HEDGEHOG途径拮抗剂及其治疗应用.pdf

材料和方法

所有试剂和溶剂均获自商品来源。通过注射转移空气和湿度敏感性液体溶液。然后通过薄层色谱法(TLC)和/或液相色谱法-质谱法(LC-MS)监测反应过程。

使用安装了PFG ATB宽带探头的Varian Mercury Plus 400MHz光谱仪记录全部核磁共振谱。

使用安装了Waters Micromass ZQ(ES离子化)和Waters PDA2996的Waters 2795分离模块、使用Waters XTerra MS C₁₈ 3.5μm 2.1x50mm柱进行10分钟方法。

使用二元Gradient Module Waters 2525泵并且结合WatersMicromass ZQ(ES)或Waters 2487 DAD、使用Supelco Discovery HSC185.0μm 10x 21.2mm柱进行制备型HLPC。

使用0.1％甲酸/水和0.1％甲酸/乙腈以梯度5/95-95/5在所示运行时间内运行梯度。

使用硅胶柱isolute flash Si进行纯化，纯度高于95％。

使用硅胶(Merck 60 F254)进行全部TLC分析并且通过在254nmUV显影和KMnO₄或茚三酮染色进行全部分析。

微波：Personal Chemistry，Emrys Optimizer，微波反应器，吸收设定在正常预先搅拌时间10s。

实施例1：(2-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌嗪-1-基}-乙基)-二甲基-胺

2-氯-5-[4-(2-二甲氨基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸乙酯

方法A-步骤a-将5-溴-2-氯苯甲酸乙酯(0.80g，3.04mmol)、rac-2，2’-双(二苯基膦基)-1，1’-联萘(BINAP)(0.19g，0.30mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd₂(dba)₃)(0.28g，0.30mmol)和碳酸铯(Cs₂CO₃)(1.39g，4.26mmol)放入Schlenk管并且通过反复氮气/真空循环净化30分钟。然后加入干甲苯(6mL)和1-(2-二甲氨基乙基)哌嗪(0.55mL，3.65mmol)。将该反应混合物在室温搅拌10min，在85℃加热过夜，然后冷却至室温。用EtOAc(30mL)稀释该溶液，过滤出不溶物，用饱和盐水(15mL)洗涤滤液。用Na₂SO₄干燥有机相，过滤，减压浓缩，得到残余物，通过快速色谱法纯化(洗脱梯度：EtOAc，EtOAc∶MeOH/1∶1，EtOAc∶MeOH∶NH₃的MeOH中溶液(2M)/1∶1∶0.2)，得到0.30g标题化合物(30％)。¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.28(3H，t)，2.12(6H，s)，2.32-2.42(4H，m)，2.47-2.51(4H，m)，3.11-3.14(4H，m)，4.27(2H，q)，7.06-7.09(1H，m)，7.18-7.19(1H，m)，7.30-7.32(1H，m)。

2-氯-5-[4-(2-二甲氨基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸

方法A-步骤b-将2-氯-5-[4-(2-二甲氨基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸乙酯(0.46g，1.36mmol)在EtOH(6mL)和NaOH 10％(2mL)中的溶液在回流状态加热过夜，然后将该反应混合物冷却至室温，通过减压蒸发浓缩有机溶剂。通过滴加1N HCl中和得到的溶液，然后减压蒸发水。将得到的残余物溶于EtOH(10mL)，过滤出不溶物，在室温减压浓缩滤液，得到0.24g标题化合物(58％)，不再纯化。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ2.27(6H，s)，2.46-2.55(8H，m)，3.04-3.06(4H，m)，7.76-7.79(1H，m)，6.92-6.93(1H，m)，7.07-7.09(1H，m)。

N-(2-氨基-苯基)-2-氯-5-[4-(2-二甲氨基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酰胺

方法A-步骤c-向2-氯-5-[4-(2-二甲氨基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酸(0.40g，1.29mmol)在干DMF(5mL)中的溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(0.25g，1.29mmol)，然后加入水合1-羟基苯并三唑(1-HOBt)(0.11g，0.77mmol)和二甲基-吡啶-4-基-胺(DMAP)(0.08g，0.64mmol)。在室温搅拌3h后，加入1，2-苯二胺(0.21g，1.93mmol)，将得到的混合物在室温搅拌过夜。减压蒸发溶液，然后用二氯甲烷(20mL)稀释，用饱和Na₂CO₃溶液(2x 5mL)洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，减压蒸发。通过快速色谱法纯化得到的固体(洗脱液：二氯甲烷∶MeOH∶NH3的MeOH溶液(2M)/9∶0.5∶0.5)，得到0.18g(35％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ2.13(6H，m)，2.35-2.41(4H，m)，2.48-2.53(4H，m)，3.14-3.18(4H，m)，4.91(2H，br s)，6.54-6.59(1H，m)，6.73-6.75(1H，m)，6.92-7.00(2H，m)，7.11-7.12(1H，m)，7.23-7.25(1H，m)，7.28-7.33(1H，m)，9.62(1H，brs)。

(2-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌嗪-1-基}-乙基)-二甲基-胺

方法A-步骤d-将N-(2-氨基-苯基)-2-氯-5-[4-(2-二甲氨基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯甲酰胺(0.35g，0.87mmol)在乙酸(15mL)中的溶液在85℃加热7h，然后减压除去溶剂，将残余物与Et₂O一起研磨，得到0.25g(75％)的标题化合物，其为固体，不再纯化。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ2.12(6H，s)，2.33-2.42(4H，m)，2.49-2.57(4H，m)，3.16-3.19(4H，m)，7.07(1H，dd)，7.18-7.23(2H，m)，7.33(1H，d)，7.38-7.41(1H，m)，7.52(1H，d)，7.65-7.67(1H，m)，12.60(1H，s)。m/z 384(M+H)⁺，保留时间＝0.68。

实施例2：4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯4-(3-羧基-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯

方法B-步骤b-将4-(3-乙氧基羰基-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.00g，14.95mmol)在EtOH(50mL)和NaOH 10％(20mL)中的溶液回流3h，然后将该反应混合物冷却至室温，减压蒸发有机溶剂。通过滴加1N HCl中和得到的溶液，用EtOAc(3x50mL)萃取水溶液。用Na₂SO₄干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到3.90g标题化合物(85％)，不再纯化。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.40(9H，s)，3.15-3.18(4H，m)，3.47-3.49(4H，m)，7.27-7.29(1H，m)，7.32-7.37(1H，m)，7.42-7.44(1H，m)，7.54(1H，brs)。

4-[3-(2-氨基-苯基氨基甲酰基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯

方法B-步骤c-将4-(3-羧基-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.80g，18.95mmol)和1，1-羰基二咪唑(CDI)(3.07g，18.95mmol)在乙腈(120mL)中的溶液在室温搅拌3h，然后加入1，2-苯二胺(2.25g，20.85mmol)。将得到的混悬液回流3h，然后冷却至室温，减压蒸发溶剂。用二氯甲烷(200mL)稀释得到的残余物，用水(3x40mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，减压蒸发。使粗产物从EtOAc中重结晶，得到2.99g(40％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.40(9H，m)，3.15-3.17(4H，m)，3.45-3.47(4H，m)，4.85(2H，br s)，6.56-6.60(1H，m)，6.75-6.77(1H，m)，6.93-6.97(1H，m)，7.11-7.14(2H，m)，7.30-7.34(1H，m)，7.38-7.40(1H，m)，7.51(1H，brs)，9.60(1H，brs)。

4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯

方法B-步骤d-将4-[3-(2-氨基-苯基氨基甲酰基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.20g，3.03mmol)在乙酸(12mL)中的溶液在55℃加热过夜，然后减压蒸发溶剂。将得到的固体与Et₂O一起研磨，得到标题化合物，为白色固体(0.90g，79％)，不再纯化。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.41(9H，m)，3.19-3.21(4H，m)，3.48-3.50(4H，m)，7.05-7.08(1H，m)，7.17-7.18(2H，m)，7.35-7.40(1H，m)，7.51-7.73(4H，m)，12.80(1H，brs)。m/z 379(M+H)⁺；保留时间＝2.58。

实施例3：2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑二盐酸盐

2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑二盐酸盐

方法B-步骤e-向4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.80g，4.76mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中加入2M HCl的Et₂O(8mL)溶液，将得到的混合物在室温搅拌6h。

然后减压除去溶剂，将得到的盐与Et₂O一起研磨，得到1.66g(100％)的标题化合物，为二盐酸盐。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ3.34-3.37(4H，m)，3.54-3.57(4H，m)，7.34-7.37(1H，m)，7.52-7.58(4H，m)，7.74-7.77(3H，m)。m/z 279(M+H)⁺；保留时间＝0.26。

实施例4：{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-(1-甲基-哌啶-4-基)-甲酮

{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-(1-甲基-哌啶-4-基)-甲酮

方法B-步骤f-向1-甲基哌啶-4-甲酸盐酸盐(0.13g，0.72mmol)和N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(0.16mL，0.72mmol)在乙腈(8mL)中的溶液这加入CDI(0.12g，0.72mmol)，将得到的混悬液在室温搅拌5h。然后加入2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑二盐酸盐(0.20g，0.57mmol)，将得到的溶液在65℃加热过夜。然后将该溶液冷却至室温，除去溶剂。将粗产物再溶于二氯甲烷(15mL)，在搅拌下加入饱和NaHCO₃溶液(6mL)。然后过滤得到的沉淀，用水(3mL)和乙醚(5mL)洗涤，减压干燥，得到0.20g(87％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.80-1.84(4H，m)，2.19-2.26(2H，m)，2.35(3H，s)，2.79-2.83(1H，m)，2.99-3.02(2H，m)，3.28-3.33(4H，m)，3.78-3.79(4H，m)，7.10-7.15(1H，m)，7.24-7.27(2H，m)，7.40-7.44(1H，m)，7.55-7.59(3H，m)，7.73-7.74(1H，m)。m/z 404(M+H)⁺；保留时间＝1.10。

实施例5：2-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基甲基)-哌嗪-1-基]-苯基}-1H-苯并咪唑甲酸酯

2-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基甲基)-哌嗪-1-基]-苯基}-1H-苯并咪唑

方法B-步骤g-向{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-(1-甲基-哌啶-4-基)-甲酮(0.12g，0.35mmol)在干THF(4mL)中的溶液中加入硼烷-甲基硫复合物的THF溶液((CH₃)₂S.BH₃)(0.07mL，0.74mmol)，将得到的混悬液在60℃加热过夜。然后将反应冷却至室温，减压除去溶剂，向残余物中加入1N HCl(3mL)，然后在100℃加热5h。然后将反应冷却至室温，用10％NaOH中和，用二氯甲烷(3x10mL)萃取。用Na₂SO₄干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到残余物，通过制备型HPLC纯化，得到0.08g(69％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.55-1.61(2H，m)，2.01-2.06(3H，m)，2.63-2.81(5H，m)，2.94-3.00(2H，m)，3.09-3.11(4H，m)，3.43-3.48(6H，m)，7.08-7.11(1H，m)，7.26-7.28(2H，m)，7.38-7.42(1H，m)，7.57-7.63(3H，m)，7.70-7.71(1H，m)，8.36(3H，s)。m/z 390(M+H)⁺；保留时间＝0.21。

实施例6：4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯

4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯

方法C-步骤a.-将4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.83g，2.20mmol)(如方法B所述制备)和NaH 60％油溶液(0.11g，4.39mmol)在THF(10mL)中的混合物在室温搅拌1h。加入碘甲烷(0.27mL，4.39mmol)，将得到的溶液搅拌过夜。向反应混合物中加入水(15mL)，然后用1N HCl中和该混悬液，用EtOAc(3x40mL)萃取。干燥合并的有机层(Na₂SO₄)，过滤，减压浓缩。将残余物与Et₂O一起研磨，过滤得到的固体，得到0.76g(88％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.40(9H，m)，3.18-3.20(4H，m)，3.45-3.48(4H，m)，3.85(3H，br s)，7.14-7.15(1H，m)，7.22-7.29(3H，m)，7.33(1H，brs)，7.39-7.42(1H，m)，7.60-7.62(1H，m)，7.65-7.67(1H，m)。m/z 393(M+H)⁺；保留时间＝2.56。

实施例7：1-甲基-2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑二盐酸盐

1-甲基-2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑二盐酸盐

方法C-步骤b-向4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.30g，3.32mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中加入2MHCl的Et₂O(9mL)溶液，将得到的溶液在室温搅拌6h。

然后减压除去溶剂，将得到的盐与Et₂O一起研磨，得到1.21g(100％)的标题化合物，为二盐酸盐。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ3.42-3.44(m，4H)，3.60-3.63(m，4H)，4.13(s，3H)，7.41-7.48(m，2H)，7.53-7.55(m，1H)，7.65-7.73(m，3H)，7.85-7.88(m，1H)，7.97-7.99(m，1H)。m/z 293(M+H)⁺；保留时间＝0.30。

实施例8：环丙基-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-甲酮

环丙基-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-甲酮

方法C-步骤c-向环丙烷甲酸(0.06g，0.68mmol)在乙腈(8mL)中的溶液中加入CDI(0.11g，0.68mmol)，将得到的混悬液在室温搅拌5h。加入1-甲基-2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑二盐酸盐(0.20g，0.55mmol)，将得到的溶液在65℃加热过夜。然后将反应冷却至室温，减压除去溶剂。将粗产物再溶于二氯甲烷(15mL)，用饱和NaHCO₃溶液(2x3mL)洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，减压浓缩。通过快速色谱法纯化残余物(洗脱液：环己烷∶EtOAc，梯度100％环己烷-100％乙酸乙酯)，得到0.17g(85％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ0.82-0.84(2H，m)，0.89-0.91(2H，m)，1.99-2.00(1H，m)，3.24-3.28(2H，m)，3.29-3.35(2H，m)，3.67-3.78(2H，m)，3.85(3H，brs)，3.89-3.95(2H，m)，7.16-7.22(1H，m)，7.28-7.35(3H，m)，7.44(1H，t)，7.51-7.53(1H，m)，7.66-7.68(1H，m)。m/z 361(M+H)⁺；保留时间＝1.75。

