8- 苯氨基咪唑并吡啶和它们作为抗癌剂和 / 或抗炎剂的用 途 相关申请的交叉引用
本申请要求 2007 年 12 月 19 日提交的美国临时申请 61/015,155 和 2008 年 5 月 16 日提交的美国临时申请 61/054,024 的优先权， 将其公开的全部内容引入本申请作为参 考。
技术领域 本发明涉及具有抗癌活性的咪唑并吡啶， 更具体地， 涉及抑制 MEK 激酶活性的咪 唑并吡啶。本发明还涉及使用所述化合物用于体外、 原位和体内诊断或治疗哺乳动物细胞 或相关病理学症状的方法。
背景技术
为 了 理 解 Ras 如 何 传 送 细 胞 外 生 长 信 号， 出 现 了 MAP( 促 分 裂 原 活 化 蛋 白， mitogen-activated protein) 激酶 (MAPK) 途径作为膜结合 Ras 和细胞核之间的关键通路。 MAPK 途径包括涉及三种关键激酶 ( 即 Raf、 MEK(MAP 激酶激酶 ) 和 ERK(MAP 激酶 )) 的一连 串磷酸化事件。活化的 GTP 结合 Ras 导致 Raf 激酶的活化和间接磷酸化。然后 Raf 在两个 丝氨酸残基 ( 对于 MEK1 为 S218 和 S222， 对于 MEK2 为 S222 和 S226) 上对 MEK1 和 MEK2 进 行磷酸化 (Ahn et al.， Methods in Enzymology 2001， 332， 417-431)。然后活化的 MEK 对 其唯一已知的底物即 MAP 激酶 ERK1 和 ERK2 进行磷酸化。对 ERK1 而言， ERK 经 MEK 的磷酸 化出现在 Y204 和 T202 上， 而对于 ERK2 而言出现在 Y185 和 T183 上 (Ahn et al.， Methods in Enzymology 2001， 332， 417-431)。磷酸化的 ERK 形成二聚物， 然后转移至其发生积聚的 细胞核 (Khokhlatchevet al.， Cell 1998， 93， 605-615)。在细胞核中， 在几种重要的细胞 功能中涉及 ERK， 这些功能包括但不限于核转运、 信号转导 (signal transduction)、 DNA 修 复、 核小体装配和易位 (nucleosome assembly and translocation) 以及 mRNA 加工和翻译 (Ahn et al.， Molecular Cell 2000， 6， 1343-1354)。总的来说， 处理具有生长因子的细胞 导致 ERK1 和 ERK2 的活化， 这导致了增殖， 以及在一些情况下导致了分化 (Lewis et al.， Adv.Cancer Res.1998， 74， 49-139)。
有力的证据显示， MAP 激酶途径中所涉及的蛋白激酶的基因突变和 / 或过度表达 在增殖性疾病中导致不受控制的细胞增殖以及最终导致肿瘤形成。例如， 一些癌症包含 导致由生长因子的连续产生而引起的上述途径的连续活化的突变。其它突变可导致活化 的 GTP 结合 Ras 复合物的失活缺乏， 这又引起 MAP 激酶途径的活化。Ras 的突变致癌形式 在 50％结肠癌和＞ 90％胰腺癌以及多种其它类型的癌症中被发现 (Kohl et al.， Science 1993， 260， 1834-1837)。最近， 已在超过 60％恶性黑素瘤中鉴定了 bRaf 突变 (Davies， H.et al.， Nature 2002， 417， 949-954)。bRaf 中的这些突变引起组成性活化 MAP 激酶级联。对 原发性肿瘤样本和细胞系的研究也已显示在胰腺癌、 结肠癌、 肺癌、 卵巢癌和肾癌 (kidney cancer) 中 MAP 激酶途径的构成性活化或过度活化 (Hoshino， R.et al.， Oncogene 1999，18， 813-822)。
MEK 作为 MAP 激酶级联途径中有吸引力的治疗靶标而出现。处在 Ras 和 Raf 下游 的 MEK 对 MAP 激酶的磷酸化是高度特异性的 ； 事实上， MEK 磷酸化的唯一已知底物是 MAP 激 酶 ERK1 和 ERK2。几项研究中已经显示对 MEK 进行抑制具有潜在的治疗益处。例如， 已经 显示小分子 MEK 抑制剂抑制裸小鼠异种移植物 (nude mouse xenograft) 中的人肿瘤生长 (Sebolt-Leopold et al.， Nature-Medicine 1999， 5(7)， 810-816)、 Trachet et al.， AACR nd Apr.6-10， 2002， Poster#5426 和 Tecle， H.IBC 2 InternationalConference of Protein Kinases， Sep.9-10， 2002)、 阻滞动物中的静态异常性疼痛 (static allodynia)(2001 年 1 月 25 日公开的 WO 01/05390) 以及抑制急性髓细胞性白血病 (acute myeloid leukemia) 细胞的生长 (Milella et al.， J Clin Invest2001， 108(6)， 851-859)。
在例如 WO02/06213、 WO 03/077855 和 WO03/077914 中讨论了几种小分子 MEK 抑制 剂。仍然存在对作为有效和安全的治疗剂的新 MEK 抑制剂需要， 所述有效和安全的治疗剂 用于治疗各种增殖性疾病状态如与 MEK 活动过度相关的病症以及由 MEK 级联调节的疾病。 发明内容 本发明一般地涉及式 I 的咪唑并吡啶 ( 和 / 或其溶剂化物、 水合物和 / 或盐 ) 及 其盐， 其具有抗癌和 / 或抗炎活性， 更具体地， 具有 MEK 激酶抑制活性。某些过度增殖性 (hyperproliferative) 和炎性疾病的特征在于对 MEK 激酶功能的调节， 例如由于所述蛋白 质的突变或过度表达导致的调节。因此， 本发明化合物及其组合物可用于治疗过度增殖性 疾病 ( 如癌症 ) 和 / 或炎性疾病 ( 如类风湿性关节炎 )。
其中 ：
Z1 为 CR1 或 N ；
R1 为 H、 C1-C3 烷基、 卤素、 CF3、 CHF2、 CN、 ORA 或 NRARA ；
R1’为 H、 C1-C3 烷基、 卤素、 CF3、 CHF2、 CN、 ORA 或 NRARA ；
其中 RA 各自独立地为 H 或 C1-C3 烷基 ；
Z2 为 CR2 或 N ；
Z3 为 CR3 或 N ； 同时条件是 ： 仅 Z1、 Z2 和 Z3 中之一可为 N ；
R2 和 R3 独立地选自 H、 卤素、 CN、 CF3、 -OCF3、 -NO2、 -(CR14R15)nC( ＝ Y’ )R11、 -(CR14R15) )OR11、 -(CR14R15)nC( ＝ Y’ )NR11R12、 -(CR14R15)nNR11R12、 -(CR14R15)nOR11、 -(CR14R15) nC( ＝ Y’ 11 -(CR14R15)nNR12C( ＝ Y’ )R11、 -(CR14R15)nNR12C( ＝ Y’ )OR11、 -(CR14R15)nNR13C( ＝ Y’ ) nSR 、 11 12 14 15 12 11 14 15 11 14 15 11 14 15 NR R 、 -(CR R )nNR SO2R 、 -(CR R )nOC( ＝ Y’ )R 、 -(CR R )nOC( ＝ Y’ )OR 、 -(CR R ) 11 12 14 15 11 14 15 11 12 )NR R 、 -(CR R )nOS(O)2(OR )、 -(CR R )nOP( ＝ Y’ )(OR )(OR )、 -(CR14R15) nOC( ＝ Y’
10101903387 A CN 101903388n说明书3/47 页OP(OR11)(OR12)、 -(CR14R15)nS(O)R11、 -(CR14R15)nS(O)2R11、 -(CR14R15)nS(O)2NR11R12、 -(CR14R15) 11 -(CR14R15)nS(O)2(OR11)、 -(CR14R15)nSC( ＝ Y’ )R11、 -(CR14R15)nSC( ＝ Y’ ) nS(O)(OR ) 、 11 14 15 11 12 OR 、 -(CR R )nSC( ＝ Y’ )NR R 、 C1-C12 烷基、 C2-C8 烯基、 C2-C8 炔基、 碳环基、 杂环基、 芳基 和杂芳基 ；
R4 为 H、 C1-C6 烷基或 C3-C4 碳环基 ；
Y 为 W-C(O)- 或 W’ ；
W为R5 为 H 或 C1-C12 烷基 ；
X1 选自 R11’和 -OR11’； 当 X1 为 R11’时， X1 任选地与 R5 和它们结合的氮原子一起形 成具有 0-2 个选自 O、 S 和 N 的另外的杂原子的 4-7 元饱和或不饱和的环， 其中所述环任 选地取代有一个或多个选自以下的基团 ： 卤素、 CN、 CF3、 -OCF3、 -NO2、 氧代、 -(CR19R20)nC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nC( ＝ Y’ )OR16、 -(CR19R20)nC( ＝ Y’ )NR16R17、 -(CR19R20)nNR16R17、 -(CR19R20)
OR16、 -(CR19R20)n-SR16、 -(CR19R20)nNR16C( ＝ Y’ )R17、 -(CR19R20)nNR16C( ＝ Y’ )OR17、 -(CR19R20) 18 )NR16R17、 -(CR19R20)nNR17SO2R16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nOC( ＝ nNR C( ＝ Y’ Y’ )OR16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ )NR16R17、 -(CR19R20)nOS(O)2(OR16)、 -(CR19R20)nOP( ＝ Y’ ) 16 17 19 20 16 17 19 20 16 19 20 16 19 20 (OR )(OR )、 -(CR R )nOP(OR )(OR )、 -(CR R )nS(O)R 、 -(CR R )nS(O)2R 、 -(CR R ) 16 17 19 20 16 19 20 16 19 20 -(CR R ) nS(O)(OR ) 、 -(CR R ) nS(O) 2(OR ) 、 -(CR R ) nSC( ＝ Y’ ) n S(O) 2 NR R 、 16 19 20 16 19 20 16 17 21 R 、 -(CR R )nSC( ＝ Y’ )OR 、 -(CR R )nSC( ＝ Y’ )NR R 和 R ； 11’
R 各自独立地为 H、 C1-C12 烷基、 C2-C8 烯基、 C2-C8 炔基、 碳环基、 杂环基、 芳基或杂 芳基 ：
R11、 R12 和 R13 独立地为 H、 C1-C12 烷基、 C2-C8 烯基、 C2-C8 炔基、 碳环基、 杂环基、 芳基 或杂芳基，
或者 R11 和 R12 与它们连接的氮一起形成 3-8 元饱和、 不饱和或芳族的具有 0-2 个 选自 O、 S 和 N 的杂原子的环， 其中所述环任选地取代有一个或多个选自以下的基团 ： 卤素、 CN、 CF3、 -OCF3、 -NO2、 C1-C6 烷基、 -OH、 -SH、 -O(C1-C6 烷基 )、 -S(C1-C6 烷基 )、 -NH2、 -NH(C1-C6 烷 基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )2、 -SO2(C1-C6 烷 基 )、 -CO2H、 -CO2(C1-C6 烷 基 )、 -C(O)NH2、 -C(O) NH(C1-C6 烷 基 )、 -C(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -N(C1-C6 烷 基 )C(O)(C1-C6 烷 基 )、 -NHC(O)(C1-C6 烷 基 )、 -NHSO2(C1-C6 烷 基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )SO2(C1-C6 烷 基 )、 -SO2NH2、 -SO2NH(C1-C6 烷 基 )、 -SO2N(C1-C6 烷基 )2、 -OC(O)NH2、 -OC(O)NH(C1-C6 烷基 )、 -OC(O)N(C1-C6 烷基 )2、 -OC(O) O(C1-C6 烷基 )、 -NHC(O)NH(C1-C6 烷基 )、 -NHC(O)N(C1-C6 烷基 )2、 -N(C1-C6 烷基 )C(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )C(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -NHC(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -NHC(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -NHC(O)O(C1-C6 烷基 ) 和 -N(C1-C6 烷基 )C(O)O(C1-C6 烷基 ) ；
R14 和 R15 独立地选自 H、 C1-C12 烷基、 芳基、 碳环基、 杂环基和杂芳基 ；n
W’ 为
其中为X2 各自独立地为 O、 S 或 NR9 ；
R7 各自独立地选自 ： H、 卤素、 CN、 CF3、 -OCF3、 -NO2、 -(CR14R15)nC( ＝ Y’ )R11、 -(CR14R15) )OR11、 -(CR14R15)nC( ＝ Y’ )NR11R12、 -(CR14R15)nNR11R12、 -(CR14R15)nOR11、 -(CR14R15) nC( ＝ Y’ 11 -(CR14R15)nNR12C( ＝ Y’ )R11、 -(CR14R15)nNR12C( ＝ Y’ )OR11、 -(CR14R15)nNR13C( ＝ Y’ ) nSR 、 NR11R12、 -(CR14R15)nNR12SO2R11、 -(CR14R15)nOC( ＝ Y’ )R11、 -(CR14R15)nOC( ＝ Y’ )OR11、 -(CR14R15) )NR11R12、 -(CR14R15)nOS(O)2(OR11)、 -(CR14R15)nOP( ＝ Y’ )(OR11)(OR12)、 -(CR14R15) nOC( ＝ Y’ 11 12 -(CR14R15)nS(O)R11、 -(CR14R15)nS(O)2R11、 -(CR14R15)nS(O)2NR11R12、 -(CR14R15) nOP(OR )(OR )、 11 -(CR14R15)nS(O)2(OR11)、 -(CR14R15)nSC( ＝ Y’ )R11、 -(CR14R15)nSC( ＝ Y’ ) nS(O)(OR ) 、 OR11、 -(CR14R15)nSC( ＝ Y’ )NR11R12、 C1-C12 烷基、 C2-C8 烯基、 C2-C8 炔基、 碳环基、 杂环基、 芳基 和杂芳基 ；
R8 各自独立地选自 C1-C12 烷基、 芳基、 碳环基、 杂环基和杂芳基 ； 9 14 15 11
R 选 自： H、 -(CR R ) nC( ＝ Y’ )R 、 -(CR 14R 15) nC( ＝ Y’ )OR 11、 -(CR 14R 15) )NR11R12、 -(CR14R15)qNR11R12、 -(CR14R15)qOR11、 -(CR14R15)qSR11、 -(CR14R15)qNR12C( ＝ nC( ＝ Y’ Y’)R 11 、-(CR 14 R 15 ) q NR 12 C( ＝ Y’)OR 11 、-(CR 14 R 15 ) q NR 13 C( ＝ Y’)NR 11 R 12 、-(CR 14 R 15 ) 12 11 -(CR14R15)qOC( ＝ Y’ )R11、 -(CR14R15)qOC( ＝ Y’ )OR11、 -(CR14R15)qOC( ＝ Y’ ) qNR SO2R 、 11 12 14 15 11 14 15 11 12 14 15 11 NR R 、 -(CR R )qOS(O)2(OR )、 -(CR R )qOP( ＝ Y’ )(OR )(OR )、 -(CR R )qOP(OR ) (OR12)、 -(CR14R15)nS(O)R11、 -(CR14R15)nS(O)2R11、 -(CR14R15)nS(O)2NR11R12、 C1-C12 烷基、 C2-C8 烯 基、 C2-C8 炔基、 碳环基、 杂环基、 芳基和杂芳基 ；
R10 为 H、 C1-C6 烷基或 C3-C4 碳环基 ；
X4 为 R6 为 H、卤 素、 C1-C6 烷 基、 C2-C8 烯 基、 C2-C8 炔 基、碳 环 基、杂 芳 基、杂 环12
101903387 A CN 101903388说明书5/47 页基、 -OCF3、 -NO2、 -Si(C1-C6 烷基 )3、 -(CR19R20)nNR16R17、 -(CR19R20)nOR16 或 -(CR19R20)n-SR16 ；
R6’为 H、 卤素、 C1-C6 烷基、 碳环基、 CF3、 -OCF3、 -NO2、 -Si(C1-C6 烷基 )3、 -(CR19R20) 16 17 -(CR19R20)nOR16、 -(CR19R20)n-SR16、 C2-C8 烯基、 C2-C8 炔基、 杂环基、 芳基或杂芳基 ； nNR R 、
p 为 0、 1、 2或3；
n 为 0、 1、 2或3；
q为2或3；
其中所述 R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 R6、 R6’ 、 R 7、 R 8、 R 9、 R10、 R11、 R11’ 、 R12、 R13、 R14、 R15 和 RA 的 烷基、 烯基、 炔基、 碳环基、 杂环基、 芳基和杂芳基各自独立地任选地取代有一个或多个独 立地选自以下的基团 ： 卤素、 CN、 CF3、 -OCF3、 -NO2、 氧代、 -Si(C1-C6 烷基 )3、 -(CR19R20)nC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nC( ＝ Y’ )OR16、 -(CR19R20)nC( ＝ Y’ )NR16R17、 -(CR19R20)nNR16R17、 -(CR19R20) 16 -(CR19R20)nSR16、 -(CR19R20)nNR16C( ＝ Y’ )R17、 -(CR19R20)nNR16C( ＝ Y’ )OR17、 -(CR19R20) nOR 、 18 )NR16R17、 -(CR19R20)nNR17SO2R16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nOC( ＝ nNR C( ＝ Y’ Y’ )OR16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ )NR16R17、 -(CR19R20)nOS(O)2(OR16)、 -(CR19R20)nOP( ＝ Y’ ) 16 17 19 20 16 17 19 20 16 19 20 16 19 20 (OR )(OR )、 -(CR R )nOP(OR )(OR )、 -(CR R )nS(O)R 、 -(CR R )nS(O)2R 、 -(CR R ) 16 17 19 20 16 19 20 16 19 20 -(CR R ) nS(O)(OR ) 、 -(CR R ) nS(O) 2(OR ) 、 -(CR R ) nSC( ＝ Y’ ) n S(O) 2 NR R 、 16 19 20 16 19 20 16 17 21 R 、 -(CR R )nSC( ＝ Y’ )OR 、 -(CR R )nSC( ＝ Y’ )NR R 和 R ； 16 17 18
R 、 R 和 R 各自独立地为 H、 C1-C12 烷基、 C2-C8 烯基、 C2-C8 炔基、 碳环基、 杂环 基、 芳基或杂芳基， 其中所述烷基、 烯基、 炔基、 碳环基、 杂环基、 芳基或杂芳基任选地取代 有一个或多个选自以下的基团 ： 卤素、 CN、 -OCF3、 CF3、 -NO2、 C1-C6 烷基、 -OH、 -SH、 -O(C1-C6 烷 基 )、 -S(C1-C6 烷 基 )、 -NH2、 -NH(C1-C6 烷 基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )2、 -SO2(C1-C6 烷 基 )、 -CO2H、 -CO2(C1-C6 烷 基 )、 -C(O)NH2、 -C(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -C(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -N(C1-C6 烷基 )C(O)(C1-C6 烷基 )、 -NHC(O)(C1-C6 烷基 )、 -NHSO2(C1-C6 烷基 )、 -N(C1-C6 烷基 )SO2(C1-C6 烷基 )、 -SO2NH2、 -SO2NH(C1-C6 烷基 )、 -SO2N(C1-C6 烷基 )2、 -OC(O)NH2、 -OC(O) NH(C1-C6 烷 基 )、 -OC(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -OC(O)O(C1-C6 烷 基 )、 -NHC(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -NHC(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -N(C1-C6 烷 基 )C(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )C(O) N(C1-C6 烷基 )2、 -NHC(O)NH(C1-C6 烷基 )、 -NHC(O)N(C1-C6 烷基 )2、 -NHC(O)O(C1-C6 烷基 ) 和 -N(C1-C6 烷基 )C(O)O(C1-C6 烷基 ) ；
