料对于本领域普通技 术人员来说是容易获得的或可以容易合成的。 本领域技术人员将迅速认识到可以根据实施 例中所述方法进行适当改变。本发明化合物的名称通常由 ChemDraw 10.0 版提供。
制备例 1
1- 溴 -4- 氟 -2-(2- 碘代苯甲氧基 )- 苯
将 2- 碘苯甲基溴 (0.29mol， 90g)， 2- 溴 -5- 氟苯酚 (0.29mol， 57.9g) 和碳酸钾 (0.46mol， 63g) 在 N， N- 二甲基甲酰胺 (750mL) 中的混合物在室温下搅拌 16 小时。加水 (1L)， 将所得混合物搅拌一小时， 滤掉固体， 用水冲洗并在真空烘箱 (20mm Hg/60℃ ) 中干 1 燥， 得到标题化合物 (121g， ＞ 100 ％ )。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ5.11(s， 2H)， 6.81(t， 1H)， 7.13(t， 1H)， 7.19(dd， 1H)， 7.46(t， 1H)， 7.59(d， 1H)， 7.62(t， 1H)， 7.93(d， 1H)。
制备例 2
3-[2-(2- 溴 -5- 氟 - 苯氧基甲基 )- 苯基 ]- 丙烯酸乙酯
在 55-60℃向 1- 溴 -4- 氟 -2-(2- 碘代 - 苯甲氧基 )- 苯 (0.29mol， 117.4g)， 乙酸 钠 (0.44mol， 36.1g， 1.5 当量 )， 溴化四 - 正丁基铵 (0.29mol， 90.3g)， 乙酸钯 (II)(8mmol， 1.8g， 3mol ％ )， 和 N- 甲 基 吡 咯 烷 酮 (900mL) 的 混 合 物 中 滴 加 丙 烯 酸 乙 酯 (0.32mol， 34.3mL) 在 N- 甲基吡咯烷酮 (200mL) 中的溶液。将反应混合物冷却到室温并用水 (2L) 和 甲基叔丁基醚 (2L) 处理。经过硅藻土， 添加乙酸乙酯 (1L)， 分离各层， 并用水 (2L) 洗涤。 用无水硫酸钠干燥有机部分， 过滤和浓缩。将所得固体悬浮于己烷 (1L) 中， 冷冻 2 小时， 过 滤并用冷己烷 (500mL) 洗涤。 在真空烘箱 (50℃ /20mm Hg) 中干燥， 得到浅黄色固体形式的 + 标题化合物 (104.4g， 95％ )。LC-MS m/z381.0[M+H] 。
制备例 3
(E)-(3- 氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基 )- 乙酸乙酯
将 3-[2-(2- 溴 -5- 氟 - 苯氧基甲基 )- 苯基 ]- 丙烯酸乙酯 (0.25mol， 94g)， 乙酸钠 (0.37mol， 30g， 1.5 当量 )， 溴化四 - 正丁基铵 (0.25mol， 81g)， 和乙酸钯 (II)(7mmol， 1.7g， 3mol％ ) 在 N- 甲基吡咯烷酮 (850mL) 中的混合物在 100-110℃加热 6 小时。冷却至室温， 用水稀释 (1L)， 经由硅藻土过滤， 并用乙酸乙酯 (2L) 洗涤。 将滤出液转移至分液漏斗， 加水(500mL) 并分离各层。用水 (2×1.5L) 洗涤有机层， 用无水硫酸钠干燥， 经过二氧化硅垫过 滤， 用乙酸乙酯 (1.5L) 洗涤并浓缩至干燥。向残余固体中添加己烷 (1L)， 冷冻 2 小时， 过 滤， 用己烷 (500mL) 洗涤， 并在 50℃ /20mm Hg 干燥， 得到标题化合物 (64.3g， 87％ )。LC-MS + m/z 299.0[M+H] 。
制备例 4
(E)-11- 溴亚甲基 -3- 氟 -6， 11- 二氢 - 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷
向 (3- 氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基 )- 乙酸乙酯 (0.23mol， 69.5g) 在异丙醇 (725mL) 中的悬浮液添加氢氧化锂 (0.53mol， 12.0g) 在水 (125mL) 中的溶液， 并 加热到 70℃持续 4 小时。使混合物冷却至 40℃， 然后用冰醋酸 (0.44mol， 25mL) 处理。搅 拌 15 分钟之后， 添加 N- 溴琥珀酰亚胺 (0.25mol， 44g)。接着鼓泡， 温度升高到 45℃， 几分 钟之后形成固体。在 40-45 ℃搅拌该混合物一小时并冷却至室温。添加水 (150mL) 中的 亚硫酸氢钠 (4.5g)， 饱和碳酸氢钠水溶液 (150mL) 和水 (450mL)。过滤所得悬浮液并用冷 1 ∶ 1 异丙醇 / 水 (300mL) 冲洗。 在 60℃ /20mm Hg 干燥固体一夜， 得到标题化合物 (65.8g， 1 93％ )。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ4.9-5.4(br d， 2H)， 6.63(dd， 1H)， 6.77(dt， 1H)， 7.13(s， 1H)， 7.32-7.46(m， 4H)， 7.52(dd， 1H)。
制备例 5
(E)-2-((3- 氟二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11-(6H)- 亚基 ) 甲基 )-4， 4， 5， 5- 四甲 基 -1， 3， 2- 二氧杂硼戊烷
向 (E)-11-( 溴亚甲基 )-3- 氟 -6， 11- 二氢二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 (49mmol， 15g) 和双 ( 频哪醇 ) 二硼 (64mmol， 16g) 在 1， 4- 二噁烷 (250mL) 中的搅拌混合物中添加乙 酸钾 (150mmol， 15g)。用氮气冲洗混合物， 添加二氯 [1， 1′ - 双 ( 二苯基膦基 )- 二茂铁 ] 钯 (II) 二氯甲烷加成物 (2.46mmol， 1.80g)， 并在 65 ℃加热一夜。冷却至室温， 经由硅藻 土过滤， 用乙酸乙酯洗涤并在真空中浓缩滤出液。添加甲醇 (200mL) 并在无真空下在旋转 蒸发器上旋转该混合物一小时， 引起棕色固体形成。经过过滤收集深褐色晶体并在真空下 干燥一夜， 得到标题化合物 (7.28g， 42％ )。浓缩滤出液并通过柱层析， 用己烷中的 0％至 16％乙酸乙酯淋洗纯化， 得到黄色固体形式的标题化合物 (3.46g， 20％ )。反应的总产量为 1 10.7g(62 ％ )。 HNMR(300MHz， CDCl3)δ7.36(dd， J ＝ 8.8， 6.8Hz， 1H)， 7.32-7.27(m， 4H)， 6.64-6.57(m， 1H)， 6.48(dd， J ＝ 10.3， 2.6Hz， 1H)， 5.98(s， 1H)， 5.20(br s， 1H)， 1.15(s， 12H)。
制备例 6
1- 溴 -3- 氟苯甲醛
在 0℃向 5L 烧瓶中的二异丙胺 (2.27mol， 320mL) 在无水四氢呋喃 (800mL) 中的
溶液经 1.5 小时滴加己烷中的 1.6M 丁基锂 (1.16L， 1.86mol)。在 0℃搅拌得到的黄色溶液 30 分钟。在一个单独的 12L 烧瓶中将 1- 溴 -3- 氟苯 (203mL， 1.86mol) 溶于无水四氢呋喃 (650mL) 并冷却至 -78℃。经由套管将预先形成的 LDA 溶液转移至加料漏斗中， 经 2 小时滴 加至 1- 溴 -3- 氟苯溶液中， 使得温度不升到 -70℃之上。在 -78℃搅拌所得料浆 30 分钟。 在 -78℃经一小时滴加 N- 甲基 -N- 苯基甲酰胺 (230mL， 1.86mol， 1.00 当量 ) 在无水四氢 呋喃 (1.15L) 中的溶液， 同时保持温度低于 -70℃。搅拌冷反应物 2 小时， 同时一夜使其缓 慢升高到室温。用甲基叔丁基醚 (3L) 稀释反应物， 用 1M 盐酸 (4L) 终止并有力地搅拌 3 小 时。分离各层和用甲基叔丁基醚 (1L) 萃取水层。用 1M 盐酸 (2×1L)、 水 (1L)、 盐水 (1L) 洗 涤合并的有机相， 用硫酸镁干燥， 过滤并浓缩至橙色油， 其缓慢固化得到标题化合物 (394g， 1 105％ )。 H NMR(CDCl3)δ10.37(s， 1H)， 7.50(d， 1H)， 7.44(m， 1H)， 7.17(t， 1H)。
制备例 7
1- 溴 -3- 氟苯甲醇
在 0℃经 30 分钟向甲醇 (14L) 中的 1- 溴 -3- 氟苯甲醛 (1.60kg， 7.91mol) 逐份添 加硼氢化钠 (284g， 7.93mol) 以控制放热和气体逸出。15 分钟之后， 用水 (500mL) 终止， 浓 缩得到黄色油。将油溶于乙酸乙酯 (6L) 中并用水 (3L) 洗涤。用乙酸乙酯 (1L) 萃取水层。 用盐水 (2L) 洗涤有机相， 用硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得到橙色油形式的标题化合物 (1614g， 1 100％ )。 H NMR(CDCl3)δ7.40(d， 1H)， 7.18(m， 1H)， 7.07(t， 1H)， 4.86(s， 2H)。
制备例 8
1- 溴 -3- 氟苯甲基溴
在 0℃向氯仿 (14L) 中的 1- 溴 -3- 氟苯甲醇 (1.61kg， 7.85mol) 溶液整份添加吡啶 (770mL， 9.52mol)( 轻微放热 ) 并在 0℃搅拌 5 分钟。滴加三溴化磷 (900mL， 9.49)， 同时保 持内部温度低于 20℃， 搅拌所得溶液一夜同时加热至室温。 冷却反应物至 0℃， 用冰水 (2L) 缓慢终止。转移至 50L 烧瓶中， 分离各层， 然后用氯仿 (1L) 萃取水层。用 5％硫酸 (2L)、 饱 和碳酸氢钠水溶液 (2L)、 盐水 (2L) 洗涤合并的有机相， 用硫酸镁干燥， 过滤并浓缩， 得到黄 1 色油形式的标题化合物 (1753g， 83％ )。 H NMR(CDCl3)δ7.43(d， 1H)， 7.21(m， 1H)， 7.09(t， 1H)， 4.68(s， 2H)。
制备例 9
1- 溴 -2-(2- 溴 -6- 氟 - 苯甲氧基 )-4- 氟 - 苯
在 0 ℃向 1- 溴 -3- 氟苯甲基溴 (1.75kg， 6.52mol) 和 2- 溴 -5- 氟苯酚 (730mL， 16.56mol， 1.01 当量 ) 在 N， N- 二甲基甲酰胺 (14L) 中的溶液整份添加碳酸钾 (1.36kg， 9.80mol)， 搅拌所得冷料浆一小时， 然后在室温下搅拌一夜。将反应混合物转移至 50 升 烧瓶中， 经 30 分钟滴加水 (14L)， 周期性地加冰以控制结晶放热。在室温下搅拌一小时， 通过过滤收集灰白色固体， 用水洗涤， 在 50 ℃干燥一夜得到标题化合物 (2.22kg， 90 ％ )。 1 H NMR(CDCl3)δ7.51(m， 2H)， 7.30(m， 1H)， 7.14(t， 1H)， 6.89(dd， 1H)， 6.67(m， 1H)， 5.26(d， 2H)。
制备例 10
(E)-(3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基 )- 乙酸乙酯
通过抽空和用氮气回充五次将 1- 溴 -2-(2- 溴 -6- 氟 - 苯甲氧基 )-4- 氟 - 苯 (886mmol， 335g)， 丙烯酸乙酯 (931mmol， 101mL， 1.05 当量 )， Pd(OAc)2(22.2mmol， 4.97g)， 溴化四丁铵 (886mmol， 286g) 和乙酸钠 (4.40mol， 363.5g) 在 N- 甲基吡咯烷酮 (3.3L) 中的混 合物脱气。将混合物加热至 120℃持续 2 小时。冷却至 35℃并经 40 分钟加水 (5.5L)。过 滤沉淀物， 用水 (2×500mL) 冲洗并空气干燥 30 分钟。在异丙醇 (1L) 中再料浆化 2 小时， 在冰上冷却一小时。 通过过滤收集暗灰色固体， 用冷异丙醇 (5×100mL) 冲洗并在 50℃在真 空中干燥， 得到标题化合物 (191g， 68％ )。
制备例 11
(E)-11- 溴亚甲基 -3， 7- 二氟 -6， 11- 二氢 - 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷
将甲醇 (1.9L) 中的 (E)-(3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基 )- 乙 酸乙酯 (601mmol， 190g) 和 5N 氢氧化钠 (1.20mol， 240mL) 的搅拌料浆加热至 50 ℃持续 2 小时。在真空中去除甲醇， 将所得黑色淤渣在水 (3L) 中再料浆化。经 45 分钟添加 5N 盐酸 (250mL)， 搅拌 2.5 小时， 过滤并用水 (4×200mL) 冲洗残余物。 在真空中在 60℃干燥灰色固 体一夜， 在 80℃干燥 6 小时。将固体 ( 仍然潮湿， 含有大致 95g 水 ) 和乙酸锂 (60.1mmol， 4g， 0.1 当量 ) 溶于乙腈 (1.7L) 中并搅拌 15 分钟。整份添加 N- 溴琥珀酰亚胺 (661mmol， 118g)， 搅拌 2.5 小时。添加 0.25M 硫代硫酸钠 (400mL)， 接着添加饱和碳酸氢钠水溶液 (400mL) 和水 (900mL)。在室温下搅拌混合物一小时， 然后在冰浴中搅拌 2 小时。过滤该混 合物并用冷乙腈 (300mL) 冲洗。在 50℃在真空中干燥一夜， 得到浅米色固体形式的标题化 1 合物 (173.3g， 89％ )。 H NMR(DMSO-d6)δ5.25(s， 2H)， 6.67(dd， 1H)， 6.81(dt， 1H)， 7.20(s， 1H)， 7.22(d， 1H)， 7.28(t， 1H)， 7.36(dd， 1H)， 7.48(m， 1H)。
制备例 12
(E)-2-((3， 7- 二氟二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11-(6H)- 亚基 ) 甲基 )-4， 4， 5， 5- 四 甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼戊烷
向 (E)-11-( 溴 亚 甲 基 )-3， 7- 二 氟 -6， 11- 二 氢 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 (46.4mmol， 15.0g) 和 双 ( 频 哪 醇 ) 二 硼 (50.3mmol， 15.3g) 在 1， 4- 二 噁 烷 (150mL) 中 的 混 合 物 中 添 加 乙 酸 钾 (74.3mmol， 7.29g)， 三 环 己 基 膦 (6.03mmol， 1.69g) 和 Pd2(dba)3(2.32mmol， 2.13g)。通过用氮气鼓泡来冲洗， 然后伴随在 65 ℃下加热， 搅拌一 夜。在冷却到室温之后， 经由硅藻土垫过滤混合物， 用乙酸乙酯洗涤该垫， 以及去除溶剂 得到棕色油。用甲醇 (180mL) 稀释该油， 在无真空下在旋转蒸发器上将所得混合物旋转 3 小时， 引起白色沉淀物形成。通过真空过滤收集沉淀物， 得到白色固体形式的标题化合物 1 (10.8g， 63％ )。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.34(dd， J ＝ 8.8， 6.7Hz， 1H)， 7.24-7.18(m， 1H)， 7.08-7.01(m， 2H)， 6.65-6.59(m， 1H)， 6.50(dd， J ＝ 10.3， 2.6Hz， 1H)， 5.99(s， 1H)， 5.31(d， J ＝ 0.9Hz， 2H)， 1.16(s， 12H)。