实施例9：2-{3-[4-环丙基甲基-哌嗪-1-基]-苯基}-1-甲基-1H-苯并咪唑甲酸酯

2-{3-[4-环丙基甲基-哌嗪-1-基]-苯基}-1-甲基-1H-苯并咪唑

方法C-步骤d-向环丙基-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-甲酮(0.17g，0.47mmol)在干THF(3.50mL)中的溶液中加入(CH₃)₂S.BH₃的THF溶液(0.11mL，1.18mmol)，将得到的混悬液在65℃加热过夜。然后将反应溶液冷却至室温，减压除去溶剂，向残余物中加入1N HCl(3mL)，然后在100℃加热6h。将该反应冷却至室温，然后通过滴加15％NaOH使呈碱性，用EtOAc(3x10mL)萃取。用Na₂SO₄干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到残余物，通过制备型HPLC纯化，得到0.05g(32％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ0.42-0.46(2H，m)，0.74-0.78(2H，m)，1.14-1.17(1H，m)，3.06-3.08(2H，m)，3.47(4H，brs)，3.57(4H，brs)，3.86(3H，s)，7.21-7.38(5H，m)，7.47-7.55(2H，m)，7.68-7.70(1H，m)，8.33(2H，s)。m/z347(M+H)⁺；保留时间＝0.65。

实施例10：3-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-吗啉-4-甲酸叔丁酯

3-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-吗啉-4-甲酸叔丁酯

方法D、E-步骤a-向吗啉-3，4-二甲酸-4-叔丁酯(0.16g，0.71mmol)在乙腈(8mL)中的溶液中加入CDI(0.16g，0.71mmol)，将得到的混悬液在室温搅拌过夜。加入1-甲基-2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑二盐酸盐(0.20g，0.55mmol)(如方法C所述制备)和DIPEA(0.19mL，1.10mmol)，将得到的溶液在65℃加热过夜。然后将该反应冷却至室温，除去溶剂，将粗产物溶于二氯甲烷(15mL)，用饱和NaHCO₃溶液洗涤(2x3mL)。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，减压浓缩。通过快速色谱法纯化残余物(洗脱液：梯度从环己烷到环己烷∶EtOAc 2∶1)，得到0.11g(40％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.44(9H，brs)，3.30-3.89(16H，brm)，4.02-4.18(2H，m)，7.20-7.26(2H，m)，7.30-7.37(3H，m)，7.47(1H，t)，7.55-7.57(1H，m)，7.67-7.68(1H，m)。m/z 506(M+H)⁺；保留时间＝2.24。

实施例11：{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-吗啉-3-基-甲酮盐酸盐

{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-吗啉-3-基-甲酮

方法D-步骤b-将3-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.15g，0.30mmol)在2M HCl的Et₂O溶液(3mL)中的溶液在室温搅拌过夜。

过滤沉淀，用乙醚洗涤，将固体溶于水(15mL)，用二氯甲烷(2x3mL)洗涤。然后用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，减压浓缩，得到0.09g(79％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ2.81(2H，d)，3.12-3.25(7H，m)，3.54-3.65(4H，m)，3.72(3H，brs)，3.77-3.89(2H，m)，7.04-7.10(2H，m)，7.16-7.24(3H，m)，7.32(1H，t)，7.38-7.40(1H，d)，7.56-7.58(1H，d)。m/z406(M+H)⁺；保留时间＝0.52。

实施例12：{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-(4-甲基-吗啉-3-基)-甲酮

{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-(4-甲基-吗啉-3-基)-甲酮

方法D-步骤c-向{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-吗啉-3-基-甲酮(0.08g，0.20mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(NaB(OAc)₃H)(0.17g，0.79mmol)在二氯乙烷(2mL)中的混悬液中加入甲醛37％(0.64mL，7.90mmol)。将该反应混合物在室温搅拌过夜，用饱和Na₂CO₃溶液(3mL)猝灭，然后用二氯甲烷(4x2mL)萃取。用Na₂SO₄干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到黄色油状物(0.08g，97％)。

¹H-NMR(MHz，CD3OD)：δ2.24(3H，s)，2.33-2.39(1H，m)，2.78-2.82(1H，m)，3.25-3.28(2H，m)，3.30-3.32(2H，m)，3.34-3.37(1H，m)，3.47-3.52(1H，m)，3.62-3.68(1H，m)，3.76-3.85(4H，m)，3.87(3H，s)，3.94-3.96(2H，m)，7.18-7.24(2H，m)，7.28-7.36(3H，m)，7.44-7.48(1H，m)，7.53-7.55(1H，m)，7.66-7.69(1H，m)。m/z 420(M+H)⁺；保留时间＝1.12。

实施例13：1-甲基-2-{3-[4-(4-甲基-吗啉-3-基甲基)-哌嗪-1-基]-苯基}-1H-苯并咪唑甲酸酯

1-甲基-2-{3-[4-(4-甲基-吗啉-3-基甲基)-哌嗪-1-基]-苯基}-1H-苯并咪唑

方法D-步骤d-在室温、在氮气气氛中向{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-(4-甲基-吗啉-3-基)-甲酮(0.06g，0.16mmol)在干THF(2mL)中的溶液中加入氢化铝锂(LiAlH₄)(0.02g，0.47mmol)。将反应在回流状态下加热2h，再加入其它的LiAlH₄(0.01g，0.24mmol)。30min后，将该溶液冷却至室温，用10％NaOH(3mL)猝灭，然后用二氯甲烷(3x 3mL)萃取。用Na₂SO₄干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩。然后通过制备型HPLC纯化粗产物，得到0.03g(41％)的标题化合物。

¹H-NMR(MHz，CD3OD)：δ2.49-2.54(1H，m)，2.66-2.77(4H，m)，2.88-2.94(1H，m)，2.96(3H，s)，3.09-3.16(1H，s)，3.57-3.63(1H，m)，3.29-3.43(6H，m)，3.78-3.86(1H，m)，3.88(3H，s)，3.92-3.97(1H，m)，4.01-4.05(1H，m)，7.16-7.18(2H，m)，7.31-7.39(3H，m)，7.38-7.46(1H，m)，7.55-7.58(1H，m)，7.67-7.70(1H，m)，8.28(2H，s)。m/z 406(M+H)⁺；保留时间＝0.92。

实施例14：3-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基甲基}-吗啉-4-甲酸叔丁酯甲酸酯

3-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基甲基}-吗啉-4-甲酸叔丁酯

方法E-步骤e-在室温、在氮气气氛中向3-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.21g，0.42mmol)在干THF(3mL)中的溶液中加入氢化铝锂(LiAlH₄)(0.05g，1.27mmol)。将反应在回流状态下加热2h。然后将该溶液冷却至室温，用15％NaOH猝灭，然后用二氯甲烷(3x10mL)萃取。用Na₂SO₄干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩。然后通过制备型HPLC纯化粗产物，得到0.09g(43％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.48(9H，s)，3.02-3.25(6H，m)，3.39-3.46(6H，m)，3.55-3.59(1H，m)，3.76-3.90(6H，m)，4.15-4.35(1H，m)，7.20-7.24(2H，m)，7.64-7.41(3H，m)，7.45-7.49(1H，m)，7.58-7.60(1H，m)，7.69-7.71(1H，m)。m/z 492(M+H)⁺；保留时间＝1.45。

实施例15：1-甲基-2-[3-(4-吗啉-3-基甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-苯并咪唑

1-甲基-2-[3-(4-吗啉-3-基甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-苯并咪唑

方法E-步骤f-向3-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基甲基}-吗啉-4-甲酸叔丁酯(0.07g，0.15mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入2M HCl的Et₂O溶液(3mL)，将得到的溶液在室温搅拌7h。

过滤出的得到的沉淀，用乙醚洗涤，然后通过制备型-HPLC纯化，用K₂CO₃碱化级分以避免最终的甲酰化，然后减压除去溶剂。然后用二氯甲烷(15mL)回收粗产物，用(3x4mL)水洗涤有机层，用Na₂SO₄干燥，过滤，减压浓缩，得到0.02g(37％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ2.11-2.24(2H，m)，2.48-2.58(3H，m)，2.71-2.76(2H，m)，2.83-2.89(1H，m)，2.98-3.06(1H，m)，3.19-3.24(4H，m)，3.28-3.38(2H，m)，3.62-3.71(2H，m)，3.86(3H，s)，7.08-7.12(1H，m)，7.17-7.30(4H，m)，7.35-7.40(1H，m)，7.58-7.67(2H，m)。m/z 392(M+H)⁺；保留时间＝0.77。

实施例16：(2-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-2-氧代-乙基)-氨基甲酸叔丁酯

(2-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-2-氧代-乙基)-氨基甲酸叔丁酯

方法F-步骤a-向N-(叔丁氧羰基)-甘氨酸(0.13g，0.74mmol)在乙腈(8mL)中的溶液中加入CDI(0.12g，0.68mmol)，将得到的混悬液在室温搅拌过夜。然后加入2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑二盐酸盐(0.20g，0.57mmol)(如方法B所述制备)和DIPEA(0.20mL，1.14mmol)，将得到的溶液在65℃加热过夜。然后将该反应冷却至室温，除去溶剂，用二氯甲烷(15mL)回收粗产物，用饱和NaHCO₃溶液(2x3mL)洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，减压浓缩。通过快速色谱法纯化残余物(洗脱液：环己烷∶EtOAc/2∶1)，得到0.14g(56％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.46(9H，s)，3.29-3.36(4H，m)，3.69-3.71(2H，m)，3.67-3.80(2H，m)，4.00(2H，s)，7.13-7.16(1H，m)，7.24-7.27(2H，m)，7.42(1H，t)，7.56-7.62(3H，m)，7.73-7.74(1H，m)。m/z436(M+H)⁺；保留时间＝2.13。

实施例17：2-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基]-乙胺

2-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基]-乙胺

方法F-步骤b-向溶液(2-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-2-氧代-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(0.12g，0.28mmol)在干THF(3.50mL)中的溶液中加入(CH₃)₂S.BH₃的THF溶液(0.06mL，0.69mmol)，将得到的混悬液在65℃加热过夜。然后将该反应冷却至室温，减压除去溶剂，将1N HCl(3mL)加入到残余物中，然后在100℃加热6h。将该反应冷却至室温，然后通过滴加15％NaOH使呈碱性，过滤得到的白色固体，用水和乙醚洗涤，得到0.06g(73％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ2.60-2.70(6H，m)，2.98-3.01(2H，m)，3.30-3.34(6H，m)，7.10(1H，d)，7.24-7.26(2H，m)，7.39(1H，t)，7.52(1H，d)，7.53-7.60(2H，m)，7.73(1H，br s)。m/z 322(M+H)⁺；保留时间＝0.22。

实施例7：1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-醇

8-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷

使用与方法A所用相同的方法，以1，4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐为原料。

得到1.25g标题化合物(77％，最后步骤)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.70(4H，br s)，3.31-3.34(4H，m)，3.90(4H，brs)，7.09-7.12(1H，m)，7.19-7.21(2H，m)，7.37-7.40(2H，m)，7.60(2H，brs)，12.62(1H，s)。

1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-酮

方法G、H-步骤a-向8-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷(2.00g，5.42mmol)在水(50mL)中的混悬液中滴加H₂SO₄(2.50mL)，将得到的溶液在室温搅拌72h。用Na₂CO₃中和该溶液，将得到的油状物在水中静置固化。过滤沉淀，干燥，得到1.60g(90％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ2.43(4H，t)，3.68(4H，t)，7.22-7.25(1H，m)，7.33-7.36(2H，m)，7.46-7.50(2H，m)，7.69-7.71(2H，m)。

实施例18：1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-醇

1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-醇

方法G-步骤b-向1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-酮(0.05g，0.17mmol)在甲醇(50mL)中的混悬液中加入硼氢化钠(NaBH₄)(0.01g，0.17mmol)，将得到的混合物在室温搅拌1h，然后用几滴水猝灭。减压除去溶剂，将粗产物溶于EtOAc(5mL)，过滤，然后减压蒸发有机相，得到0.02g(36％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.43-1.45(2H，m)，1.78-1.80(2H，m)，2.89-2.94(2H，m)，3.56-3.64(3H，m)，4.68(1H，d)，7.06-7.08(1H，m)，7.18-7.21(2H，m)，7.33-7.40(2H，m)，7.52(1H，d)，7.66(1H，d)，12.59(1H，s)。m/z 328(M+H)⁺；保留时间＝1.55。

实施例19：2-[5-(4-氮杂庚环-1-基-哌啶-1-基)-2-氯-苯基]-1H-苯并咪唑2-[5-(4-氮杂庚环-1-基-哌啶-1-基)-2-氯-苯基]-1H-苯并咪唑

方法H-步骤c-向1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-酮(0.10g，0.31mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混悬液中加入氮杂庚环(0.05mL，0.46mmol)。在室温搅拌30min后，加入1滴乙酸，1h后，再加入等分部分的氮杂庚环(0.05mL，0.46mmol)，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(NaB(OAc)₃H)(0.10g，0.46mmol)。将该反应混合物在室温搅拌过夜，然后减压除去溶剂，将粗产物溶于二氯甲烷(10mL)。向该溶液中加入PS-异氰酸酯树脂(PS-NCO)(Argonaut，载量0.93mmol/g)，然后将该混合物在室温振摇过夜，过滤。减压除去溶剂，得到固体残余物，用EtOAc和Et₂O洗涤，然后干燥，得到所需的产物(0.07g，58％)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.45-1.50(9H，m)，1.74(2H，d)，2.61-2.74(6H，m)，3.31(2H，s)，3.78(2H，d)，7.06-7.08(1H，m)，7.20-7.22(2H，m)，7.33-7.38(2H，m)，7.52(1H，d)，7.66(1H，d)，12.60(1H，s)。m/z409(M+H)⁺；保留时间＝1.32。