或者 R16 和 R17 与它们连接的氮一起形成 3-8 元饱和、 不饱和或芳族的具有 0-2 个 选自 O、 S 和 N 的杂原子的环， 其中所述环任选地取代有一个或多个选自以下的基团 ： 卤素、 CN、 -OCF3、 CF3、 -NO2、 C1-C6 烷基、 -OH、 -SH、 -O(C1-C6 烷基 )、 -S(C1-C6 烷基 )、 -NH2、 -NH(C1-C6 烷 基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )2、 -SO2(C1-C6 烷 基 )、 -CO2H、 -CO2(C1-C6 烷 基 )、 -C(O)NH2、 -C(O) NH(C1-C6 烷 基 )、 -C(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -N(C1-C6 烷 基 )C(O)(C1-C6 烷 基 )、 -NHC(O)(C1-C6 烷 基 )、 -NHSO2(C1-C6 烷 基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )SO2(C1-C6 烷 基 )、 -SO2NH2、 -SO2NH(C1-C6 烷 基 )、 -SO2N(C1-C6 烷基 )2、 -OC(O)NH2、 -OC(O)NH(C1-C6 烷基 )、 -OC(O)N(C1-C6 烷基 )2、 -OC(O) O(C1-C6 烷基 )、 -NHC(O)NH(C1-C6 烷基 )、 -NHC(O)N(C1-C6 烷基 )2、 -N(C1-C6 烷基 )C(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )C(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -NHC(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -NHC(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -NHC(O)O(C1-C6 烷基 ) 和 -N(C1-C6 烷基 )C(O)O(C1-C6 烷基 ) ；
R19 和 R20 各自独立地选自 H、 C1-C12 烷基、 -(CH2)n- 芳基、 -(CH2)n- 碳环基、 -(CH2) n- 杂环基和 -(CH2)n- 杂芳基 ；R21 为 C1-C12 烷基、 C2-C8 烯基、 C2-C8 炔基、 碳环基、 杂环基、 芳基或杂芳基， 其中 R21 的每个成员任选地取代有一个或多个选自以下的基团 ： 卤素、 氧代、 CN、 -OCF3、 CF3、 -NO2、 C1-C6 烷基、 -OH、 -SH、 -O(C1-C6 烷基 )、 -S(C1-C6 烷基 )、 -NH2、 -NH(C1-C6 烷基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )2、 -SO2(C1-C6 烷基 )、 -CO2H、 -CO2(C1-C6 烷基 )、 -C(O)NH2、 -C(O)NH(C1-C6 烷基 )、 -C(O) N(C1-C6 烷 基 )2、 -N(C1-C6 烷 基 )C(O)(C1-C6 烷 基 )、 -NHC(O)(C1-C6 烷 基 )、 -NHSO2(C1-C6 烷 基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )SO2(C1-C6 烷 基 )、 -SO2NH2、 -SO2NH(C1-C6 烷 基 )、 -SO2N(C1-C6 烷 基 )2、 -OC(O)NH2、 -OC(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -OC(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -OC(O)O(C1-C6 烷 基 )、 -NHC(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -NHC(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -N(C1-C6 烷 基 )C(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -N(C1-C6 烷 基 )C(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -NHC(O)NH(C1-C6 烷 基 )、 -NHC(O)N(C1-C6 烷 基 )2、 -NHC(O)O(C1-C6 烷基 ) 和 -N(C1-C6 烷基 )C(O)O(C1-C6 烷基 ) ；
Y’ 各自独立地为 O、 NR22 或 S ； 以及 22
R 为 H 或 C1-C12 烷基。
本发明包括含有式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物、 水合物和 / 或盐 ) 和载体 ( 可 药用载体 ) 的组合物 ( 如药物组合物 )。本发明还包括含有式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化 物、 水合物和 / 或盐 ) 和载体 ( 可药用载体 ) 以及另一种化学治疗药物和 / 或另一种抗炎 药物的组合物 ( 如药物组合物 )。本发明组合物可用于在哺乳动物 ( 例如人 ) 中抑制异常 细胞生长或治疗过度增殖性疾病。本发明组合物还可用于在哺乳动物 ( 例如人 ) 中治疗炎 性疾病。
本发明包括在哺乳动物 ( 例如人 ) 中抑制异常细胞生长或治疗过度增殖性疾病的 方法， 所述方法包括将治疗有效量的式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物和盐 ) 或包含其的组 合物单独或与另一种化学治疗药物一起给予所述哺乳动物。
本发明包括在哺乳动物 ( 例如人 ) 中治疗炎性疾病的方法， 所述方法包括将治疗 有效量的式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物和盐 ) 或包含其的组合物单独或与另一种抗炎药 物一起给予所述哺乳动物。
本发明包括使用本发明化合物用于体外、 原位和体内诊断或治疗哺乳动物细胞、 器官或相关病理学病症的方法。 具体实施方式
现详细说明本发明的某些实施方式即附加结构和化学式所显示的实施例。 当本发 明用所列举的实施方式描述时， 应该理解它们并非意在将本发明局限于那些实施方式。相 反地， 本发明旨在涵盖可包括在如权利要求所定义的本发明范围内的所有变更、 修改和等 价形式。 本领域技术人员会认识到与本申请描述的那些方法和物质类似或等价的多种方法 和物质， 这些方法和物质可用于本发明的实践中。 本发明决不限于所描述的方法和物质。 如 果一篇或多篇引入的文献、 专利和类似材料与本申请 ( 包括但不限于所定义的术语、 术语 的用法、 所描述的技术等 ) 不同或矛盾， 以本申请为准。
定义
本申请所定义的术语″烷基″是指由一至十二个碳原子组成的饱和直链或 支 链 单 价 烃 基。 烷 基 的 实 例 包 括 但 不 限 于 甲 基 (Me、 -CH3)、 乙 基 (Et、 -CH2CH3)、 1- 丙 基 (n-Pr、 正 丙 基、 -CH2CH2CH3)、 2- 丙 基 (i-Pr、 异 丙 基、 -CH(CH3)2)、 1- 丁 基 (n-Bu、 正丁 基、 -CH2CH2CH2CH3)、 2- 甲 基 -1- 丙 基 (i-Bu、 异 丁 基、 -CH2CH(CH3)2)、 2- 丁 基 (s-Bu、 仲 丁 基、 -CH(CH3)CH2CH3)、 2- 甲 基 -2- 丙 基 (t-Bu、叔 丁 基、 -C(CH3)3)、 1- 戊 基 ( 正 戊 基、 -CH2CH2CH2CH2CH3)、 2- 戊 基 (-CH(CH3)CH2CH2CH3)、 3- 戊 基 (-CH(CH2CH3)2)、 2- 甲 基 -2- 丁 基 (-C(CH3)2CH2CH3)、 3- 甲 基 -2- 丁 基 (-CH(CH3)CH(CH3)2)、 3- 甲 基 -1- 丁 基 (-CH2CH2CH(CH3)2)、 2- 甲 基 -1- 丁 基 (-CH2CH(CH3)CH2CH3)、 1- 己 基 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、 2- 己 基 (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、 3- 己 基 (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、 2- 甲 基 -2- 戊 基 (-C(CH3)2CH2CH2CH3)、 3- 甲基 -2- 戊基 (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、 4- 甲基 -2- 戊基 (-CH(CH3) CH2CH(CH3)2)、 3- 甲基 -3- 戊基 (-C(CH3)(CH2CH3)2)、 2- 甲基 -3- 戊基 (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、 2， 3- 二甲基 -2- 丁基 (-C(CH3)2CH(CH3)2)、 3， 3- 二甲基 -2- 丁基 (-CH(CH3)C(CH3)3、 1- 庚基、 1- 辛基等。
术语″烯基″是指由一至十二个碳原子组成的具有至少一个不饱和位点即碳碳 2 sp 双键的直链或支链单价烃基， 其中所述烯基包括具有 “顺式” 和 “反式” 取向 ( 或者″ E″ 和″ Z″取向 ) 的基团。实例包括但不限于乙烯基 (ethylenyl orvinyl)(-CH ＝ CH2)、 烯 丙基 (-CH2CH ＝ CH2) 等。
术语″炔基″是指由一至十二个碳原子组成的具有至少一个不饱和位点即碳 碳 sp 三键的直链或支链单价烃基。实例包括但不限于乙炔基 (-C ≡ CH)、 丙炔基 ( 炔丙 基， -CH2C ≡ CH) 等。 术语″碳环 (carbocycle)″、 ″碳环基 (carbocyclyl)″、 ″碳环 (carbocyclic ring)″和″环烃基 (cycloalkyl)″是指具有 3 至 12 个碳原子作为单环或 7 至 12 个碳原 子作为二环的单价非芳香性饱和或部分不饱和的环。具有 7 至 12 个原子的二环碳环可排 列为例如二环 [4， 5]、 [5， 5]、 [5， 6] 或 [6， 6] 系统， 具有 9 或 12 个环原子的二环碳环可排列 为二环 [5， 6] 或 [6， 6] 系统， 或排列为桥接系统 (bridged system) 如二环 [2.2.1] 庚烷、 二环 [2.2.2] 辛烷和二环 [3.2.2] 壬烷。单环碳环的实例包括但不限于环丙基、 环丁基、 环 戊基、 1- 环戊 -1- 烯基、 1- 环戊 -2- 烯基、 1- 环戊 -3- 烯基、 环己基、 1- 环己 -1- 烯基、 1- 环 己 -2- 烯基、 1- 环己 -3- 烯基、 环己二烯基、 环庚基、 环辛基、 环壬基、 环癸基、 环十一烷基、 环 十二烷基等。
″芳基″表示通过从母体芳族环系统中的单个碳原子除去一个氢原子得到的由 6-18 个碳原子组成的单价芳族烃基。在示例性结构中一些芳基被表示为″ Ar″。芳基包 括含有与饱和、 部分不饱和的环或芳族碳环或杂环稠合的芳族环的二环基团。典型的芳基 包括但不限于由苯 ( 苯基 )、 取代的苯、 萘、 蒽、 茚基 (indenyl)、 茚满基 (indanyl)、 1， 2- 二 氢萘、 1， 2， 3， 4- 四氢萘基等得到的基团。
术 语 ″ 杂 环 (heterocycle) ″、 ″ 杂 环 基 (heterocyclyl) ″ 和 ″ 杂 环 (heterocyclicring)″在本申请中可交换使用， 是指由 3 至 18 个环原子组成的饱和或部 分饱和 ( 即在环中具有一个或多个双键和 / 或三键 ) 的碳环基团， 其中至少一个环原子为 选自氮、 氧和硫的杂原子， 其余环原子为 C， 其中一个或多个环原子任选独立被一个或多个 如下所述的取代基取代。杂环可以是具有 3 至 7 个环成员 (2 至 6 个碳原子以及选自 N、 O、 P 和 S 的 1 至 4 个杂原子 ) 的单环或具有 7 至 10 个环成员 (4 至 9 个碳原子以及选自 N、 O、 P 和 S 的 1 至 6 个杂原子 ) 的二环， 例如二环 [4， 5]、 [5， 5]、 [5， 6] 或 [6， 6] 系统。杂 环描述在 Paquette， Leo A. ； ″ Principles of Modern Heterocyclic Chemistry″ (W.
A.Benjamin， NewYork， 1968)( 特 别 是 第 1、 3、 4、 6、 7 和 9 章 ) ； ″ The Chemistry of HeterocyclicCompounds， A series of Monographs″ (John Wiley & Sons， New York， 1950 topresent)( 特 别 是 第 13、 14、 16、 19 和 28 卷 ) ； 以 及 J.Am.Chem.Soc.(1960)82 ： 5566 中。″杂环基″还包括杂环基团与饱和、 部分饱和的环或芳族碳环或杂环稠合的基 团。杂环的实例包括但不限于吡咯烷基、 四氢呋喃基、 二氢呋喃基、 四氢噻吩基、 四氢吡喃 基、 二氢吡喃基、 四氢噻喃基、 哌啶子基 (piperidino)、 吗啉代 (morpholino)、 硫吗啉代 (thiomorpholino)、 硫杂氧杂环己基 (thioxanyl)、 哌嗪基、 高哌嗪基 (homopiperazinyl)、 氮杂环丁烷基、 氧杂环丁烷基、 硫杂环丁烷基、 高哌啶基 (homopiperidinyl)、 氧杂环庚 烷 基 (oxepanyl)、 硫 杂 环 庚 烷 基 (thiepanyl)、 氧杂 (diazepinyl)、 硫杂 基 (oxazepinyl)、 二氮杂 基 基 (thiazepinyl)、 2- 吡咯啉基、 3- 吡咯啉基、 二氢吲哚基、 2H- 吡喃基、 4H- 吡喃基、 二噁烷基、 1， 3- 二氧杂环戊基、 吡唑啉基、 二硫杂环己基 (dithianyl)、 二硫 杂环戊基 (dithiolanyl)、 二氢吡喃基、 二氢噻吩基、 二氢呋喃基、 吡唑烷基、 咪唑啉基、 咪唑 烷基、 3- 氮杂二环 [3.1.0] 己烷基、 3- 氮杂二环 [4.1.0] 庚烷基和氮杂二环 [2.2.2] 己烷 基。螺部分也包括在本定义的范围内。环原子被氧代 ( ＝ O) 部分取代的杂环基的实例为 嘧啶酮基 (pyrimidinonyl) 和 1， 1- 二氧代 - 硫吗啉基。 术语″杂芳基″是指由 5 或 6 元环组成的单价芳族基团， 以及包括由 5-18 个原子 组成的稠环系统 ( 其中至少一个环是芳族的 )， 其含有独立选自氮、 氧和硫的一个或多个杂 原子。杂芳基的实例为吡啶基 ( 包括例如 2- 羟基吡啶基 )、 咪唑基、 咪唑并吡啶基、 嘧啶基 ( 包括例如 4- 羟基嘧啶基 )、 吡唑基、 三唑基、 吡嗪基、 四唑基、 呋喃基、 噻吩基、 异噁唑基、 噻 唑基、 噁唑基、 异噻唑基、 吡咯基、 喹啉基、 异喹啉基、 吲哚基、 苯并咪唑基、 苯并呋喃基、 噌啉 基、 吲唑基、 吲嗪基、 酞嗪基、 哒嗪基、 三嗪基、 异吲哚基、 蝶啶基、 嘌呤基、 噁二唑基、 三唑基、 噻二唑基、 呋咱基、 苯并呋咱基、 苯并噻吩基、 苯并噻唑基、 苯并噁唑基、 喹唑啉基、 喹噁啉 基、 二氮杂萘基和呋喃并吡啶基。
杂环或杂芳基可以是碳 ( 碳联的 ) 或氮 ( 氮联的 ) 连接的 ( 在该连接为可能的情 况下 )。通过举例而非限制， 碳键合的杂环或杂芳基在以下位置键合 ： 吡啶的 2、 3、 4、 5或6 位， 哒嗪的 3、 4、 5 或 6 位， 嘧啶的 2、 4、 5 或 6 位， 吡嗪的 2、 3、 5 或 6 位， 呋喃、 四氢呋喃、 噻吩、 吡咯或四氢吡咯的 2、 3、 4 或 5 位， 噁唑、 咪唑或噻唑的 2、 4 或 5 位， 异噁唑、 吡唑或异噻唑的 3、 4 或 5 位， 氮丙啶的 2 或 3 位， 氮杂环丁烷的 2、 3 或 4 位， 喹啉的 2、 3、 4、 5、 6、 7 或 8 位， 或 异喹啉的 1、 3、 4、 5、 6、 7 或 8 位。
通过举例而非限制， 氮键合的杂环或杂芳基在以下位置键合 ： 氮丙啶、 氮杂环丁 烷、 吡咯、 吡咯烷、 2- 吡咯啉、 3- 吡咯啉、 咪唑、 咪唑烷、 2- 咪唑啉、 3- 咪唑啉、 吡唑、 吡唑啉、 2- 吡唑啉、 3- 吡唑啉、 哌啶、 哌嗪、 吲哚、 二氢吲哚、 1H- 吲唑， 异吲哚或异二氢吲哚的 2 位， 吗 啉的 4 位， 和咔唑或 β- 咔啉的 9 位。
术语 “卤素” 是指 F、 Cl、 Br 或 I。杂芳基或杂环基中存在的杂原子包括氧化形式 + 如N →O、 S(O) 和 S(O)2。
术语 “治疗 (treating)” 或 “治疗 (treatment)” 是指治疗性处置和预防性措施， 其中目的是预防或减缓 ( 减轻 ) 不期望的生理学变化或障碍如癌的发展或扩散。出于本发 明的目的， 有益的或期望的临床结果包括但不限于缓解症状、 减小病变程度、 稳定 ( 即不是 恶化 ) 疾病状态、 延迟或减缓疾病进展、 改善或缓和疾病状态以及好转 ( 部分好转或完全好
转 )， 无论这些结果是可检测的还是不可检测的。 “治疗 (treating)” 还可表示与未接受治 疗的预期存活相比延长的存活。 需要治疗的对象包括已经患有病症或障碍的对象以及易患 所述病症或障碍的对象或所述病症或障碍应该被预防的对象。
术语 “治疗有效量” 表示 (i) 治疗或预防本申请描述的具体疾病、 病症或障碍的本 发明化合物的量， (ii) 削弱、 改善或消除本申请描述的具体疾病、 病症或障碍的一种或多种 症状的本发明化合物的量， 或 (iii) 预防或延迟本申请描述的具体疾病、 病症或障碍的一 种或多种症状的发作的本发明化合物的量。在癌症的情况中， 治疗有效量的药物可降低癌 细胞的数量 ； 减小肿瘤尺寸 ； 抑制 ( 即在一定程度上减慢以及优选停止 ) 肿瘤转移 (tumor metastasis) ； 在一定程度上抑制肿瘤生长 ； 和 / 或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或 多种症状。如果药物可预防癌细胞的生长和 / 或杀死现存的癌细胞， 其可能是细胞生长抑 制性的 (cytostatic) 和 / 或细胞毒性的。对于癌症治疗而言， 可例如通过评价疾病进展时 间 (TTP) 和 / 或确定应答率 (RR) 来测量功效。
术语″异常细胞生长″和″过度增殖性疾病″在本申请中可交换使用。 除非另有 说明， 本申请使用的″异常细胞生长″是指不依赖于正常调节机制的细胞生长 ( 例如接触 抑制缺乏 (loss of contact inhibition))。 这包括例如以下细胞的异常生长 ： (1) 通过表 达突变的酪氨酸激酶或过度表达受体酪氨酸激酶而增殖的肿瘤细胞 ( 肿瘤 ) ； (2) 出现异常 酪氨酸激酶活化的其它增殖性疾病中的良性和恶性细胞 ； (3) 其增殖受受体酪氨酸激酶影 响的任何肿瘤 ； (4) 其增殖受异常丝氨酸 / 苏氨酸激酶活化影响的任何肿瘤 ； 以及 (5) 出现 异常丝氨酸 / 苏氨酸激酶活化的其它增殖性疾病中的良性和恶性细胞。
术语″癌症 (cancer) ″和″癌的 (cancerous) ″是指或描述哺乳动物中特征典 型为未调节的细胞生长的生理学情况。″肿瘤″包含一种或多种癌细胞。癌症的实例包括 但不限于癌瘤 (carcinoma)、 淋巴瘤、 母细胞瘤、 肉瘤以及淋巴或淋巴样恶性肿瘤。 所述癌症 的更具体的实例包括鳞状细胞癌 ( 例如上皮鳞状细胞癌 )， 肺癌， 包括小细胞肺癌、 非小细 胞肺癌 (″ NSCLC″ )、 肺腺癌 (adenocarcinoma of the lung) 和肺鳞状细胞癌 (squamous carcinoma of thelung)， 腹膜癌， 肝细胞癌， 胃癌 (gastric or stomach cancer)， 包括胃 肠癌， 胰腺癌， 成胶质细胞瘤， 子宫颈癌， 卵巢癌， 肝癌 (liver cancer)， 膀胱癌， 肝细胞瘤 (hepatoma)， 乳癌 (breast cancer)， 结肠癌， 直肠癌， 结肠直肠癌， 子宫内膜癌或子宫癌， 唾液腺癌， 肾癌或肾脏癌， 前列腺癌， 外阴癌 (vulvalcancer)， 甲状腺癌， 肝脏癌 (hepatic carcinoma)， 肛门癌， 阴茎癌， 急性白血病， 以及头 / 脑癌和颈癌。