制备例 13
(E)-11- 溴亚甲基 -3， 8- 二氟 -6， 11- 二氢 - 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷
基本如制备例 9、 10 和 11 所述制备标题化合物， 用 1- 溴 -2- 溴甲基 -4- 氟 - 苯和 2- 溴 -5- 氟 - 苯酚开始。
制备例 14
(E)-2-((3， 8- 二氟二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11-(6H)- 亚基 ) 甲基 )-4， 4， 5， 5- 四 甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼戊烷
向 (E)-11-( 溴 亚 甲 基 )-3， 8- 二 氟 -6， 11- 二 氢 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷(90.0mmol， 29.0g) 和双 ( 频哪醇 ) 二硼 (117mmol， 29.5g) 在 1， 4- 二噁烷 (295mL) 中的混合 物中添加乙酸钾 (144mmol， 14.1g)， 三环己基膦 (11.7mmol， 3.28g) 和 Pd2(dba)3(4.14mmol， 3.80g)。 通过用氮气鼓泡通过混合物来冲洗， 然后在 65℃下加热一夜。 在冷却到室温之后， 经硅藻土垫过滤， 用乙酸乙酯洗涤。在真空中浓缩滤出液， 得到棕色油。用甲醇 (180mL) 稀 释该油， 在无真空下在旋转蒸发器上将所得混合物旋转 1.5 小时， 引起棕色沉淀物形成。通 过真空过滤收集沉淀物， 得到棕色固体形式的标题化合物 (24.2g， 73％ )。1H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.35(dd， J ＝ 8.8， 6.7Hz， 1H)， 7.29-7.24(m， 1H)， 7.05-6.93(m， 2H)， 6.65-6.59(m， 1H)， 6.49(dd， J ＝ 10.2， 2.6Hz， 1H)， 5.99(s， 1H)， 5.15(br s， 2H)， 1.16(s， 12H)。
制备例 15
(R)- 甲烷磺酸 2- 叔丁氧基羰基氨基 - 丙酯
在 0℃在氮气下向 (R)-(+)-2- 叔 - 丁氧基 - 羰基胺基 -1- 丙醇 (0.085mol， 15.0g) 和三乙胺 (0.12mol， 17.3g， 2.0 当量 ) 在二氯甲烷 (150mL) 中的溶液中滴加甲烷磺酰氯 (0.128mol， 14.7g， 1.5 当量 )。完成添加时， 将反应混合物加热至室温并搅拌 2 小时。用 二氯甲烷稀释反应混合物， 用 0.1N 盐酸和饱和碳酸氢钠溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥有机 1 层， 过滤和在真空下浓缩， 得到白色固体形式的标题化合物 (20.8g， 96％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.24(d， 3H)， 1.43(s， 9H)， 3.03(s， 3H)， 3.97(brs， 1H)， 4.14(dd， 1H)， 4.21(br s， 1H)， 4.64(br s， 1H， Boc-NH)。
制备例 16
(R)-(1- 甲基 -2- 吗啉 -4- 基乙基 )- 氨基甲酸叔丁酯
将 (R)- 甲烷磺酸 2- 叔丁氧基羰基氨基 - 丙酯 (0.083mol， 20g) 和吗啉 (0.83mol， 72.2g) 在乙腈 (210mL) 中的混合物加热至 65℃持续 16 小时。浓缩反应混合物， 用水稀释 残余物， 用二氯甲烷萃取， 合并有机层并用水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和在真 1 空下浓缩， 得到黄色稠油形式的标题化合物 (12g， 62％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.13(d， 3H)， 1.43(s， 9H)， 2.21(dd， 1H)， 2.26-2.32(m， 1H)， 2.35-2.39(m， 2H)， 2.48-2.55(m， 2H)， 3.63-3.70(m， 5H)， 4.68(br s， 1H， -NH)。
制备例 17
(R)-1- 甲基 -2- 吗啉 -4- 基 - 盐酸乙胺
在 0℃向 (R)-(1- 甲基 -2- 吗啉 -4- 基 - 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 (0.05mol， 12g) 在干燥二氯甲烷 (75mL) 中的溶液添加二噁烷 (120mL) 中的 1.6M 氯化氢。将反应混合物 加热至室温并搅拌 2 小时。过滤沉淀物并在真空下干燥， 得到白色固体形式的标题化合物 1 (9.2g， 86 ％ )。 H NMR(400MHz， OMSO-d6)δ1.29(d， 3H)， 3.10(br s， 2H)， 3.38(br s， 4H)， 3.79(br s， 5H)。
制备例 18
(R)-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 )-(1- 甲基 -2- 吗啉 -4- 基乙基 )- 胺
将 (R)-1- 甲 基 -2- 吗 啉 -4- 基 - 盐 酸 乙 胺 (0.04mol， 8.7g)， 5- 溴 -2- 氟 硝 基 苯 (0.048mol， 10.5g)， 三乙胺 (0.20mol， 20.2g) 和二甲基氨基吡啶 (0.0004mol， 0.048g) 在乙酸乙酯 (220mL) 中的混合物回流 16 小时。将反应混合物冷却到室温， 用乙酸乙酯稀 释， 和用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩。使用己烷中的 10 ％乙 酸乙酯作为洗脱剂， 在硅胶柱上纯化， 得到橙色固体形式的标题化合物 (12.8g， 95 ％ )。28101903377 A CN 1019033781说明书25/65 页H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.29(d， 3H)， 2.47-2.51(m， 5H)， 2.53-2.58(m， 1H)， 3.64-3.69(m， 4H)， 3.72-3.78(m， 1H)， 6.78(d， 1H)， 7.46(dd， 1H)， 8.30(d， 1H)， 8.33(d， 1H)。
通过基本按照制备例 15、 16、 17 和 18 中所述方法， 分别从 (S)-(-)-2- 叔丁氧 基 - 羰基胺基 -1- 丙醇或叔丁基 -N-(2- 羟乙基 ) 氨基甲酸酯开始制备以下表格中的中间 体。
(S)-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 )-(1- 甲 1930制备例 20
(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 )-(4- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 胺
将 1- 氨基 -4- 甲基哌嗪 (0.217mol， 25.0g)， 5- 溴 -2- 氟硝基苯 (0.239mol， 52.6g) 和三乙胺 (0.46mol， 46g) 在乙酸乙酯 (900mL) 中的混合物加热回流 16 小时。 将反应混合物
制备例基 -2- 吗啉 -4- 基乙基 )- 胺化学名称H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.29(d， 3H)， 2.46-2.58(m， 6H)， 3.63-3.69(m， 4 H)， 3.71-3.79(m， 1H)， 6.77(d， 1H)， 7.45 (dd， 1H)， 8.29(d， 1H)， 8.33(d， 1H).物理数据冷却到室温， 用乙酸乙酯稀释， 和用水和盐水洗涤。 用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩。 使用二氯甲烷中的 5％甲醇作为洗脱剂， 在硅胶柱上纯化， 得到标题化合物 (43.2g， 63％ )。 + ES-MS m/z 315[M+1] 。
制备例 21
3-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 氮杂环丁烷 -1- 甲酸叔丁酯
将 5- 溴 -2- 氟硝基苯 (28.8mmol， 3.55mL)， 3- 氨基 - 氮杂环丁烷 -1- 甲酸叔丁酯 (28.8mmol， 4.96g) 和三乙胺 (35.9mmol， 5.00mL) 溶于乙酸乙酯 (100mL) 中， 在氮气下回流 48 小时。冷却到室温。用 0.5M 盐酸洗涤两次， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 在真空中浓缩， 得 79 81 + 到亮橙色固体 (11.04g， ＞ 100％ )。LC-MS m/z( Br/ Br)394.0/396.0[M+H] 。
制备例 22
氮杂环丁烷 -3- 基 -(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 )- 盐酸胺
在室温下在氮气下搅拌 3-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 氮杂环丁烷 -1- 甲酸叔丁 酯 (29.66mmol， 11.04g) 在二噁烷 (40mL) 中的 4.0M 氯化氢中的溶液一夜。 固体自溶液中析 出。用醚 (200mL) 稀释， 滤掉固体， 用充足的醚冲洗并干燥 (8.54g， 93％ )。1H NMR(400MHz， CD3OD) ： 4.12(dd， 2H)， 4.45(dd， 2H)， 4.72(m， 1H)， 6.76(d， 1H)， 7.62(dd， 1H)， 8.30(d， 1H)。 79 81 + LC-MS m/z( Br/ Br)272.0/274.0[M+H] 。
制备例 23
(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 )-(1- 甲基 - 氮杂环丁烷 -3- 基 )- 胺
在 0℃向氮杂环丁烷 -3- 基 -(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 )- 盐酸胺 (27.7mmol， 8.54g) 在乙腈 (100mL) 和 37％甲醛水溶液 (83.0mmol， 6.28mL， 3.00 当量 ) 中的混合物中缓慢添加 三乙酰氧基硼氢化钠 (88.6mmol， 18.8g)。 在室温下在氮气下搅拌一夜。 在减压下去除挥发 物。 用乙酸乙酯稀释， 用 10％碳酸氢钠水溶液洗涤两次， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并在减压 下浓缩， 得到 8.5g 橙色固体。用二氯甲烷中的 5％甲醇作为洗脱剂淋洗， 在 120g 二氧化硅 79 81 柱上纯化， 得到标题化合物 (5.92g， 75％ )。LC-MS m/z( Br/ Br)286.0/288.0[M+H]+。
制备例 24
(2S， 4R)-4- 羟基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯
在 0℃在氮气气氛下向 (2S， 4R)-4- 羟基 - 吡咯烷 -2- 甲酸 (0.70mol， 93.0g) 在干 燥甲醇 (2L) 中的溶液中滴加亚硫酰氯 (1.07mol， 128.2g)。 完成添加时， 将反应混合物加热 至室温并搅拌 6 小时。在减压下浓缩反应混合物， 得到相应的盐酸甲酯。在 0℃向盐酸甲酯 在干燥二氯甲烷 (2L) 中的溶液中添加三乙胺 (1.56mol， 157.5g) 并搅拌 30 分钟。然后连 续添加 N， N- 二甲基氨基吡啶 (0.10mol， 13g) 和重碳酸二叔丁酯 (0.85mol， 185.7g)。将反 应混合物加热至室温并搅拌 18 小时。用水终止反应混合物， 分离有机层， 用水和饱和碳酸 氢钠溶液洗涤。 用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和在减压下浓缩， 得到粘性油形式的标题化 + 合物 (160g， 91％ )。ES-MSm/z 246.1[M+1] 。
制备例 25
(2R， 4R)-4- 羟基 - 吡咯烷 -2- 甲酸盐酸盐
在 50℃向乙酸酐 (408g) 和乙酸 (1.2L) 的混合物整份添加反式 -4- 羟基 -L- 脯 氨酸 (0.36mol， 94g)。在 90℃加热反应混合物 5.5 小时， 然后浓缩。将残余物溶于 2N 盐酸 中并回流 3 小时。将反应混合物冷却到室温， 经由硅藻土过滤， 并在真空下浓缩直到形成白色针状体。过滤该晶体， 用醚洗涤， 在真空下干燥得到标题化合物 (90.0g， 75％ )。[α] 20 1 D +10.0(c ＝ 1.0， 甲醇中 )。 H NMR(400MHz， D2O)， δ2.34-2.39(m， 1H)， 2.45-2.53(m， 1H)， 3.38(dd， 1H)， 3.45(d， 1H)， 4.50(dd， 1H)， 4.58(br s， 1H)。
制备例 26
(2R， 4R)-4- 羟基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯
在 0℃在氮气气氛下向 (2R， 4R)-4- 羟基 - 吡咯烷 -2- 甲酸盐酸盐 (1.19mol， 200g) 在干燥甲醇 (2L) 中的溶液滴加亚硫酰氯 (1.81mol， 213.8g， 1.5 当量 )。完成添加时， 将反 应混合物加热至室温并搅拌 6 小时。在减压下浓缩反应混合物， 得到相应的盐酸甲酯。在 0℃向盐酸甲酯在干燥二氯甲烷 (2L) 中的溶液中添加三乙胺 (265.9g， 2.63mol) 并搅拌 30 分钟。 然后连续添加 N， N- 二甲基氨基吡啶 (0.18mol， 21.9g) 和重碳酸二叔丁酯 (1.43mol， 313.5g)。将反应混合物加热至室温并搅拌 18 小时。用水终止反应混合物， 分离有机层， 用 水和 NaHCO3 溶液洗涤。 用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和在真空下浓缩， 得到稠油形式的标 1 题化合物 (260g， 88％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.43(s， 9H)， 1.46(s， 9H)， 2.05-2.10(m， 2H)， 2.26-2.35(m， 2H)， 3.48-3.56(m， 2H)， 3.58-3.61(m， 1H)， 3.64-3.70(m， 2H)， 3.77(s， 3H)， 3.79(s， 3H)， 4.27-4.29(m， 1H)， 4.34-4.38(m， 2H)。 制备例 27
(2S， 4R)-4- 甲烷磺酰氧基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯
在 0℃在氮气气氛下向 (2S， 4R)-4- 羟基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯 (0.65mol， 160g) 在吡啶 (600mL) 中的溶液中滴加甲烷磺酰氯 (1.56mol， 179g)。完成添加 时， 将反应混合物加热至室温并搅拌 2 小时。用二氯甲烷稀释反应混合物， 用 0.1N 盐酸和 饱和碳酸氢钠溶液洗涤。 用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和在真空下浓缩， 得到稠油形式的 + + 标题化合物 (185g， 91％ )。ES-MS m/z 324.1[M+1] ， 224.0[M-BoC] 。
制备例 28
(2R， 4R)-4- 甲烷磺酰氧基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯
基本如制备例 27 中所述由 (2R， 4R)-4- 羟基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲 + 酯制备标题化合物。ES-MS m/z 324.1[M+1] 。
制备例 29
(2S， 4S)-4- 溴 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯
在 0 ℃向 (2S， 4R)-4- 羟基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯 (0.58mol， 292g) 在干燥二氯甲烷 (1.44L) 中的溶液中分批添加三苯基膦 144g) 和 CBr4(0.88mol， (0.88mol， 231g)。完成添加时， 将反应混合物加热至室温并搅拌 4 小时。添加乙醇 (1.44L) 并另外搅拌 2 小时。向反应混合物添加二乙醚 (1.44L)， 过滤沉淀的三苯基氧膦， 并在减压 下浓缩滤出液。使用己烷中的 5％乙酸乙酯作为洗脱剂， 由柱层析纯化， 得到稠油形式的标 + 题化合物 (155g， 85％ )。ES-MS m/z 308[M+1] 。
制备例 30
(2R， 4S)-4- 溴 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯
基本如制备例 29 中所述由 (2R， 4R)-4- 羟基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 1 2- 甲酯制备标题化合物。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.45-1.47(s， 9H)， 2.38-2.45(m， 1H)， 2.54-2.59(m， 1H)， 3.72-3.74(s， 3H)， 3.84-3.87(m， 1H)， 3.92-3.94(m， 1H)， 4.44-4.54(m，
2H)。 制备例 31
(2S， 4S)-4- 叠氮基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯
将 (2S， 4R)-4- 甲烷磺酰氧基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯 (0.60mol， 185g) 和叠氮化钠 (1.20mol， 78g) 在 N， N- 二甲基甲酰胺 (1L) 中的混合物加热至 80℃持续 16 小时。用水稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取。用 0.5N 盐酸、 饱和碳酸氢钠溶液和盐水 洗涤合并的有机层。 用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和在真空下浓缩， 得到黄色稠油形式的 + + 标题化合物 (140g， 88％ )。ES-MS m/z 271.2[M+1] ， 171.0[M-Boc] 。
基本按照如制备例 31 中所述， 从适当的溴或甲磺酰基 - 吡咯烷开始制备以下表格 中的中间体。
制备例 32*化学名称 (2S， 4R)-4- 叠氮基 - 吡咯烷 -1， 2二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯 (2R， 4R)-4- 叠氮基 - 吡咯烷 -1， 2二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯物理数据33H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.401.41(s， 9H)， 2.09-2.13(m， 1H)， 2.40-2.44(m， 1H)， 3.37-3.45(m， 1H)， 3.61-3.65(m， 1H)， 3.67-3.69 (s， 3H)， 4.09-4.15(m， 1H)， 4.254.38(m， 1H). ES-MS m/z 271[M+1]+， 171.1[MBoc]+ 基线峰134(2R， 4S)-4- 叠氮基 - 吡咯烷 -1， 2二甲酸 1- 叔丁酯 2- 甲酯*65℃， 16 小时
制备例 35
(2S， 4S)-4- 叠氮基 -2- 羟甲基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯
在 -10 至 -20℃下在氮气气氛下向 (2S， 4S)-4- 叠氮基 - 吡咯烷 -1， 2- 二甲酸 1- 叔 丁酯 2- 甲酯 (0.16mol， 40g) 在无水二乙醚 (400mL) 中的溶液中添加硼氢化锂 (0.16mol， 3.6g)。完成添加时， 在相同的温度搅拌反应混合物 30 分钟。用饱和碳酸氢钠溶液在 -70℃ 终止反应混合物， 使其缓慢达到室温。分离有机层和用二氯甲烷萃取水层。用无水硫 酸钠干燥有机层， 过滤和在真空下浓缩， 得到黄色稠油形式的标题化合物 (32g， 粗品 )。 1 HNMR(400MHz， CDCl3)δ1.46(s， 9H)， 2.32-2.35(m， 1H)， 3.30(dd， 1H)， 3.65-3.79(m， 4H)， 4.07-4.29(m， 2H)。
基本按照如制备例 35 中所述， 从适当的吡咯烷 -2- 甲酸甲酯开始制备以下表格中 的中间体。
33101903377 A CN 101903378说化学名称明书30/65 页制备例 36 37 38
(2S， 4R)-4- 叠氮基 -2- 羟甲基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯 (2R， 4R)-4- 叠氮基 -2- 羟甲基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯 (2R， 4R)-4- 叠氮基 -2- 羟甲基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯制备例 39 (2S， 4S)-4- 氨基 -2- 羟甲基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯将 (2S， 4S)-4- 叠 氮 基 -2- 羟 甲 基 - 吡 咯 烷 -1- 甲 酸 叔 丁 酯 (32g) 溶 于 甲 醇 (150mL) 中。添加 10％碳上钯 (3.2g) 和在室温下氢化 (1 大气压 )16 小时。经由硅藻土柱 塞滤掉催化剂， 在真空下浓缩， 得到黄色稠油形式的标题化合物 (28g， 粗品 )。
基本按照如制备例 39 中所述， 从适当的叠氮基 - 吡咯烷开始制备以下表格中的中 间体。
制备例 43 (2S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-2- 羟甲基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯将 (2S， 4S)-4- 氨 基 -2- 羟 甲 基 - 吡 咯 烷 -1- 甲 酸 叔 丁 酯 (0.14mol， 31g)， 5- 溴 -2- 氟硝基苯 (0.29mol， 64.0g) 和三乙胺 (0.58mol， 59g) 在乙酸乙酯 (320mL) 中的 混合物加热回流 16 小时。将反应混合物冷却到室温， 用乙酸乙酯稀释， 和用水和盐水洗涤。 用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到暗橙色稠油形式的标题化合物 (42g， 粗品 )。
制备例 44
(2S， 4S)-[4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 吡咯烷 -2- 基 ]- 甲醇盐酸盐
在室温下向 (2S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-2- 羟甲基吡咯烷 -1- 甲酸 叔丁酯 (0.22mol， 95g) 在干燥二氯甲烷 (475mL) 中的溶液中缓慢添加二噁烷 (950mL) 中的 4.0M 氯化氢， 搅拌 2 小时。过滤沉淀的固体， 在真空下干燥得到橙色固体形式的标题化合 1 物 (70g， 87 ％ )。 H NMR(400MHz， CD3OD)δ1.98-2.05(m， 1H)， 2.71-2.79(m， 1H)， 3.36(dd， 1H)， 3.58-3.63(m， 1H)， 3.76(dd， 1H)， 3.88-3.95(m， 2H)， 4.55-4.58(m， 1H)， 7.03(d， 1H)， 7.66(dd， 1H)， 8.30(d， 1H)。
基本按照如制备例 43 和 44 中所述， 从适当的氨基 - 吡咯烷开始制备以下表格中 的中间体。
35
制备例1101903377 A CN 101903378化学名称物理数据45(2S， 4R)-[4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 吡咯烷 -2- 基 ]- 甲醇盐酸盐H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ2.012.10(m， 2H)， 3.06-3.10(m， 2H)， 3.47-3.60 (m， 3H)， 3.62-3.71(m， 2H)， 3.83(br s， 1H)， 4.49-4.50(m， 1H)， 7.09(d， 1H)， 7.72 (dd， 1H)， 7.94(d， 1H)， 8.2(d， 1H)， 9.10 (br s， 1H， HCl)， 9.60(br s， 1H， HCl).46(2R， 4R)-[4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨1说基 )- 吡咯烷 -2- 基 ]- 甲醇盐酸盐明制备例 48 (7S， 8aS)-7-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 四氢 - 吡咯并 [2， 1-c][1， 4] 噁嗪 -4- 酮361书H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.801.85(m， 1H)， 2.54-2.59(m， 1H)， 3.43-3.51 (m， 3H)， 3.56-3.63(m， 1H)， 3.69-3.72(m， 2H)， 4.50-4.51(m， 1H)， 7.10(d， 1H)， 7.55(dd， 1H)， 8.14(d， 1H， -NH)， 8.20(d， 1H).47(2R， 4S)-[4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 吡咯烷 -2- 基 ]- 甲醇盐酸盐H NMR (400MHz， DMSO-d6)δ2.082.21(m， 2H)， 3.27(d， 1H)， 3.57-3.61(m， 2H)， 3.68-3.71(m， 1H)， 3.83(br s， 1H)， 4.47-4.51(m， 1H)， 5.44(br s， 1H)， 7.08(d， 1H)， 7.72(dd， 1H)， 7.94(d， 1H)， 8.20(d， 1H)， 9.06(br s， 1H)， 9.59(br s， 1H).32/65 页101903377 A CN 101903378说明书33/65 页在室温下向 (2S， 4S)-[4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 吡咯烷 -2- 基 ]- 甲醇盐 酸盐 (0.22mol， 79g) 在四氢呋喃 / 水 (1 ∶ 1) 混合物 (1180mL) 中的溶液中滴加氯乙酰氯 (0.49mol， 55.7g)。 通过连续添加 4M 氢氧化钠溶液， 将反应物 pH 保持在 10-12。 完成氯乙酰 氯添加后， 在室温下搅拌反应混合物 4 小时。在减压下去除四氢呋喃并用二氯甲烷萃取水 层。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到橙色固体形式的标题化合物 (50g， 62％ )。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.59-1.67(m， 1H)， 2.58-2.64(m， 1H)， 3.40(t， 1H)， 3.71(dd， 1H)， 3.91-4.01(m， 2H)， 4.09(d， 1H)， 4.20(dd， 1H)， 4.29-4.35(m， 2H)， 6.75(d， 1H)， 7.54(dd， 1H)， 8.05(d， 1H)， 8.32(d， 1H)。
制备例 49
(4- 溴 -2- 硝 基 - 苯 基 )-((7S， 8aS)- 六 氢 化 - 吡 咯 并 [2， 1-c][1， 4] 噁 嗪 -7- 基 )- 胺