实施例20：1-(4-{4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-[1，4]二氮杂庚环-1-基)-乙酮

2-(3-溴-苯基)-1H-苯并咪唑

方法I、J、K-步骤a将O-苯二胺(81.8g，756.6mmol)和草酸(3.40g，37.8mmol)完全溶于预先在80℃温热的乙醇/水1∶1(2L)中。然后向该溶液中滴加3-溴苯甲醛(44.1mL，378.3mmol)。将该反应混合物在70℃搅拌过夜，在户外开放空气下2天。过滤出固体，与(150mL)甲醇研磨，得到产物，为淡黄色固体(27.50g)。从母液中回收3.8g产物。总收率31.30g(30％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ7.24(2H，m)，7.54(2H，m)，7.70(m，2H)，8.19(1H，m)，8.37(1H，t)，13.2(1H，s)。m/z 273(M+H)⁺；保留时间＝8.60。

2-(3-溴-苯基)-1-二氟甲基-1H-苯并咪唑

方法I、J、K-步骤b-在高压釜中放入2-(3-溴-苯基)-1H-苯并咪唑(14.10g.51.6mmol)、50％NaOH水溶液(8.3mL，154.8mmol)、TEBAC(0.58g，2.5mmol)和THF(120mL)。将该混合物室温搅拌2h，然后使氯二氟甲烷发泡，直到原料完全转化(2巴，约3h)。用DCM(100mL)稀释该混合物，滗析有机相，用Na₂SO₄干燥。减压蒸发溶剂，得到深红色油状物，通过二氧化硅versaflash快速色谱法纯化(1g产物/30g二氧化硅)(洗脱液：环己烷∶AcOEt，梯度从环己烷95∶AcOEt 5到环己烷7∶AcOEt 3)，得到14.30g的标题化合物(86％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ7.45(2H，m)，7.59(1H，t)；7.75(1H，m)，7.83(2H，m)，7.95(1H，m)，8.09(1H，s)。m/z 323(M+H)⁺；保留时间＝8.60。

1-(4-{4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-[1，4]二氮杂庚环-1-基)-乙酮

方法J-步骤c-将2-(3-溴-苯基)-1-二氟甲基-1H-苯并咪唑(0.10g，0.31mmol)、碳酸铯(0，14g，0.43mmol)、rac-2，2’双(二苯基膦基)-1，1’-联萘(BINAP)(0.007g，0.01mmol)和三-(二亚苄基丙酮)-二钯(0)(0.004g)放入7mL密封小瓶，通过反复氮气/真空循环10分钟净化。加入干甲苯(0.6mL)和N-乙酰基高哌嗪(0.05mL，0.37mmol)，将该反应混合物在85℃、在搅拌下加热24小时。

将反应冷却至室温，通过SCX柱(2g)过滤，(洗脱液：DCM/甲醇1∶1)。减压浓缩有机层，通过制备型HPLC纯化，得到58mg标题化合物(48％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.95-2.08(5H，m)，3.48-3.55(2H，m)，3.65-3.77(4H，m)，3.80-3.84(2H，m)，6.93-6.95(1H，m)，7.04-7.11(2H，m)，7.41-7.67(4H，m)，7.73-7.82(2H，m)。m/z 385(M+H)⁺；保留时间＝3.30。

实施例21：1-二氟甲基-2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑盐酸盐

4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基-)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯

方法K-步骤d-将2-(3-溴-苯基)-1-二氟甲基-1H-苯并咪唑(1,00g，3.10mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0,75g，4.02mmol)和碳酸铯(5.04g，15.48mmol)放入干250mL圆底烧瓶，通过反复氮气/真空循环30分钟净化，加入干甲苯(50mL)。同时将乙酸钯(139mg，0.62mmol)和rac-2，2’双(二苯基膦基)-1，1’-联萘(BINAP)(0.58g，0.30mmol)放入干100mL圆底烧瓶，通过反复氮气/真空循环30分钟净化。

加入干甲苯(50mL)，将该混悬液搅拌10分钟，然后加入第一个圆底烧瓶中。将该反应混合物在氮气气氛中回流过夜，冷却至室温。过滤该混合物，用EtOAC(3x20mL)洗涤不溶物。减压浓缩有机溶液，通过快速色谱法纯化粗产物(洗脱液：环己烷∶AcOEt，梯度从100％环己烷到环己烷5∶AcOEt1)，得到1.10g标题化合物(83％)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.41(9H，s)，3.19-3.22(4H，m)，3.46-3.48(4H，m)，7.08-7.10(1H，m)，7.20-7.23(2H，m)，7.37-7.46(3H，m)，7.71-7.80(3H，m)。

m/z 429(M+H)⁺；保留时间＝4.53。

1-二氟甲基-2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑

方法K-步骤e-向4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基-)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.10g，2.57mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入2M HCl的Et2O溶液(11mL)，将得到的混悬液在室温搅拌过夜。过滤沉淀，将得到的盐与Et2O(3x20mL)一起研磨，得到1.02g(100％)的标题化合物，为盐酸盐。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ3.21(4H，bs)，3.47-3.50(4H，m)，7.11-7.20(1H，m)，7.25-7.30(2H，m)，7.41-7.51(3H，m)，7.74-8.02(3H，m)，9.35(2H，bs)。m/z 329(M+H)⁺；保留时间＝1.77。

实施例22：1-{4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-2-甲基-丙-1-酮

1-{4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-2-甲基-丙-1-酮

方法K-步骤f-将CDI(0.05g，0.32mmol)加入到异丁酸(0.029g，0.32mmol)在乙腈(2.50mL)中的溶液中。将得到的溶液在室温搅拌5h。

加入1-二氟甲基-2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑(0.10g，0.27mmol)和N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(0.05mL，0.27mmol)，将反应在65℃加热过夜。将该反应冷却至室温，除去溶剂，加入DCM(3mL)。用水(2x2mL)和饱和Na₂CO₃溶液(2x2mL)洗涤有机溶液。减压浓缩有机层，通过快速色谱法纯化粗产物(洗脱液：环己烷∶AcOEt，梯度100％环己烷-环己烷3∶AcOEt1)，得到0.067g的标题化合物(61％)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ1.09(6H，d)，2.77(1H，七重峰)，3.21-3.29(4H，m)，3.64-3.75(4H，m)，7.04-7.07(2H，m)，7.10-7.41(5H，m)，7.70-7.73(1H，m)，7.77-7.81(1H，m)。m/z 399(M+H)⁺；保留时间＝3.68。

实施例23：4-{4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯

4-{4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯

方法K-步骤g-将CDI(0.053mg，0.32mmol)加入到哌啶-1，4-二甲酸一-叔丁酯(0.074g，0.32mmol)在乙腈(2.50mL)中的溶液中。将得到的溶液在室温搅拌5小时。

加入1-二氟甲基-2-(3-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑(0.10g，0.27mmol)和N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(0.05mL，0.27mmol)，将反应在65℃加热过夜。将该反应冷却至室温，除去溶剂，加入DCM(3mL)。

用水(2x2mL)和饱和Na₂CO₃溶液(2x 2mL)洗涤有机溶液。减压浓缩有机层，通过快速色谱法纯化粗产物(洗脱液：环己烷∶AcOEt，梯度100％环己烷-环己烷3∶AcOEt1)，得到0.067g标题化合物(70％)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ1.39(9H，s)，1.60-1.74(4H，m)，2.57-2.77(3H，m)，3.21-3.26(4H，m)，3.64-3.74(4H，m)，4.10(2H，m)，7.04-7.07(2H，m)，7.11-7.41(5H，m)，7.71-7.73(1H，m)，7.78-7.82(1H，m)。m/z 540(M+H)⁺；保留时间＝4.25。

实施例24：{4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-哌啶-4-基-甲酮

{4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-哌啶-4-基-甲酮

方法K-步骤h-向4-{4-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.075g，0.14mmol)在DCM(0.5mL)中的溶液中加入2M HCl的Et2O溶液(2.5mL)，将得到的混悬液在室温搅拌6h。过滤沉淀，与Et2O(3x20mL)研磨。通过制备型HPLC纯化固体。用K₂CO₃中和HPLC级分并浓缩，加入浓DCM(5mL)和水(5mL)，分离有机相，浓缩至得到44mg的标题化合物(72％)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ1，82-2.15(4H，m)，2.72-2.86(1H，m)，3.09-3.34(6H，m)，3.48-3.64(2H，m)，3.63-3.83(4H，m)，7.09-7.15(2H，m)，7.29-7.30(2H，m)，7.37-7.47(3H，m)，7.75-7.78(1H，m)，7.81-7.85(1H，m)。m/z 440(M+H)⁺；保留时间＝2.03。

实施例25：1-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基-]哌啶-4-甲酸乙酯1-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基-]哌啶-4-甲酸乙酯

方法I-步骤i-与方法K步骤d所述方法相同，但使用原料哌啶-4-甲酸乙酯替代哌嗪-1-甲酸叔丁酯。定量收率。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.26(3H，t)，1.77-1.87(2H，m)，2.01-2.05(2H，m)，2.50-2.57(1H，m)，2.88-2.94(2H，m)，3.76-3.81(2H，m)，4.12-4.17(2H，q)，7.09-7.11(1H，m)，7.24-7.26(1H，m)，7.29-7.30(1H，m)，7.41-7.81(6H，m)。m/z 400(M+H)⁺；保留时间＝4.25。

实施例26：{1-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-4-基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮

1-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基-]哌啶-4-甲酸

方法I-步骤l-将NaOH粉末(0.24g，6.02mmol)加入到1-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基-]哌啶-4-甲酸乙酯(1.20g，3.01mmol)在乙醇∶水3∶1中的溶液中，将该反应在80℃加热过夜。将反应冷却至室温，通过减压蒸发浓缩有机溶剂。通过滴加6N HCl中和得到的溶液。析出浅棕色沉淀，将其过滤，干燥，得到0.80g的标题化合物(72％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.83-1.93(2H，m)，2.06-2.11(2H，m)，2.52-2.59(1H，m)，3.14-3.17(2H，m)，3.71-3.76(2H，m)，7.33-7.35(1H，m)，7.40-7.42(2H，m)，7.44-7.78(6H，m)。m/z 372(M+H)⁺；保留时间＝3.25。

{1-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-4-基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮

方法I-步骤m-在室温将HATU(0.11g，0.30mmol)和二异丙基乙胺(DIPEA)(0.09mL，0.54mmol)加入到1-[3-(1-二氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基-]哌啶-4-甲酸(0.10g，0.27mmol)在二氯甲烷中的混悬液中。将反应在35℃加热过夜。将反应冷却至室温，用饱和Na₂CO₃溶液(2x4mL)和水(1x3mL)洗涤。减压浓缩有机层，通过快速色谱法纯化粗产物(洗脱液：环己烷∶AcOEt，梯度环己烷1∶AcOEt 1-100％AcOEt，最终AcOEt∶2.0N氨的甲醇溶液5∶1)，得到0.025g标题化合物(20％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.79-1.88(4H，m)，2.31(3H，s)，2.39-2.48(4H，m)，2.80-2.92(3H，m)，3.60-3.68(4H，m)，3.85-3.88(2H，m)，7.08-7.10(1H，m)，7.20-7.25(1H，m)，7.28-7.29(1H，m)，7.40-7.81(6H，m)。m/z 454(M+H)⁺；保留时间＝2.00。

实施例27：{4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-吡咯烷-1-基-甲酮

N-(2-氨基-苯基)-5-溴-2-氟-苯甲酰胺

方法L、M-步骤a-将5-溴-2-氟-苯甲酸(4.96g，22.6mmol)、苯-1，2-二胺(4.90g，45.3mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(5.21g，27.2mmol)、水合1-羟基苯并三唑(1-HOBt)(3.67g，27.2mmol)和二甲基-吡啶-4-基-胺(DMAP)(0.03g，0.2mmol)放入100mL圆底烧瓶。加入干DMF(60mL)，将反应在室温搅拌过夜。减压除去溶剂，然后用DCM(15mL)和0.4M Na₂CO₃溶液(15mL)稀释粗产物。白色沉淀形成，过滤出来，再用DCM(10mL)洗涤，干燥，得到4.96g标题化合物。收集溶液，使有机相与水相分离，减压浓缩：又形成沉淀，过滤出来，用DCM(3mL)洗涤，又得到0.68g所需的化合物。总收率81％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ4.84-5.14(2H，m)，6.54-6.59(1H，m)，6.73-6.76(1H，m)，6.93-6.97(1H，m)，7.21-7.24(1H，m)，7.31-7.35(1H，m)，7.72-7.76(1H，m)，9.62-9.64(1H，m)。m/z 308/310(M+H)⁺；保留时间＝1.87。

2-(5-溴-2-氟-苯基)-1H-苯并咪唑

方法L、M-步骤b-将N-(2-氨基-苯基)-5-溴-2-氟-苯甲酰胺(5.64g，18.3mmol)在乙酸(20mL)中的混悬液在60℃加热。30min后，该混悬液变成溶液，静置过夜。减压除去溶剂，将残余物与DCM(10mL)一起研磨，过滤出来。用DCM(3x10mL)洗涤沉淀，干燥，得到4.76g标题化合物(89％)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ7.24-7.27(2H，m)，7.43-7.48(1H，m)，7.63-7.66(2H，m)，7.72-7.76(1H，m)，8.33-8.35(1H，m)。m/z 290/292(M+H)⁺；保留时间＝1.85。