″化学治疗药物″是可用于治疗癌症的化合物。化学治疗药物的实例包括 Erlotinib(TARCEVA ， Genentech/OSI Pharm.)、 硼 替 佐 米 (Bortezomib)(VELCADE ， Millennium Pharm.)、 氟维司群 (FASLODEX ， AstraZeneca)、 Sutent(SU11248， Pfizer)、 来 曲 唑 (FEMARA ， Novartis)、 甲 磺 酸 伊 马 替 尼 (GLEEVEC ， Novartis)、 PTK787/ZK 222584(Novartis)、 奥 沙 利 铂 (Eloxatin ， Sanofi)、 5-FU(5- 氟 尿 嘧 啶 )、 甲酰四氢叶 酸 (Leucovorin)、 雷 帕 霉 素 (Sirolimus， RAPAMUNE ， Wyeth)、 拉 帕 替 尼 (Lapatinib) (TYKERB ， GSK572016， Glaxo Smith Kline)、 Lonafarnib(SCH 66336)、 索 拉 非 尼 (Sorafenib， BAY43-9006， Bayer Labs) 和 Gefitinib(IRESSA ， AstraZeneca)、 AG1478、 AG1571(SU 5271 ； Sugen) ； 烷 化 剂 如 塞 替 派 (thiotepa) 和 CYTOXAN 环 磷 酰 胺 ； 磺酸 烷 基 酯 (alkyl sulfonate) 如 白 消 安、 英 丙 舒 凡 和 哌 泊 舒 凡 (piposulfan) ； 氮丙啶如benzodopa、 卡波醌、 meturedopa 和 uredopa ； 乙撑亚胺 (ethylenimine) 和甲基氨基吖啶 (methylamelamine)， 包括六甲密胺、 三亚胺嗪 (triethylenemelamine)、 三亚乙基磷酰胺 (triethylenephosphoramide)、 三 亚 乙 基 硫 化 磷 酰 胺 (triethylenethiophosphoramide) 和 trimethylomelamine ； 番 荔 枝 内 酯 (acetogenin)( 尤 其 是 布 拉 它 辛 (bullatacin) 和 布 拉 它 辛 酮 (bullatacinone)) ； 喜 树 碱 ( 包 括 合 成 性 类 似 物 托 泊 替 康 (topotecan)) ； 苔 藓 抑 素 (bryostatin) ； callystatin ； CC-1065( 包 括 其 阿 多 来 新 (adozelesin)、 卡折 来 新 (carzelesin) 和 比 折 来 新 (bizelesin) 合 成 性 类 似 物 ) ； cryptophycins( 特 别 是 cryptophycin 1 和 cryptophycin 8) ； 多 拉 司 他 汀 (dolastatin) ； duocarmycin( 包 括 合 成 性 类 似 物 KW-2189 和 CB1-TM1) ； eleutherobin ； pancratistatin ； sarcodictyin ； spongistatin ； 氮芥如苯丁酸氮芥、 萘氮芥、 氯磷酰胺 (chlorophosphamide)、 雌莫司汀、 异 环 磷 酰 胺、 双 氯 乙 基 甲 胺 (mechlorethamine)、 盐 酸 氧 氮 芥 (mechlorethamine oxide hydrochloride)、 美法仑、 新氮芥 (novembichin)、 苯芥胆甾醇 (phenesterine)、 泼尼莫司 汀 (prednimustine)、 曲磷胺 (trofosfamide)、 尿嘧啶氮芥 (uracil mustard) ； 硝基脲如卡 莫司汀、 氯脲菌素 (chlorozotocin)、 福莫司汀、 洛莫司汀、 尼莫斯汀和雷莫司汀 ； 抗生素如 烯二炔 (enediyne) 抗生素 ( 例如刺孢霉素 (calicheamicin) 尤其是刺孢霉素 γ1I 和刺孢 霉素 ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33 ： 183-186) ； 蒽环类抗生素 (dynemicin)， 包 括 dynemicin A ； 二 膦 酸 盐 (bisphosphonate) 如 氯 膦 酸 盐 (clodronate) ； 埃斯培拉 霉 素 (esperamicin) ； 以 及 新 抑 癌 蛋 白 生 色 团 (neocarzinostatin chromophore) 和 相 关色蛋白烯二炔抗生素生色团 (enediyne antibiotic chromophore)、 aclacinomysin、 放线菌素 (actinomycin)、 authramycin、 偶氮丝氨酸 (azaserine)、 博来霉素、 放线菌素 C(cactinomycin)、 carabicin、 去甲柔红霉素 (carminomycin)、 嗜癌素 (carzinophilin)、 色 霉 素 (chromomycin)、 放 线 菌 素 D(dactinomycin)、 柔 红 霉 素 (daunorubicin)、 地拖比 星 (detorubicin)、 6- 重 氮 基 -5- 氧 代 -L- 正 亮 氨 酸 (6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、 ADRIAMYCIN ( 多 柔 比 星 )、 吗 啉 代 - 多 柔 比 星、 氰 基 吗 啉 代 - 多 柔 比 星、 2- 吡 咯 啉 子基 - 多柔比星和去氧多柔比星、 表柔比星 (epirubicin)、 依索比星、 伊达比星、 麻西 罗 霉 素 (marcellomycin)、 丝 裂 霉 素 如 丝 裂 霉 素 C、 麦 考 酚 酸 (mycophenolic acid)、 诺 拉 霉 素 (nogalamycin)、 橄 榄 霉 素 (olivomycins)、 培 洛 霉 素 (peplomycin)、 泊非 霉 素 (porfiromycin)、 嘌 罗 霉 素 (puromycin)、 三 铁 阿 霉 素 (quelamycin)、 罗多比 星 (rodorubicin)、 链 黑 霉 素 (streptonigrin)、 链 佐 星 (streptozocin)、 杀结核菌素 (tubercidin)、 乌苯美司 (ubenimex)、 净司他丁 (zinostatin)、 佐柔比星 ； 抗代谢物如甲氨 喋呤和 5- 氟尿嘧啶 (5-FU) ； 叶酸类似物如二甲叶酸、 甲氨喋呤、 喋罗呤 (pteropterin)、 三甲曲沙 (trimetrexate) ； 嘌呤类似物如氟达拉滨 (fludarabine)、 6- 巯嘌呤、 硫咪嘌 呤 (thiamiprine)、 硫 鸟 嘌 呤 (thioguanine) ； 嘧 啶 类 似 物 如 安 西 他 滨 (ancitabine)、 阿 扎 胞 苷 (azacitidine)、 6- 氮 鸟 苷 (6-azauridine)、 卡 莫 氟 (carmofur)、 阿糖胞苷 (cytarabine)、 二脱氧尿苷 (dideoxyuridine)、 去氧氟尿苷 (doxifluridine)、 伊诺他滨 (enocitabine)、 氟尿苷 (floxuridine) ； 雄激素如卡普睾酮 (calusterone)、 丙酸甲雄烷 酮 (dromostanolone propionate)、 环 硫 雄 醇 (epitiostanol)、 美 雄 烷 (mepitiostane)、 睾内酯 (testolactone) ； 抗肾上腺素 (anti-adrenal) 如氨鲁米特 (aminoglutethimide)、 米托坦 (mitotane)、 曲洛司坦 (trilostane) ； 叶酸补充剂 (folic acid replenisher) 如亚叶酸 (frolinic acid) ； 醋葡醛内酯 (aceglatone) ； 醛磷酰胺糖苷 (aldophosphamide glycoside) ； 氨 基 乙 酰 丙 酸 (aminolevulinic acid) ； 恩 尿 嘧 啶 (eniluracil) ； 安吖 啶 (amsacrine) ； bestrabucil ； 比 生 群 (bisantrene) ； 伊 达 曲 杀 (edatraxate) ； 地磷 酰 胺 (defofamine) ； 秋 水 仙 胺 (demecolcine) ； 地 吖 醌 (diaziquone) ； elfornithine ； 依 利 醋 铵 (elliptinium acetate) ； 埃 坡 霉 素 (epothilone) ； 依 托 格 鲁 (etoglucid) ； 硝 酸 镓 (gallium nitrate) ； 羟 基 脲 (hydroxyurea) ； 香 菇 多 糖 (lentinan) ； 氯尼 达 明 (lonidainine) ； 美 登 醇 (maytansinoid) 如 美 登 素 (maytansine) 和 安 丝 菌 素 (ansamitocin) ； 米 托 胍 腙 (mitoguazone) ； 米 托 蒽 醌 (mitoxantrone) ； mopidanmol ； 根 瘤 菌 剂 (nitraerine) ； 喷 司 他 丁 (pentostatin) ； 蛋 氨 氮 芥 (phenamet) ； 吡柔比星 (pirarubicin) ； 洛索蒽醌 (losoxantrone) ； 鬼臼酸 (podophyllinic acid) ； 2- 乙基肼 ； 丙 卡巴肼 (procarbazine) ； PSK 多糖复合物 (JHS Natural Products， Eugene， OR) ； 雷佐 生 (razoxane) ； 根霉素 (rhizoxin) ； 西佐喃 (sizofiran) ； 锗螺胺 (spirogermanium) ； 细 交链孢菌酮酸 (tenuazonic acid) ； 三亚胺醌 (triaziquone) ； 2， 2’ ， 2” - 三氯三乙胺 ； 单端 孢菌毒素 (trichothecene)( 尤其是 T-2 毒素、 verracurin A、 杆孢菌素 A 和 anguidine) ； 乌拉坦 ； 长春地辛 ； 达卡巴嗪 (dacarbazine) ； 甘露莫司汀 (mannomustine) ； 二溴甘露醇 (mitobronitol) ； 二溴卫矛醇 (mitolactol) ； 哌泊溴烷 (pipobroman) ； gacytosine ； 阿糖 胞苷 (arabinoside)( ″ Ara-C ″ ) ； 环磷酰胺 ； 塞替派 ； 紫杉烷例如 TAXOL ( 紫杉醇 ； TM Bristol-Myers Squibb Oncology， Princeton， N.J.)、 ABRAXANE (Cremophor-free)、紫 杉醇的白蛋白工程化纳米微粒制剂 (albumin-engineered nanoparticie formulations ofpaclitaxel)(American Pharmaceutical Partners ， Schaumberg ， Illinois) 和 TAXOTERE (doxetaxel ； -Poulenc Rorer， Antony， France) ； chloranmbucil ； GEMZAR ( 吉西他滨 ) ； 6- 硫代鸟嘌呤 ； 巯嘌呤 ； 甲氨喋呤 ； 铂类似物如顺铂和卡铂 ； 长春 碱； 依托泊苷 (VP-16) ； 异环磷酰胺 ； 米托蒽醌 ； 长春新碱 ； NAVELBINE ( 长春瑞滨 ) ； 诺消 灵 (novantrone) ； 替尼泊苷 (teniposide) ； 伊达曲杀 (edatrexate) ； 柔红霉素 ； 氨基喋呤 ； 卡培他滨 (XELODA ) ； 伊班膦酸盐 (ibandronate) ； CPT-11 ； 拓扑异构酶抑制剂 RFS2000 ； 二 氟 甲 基 鸟 氨 酸 (difluoromethylomithine)(DMFO) ； 类 视 黄 醇 (retinoid) 如 视 黄 酸 (retinoic acid) ； 以及上述任何物质的可药用盐、 酸和衍生物。
以下物质也包括在″化学治疗药物″的定义中 ： (i) 用于调节或抑制激素对肿 瘤的作用的抗激素药物， 如抗雌激素药物 (anti-estrogen) 和选择性雌激素受体调节剂 (selective estrogen receptor modulator， SERM)， 包括例如他莫昔芬 ( 包括 NOLVADEX ； 枸橼酸他莫昔芬 )、 雷洛昔芬、 屈洛昔芬、 4- 羟基他莫昔芬、 曲沃昔芬 (trioxifene)、 雷洛 西 芬 (keoxifene)、 LY117018、 奥 那 司 酮 (onapristone) 和 FARESTON ( 枸 橼 酸 托 米 芬 (toremifine citrate)) ； (ii) 抑制芳香酶 ( 调节肾上腺中雌激素产生 ) 的芳香酶抑制剂， 例如 4(5)- 咪唑、 氨鲁米特、 MEGASE ( 醋酸甲地孕酮 (megestrol acetate))、 AROMASIN ( 依西美坦 (exemestane) ； Pfizer)、 formestanie、 法倔唑 (fadrozole)、 RIVISOR ( 伏氯 唑 (vorozole))、 FEMARA ( 来曲唑 ； Novartis) 和 ARIMIDEX ( 阿那曲唑 (anastrozole) ； AstraZeneca) ； (iii) 抗雄激素药物 (anti-androgen)， 如氟他胺、 尼鲁米特 (nilutamide)、 比卡鲁胺 (bicalutamide)、 醋酸亮丙瑞林 (leuprolide) 和戈舍瑞林 (goserelin) 以及 曲沙他滨 (troxacitabine)(1， 3- 二氧杂环戊烷核苷胞嘧啶类似物 ) ； (iv) 蛋白激酶抑制剂 ； (v) 脂激酶抑制剂 ； (vi) 反义寡核苷酸， 特别是抑制异常细胞增殖中所涉及的信号 转导途径中的基因表达的那些反义寡核苷酸， 例如 PKC-α、 Ralf 和 H-Ras ； (vii) 核酶如 VEGF 表达抑制剂 ( 例如 ANGIOZYME ) 和 HER2 表达抑制剂 ； (viii) 疫苗如基因治疗疫 苗， 例如 ALLOVECTIN 、 LEUVECTIN 和 VAXID ； PROLEUKIN rIL-2 ； 拓扑异构酶 1 抑 制剂如 LURTOTECAN ； ABARELIX rmRH ； (ix) 抗血管生成药物如贝伐单抗 (AVASTIN ， Genentech) ； 以及 (x) 上述任何物质的可药用盐、 酸和衍生物。其它抗血管生成药物包 括 MMP-2( 基质金属蛋白酶 2) 抑制剂、 MMP-9( 基质金属蛋白酶 9) 抑制剂、 COX-II( 环氧合 酶 II) 抑制剂以及 VEGF 受体酪氨酸激酶抑制剂。可与本发明化合物 / 组合物 ( 例如实施 例 5-14 的标题化合物中的任何化合物 ) 联用的上述有用的基质金属蛋白酶抑制剂的实例 描述在 WO 96/33172、 WO 96/27583、 EP 818442、 EP 1004578、 WO 98/07697、 WO 98/03516、 WO 98/34918、 WO 98/34915、 WO 98/33768、 WO 98/30566、 EP 606,046、 EP 931,788、 WO 90/05719、 WO 99/52910、 WO 99/52889、 WO99/29667、 WO 99/07675、 EP 945864、 美国专利 5,863,949、 美国专利 5,861,510 和 EP 780,386 中， 将所有这些文献全文引入本申请作为参 考。VEGF 受体酪氨酸激酶抑制剂的实例包括 4-(4- 溴 -2- 氟苯氨基 )-6- 甲氧基 -7-(1- 甲 基哌啶 -4- 基甲氧基 ) 喹唑啉 (ZD6474 ； WO 01/32651 中的实施例 2)、 4-(4- 氟 -2- 甲基吲 哚 -5- 基氧基 )-6- 甲氧基 -7-(3- 吡咯烷 -1- 基丙氧基 )- 喹唑啉 (AZD2171 ； WO00/47212 中的实施例 240)、 vatalanib(PTK787 ； WO 98/35985) 和 SU11248(( 舒尼替尼 (sunitinib) ； WO 01/60814) 以及化合物例如 PCT 公开号 WO 97/22596、 WO 97/30035、 WO 97/32856 和 WO 98/13354 中公开的化合物。
可与本发明化合物 ( 例如实施例 5-14 的标题化合物中的任何化合物 ) 联用的化 学治疗药物的其它实例包括 PI3K( 磷酸肌醇 -3 激酶 ) 的抑制剂， 如以下文献中报道的化合 物： Yaguchi et al(2006)Jour.of the Nat.Cancer Inst.98(8) ： 545-556 ； US 7173029 ； US 7037915 ； US 6608056 ； US 6608053 ； US6838457 ； US 6770641 ； US 6653320 ； US 6403588 ； US 2008/0242665 ； WO2006/046031 ； WO 2006/046035 ； WO 2006/046040 ； WO 2007/042806 ； WO2007/042810 ； WO 2004/017950 ； US 2004/092561 ； WO 2004/007491 ； WO2004/006916 ； WO 2003/037886 ； US 2003/149074 ； WO 2003/035618 ； WO2003/034997 ； US 2003/158212 ； EP 1417976 ； US 2004/053946 ； JP 2001247477 ； JP 08175990 ； JP 08176070 ； US 6703414 ； 和 WO 97/15658， 将所有这些文献全文引入本申请作为参考。所述 PI3K 抑制剂的具体实例包 括 SF-1126(PI3K 抑制剂， Semafore Pharmaceuticals)、 BEZ-235(PI3K 抑制剂， Novartis)、 XL-147(PI3K 抑制剂， Exelixis， Inc.) 和 GDC-0941(PI3K 抑制剂， Genentech， Inc.)。
本申请中使用的术语″炎性疾病″包括但不限于类风湿性关节炎、 动脉粥样硬 化、 充血性心力衰竭、 炎症性肠病 ( 包括但不限于克罗恩病 (Crohn’ s disease) 和溃疡性 结肠炎 )、 慢性阻塞性肺病 (chronic obstructive pulmonarydisease in the lung)、 肝肾 纤维化疾病 (firotic disease in the liver and kidney)、 克罗恩病、 狼疮、 皮肤病 ( 如牛 皮癣、 湿疹和硬皮病 (scleroderma))、 骨关节炎、 多发性硬化、 哮喘、 与糖尿病并发症相关的 疾病和障碍、 器官如肺、 肝、 肾的纤维化器官衰竭 (firotic organ failure) 以及心血管系 统的炎症性并发症如急性冠状动脉综合征 (acute coronary syndrome)。
″抗炎药物″为可用于治疗炎症的化合物。抗炎药物的实例包括可注射蛋白 治 疗 剂 如 Enbrel 、 Remicade 、 Humira 和 Kineret 。 抗 炎 药 物 的 其 它 实 例 包 括非甾类抗炎药 (NSAID)， 如布洛芬或阿司匹林 ( 其减小肿胀并缓解疼痛 ) ； 缓解疾病的抗 风湿药 (DMARD)， 如甲氨喋呤 ； 5- 氨基水杨酸酯 ( 柳氮磺吡啶 (sulfasalazine) 和非磺 胺的药物 ) ； 皮质激素 ； 免疫调节剂如 6- 巯嘌呤 ( ″ 6-MP ″ )、 硫唑嘌呤 ( ″ AZA ″ )、 环 孢菌素和生物应答调节剂 (biological responsemodifier) 如 Remicade.RTM.( 英夫利 昔 单 抗 (infliximab)) 和 Enbrel.RTM.( 依 那 西 普 (etanercept)) ； 成纤维细胞生长因 子 (fibroblast growth factor) ； 血小板衍生的生长因子 (platelet derived growth factor) ； 酶阻滞剂如 Arava.RTM.( 来氟米特 ) ； 和 / 或软骨保护药物如透明质酸、 葡糖胺和 软骨素。
本申请使用的术语″前药″是指能够经酶或水解活化或转化为更具活性的母体 形式的本发明化合物的前体或衍生物形式。参见例如 Wilman，″ Prodrugs in Cancer Chemotherapy ″ Biochemical Society Transactions， 14， pp.375-382， 615th Meeting Belfast(1986) 以及 Stella et al.， ″ Prodrugs ： A ChemicalApproach to Targeted Drug Delivery，″ Directed Drug Delivery， Borchardt etal.， (ed.)， pp.247-267， Humana Press(1985)。本发明的前药包括但不限于含酯的前药、 含磷酸酯的前药、 含硫代磷酸酯的 前药、 含硫酸酯的前药、 含肽的前药、 D- 氨基酸修饰的前药、 糖基化的前药、 含 β- 内酰胺的 前药、 含任选取代的苯氧基乙酰胺的前药、 含任选取代的苯基乙酰胺的前药、 5- 氟胞嘧啶和 其它 5- 氟尿嘧啶前药， 这些前药可转化为更具活性的无细胞毒性的药物。可衍生为用于本 发明的前药形式的细胞毒性药物的实例包括但不限于本发明化合物和如上所述的化学治 疗药物。
″代谢物″是通过具体化合物或其盐在体内的代谢而产生的产物。 可使用本领域 已知的常规技术鉴定化合物的代谢物， 并使用如本申请所述的试验确定它们的活性。所述 产物可起因于例如所给药的化合物的氧化、 羟基化、 还原、 水解、 酰胺化、 脱酰胺化、 酯化、 脱 酯化、 酶法裂解等。因此， 本发明包括本发明化合物的代谢物， 包括由以下方法产生的化合 物， 所述方法包括使本发明化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间。
″脂质体″是由各种类型的脂类、 磷脂和 / 或表面活性剂组成的小囊泡， 其可用 于将药物 ( 如本申请公开的 MEK 抑制剂和任选的化学治疗药物 ) 递送至哺乳动物。与生物 膜的脂排列类似， 脂质体的组分通常以双层形式排列。
术语″包装说明书 (package insert)″是指通常包括在治疗产品的市售包装中 的说明书， 其含有关于适应症、 用法、 剂量、 给药、 禁忌症和 / 或告诫事项的信息， 这些信息 涉及上述治疗产品的使用。
术语″手性″是指具有镜像配偶体 (mirror image partner) 不可重叠性质的分 子， 而术语″非手性″是指可与其镜像配偶体重叠的分子。
术语″立体异构体″是指具有相同化学组成和连结情况但它们原子的取向在空 间上不同因此不能通过围绕单键旋转而相互转化的化合物。