在 0 至 -5 ℃下在氮气下向 (7S， 8aS)-7-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 四氢 - 吡 咯 并 [2， 1-c][1， 4] 噁 嗪 -4- 酮 (0.028mol， 10g) 在 四 氢 呋 喃 (150mL) 中 的 溶 液 中 滴 加 BH3THF(1.0M， 四氢呋喃中， 0.056mol， 56mL)。 完成添加后， 使反应混合物回流 3 小时。 将反应 混合物冷却到 0℃， 用 1N 盐酸终止， 然后添加 1N 氢氧化钠水溶液。 在减压下去除四氢呋喃并 用二氯甲烷萃取水层。 用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩。 将残余物溶于甲醇 (160mL)， 添加二噁烷 (160mL) 中的 4N 氯化氢， 在 80℃加热反应混合物 4 小时。冷却至室温， 通过添 加 4N 氢氧化钠水溶液调节 pH 为 10-12。在减压下去除甲醇并用二氯甲烷萃取水层。用 无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到结晶黄色固体形式的标题化合物 (8.0g， 83％ )。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.32-1.38(m， 1H)， 2.19-2.22(m， 1H)， 2.34(dt， 1H)， 2.42-2.47(m， 1H)， 2.54-2.58(m， 1H)， 2.92(d， 1H)， 3.07(d， 1H)， 3.34(t， 1H)， 3.61(dt， 1H)， 3.85(dd， 1H)， 3.97(dd， 1H)， 4.01-4.07(m， 1H)， 6.67(d， 1H)， 7.48(dd， 1H)， 8.17(d， 1H)， 8.35(d， 1H)。
基本按照如制备例 48 和 49 中所述， 从适当的苯基 - 氨基 - 吡咯烷开始制备以下 表格中的中间体。例如对于制备例 50 和 51， 用硼烷 - 四氢呋喃络合物或硼烷 - 二甲硫醚络 合物进行四氢 - 吡咯并 [2， 1-c][1， 4] 噁嗪 -4- 酮的还原。
37制备例 (7R， 8aS)-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯 基 )-( 六氢化 - 吡咯并 [2， 1-c][1， 4] 噁嗪 -7- 基 )- 胺 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.30-1.36 (m， 1H)， 2.18-2.25(m， 1H)， 2.31-2.38(m， 1H)， 2.42-2.47(m， 1H)， 2.53-2.58(m， 1H)， 2.90(d， 1H)， 3.06(d， 1H)， 3.34(t， 1H)， 3.62(dt， 1H)， 3.86(dd， 1H)， 3.97 (dd， 1H)， 4.01-4.09(m， 1H)， 6.67(d， 1H)， 7.49(dd， 1H)， 8.16(d， 1H， -NH)， 8.32(d， 1H).1 1化学名称物理数据101903377 A CN 1019033785051 基 )-( 六氢化 - 吡咯并 [2， 1-c][1， 4] 噁嗪 -7- 基 )- 胺(7R， 8aR)-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯说明38书H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.30-1.36 (m， 1H)， 2.18-2.25(m， 1H)， 2.31-2.38(m， 1H)， 2.42-2.47(m， 1H)， 2.53-2.58(m， 1H)， 2.90(d， 1H)， 3.06(d， 1H)， 3.34(t， 1H)， 3.62(dt， 1H)， 3.86(dd， 1H)， 3.97 (dd， 1H)， 4.01-4.09(m， 1H)， 6.67(d， 1H)， 7.49(dd， 1H)， 8.16(d， 1H， -NH)， 8.32(d， 1H).34/65 页
101903377 A CN 10190337852 基 )-( 六氢化 - 吡咯并 [2， 1-c][1， 4] 噁嗪 -7- 基 )- 胺(7S， 8aR)-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯1说制备例 53 2， 5- 二氢 -1H- 吡咯 -1- 甲酸叔丁酯明39书H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.69(dd， 1H)， 1.88-1.96(m， 1H)， 2.17-2.24(m， 1H)， 2.42-2.48(m， 2H)， 2.93(d， 1H)， 3.27 (t， 1H)， 3.57(t， 1H)， 3.68-3.75(m， 1H)， 3.87(d， 1H)， 3.97(d， 1H)， 4.09-4.17(m， 1H)， 6.69(d， 1H)， 7.50(d， 1H)， 8.07(d， 1H)， 8.32(d， 1H).35/65 页101903377 A CN 101903378
说明书36/65 页在 0℃经 1.5 小时向 3- 吡咯啉 (40.0g， 0.57mol) 在二氯甲烷 (400mL) 中的溶液中 滴加重碳酸二 - 叔丁酯 (0.69mol， 151.0g) 在二氯甲烷 (200mL) 中的溶液并在室温下搅拌 10 小时。去除溶剂并将粗产物用于下一步制备例 47 中 (95.0g， 98％ )。
制备例 54
外消旋反式 -3- 溴 -4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯
在 0 ℃经 15 分钟向 2， 5- 二氢 -1H- 吡咯 -1- 甲酸叔丁酯 (0.29mol， 50.0g) 在二 甲亚砜 (360mL) 和水 (18mL) 中的搅拌混合物中逐渐添加 N- 溴琥珀酰亚胺 (0.325mol， 58.0g)。在室温下搅拌 2 小时之后， 加水 (500mL) 并用乙酸乙酯萃取。
用盐水洗涤有机层， 用硫酸钠干燥， 在真空中浓缩得到浅棕色油形式的标题化 1 合 物 (75.0g， 95 ％ )。 H NMR(500MHz， CDCl3)δ4.43-4.53(m， 1H)， 4.12-4.20(m， 1H)， 3.96-4.11(m， 2H)， 3.68-3.94(m， 2H)， 3.32-3.48(m， 1H)， 1.47(s， 9H)。
制备例 55
外消旋反式 -3- 苯甲基氨基 -4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯
在室温下搅拌粗的外消旋反式 -3- 溴 -4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯 (75.0g) 和 1N 氢氧化钠水溶液 (400mL) 的混合物 2 小时。添加苯甲基胺 (0.86mol， 80.0g)， 在 65℃ 搅拌 4.5 小时， 然后冷却至 0℃。通过过滤收集所得沉淀物， 用水和异丙醚洗涤， 干燥得到 1 白色固体形式的标题化合物 (50.0g， 63％ )。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.21-7.38(m， 5H)， 4.06-4.15(m， 1H)， 3.84(d， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 3.57-3.75(m， 2H)， 3.10-3.35(m， 3H)， 1.65(br s， 2H)， 1.46(s， 9H)。
制备例 56
(3S， 4S)-3- 苯甲基氨基 -4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯， (+)- 扁桃酸盐
在 70 ℃ 将 外 消 旋 反 式 -3- 苯 甲 基 氨 基 -4- 羟 基 - 吡 咯 烷 -1- 甲 酸 叔 丁 酯 (0.343mol， 100.0g) 和 (+)- 扁桃酸 (0.378mol， 57.83g) 在乙腈 (1L) 和水 (10mL) 中的混 合物加热一小时， 然后在 4 小时内冷却至室温。通过过滤收集所得结晶沉淀物， 用乙腈洗 涤， 从乙腈 / 水 (20 ∶ 1) 中再结晶， 得到白色结晶固体形式的标题化合物 (62.0g， 40％ )。 1 H NMR(500MHz， CDCl3)δ7.19-7.44(m， 8H)， 5.05(br s， 2H)， 4.97(s， 1H)， 3.95-4.02(m， 1H)， 3.73(s， 2H)， 3.28-3.50(m， 4H)， 2.95-3.18(m， 3H)， 1.39(s， 9H) ； 熔 点 185-188， 23 [α] D+50.0° (c 0.50， MeOH)。
制备例 57
(3S， 4S)-3- 苯甲基氨基 -4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯
向 (3S， 4S)-3- 苯 甲 基 氨 基 -4- 羟 基 - 吡 咯 烷 -1- 甲 酸 叔 丁 酯 (+)- 扁 桃 酸 盐 (60.0g) 中添加 3％碳酸钾水溶液 (300mL)， 用乙酸乙酯 (3×250mL) 萃取游离胺。 用盐水洗 涤合并的有机层， 用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸发溶剂， 得到白色固体形式的 (S， S)- 对 + 23 映异构体 (34.0g， 65％ )。APCI MSm/z 293[M+H] ； 熔点 69-70℃， [α] D+18.0° (c， 0.50， MeOH)。
制备例 58
(3S， 4S)-3- 氨基 -4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯
向 (3S， 4S)-3- 苯甲基氨基 -4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯 (0.054mol， 16.0g) 在正丁醇 (225mL) 中的溶液添加 10 ％ Pd/C(5.0g)， 在 50psi 氢化该混合物 10 小时。经硅藻土柱塞过滤反应混合物， 用乙醇洗涤。蒸发滤出液， 得到白色固体形式的标题化合物 + 23 (11.10g， 99％ )。APCI MS m/z203[M+H] ； [α] D+7.8° (c， 0.50， MeOH)。
制备例 59
(3S， 4S)-3-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯
向 1- 溴 -4- 氟 -3- 硝基苯 (0.125mol， 26.0g) 在乙酸乙酯 (300mL) 中的溶液中添 加 (3S， 4S)-3- 苯甲基氨基 -4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯 (0.113mol， 23.0g) 和三乙胺 (0.339mol， 35.0g)， 回流 14 小时， 冷却至室温， 用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥， 蒸发 溶剂， 通过快速柱层析提纯， 得到黄色固体形式的标题化合物 (43.0g， 90％ )。APCI MS m/z + 403[M+H] 。
制备例 60
(3R， 4R)-3- 苯甲基氨基 -4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯， (-)- 扁桃酸盐
在 70 ℃ 将 外 消 旋 反 式 -3- 苯 甲 基 氨 基 -4- 羟 基 - 吡 咯 烷 -1- 甲 酸 叔 丁 酯 (0.085mol， 25.0g) 和 (-)- 扁 桃 酸 (0.094mol， 14.45g， 1.1 当 量 ) 在 乙 腈 (200mL) 和 水 (5mL) 中混合一小时。 在 4 小时内冷却至室温。 通过过滤收集所得结晶沉淀物， 用乙腈洗涤， 1 从乙腈 / 水 (20 ∶ 1) 中再结晶， 得到白色结晶固体形式的 (-)- 扁桃酸盐 (34.0g， 88％ )。 H NMR(500MHz， CDCl3)δ7.19-7.44(m， 8H) ； 5.05(br s， 2H)， 4.97(s， 1H)， 3.95-4.02(m， 1H)， 23 3.73(s， 2H)， 3.28-3.50(m， 4H)， 2.95-3.18(m， 3H)， 1.39(s， 9H) ； [α] D-58.0 ° (c 0.50， MeOH)。
制备例 61
(3R， 4R)-3-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯
基本按照如制备例 58、 59 和 60 中所述的， 从 (3R， 4R)-3- 苯甲基氨基 -4- 羟基 - 吡 咯烷 -1- 甲酸叔丁酯 (-)- 扁桃酸盐开始制备标题化合物。
制备例 62
(3S， 4R)-3-(4- 溴 -2- 硝基苯基氨基 )-4-(2- 氯乙酰氧基 ) 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁 酯
向 (3S， 4S)-3-(4- 溴 -2- 硝 基 苯 基 氨 基 )-4- 羟 基 吡 咯 烷 -1- 甲 酸 叔 丁 酯 (2.50mmol， 1.0g)， 氯 乙 酸 (3.0mmol， 300mg) 和 三 苯 基 膦 (3.0mmol， 850mg) 在 四 氢 呋 喃 (40mL) 中的混合物中添加偶氮二甲酸二乙酯 (3.0mmol， 600mg)， 并在室温下搅拌 12 小时。 去除溶剂， 向残余物添加乙酸乙酯 (50mL)， 用水和盐水洗涤。 用无水硫酸钠干燥和蒸发。 通 过柱层析纯化残余物， 用二氯甲烷中的 20％乙酸乙酯淋洗， 得到黄色固体形式的标题化合 1 物 (1.10g， 98％ )。 H NMR(500MHz， CDCl3)δ8.35(s， 1H)， 8.20(m， 1H)， 7.60(m， 1H)， 6.82(m， 1H)， 5.55(d， J ＝ 6.8Hz， 1H)， 4.32(m， 1H)， 4.13(bd， J ＝ 8.2Hz， 2H)， 3.90(m， 1H)， 3.79(m， 1H)， 3.74(dd， J ＝ 4.2， 10.4Hz， 1H)， 3.25(t， J ＝ 7.20Hz， 1H)， 1.41(s， 9H)。
制备例 63
(3S， 4R)-3-(4- 溴 -2- 硝基苯基氨基 )-4- 羟基吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯
向 (3S， 4R)-3-(4- 溴 -2- 硝基苯基氨基 )-4-(2- 氯乙酰氧基 ) 吡咯烷 -1- 甲酸 叔丁酯 (2.20mmol， 1.0g) 在甲醇中的溶液添加 2.0M 氢氧化锂水溶液 (5mL)， 在室温下搅拌 3.5 小时。去除溶剂， 用乙酸乙酯 (50mL) 稀释残余物， 并用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干 燥， 过滤和蒸发溶剂。通过柱层析纯化， 用二氯甲烷中的 50％乙酸乙酯淋洗， 得到黄色固体形式的标题化合物 (900mg， 98％ )。APCI MS m/z 462[M+H]+。
制备例 64
(3R， 4S)-3-(4- 溴 -2- 硝基苯基氨基 )-4- 羟基吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯
基 本 按 照 如 制 备 例 62 和 63 所 述 的， 从 (3R， 4R)-3-(4- 溴 -2- 硝 基 苯 基 氨 基 )-4- 羟基吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯开始制备标题化合物。
制备例 65
(3S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 吡咯烷 -3- 醇， 盐酸盐
在 0 ℃向 (3S， 4S)-3-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-4- 羟基 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔 丁酯 (0.106mol， 43.0g) 在乙酸乙酯 (500mL) 中的悬浮液鼓入无水氯化氢气体 10 分钟， 在 室温下搅拌一小时。去除溶剂， 在真空下干燥所得固体， 得到黄色固体形式的标题化合物 + (35.0g， 98％ )。APCI MS m/z 302[M+H] 。
制备例 66
(3S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-1- 甲基 - 吡咯烷 -3- 醇
在 0℃向乙腈中的 (3S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 吡咯烷 -3- 醇盐酸盐 (0.104mol， 35.0g) 添加三乙酰氧基硼氢化钠 (0.37mol， 78.0g)。经 10 分钟向该混合物中 缓慢添加 37％甲醛水溶液 (30mL)， 在室温下搅拌 10 小时。添加饱和碳酸氢钠水溶液， 搅拌 一小时。用乙酸乙酯萃取， 用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥， 过滤， 蒸发溶剂， 得到黄色 + 23 固体形式的标题化合物 (34.0g， 98％ )。APCI MS m/z 302[M+H] ； [α] D+58.6° (c， 0.50， MeOH)。
基本按照如制备例 65 和 66 中所述的制备以下表格中的中间体， 其中适当的 3-(4- 溴 -2- 硝基苯基氨基 )-4- 羟基吡咯烷 -1- 甲酸叔丁酯用无水 HCl 气体处理 10-30 分 钟， 然后搅拌 1-4 小时。用甲醛处理所得去保护的吡咯烷 15 分钟至 10 小时。
42
101903377 A CN 101903378制备例 (3R， 4R)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 氨基 )-1- 甲基 - 吡咯烷 -3- 醇1化学名称物理数据 H NMR(300MHz， CDCl3)δ8.21(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 7.57(dd， J ＝ 3.5， 8.8Hz， 1H)， 7.08(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 4.11(m， 1H)， 3.92(m， 1H)， 3.21(dd， J ＝ 3.8， 7.9Hz， 1H)， 3.12(dd， J ＝ 4.8， 8.9Hz， 1H)， 2.71(dd， J ＝ 3.8， 8.8Hz， 1H)， 2.59(dd， J ＝ 4.8， 8.9 Hz， 1H)， 2.41(s， 3H) ESI MS m/z 318[M+H]+67说68 氨基 )-1- 甲基 - 吡咯烷 -3- 醇 (3R， 4R)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 氨基 )-1- 甲基 - 吡咯烷 -3- 醇1(3R， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基明制备例 70
4- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯
在 0 ℃ 向 1-( 叔 丁 氧 基 羰 基 )-4- 哌 啶 酮 (0.74mol， 150g) 和 三 乙 胺 (1.5mol， 151.6g) 在二氯甲烷 (1L) 中的溶液中分批添加硼氢化钠 (0.82mol， 31.3g)。 完成添加时， 将 H NMR(300MHz， CDCl3)δ8.66(d， J ＝ 5.4Hz， 1H)， 8.33(d， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.48(dd， J ＝ 9.2， 2.1Hz， 1H)， 6.67(d， J ＝ 9.3Hz)， 4.43-4.41(m， 1H)， 4.05-4.00 (m， 1H)， 2.90-2.73(m， 3H)， 2.68-2.63(m， 1H)， 2.38(s， 3H)43书6939/65 页101903377 A CN 101903378说明书40/65 页反应混合物加热至室温并搅拌 4 小时。用饱和氯化铵溶液终止反应混合物， 在减压下去除 乙醇。将残余物溶于水中并用二氯甲烷萃取。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到 1 粘稠固体形式的标题化合物 (150g， 99％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.45(s， 9H)， 1.53(d， 2H)， 1.83-1.87(m， 2H)， 3.02(dt， 2H)， 3.8-3.85(m， 3H)。
制备例 71
4- 甲烷磺酰氧基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯
在 0 ℃ 向 4- 羟 基 - 哌 啶 -1- 甲 酸 叔 丁 酯 (0.74mol， 150g) 和 三 乙 胺 (1.5mol， 151.6g) 在二氯甲烷 (1L) 中的溶液中滴加氯化硫酰甲烷 (1.12mol， 128.8g)。完成添加时， 将反应混合物加热至室温并搅拌 16 小时。用二氯甲烷稀释反应混合物， 用饱和碳酸氢钠 溶液和水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到棕色固体形式的标题化合物 1 (192g， 92％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.45(s， 9H)， 1.78-1.85(m， 2H)， 1.93-1.98(m， 2H)， 3.03(s， 3H)， 3.26-3.32(m， 2H)， 3.68-3.71(m， 2H)， 4.85-4.90(m， 1H)。
制备例 72
3， 6- 二氢 -2H- 吡啶 -1- 甲酸叔丁酯
在 80 ℃ 加 热 4- 甲 烷 磺 酰 基 氧 基 - 哌 啶 -1- 甲 酸 叔 丁 酯 (0.69mol， 193g) 在 DBU(400mL) 中的溶液 16 小时。用水稀释反应混合物， 用二乙醚萃取， 用 1N 盐酸和饱和碳 酸氢钠溶液洗涤有机层。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到棕色油形式的标题 1 化合物 (116g， 92％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.46(s， 9H)， 2.12(br s， 2H)， 3.47(t， 2H)， 3.87(s， 2H)， 5.65(br s， 1H)， 5.81(br s， 1H)。
制备例 73
外消旋顺式 -7- 氧杂 -3- 氮杂 - 二环 [4.1.0] 庚烷 -3- 甲酸叔丁酯
在 0℃向 3， 6- 二氢 -2H- 吡啶 -1- 甲酸叔丁酯 (0.64mol， 117.8g) 在二氯甲烷 (1L) 中的溶液中滴加 m- 氯过氧苯甲酸 (0.77mol， 133.1g) 在二氯甲烷 (200mL) 中的溶液。完 成添加时， 将反应混合物加热至室温并搅拌 16 小时。用二氯甲烷稀释反应混合物， 用 4N 氢氧化钠溶液、 水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到浅黄色油形式 1 的标题化合物 (112g， 87％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.44(s， 9H)， 1.87-1.93(m s， 1H)， 2.04(br s， 1H)， 3.11(br s， 1H)， 3.20(br s， 1H)， 3.28(s， 1H)， 3.44(br s， 1H)， 3.68(br s， + 1H)， 3.81-3.92(m， 1H)。ES-MS m/z 204[M+H] 。
制备例 74
外消旋反式 -4- 叠氮基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯
在 65 ℃ 将 外 消 旋 反 式 -7- 氧 杂 -3- 氮 杂 - 二 环 [4.1.0] 庚 烷 -3- 甲 酸 叔 丁 酯 (0.56mol， 112g)， 叠 氮 化 钠 (1.12mol， 73.08g)， 氯 化 铵 (0.56mol， 30.07g) 和 甲 醇 / 水 (3 ∶ 1)(1L) 的混合物加热 16 小时。用水稀释反应混合物， 用二氯甲烷萃取， 用饱和 碳酸氢钠和盐水溶液洗涤有机层。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩。使用己烷中 的 6 ％乙酸乙酯作为洗脱剂， 在硅胶柱上纯化残余物， 得到浅黄色油形式的标题化合物 1 (42.3g， 42％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.48(s， 9H)， 1.84(br s， 1H)， 1.97-2.01(m， 1H)， 2.74-2.82(m， 1H)， 2.88(br s， 1H)， 3.37-3.40(m， 1H)， 3.50(br s， 1H)， 3.91(br s， 1H)， + 4.09(dd， 1H)。ES-MS m/z 143[M-BoC] 。
制备例 75外消旋反式 -4- 氨基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯
将外消旋反式 - 叠氮基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 (0.23mol， 56.6g) 溶于甲 醇 (500mL) 中， 添加 10％碳上钯 (12.0g)， 在室温下氢化 (1 大气压 )16 小时。经由硅藻土 柱塞滤掉催化剂， 浓缩滤出液， 得到浅黄色稠油形式的标题化合物 (53.7g， 99％ )。
制备例 76
外消旋反式 -4- 苯甲基氨基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯
向外消旋反式 -4- 氨基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 (0.24mol， 53.7g) 和乙酸 (92mL) 在乙醇 (400mL) 中的溶液中添加苯甲醛 (0.24mol， 26.3g)， 在室温下搅拌反应混合 物 30 分钟。添加氰基硼氢钠 (0.49mol， 31.2g)， 搅拌反应混合物 3 小时。用碳酸氢钠溶液 终止反应混合物， 用二氯甲烷萃取。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩。将残余物溶于 最低量二氯甲烷中， 添加 0.1N 盐酸水溶液， 保持 pH 为 4-5。丢弃有机层。用二氯甲烷洗涤 酸性水层三次， 丢弃有机层。调节水层 pH 为 10-12， 用二氯甲烷萃取。用无水硫酸钠干燥有 1 机层， 过滤和浓缩， 得到浅黄色油形式的标题化合物 (35.7g， 46％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3) δ1.35-1.40(m， 2H)， 1.45(s， 9H)， 2.05(br s， 1H)， 2.43(t， 1H)， 2.57(t， 1H)， 2.69(brs， 1H)， 3.27(br s， 1H)， 3.70(d， 1H)， 3.94(d， 1H)， 4.15(br s， 1H)， 4.26(d， 1H)， 7.23-7.29(m， 1H)， 7.30-7.32(m， 2H)， 7.33-7.36(m， 2H)。
制备例 77
(3R， 4R)-4- 苯甲基氨基 -3- 羟基 -4- 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯， L-(+)- 酒石酸盐
在 75℃将外消旋反式 -4- 苯甲基氨基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 (0.11mol， 35.0g) 和 L-(+)- 酒石酸 (0.12mol， 18.9g， 1.2 当量 ) 和乙腈 / 水 (20 ∶ 1)(175mL) 的混合 物加热 4 小时。在减压下浓缩反应混合物， 得到酒石酸盐 (53.0g)。从乙腈中将残余物结 晶三次。过滤该晶体， 在真空下干燥得到标题化合物 (18.3g， 67％ )。HPLC( 柱 ： Chiralcel OD-H(250mm×4.6mm) ； 溶剂体系 ： 异 丙 醇 / 己 烷 中 的 0.1 ％ 三 乙 胺 (8 ∶ 92) ； 流速 ： 0.800ml/min ； 波长 ： 258nm) ： 99.9 ％ ee.tR 9.502 分钟。相反对映异构体 ((3S， 4S)-3- 羟 基 -4- 苯乙基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯， L-(-)- 酒石酸盐 ) 的 tR 为 8.714 分钟。