2-(5-溴-2-氟-苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑

方法L-步骤c-将NaH60％的矿物油混悬液(0.61g,25.5mmol)加入到2-(5-溴-2-氟-苯基)-1H-苯并咪唑(3.70g，12,76mmol)在干THF(100mL)中的溶液中，将该反应在室温搅拌30分钟，然后加入碘甲烷(1.19mL，19.1mmol)。将反应保持搅拌2h，然后用水(20mL)使反应停止。浓缩溶液，然后加入AcOEt(30mL)。分离有机溶液，用盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，减压浓缩，得到3.80g所需的化合物(97％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ3.76(3H，s)，7.31-7.42(3H，m)，7.59-7.61(1H，m)，7.70-7.72(1H，m)，7.78-7.82(1H，m)，7.85-7.87(1H，m)。m/z 304/306(M+H)⁺；保留时间＝1.80。

{4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基l-哌嗪-1-基}-吡咯烷-1-基-甲酮

方法L-步骤d-按照与方法J步骤c所述相同的方法，但以2-(5-溴-2-氟-苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑和哌嗪-1-基-吡咯烷-1-基-甲酮为原料。通过制备型HPLC纯化粗反应混合物，得到0.06g的标题化合物(44％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.82-1.89(4H，m)，3.20-3.23(4H，m)，3.40-3.42(4H，m)，3.44-3.47(4H，m)，3.77-3.78(3H，m)，7.20-7.22(1H，m)，7.24-7.26(2H，m)，7.31-7.40(2H，m)，7.57-7.59(1H，m)，7.69-7.71(1H，m)。m/z 408(M+H)⁺；保留时间＝2.32。

实施例28：4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯

4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯

方法L-步骤e-将2-(5-溴-2-氟-苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑(2.10g，6.9mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.16g，8.3mmol)、碳酸铯(3.14g，9.6mmol)、rac-2，2’双(二苯基膦基)-1，1’-联萘(BINAP)(0.17g，0.28mmol)和三-(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.06g，0.07mmol)放入Schlenk管，通过反复氮气/真空循环10分钟净化。加入干甲苯(13mL)，将该反应在85℃搅拌24h。将反应冷却至室温，用AcOEt(20mL)稀释，用水(10mL)洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，减压浓缩。通过快速色谱法纯化粗反应混合物(洗脱液：环己烷∶AcOEt，梯度100％环己烷-环己烷2∶AcOEt1)，得到1.14g原料和0.70g标题化合物(54％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.47(9H，s)，3.14-3.17(4H，m)，3.57-3.59(4H，m)，7.20-7.26(3H，m)，7.30-7.39(2H，m)，7.56-7.58(1H，m)，7.68-7.71(1H，m)。m/z 411(M+H)⁺；保留时间＝1.90。

实施例29：2-二甲氨基-1-{4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-乙酮

2-(2-氟-5-哌嗪-1-基-苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑

方法L-步骤f-向4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.86g，1.71mmol)在DCM(2.0mL)中的溶液中加入2.0M HCl的Et₂O溶液(10mL)，将得到的混悬液在室温搅拌过夜。过滤出沉淀，与Et₂O(3x15mL)研磨，得到标题化合物(定量收率)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ3.22-3.25(4H，m)，3.44-3.47(4H，m)，3.94(3H，s)，7.43-7.53(3H，m)，7.60-7.67(2H，m)，7.87-7.89(1H，m)，8.01-8.03(1H，m)，9.42(2H，m)。m/z 311(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

2-二甲氨基-1-{4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-乙酮

方法L-步骤g-与方法L-步骤h相同的方法。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ2.30(6H，s)，3.18-3.25(6H，m)，3.74-3.78(7H，m)，7.21-7.28(3H，m)，7.31-7.40(2H，m)，7.57-7.59(1H，m)，7.69-7.71(1H，m)。m/z 396(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

实施例30：(S)-2-{4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

(S)-2-{4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

方法L-步骤h-将CDI(0.05g，0.31mmol)加入到N-Boc-L-脯氨酸(0.07g，0.31mmol)在乙腈(2.50mL)中的溶液中。将得到的溶液在室温搅拌6小时。

加入2-(2-氟-5-哌嗪-1-基-苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑(0.10g，0.26mmol)和N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(0.09mL，0.52mmol)，将反应在65℃加热过夜。将该反应冷却至室温，减压除去溶剂，加入DCM(3mL)。用水(2x2mL)和饱和Na₂CO₃溶液(2x2mL)洗涤有机溶液。减压浓缩有机层，通过快速色谱法纯化粗产物(洗脱液：环己烷∶AcOEt，梯度环己烷2∶AcOEt 1-100％AcOEt)，得到0.067g的标题化合物(51％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.40-1.45(9H，m)，1.82-1.97(3H，m)，2.23-2.36(1H，m)，3.15-3.29(4H，m)，3.42-3.57(2H，m)，3.69-3.85(7H，m)，4.72-4.77(1H，m)，7.22-7.29(3H，m)，7.31-7.40(2H，m)，7.57-7.59(1H，m)，7.69-7.71(1H，m)。m/z 508(M+H)⁺；保留时间＝2.63。

实施例31：{4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-(S)-吡咯烷-2-基-甲酮盐酸盐

{4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-(S)-吡咯烷-2-基-甲酮

方法L-步骤i-向(S)-2-{4-[4-氟-3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌嗪-1-羰基}-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.05g，0.10mmol)在DCM(0.5mL)中的溶液中加入2M HCl的Et₂O溶液(2.0mL)，将得到的混悬液在室温搅拌过夜。减压浓缩反应，然后加入水(4.0mL)，再次浓缩该混合物，得到0.04g标题化合物，为盐酸盐(86％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.85-2.04(4H，m)，2.42-2.51(1H，m)，3.60-3.81(4H，m)，3.98-3.99(3H，m)，3.23-3.36(5H，m)，4.60-4.69(1H，m)，7.32-7.44(3H，m)，7.62-7.68(2H，m)，7.77-7.80(1H，m)，7.89-7.93(1H，m)。m/z 408(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

实施例32：1-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氟-苯基]-哌嗪-1-基}-2-二甲氨基-乙酮

2-(5-溴-2-氟-苯基)-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯

方法M-步骤l-在氮气气氛中、在室温下将NaH60％的矿物油分散液(0.70g，17.34mmol)加入到2-(5-溴-2-氟-苯基)-1H-苯并咪唑(3.87g，13.3mmol)在干THF(140mL)的溶液中。10分钟后，加入二碳酸二叔丁酯(0.30g，13.3mmol)在干THF(50mL)中的溶液，将反应静置30h。加入水(40mL)，减压浓缩反应。加入AcOEt(30mL)，分离有机层。用AcOEt(2x10mL)洗涤水溶液。收集有机层，用Na₂SO₄干燥，减压浓缩。通过快速色谱法纯化粗反应混合物(洗脱液：环己烷∶AcOEt，梯度100％环己烷-环己烷10∶AcOEt 1)，得到4.7g的标题化合物(90％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.44(9H，s)，7.23-7.27(1H，m)，7.41-7.50(2H，m)，7.73-7.77(2H，m)，7.84-7.86(1H，m)，8.10-8.12(1H，m)。m/z 392(M+H)⁺；保留时间＝2.88。

2-[5-(4-叔丁氧羰基-哌嗪-1-基)-2-氟-苯基]-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯

方法M-步骤m-在氮气气氛中将2-(5-溴-2-氟-苯基)-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯(2.52g，6.5mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.56g，8.40mmol)和碳酸铯(10.50g，32.20mmol)放入干500mL圆底烧瓶，加入干甲苯(140mL)。同时在氮气气氛中将乙酸钯(0.29g，1.30mmol)和BINAP(1.20g，1.93mmol)放入干250mL圆底烧瓶，加入干甲苯(140mL)。10分钟后，将包含BINAP和乙酸钯的混悬液加入到500mL圆底烧瓶中。将该反应混合物在85℃、在氮气气氛中加热过夜，冷却至室温。过滤该混合物，用EtOAC(3x20mL)洗涤不溶物。减压浓缩有机溶液，通过快速色谱法纯化粗产物(洗脱液：环己烷∶AcOEt，梯度100％环己烷-环己烷4∶AcOEt 1)，得到2.48g标题化合物(76％)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.36(9H，s)，3.08-3.10(4H，m)，3.43-3.46(4H，m)，7.12-7.18(1H，m)，7.20-7.25(2H，m)，7.38-7.47(2H，m)，7.76-7.78(1H，m)，7.97-7.99(1H，m)。m/z 497(M+H)⁺；保留时间＝2.93。

2-(2-氟-5-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑

方法M-步骤n-向2-[5-(4-叔丁氧羰基-哌嗪-1-基)-2-氟-苯基]-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯(0.45g，0.91mmol)在DCM(1.0mL)中的溶液中加入2M HCl的Et₂O溶液(8.0mL)，将得到的混悬液在室温搅拌过夜。再加入2M HCl的Et₂O溶液(5.0mL)，将反应保持搅拌24h。过滤出沉淀，与Et₂O(3x15mL)研磨，得到0.21g的标题化合物(55％)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ3.26(4H，bs)，3.49-3.51(4H，m)，7.36-7.40(1H，m)，7.45-7.53(3H，m)，7.80-7.84(2H，m)，7.91-7.93(1H，m)，9.28(2H，bs)。m/z 297(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

1-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氟-苯基]-哌嗪-1-基}-2-二甲氨基-乙酮

方法M-步骤o-将CDI(0.052g，0.32mmol)加入到N，N-二甲基甘氨酸(0.033g，0.32mmol)在乙腈(2.50mL)中的溶液中。将得到的溶液在室温搅拌5小时。然后加入2-(2-氟-5-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑(0.10g，0.27mmol)和N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(0.11mL，0.6mmol)，将反应在65℃加热过夜。将反应冷却至室温，减压除去溶剂。将DCM(2mL)加入到粗产物中，用水(2x 4mL)和饱和Na₂CO₃溶液(2x4mL)洗涤有机溶液，浓缩。通过快速色谱法纯化粗反应混合物(洗脱液：MeOH∶AcOEt，梯度100％AcOEt-MeOH 0.6∶AcOEt4)，得到0.049g的标题化合物(43％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ2.33(6H，s)，3.22-3.29(4H，m)，3.29(2H，s)，3.77-3.79(4H，m)，7.16-7.24(2H，m)，7.26-7.31(2H，m)，7.59-7.70(2H，bp)，7.75-7.77(1H，m)。m/z 382(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

实施例33：4-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氟-苯基]-哌嗪-1-基}-哌啶-4-基-甲酮

4-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氟-苯基]-哌嗪-1-羰基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯

方法M-步骤p-将CDI(0.047g，0.29mmol)加入到哌啶-1，4-二甲酸一-叔丁酯(0.07g，0.29mmol)在乙腈(2.50mL)的溶液中。将得到的溶液在室温搅拌5小时。加入2-(2-氟-5-哌嗪-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑(0.10g，0.27mmol)和DIPEA(0.05mL，0.26mmol)，将反应在65℃加热过夜。将反应冷却至室温，减压除去溶剂。将DCM(2mL)加入到粗产物中，用水(2x4mL)和饱和Na₂CO₃溶液(2x4mL)洗涤有机溶液，浓缩。通过快速色谱法纯化粗反应混合物(洗脱液：环己烷∶AcOEt，梯度100％环己烷-100％AcOEt)，得到0.08g标题化合物(60％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.45(9H，s)，1.55-1.66(2H，m)，1.72-1.76(2H，m)，2.82-3.00(3H，m)，3.21-3.31(4H，m)，3.77-3.83(4H，m)，4.07-4.17(2H，m)，7.17-7.24(2H，m)，7.26-7.31(2H，m)，7.55-.7.72(2H，m)，7.75-7.78(1H，m)。

4-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氟-苯基]-哌嗪-1-基}-哌啶-4-基-甲酮

方法M-步骤q-向4-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氟-苯基]-哌嗪-1-羰基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.08g，0.16mmol)在DCM(1mL)中的溶液中加入2M HCl的Et₂O溶液(3.0mL)，将得到的混悬液在室温搅拌3天。减压浓缩反应，加入水(8mL)，减压浓缩溶液。通过制备型HPLC纯化固体。用K₂CO₃中和HPLC级分，浓缩。加入DCM(5mL)和水(5mL)，分离有机相，浓缩至得到44mg的标题化合物(72％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.70-1.80(4H，m)，2.73-2.80(2H，m)，2.91-2.98(1H，m)，3.13-3.17(2H，m)，3.20-3.28(4H，m)，7.15-7.32(2H，m)，7.26-7.31(2H，m)，7.62-7.65(2H，m)，7.75-7.77(1H，m)。m/z 408(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

实施例34：2-乙氧基-N-{1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-4-基}-乙酰胺

2-(3-溴苯基)-1H-苯并咪唑

方法N-步骤a将O-苯二胺(81.8g，756.6mmol)和草酸(3.4g，37.8mmol)完全溶于预先在80℃温热的EtOH-H₂O/1∶1(2L)中。然后将3-溴苯甲醛(44.10mL，378.30mmol)滴加到该溶液中。将该反应混合物在70℃搅拌过夜，对空气开放。过滤出固体后的当天，与MeOH(150mL)研磨，得到产物，为淡黄色固体(27.50g)。从母液中回收3.8g。总收率31.30g(30％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ7.24(2H，m)，7.54(2H，m)，7.70(m，2H)，8.19(1H，m)，8.37(1H，t)，13.2(1H，s)。m/z 273(M+H)⁺；保留时间＝8.60。