″非对映异构体″是指具有两个或更多手性中心并且其分子不互为镜像的立体 异构体。非对映异构体具有不同的物理性质， 如熔点、 沸点、 光谱性质和反应性。非对映异 构体的混合物可通过高拆分分析操作如结晶、 电泳和色谱来分离。
″对映异构体″是指互为不可重叠镜像的化合物的两种立体异构体。
本 申 请 使 用 的 立 体 化 学 定 义 和 常 规 通 常 遵 循 S.P.Parker， Ed.， McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company， New York 以及 Eliel， E.and Wilen， S.，″ Stereochemistry of Organic Compounds″， John Wiley & Sons， Inc.， New York， 1994。本发明化合物可含有不对称或手性中心， 因此以不同立体异构形式 存在。预期的是， 本发明化合物的所有立体异构形式， 包括但不限于非对映异构体、 对映异 构体和阻转异构体 (atropisomers) 及它们的混合物如外消旋混合物， 形成了本发明的部 分。多种有机化合物以光学活性形式存在， 即它们具有旋转平面偏振光的平面的能力。在 描述有光学活性的化合物时， 使用前缀 D 和 L 或者 R 和 S 来表示分子围绕其一个或多个手 性中心的绝对构型。前缀 d 和 l 或者 (+) 和 (-) 用于指定平面偏振光由化合物引起的旋转 的符号， 其中 (-) 或 l 表示化合物是左旋的。前缀为 (+) 或 d 的化合物是右旋的。对于给 定的化学结构而言， 除了这些立体异构体互为镜像外， 这些立体异构体是相同的。 具体的立 体异构体也可称为对映异构体， 所述异构体的混合物通常称作对映异构混合物。对映异构 体的 50 ∶ 50 混合物称为外消旋混合物或外消旋体， 当化学反应或方法中没有立体选择性 或立体专一性时可出现这种情况。 术语″外消旋混合物″和″外消旋体″是指两种对映异 构体物质的等摩尔混合物， 其没有光学活性。
术 语 ″ 互 变 异 构 体 ″ 或 ″ 互 变 异 构 形 式 ″ 是 指 可 通 过 低 能 垒 (low energybarrier) 互 相 转 化 的 不 同 能 量 的 结 构 异 构 体。 例 如， 质子互变异构体 (protontautomer)( 也称为质子迁移互变异构体 (prototropic tautomer)) 包括通过质子 迁移进行的互相转化， 如酮 - 烯醇异构化和亚胺 - 烯胺异构化。价互变异构体 (valence tautomer) 包括通过一些成键电子的重组进行的互相转化。
本申请使用的短语″可药用盐″是指本发明化合物的可药用有机或无机盐。示 例性盐包括但不限于硫酸盐、 枸橼酸盐、 乙酸盐、 草酸盐、 氯化物、 溴化物、 碘化物、 硝酸 盐、 硫酸氢盐、 磷酸盐、 酸式磷酸盐、 异烟酸盐、 乳酸盐、 水杨酸盐、 酸式枸橼酸盐、 酒石酸 盐、 油酸盐、 鞣酸盐 (tannate)、 泛酸盐 (pantothenate)、 酒石酸氢盐、 抗坏血酸盐、 琥珀 酸盐、 马来酸盐、 龙胆酸盐 (gentisinate)、 富马酸盐、 葡糖酸盐、 葡糖醛酸盐、 糖质酸盐 (saccharate)、 甲酸盐、 苯甲酸盐、 谷氨酸盐、 甲磺酸盐 ( 甲磺酸盐 (mesylate))、 乙磺酸盐、 苯磺酸盐、 对甲苯磺酸盐、 扑酸盐 ( 即 1， 1’ - 亚甲基 - 二 -(2- 羟基 -3- 萘甲酸盐 ))、 碱金 属 ( 例如钠和钾 ) 盐、 碱土金属 ( 例如镁 ) 盐以及铵盐。可药用盐可涉及另一种分子如乙 酸根离子、 琥珀酸根离子或其它抗衡离子的包合物 (inclusion)。 抗衡离子可以是稳定母体 化合物电荷的任何有机或无机部分。 此外， 可药用盐可在其结构中具有多于一个带电原子。 多个带电原子为可药用盐的部分的情况可具有多个抗衡离子。因此， 可药用盐可具有一个 或多个带电原子和 / 或一个或多个抗衡离子。
若本发明化合物为碱， 则期望的可药用盐可通过本领域可得的任何合适方法来 制备， 例如用无机酸 ( 如盐酸、 氢溴酸、 硫酸、 硝酸、 甲磺酸、 磷酸等 ) 或用有机酸 ( 如乙 酸、 马来酸、 琥珀酸、 扁桃酸、 富马酸、 丙二酸、 丙酮酸、 草酸、 羟乙酸、 水杨酸、 吡喃糖基酸 (pyranosidyl acid) 如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸、 α- 羟基酸如枸橼酸或酒石酸、 氨基酸如 天冬氨酸或谷氨酸、 芳族酸如苯甲酸或肉桂酸、 磺酸如对甲苯磺酸或乙磺酸等 ) 处理游离 碱。
若本发明化合物为酸， 则期望的可药用盐可通过任何合适方法来制备， 例如用无 机或有机碱 ( 如胺 ( 伯胺、 仲胺或叔胺 )、 碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等 ) 处理游离酸。合适盐的示例性实例包括但不限于从以下物质得到的有机盐 ： 氨基酸如甘氨酸和 精氨酸、 氨、 伯胺、 仲胺和叔胺以及环状胺如哌啶、 吗啉和哌嗪 ； 以及从以下物质得到的无机 盐： 钠、 钙、 钾、 镁、 铁、 铜、 锌、 铝和锂。
短语″可药用的″表示所述物质或组合物必须与制剂包含的其它成分和 / 或用 其治疗的哺乳动物在化学上和 / 或毒理学上是相容的。
″溶剂化物″是指一种或多种溶剂分子与本发明化合物的结合物或络合物。 形成 溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、 异丙醇、 乙醇、 甲醇、 DMSO、 乙酸乙酯、 乙酸和乙醇 胺。术语″水合物″是指当溶剂分子是水时的络合物。
术语″保护基″是指通常用于在化合物上的其它官能团发生反应时阻止或保护 具体官能团的取代基。例如， ″氨基保护基″为与氨基相连的阻止或保护化合物中氨基官 能度的取代基。 合适的氨基保护基包括乙酰基、 三氟乙酰基、 叔丁氧基羰基 (BOC)、 苄基氧基 羰基 (CBZ) 和 9- 芴基甲氧基羰基 (Fmoc)。类似地，″羟基保护基″是指阻止或保护羟基 官能度的羟基的取代基。合适的保护基包括乙酰基和三烷基甲硅烷基。″羧基保护基″是 指阻止或保护羧基官能度的羧基的取代基。常见的羧基保护基包括苯基磺酰基乙基、 氰基 乙基、 2-( 三甲基甲硅烷基 ) 乙基、 2-( 三甲基甲硅烷基 ) 乙氧基甲基、 2-( 对甲苯磺酰基 ) 乙基、 2-( 对硝基苯基磺酰基 ) 乙基、 2-( 二苯基膦基 )- 乙基、 硝基乙基等。 针对保护基的一 般描述及其用途， 参见 T.W.Greene， ProtectiveGroups in Organic Synthesis， John Wiley & Sons， New York， 1991。
除非另有说明， 术语″本发明化合物 (compound of this invention)″、″本发 明化合物 (compounds of the present invention)″、 ″式 I 化合物″、 ″咪唑并吡啶″ 和″式 I 的咪唑并吡啶″包括式 I 的化合物 / 咪唑并吡啶及其立体异构体、 几何异构体、 互 变异构体、 溶剂化物、 代谢物、 盐 ( 例如可药用盐 ) 和前药。
本发明提供了如上所述的式 I 的咪唑并吡啶， 其可用作激酶抑制剂， 具体地， 可用 1 11’ 作 MEK 激酶抑制剂。在本发明的一种实施方式中， 当 Z 为 N 时， 则 R 不为芳基 ； 所有其它 变量如式 I 中所定义。
在本发明的一种实施方式中， 化合物具有式 I-a， 并且所有其它变量如式 I 中所定 义， 或者如上述实施方式中所定义。
在本发明的一种实施方式中， R2 为 H、 卤素、 CF3 或 C1-C3 烷基 ； 并且所有其它变量 如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， R2 为 H、 甲基、 CF3、 F 或 Cl ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， R2 为 H、 F 或 Cl ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a
中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的一种实施方式中， R3 为 H、 卤素、 CF3 或 C1-C3 烷基 ； 并且所有其它变量 如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， R3 为 H、 甲基、 CF3、 F 或 Cl ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， R3 为 H、 F 或 Cl ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的一种实施方式中， R1’为 H 或 C1-C3 烷基 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。在另一种实施方式中， R1’为 H， 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。 1
在本发明的一种实施方式中， Z 为 CR1， 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的一种实施方式中， Z1 为 N， 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， Z1 为 CR1， R1 为 H 或 C1-C3 烷基 ； 并且所有其它变量 如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。在另一种实施方式中， 1 R 为 H， 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定 1 义。在另一种实施方式中， R 为甲基， 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上 述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的一种实施方式中， R4 为 H 或 C1-C6 烷基 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， R4 为 H 或甲基 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中 所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。 在本发明的另一种实施方式中， R4 为 H ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。 5
在本发明的一种实施方式中， R 为 H 或 C1-C6 烷基 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， R5 为 H 或甲基 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中 所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， R5 为 H ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， R5 为甲基 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所 定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的一种实施方式中， X1 为 OR11’； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定 义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， X1 为 OR11’ ， 其中 R11’为 H 或 C1-C12 烷基 ( 例如， C1-C6 烷基 )， 所述 C1-C12 烷基 ( 例如， C1-C6 烷基 ) 取代有一个或多个独立地选自以下 的基团 ： 卤 素、 CN、 CF3、 -OCF3、 -NO2、 氧 代、 -(CR19R20)nC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nC( ＝ Y’ ) 16 19 20 16 17 19 20 16 17 19 20 16 19 20 16 19 20 OR 、 -(CR R )nC( ＝ Y’ )NR R 、 -(CR R )nNR R 、 -(CR R )nOR 、 -(CR R )nSR 、 -(CR R ) 16 17 19 20 16 17 19 20 18 16 17 )R 、 -(CR R )nNR C( ＝ Y’ )OR 、 -(CR R )nNR C( ＝ Y’ )NR R 、 -(CR19R20) nNR C( ＝ Y’24101903387 A CN 101903388n说明书17/47 页NR17SO2R16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ )OR16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ ) 16 17 19 20 16 19 20 16 17 19 20 16 NR R 、 -(CR R )nOS(O)2(OR )、 -(CR R )nOP( ＝ Y’ )(OR )(OR )、 -(CR R )nOP(OR ) 17 19 20 16 19 20 16 19 20 16 17 (OR )、 -(CR R )nS(O)R 、 -(CR R )nS(O)2R 、 -(CR R )nS(O)2NR R 、 -(CR19R20)nS(O) (OR16)、 -(CR19R20)nS(O)2(OR16)、 -(CR19R20)nSC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nSC( ＝ Y’ )OR16、 -(CR19R20) )NR16R17 和 R21 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式 nSC( ＝ Y’ 中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， X1 为 OR11’ ， 其中 R11’为杂环基 ( 例如， 4 至 6 元的 杂环基 )， 其任选地取代有一个或多个独立地选自以下的基团 ： 卤素、 CN、 CF3、 -OCF3、 -NO2、 氧 19 20 16 19 20 16 19 20 16 17 19 20 代、 -(CR R )nC( ＝ Y’ )R 、 -(CR R )nC( ＝ Y’ )OR 、 -(CR R )nC( ＝ Y’ )NR R 、 -(CR R ) 16 17 19 20 16 19 20 16 19 20 16 17 19 20 16 -(CR R )nOR 、 -(CR R )nSR 、 -(CR R )nNR C( ＝ Y’ )R 、 -(CR R )nNR C( ＝ Y’ ) nNR R 、 17 19 20 18 16 17 19 20 17 16 19 20 16 19 20 OR 、 -(CR R )nNR C( ＝ Y’ )NR R 、 -(CR R )nNR SO2R 、 -(CR R )nOC( ＝ Y’ )R 、 -(CR R ) 16 19 20 16 17 19 20 16 19 20 )OR 、 -(CR R )nOC( ＝ Y’ )NR R 、 -(CR R )nOS(O)2(OR )、 -(CR R )nOP( ＝ Y’ ) nOC( ＝ Y’ 16 17 19 20 16 17 19 20 16 19 20 16 19 20 (OR )(OR )、 -(CR R )nOP(OR )(OR )、 -(CR R )nS(O)R 、 -(CR R )nS(O)2R 、 -(CR R ) 16 17 19 20 16 19 20 19 20 -(CR R ) nS(O)(OR ) 、 -(CR R ) nS(O) 2(OR 16) 、 -(CR R ) nSC( ＝ Y’ ) n S(O) 2 NR R 、 16 19 20 16 19 20 16 17 21 R 、 -(CR R )nSC( ＝ Y’ )OR 、 -(CR R )nSC( ＝ Y’ )NR R 和 R ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， X1 为 OR11’ ， 其中 R11’为具有 1 个氮环原子的 4 至 6 元杂环基， 其中所述杂环基任选地取代有一个或多个独立地选自以下的基团 ： 卤素、 19 20 16 19 20 16 CN、 CF3、 -OCF3、 -NO2、氧 代、 -(CR R )nC( ＝ Y’ )R 、 -(CR R )nC( ＝ Y’ )OR 、 -(CR19R20) )NR16R17、 -(CR19R20)nNR16R17、 -(CR19R20)nOR16、 -(CR19R20)nSR16、 -(CR19R20)nNR16C( ＝ nC( ＝ Y’ Y’)R 17 、-(CR 19 R 20 ) n NR 16 C( ＝ Y’)OR 17 、-(CR 19 R 20 ) n NR 18 C( ＝ Y’)NR 16 R 17 、-(CR 19 R 20 ) 17 16 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ )OR16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ ) nNR SO2R 、 16 17 19 20 16 19 20 16 17 19 20 16 NR R 、 -(CR R )nOS(O)2(OR )、 -(CR R )nOP( ＝ Y’ )(OR )(OR )、 -(CR R )nOP(OR ) 17 19 20 16 19 20 16 19 20 16 17 (OR )、 -(CR R )nS(O)R 、 -(CR R )nS(O)2R 、 -(CR R )nS(O)2NR R 、 -(CR19R20)nS(O) (OR16)、 -(CR19R20)nS(O)2(OR16)、 -(CR19R20)nSC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nSC( ＝ Y’ )OR16、 -(CR19R20) )NR16R17 和 R21 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式 nSC( ＝ Y’ 中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， X1 为 ：
并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所 在本发明的另一种实施方式中， X1 为定义。
并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所 在本发明的另一种实施方式中， X1 为定义。
并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。 在本发明的一种实施方式中， X1 为 R11’ ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， X1 为 R11’ ， 其中 R11’ 为 H 或 C1-C12 烷基 ( 例如， C1-C6 烷基 )， 所述 C1-C12 烷基 ( 例如， C1-C6 烷基 ) 取代有一个或多个独立地选自以下的基团 ： 卤 19 20 16 19 20 素、 CN、 CF3、 -OCF3、 -NO2、 氧代、 -Si(C1-C6 烷基 )3、 -(CR R )nC( ＝ Y’ )R 、 -(CR R )nC( ＝ Y’ ) 16 19 20 16 17 19 20 16 17 19 20 16 19 20 16 19 20 OR 、 -(CR R )nC( ＝ Y’ )NR R 、 -(CR R )nNR R 、 -(CR R )nOR 、 -(CR R )nSR 、 -(CR R ) 16 17 19 20 16 17 19 20 18 16 17 )R 、 -(CR R )nNR C( ＝ Y’ )OR 、 -(CR R )nNR C( ＝ Y’ )NR R 、 -(CR19R20) nNR C( ＝ Y’ 17 16 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ )OR16、 -(CR19R20)nOC( ＝ Y’ ) nNR SO2R 、 16 17 19 20 16 19 20 16 17 19 20 16 NR R 、 -(CR R )nOS(O)2(OR )、 -(CR R )nOP( ＝ Y’ )(OR )(OR )、 -(CR R )nOP(OR ) 17 19 20 16 19 20 16 19 20 16 17 (OR )、 -(CR R )nS(O)R 、 -(CR R )nS(O)2R 、 -(CR R )nS(O)2NR R 、 -(CR19R20)nS(O) (OR16)、 -(CR19R20)nS(O)2(OR16)、 -(CR19R20)nSC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nSC( ＝ Y’ )OR16、 -(CR19R20) )NR16R17 和 R21 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式 nSC( ＝ Y’ 中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， X1 为并