制备例 78
(3R， 4R)-4- 氨基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯
将 (3R， 4R)-4- 苯甲基 -3- 羟基 -4- 苯乙基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯， L-(+)- 酒石 酸盐 (0.04mol， 18.3g) 溶于 4％碳酸钾溶液 (500mL) 中并搅拌 30 分钟。用二氯甲烷萃取 游离胺。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到游离胺 (11.3g， 92 ％ )。将胺溶于 甲醇 (110mL) 中， 添加 10 ％碳上钯 (2.5g)， 在室温下氢化 (1 大气压 )16 小时。经由硅藻 土柱塞滤掉催化剂， 浓缩滤出液， 得到浅黄色稠油形式的标题化合物 (7.6g， 95％ )。[α] 1 26.1 +2.141(c1.0， 甲醇 )。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.08(dq， 1H)， 1.38(s， 9H)， 1.67(dd， D 1H)， 1.80(br s， 1H)， 2.37-2.45(m， 2H)， 2.67(br s， 1H)， 2.90(br s， 1H)， 3.79(br s， 1H)， + 3.88(br s， 1H)， 5.0(br s， 1H)。ES-MSm/z 217[M+H] 。
制备例 79
(3R， 4R)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯
将 (3R， 4R)-4- 氨基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 (0.02mol， 6.0g)， 5- 溴 -2- 氟 硝基苯 (0.03mol， 6.71g) 和三乙胺 (0.058mol， 5.88mL) 在乙酸乙酯 (180mL) 中的混合物加热回流 16 小时。将反应混合物冷却到室温， 用乙酸乙酯稀释， 和用水和盐水洗涤。用 无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到标题化合物 (12.35g， 粗品 )。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.46(s， 9H)， 1.50-1.51(m， 1H)， 2.08-2.12(m， 1H)， 2.93(dd， 1H)， 3.01(brs， 1H)， 3.55-3.61(m， 1H)， 3.62-3.68(m， 1H)， 3.68(br s， 1H)， 4.13-4.18(m， 1H)， 6.97(d， 1H)， + 7.48(dd， 1H)， 8.08(d， 1H)， 8.30(d， 1H)。ES-MS m/z 316[M-Boc] 。
制备例 80
(3R， 4R)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 哌啶 -3- 醇， 盐酸盐
在室温下向 (3R， 4R)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔 丁酯 (0.027mol， 11.5g) 在干燥二氯甲烷 (40mL) 中的溶液中缓慢添加二噁烷 (70mL) 中 的 4.0M 氯化氢， 并搅拌 16 小时。过滤沉淀物并在真空下干燥， 得到黄色固体形式的标题 1 化 合 物 (8.68g， 89 ％ )。 H NMR(400MHz， CD3OD)δ1.81-1.86(m， 1H)， 2.39-2.44(m， 1H)， 3.02-3.07(m， 1H)， 3.18-3.26(m， 1H)， 3.34-3.40(m， 1H)， 3.45(dd， 1H)， 3.87-3.91(m， 2H)， 7.17(d， 1H)， 7.61(dd， 1H)， 8.28(d， 1H)。
制备例 81
(3R， 4R)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-1- 甲基 - 哌啶 -3- 醇
向 (3R， 4R)-4-(4- 溴 -2- 硝 基 - 苯 基 氨 基 )- 哌 啶 -3- 醇， 盐 酸 盐 (0.024mol， 8.68g) 和乙酸 (10.2mL) 在水 (42mL) 中的溶液中添加甲醛 (20.5mL， 37-41 ％水溶液 )， 并在室温下搅拌反应混合物 30 分钟。添加氰基硼氢钠 (0.073mol， 4.6g)， 搅拌反应混合 物 3 小时。用碳酸氢钠溶液终止反应混合物， 用二氯甲烷萃取。用无水硫酸钠干燥有机 层， 过滤和浓缩， 得到标题化合物 (7.8g， 97 ％ )。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.63-1.71(m， 1H) ， 2.16-2.21(m ， 2H) ， 2.33(s ， 3H) ， 2.35-2.38(m ， 1H) ， 2.60(br s ， 1H) ， 2.80(d ， 1H) ， 3.54-3.56(m， 1H)， 3.75-3.79(m， 1H)， 6.92(d， 1H)， 7.48(dd， 1H)， 8.14(d， 1H)， 8.30(d， 1H)。
制备例 82
(3S， 4S)-4- 苯甲基氨基 -3- 羟基 -4- 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯， D-(-)- 酒石酸盐
浓缩制备例 77 的母液， 得到对映富集的 (3S， 4S)-3- 羟基 -4- 苯乙基 - 哌啶 -1- 甲 酸叔丁酯 L-(+)- 酒石酸盐 (0.0377mol， 17.2g)。添加 4 ％碳酸钾水溶液 (500mL) 并搅拌 30 分钟。用二氯甲烷萃取游离胺。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到游离胺 (11.0g)。在 75 ℃将 4- 苯甲基氨基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 (0.0361mol， 11.0g) 和 D-(-)- 酒 石 酸 (0.0397mol， 5.97g， 1.1 当 量 ) 在 乙 腈 / 水 (20 ∶ 1)(100ml) 中 的 混 合物加热 4 小时。在减压下浓缩反应混合物， 得到粗酒石酸盐。从乙腈中将残余物结晶 三次。过滤该晶体， 在真空下干燥得到标题化合物 (14.8g， 90 ％ )。HPLC( 柱 ： Chiralcel OD-H(250mm×4.6mm) ； 溶剂体系 ： 异 丙 醇 / 己 烷 中 的 0.1 ％ 三 乙 胺 (8 ∶ 92) ； 流速 ： 0.800ml/min ； 波长 ： 258nm) ： 96.4 ％ ee.tR 8.714 分钟。相反对映异构体 ((3R， 4R)-3- 羟 基 -4- 苯乙基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯， L-(+)- 酒石酸盐 ) 的 tR 为 9.502 分钟。
制备例 83
(3S， 4S)-4- 氨基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯
将 (3S， 4S)-4- 苯甲基氨基 -3- 羟基 -4- 苯乙基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯， D-(-)- 酒 石酸 (0.036mol， 16.4g) 溶于 4 ％碳酸钾水溶液 (500mL) 中并搅拌 30 分钟。用二氯甲烷 萃取， 用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到游离胺 (11.0g， 99％ )。将胺溶于甲醇(110mL) 中， 添加 10％碳上钯 (5.5g)， 在室温下氢化 (50psi)2 小时。经由硅藻土滤掉催化 剂， 浓缩得到浅黄色稠油形式的标题化合物 (7.7g， 99％ )。
制备例 84
(3S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯
将 (3S， 4S)-4- 氨基 -3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 (0.035mol， 7.5g)， 5- 溴 -2- 氟 硝基苯 (0.038mol， 8.48g) 和三乙胺 (0.073mol， 7.44g) 在乙酸乙酯 (250mL) 中的混合物加 热回流 16 小时。将反应混合物冷却到室温， 用乙酸乙酯稀释， 和用水和盐水洗涤。用无水 硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 得到标题化合物 (16.16g， 粗品 )。
制备例 85
(3S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 哌啶 -3- 醇， 盐酸盐
在室温下向 (3S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-3- 羟基 - 哌啶 -1- 甲酸叔丁 酯 (0.035mol， 14.6g) 在干燥二氯甲烷 (50mL) 中的溶液中添加二噁烷 (90mL) 中的 4M 氯化 氢并搅拌 16 小时。过滤沉淀物并在真空下干燥， 得到黄色固体形式的标题化合物 (9.84g， 80％ )。
制备例 86
(3S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )-1- 甲基 - 哌啶 -3- 醇
向 (3S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝基 - 苯基氨基 )- 哌啶 -3- 醇， 盐酸盐 (0.028mol， 9.8g) 和乙酸 (12mL) 在水 (46mL) 中的溶液中添加甲醛 (24mL， 37-41 ％水溶液 )， 并在室温下搅 拌反应混合物 30 分钟。添加氰基硼氢钠 (0.083mol， 5.26g)， 搅拌反应混合物 3 小时。用 碳酸氢钠溶液终止反应混合物， 用二氯甲烷萃取。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和浓缩， 1 得到标题化合物 (8.4g， 92％ )。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.63-1.71(m， 1H)， 2.16-2.21(m， 2H) ， 2.33(s ， 3H) ， 2.35-2.38(m ， 1H) ， 2.60(br s ， 1H) ， 2.80(d ， 1H) ， 3.54-3.56(m ， 1H) ， 3.75-3.79(m， 1H)， 6.92(d， 1H)， 7.48(dd， 1H)， 8.14(d， 1H)， 8.30(d， 1H)。
制备例 87
(R)-[4-((E)-3， 8- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-2- 硝 基 - 苯基 ]-(1- 甲基 -2- 吗啉 -4- 基 - 乙基 )- 胺
用 氮 气 将 (R)-(4- 溴 -2- 硝 基 - 苯 基 )-(1- 甲 基 -2- 吗 啉 -4- 基 - 乙 基 )- 胺 (0.037mol， 12.8g)， (E)-3， 8- 二 氟 -11-(4， 4， 5， 5- 四 甲 基 [1， 3， 2] 二 氧 杂 硼 杂 环 戊 烷 -2- 基亚甲基 )-6， 11- 二氢 - 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 (0.037mol， 13.7g)， 三苯基膦 (0.007mol， 2.02g) 和乙酸钾 (0.074mol， 7.29g) 在二噁烷 / 水 (3 ∶ 1)(450mL) 中的混合 物脱气三次。向反应混合物添加乙酸钯 (II)(0.001mol)， 再用氮气脱气三次。在 85℃加 热所得反应混合物持续 16 小时。将反应混合物冷却到室温， 用水稀释， 用乙酸乙酯萃取， 合并有机层， 用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相， 过滤和浓缩。使用己烷中的 7％
乙酸乙酯作为洗脱剂， 在硅胶柱上纯化， 得到橙色固体形式的标题化合物 (9.1g， 48％ )。1H NMR(400MHz， CDCl3)， δ1.26(d， 3H)， 2.44-2.57(m， 6H)， 3.66-3.68(m， 4H)， 3.71-3.78(m， 1H)， 4.89(br s， 1H)， 5.63(br s， 1H)， 6.52(dd， 1H)， 6.61(d， 1H)， 6.67(dt， 1H)， 6.76(s， 1H) ， 6.89(d ， 1H) ， 6.95(dt ， 1H) ， 7.06-7.10(m ， 1H) ， 7.19(dd ， 1H) ， 7.29-7.41(m ， 1H) ， 7.95(d， 1H)， 8.35(d， 1H， -NH)。
实施例 1
(E)-N-((R)-5-((E)-3， 8- 二 氟 -6H- 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11- 亚 基 甲 基 )-1-(1- 甲基 -2- 吗啉 -4- 基 - 乙基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 氰酰胺
将 (R)-[4-((E)-3， 8- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-2- 硝 基 - 苯基 ]-(1- 甲基 -2- 吗啉 -4- 基 - 乙基 )- 胺 (0.017mol， 9.0g) 溶于四氢呋喃 (35mL) 和异丙醇 (90mL) 中。添加三乙胺 (0.039mol， 3.9g) 和 10％碳上铂 (1.5g) 并在室温下在 50psi(H2) 下在 Parr 振荡器中氢化 2 小时。经由硅藻土柱塞滤掉催化剂。用二噁烷 (35mL) 稀释滤出液， 添加 N- 氰基碳酰亚胺二苯酯 (0.019mol， 4.61g)， 并在室温下搅拌 48 小时。 在 减压下浓缩反应混合物。使用二氯甲烷中的 0.5％甲醇作为洗脱剂， 在硅胶柱上纯化， 得到 + 灰白色固体形式的标题化合物 (6.0g， 64％ )。LC-MS m/z 528.2[M+H] 。
基本如制备例 87 和实施例 1 中所述， 使用适当的苯基溴和适当的乙烯基二氧杂硼 戊烷， 制备以下表格中的以下实施例。
制备例 88