2-(3-溴-苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑

方法N-步骤b-将2-(3-溴苯基)-1H-苯并咪唑(7.8g，28.6mmol)完全溶于干THF(300ml)，然后将NaH 60％m/m(1.49g，37.2mmol)逐步加入到澄清黄色溶液中。将浅棕色混悬液rt搅拌1h，然后滴加CH₃I(2.5ml，40.0mmol)。将该反应混合物rt搅拌过夜。用H₂O(300ml)使反应停止，用EtOAc(2x 450ml)萃取。用MgSO₄干燥有机萃取物，过滤并蒸发，得到化合物，为棕-黄色固体(7.4g，70％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ3.90(3H，s)，7.30(2H，m)，7.55(1H，t)，7.64(1H，d)，7.70(1H，d)，7.77(1H，m)，7.88(1H，m)，8.05(1H，m)。m/z＝287[M+H]⁺，保留时间＝7.70。

{1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-4-基}-氨基甲酸叔丁酯

方法N-步骤c-在Ar气气氛中将BINAP(5.85g，9.4mmol)和Pd(OAc)₂(1.41g，6.3mmol)放入4-颈圆底烧瓶中。将该混合物在Ar气流中搅拌10分钟，然后加入300ml无水甲苯。同时向在Ar气气氛中干燥的另一4-颈圆底烧瓶中放入预先溶于300ml无水甲苯的2-(3-溴苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑(9.0g，31.3mmol)、4-N-BOC-氨基哌啶(8.18g，40.7mmol)和Cs₂CO₃(50.99g，156.5mmol)。将该混合物搅拌约10分钟，然后将第一个烧瓶的内含物加入到第二个烧瓶中。将反应在回流温度搅拌过夜。冷却至室温后，用具有硅藻土垫的gouch过滤该混悬液。减压蒸发澄清溶液，用MTBE研磨残余物，得到7.1g(55％)纯产物，为黄白色固体。

¹H-NMR(DMSO)：1.39(s，9H)；1.49(m，2H)；1.82(m，2H)；2.83(m，2H)；3.44(bs，1H)；3.75(m，2H)；3.87(s，3H)；6.86(d，1H)；7.11-7.67(m，8H)。m/z＝407[M+H]⁺；保留时间＝8.02。

{1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-4-基胺盐酸盐

方法N-步骤d向{1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-4-基}-氨基甲酸叔丁酯(2.00g，4.93mmol)在二氯甲烷(2mL)和甲醇(1mL)中的混合物中加入2M HCl的Et₂O溶液(25mL)，将得到的混合物在室温搅拌过夜。

过滤出固体，真空干燥，再溶于水(50mL)，用二氯甲烷(3x10mL)洗涤。减压除去水，得到1.48g(89％)的标题化合物，为盐酸盐。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.67-1.77(2H，m)，2.01-2.04(2H，m)，2.95-3.00(2H，m)，3.19-3.26(1H，m)，3.89-3.95(2H，m)，4.05(3H，s)，7.36-7.44(2H，m)，7.55-7.68(4H，m)，7.86-7.89(1H，m)，8.04-8.07(1H，m)，8.41(3H，bs)。m/z＝307[M+H]⁺；保留时间＝0.17。

2-乙氧基-N-{1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-4-基}-乙酰胺

方法N-步骤e向乙氧基乙酸(0.05mL，0.49mmol)在乙腈(3mL)中的溶液中加入作为储备溶液的CDI(0.80g，0.49mmol)，将得到的混悬液在室温搅拌3h。加入{1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-4-基胺盐酸盐(0.13g，0.41mmol)和DIPEA(0.07mL，0.41mmol)，将得到的溶液在70℃加热过夜。然后将该反应冷却至室温，减压除去溶剂。将粗产物再溶于二氯甲烷(4mL)，用饱和Na₂CO3溶液(2mL)和水(2mL)洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤和减压浓缩。通过快速色谱法纯化残余物(洗脱液：二氯甲烷∶MeOH，，梯度100％二氯甲烷-95％二氯甲烷∶5％MeOH)，得到0.70g(44％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ1.17(3H，t)，1.51-1.61(2H，m)，1.96-2.00(2H，m)，2.89-2.95(2H，m)，3.50(2H，q)，3.67-3.71(2H，m)，3.81(3H，s)，3.86(2H，s)，3.91-4.01(1H，m)，6.44-6.46(1H，m)，6.99-7.01(1H，m)，7.05-7.07(1H，m)，7.23-7.35(5H，m)，7.77-7.80(1H，m)。m/z＝393[M+H]⁺；保留时间＝1.67。

实施例35：4-氟-1’-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-[1，4’]联哌啶2-(3-溴苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑

方法O、Oa-步骤a-将2-(3-溴苯基)-1H-苯并咪唑(如方法N，步骤a所述制备)(7.8g，28.6mmol)完全溶于干THF(300mL)中，然后逐步加入NaH 60％m/m(1.49g，37.2mmol)到澄清黄色溶液中。将浅棕色混悬液在室温搅拌1h，然后滴加CH₃I(2.5mL，40.0mmol)。将该反应混合物rt搅拌过夜。用H₂O(300mL)使反应停止，用EtOAc(2x450mL)萃取。用MgSO₄干燥有机萃取物，过滤，蒸发，得到7.4g的标题化合物，为棕黄色固体(70％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ3.90(3H，s)，7.30(2H，m)，7.55(1H，t)，7.64(1H，d)，7.70(1H，d)，7.77(1H，m)，7.88(1H，m)，8.05(1H，m)。m/z 287(M+H)⁺；保留时间＝7.70。

8-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4，5]癸烷

方法O、Oa-步骤b-在安装了磁力搅拌器和在氩气气氛中干燥的4颈圆底烧瓶中放入BINAP(3.7g，5.9mmol，0.3eq)和Pd(OAc)₂(0.9g，3.9mmol，0.2eq)，在氩气流中静置15min。同时在安装了磁力搅拌器、回流冷凝器和在氩气气氛中干燥的4颈圆底烧瓶中将2-(3-溴苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑(5.6g，19.5mmol，1eq)溶于干甲苯(300mL)，然后将1，4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(3.3mL，25.4mmol，1.3eq)、Cs₂CO₃(31.8g，97.5mmol，5eq)和催化剂混悬液加入到该溶液中。将该反应混合物在回流温度下搅拌过夜，通过LC-MS检查转化率。使该混悬液冷却至r.t.，然后用具有硅藻土垫的gooch过滤。蒸发溶剂，得到16.0g红棕色油状物，通过二氧化硅versaflash自动快速色谱法、通过从Cy∶MTBE＝85∶15到Cy∶MTBE＝15∶85洗脱纯化(1产物g/30二氧化硅g)，得到2.3g纯产物，为黄色油状物(34％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ1.70-1.73(4H，m)，3.34-3.37(4H，m)，3.84(3H，s)，3.90(4H，m)，7.11-7.39(6H，m)，7.57-7.58/1H，m)，7.64-7.65(1H，m)。m/z 350(M+H)⁺；保留时间＝6.73。

1-[3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)苯基]哌啶-4-酮

方法O、Oa-步骤c-将8-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4，5]癸烷(2.30g，6.60mmol)溶于120mL THF。在0℃用NaCl-冰浴冷却该溶液，然后加入HCl 6M(18mL，108mmol)。通过HPLC/MS监测反应进程，将该体系rt搅拌至完全转化。减压浓缩溶液，然后用NaOH 2M(80mL)中和，最后用EtOAc(3x150mL)萃取。共同收集有机萃取物，用MgSO₄干燥，过滤，蒸发，得到2g澄清产物，为淡黄色固体(92％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ2.46(4H，t)，3.70(4H，t)，3.88(3H，s)，7.20-76(8H，m)。m/z 306(M+H)⁺；保留时间＝5.90。

2-(5-溴-2-氯苯基)-1H-苯并咪唑

方法O、Oa-步骤d

在安装了磁力搅拌器的单颈圆底烧瓶中放入5-溴-2-氯苯甲酸(70.0g，297.3mmol)、o-苯二胺(64.3g，594.6mmol)和甲磺酸(140mL)，加热至170℃，以熔化固体。在该温度下将该系统搅拌5h，然后静置达到rt。用NaOH 35％(200mL)处理蓝色固体，得到紫色混悬液(pH 5)，过滤，用NaOH 0.5M(2L)和H₂O(2L)洗涤。真空(60℃)干燥产物，得到61.6g纯紫色固体(67％)。

m/z 307/309(M+H)⁺；保留时间＝8.73。

2-(5-溴-2-氯苯基)-1H-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯

方法O、Oa-步骤e-在安装了磁力搅拌器的3颈圆底烧瓶中将2-(5-溴-2-氯苯基)-1H-苯并咪唑(30.7g，99.8mmol)混悬于THF(1L)中。然后加入50％NaOH(72.0g，598mmol)。将该混悬液在搅拌下保持在r.t.1h。将(BOC)₂O(37.0g，169.7mmol)溶于THF(200mL)，加入到反应混合物中。将该反应保持在搅拌下过夜。减压蒸发溶剂。用水(500mL)稀释得到的残余物，过滤，真空(60℃)干燥，得到39.8g的棕色固体(98％)。

m/z 407/409(M+H)⁺；保留时间＝10.14。

2-[2-氯-5-(1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基)-苯基]-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯

方法O、Oa-步骤f-在安装了磁力搅拌器和在氩气气氛中干燥的4颈圆底烧瓶中放入BINAP(13.8g，22.1mmol)和Pd(OAc)₂(3.3g，14.7mmol)，在氩气流中静置15min。同时在安装了磁力搅拌器、回流冷凝器和在氩气气氛中干燥的4颈圆底烧瓶中将2-(5-溴-2-氯苯基)-1H-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯(30.0g，73.6mmol)溶于干甲苯(1L)，然后加入1，4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(12.3mL，95.7mmol)、Cs₂CO₃(119.9g，368.0mmol)和催化剂混悬液加入到该溶液中。将该反应混合物在80℃搅拌30h，通过LC-MS检查转化率。使该混悬液冷却至r.t.，然后用具有硅藻土垫的gooch过滤。蒸发溶剂，得到64.5g棕色油状物，不经任何额外的纯化用于下一步。

m/z 471/473(M+H)⁺；保留时间＝9.70。

1-[3-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-氯苯基]哌啶-4-酮

方法O、Oa-步骤g-在安装了磁力搅拌器的4颈圆底烧瓶中将2-[2-氯-5-(1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4，5]癸-8-基)-苯基]-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯(59.5g，93，9mmol，1eq)溶于THF(250mL)，然后加入HCl 4M(1.2L，4695mmol)。将该系统在搅拌下在rt保持过夜。过滤棕色混悬液，用冷水(500mL)洗涤固体，该固体是来自上述步骤的催化剂。减压浓缩母液，以沉淀其它的固体，过滤出来。用冰-NaCl浴将酸水相(1.7L)冷却至0℃，用NaOH 4M(1.8L)使呈碱性。过滤固体，用水(600mL)洗涤，真空(60℃)干燥，得到纯的22.8g产物，为浅灰色固体(75％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ2.45(4H，t)，3.70(4H，t)，7.17-7.64(7H，m)，12.85(1H，bs)。m/z 426/428(M+H)⁺；保留时间＝6.97。

4-氟-1’-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-[1，4’]联哌啶

方法O-步骤h-将三乙酰氧基硼氢化钠(0.10g，0.49mmol)加入到1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-4-酮(0.1g，0.33mmol)和4-氟哌啶盐酸盐(0.07g，0.49mmol)在二氯乙烷(2.50mL)中的混合物中。将反应保持在室温18h。用DCM(4mL)稀释反应，用Na₂CO₃饱和溶液(4mL)洗涤。浓缩有机层，通过SCX柱(2g)过滤(洗脱液：首先10mL DCM∶MeOH 1∶1，然后10mL 2.0N氨的MeOH溶液)。浓缩氨溶液，通过快速色谱法纯化粗产物(洗脱液：AcOEt∶2.0N氨的MeOH溶液，梯度100％AcOEt-AcOEt 10∶2.0N氨的MeOH溶液1)，得到0.06g的标题化合物(48％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.67-1.73(2H，m)，1.86-2.06(6H，m)，2.61-2.71(3H，m)，2.77-2.89(4H，m)，3.89-3.93(5H，m)，4.61-4.77(1H，m)，7.17-7.19(2H，m)，7.28-7.37，(3H，m)，7.41-7.45(1H，m)，7.54-7.56(1H，m)，7.66-7.68(1H，m)。m/z 393(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

实施例36：1’[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-[1，4’]联哌啶

1’[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-[1，4’]联哌啶

方法Oa-步骤i-将1-[3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)苯基]哌啶-4-酮(0.06g，0.2mmol)和哌啶(0.034g，0.4mmol)与三乙胺(27μL，0.2mmol)和分子筛(0.5g)在甲醇(5ml)中加热至40℃16小时。加入氰基硼氢化钠(0.025g，0.4mmol)和氯化锌(0.027g，0.2mmol)，将该反应再加热16小时，蒸发该反应混合物，使残余物分配在1N氢氧化钠(2ml)与二氯甲烷(4ml)之间。分离有机层，蒸发，通过制备型HPLC纯化。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.56(1H，bs)，1.84-1.98(7H，m)，2.20-2.23(2H，m)，2.89-2.94(2H，m)，3.04(2H，bs)，3.36-3.43(1H，m)，3.56(2H，bs)，3.94(3H，s)，4.02-4.05(2H，m)，7.23-7.26(2H，m)，7.37-7.45(3H，m)，7.47-7.51(1H，m)，7.64-7.66(1H，m)，7.71-7-73(1H，m)。

m/z 375(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

实施例37：2-[3-(3-氟-4-吗啉-4-基-哌啶-1-基)-苯基]-1-甲基-1H-苯并咪唑

4-三甲基甲硅烷氧基-3.6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯

方法P-步骤a-将氯三甲基硅烷(1.52mL，12.05mmol)和干三乙胺(3.42mL，24.6mmol)加入搅拌的4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.0g，10.04mmol)在干DMF(20mL)中的溶液中。将该反应在80℃加热16h，然后冷却至室温，用正己烷(120mL)稀释。用冷NaHCO₃饱和溶液(60mL)洗涤有机溶液，用Na₂SO₄干燥，减压浓缩，得到2.56g的标题化合物(94％)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ0.00(9H，s)，1.23(9H，s)，1.83-1.87(2H，m)，3.24-3.27(2H，m)，3.60-3.61(2H，m)，4.63(1H，bs)。m/z 272(M+H)⁺；保留时间＝2.78。