且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定 在本发明的另一种实施方式中， R5 为 H 和 X1 为义。
并
且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定 在本发明的另一种实施方式中， X1 为义。
并
且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定 在本发明的另一种实施方式中， R5 为甲基和 X1 为义。
并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。 在本发明的一种实施方式中， X1 为 R11’ 以及 X1 与 R5 和它们结合的氮原子一起形成 具有 0-2 个选自 O、 S 和 N 的另外的杂原子的 4-5 元饱和环， 其中所述环任选地取代有一个 或多个选自以下的基团 ： 卤素、 CN、 CF3、 -OCF3、 -NO2、 氧代、 -(CR19R20)nC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20) )OR16、 -(CR19R20)nC( ＝ Y’ )NR16R17、 -(CR19R20)nNR16R17、 -(CR19R20)nOR16、 -(CR19R20) nC( ＝ Y’ 16 -(CR19R20)nNR16C( ＝ Y’ )R17、 -(CR19R20)nNR16C( ＝ Y’ )OR17、 -(CR19R20)nNR18C( ＝ Y’ ) n-SR 、 16 17 19 20 17 16 19 20 16 19 20 16 19 20 NR R 、 -(CR R )nNR SO2R 、 -(CR R )nOC( ＝ Y’ )R 、 -(CR R )nOC( ＝ Y’ )OR 、 -(CR R ) 16 17 19 20 16 19 20 16 17 )NR R 、 -(CR R )nOS(O)2(OR )、 -(CR R )nOP( ＝ Y’ )(OR )(OR )、 -(CR19R20) nOC( ＝ Y’ 16 17 -(CR19R20)nS(O)R16、 -(CR19R20)nS(O)2R16、 -(CR19R20)nS(O)2NR16R17、 -(CR19R20) nOP(OR )(OR )、 16 -(CR19R20)nS(O)2(OR16)、 -(CR19R20)nSC( ＝ Y’ )R16、 -(CR19R20)nSC( ＝ Y’ ) nS(O)(OR ) 、 16 19 20 16 17 21 OR 、 -(CR R )nSC( ＝ Y’ )NR R 和 R ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如 上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， W为：
并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。 11’
在本发明的一种实施方式中， W 为 -OR ， 其中 R11’为 H 或 C1-C12 烷基 ； 并且所有其 它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， W 为 -OR11’ ， 其中 R11’为 H ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， W 为 -OR11’ ， 其中 R11’为 C1-C6 烷基 ； 并且所有其它 变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的一种实施方式中， W’ 为 -NHSO2R8 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中 所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的一种实施方式中， R6 为卤素、 C2-C8 炔基、 碳环基或 -SR16 ； 并且所有其它 变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的另一种实施方式中， R6 为卤素、 C2-C3 炔基、 C3- 碳环基或 -SR16， 其中 R16 为 C1-C2 烷基 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一 种所定义。
在本发明的一种实施方式中， R6’ 为 H、 卤素或 C1-C3 烷基 ； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的一种实施方式中， p为1或2； 并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定 义， 或者如上述实施方式中的任何一种所定义。
在本发明的一种实施方式中， X4 为
并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所 在本发明的另一种实施方式中， X4 为定义。
并且所有其它变量如式 I 或 I-a 中所定义， 或者如上述实施方式中的任何一种所 本发明的另一种实施方式包括实施例 5-14 中所述的化合物和下面的化合物 ：定义。
式 I 化合物的制备
式 I 的咪唑并吡啶根据下文在方案和实施例中所述的步骤或通过本领域已知的 方法制备。例如， 式 (I) 化合物， 其中 Y ＝ W-C(O)-， 可以根据方案 1 制备。
方案 1
具有一般结构 (II) 的异烟酸可以商购获得或使用文献中所述的方法制备。酸 (II) 可以通过以下方法转化成式 (III) 的酯 ： 在催化剂如 DMF 的存在下， 在溶剂如 DCM 中 与氯化剂如草酰氯反应， 接着用烷基醇如甲醇处理。可选择地， 可以在酸如硫酸的存在下， 使酸 (II) 在烷基醇中反应以提供式 (III) 的酯。
2- 氰基吡啶 (IV) 可以从 2- 卤素吡啶 (III)， 通过在过渡金属催化剂如 Zn、 四(三 苯基膦 ) 钯 (0) 或三 ( 二亚苄基丙酮 ) 合二钯 (0)/1， 1’ - 双 ( 二苯基膦基 ) 二茂铁的存在 下， 在溶剂如 DMF 中， 在从 50℃至回流温度的温度， 或者在微波辐射下在 70℃至 200℃的温 度， 与无机氰化物如氰化锌反应制备。
可以通过在 1 至 5 个大气压的压力， 在催化剂如钯 / 碳的存在下， 在溶剂如甲醇、 乙酸或甲酸中， 在添加或不添加强酸如浓盐酸的情况下与氢反应， 将氰基吡啶 (IV) 还原， 以得到 2- 氨基甲基吡啶 (V)， A ＝ CH2。可选择地， 可以通过以下方法将氰基吡啶 (IV) 转化 成 2- 氨基甲基吡啶 ： 在金属盐如氯化钴的存在下， 在溶剂如甲醇中， 在 0℃至室温的温度与 无机金属氢化物如硼氢化钠反应。可选择地， 式 (V) 化合物， A ＝ NH， 可以通过使式 (III) 化合物在溶剂如乙醇的存在下， 在 0℃至回流的温度， 与水合肼反应而制备。
式 (VI) 化合物可以通过使化合物 (V) 在溶剂如四氢呋喃中， 在 0℃至回流的温度， 与酸酐如乙酸酐或混合酸酐如甲酸 - 乙酸酐反应而制备。
式 (VII) 化合物可以通过使化合物 (VI) 在溶剂如甲苯中， 在 25℃至回流的温度， 与氯化剂如三氯氧磷 (phosphorous oxychloride) 反应而制备。可选择地， 式 (VII) 化合 物可以通过使式 (VI) 化合物不使用溶剂或在溶剂如二噁烷中， 在 50℃至回流的温度与酸 如甲酸反应而制备。
式 (VIII) 化合物可以通过使式 (VII) 化合物在碱如二 ( 三甲基甲硅烷基 ) 氨基锂 的存在下， 在溶剂如 THF 中， 在 -78℃至室温的温度与苯胺 ( 具有适当的取代基 R1) 反应而
制备。可选择地， 式 (VIII) 化合物可以通过使式 (VII) 化合物在催化剂如三 ( 二亚苄基丙 酮 ) 合二钯 (0)、 碱如磷酸钾、 配体如 2- 二环己基膦基 -2’ ， 6’ -( 二异丙氧基 ) 联苯的存在 下， 在适合的溶剂如甲苯中， 在室温至溶剂回流的温度， 或者在微波辐射下在 70℃至 150℃ 的温度， 与苯胺 ( 具有适当的取代基 R1) 反应而制备。
式 (IX) 化合物可以通过使式 (VIII) 化合物在质子溶剂如乙醇或甲醇中， 在室温 至回流温度的温度， 与碱如氢氧化钠反应而制备。
式 (IX) 化合物可以在适合的碱如二异丙基乙基胺或三乙胺的存在下， 在惰性溶 剂如四氢呋喃、 N， N- 二甲基甲酰胺或二氯甲烷中， 在约室温的温度， 与式 (XII) 的官能化羟 胺 ( 可商购获得或根据文献中的方法制备 ) 或胺和适合的偶联剂如 O-(7- 氮杂 - 苯并 - 三 唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四 - 甲基 六氟磷酸盐、 N-(3- 二甲基氨基丙基 )-N′ - 乙基碳 二亚胺盐酸盐或 N， N′ - 二环己基碳二亚胺 ( 在 N- 羟基 -1， 2， 3- 苯并三唑的存在下 ) 反 应， 以获得式 (X) 化合物。式 (X) 化合物可以直接通过使式 (VIII) 化合物在路易斯酸如三 甲基铝的存在下， 在溶剂如 DCM 中， 在室温至回流的温度与胺或羟胺 DNHR 反应而获得。可 选择地， 式 (X) 化合物可以通过使式 (VIII) 化合物在碱如二 ( 三甲基甲硅烷基 ) 氨基锂的 存在下， 在溶剂如 THF 中， 在 -78℃至 25℃的温度用官能化羟胺 DNHR 处理而制备。
式 (I) 化合物， 其中 Y ＝ R8SO2NH-， 可以根据方案 2 制备。 方案 2式 (XVI) 化合物可以通过使式 (IX) 化合物在溶剂如甲苯中， 在碱如三乙胺的存在 下， 用叠氮化磷酸二苯酯 (diphenylphosphoryl azide， DPPA) 处理而制备。式 (XVII) 化合 物可以从式 (XVI) 化合物开始， 通过以下方法制备 ： 在溶剂如 DMF 中用碱如氢化钠处理， 接 着与磺酰氯 ( 适当地取代的 ) 反应。式 (XVIII) 化合物可以通过使式 (XVII) 化合物在溶 剂如 DMF 中， 在 50℃至 150℃的温度使用碱如氢氧化钠脱保护而制备。
式 (XII) 的羟胺可以使用文献中所述的方法或方案 3 中概述的合成路线制备。
方案 3
通式 (XXXVII) 的伯醇或仲醇可以使用文献中所述的方法制备。可以使用膦和偶联剂如偶氮二羧酸二乙酯使它们与 N- 羟基邻苯二甲酰亚胺反应， 以提供通式 (XXXVIII) 化 合物。可以使用肼或甲基肼将通式 (XXXVIII) 化合物脱保护， 以提供通式 (XII-a) 的羟胺。
式 (XII-a) 化合物可以通过使用还原剂如三乙酰氧基硼氢化钠、 氰基硼氢化钠或 硼烷 - 吡啶， 在溶剂如二氯乙烷中， 在环境温度至回流的温度用醛或酮进行还原胺化而得 到进一步修饰。另外， 可以通过在碱如三乙胺的存在下， 在溶剂如二氯甲烷中， 用烷基卤化 物进行烷基化进一步修饰式 (XII-a) 化合物， 以提供通式 (XII-b) 的羟胺。
可选择地， 式 (XII-a) 的羟胺可以根据方案 4 制备。
方案 4
可以使式 (XL) 的烷基卤化物在碱如碳酸钾的存在下， 在溶剂如二甲基亚砜中， 在 10 ℃至 50 ℃的温度与 N- 羟基邻苯二甲酰亚胺反应。可以使用方案 3 中所述的将式 (XXXVIII) 化合物转化成式 (XII) 化合物的方法将式 (XLI) 化合物转化成式 (XII) 化合物。 可选择地， 式 (XII-a) 化合物可以根据方案 5 制备。 方案 5
可以在催化量的碱如 DIPEA 和助催化剂如四丁基溴化铵的存在下， 在溶剂如甲苯 中， 在 50℃至回流的温度使式 (XLII) 化合物与 N- 羟基邻苯二甲酰亚胺反应。可以使用方 案 3 中所述的将式 (XXXVIII) 化合物转化成式 (XII) 化合物的方法将式 (XLIII) 化合物转 化成式 (XII) 化合物。
在上述交叉 - 偶联反应中使用的通式 (XXXI) 的苯胺可以使用文献中所述的方法 或根据方案 6 制备。
方案 6可以在溶剂如二甲苯中， 使用催化剂如四 ( 三苯基膦 ) 钯， 在室温至回流的温度使 取代的 1- 氯 -4- 硝基苯与金属 RMXn 如环丙基硼酸或六甲基二硅氮烷反应， 以得到式 (XXX) 化合物。可以使用文献中所述的方法 ( 例如， 在氢气气氛下， 在 1 至 5 个大气压的压力， 在 催化剂如钯 / 碳的存在下， 在溶剂如乙醇或乙酸乙酯中， 在室温反应 ) 将硝基还原， 以得到
式 (XXXI) 化合物。
可选择地， 式 (LV) 的苯胺可以根据方案 7 制备。
方案 7
可以在溶剂如 THF 中， 在 -100℃至 -20℃的温度， 使式 (LIV) 的 4- 溴苯胺或 4- 碘 苯胺与至少 2 当量的强有机金属碱如正丁基锂反应， 接着用亲电子试剂如三甲基甲硅烷基 氯化物淬灭中间体芳基锂物质， 以得到式 (LV) 化合物。
应该理解， 当适当的官能团存在时， 式 (I) 化合物或在它们的制备中使用的任何 中间体可通过一种或多种标准合成方法采用取代、 氧化、 还原或裂解反应来进一步衍生化。 具体的取代方法包括常规的烷基化、 芳基化、 杂芳基化、 酰化、 磺酰化、 卤化、 硝化、 甲酰化和 偶联操作。
例 如， 芳基溴或芳基氯基团可如下转化为芳基碘 ： 使用芬克尔斯坦反应 (Finkelstein reaction) 即在溶剂如 1， 4- 二噁烷中， 采用碘源如碘化钠， 催化剂如碘化亚 铜， 和配体如反式 -N， N’ - 二甲基 -1， 2- 环己二胺， 然后将反应混合物在回流温度加热。芳 基三烷基甲硅烷可如下转化为芳基碘 ： 用碘源如一氯化碘， 在含有或不含路易斯酸如四氟 硼酸银的溶剂如二氯甲烷中， 在 -40℃至回流温度处理所述甲硅烷。
在另一实施例中， 伯胺 (-NH2) 基团可如下进行烷基化 ： 使用还原性烷基化方法即 在溶剂如卤代烃如 1， 2- 二氯乙烷， 或醇如乙醇中， 必要时在酸如乙酸存在下， 在环境温度 左右， 使用醛或酮， 和硼氢化物例如三乙酰氧基硼氢化钠或氰基硼氢化钠。仲胺 (-NH-) 基 团可使用醛类似地进行烷基化。
在 另 一 实 施 例 中， 伯 胺 或 仲 胺 基 团 可 通 过 酰 化 转 化 为 酰 胺 基 团 (-NHCOR’ 或 -NRCOR’ )。酰化可如下实现 ： 与适当的酰氯在碱如三乙胺的存在下， 在合适的溶剂如二 氯甲烷中反应 ； 或与适当的羧酸在合适的偶联剂如 HATU(O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N，
N， N’ ， N’ - 四甲基六氟磷酸盐 ) 存在下， 在合适的溶剂如二氯甲烷中反应。类似地， 胺基团可如下转化为磺酰胺基团 (-NHSO2R’ 或 -NR” SO2R’ )： 使胺基团与适当的磺酰氯在合适的 碱如三乙胺存在下， 在合适的溶剂如二氯甲烷中反应。伯胺或仲胺基团可如下转化为脲基 团 (-NHCONR’ R” 或 -NRCONR’ R” )： 使伯胺或仲胺基团与适当的异氰酸酯在合适的碱如三乙 胺存在下， 在合适的溶剂如二氯甲烷中反应。 胺 (-NH2) 可如下获得 ： 还原硝基 (-NO2)， 例如在金属催化剂 ( 例如钯 / 载体 ( 如 碳 )) 存在下， 在溶剂如乙酸乙酯或醇如甲醇中， 使用例如氢气进行催化氢化。可供选择地， 可通过化学还原即在酸如盐酸存在下使用例如金属 ( 如锡或铁 ) 来进行所述转化。
在另一实施例中， 胺 (-CH2NH2) 基团可如下获得 ： 对腈 (-CN) 进行还原， 例如在金属 催化剂 ( 例如钯 / 载体 ( 如碳 ) 或兰尼镍 (Raney nickel)) 存在下， 在溶剂如醚 ( 例如环 醚如四氢呋喃 ) 中， 在 -78℃至溶剂的回流温度使用例如氢气进行催化氢化。
在另一实施例中， 胺 (-NH2) 基团可如下从羧酸基团 (-CO2H) 获得 ： 将羧酸基团
(-CO2H) 转化为相应的酰基叠氮 (-CON3)， 进行库尔提斯重排 (Curtiusrearrangement)， 然 后对形成的异氰酸酯 (-N ＝ C ＝ O) 进行水解。
醛基 (-CHO) 可如下转化为胺基团 (-CH2NR’ R” )： 在溶剂如卤代烃 ( 如二氯甲烷 ) 或醇 ( 如乙醇 ) 中， 必要时在酸如乙酸的存在下， 在环境温度左右使用胺和硼氢化物 ( 如三 乙酰氧基硼氢化钠或氰基硼氢化钠 ) 进行还原性氨化。
在另一实施例中， 醛基可如下转化为烯基 (-CH ＝ CHR’ )： 在本领域技术人员已知 的标准条件下使用适当的膦烷 (phosphorane) 或膦酸酯 (phosphonate) 进行维悌希反应 (Wittig reaction) 或 Wadsworth-Emmons 反应。
醛基可如下获得 ： 在合适的溶剂如甲苯中使用二异丁基氢化铝对酯基 ( 如 -CO2Et) 或腈 (-CN) 进行还原。可供选择地， 醛基可如下获得 ： 使用本领域技术人员已 知的任何合适氧化剂对醇基 (alcohol group) 进行氧化。
取决于 R 的性质， 酯基 (-CO2R’ ) 可通过酸催化水解或碱催化水解而转化为相应的 酸基团 (-CO2H)。若 R 为叔丁基， 则可以如下实现酸催化水解 ： 例如用有机酸如三氟乙酸在 含水溶剂中进行处理， 或用无机酸如盐酸在含水溶剂中进行处理。
羧酸基团 (-CO2H) 可通过与适当的胺在合适的偶联剂如 HATU 存在下， 在合适的溶 剂如二氯甲烷中反应而转化为酰胺 (CONHR’ 或 -CONR’ R” )。
在另一实施例中， 羧酸可如下加入一个碳原子 (be homologated by onecarbon) ( 即 -CO2H 变为 -CH2CO2H) ： 将羧酸转化为相应的酰氯 (-COCl)， 接着进行阿恩特 - 艾斯特合 成 (Arndt-Eistert synthesis)。
在另一实施例中， -OH 基团可如下从相应的酯 ( 如 -CO2R’ ) 或醛 (-CHO) 生成 ： 使 用例如络合金属氢化物 ( 如氢化铝锂于乙醚或四氢呋喃中的溶液或者硼氢化钠在溶剂如 甲醇中的溶液 ) 进行还原。可供选择地， 醇可通过使用例如氢化铝锂于溶剂如四氢呋喃中 的溶液或使用硼烷于溶剂如四氢呋喃中的溶液还原相应的酸 (-CO2H) 来制备。
醇基可使用本领域技术人员已知的条件转化为离去基如卤素原子或磺酰基氧基 ( 如烷基磺酰基氧基 ( 例如三氟甲基磺酰基氧基 ) 或芳基磺酰基氧基 ( 例如对甲苯磺酰基 氧基 ))。 例如， 可以使醇与亚硫酰氯在卤代烃 ( 例如二氯甲烷 ) 中反应得到相应的氯化物。 在所述反应中也可使用碱 ( 例如三乙胺 )。
在另一实施例中， 醇、 酚或酰胺基团可如下进行烷基化 ： 使酚或酰胺与醇在溶剂如 四氢呋喃中， 在膦例如三苯基膦和活化剂如偶氮二羧酸二乙酯、 偶氮二羧酸二异丙酯或偶 氮二羧酸二甲酯的存在下偶联。 可供选择地， 烷基化可如下实现 ： 使用合适的碱如氢化钠进 行脱质子化， 接着加入烷基化试剂如卤代烷。
化合物中的芳族卤素取代基可如下进行卤素 - 金属交换 ： 化合物中的芳族卤素取 代基用碱 ( 如锂碱例如正丁基锂或叔丁基锂 )， 任选在低温如 -78℃左右， 在溶剂如四氢呋 喃中处理， 然后用亲电子试剂淬灭以引入期望的取代基。由此， 例如甲酰基可通过使用 N， N- 二甲基甲酰胺作为亲电子试剂来引入。可供选择地， 芳族卤素取代基可进行金属 ( 例 如钯或铜 ) 催化的反应以引入例如酸基团、 酯基团、 氰基、 酰胺基团、 芳基、 杂芳基、 烯基、 炔基、 硫代或氨基取代基。可使用的合适操作包括由 Heck、 Suzuki、 Stille、 Buchwald 或 Hartwig 描述的那些操作。
芳族卤素取代基也可在与适当的亲核试剂如胺或醇反应后进行亲核置换。 有利地是， 上述反应可在微波照射的存在下在升高的温度进行。
如下所述， 测试了本发明化合物抑制 MEK 活性和活化的能力 ( 初级测定 ) 和它们 对生长细胞的生物学作用 ( 次级测定 )。 在实施例 1 的 MEK 活性测定中 IC50 小于 5μM( 更优 选为小于 0.1μM， 最优选为小于 0.01μM)， 在实施例 2 的 MEK 活化测定中 IC50 小于 5μM( 更 优选为小于 1μM， 甚至更优选为小于 0.1μM， 最优选为小于 0.01μM)， 在实施例 3 的细胞 增殖测定中 EC50 小于 10μM( 更优选为小于 1μM， 甚至更优选为小于 0.5μM， 最优选为小于 0.1μM)， 和 / 或在实施例 4 的 ERK 磷酸化测定中 EC50 小于 10μM( 更优选为小于 1μM， 甚 至更优选为小于 0.5μM， 最优选为小于 0.1μM) 的本发明化合物可用作 MEK 抑制剂。
本发明包括含有式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物和 / 或盐 ) 和载体 ( 可药用载 体 ) 的组合物 ( 如药物组合物 )。本发明还包括含有式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物和 / 或盐 ) 和载体 ( 可药用载体 ) 以及还含有如本申请描述的另一种化学治疗药物和 / 或另一 种抗炎药物的组合物 ( 如药物组合物 )。本发明组合物可用于在哺乳动物 ( 例如人 ) 中抑 制异常细胞生长或治疗过度增殖性疾病。本发明组合物还可用于在哺乳动物 ( 例如人 ) 中 治疗炎性疾病。