[4-((E)-3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-2- 硝基 - 苯 基 ]-(4- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 胺
用氮气将 (4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 )-(4- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 胺 (0.016mol， 5.0g)， (E)-3， 7- 二氟 -11-(4， 4， 5， 5- 四甲基 [1， 3， 2] 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基亚甲基 )-6， 11- 二 氢 - 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 (0.017mol， 6.4g)， 三苯基膦 (0.0028mol， 0.74g) 和乙酸钾 (0.0317mol， 3.11g) 在二噁烷 / 水 (3 ∶ 1)(200mL) 中的混合物脱气三次。向反应混合物添 加乙酸钯 (II)(0.5mmol， 113mg)， 再用氮气脱气三次。在 85℃加热所得反应混合物持续 16 小时。将反应混合物冷却到室温和用水稀释。用乙酸乙酯萃取混合物， 合并有机层， 和用水 和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相， 过滤和浓缩。从甲醇中结晶原料， 过滤和在真空下 干燥， 得到橙色固体形式的标题化合物 (4.2g， 55％ )。ES-MS m/z 479[M+1]+。
实施例 7
(E)-N-(5-((E)-3， 7- 二 氟 -6H- 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11- 亚 基 甲 基 )-1-(4- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 氰酰胺
将 [4-((E)-3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-2- 硝基 - 苯 基 ]-(4- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 胺 (0.008mol， 3.96g) 溶于四氢呋喃 (150mL) 中。添加三乙 胺 (0.018mol， 1.84g) 和 10％碳上铂 (1.3g) 并在室温下在 50psi(H2) 下在 Parr 振荡器中 氢化 3 小时。经由硅藻土柱塞滤掉催化剂， 并添加吡啶 (150mL) 和 N- 氰基碳酰亚胺二苯酯 (0.009mol， 2.17g)。在室温下搅拌 16 小时然后加热至 70℃持续 8 小时。在减压下浓缩反 应混合物。 使用己烷中的 60％丙酮作为洗脱剂， 在硅胶柱上纯化， 得到灰白色固体形式的标 + 题化合物 (1.8g， 43％ )。LC-MS m/z 499.2[M+H] 。
基本如制备例 88 和实施例 7 中所述， 使用适当的苯基溴和适当的乙烯基二氧杂硼 戊烷， 制备以下表格中的以下实施例。实施例 10
5-((E)-3， 8- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-1， 3- 二氢 - 苯 并咪唑 -2- 亚基 - 氰酰胺
在 (E)-N-(5-((E)-3， 8- 二 氟 -6H- 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11- 亚 基 甲 基 )-1-(4- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 氰酰胺 ( 实施例 9) 的 最后纯化期间分离标题化合物作为副产物。LC-MS m/z 401.3[M+H]+。
制备例 89
[4-((E)-3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-2- 硝基 - 苯 基 ]-(1- 甲基 - 氮杂环丁烷 -3- 基 )- 胺
用氮气将密封管中的 (4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 )-(1- 甲基 - 氮杂环丁烷 -3- 基 )- 胺 (709μmol， 203mg)， (E)-3， 7- 二 氟 -11-(4， 4， 5， 5- 四 甲 基 -[1， 3， 2] 二 氧 杂 硼 杂 环 戊 烷 -2- 基 亚 甲 基 )-6， 11- 二 氢 - 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 (723μmol， 268mg) 在 甲 醇 (1.0mL)/ 四 氢 呋 喃 (3.0mL)(1 ∶ 3 溶 剂 比 ) 中 的 混 合 物 吹 扫 五 分 钟。 添 加 甲 醇 钠 (1.42mmol， 77mg)， 四 ( 三苯基膦 ) 钯 (35μmol， 41mg) 并在 70℃加热一夜。用乙酸乙酯稀 释， 用 10％碳酸氢钠洗涤两次， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并在真空中浓缩， 得到 377mg 橙色 油残余物。用二氯甲烷中的 5％甲醇作为洗脱剂淋洗， 在 12g 硅胶柱上纯化， 得到标题化合 + 物 (199mg， 62％ )。LC-MS m/z 450.0[M+H] 。
实施例 11
(E)-N-(5-((E)-3， 7- 二 氟 -6H- 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11- 亚 基 甲 基 )-1-(1- 甲基 - 氮杂环丁烷 -3- 基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 氰酰胺
将 [4-((E)-3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-2- 硝基 - 苯 基 ]-(1- 甲基 - 氮杂环丁烷 -3- 基 )- 胺 (4.23mmol， 1.90g)， 三乙胺 (9.31mmol， 1.30mL) 溶于四氢呋喃 (20mL) 中， 添加 5％碳上铂 (200mg) 并在 35℃氢化 (50psi) 一小时。滤掉催 化剂， 用吡啶 (20mL) 冲洗， 添加 N- 氰基碳酰亚胺二苯酯 (4.65mmol， 1.11g) 并在氮气下在 室温下搅拌一夜。用乙酸乙酯稀释， 用 5％碳酸氢钠水溶液洗涤两次， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并在真空中浓缩， 得到大约 3g 橙色油。用二氯甲烷中的 5％甲醇作为洗脱剂淋洗， 在 80g 硅胶柱上纯化， 得到约 930mg 的黄色半固体。溶于最低量甲醇中并静置。形成白色固 体。 30 分钟之后， 滤掉固体并用甲醇冲洗， 得到白色固体形式的标题化合物 (815mg， 41％ )。 + LC-MS m/z470.2[M+H] 。
基本如制备例 89 和实施例 11 中所述， 使用适当的苯基溴和适当的乙烯基二氧杂 硼戊烷， 制备以下表格中的以下实施例。
制备例 90
[4-((E)-3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-2- 硝基 - 苯 基 ]-((7S， 8aS)- 六氢 - 吡咯并 [2， 1-c][1， 4] 噁嗪 -7- 基 )- 胺
用氮气将 (4- 溴 -2- 硝基 - 苯基 )-((7S， 8aS)- 六氢 - 吡咯并 [2， 1-c][1， 4] 噁 嗪 -7- 基 )- 胺 (0.011mol， 4.0g)， (E)-3， 7- 二氟 -11-(4， 4， 5， 5- 四甲基 [1， 3， 2] 二氧杂硼 杂环戊烷 -2- 基亚甲基 )-6， 11- 二氢 - 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 (0.012mol， 4.76g)， 三苯 基膦 (0.0031mol， 0.8g) 和甲醇钠 (0.03mol， 1.6g) 在四氢呋喃 / 甲醇 (3 ∶ 1)(120mL) 中 的混合物脱气三次。向反应混合物添加乙酸钯 (II)(1.0mmol， 240mg)， 再用氮气脱气三次。 在 70℃加热反应混合物 4 小时。 将反应混合物冷却到室温， 经由硅藻土柱塞过滤， 在减压下 浓缩滤出液得到标题化合物 (5.0g， 粗品 )。
实施例 14
(E)-N-(5-((E)-3， 7- 二 氟 -6H- 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11- 亚 基 甲 基 )-1-((7S， 8aS)- 六氢 - 吡咯并 [2， 1-c][1， 4] 噁嗪 -7- 基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚
基 )- 氰酰胺
将 [4-((E)-3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-2- 硝基 - 苯 基 ]-((7S， 8aS)- 六 氢 - 吡 咯 并 [2， 1-c][1， 4] 噁 嗪 -7- 基 )- 胺 (0.009mol， 5.0g) 溶 于 四氢呋喃 (40mL) 中。添加三乙胺 (0.009mol， 0.9g) 和 10％碳上铂 (1.0g) 并在室温下在 50psi(H2) 下在 Parr 振荡器中氢化 3 小时。经由硅藻土柱塞滤掉催化剂， 向滤出液中添加 吡啶 (40mL) 和 N- 氰基碳酰亚胺二苯酯 (0.009mol， 2.35g)。在室温下搅拌 16 小时， 然后在 60-70℃加热 8 小时。在减压下去除溶剂。将所得残余物溶于二氯甲烷中， 用水和饱和碳酸 氢钠溶液洗涤。 用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和在减压下浓缩。 使用二氯甲烷中的 1％甲 醇作为洗脱剂， 在硅胶柱上纯化， 得到标题化合物 (1.9g， 36％ )。LC-MS m/z 526.4[M+H]+。
基本如制备例 90 和实施例 14 中所述， 使用适当的苯基溴和适当的乙烯基二氧杂 硼戊烷并在约 70℃下加热 4 至 16 小时， 制备以下表格中的以下实施例。
制备例 91
(3S， 4S)-4-(4-((E)-(3- 氟二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11(6H)- 亚基 ) 甲基 )-2- 硝 基苯基氨基 )-1- 甲基吡咯烷 -3- 醇
将 (3S， 4S)-4-(4- 溴 -2- 硝 基 苯 基 氨 基 )-1- 甲 基 吡 咯 烷 -3- 醇 (17.6mmol， 5.55g)， (E)-2-((3- 氟 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11(6H)- 亚 基 ) 甲 基 )-4， 4， 5， 5- 四 甲 基 -1， 3， 2- 二 氧 杂 硼 戊 烷 (16.0mmol， 5.62g)， 三 苯 基 膦 (2.87mmol， 0.75g)， 和 K2CO3(44.7mmol， 6.18g) 在 110mL 二噁烷∶水 (3 ∶ 1) 中混合。 通过用氮气鼓泡五分钟使混 合物脱气， 添加乙酸钯 (II)(0.48mmol， 322mg)， 并在氮气下在 82℃加热 3.5 小时。冷却至 室温， 用水和二氯甲烷稀释， 然后经过硅藻土垫。分离各相， 用二氯甲烷萃取水相两次。合 并有机相， 用盐水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 在真空中去除溶剂。溶于 4 ∶ 1 CH2Cl2/ MeOH 中， 使用相同溶剂经过二氧化硅柱塞。 浓缩滤出液， 并用甲醇研磨。 通过过滤收集所得 1 固体， 得到红色固体形式的标题化合物 (4.12g， 56％ ) ： H NMR(300MHz， CDCl3)δ2.23(dd， J ＝ 9.9， 5.6Hz， 1H)， 2.38(s， 3H)， 2.28-2.26(m， 1H)， 2.70(d， J ＝ 3.5Hz， 2H)， 3.36(dd， J＝ 9.8， 7.1Hz， 1H)， 3.91-3.87(m， 1H)， 4.01(br s， 1H)， 5.00-4.80(m， 1H)， 5.70-5.50(m， 1H)， 6.52(dd， J ＝ 10.3， 2.6Hz， 1H)， 6.68-6.64(m， 1H)， 6.78-6.75(m， 2H)， 7.01(d， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 7.08(d， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 7.24-7.22(m， 1H)， 7.35(dt， J ＝ 1.5， 1.2Hz， lH)， 7.42(dd， J ＝ 8.7， 6.6Hz， 1H)， 7.47(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 7.94(s， 1H)， 8.00(d， J ＝ 6.2Hz， 1H)。
实施例 26
(E)-N-(5-((E)-(3- 氟二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11(6H)- 亚基 ) 甲基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟基 -1- 甲基吡咯烷 -3- 基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -2(3H)- 亚基 )- 氰酰胺
向 (3S， 4S)-4-(4-((E)-(3- 氟 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11(6H)- 亚 基 ) 甲 基 )-2- 硝基苯基氨基 )-1- 甲基吡咯烷 -3- 醇 (3.10mmol， 1.43g) 在异丙醇 (85mL) 和三乙 胺 (9.3mmol， 1.30mL) 中的溶液中添加 5％ Pt/C(420mg)， 并在 50psi 下氢化 1.5 小时。经 硅藻土柱塞滤过， 用异丙醇 (50mL) 洗涤。添加氰基碳酰亚胺二苯酯 (3.1mmol， 0.74g) 并在 室温下搅拌一夜， 然后加热回流 3 小时。去除溶剂， 用二氯甲烷中的 0％至 20％甲醇的梯 度淋洗， 通过柱层析纯化残余物， 得到浅棕色固体形式的标题化合物 (955mg， 57％ )。[α] + 23 CH3OH)， ESI MS m/z 482[M+H] 。 D +13.8(c 0.17，