3-氟-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯

方法P-步骤b-在室温、在氮气气氛中将Selectfluor(5.52g，15.59mmol)加入到搅拌的4-三甲基甲硅烷氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(3.84g，14.17mmol)在干乙腈(150mL)中的溶液中。75分钟后，用AcOEt(500mL)稀释反应，用NaCl(300mL)稀溶液、然后用(300mL)洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，减压浓缩。通过快速色谱法、通过中性氧化铝纯化粗反应混合物(洗脱液：环己烷∶AcOEt∶MeOH，梯度环己烷∶AcOEt 1∶1-环己烷∶AcOEt 1∶2-100％AcOEt，最终AcOEt∶MeOH95∶5)，得到2.12g的标题化合物。

3-氟-4-吗啉-4-基-哌啶-1-甲酸叔丁酯

方法P-步骤c-在氮气气氛中将吗啉(0.71mL，8.11mmol)加入到搅拌的3-氟-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.60g，7.37mmol)在二氯乙烷(2mL)中的溶液中。10分钟后，逐步加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.35g，11.13mmol)，将该反应静置3h。向该反应中加入Na₂CO₃饱和溶液(20mL)。分离有机相，用DCM(3x10mL)萃取水溶液。收集有机层，用Na₂SO₄干燥，减压浓缩。通过快速色谱法纯化粗反应混合物(洗脱液：环己烷∶AcOEt∶2.0N氨的MeOH溶液，梯度环己烷∶AcOEt 2∶1-100％AcOEt，最终AcOEt∶2.0N氨的MeOH溶液10∶1)，得到1.28g的标题化合物。(57％)。

¹H-NMR(400MHz CD3OD)：δ1.45(9H，s)，1.74-1.80(2H，m)，2.38-2.51(1H，m)，2.65-2.68(4H，m)，2.71-3.04(2H，m)，3.65-3.72(4H，m)，4.18-4.21(1H，m)，4.37-4.38(1H，m)，4.91-5.03(1H，m)。m/z 289(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

4-(3-氟-哌啶-4-基)-吗啉

方法P-步骤d-将2.0N HCl的Et₂O溶液(15mL)加入到3-氟-4-吗啉-4-基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.28g，4.44mmol)在DCM(2mL)中的溶液中，将得到的混悬液在室温搅拌4天。过滤出沉淀，与Et₂O(2x5mL)研磨。加入Na₂CO₃饱和溶液(10mL)，减压浓缩得到的溶液。加入EtOH(15mL)，过滤出沉淀。

减压浓缩滤液，得到0.71g的标题化合物。(85％)。

¹H-NMR(400MHz CD3OD)：δ1.84-1.94(2H，m)，2.47-2.60(1H，m)，2.66-2.68(4H，m)，2.78-2.86(1H，m)，2.88-3.02(1H，m)，3.23-3.28(1H，m)，3.36-3.44(1H，m)，3.68-3.71(4H，m)，5.01-5.14(1H，m)。m/z 189(M+H)⁺；保留时间＝0.17。

2-[3-(3-氟-4-吗啉-4-基-哌啶-1-基)-苯基]-1-甲基-1H-苯并咪唑

方法P-步骤e-在氮气气氛中将4-(3-氟-哌啶-4-基)-吗啉(0.085g，0.45mmol)、2-(3-溴-苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑(方法N，步骤a、b中所述)(0.10g，0.35mmol)和碳酸铯(10.50g，32.2mmol)放入干燥密封的7mL小瓶中，加入干甲苯(0.4mL)。同时在氮气气氛中将乙酸钯(0.016g，0.07mmol)和BINAP(0.065g，0.10mmol)放入另一个干燥密封的7mL小瓶，用干甲苯(0.8mL)稀释。约20分钟后，将得到的混悬液加入到包含原料的小瓶中。

将该反应混合物在85℃加热24h，然后冷却至室温，通过SCX过滤(洗脱液：首先10mL DCM∶MeOH 1∶1，然后10mL 2.0N氨的MeOH溶液)。减压浓缩氨溶液，通过快速色谱法纯化粗产物(洗脱液：MeOH∶AcOEt，梯度100％AcOEt-MeOH∶AcOEt 1∶4)，得到0.08g的标题化合物。(58％)。

¹H-NMR(400MHz CD3OD)：δ1.91-1.95(1H，m)，2.01-2.11(1H，m)，2.41-2.54(1H，m)，2.67-2.75(4H，m)，2.84-3.04(2H，m)，3.68-3.76(4H，m)，3.88(3H，s)，3.92-3.98(1H，m)，4.09-4.16(1H，m)，5.06-5.19(1H，m)。m/z 395(M+H)⁺；保留时间＝0.27。

实施例38：{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-(1-甲基-哌啶-3-基-甲酮

4-(4-氯-3-乙氧基羰基-苯基)-[1，4]二氮杂庚环-1-甲酸叔丁酯

方法Q-步骤a-将[1，4]二氮杂庚环-1-甲酸叔丁酯(11.5g，0.057mmol)、5，溴-2-氯苯甲酸乙酯(12.5g，0.047mmol)、Pd(OAc)₂(0.21g，1mmol)、rac-2，2’双(二苯基膦基)-1，1’-联萘(BINAP)(0.88g，1.4mmol)和碳酸铯(21.5g，66mmol)混悬于甲苯(200mL)中。将反应回流16h，然后冷却至20℃。将该反应混合物倾入水(200mL)，用AcOEt(3x150mL)萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO₄干燥，减压浓缩，得到棕色油状物，通过快速色谱法纯化(洗脱液：正己烷∶AcOEt，梯度正己烷∶AcOEt 4∶1-正己烷∶AcOEt 1∶1)，得到17.2g的标题化合物。(96％)。

¹H-NMR(400MHz CDCl₃)：δ1.37-1.48(12H，m)，1.96-2.02(2H，m)，3.22-3.35(2H，m)，3.50-3.64(6H，m)，4.39(2H，q)，6.76-6.78(1H，m)，7.10-7.11(1H，m)，7.23-7.26(1H，m)。m/z 383(M+H)⁺；保留时间＝7.70。

2-(2-氯-5-[1，4]二氮杂庚环-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑

方法Q-步骤b-向冷却至0℃的在氮气气氛中的三甲基铝(2.0M的甲苯溶液)(90mL，180mmol)在甲苯(300mL)中的溶液中逐步加入苯-1，2-二胺(6.5g，60mmol)。将该溶液在0℃搅拌30分钟，然后在15-20℃搅拌至甲烷停止放出。向得到的溶液中一次加入4-(4-氯-3-乙氧基羰基-苯基)-[1，4]二氮杂庚环-1-甲酸叔丁酯(15.2g，40mmol)。将该反应加热至回流24h，然后冷却至0℃。谨慎加入水(70mL)，然后加入MeOH(700mL)。过滤固体沉淀，减压浓缩滤液。用热DCM∶MeOH 1∶1(400mL)、然后用AcOEt(200mL)洗涤沉淀。减压浓缩溶液。合并两次萃取物，通过快速色谱法纯化(洗脱液：AcOEt∶MeOH∶NH3，梯度100％AcOEt-AcOEt∶MeOH∶NH373∶25∶2)，得到9.3g的2-(2-氯-5-[1，4]二氮杂庚环-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑和N-(2-氨基-苯基)-2-氯二氮杂庚环-1-基-苯甲酰胺的混合物。

m/z 345(M+H)⁺；保留时间＝3.07；m/z 327(M+H)⁺；保留时间＝4.1。

2-(2-氯-5-[1，4]二氮杂庚环-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑

方法Q-步骤c-将2-(2-氯-5-[1，4]二氮杂庚环-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑和N-(2-氨基-苯基)-2-氯二氮杂庚环-1-基-苯甲酰胺(10.1g)的3∶1混合物溶于乙酸(120mL)，在55℃加热16h。将反应冷却至20℃，减压浓缩。将得到的棕色油状物与Et₂O一起研磨，干燥。将乙酸盐溶于10％MeOH/DCM(100mL)和NaHCO₃ 0.1M水溶液(200mL)。沉淀形成，搅拌2h，然后过滤，在60℃干燥，得到7.92g标题化合物。(两步内61％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ2.11-2.17(2H，m)，3.07-3.08(2H，m)，3.26(2H，bs)，3.60-3.63(2H，m)，3.82-3.84(2H，m)，7.12-7.15，(1H，m)，7.40-7.41(1H，m)，7.54-7.56(1H，m)，7.60-7.64(2H，m)，7.88-7.92(2H，m)，9.40(2H，bs)。m/z 327(M+H)⁺；保留时间＝4.1。

3-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-羰基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯

方法Q-步骤d-将2-(2-氯-5-[1，4]二氮杂庚环-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑(0.25g，0.76mmol)、HOBt(0.12g，0.86mmol)、NMM(0.5mL，3.9mmol)、哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯(0.17g，0.76mmol)和EDC(0.22g，1.16mmol)溶于DCM(8.0mL)，在20℃搅拌16h。加入水(6.0mL)。分离有机层，减压浓缩，通过快速色谱法纯化粗产物(洗脱液：100％AcOEt)，得到0.25g标题化合物。(100％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ1.28-1.51(11H，m)，1.56-1.89(3H，m)，2.01(1H，m，)，2.60-2.71(3H，m)，3.41-3.76(7H，m)，3.91-4.03(3H，m)，6.90-6.95(1H，m)，7.20-7.30(3H，m)，7.34-7.37(1H，m)，7.63(2H，bs)。m/z 536(M+H)⁺；保留时间＝1.85。

{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-哌啶-3-基-甲酮

方法Q-步骤e-将3-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-羰基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.21g，0.39mmol)溶于异丙醇(4mL)，加入乙酰氯(0.17mL，2.4mmol)。将反应在40℃加热16h，然后冷却至室温，减压浓缩，在60℃干燥，得到0.19g标题化合物，为二盐酸盐(94％)。

¹H-NMR(400MHz CD3OD)：δ1.56-2.07(6H，m)，3.04-3.25(5H，m)，3.42-3.54(1H，m)，3.59-3.87(6H，m)，3.91-4.08(1H，m)，7.14-7.20(1H，m)，7.25-7.31(1H，m)，7.50-7.56(1H，m)，7.66-7.71(2H，m)，7.87-7.92(2H，m)。

m/z 438(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-(1-甲基-哌啶-3-基-甲酮

方法Q-步骤f-将{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-哌啶-3-基-甲酮(0.18g，0.34mmol)混悬于DCM(8mL)中。加入三乙胺(0.5mL 3.5mmol)，得到溶液，然后加入AcOH(0.5mL)和甲醛37％水溶液)(0.1mL)。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.14g，0.63mmol)，将该反应在室温搅拌24h，然后在40℃搅拌4天。将反应混合物浓缩至4mL，然后再加入甲醛(0.1mL)、三乙胺(0.5mL，3.5mmol)、AcOH(0.5mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.14g，0.63mmol)，将该反应在100℃、在微波中加热20分钟。用NaOH 2.0N溶液(4mL)使反应停止，搅拌15分钟。分离有机层，减压下浓缩。通过快速色谱法纯化残余物(洗脱液：正己烷∶AcOEt∶MeOH∶NH₃，梯度正己烷∶AcOEt 1∶1-AcOEt∶MeOH∶NH380∶18∶2)，得到0.07g标题化合物，通过制备型HPLC进一步纯化，得到0.02g标题化合物。(13％)。

¹H-NMR(400MHz CD3OD)：δ1.37-1.94(4H，m)，1.98-2.10(2H，m)，2.56-2.62(3H，m)，2.68-2.80(2H，m)，2.98-3.06(2H，m)，3.44-4.04(9H，m)，6.90-6.98(1H，m)，7.14-7.21(1H，m)，7.28-7.40(3H，m)，7.63-7.67(2H，m)。m/z 452(M+H)⁺；保留时间＝分裂峰。

实施例39：4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-甲酸苯基酰胺

4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-甲酸苯基酰胺

方法R-向2-(2-氯-5-[1，4]二氮杂庚环-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑(方法Q，步骤a、b、c)(0.10g，0.30mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入异氰酸苯酯(0.03mL，0.30mmol)，将得到的混悬液在室温搅拌16h。过滤沉淀，然后通过快速色谱法纯化(洗脱液：EtOAc∶己烷，1∶4)，得到0.06g(45％)的标题化合物。

¹H-NMR (400MHz，DMSO)：δ1.89-1.95(2H，m)，3.39-3.42(2H，m)，3.56-3.59(2H，m)，3.64(4H，bs)，6.88-6.93(2H，m)，7.16-7.24(5H，m)，7.33-7.35(1H，m)，7.38-7.41(2H，m)，7.52-7.54(1H，m)，7.67-7.69(1H，m)，12.56(1H，s)。m/z＝446[M+H]⁺；保留时间＝5.87。