本发明化合物和组合物还可用于在哺乳动物 ( 例如人 ) 中治疗自身免疫性疾 病、 破坏性骨疾病 (destructive bone disorder)、 增殖性疾病、 感染性疾病 (infectious disease)、 病毒疾病、 纤维化疾病或神经变性疾病。上述疾病 / 障碍的实例包括但不 限 于 糖 尿 病 和 糖 尿 病 并 发 症、 糖 尿 病 性 视 网 膜 病 (diabeticretinopathy)、 早产儿视 网 膜 病 (retinopathy of prematurity)、 年 龄 相 关 黄 斑 变 性 (age-related macular degeneration)、 血管瘤、 特发性肺纤维化 (idiopathicpulmonary fibrosis)、 鼻炎和特应 性皮炎 (atopic dermatitis)、 肾病和肾衰竭、 多囊性肾病 (polycystic kidney disease)、 充血性心力衰竭、 神经纤维瘤病 (neurofibromatosis)、 器官移植排斥、 恶病质、 中风、 败血 症性休克、 心力衰竭、 器官移植排斥、 阿尔兹海默病、 慢性疼痛或神经性疼痛， 以及病毒感染 如 HIV、 乙型肝炎病毒 (HBV)、 人乳头瘤病毒 (human papilloma virus， HPV)、 巨细胞病毒 (CMV) 和 EB 病毒 (Epstein-Barr virus， EBV)。出于本发明的目的， 慢性疼痛包括但不限于 原发性疼痛 (idiopathic pain) 和与慢性酒精中毒、 维生素缺乏、 尿毒症、 甲状腺功能减退 (hypothyroidism)、 炎症、 关节炎相关的疼痛， 以及术后痛 (post-operative pain)。 神经性 疼痛与多种病症相关， 这些病症包括但不限于炎症、 术后痛、 幻肢痛 (phantom limb pain)、 烧伤痛 (burnpain)、 痛风、 三叉神经痛 (trigeminal neuralgia)、 急性疱疹疼痛和疱疹后疼 痛 (acute herpetic and postherpetic pain)、 灼痛 (causalgia)、 糖尿病性神经病、 网状 组织撕脱伤 (plexus avulsion)、 神经瘤、 血管炎 (vasculitis)、 病毒感染、 挤压伤 (crush injury)、 缩窄性损伤 (constriction injury)、 组织损伤 (tissue injury)、 截肢术 (limb amputation)、 关节炎疼痛以及外周神经系统和中枢神经系统之间的神经损伤。
本发明化合物和组合物还可用于在哺乳动物 ( 例如人 ) 中治疗胰腺炎或肾脏疾病 ( 包括增殖性肾小球肾炎 (proliferative glomerulonephritis) 和糖尿病诱发的肾病 )。
本发明化合物和组合物还可用于在哺乳动物 ( 例如人 ) 中防止胚细胞植入 (blastocyte implantation)。
本发明包括在哺乳动物 ( 例如人 ) 中抑制异常细胞生长或治疗过度增殖性疾病的 方法， 所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物和 /或盐 ) 或含有其的组合物。本发明还包括在哺乳动物 ( 例如人 ) 中治疗炎性疾病的方法， 所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物和 / 或盐 ) 或含有其的组合物。
本发明包括在哺乳动物 ( 例如人 ) 中抑制异常细胞生长或治疗过度增殖性疾病的 方法， 所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物和 / 或盐 ) 或含有其的组合物， 以及如本申请中描述的另一种化学治疗药物。本发明还包括在 哺乳动物 ( 例如人 ) 中治疗炎性疾病的方法， 所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量 的式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物和 / 或盐 ) 或含有其的组合物， 以及如本申请中描述的 另一种抗炎药物。
本发明包括在哺乳动物 ( 例如人 ) 中治疗自身免疫性疾病、 破坏性骨疾病、 增殖性 疾病、 感染性疾病、 病毒疾病、 纤维化疾病或神经变性疾病的方法， 所述方法包括给予所述 哺乳动物治疗有效量的式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物和盐 ) 或含有其的组合物， 以及任 选还给予另一种治疗药物。上述疾病 / 障碍的实例包括但不限于糖尿病和糖尿病并发症、 糖尿病性视网膜病、 早产儿视网膜病、 年龄相关黄斑变性、 血管瘤、 特发性肺纤维化、 鼻炎和 特应性皮炎、 肾病和肾衰竭、 多囊性肾病、 充血性心力衰竭、 神经纤维瘤病、 器官移植排斥、 恶病质、 中风、 败血症性休克、 心力衰竭、 器官移植排斥、 阿尔兹海默病、 慢性疼痛或神经性 疼痛， 以及病毒感染， 如 HIV、 乙型肝炎病毒 (HBV)、 人乳头瘤病毒 (HPV)、 巨细胞病毒 (CMV) 和 EB 病毒 (EBV)。 本发明包括在哺乳动物 ( 例如人 ) 中治疗胰腺炎或肾脏疾病 ( 包括增殖性肾小球 肾炎和糖尿病诱发的肾病 ) 的方法， 所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的式 I 化 合物 ( 和 / 或其溶剂化物和盐 ) 或含有其的组合物， 以及任选还给予另一种治疗药物。
本发明包括在哺乳动物 ( 例如人 ) 中防止胚细胞植入的方法， 所述方法包括给予 所述哺乳动物治疗有效量的式 I 化合物 ( 和 / 或其溶剂化物和盐 ) 或含有其的组合物， 以 及任选还给予另一种治疗药物。
本发明包括使用本发明化合物用于体外、 原位和体内诊断或治疗哺乳动物细胞、 器官或相关病理学病症的方法。
还相信的是， 本发明化合物可使得异常细胞对出于杀死和 / 或抑制这些细胞生长 的目的而进行的放射治疗更敏感。 因此， 本发明还涉及使哺乳动物 ( 例如人 ) 中的异常细胞 对放射治疗敏感的方法， 所述方法包括给予所述哺乳动物一定量的式 I 化合物 ( 和 / 或其 溶剂化物和盐 ) 或含有其的组合物， 所述量就使异常细胞对放射治疗敏感而言是有效的。
本发明化合物 ( 下文称为″活性化合物″ ) 的给药可通过能够递送所述化合物至 作用位点的任何方法进行。这些方法包括口服途径、 十二指肠内途径、 肠胃外注射 ( 包括静 脉内、 皮下、 肌内、 血管内或输注 )、 局部、 吸入和直肠给药。
所给药的活性化合物的量可取决于所治疗的受试者、 疾病或病症的严重度、 给药 速率、 化合物的体内处置 (disposition) 和开处方医师的判断。然而， 有效剂量的范围为约 0.001 至约 100mg/ 千克体重 / 天， 优选约 1 至约 35mg/kg/ 天， 其为单一剂量或分份剂量。 对于 70kg 的人而言， 有效剂量可总计为约 0.05 至 7g/ 天， 优选约 0.05 至约 2.5g/ 天。在 一些情况下， 低于上述范围的下限的剂量水平可以是远远足够的， 而在其它情况下， 可使用 更大的剂量而不引起任何有害的副作用， 条件是首先将所述更大的剂量分成若干小剂量用
于在一天中给药。
活性化合物可用作单独治疗， 或与一种或多种化学治疗药物或抗炎剂例如本申请 描述的那些联用。所述联合治疗可通过同时、 先后或分开给予各治疗组分来实现。
药物组合物可例如呈适于口服给药的形式， 其为片剂、 胶囊剂、 丸剂、 粉末剂、 持续 释放制剂、 溶液剂、 混悬剂 ； 适于肠胃外注射的形式， 其为无菌溶液剂、 混悬剂或乳剂 ； 适于 局部给药的形式， 其为软膏剂或乳膏剂 ； 或适于直肠给药的形式， 其为栓剂。药物组合物可 呈适于单次给药精确剂量的单位剂量形式。药物组合物可包含常规的药物载体或赋形剂， 以及作为活性成分的本发明化合物。此外， 其可包含其它医药试剂、 载体、 辅料等。
示例性的肠胃外给药形式包括活性化合物于无菌水溶液 ( 例如丙二醇水溶液或 右旋糖水溶液 ) 中的溶液剂或混悬剂。如果期望， 可对上述剂型进行适当的缓冲。
合适的药物载体包括惰性稀释剂或充填剂、 水和各种有机溶剂。如果期望， 药物 组合物可含有额外的成分， 如矫味剂、 粘合剂、 赋形剂等。由此， 对于口服给药而言， 含有各 种赋形剂如枸橼酸的片剂可与各种崩解剂 ( 如淀粉、 海藻酸和某些复合硅酸盐 (complex silicate)) 以及粘合剂 ( 如蔗糖、 明胶和阿拉伯胶 ) 一起使用。此外， 润滑剂 ( 如硬脂酸 镁、 十二烷基硫酸钠和滑石 ) 通常可用于片剂目的。相似类型的固体组合物也可按软填 充明胶胶囊剂和硬填充明胶胶囊剂的形式使用。因此， 优选的物质包括乳糖 (lactose 或 milksugar) 和高分子量聚乙二醇。当含水混悬剂或酏剂期望用于口服给药时， 可将其中的 活性化合物与以下物质混合 ： 各种甜味剂或矫味剂、 着色剂或染料， 和乳化剂或助悬剂 ( 如 果期望 )， 以及稀释剂如水、 乙醇、 丙二醇、 甘油或它们的组合。
对本领域技术人员而言， 制备含有具体量的活性化合物的各种药物组合物的方 法是已知的或是显而易见的。例如， 参见 Remington’ sPharmaceutical Sciences， Mack Publishing Company， Ester， Pa.， 15.sup.thEdition(1975)。
实施例
缩写
nBuLi 正丁基锂
CDCl3 氘代氯仿
CD3OD 氘代甲醇
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙基胺
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
Dppf 1， 1’ - 双 ( 二苯基膦基 ) 二茂铁
EDCI 1- 乙基 -3-(3’ - 二甲基氨基丙基 ) 碳二亚胺盐酸盐
Et3N 三乙胺
HATU HCl Hvflo HOBt IMSO-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N′， N′ - 四甲基 盐酸 硅藻土 1- 羟基苯并三唑 工业甲基化酒精39六氟磷酸盐101903387 A CN 101903388
说明书32/47 页K3PO4 磷酸三钾
LHMDS 二 ( 三甲基甲硅烷基 ) 氨基锂
MeOH 甲醇
NaOH 氢氧化钠
Pd(PPh3)4 四 ( 三苯基膦 ) 钯 (0)
Pd2dba3 三 ( 二亚苄基丙酮 ) 合二钯 (0)
Si-PPC 预填充的二氧化硅快速色谱柱 ： Isolute SPE、 BiotageSNAP 或 ISCO Redisep
SCX-2 具有化学键合丙磺酸官能团的 Isolute 硅基吸附剂
THF 四氢呋喃
一般实验条件
在环境温度使用带有三重共振 5mm 探头的 Varian Unity Inova(400MHz) 光谱仪 1 记录 H NMR 光谱。化学位移表示为相对于四甲基甲硅烷的 ppm。使用以下缩写 ： br ＝宽信 号， s ＝单峰， d ＝二重峰， dd ＝双二重峰， t ＝三重峰， q ＝四重峰， m ＝多重峰。
使用下列方法之一进行高压液相色谱 - 质谱 (LCMS) 实验以确定保留时间 (RT) 和 相关质量离子 (mass ion)。
方法 A ： 在与带有二极管阵列检测器的 Hewlett Packard HP1100 LC 系统相连的 Waters Micromass ZQ 四极杆质谱仪上进行实验。 该系统使用 Higgins Clipeus 5 微米 C18 100×3.0mm 柱和 1ml/ 分钟的流速。起始溶剂系统在第一分钟内为 95％含有 0.1％甲酸的 水 ( 溶剂 A) 和 5％含有 0.1％甲酸的乙腈 ( 溶剂 B)， 接着再历时 14 分钟梯度升至 5％溶剂 A 和 95％溶剂 B。最终溶剂系统保持恒定再持续 5 分钟。
方法 B ： 在 与 带 有 二 极 管 阵 列 检 测 器 和 100 位 自 动 进 样 器 的 HewlettPackard HP1100 LC 系统相连的 Waters Platform LC 四极杆质谱仪上进行实验， 使用 Phenomenex Luna C18(2)30×4.6mm 柱和 2ml/ 分钟的流速。溶剂系统在开始的 0.50 分钟内为 95％含 有 0.1％甲酸的水 ( 溶剂 A) 和 5％含有 0.1％甲酸的乙腈 ( 溶剂 B)， 接着再历时 4 分钟梯 度升至 5％溶剂 A 和 95％溶剂 B。最终溶剂系统保持恒定再持续 0.50 分钟。
使用 Personal Chemistry Emrys InitiatorTM 或 OptimizerTM 进行微波实验， 所 述装置使用单模共振器和动力场调谐 (dynamic field tuning)， 两者都可以得到重现和控 制。可实现 40-250℃的温度， 并且可达到高至 20 巴的压力。
实施例 1MEK 测定 (MEK 活性测定 )
使用昆虫细胞中表达的组成性活化的人突变 MEK1 作为酶活性的来源， 其在激酶 测定中的最终浓度为 15nM。
所述测定在 50μM ATP 存在下进行 30 分钟， 使用大肠杆菌 (E.Coli) 中产生的重 组 GST-ERK1 作为底物。使用由 Cisbio 提供的 HTRF 试剂检测底物的磷酸化并定量。上述 HTRF 试剂由与别藻蓝蛋白 (allophycocyanin)(XL665) 结合的抗 GST 抗体和与铕穴状化合 物 (europium-cryptate) 结合的抗磷酸 (Thr202/Tyr204)ERK 抗体组成。这两种抗体分别 以 4μg/ml 和 0.84μg/ml 的最终浓度使用。 抗磷酸抗体识别在 Thr202 和 Tyr204 上双重磷 酸化的 ERK1。当这两种抗体都与 ERK1 结合时 ( 即当底物被磷酸化时 )， 在 340nm 激发后， 发生了能量从穴状化合物至别藻蓝蛋白的转移， 导致发射出与所产生的磷酸化底物的量成比例的荧光。使用多孔荧光计 (multiwell fiuorimeter) 检测荧光。
将化合物在 DMSO 中稀释， 然后加至测定缓冲液中， 测定中的最终 DMSO 浓度为 1％。
IC50 定义为给定的化合物实现 50％抑制对照时的浓度。 使用 XLfit 软件包 (2.0.5 版本 ) 计算 IC50 值。
实施例 5-14 化合物在实施例 1 中所述的测定中呈现出小于 1μM 的 IC50。
实施例 2bRaf 测定 (MEK 活化测定 )
使用昆虫细胞中表达的组成性活化的 bRaf 突变作为酶活性的来源。
所述测定在 200μM ATP 的存在下进行 30 分钟， 使用大肠杆菌中产生的重组 GST-MEK1 作为底物。 使用由 Cisbio 提供的 HTRF 试剂检测底物的磷酸化并定量。 上述 HTRF 试剂由与别藻蓝蛋白 (XL665) 结合的抗 GST 抗体和与铕穴状化合物结合的抗磷酸 (Ser217/ Ser221)MEK 抗体组成。所述抗磷酸抗体识别在 Ser217 和 Ser221 上双重磷酸化的 MEK 或在 Ser217 上单独磷酸化的 MEK。当这两种抗体都与 MEK 结合时 ( 即当底物被磷酸化时 )， 在 340nm 激发后， 发生了能量从穴状化合物至别藻蓝蛋白的转移， 导致发射出与所产生的磷酸 化底物的量成比例的荧光。使用多孔荧光计检测荧光。
将化合物在 DMSO 中稀释， 然后加至测定缓冲液中， 测定中的最终 DMSO 浓度为 1％。
IC50 定义为给定的化合物实现 50％抑制对照时的浓度。 使用 XLfit 软件包 (2.0.5 版本 ) 计算 IC50 值。
实施例 3 细胞增殖测定
在细胞增殖测定中使用以下细胞系对化合物进行试验 ：
HCT116 人结肠直肠癌 (ATCC)
A375 人恶性黑素瘤 (ATCC)
在 37 ℃在 5 ％ CO2 增湿培养箱中将这两种细胞系都维持在补充有 10 ％ FCS 的 DMEM/F12(1 ∶ 1) 培养基 (Gibco) 中。
将细胞以 2,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板中， 24 小时后使其暴露于不同浓度的 化合物于 0.83％ DMSO 中的溶液。使细胞再生长 72h， 然后将等体积的 CellTiter-Glo 试剂 (Promega) 加到每孔中。 这使细胞溶解并产生与所释放的 ATP 的量成比例 ( 因此与孔中的细 胞数目成比例 ) 的发光信号， 所述发光信号可使用多孔发光计 (multiwell luminometer) 检测。
EC50 定义为给定的化合物实现 50％抑制对照时的浓度。 使用 XLfit 软件包 (2.0.5 版本 ) 计算 EC50 值。
在该测定中， 实施例 5-11 和 13-14 的标题化合物在两种细胞系中均呈现出小于 10μM 的 EC50。实施例 12 的标题化合物在 HCT116 细胞系中呈现出小于 0.1μM 的 EC50。
实施例 4 基于细胞的磷酸 -ERK 测定
在基于细胞的磷酸 -ERK ELISA 中使用以下细胞系对化合物进行试验 ：
HCT116 人结肠直肠癌 (ATCC)
A375 人恶性黑素瘤 (ATCC)
在 37 ℃在 5 ％ CO2 增湿培养箱中将这两种细胞系都维持在补充有 10 ％ FCS 的 DMEM/F12(1 ∶ 1) 培养基 (Gibco) 中。
将细胞以 2,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板中， 24 小时后使其暴露于不同浓度的化合物于 0.83 ％ DMSO 中的溶液。使细胞再生长 2h 或 24h， 用甲醛 (2 ％最终浓度 ) 固 定， 然后用甲醇渗透。用 TBST-3％ BSA 封闭后， 在 4℃将固定的细胞与第一抗体 ( 来自兔 的抗磷酸 ERK) 一起孵育过夜。将细胞与碘化丙锭 (Propidium Iodide)(DNA 荧光染料 ) 一起孵育， 然后使用与荧光 AlexaFluor 488 染料 ( 分子探针 ) 结合的抗兔第二抗体对细 胞 p-ERK 进行检测。使用 Acumen Explorer(TTP Labtech) 激光扫描微量板细胞计数器 (laser-scanningmicroplate cytometer) 对荧光进行分析， 然后将 Alexa Fluor 488 信号 归一化为 PI 信号 ( 与细胞数目成比例 )。
EC50 定义为给定的化合物实现基线和最大响应之间一半信号的浓度。使用 XLfit 软件包 (2.0.5 版本 ) 计算 EC50 值。
在该测定中， 实施例 5-11 和 13-14 的标题化合物在两种细胞系中均呈现出小于 0.2μM 的 EC50。实施例 12 的标题化合物在 HCT116 细胞系中呈现出小于 0.2μM 的 EC50。
咪唑并 [1， 5-a] 吡啶的合成
8- 氯 - 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯
步骤 1 ： 2， 3- 二氯 - 异烟酸在 -25℃， 在惰性气氛下向二异丙基胺 (7.0mL， 50mmol) 在无水 THF(100mL) 中的溶 液滴加 nBuLi 在己烷 (31mL， 50mmol) 中的 1.6M 溶液。然后将反应混合物冷却至 -78℃并添 加 2， 3- 二氯吡啶。 将反应混合物在 -78℃搅拌 3 小时， 然后倒在固体二氧化碳上并在室温陈 化 (aged)18 小时。将混合物用水 (100mL) 稀释并用乙醚 (3x40mL) 洗涤， 然后冷却至 0℃， 用浓 HCl( 约 5mL) 酸化并用乙醚 (3x50mL) 萃取。将合并的有机萃取物干燥 (Na2SO4)， 过滤 1 并浓缩， 以得到标题化合物， 其为白色固体 (7.7g， 80％ )。 H NMR(d6-DMSO， 400MHz)8.49(d，
J ＝ 5.0Hz， 1H)， 7.72(d， J ＝ 5.0Hz， 1H)。
步骤 2 ： 2， 3- 二氯 - 异烟酸甲酯
向 2， 3- 二 氯 - 异 烟 酸 (7.7g， 40mmol) 在 二 氯 甲 烷 (45mL) 中 的 悬 浮 液 添 加 DMF(0.1mL) 和草酰氯 (17.5mL， 200mmol)。将反应混合物在室温搅拌 18 小时， 然后在减压下浓缩。将所得的残留物用甲苯共沸， 然后冷却至 0℃并溶解在甲醇 (135mL) 中。将混合 物升温至室温， 然后在减压下浓缩以得到残留物。 将残留物溶解在乙酸乙酯中， 并将所得的 溶液用碳酸氢钠饱和溶液、 水和盐水洗涤， 干燥 (Na2SO4)， 过滤并浓缩， 以得到标题化合物， 1 其为无色油状物， 在静置后结晶 (7.9g， 96％ )。 H NMR(CDCl3， 400MHz)8.38(d， J ＝ 5.0Hz， 1H)， 7.52(d， J ＝ 5.0Hz， 1H)， 3.99(s， 3H)。
步骤 3 ： 3- 氯 -2- 氰基 - 异烟酸甲酯
将微波瓶 (microwave vial) 装有 2， 3- 二氯 - 异烟酸甲酯 (7.6g， 36.9mmol)、 氰化 锌 (4.75g， 40.6mmol)、 四 ( 三苯基膦 ) 钯 (1.0g， 0.9mmol) 和 DMF(37mL)， 然后盖上， 排空并 用氮气回填。对反应溶液进行微波辐射 ( 在 190℃加热 20 分钟 )， 然后通过 Celite 垫过 滤， 进一步用乙酸乙酯洗涤该 Celite 垫。将所得的混合物依次用水、 碳酸氢钠饱和溶液
和盐水洗涤， 干燥 (Na2SO4)， 过滤并真空浓缩。 对所得的残留物进行柱色谱分离 (Si-PPC， 梯 度 0％至 100％， 在环己烷中的乙酸乙酯 )， 以得到标题化合物， 其为白色固体 (3.1g， 43％ )。 1 H NMR(CDCl3， 400MHz)8.70(d， J ＝ 5.0Hz， 1H)， 7.87(d， J ＝ 5.0Hz， 1H)， 4.01(s， 3H)。
步骤 4 ： 3- 氯 -2- 甲酰基氨基甲基 - 异烟酸甲酯