按照基本如制备例 91 和实施例 26 所述的方法， 使用适当的乙烯基溴和乙烯基二 氧杂硼戊烷并在约 80 至 85℃加热 3 至 16 小时， 制备以下实施例。使用 5％或 10％碳上铂 或碳上钯还原约 1-4 小时。
* 在 Suzuki 偶联反应中使用乙酸钾。
实施例 32
(E)-N-(5-((E)-3- 氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟基 -1- 甲基 -1- 氧 - 吡咯烷 -3- 基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 氰酰胺
向 (E)-N-(5-((E)-(3- 氟 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11(6H)- 亚 基 ) 甲 基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟基 -1- 甲基吡咯烷 -3- 基 )-lH- 苯并 [d] 咪唑 -2(3H)- 亚基 ) 氰 酰胺 (0.27mmol， 130mg) 在二氯甲烷 (10mL) 中的溶液中添加间氯过氧苯甲酸 (0.43mmol， 93mg)， 在室温下搅拌一夜。将溶液装载在二氧化硅上并用二氯甲烷中的 0 至 20％甲醇淋 洗， 通过闪蒸层析纯化， 得到标题化合物 (135mg， 100％ )。LC-MS m/z 498.2[M+H]+。
实施例 33
顺丁烯二酸 (E)-N-(5-((E)-(3- 氟二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11(6H)- 亚基 ) 甲 基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟基 -1- 甲基吡咯烷 -3- 基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -2(3H)- 亚基 ) 氰酰 胺
在 50 ℃ 将 乙 腈 (60mL) 中 的 (E)-N-(5-((E)-(3- 氟 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11(6H)- 亚 基 ) 甲 基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟 基 -1- 甲 基 吡 咯 烷 -3- 基 )-1H- 苯 并 [d] 咪唑 -2(3H)- 亚基 ) 氰酰胺 (7.10mmol， 3.42g) 加热 30 分钟， 立即添加 (Z)-2- 丁烯二酸 (7.10mmol， 837mg)。几分钟之后， 悬浮液变得均匀， 然后开始形成沉淀。将所得悬浮液冷却 至室温。 通过过滤收集固体， 用乙腈 (50mL) 洗涤， 在真空烘箱中在 50℃干燥 2 小时， 得到标 + 1 题化合物 (4.1g， 97％ )。LC-MS m/z 488.2[M+H] 。 H NMR(400MHz， DMSO-d6) ： 2.80(s， 3H)， 3.77-3.72(m， 8H)， 4.66-4.63(m， 1H)， 4.96-4.91(m， 1H)， 5.16-5.10(m， 1H)， 5.72-5.67(m， 1H)， 5.89-5.82(m， 1H)， 6.00(s， 2H)， 6.59(dd， J ＝ 2.6， 10.5Hz， 1H)， 6.80-6.76(m， 1H)，
6.86(s， 1H)， 6.94-6.90(m， 2H)， 7.02(s， 1H)， 7.22(td， J ＝ 7.5， 1.3Hz， 1H)， 7.30(d， J ＝ 8.8Hz， 1H)， 7.36(td， J ＝ 7.5， 1.3Hz， 1H)， 7.61-7.57(m， 2H)。
替代程序 ：
将 (E)-N-(5-((E)-(3- 氟 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11(6H)- 亚 基 ) 甲 基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟基 -1- 甲基吡咯烷 -3- 基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -2(3H)- 亚基 )- 氰 酰胺 (145mg) 溶于乙腈 (5mL) 中， 加热至 50℃， 得到不透明溶液。将 2- 丁烯二酸 (35mg) 溶 于 THF(300μL) 中， 缓慢加入到乙腈中， 形成透明溶液。将溶液冷却至室温， 同时搅拌得到 沉淀物。继续搅拌该溶液一夜。快速过滤所得固体， 在 40℃在真空下干燥 2 小时。在随后 TGA( 热解重量分析 ) 热谱图中观察到残余乙腈， 将材料进一步干燥一夜。
制备例 92
(3R， 4R)-4-[4-((E)-3， 7- 二 氟 -6H- 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11- 亚 基 甲 基 )-2- 硝基 - 苯基氨基 ]-1- 甲基 - 哌啶 -3- 醇
用 氮 气 将 (3R， 4R)-4-(4- 溴 -2- 硝 基 - 苯 基 氨 基 )-1- 甲 基 - 哌 啶 -3- 醇 (0.009mol， 3.0g)， (E)-3， 8- 二氟 -11-(4， 4， 5， 5- 四甲基 [1， 3， 2] 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 亚甲基 )-6， 11- 二氢 - 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 (0.01mol， 3.7g， 1.1 当量 )， 三苯基膦 (0.002mol， 0.61g) 和甲醇钠 (0.02mol， 1.2g) 在四氢呋喃 / 甲醇 (3 ∶ 1)(150mL) 中的混合 物脱气三次。向反应混合物中添加乙酸钯 (II)(0.8mmol， 183mg)， 再用氮气脱气三次。在
70℃加热反应混合物 16 小时。将反应混合物冷却到室温， 经由硅藻土柱塞过滤， 在减压下 浓缩滤出液得到标题化合物 (6.6g， 粗品 )。
实施例 34
(E)-N-(5-((E)-3， 7- 二 氟 -6H- 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11- 亚 基 甲 基 )-1-((3R， 4R)-3- 羟基 -1- 甲基 - 哌啶 4- 基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 氰酰 胺
将 (3R， 4R)-4-[4-((E)-3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲 基 )-2- 硝基 - 苯基氨基 ]-1- 甲基 - 哌啶 -3- 醇 (0.009mol， 4.48g) 溶于四氢呋喃 (100mL) 中。添加三乙胺 (0.018mol， 1.83g) 和 10 ％碳上铂 (2.2g) 并在室温下在 50psi(H2) 下在 Parr 振荡器中氢化 4 小时。经由硅藻土柱塞滤掉催化剂。向滤出液中添加吡啶 (100mL) 和 N- 氰基碳酰亚胺二苯酯 (0.009mol， 2.16g)。在室温下搅拌 16 小时然后在 60-70 ℃加 热 8 小时。在减压下去除溶剂。将残余物溶于二氯甲烷中， 用水和饱和碳酸氢钠溶液洗 涤。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和在减压下浓缩。使用二氯甲烷中的 5％甲醇作为洗 脱剂， 在硅胶柱上纯化， 得到灰白色固体形式的标题化合物 (1.2g， 26％ )。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.66-1.8(m， 1H)， 1.75-1.78(m， 1H)， 1.87-1.90(m， 1H)， 2.03(br s， 1H)， 2.24(s， 3H) ， 2.81(br s ， 1H) ， 2.96(br s ， 1H) ， 3.99(br s ， 1H) ， 4.31(br s ， 1H) ， 5.09(s ， 1H) ， 5.36(br s， 1H)， 5.46(br s， 1H)， 6.68(dd， 1H)， 6.82-6.87(m， 3H)， 6.99(d， 1H)， 7.09(s， 1H)， 7.26-7.35(m， 3H)， 7.62(t， 1H)， 12.49(br s， 1H)。
实施例 35
(E)-N-(5-((E)-3， 7- 二 氟 -6H- 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11- 亚 基 甲 基 )-1-((3S， 4S)-3- 羟基 -1- 甲基 - 哌啶 4- 基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 氰酰 胺
将 4-[4-((E)-3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-2- 硝基 - 苯基氨基 ]-1- 甲基 - 哌啶 -3- 醇 (0.012mol， 5.97g) 溶于四氢呋喃 (50mL) 中。添加 三乙胺 (0.024mol， 2.44g) 和 10％碳上铂 (2.9g) 并在室温下在 50psi(H2) 下在 Parr 振荡 器中氢化 4 小时。经由硅藻土滤掉催化剂。向滤出液中添加吡啶 (50mL) 和 N- 氰基碳酰亚 胺二苯酯 (0.012mol， 2.88g)。在室温下搅拌 16 小时然后在 60-70℃加热 8 小时。在减压 下去除溶剂， 将残余物溶于二氯甲烷中， 用水和饱和碳酸氢钠溶液洗涤。 用无水硫酸钠干燥 有机层， 过滤和在减压下浓缩。使用二氯甲烷中的 5％甲醇作为洗脱剂， 在硅胶柱上纯化残 余物， 得到灰白色固体形式的标题化合物 (1.7g， 27％ )。LC-MS m/z 514.4[M+H]+。
按照基本如制备例 92 和实施例 34 和 35 所述的方法， 使用适当的苯基溴和乙烯基 二氧杂硼戊烷并在约 80 至 85℃加热 3 至 16 小时， 制备以下实施例。使用 5％或 10％碳上 铂或碳上钯还原约 1-4 小时。
实施例 40
(E)-N-(5-((E)-3， 7- 二 氟 -6H- 二 苯 并 [b， e] 氧 杂 环 庚 烷 -11- 亚 基 甲 基 )-1-((R)-1- 甲基 -2- 吗啉 -4- 基 - 乙基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 脲
通 过 用 二 噁 烷 (20mL) 稀 释 12M 盐 酸 (10mL)， 制 备 4M 氯 化 氢 在 二 噁 烷 中 的 溶 液。在室温下向 (E)-N-((R)-5-((E)-3， 7- 二氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚 基甲基 )-1-(1- 甲基 -2- 吗啉 -4- 基 - 乙基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 氰酰胺 (0.005mol， 3.0g) 中缓慢添加该溶液， 并搅拌 48 小时。用 4N 氢氧化钾水溶液终止反应混 合物， 用二氯甲烷萃取并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层， 过滤和在 减压下浓缩。使用二氯甲烷中的 1％甲醇作为洗脱剂， 在硅胶柱上纯化， 得到灰白色固体形 1 式的标题化合物 (1.2g， 38％ )。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)(E， Z)-N 异构体的混合物。主要 异构体： δ1.44(d， 3H)， 2.23-2.26(m， 2H)， 2.32-2.33(m， 1H)， 2.63(dd， 1H)， 2.77-2.82(m， 1H)， 3.29-3.46(m， 5H)， 4.77-4.82(m， 1H)， 5.35-5.44(br d， 2H)， 6.65(dd， 1H)， 6.89(dt， 3H) ， 7.13(s ， 1H) ， 7.1(s ， 1H) ， 7.21-7.28(m ， 2H) ， 7.31-7.42(m ， 1H) ， 7.55-7.62(m ， 1H) ， 9.95(s， 1H)。次要异构体 ： δ1.39(d， 3H， E， Z- 异构体 )， 2.23-2.26(m， 2H)， 2.32-2.33(m， 2H) ， 2.88-3.0(m ， 1H) ， 3.29-3.46(m ， 5H) ， 4.80-4.99(m ， 1H) ， 5.35-5.44(br d ， 2H) ， 6.65(dd， 1H)， 6.89(dt， 3H)， 7.13(s， 1H)， 7.1(s， 1H)， 7.21-7.28(m， 2H)， 7.31-7.42(m， 1H)， 7.55-7.62(m， 1H)， 9.95(s， 1H)。
实施例 41
(E)-N-(5-((E)-3- 氟 -6H- 二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11- 亚基甲基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟基 -1- 甲基 - 吡咯烷 -3- 基 )-1， 3- 二氢 - 苯并咪唑 -2- 亚基 )- 脲
向三氟乙酸 (30mL) 和水 (6.0 当量， 100mmol， 1.81mL) 在冰浴中的混合物中添加顺 丁烯二酸 (E)-N-(5-((E)-(3- 氟二苯并 [b， e] 氧杂环庚烷 -11(6H)- 亚基 ) 甲基 )-1-((3S， 4S)-4- 羟基 -1- 甲基吡咯烷 -3- 基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -2(3H)- 亚基 ) 氰酰胺 (16.73mmol， 10.00g)。将所得悬浮液加热至室温并搅拌 2 小时。用乙酸乙酯 (250mL) 稀释该溶液， 在冰 浴中冷却混合物 30 分钟， 用 5N 氢氧化钠处理至 pH ＝ 11。用盐水洗涤有机层， 用无水硫酸 钠干燥， 和在减压下浓缩。用乙酸乙酯中的 2.5 至 5％甲醇淋洗， 通过柱层析纯化残余物， 得到白色固体。在 40℃下在真空烘箱中干燥一夜， 得到标题化合物 (6.74g， 81％ )。LC-MS
m/z 500.2[M+H]+。
基本按照如实施例 40 或 41 中所述， 使用适当的氰基胍制备以下实施例。
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