实施例40：4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-甲酸(2-二甲氨基-乙基)-酰胺

4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-甲酸(2-二甲氨基-乙基)-酰胺

方法S-向N，N-二甲基-乙-1，2-二胺(0.85g，0.96mmol)和三乙胺(0.50mL，3.84mmol)在二噁烷中的溶液中滴加异丙基氯甲酸酯(0.10mL，0.96mmol)，在室温搅拌1h后，加入2-(2-氯-5-[1，4]二氮杂庚环-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑(方法Q，步骤a、b、c)(0.21g，0.64mmol)。将得到的混合物在150℃在微波下加热1h。然后减压除去溶剂，使粗产物分配在二氯甲烷(8mL)与水(2mL)之间，分离有机层，上硅胶柱进行纯化(洗脱液：EtOAc∶MeOH∶NH₃，，梯度80∶18∶2-70∶28∶2)，得到279mg的标题化合物，具有定量收率。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.97-2.00(2H，m)，2.85(6H，s)，2.92-2.95(1H，m)，3.12-3.15(1H，m)，3.41-3.46(4H，m)，3.65-3.74(6H，m)，6.97-7.00(1H，m)，7.21-7.22(1H，m)，7.38-7.41(3H，m)，7.69-7.72(2H，m)。

m/z＝441[M+H]⁺；保留时间＝4.12。

实施例41：1-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-2-二甲氨基-乙酮

1-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-2-二甲氨基-乙酮

方法T-步骤a-将二甲基甘氨酸(0.78g，0.76mmol)、N，N-二异丙基乙胺(0.20mL，1.14mmol)和o-苯并三唑-N，N，N’，N’-四甲基-脲-六氟-磷酸盐(HBTU)(0.32g，0.84mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液在室温搅拌15min，然后加入2-(2-氯-5-[1，4]二氮杂庚环-1-基-苯基)-1H-苯并咪唑(方法Q，步骤a、b、c)(0.25g，0.76mmol)。在室温16h搅拌后，除去溶剂，通过快速色谱法纯化粗产物(洗脱液：梯度EtOAc∶己烷/50∶50-EtOAc∶己烷∶NH3/80∶18∶2)，得到0.16g的标题化合物(50％)。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.93-2.04(2H，m)，2.15(3H，s)，2.21(3H，s)，3.07-3.21(2H，m)，3.45-3.51(1H，m)，3.54-3.57(1H，m)，3.63-3.70(3H，m)，3.76-3.84(3H，m)，6.90-6.95(1H，m)，7.20-7.31(3H，m)，7.33-7.37(1H，m)，7.64(2H，bs)。m/z＝412[M+H]⁺；保留时间＝4.24。

实施例42：(2-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-乙基)-二甲基-胺

(2-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-乙基)-二甲基-胺

方法T-步骤b-向1-{4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-2-二甲氨基-乙酮(0.13g，0.31mmol)在四氢呋喃(4mL)中的溶液中加入1M LiAlH₄(0.31mL，0.31mmol)，将得到的混合物在室温搅拌72h，然后用水(20mL)和2N NaOH(20mL)猝灭。然后使该反应混合物通过短塞(Na₂SO₄)，减压除去溶剂，通过制备型HPLC纯化粗产物，得到0.03g(25％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.98-2.04(2H，m)，2.29(6H，s)，2.53-2.56(2H，m)，2.66-2.70(4H，m)，2.85-2.88(2H，m)，3.55-3.58(2H，m)，3.61-3.63(2H，m)，6.86-6.89(1H，m)，7.16-7.17(1H，m)，7.26-7.30(2H，m)，7.32-7.35(1H，m)，7.63(2H，bs)。

m/z＝398[M+H]⁺；保留时间＝4.53。

实施例43：N，N-二甲基-2-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-乙酰胺

4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基-[1，4]二氮杂庚环-1-甲酸叔丁酯

方法U、V、W、Ab-步骤a在Ar气氛中将BINAP(5.85g，9.4mmol)和Pd(OAc)₂(1.41g，6.3mmol)放入4颈圆底烧瓶。将该混合物在Ar气流中搅拌10分钟，然后加入300ml无水甲苯。同时在Ar气氛中干燥的另一4-颈圆底烧瓶中放入预先溶于300ml无水甲苯的2-(3-溴苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑(方法O、Oa步骤a所述)(9.0g，31.3mmol)、1-BOC-高哌嗪(8.0ml，40.7mmol)和Cs₂CO₃(50.99g，156.5mmol)。将该混合物搅拌约10分钟，然后将第一个烧瓶的内含物加入到第二个烧瓶中。将该反应在回流温度搅拌过夜。冷却至室温后，用具有硅藻土垫的gouch过滤该混悬液。减压蒸发澄清溶液，通过二氧化硅versaflsh自动快速色谱法(1产物g/30二氧化硅g)纯化残余物(25.0g)，从Cy∶EtOAc＝9∶1到Cy∶EtOAc＝1∶9洗脱，得到纯的产物，为棕色泡沫(5.2g，41％)。

¹H-NMR(d6DMSO)：1.26(d，9H)；1.84(m，2H)；3.25(m，2H)；3.61(m，4H)；3.86(s，3H)；6.91(dd，1H)7.00(t，1H)；7.10(s，1H)；7.27(m，3H)；7.59(d，1H)；7.67(d，1H)。m/z＝407[M+H]⁺；保留时间＝8.20min。

2-(3-[1，4]二氮杂庚环-1-基苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑二盐酸盐

方法U、V、W、Ab-步骤b向4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基-[1，4]二氮杂庚环-1-甲酸叔丁酯(2.20g，5.61mmol)在甲醇(3mL)中的混合物中加入2M HCl的Et₂O溶液(10mL)，将得到的混合物在室温搅拌6h。然后减压除去溶剂，将得到的盐与Et₂O研磨，减压过滤，真空干燥，得到1.60g(93％)的标题化合物，为盐酸盐。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ2.13-2.19(2H，m)，3.07-3.08(2H，m)，3.24(2H，bs)，3.61-3.64(2H，m)，3.84-3.87(2H，m)，4.06(3H，s)，7.14-7.22(2H，m)，7.33(1H，bs)，7.49-7.53(1H，m)，7.62-7.68(2H，m)，7.86-7.90(1H，m)，8.04-8.08(1H，m)，9.54(2H，bs)。m/z＝307[M+H]⁺；保留时间＝分裂峰。

N，N-二甲基-2-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-乙酰胺

方法U-步骤c-将2-(3-[1，4]二氮杂庚环-1-基苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑(0.30g，0.79mmol)、2-氯-N，N-二甲基-乙酰胺(0.14g，1.18mmol)和三乙胺(0.44mL，3.20mmol)在二噁烷(8mL)中的混合物在80℃加热16h。然后将该反应冷却至室温，过滤出沉淀，减压蒸发有机相。通过快速色谱法纯化残余物(洗脱液：EtOAc 100％-EtOAc∶MeOH∶NH389∶10∶1)，得到0.11g(34％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.93-2.04(2H，m)，2.15(3H，s)，2.21(3H，s)，3.07-3.21(2H，m)，3.45-3.51(1H，m)，3.54-3.57(1H，m)，3.63-3.70(3H，m)，3.76-3.84(3H，m)，6.90-6.95(1H，m)，7.20-7.31(3H，m)，7.33-7.37(1H，m)，7.64(2H，bs)。m/z＝392[M+H]⁺；保留时间＝4.87min。

实施例44：2-[3-(4-甲磺酰基-[1，4]二氮杂庚环-1-基)-苯基]-1-甲基-1H-苯并咪唑

2-[3-(4-甲磺酰基-[1，4]二氮杂庚环-1-基)-苯基]-1-甲基-1H-苯并咪唑

方法V-步骤d-向2-(3-[1，4]二氮杂庚环-1-基苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑(0.18g，0.46mmol)和三乙胺(0.32mL，2.30mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入甲磺酰氯(0.04mL，0.55mmol)。在室温16h搅拌后，加入水(1mL)，用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，减压蒸发。通过快速色谱法纯化得到的粗产物(洗脱液：EtOAc)，得到0.10g(54％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.87-1.91(2H，m)，2.81(3H，s)，3.19-3.22(2H，m)，3.42-3.45(2H，m)，3.63-3.66(2H，m)，3.69-3.71(2H，m)，3.84(3H，s)，6.91-6.94(1H，m)，7.00-7.02(1H，m)，7.09-7.10(1H，m)，7.20-7.29(2H，m)，7.32-7.36(1H，m)，7.57-7.59(1H，m)，7.65-7.66(1H，m)。m/z＝385[M+H]⁺；保留时间＝5.49min。

实施例45：{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮

{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮

方法W-步骤e-向三光气(0.41g，0.13mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入在二氯甲烷(2mL)中的2-(3-[1，4]二氮杂庚环-1-基苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑二盐酸盐(0.14g，0.37mmol)和DIPEA(0.11mL，0.66mmol)。在室温15分钟搅拌后，加入N-甲基-哌嗪(0.04mL，0.44mmol)和DIPEA(0.04mL，0.22mmol)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液。将得到的混悬液在室温搅拌10min。将该混合物倾倒在饱和NaHCO₃溶液(25mL)和二氯甲烷(25mL)的混合物中，用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，减压浓缩，得到残余物，通过制备型HPLC纯化，得到20mg(13％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ2.02-2.13(2H，m)，2.89(3H，s)，3.02-3.58(10H，m)，3.67-3.72(4H，m)，3.84-3.86(2H，m)，4.10(3H，s)，7.08-7.20(3H，m)，7.51-7.55(1H，m)，7.63-7.69(2H，m)，7.82-7.93(2H，m)。

m/z＝433[M+H]⁺；保留时间＝4.75min。

实施例46：1-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-2-哌啶-1-基-乙酮

1-{4-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-[1，4]二氮杂庚环-1-基}-2-哌啶-1-基-乙酮

方法Ab-步骤f-将哌啶-1-基-乙酸(0.12g，0.86mmol)和1，1-羰基二咪唑(0.14g，0.86mmol)在乙腈(3mL)中的溶液在室温搅拌4h，然后加入2-(3-[1，4]二氮杂庚环-1-基苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑二盐酸盐(0.26g，0.86mmol)和三乙胺(0.24mL，1.71mmol)在乙腈(2mL)中的溶液。将得到的混悬液在70℃加热过夜，然后冷却至室温，减压除去溶剂。用二氯甲烷(10mL)稀释得到的残余物，用水(2x3mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，减压蒸发。通过快速色谱法纯化残余物(洗脱液：二氯甲烷∶MeOH，梯度100％二氯甲烷-95％二氯甲烷∶5％MeOH)，得到0.12g(32％)的标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ1.21-1.46(7H，m)，1.83-1.97(2H，m)，2.21-2.31(4H，m)，2.95-3.02(2H，m)，3.27-3.30(2H，m)，3.48-3.70(5H，m)，3.84-3.85(3H，m)，6.88-7.01(2H，m)，7.06-7.11(1H，m)，7.20-7.35(3H，m)，7.57-7.61(1H，m)，7.63-7.66(1H，m)。m/z＝432[M+H]⁺；保留时间＝4.64min。

实施例47：{1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-3-基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮

1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-3-甲酸乙酯

方法X-步骤a-将3-哌啶甲酸乙酯(0.55g，3.48mmol)、2-(3-溴苯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑(方法O、Oa步骤a所述)(0.50g，1.74mmol)、Pd(OAc)₂(0.008g，0.035mmol)、rac-2，2’双(二苯基膦基)-1，1’-联萘(BINAP)(0.78g，0.052mmol)和碳酸铯(0.78g，2.08mmol)混悬于甲苯(20mL)中，用N₂脱气。将反应在150℃、在微波中加热30分钟。将反应倾入水(200mL)中，用AcOEt(100mL)萃取。收集有机层，减压浓缩。通过快速色谱法纯化粗反应混合物(洗脱液：正己烷∶AcOEt，梯度100％正己烷-正己烷∶AcOEt 7∶3)，得到0.4g标题化合物。(63％)。

¹H-NMR(400MHz CDCl₃)：δ1.28(3H，s)，1.66-1.77(2H，m)，1.81-1.89(1H，m)，2.04-2.07(1H，m)，2.66-2.73(1H，m)，2.89-2.96(1H，m)，3.10-3.16(1H，m)，3.58-3.62(1H，m)，3.80-3.84(1H，m)，3.88(3H，s)，4.15-4.21(2H，m)，7.09-7.12(2H，m)，7.31-7.42(5H，m)，7.83-7.86(1H，m)。

1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-3-甲酸

方法X-步骤b-将1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-3-甲酸乙酯(2.0g，5.51mmol)溶于MeOH∶水5∶2(35mL)中。加入NaOH(0.44g，11mmol)，将反应在40℃加热3h。减压浓缩反应混合物，溶于水(30mL)，用AcOEt(30mL)洗涤。用浓HCl将水层酸化至pH 5.5。过滤出白色固体，与水(20mL)和正己烷(20mL)研磨，得到1.60g的标题化合物。(87％)。

¹H-NMR(400MHz CD₃OD)：δ1.68-1.77(2H，m)，1.83-1.88(1H，m)，2.01-2.06(1H，m)，2.64-2.71(1H，m)，2.92-2.99(1H，m)，3.12-3.17(1H，m)，3.57-3.60(1H，m)，3.77-3.81(1H，m)，3.90(3H，s)，7.18-7.21(2H，m)，7.29-7.38(3H，m)，7.42-7.46(1H，m)，7.56-7.58(1H，m)，7.67-7.69(1H，m)。m/z 336(M+H)⁺；保留时间＝3.65。

{1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-3-基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮

方法X-步骤c-将1-[3-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-苯基]-哌啶-3-甲酸(0.10g，0.30mmol)加入到搅拌的二异丙基乙胺(DIPEA)(89μL，0.36mmol)、HBTU(0.12g，0.33mmol)和N-甲基-哌嗪(0.04g，0.36mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中。将该反应在35℃搅拌过夜，减压浓缩。通过快速色谱法、通过NH2柱纯化粗反应混合物(洗脱液：正己烷∶AcOEt，梯度100％正己烷100％AcOEt)，得到0.055g的标题化合物。(44％)。