将 3- 氯 -2- 氰 基 - 异 烟 酸 甲 酯 (2.9g， 14.8mmol) 和 10 ％ 钯 / 碳 (palladium oncharcoal)(293mg) 在乙酸 (65mL) 中的混合物脱气并用氢气回填， 重复三次。 在氢气气氛 (1bar) 下， 在室温将反应混合物搅拌 18 小时， 然后过滤。 在减压下浓缩滤液以得到残留物， 依次用甲醇和氨在甲醇中的 将该残留物溶解在甲醇中并装载到 50gIsolute SCX-2 柱上， 2M 溶液洗脱。 合并适当的级分并在减压下浓缩以得到残留物。 将残留物溶解在甲酸 (40mL) 和乙酸酐 (8mL) 的混合物中， 在室温搅拌 30 分钟。在减压下除去溶剂以得到残留物， 将残 留物溶解在二氯甲烷中。用碳酸氢钠饱和溶液洗涤所得的溶液， 将水层分离并用二氯甲烷 萃取两次。使合并的有机萃取物通过分相器 (phaseseparator) 并在减压下浓缩， 以得到残 留物， 对残留物进行柱色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 10％， 在二氯甲烷中的甲醇 )。得到标 题化合物， 其为白色固体 (1.5g， 44％ )。LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 2.15min， [M+H]+ ＝ 229。步骤 5 ： 8- 氯 - 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯
将 3- 氯 -2- 甲酰基氨基甲基 - 异烟酸甲酯 (1.5g， 6.6mmol) 和三氯氧磷 (1.3mL， 14.2mmol) 在甲苯 (80mL) 中的混合物在 90℃搅拌 15 分钟， 然后冷却至室温并在减压下浓
缩。 使残留物在乙酸乙酯和碳酸氢钠饱和溶液之间分配。 将有机层分离并用水和盐水洗涤， 干燥 (Na2SO4)， 过滤并浓缩， 以得到标题化合物， 其为浅黄色固体 (1.3g， 93％ )。LCMS( 方法 + B) ： RT ＝ 2.38min， [M+H] ＝ 211。
8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸
步骤 1 ： 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯将 8- 氯 - 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯 (105mg， 0.50mmol)、 4- 环丙基 -2- 氟 苯胺 (101mg， 0.60mmol)、 Pd2dba3(18mg， 0.02mmol)、 2- 二环己基膦基 -2’ ， 6’ - 二异丙氧基 联苯 (37mg， 0.08mmol) 和 K3PO4(148mg， 0.70mmol) 在甲苯 (2mL) 中的悬浮液脱气， 然后加热 至 100℃并保持 24 小时。然后将反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯稀释。将所得的溶 液用水和盐水洗涤， 然后装载到 10g Isolute SCX-2 柱上， 依次用甲醇和氨在甲醇中的 2M 溶液洗脱该柱。 合并适合的级分并浓缩。 对所得的残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 10％， 在二氯甲烷中的乙酸乙酯 ) 以得到标题化合物， 其为黄色油状物 (68mg， 42％ )。 + LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 3.45min， [M+H] ＝ 326。
步骤 2 ： 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸
将 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯 (0.28g， 0.86mmol) 和 1M NaOH(1.03mL， 1.03mmol) 在 IMS(5mL) 中的悬浮液加热至 65℃并保持 5 小 时。 然后将反应混合物冷却至室温并添加 1M HCl 以调节 pH 至 2。 将形成的沉淀物过滤并在 干燥枪 (drying pistol) 中于 40℃干燥 18 小时， 以得到标题化合物， 其为膏状固体 (cream + solid)(0.22g， 81％ )。LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 2.84min， [M+H] ＝ 312。
实施例 5 ： 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 甲酰胺
向 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯 (23mg， 0.07mmol) 在 IMS(1.0mL) 中的溶液添加 1.0M 氢氧化钠水溶液 (0.10mL， 0.10mmol)。将反 应混合物加热至 65℃并保持 1 小时， 然后冷却至室温并真空浓缩。将所得的残留物用甲苯 共沸， 然后溶解在 DMF(1mL) 中。依次添加氯化铵 (7mg， 0.13mmol)、 N， N- 二异丙基乙基胺
(47μL， 0.27mmol) 和 HATU(51mg， 0.13mmol)， 然后将反应混合物在室温搅拌 18 小时。然后 将反应混合物用甲醇稀释并装载到 Isolute SCX-2 柱 (5g) 上。 然后用甲醇洗涤该柱， 随后 使用在 MeOH 中的 2M NH3 洗脱希望的产物。 收集洗脱液并浓缩， 以得到残留物。 对残留物进行 快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 5％， 在二氯甲烷中的甲醇 ) 以获得标题化合物， 其为浅 + 1 黄色固体 (5mg， 23％ )。 LCMS( 方法 A) ： RT ＝ 6.64min， [M+H] ＝ 311。H NMR(CD3OD)8.18(1H， d， J ＝ 0.88Hz)， 7.64(1H， dd， J ＝ 7.40， 0.97Hz)， 7.13(1H， t， J ＝ 8.28Hz)， 6.93-6.86(3H， m)， 6.35(1H， s)， 1.98-1.90(1H， m)， 1.05-0.97(2H， m)， 0.73-0.68(2H， m)。
实施例 6 ： 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟 基 - 乙氧基 )- 酰胺
步骤 1 ： 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1.5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙 烯基氧基 - 乙氧基 )- 酰胺向 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯 (68mg， 0.21mmol) 在 IMS(2.5mL) 中的溶液添加 1.0M 氢氧化钠水溶液 (0.25mL， 0.25mmol)。 将反应 混合物在 65℃加热 1 小时， 然后冷却至室温并真空浓缩。 将所得的残留物用甲苯共沸， 然后 悬浮在 THF(4mL) 中。然后依次添加 O-(2- 乙烯基氧基 - 乙基 )- 羟胺 (43mg， 0.42mmol)、 N， N- 二异丙基乙基胺 (0.14mL， 0.84mmol)、 EDCI(81mg， 0.42mmol) 和 HOBt(57mg， 0.42mmol)， 然后将反应混合物在室温搅拌 18 小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释并用水、 饱和碳 酸氢钠水溶液和盐水洗涤， 接着干燥 (Na2SO4)， 过滤并真空浓缩。对所得的残留物进行快速 色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 5％， 在二氯甲烷中的甲醇 ) 以得到标题化合物， 其为浅黄色 + 油状物 (56mg， 67％ )。LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 3.02min， [M+H] ＝ 397。
步骤 2 ： 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟 基 - 乙氧基 )- 酰胺
将 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙烯基氧 基 - 乙氧基 )- 酰胺 (56mg， 0.14mmol) 溶解在甲醇中并装载到 Isolute SCX-2 柱 (5g) 上。 然后用甲醇洗涤该柱， 随后使用在 MeOH 中的 2M NH3 洗脱希望的产物。 收集洗脱液并浓缩， 以 得到残留物。 对残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 20％， 在二氯甲烷中的甲醇 ) 以得到标题化合物， 其为浅黄色固体 (37mg， 71％ )。LCMS( 方法 A) ： RT ＝ 6.40min， [M+H]+
＝ 371。1HNMR(CH3OH-d4) ： 8.20(1H， d， J ＝ 0.71Hz)， 7.67-7.65(1H， m)， 7.17-7.11(1H， m) ， 6.94-6.87(2H ， m) ， 6.73(1H ， d， J ＝ 7.38Hz) ， 6.39(1H ， s) ， 4.00-3.97(2H ， m) ， 3.75-3.72(2H， m)， 1.98-1.89(1H， m)， 1.04-0.98(2H， m)， 0.73-0.68(2H， m)。
实施例 7 ： 8-(2- 氟 -4- 甲基硫基 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟基 - 乙氧基 )- 酰胺
步骤 1 ： 8-(2- 氟 -4- 甲基硫基 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯将 8- 氯 - 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯 (223mg， 1.06mmol)、 2- 氟 -4- 甲基 硫基 - 苯胺 (200mg， 1.27mmol)、 Pd2dba3(39mg， 0.04mmol)、 2- 二环己基膦基 -2’ ， 6’ - 二异 丙氧基联苯 (79mg， 0.17mmol) 和 K3PO4(315mg， 1.48mmol) 在甲苯 (4mL) 中的悬浮液脱气， 然 后在 100℃加热 18 小时。然后将反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯稀释。依次用水和盐 水洗涤所得的混合物， 然后装载到 10g Isolute SCX-2 柱上， 依次用甲醇和氨在甲醇中的 2M 溶液洗脱该柱。 合并适当的级分并真空浓缩以得到残留物。 对残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 10％， 在二氯甲烷中的乙酸乙酯 ) 以得到标题化合物， 其为黄色油状物 + (136mg， 39％ )。LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 3.26min， [M+H] ＝ 332。
步骤 2 ： 8-(2- 氟 -4- 甲基硫基 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙 烯基氧基 - 乙氧基 )- 酰胺
向 8-(2- 氟 -4- 甲基硫基 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯 (136mg， 0.41mmol) 在 IMS(10mL) 中的溶液添加 1.0M 氢氧化钠水溶液 (0.82mL， 0.82mmol)。将反应 混合物在 65℃加热 1 小时， 然后冷却至室温并真空浓缩。 将所得的残留物用甲苯共沸， 然后 悬浮在 THF(10mL) 中。然后依次添加 O-(2- 乙烯基氧基 - 乙基 )- 羟胺 (84mg， 0.82mmol)、 N， N- 二 异 丙 基 乙 基 胺 (0.28mL， 1.64mmol)、 EDCI(157mg， 0.82mmol) 和 HOBt(111mg， 0.82mmol)， 然后将反应混合物在室温搅拌 18 小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释， 用
水、 饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤， 干燥 (Na2SO4)， 过滤并浓缩。对所得的残留物进行快 速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 100％， 在二氯甲烷中的乙酸乙酯 ) 以得到标题化合物， 其 + 为浅黄色油状物 (160mg， 97％ )。LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 2.91min， [M+H] ＝ 403。
步骤 3 ： 8-(2- 氟 -4- 甲基硫基 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟 基 - 乙氧基 )- 酰胺
将 8-(2- 氟 -4- 甲基硫基 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙 烯基氧基 - 乙氧基 )- 酰胺 (160mg， 0.40mmol) 溶解在甲醇中并装载到 Isolute SCX-2 柱 (10g) 上。然后用甲醇洗涤该柱， 随后使用在 MeOH 中的 2M NH3 洗脱希望的产物。收集 洗脱液并浓缩， 以得到残留物， 对残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0 ％至 10 ％， 在 二氯甲烷中的甲醇 ) 以得到标题化合物， 其为浅黄色固体 (77mg， 51 ％ )。LCMS( 方法 A) ： + 1 RT ＝ 5.96min， [M+H] ＝ 377。 HNMR(DMSO-d6)11.54(1H， s)， 10.51(1H， s)， 8.29(1H， d， J ＝ 0.80Hz)， 7.80(1H， dd， J ＝ 7.37， 0.94Hz)， 7.24-7.16(2H， m)， 7.06(1H， dd， J ＝ 8.38， 2.11Hz)， 6.80-6.74(1H， m)， 6.39(1H， s)， 4.70(1H， s)， 3.86(2H， t， J ＝ 4.95Hz)， 3.57(2H， t， J ＝ 4.95Hz)， 2.49(3H， s)。
实施例 8 ： 8-(2- 氟 -4- 碘 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟 基 - 乙氧基 )- 酰胺
步骤 1 ： 8-(4- 溴 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯
将 8- 氯 - 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯 (500mg， 2.38mmol)、 4- 溴 -2- 氟苯 胺 (543mg， 2.86mmol)、 Pd2dba3(110mg， 0.12mmol)、 2- 二环己基膦基 -2’ ， 6’ - 二异丙氧基联苯 (224mg， 0.48mmol) 和 K3PO4(710mg， 3.33mmol) 在甲苯 (10mL) 中的悬浮液脱气， 然后 在 100℃加热 18 小时。然后将反应混合物冷却至室温， 用乙酸乙酯稀释并过滤。将滤液用 水和盐水洗涤， 然后装载到 10gIsolute SCX-2 柱上， 依次用甲醇和氨在甲醇中的 2M 溶液 洗脱该柱。合并适当的级分并真空浓缩。对所得的残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯 度 0％至 20％， 在 DCM 中的乙酸乙酯 ) 以得到标题化合物， 其为黄色油状物 (240mg， 28％ )。 + LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 3.40min， [M+H] ＝ 364/366。
步骤 2 ： 8-(2- 氟 -4- 碘 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯
在氩气气氛下， 将 8-(4- 溴 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲 酯 (235mg， 0.65mmol)、 碘化亚铜 (I)(6mg， 0.03mmol)、 碘化钠 (195mg， 1.3mmol) 和反式 -N， N ′ - 二甲基 -1， 2- 环己二胺 (0.01mL， 0.06mmol) 在 1， 4- 二噁烷 (1.0mL) 中的混合物在 110℃加热 26 小时。将反应混合物冷却至室温， 用甲醇稀释并装载到 Isolute SCX-2 柱 (10g) 上。然后用甲醇洗涤该柱， 随后使用在 MeOH 中的 2M NH3 洗脱希望的产物。收集洗脱 液并浓缩以得到残留物。对残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 20％， 在二氯甲 烷中的乙酸乙酯 ) 以得到标题化合物， 其为浅黄色固体 (182mg， 67％ )。LCMS( 方法 B) ： RT + ＝ 3.45min， [M+H] ＝ 412。
步骤 3 ： 8-(2- 氟 -4- 碘 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙烯基 氧基 - 乙氧基 )- 酰胺
向 8-(2- 氟 -4- 碘 - 苯 基 氨 基 )- 咪 唑 并 [1， 5-a] 吡 啶 -7- 羧 酸 甲 酯 (200mg， 0.49mmol) 在 IMS(10mL) 中的溶液添加 1.0M 氢氧化钠水溶液 (1.0mL， 1.0mmol)。将反应混 合物在 65℃加热 2 小时， 然后冷却至室温并真空浓缩。 将所得的残留物用甲苯共沸， 然后悬 浮在 THF(10mL) 中。然后依次添加 O-(2- 乙烯基氧基 - 乙基 )- 羟胺 (103mg， 1.0mmol)、 N， N- 二异丙基乙基胺 (0.34mL， 1.96mmol)、 EDCI(192mg， 1.0mmol) 和 HOBt(135mg， 1.0mmol)， 然后将反应混合物在室温搅拌 18 小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释， 依次用水、 饱 和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤， 干燥 (Na2SO4)， 过滤并真空浓缩。对所得的残留物进行快速 色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 100％， 在二氯甲烷中的乙酸乙酯 ) 以得到标题化合物， 其为 + 浅黄色油状物 (151mg， 64％ )。LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 3.05min， [M+H] ＝ 483。
步骤 4 ： 8-(2- 氟 -4- 碘 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟基 - 乙 氧基 )- 酰胺
将 8-(2- 氟 -4- 碘 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙烯基氧基 - 乙 氧基 )- 酰胺 (151mg， 0.31mmol) 溶解在甲醇中并装载到 Isolute SCX-2 柱 (10g) 上。然 后用甲醇洗涤该柱， 随后使用在 MeOH 中的 2M NH3 洗脱希望的产物。合并适当的级分并浓 缩以得到残留物， 对残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 10％， 在二氯甲烷中的 甲醇 ) 以得到标题化合物， 其为浅黄色固体 (115mg， 81％ )。LCMS( 方法 A) ： RT ＝ 6.36min， + 1 [M+H] ＝ 457。 HNMR(CD3OD) ： 8.27(1H， d， J ＝ 0.85Hz)， 7.80-7.77(1H， m)， 7.57-7.53(1H， m)， 7.49-7.46(1H， m)， 6.95(1H， t， J ＝ 8.48Hz)， 6.76(1H， d， J ＝ 7.37Hz)， 6.68(1H， s)， 4.00-3.94(2H， m)， 3.75-3.71(2H， m)。
实施例 9 ： 8-(4- 环 丙 基 -2- 氟 - 苯 基 氨 基 )- 咪 唑 并 [1， 5-a] 吡 啶 -7- 羧 酸 ((S)-2- 羟基 - 丙氧基 )- 酰胺将 8-(4- 环 丙 基 -2- 氟 - 苯 基 氨 基 )- 咪 唑 并 [1， 5-a] 吡 啶 -7- 羧 酸 (0.11g， 0.35mmol)、 EDCI(0.081g， 0.42mmol)、 HOBt(0.057g， 0.42mmol)、 DIPEA(0.085mL， 0.88mmol) 和 (S)-1- 氨基氧基 - 丙 -2- 醇盐酸盐 (0.05g， 0.39mmol) 在 DMF(1.5mL) 中的悬浮液在室温 搅拌 18 小时。使反应混合物在 DCM(5mL) 和饱和 NaHCO3 水溶液 (5mL) 之间分配。将有机层 依次用水 (5mL) 和盐水 (5mL) 洗涤， 然后干燥 (MgSO4)， 过滤并真空浓缩。 对所得的残留物进 行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 60％， 在 DCM 中的乙酸乙酯 ) 以得到黄色粘性固体， 通 过制备性 HPLC(Gemini 5 微米 C18 250×21.20mm 柱， 0.1％甲酸， 梯度乙腈 / 水， 5 至 98％， 斜 坡时间 (ramp time)20 分钟 ) 进一步纯化该黄色粘性固体以得到标题化合物， 其为黄色固 + 1 体 (38mg， 27％ )。LCMS( 方法 A) ： RT ＝ 6.87min， [M+H] ＝ 385。 H NMR(DMSO-d6)10.54(1H， s)， 8.27(1H， s)， 7.76(1H， dd， J ＝ 7.37， 0.93Hz)， 7.14(1H， t， J ＝ 8.37Hz)， 6.98(1H， dd， J＝ 11.87， 1.95Hz)， 6.95-6.89(1H， m)， 6.76(1H， d， J ＝ 7.33Hz)， 6.27(1H， s)， 3.89-3.79(1H， m)， 3.72-3.62(2H， m)， 1.99-1.90(1H， m)， 1.04(3H， d， J ＝ 6.34Hz)， 0.99-0.93(2H， m)， 0.76-0.67(2H， m)。
实施例 10 ： 8-(4- 环丙基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟 基 -1， 1- 二甲基 - 乙氧基 )- 酰胺
将 8-(4- 环 丙 基 -2- 氟 - 苯 基 氨 基 )- 咪 唑 并 [1， 5-a] 吡 啶 -7- 羧 酸 (0.11g， 0.35mmol)、 EDCI(0.081g， 0.42mmol)、 HOBt(0.057g， 0.42mmol)、 DIPEA(0.085mL， 0.88mmol) 和 2- 氨基氧基 -2- 甲基 - 丙 -1- 醇盐酸盐 (0.055g， 0.39mmol) 在 DMF(1.5mL) 中的悬浮 液在室温搅拌 18 小时。使反应混合物在 DCM(5mL) 和饱和 NaHCO3 水溶液 (5ml) 之间分 配。将有机层依次用水 (5mL) 和盐水 (5mL) 洗涤， 然后干燥 (MgSO4)， 过滤并真空浓缩。对 所得的残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 40％， 在 DCM 中的乙酸乙酯 ) 得到黄 色固体， 通过制备性 HPLC(Gemini 5 微米 C18 250×21.20mm 柱， 0.1％甲酸， 梯度乙腈 / 水， 5 至 98 ％， 斜坡时间 20 分钟 ) 进一步纯化该黄色固体以得到标题化合物， 其为黄色固体 + 1 (11mg， 8％ )。LCMS( 方法 A) ： RT ＝ 7.57min， [M+H] ＝ 399。 HNMR(DMSO-d6) ： 10.37(1H， s)， 8.28(1H， s)， 7.79(1H， dd， J ＝ 7.35， 0.95Hz)， 7.14(1H， s)， 7.02-6.93(1H， m)， 6.91(1H， d，
J ＝ 8.28Hz)， 6.82(1H， s)， 6.27(1H， s)， 1.99-1.90(1H， m)， 1.15(6H， s)， 0.99-0.92(2H， m)， 0.73-0.67(2H， m)。
实施例 11 ： 8-(4- 溴 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟 基 - 乙氧基 )- 酰胺
步骤 1 ： 8-(4- 溴 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙烯基 氧基 - 乙氧基 )- 酰胺向 8-(4- 溴 -2- 氟 - 苯 基 氨 基 )- 咪 唑 并 [1， 5-a] 吡 啶 -7- 羧 酸 甲 酯 (50mg， 0.14mmol) 在 IMS(3mL) 中的溶液添加 1.0M 氢氧化钠水溶液 (0.3mL， 0.3mmol)。将反应混 合物在 65℃加热 2 小时， 然后冷却至室温并真空浓缩。 将所得的残留物用甲苯共沸， 然后悬 浮在 THF(3mL) 中。然后依次添加 O-(2- 乙烯基氧基 - 乙基 )- 羟胺 (29mg， 0.28mmol)、 N， N- 二异丙基乙基胺 (0.10mL， 0.56mmol)、 EDCI(54mg， 0.28mmol) 和 HOBt(38mg， 0.28mmol)， 然后将反应混合物在室温搅拌 18 小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释并依次用水、 饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。将有机层分离， 干燥 (Na2SO4)， 过滤并真空浓缩。对所得 的残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 100％， 在二氯甲烷中的乙酸乙酯 ) 以得 到标题化合物， 其为浅黄色油状物 (40mg， 65％ )。LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 2.98min， [M+H]+ ＝ 435/437。
步骤 2 ： 8-(4- 溴 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟基 - 乙 氧基 )- 酰胺
将 8-(4- 溴 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙烯基氧基 - 乙 氧基 )- 酰胺 (40mg， 0.09mmol) 溶解在甲醇中并装载到 Isolute SCX-2 柱 (5g) 上。然后 用甲醇洗涤该柱， 随后使用在 MeOH 中的 2M NH3 洗脱希望的产物。 合并适当的级分并浓缩以 得到残留物， 对残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 20％， 在二氯甲烷中的甲醇 ) 以得到标题化合物， 其为浅黄色固体 (11mg， 29％ )。LCMS( 方法 A) ： RT ＝ 6.06min， [M+H]+ ＝ 409/411。1H NMR(CD3OD) ： 8.27(1H， d， J ＝ 0.85Hz)， 7.79(1H， dd， J ＝ 7.39， 0.97Hz)， 7.42(1H， dd， J ＝ 10.00， 2.19Hz)， 7.31(1H， ddd， J ＝ 8.53， 2.20， 1.19Hz)， 7.12(1H， t， J ＝ 8.60Hz)， 6.79-6.73(1H， m)， 6.65(1H， s)， 3.97(2H， t， J ＝ 4.69Hz)， 3.73(2H， t， J＝ 4.68Hz)。
实施例 12 ： 8-(4- 溴 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 ((S)-2- 羟 基 - 丙氧基 )- 酰胺向 8-(4- 溴 -2- 氟 - 苯 基 氨 基 )- 咪 唑 并 [1， 5-a] 吡 啶 -7- 羧 酸 甲 酯 (587mg， 1.61mmol) 在 IMS(20mL) 中的溶液添加 1.0M 氢氧化钠水溶液 (1.7mL， 1.7mmol)。将反应 混合物在 65℃加热 2 小时， 然后冷却至室温并真空浓缩。将所得的残留物用甲苯共沸， 然 后悬浮在二噁烷 (15mL) 中。然后添加 EDCI(614mg， 3.2mmol) 和 HOBt(432mg， 3.2mmol)， 并将反应混合物在室温搅拌 30 分钟。然后依次添加 (S)-1- 氨基氧基 - 丙 -2- 醇盐酸盐 (408mg， 3.20mmol) 和 N， N- 二异丙基乙基胺 (1.1mL， 6.44mmol)， 并将反应混合物在室温搅 拌 18 小时。然后在减压下浓缩反应混合物。将所得的残留物吸收在乙酸乙酯中， 然后依次 用水、 饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤， 干燥 (Na2SO4)， 过滤并真空浓缩。对所得的残留物
进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 10％， 在二氯甲烷中的甲醇 )。合并适当的级分并 浓缩以得到残留物， 对该残留物实施 HPLC(Gemini 5 微米 C18 250×21.20mm 柱， 0.1％甲酸， 在水中的乙腈， 梯度 5％至 85％， 斜坡时间 20 分钟 ) 以得到标题化合物， 其为浅黄色固体 + 1 (180mg， 26％ )。 LCMS( 方法 A) ： RT ＝ 6.55min， [M+H] ＝ 423/425。 HNMR(CDCl3) ： 10.46(1H， s)， 8.75(1H， s)， 7.99(1H， s)， 7.39(1H， d， J ＝ 7.36Hz)， 7.32(1H， dd， J ＝ 9.31， 2.15Hz)， 7.28(1H， d， J ＝ 8.83Hz)， 7.12(1H， t， J ＝ 8.38Hz)， 6.63(1H， s)， 6.46(1H， d， J ＝ 7.33Hz)， 4.10-4.01(1H， m)， 3.93(1H， dd， J ＝ 11.43， 2.28Hz)， 3.70(1H， t， J ＝ 10.42Hz)， 1.14(3H， d， J ＝ 6.47Hz)。
实施例 13 ： 8-(4- 溴 -2- 氯 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟 基 - 乙氧基 )- 酰胺
步骤 1 ： 8-(4- 溴 -2- 氯 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯
将 8- 氯 - 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯 (300mg， 1.43mmol)、 4- 溴 -2- 氯苯胺 (354mg， 1.72mmol)、 Pd2dba3(65mg， 0.07mmol)、 2- 二环己基膦基 -2’ ， 6’ - 二异丙氧基联苯 (131mg， 0.28mmol) 和 K3PO4(424mg， 2.00mmol) 在甲苯 (5ml) 中的悬浮液脱气， 然后在 110℃ 加热 18 小时。然后将反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯稀释。用水和盐水洗涤所得的 混合物， 然后装载到 10gIsolute SCX-2 柱上， 依次用甲醇和氨在甲醇中的 2M 溶液洗脱该 柱。合并适当的级分并真空浓缩。对所得的残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 100％， 在 DCM 中的乙酸乙酯 ) 以得到标题化合物， 其为黄色油状物 (271mg， 50％ )。 LCMS( 方 + 法 B) ： RT ＝ 3.65min， [M+H] ＝ 381/383。
步骤 2 ： 8-(4- 溴 -2- 氯 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙烯基 氧基 - 乙氧基 )- 酰胺
向 8-(4- 溴 -2- 氯 - 苯 基 氨 基 )- 咪 唑 并 [1， 5-a] 吡 啶 -7- 羧 酸 甲 酯 (271mg， 0.71mmol) 在 IMS(10mL) 中的溶液添加 1.0M 氢氧化钠水溶液 (0.8mL， 0.8mmol)。将反应混 合物在 65℃加热 1 小时， 然后冷却至室温并真空浓缩。将所得的残留物用甲苯共沸， 然后 悬浮在 THF(10mL) 中。然后依次添加 O-(2- 乙烯基氧基 - 乙基 )- 羟胺 (89mg， 0.87mmol)、 N， N- 二 异 丙 基 乙 基 胺 (0.30mL， 1.73mmol)、 EDCI(166mg， 0.87mmol) 和 HOBt(117mg， 0.87mmol)， 并将反应混合物在室温搅拌 18 小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释并依 次用水、 饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。将分离的有机层干燥 (Na2SO4)， 过滤并真空浓缩 以得到标题化合物， 其为浅黄色固体 (210mg， 65％ )。LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 3.17min， [M+H]+ ＝ 451/453。
步骤 3 ： 8-(4- 溴 -2- 氯 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟基 - 乙 氧基 )- 酰胺将 8-(4- 溴 -2- 氯 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙烯基氧 基 - 乙氧基 )- 酰胺 (196mg， 0.43mmol) 溶解在甲醇中并装载到 Isolute SCX-2 柱 (10g) 上。然后用甲醇洗涤该柱， 随后使用在 MeOH 中的 2M NH3 洗脱希望的产物。合并适当的级分 并浓缩以得到残留物， 对残留物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 10％， 在二氯甲烷 中的甲醇 )。合并适当的级分并浓缩以得到残留物， 对该残留物实施 HPLC( 制备性 C18 柱， 0.1％甲酸， 在水中的乙腈， 梯度 5％至 98％， 斜坡时间 20 分钟 ) 以得到标题化合物， 其为浅 + 1 黄色固体 (43mg， 23％ )。 LCMS( 方法 A) ： RT ＝ 6.71min， [M+H] ＝ 425/427。HNMR(DMSO-d6) ： 11.68(1H， s)， 10.46(1H， s)， 8.35(1H， d， J ＝ 0.79Hz)， 7.95(1H， d， J ＝ 7.36Hz)， 7.78(1H， d， J ＝ 2.27Hz)， 7.42(1H， dd， J ＝ 8.62， 2.29Hz)， 7.01(1H， d， J ＝ 8.63Hz)， 6.79(1H， d， J ＝ 7.35Hz)， 6.56(1H， s)， 4.69(1H， s)， 3.87(2H， t， J ＝ 4.89Hz)， 3.57(2H， m)。
实施例 14 ： 8-(4- 环丁基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟 基 - 乙氧基 )- 酰胺
步骤 1 ： 4- 环丁基 -2- 氟 - 硝基苯将 三 氟 甲 磺 酸 3- 氟 -4- 硝 基 - 苯 酯 (1.8g， 6.2mmol)、 环 丁 基 硼 酸 (0.78g， 7.5mmol)、 Pd(dppf)Cl2(0.40g， 0.5mmol) 和 2M 碳酸铯水溶液 (aq)(5mL， 9.9mmol) 在甲苯 (10ml) 中的溶液用氩气脱气 10 分钟， 然后加热至 90℃并保持 2.5 小时。 然后将反应混合物 冷却至室温并通过 hyflo 过滤。 使反应混合物在乙酸乙酯 (70mL) 和水 (70mL) 之间分配。 将有机层分离， 然后用盐水 (50mL) 洗涤， 干燥 (MgSO4)， 过滤并真空浓缩。 对所得的固体进行 快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 30％， 在戊烷中的 DCM) 以得到标题化合物， 其为黄色液 1 体 (0.504g， 42％ )。 H NMR(DMSO-d6) ： 8.08(1H， t， J ＝ 8.3Hz)， 7.44(1H， d， J ＝ 13.2Hz)， 7.28(1H， d， J ＝ 8.5Hz)， 3.65(1H， m)， 2.33(2H， m)， 2.13(2H， m)， 1.99(1H， m)， 1.84(1H， m)。
步骤 2 ： 4- 环丁基 -2- 氟苯胺
将 4- 环丁基 -2- 氟 - 硝基苯 (0.5g， 2.6mmol) 在 IMS(5mL) 中的溶液用氩气脱气 2 分钟， 然后添加 10％ Pd/C(0.05g)， 并附加上氢气球。将所得的混合物在室温搅拌 18 小时， 然后用氮气冲洗并通过 hyflo 过滤。 将滤液真空浓缩以得到标题化合物， 其为橙色 / 红色 1 油状物 (0.31g， 74％ )。 H NMR(CDCl3) ： 6.84(1H， d， J ＝ 12.3Hz)， 6.77(1H， d， J ＝ 8.1Hz)， 6.70(1H， t， J ＝ 9.1Hz)， 3.58(2H， 宽峰 )， 3.42(1H， m)， 2.28(2H， m)， 2.01(3H， m)， 1.82(1H， m)。
步骤 3 ： 8-(4- 环丁基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯将 8- 氯 - 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯 (250mg， 1.2mmol)、 4- 环丁基 -2- 氟 苯胺 (230mg， 1.4mmol)、 Pd2dba3(43mg， 0.047mmol)、 2- 二环己基膦基 -2’ ， 6’ - 二甲氧基 -1， 1’ - 联苯 (80mg， 0.19mmol) 和 K3PO4(350mg， 1.7mmol) 在甲苯 (5ml) 中的悬浮液用氩气脱
气 10 分钟， 然后在 100℃加热 18 小时。然后将反应混合物冷却至室温并通过 hyflo 过 滤。真空浓缩滤液， 并对所得的胶状物进行快速色谱分离 (Si-PPC， 用在 DCM 中的 5％乙酸 1 乙酯洗脱 ) 以得到标题化合物， 其为黄色油状物 (150mg， 38％ )。 H NMR(CDCl3) ： 7.95(1H， s)， 7.73(1H， d， J ＝ 7.4Hz)， 7.23(1H， t， J ＝ 8.6Hz)， 7.07(1H， d， J ＝ 7.3Hz)， 7.01(2H， m)， 6.50(1H， s)， 3.90(3H， s)， 3.59(1H， m)， 2.39(2H， m)， 2.17(2H， m)， 2.06(1H， m)， 1.93(1H， m)。
步骤 4 ： 8-(4- 环丁基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸
将 8-(4- 环丁基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸甲酯 (150mg， 0.46mmol) 和 1M NaOH(1.5mL， 1.5mmol) 在 IMS(2mL) 中的悬浮液在 60℃加热 2 小时。 然后将 反应混合物冷却至室温， 用水稀释并添加冰乙酸， 以调节 pH 至 4。 将沉淀物过滤并在干燥枪 1 中于 40℃干燥 18 小时以提供标题化合物， 其为膏状固体 (154mg， 99％ )。 H NMR(DMSO-d6) ： 10.53(1H， s)， 8.34(1H， s)， 7.74(1H， d， J ＝ 7.3Hz)， 7.35(1H， t， J ＝ 8.3Hz)， 7.24(1H， d， J ＝ 11.2Hz)， 7.13(1H， d， J ＝ 8.1Hz)， 7.01(1H， d， J ＝ 9.3Hz)， 6.23(1H， s)， 3.61(1H， m)， 2.38(2H， m)， 2.14(2H， m)， 1.99(1H， m)， 1.84(1H， m)。
步骤 5 ： 8-(4- 环丁基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙 烯基氧基 - 乙氧基 )- 酰胺
将 8-(4- 环 丁 基 -2- 氟 - 苯 基 氨 基 )- 咪 唑 并 [1， 5-a] 吡 啶 -7- 羧 酸 (154mg， 0.46mmol)、 EDCI(105mg， 0.55mmol)、 HOBt(74mg， 0.55mmol)、 DIPEA(0.19mL， 1.14mmol) 和 O-(2- 乙烯基氧基 - 乙基 )- 羟胺 (52mg， 0.50mmol) 在 THF(2.5mL) 中的悬浮液在室温搅拌 18 小时。使反应混合物在 DCM(20mL) 和饱和 NaHCO3 水溶液之间分配。分离有机层， 然后依 次用水 (20mL) 和盐水 (20mL) 洗涤， 干燥 (MgSO4)， 过滤并真空浓缩。对所得的胶状物进行 快速色谱分离 (Si-PPC， 梯度 0％至 100％， 在环己烷中的乙酸乙酯 ) 以得到标题化合物， 其 + 为褐色胶状物 (149mg， 80％ )。LCMS( 方法 B) ： RT ＝ 3.49min， [M+H] ＝ 411。
步骤 6 ： 8-(4- 环丁基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 羟 基 - 乙氧基 )- 酰胺
将 8-(4- 环丁基 -2- 氟 - 苯基氨基 )- 咪唑并 [1， 5-a] 吡啶 -7- 羧酸 (2- 乙烯 基氧基 - 乙氧基 )- 酰胺 (149mg， 0.36mmol) 溶解在甲醇 (2mL) 中并用 1M HCl(1.5mL) 处 理。将反应混合物在室温搅拌 2 小时。真空除去溶剂， 并用制备性 HPLC(Gemini 5 微米 C18 250×21.20mm 柱， 0.1 ％甲酸， 梯度乙腈 / 水， 5 至 98 ％， 斜坡时间 20 分钟 ) 纯化残留物，
以得到标题化合物， 其为黄色固体 (16mg， 11％ )。LCMS( 方法 A) ： RT ＝ 7.40min， [M+H]+ ＝ 385。1HNMR(DMSO-d6) ： 11.59(1H， s)， 10.60(1H， s)， 8.32(1H， s)， 7.82(1H， d， J ＝ 7.7Hz)， 7.24(1H， d， J ＝ 8.5Hz)， 7.15(1H， d， J ＝ 11.2Hz)， 7.07(1H， d， J ＝ 8.11Hz)， 6.79(1H， d， J ＝ 7.3Hz)， 6.33(1H， s)， 4.73(1H， s)， 3.69(2H， t， J ＝ 4.8Hz)， 3.61(2H， t， J ＝ 5.0Hz)， 3.57(1H， d， J ＝ 8.8Hz)， 2.36(2H， m)， 2.12(2H， m)， 1.96(1H， m)， 1.83(1H， m)。55