¹H-NMR(400MHz CD₃OD)：δ1.59-1.69(1H，m)，1.74-1.86(2H，m)，1.93-1.96(1H，m)，2.35(3H，s)，2.40-2.61(4H，m)，2.79-2.86(1H，m)，2.94-3.06(2H，m)，3.60-3.66(4H，m)，3.80-3.85(2H，m)，3.89(s，3H)，7.16-7.19(2H，m)，7.28-7.36(3H，m)，7.42-7.46(1H，m)，7.54-7.57(1H，m)，7.66-7.68(1H，m)。m/z 418(M+H)⁺；保留时间＝4.75。

实施例48：{1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮

2-[2-氯-5-(4-乙氧基羰基-哌啶-1-基)-苯基]-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯

方法Y、Z-步骤a-将异3-哌啶甲酸乙酯(1.54g，9.8mmol)、2-(5-溴-2-氯苯基)-1H-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯(方法O、OA、步骤d、e所述)(2.0g，4.9mmol)、Pd(OAc)₂(0.22g，0.98mmol)、rac-2，2’双(二苯基膦基)-1，1’-联萘(BINAP)(0.90g，1.47mmol)和碳酸铯(8.0g，24.5mmol)混悬于甲苯(40mL)中，用N₂脱气。将反应回流至原料完全耗尽。过滤出反应混合物，用水(200mL)洗涤。用AcOEt(100mL)萃取有机层，减压浓缩。通过快速色谱法纯化粗反应混合物(洗脱液：正己烷∶AcOEt，梯度100％正己烷-正己烷∶AcOEt 1∶1)，得到1.6g标题化合物。(67％)。

¹H-NMR(400MHz CDCl₃)：δ1.28(3H，t)，1.40(9H，s)，1.83-1.94(2H，m)，2.01-2.09(2H，m)，2.42-2.49(1H，m)，2.82-2.88(2H，m)，3.63-3.68(2H，m)，4.16(2H，q)，7.00(1H，bs)，7.11(1H，bs)，7.29-7.33(1H，m)，7.37-7.45(2H，m)，7.80-7.82(1H，m)，8.11-8.13(1H，m)。m/z 484(M+H)⁺；保留时间＝8.69。

1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-甲酸乙酯

方法Y、Z-步骤b-将2-[2-氯-5-(4-乙氧基羰基-哌啶-1-基)-苯基]-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯(1.98g，4.1mmol)溶于异丙醇(50mL)。滴加乙酰氯(2.1g，28.7mmol)，将该反应混合物在40℃加热至无原料保留。减压浓缩反应，得到2.0g的标题化合物。(100％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ1.18(3H，t)，1.60-1.70(2H，m)，1.89-1.93(2H，m)，2.53-2.63(1H，m)，2.92-2.98(2H，m)，3.79-3.82(2H，m)，4.07(2H，q)，7.29-7.32(1H，m)，7.53-7.64(4H，m)，7.86-7.91(2H，m)。m/z 384(M+H)⁺；保留时间＝6.59。

1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-甲酸

方法Y、Z-步骤c-将1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-甲酸乙酯(2.0g，5.2mmol)溶于MeOH∶水3∶2(50mL)，加入NaOH(0.41g，10.3mmol)。将该反应在40℃搅拌至原料完全耗尽。减压浓缩反应混合物，溶于水(30mL)，用AcOEt(30mL)洗涤。用浓HCl中和水层，过滤出白色固体，用水(20mL)和Et2O(20mL)洗涤，得到1.2g的标题化合物。(82％)。

¹H-NMR(400MHz DMSO)：δ1.59-1.69(2H，m)，1.88-1.92(2H，m)，2.36-2.43(1H，m)，2.81-2.87(2H，m)，3.69-3.72(2H，m)，7.07-7.10(1H，m)，7.19-7.23(2H，m)，7.37-7.40(2H，m)，7.61(2H，bs)。m/z 356(M+H)⁺；保留时间＝3.66。

{1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮

方法Y-步骤d-如方法X-步骤c，以1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-甲酸(0.1g，0.28mmol)和1-甲基-哌嗪(37μL，0.34mmol)为原料合成。得到30mg(24％)。

¹H-NMR(400MHz CD₃OD)：δ1.78-1.90(4H，m)，2.32(3H，s)，2.41-2.50(4H，m)，2.82-2.89(3H，m)，3.61-3.66(4H，m)，3.82-3.85(2H，m)，7.09-7.12(1H，m)，7.26-7.30(2H，m)，7.39-7.41(2H，m)，7.62-7.64(2H，m)。

m/z 438(M+H)⁺；保留时间＝4.74。

实施例49：{1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-基}-哌嗪-1-基-甲酮盐酸盐

4-{1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-羰基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯

方法Z-步骤e-如方法X-步骤c所述，以1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-甲酸(0.1g，0.28mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.06g，0.34mmol)为原料合成。(72％)

¹H-NMR(400MHz CD₃OD)：δ1.47(9H，s)，1.90-1.91(4H，m)，2.84-2.90(3H，m)，3.41-3.63(8H，m)，3.83-3.88(2H，m)，7.10-7.13(1H，m)，7.26-7.31(2H，m)，7.39-7.41(2H，m)，7.63(2H，bs)。m/z 524(M+H)⁺；保留时间＝6.32。

{1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-基}-哌嗪-1-基-甲酮

方法Z-步骤f-将4-{1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯-苯基]-哌啶-4-羰基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.05g，0.11mmol)混悬于异丙醇(4mL)中。滴加乙酰氯(55μL，0.77mmol)，将该反应混合物加热至40℃，直到无原料保留。减压浓缩反应，得到0.05g标题化合物。(100％)。

m/z 424(M+H)⁺；保留时间＝4.10。

表1显示了根据表第3栏所示和上述详细讨论在实施例1-49合成中的方法制备的合成化合物的选择。

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生物活性

Smo的克隆和表达稳定重组Smo的细胞系的生成

通过PCR、使用标准条件扩增人Smo编码序列。模板是来自Origene(目录号TC122724)的pcMV6-XL5-Smo。如下命名引物：

正向(5’GATCGGTACCGGGCTTTTGCTGAGTT 3’)具有KpnI限制位点；

反向(5’GATCGCGGCCGCCTACTTATCGTCGTCATCCTTGTAATCGAAGTCCGAGTCTGC 3’)具有NotI限制位点，终止密码子和5’端上的FLAG-编码序列。

得到的扩增子是2424bp长度并且包含完全Smo-编码序列、FLAG-标记和两个限制位点，一端一个。用KpnI和NotI限制酶和为克隆选择的pcDNA5/FRT质粒(Invitrogen)双重消化该扩增子。Smo-FLAG编码序列连接和克隆入pcDNA5/FRT  质粒产生命名为pcDNA5/FRT Smo-FLAG和7432bp长度的质粒。

FlpIN技术(Invitrogen)用于使用FlpIN293细胞系(Invitrogen，RT50-07)生成稳定表达Smo-FLAG的细胞系。这是一种通过用pFRT/lacZeo质粒稳定转染生成博莱霉素-抗性FlpIN293宿主细胞系而来源于HEK293细胞的品系。FlpIN293细胞适合于生成包含整合的Flp重组靶(FRT)位点的稳定哺乳动物细胞系(Invitrogen)。

同时进行pcDNA5/FRT Smo-FLAG质粒转染(或就模拟转染的细胞而言，用空质粒转染)与携带Flp重组酶的pOG44质粒转染，所述Flp重组酶催化宿主细胞中FRT位点分别与pcDNA5/FRT Smo-FLAG表达载体或pcDNA5/FRT空载体之间的同源组成重组。表达Smo-FLAG的细胞和模拟转染细胞具有潮霉素B抗性并且对β-gal染色呈阴性。还通过蛋白质印迹检查了Smo和FLAG抗原表达。生成的两种细胞系命名为显示模拟转染的293FlpIN/克隆E-3和显示Smo-FLAG转染细胞系的293FlpIN/克隆3-5。

细胞培养条件

将细胞维持在包含10％胎牛血清(均来自Invitrogen)、添加剂了0.25mg/ml潮霉素B(Invitrogen)的DMEM中。将细胞维持在37℃、95％空气-5％二氧化碳完全加湿的环境中，融化后至多22-25个循环使用。

结合测定研发

通过替代结合测定、使用Smo受体配体(Bodipy-Cyclopamine，Toronto Research Chemical Inc，cat#B674800)作为替代的标记配体测试化合物与Smo受体的相互作用。

为了测定荧光配体的Kd(其中达到50％最大结合的配体浓度)和Bmax(抗原特异性结合生物制品中的受体的配体最大量)，通过从总体结合(TB)中扣除非特异性结合(NSB)计算特异性结合(SB)。通过添加增加浓度的Bodipy-环杷明到细胞中测定TB，同时通过添加增加浓度的Bodipy-环杷明与饱和浓度的充分描述的拮抗剂(就此而言是N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯苯基]-3，5-二甲氧基-苯甲酰胺(Rubin等人WO2003011219)在选择的10μM下)的混合物到细胞中测定NSB。就Bodipy-环杷明的各浓度而言，通过从TB中扣除NSB值计算SB。从SB曲线计算Bmax和Kd。在该情况中，发现稳定模拟转染的细胞系克隆E-3具有115nM的Kd，同时发现稳定Smo-FLAG转染的细胞系克隆3-5具有44.3nM的Kd。Ki是抑制50％标记配体特异性结合(SB)的未标记配体的浓度，并且对标记配体的有效使用浓度校准。根据Cheng-Prusoff方程计算Ki，Ki＝IC₅₀/[1+[bodipy-环杷明]/Kd)]。

测试化合物的结合测定

使用Burker室计数293FlpIN/克隆E-3和293FlpIN/克隆3-5细胞，并且在两个96孔培养板(U bottom，Sigma Aldrich，cat#M8185-100EA)中转染100000个细胞/100μl DMEM 1％FBS。293FlpIN/克隆E-3细胞用作及时检查超表达Smo的293FlpIN/克隆3-5细胞的荧光(FLU)变化内标对照。

用DMEM 1％FBS制备对照品和化合物并且将100μl加入到细胞中。将全部对照品和化合物与终浓度的5nM Bodipy-环杷明一起孵育。

将化合物溶于DMSO(储备溶液10mM)，并且首次在10μM测试(单一浓度测定)；将每种化合物至少重复两次(在两个不同培养板上)。当Bodipy-环杷明被高于30％阈值替代时，使用浓度-响应测定与8种化合物通过量/培养板再测试化合物，且浓度范围是：100、10、1、0.5、0.1、0.01、0.05、0.001和0.0001μM。

作为阴性对照，使用293FlpIN/克隆3-5细胞，其中对单一浓度测定而言加入DMSO按1∶1000稀释，就浓度响应测定而言按1∶100稀释。

作为替代Bodipy-环杷明结合的阳性对照，使用10μM浓度的N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯苯基]-3，5-二甲氧基-苯甲酰胺(Rubin等人WO2003011219)。

将两个培养板在室温、避光的振摇平台上孵育4小时。孵育后，以1600rpm离心培养板5min，用包含2％FBS的PBS洗涤两次。最终将细胞重新混悬于170μl洗涤缓冲液中并且用FACScalibur HTS系统(Beeton Dickinson)获取荧光信号。

将仪器获取参数设定在每个使用未处理的未标记的293FlpIN/克隆E-3细胞的培养板的读数开始状态。使用的HTS获取程序是BD^TM PlateManager(BD Bioscience)且使用BD CellQuest^TM Pro软件(BDBioscience)进行数据分析。

通过重叠阳性和阴性对照的FL1-H直方图和在两曲线之间交叉处设定标记进行定量。仅定量荧光多于设定标记的情况。然后根据阴性对照(0％Bodipy-环杷明替代)和阳性对照(100％Bodipy-环杷明替代)对各值进行归一化。

来自实施例1-449的化合物在上述条件下测试时均展示出83pM-31μM范围的Ki值。

使用碱性磷酸酶测定的测试化合物

已经在体外小鼠间充质细胞系C3H10T1/2中证实了Shh诱导碱性磷酸酶(AP)，即成骨细胞分化标记(Katsuura等人，1999；Kinto等人，1997；Murone等人，1999；Nakamura等人，1997，Wu等人2004。因此，为了分析小分子与Hedgehog-Gli信号传到之间的干扰，应用基于小鼠细胞系中AP活化的功能测定。试剂盒的底物(Cat S1000，Promega)用于检测溶液中的AP。简言之，使用下列方法。

给聚赖氨酸-包被的澄清平底96-孔培养板(Corning，Cat.3667)充满100μl细胞培养液中10.000个细胞/孔。细胞培养基由DMEM(Cat21969-035)与1％Glutamax(Cat 35050-038)、1％青霉素/链霉素(Cat15140-122)和1％Hepes(15630-056)组成。全部试剂均获自Invitrogen。将培养板在37℃与5％二氧化碳中孵育过夜。然后除去培养基，将包含化合物或参比拮抗剂(N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-氯苯基]-3，5-二甲氧基-苯甲酰胺(Rubin等人WO2003011219))的100μl新鲜培养基加入到各孔中。全部化合物和参比溶液均包含2μM浓度的激动剂purmorphamine(Sinha等人Nature Chem.Biol.2，29-30(2005))。一式三份在100pM-50μM范围的10个浓度下测试化合物。将每一样品的DMSO终浓度调整至在培养基中1％。将细胞与化合物溶液在37℃、在5％二氧化碳的存在下孵育72小时。从培养板中除去细胞培养基，向各孔中加入40μl 1∶5稀释的裂解溶液(Cat E194A，Promega)。然后在黑暗中振荡器上孵育培养板20分钟。最终将40μl再溶解的AttoPhos底物溶液加入到各孔中，然后在振荡器上再孵育15分钟期限。根据供应商的说明书再溶解AttoPhos底物，但将底物溶液始终贮存在-80℃。Safire2培养板读出器(Tecan)用于测定样品中的荧光强度改变，其中使用激发波长430nm和发射波长560nm。

来自实施例1-449的化合物在上述条件下测试时均展示出26pM-42μM范围的IC₅₀值。