油菜花粉发酵破壁新方法 技术领域
本发明涉及一种油菜花粉发酵破壁新方法。
背景技术
花粉(pollen)是植物雄性配子体，植物高度浓缩的“微型营养库”，其不仅含有人体生存所需的多种营养物质，而且含有多种生物活性物质，对肌体的各种生理功能具有奇妙的调节作用，可以增强体质、提高免疫力、延缓衰老、降低血压等，被誉为“完全营养品”。花粉是由花粉壁和内含物(或原生质，花粉主要营养物质)所组成，花粉壁可分为外壁与内壁，外壁主要由孢粉素和纤维素组成，内壁主要由纤维素和果胶组成；由于组成壁成分性质的独特性导致花粉细胞壁难于破损。这既影响了营养成分的吸收利用，也阻止了提取时营养物质的释放。据统计，我国目前花粉资源利用率仅是一般资源量的1/24，为最高资源量的1/240。因此花粉的破壁十分重要。许多研究都证明了破壁后花粉的营养效果较破壁前好的多。
迄今为止，有关油菜花粉破壁的工艺有过很多报道，目前常用的破壁方法多为物理法(如高压气流碰撞法、超声波法、冷冻加热法、膨化法等)，主要存在的问题有：
1)对设备和工作条件要求高，投入大，不宜推广和实施产业化；
2)破壁率低；
3)利用温差法时，由于温度的变化过大，导致花粉营养物质地极大破坏。
发明内容
本发明目的是提供一种油菜花粉发酵破壁新方法。
油菜花粉破壁的步骤如下：
1)培养基制备：
(1)豆用粉碎机碾碎，按1∶8-12的比例加水，在高压锅中蒸煮60-80min，用纱布过滤，或将黄豆包在纱布中蒸煮，提取黄豆汁，按黄豆∶蔗糖∶琼脂＝8-12∶2-4∶3-5的比例制备培养基；
(2)虎红培养基：按每1000ml蒸馏水中加入蛋白胨4-6g，葡萄糖8-12g，磷酸二氢钾1-2g，硫酸镁0.3-0.6g，琼脂18-22g，氯霉素0.1-0.2g的比例溶解后，再加入1/3000虎红水溶液80-120ml，分装后，高压灭菌；
(3)霉菌培养基：按每1000ml蒸馏水中加入蛋白胨4-6g，酵母浸出液1-3g，磷酸氢二钾0.5-1.5g，硫酸镁0.3-0.6g，琼脂18-20g，氯霉素0.1-0.2g的比例溶解(微温)，调pH为6.5-7.0，煮沸，加18-20g葡萄糖，溶解后，过滤调pH为6.0±0.5，使灭菌后pH为6.4±0.2，高压灭菌；
(4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基：将马铃薯去皮切块，加蒸馏水，煮沸10-20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000ml，加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，高压灭菌；
2)灭菌、接种：将刚制备的培养基趁热分装于培养皿中(10-15ml)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌15-20min，冷却至室温，在超净工作台上接种试管菌种，置28-30℃的恒温培养箱中培养；
3)曲子制备：采用麦麸培养基，每100g原料加水40-45g，搅拌均匀后，分装于的三角瓶(每瓶30-40g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌10-20min，冷却至室温，在超净工作台将培养皿中30-40％的菌种接入三角瓶，在28-30℃的恒温培养箱中发酵；
4)酶液制备：将已发酵完全的曲子方入适量的温水，约为原料的70-100％，浸泡3-4小时，然后用外力积压曲子，收集发酵液，得酶液；
5)发酵酶液：将油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎过筛，得均匀花粉粒，用无水酒精喷洒灭菌，放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝1-3∶1)按9-12∶14-16的比例多次混合均匀，置培养皿中于恒温培养箱中37±0.5℃发酵11-14小时，pH为4-5，即可得破壁花粉。
本发明的优点是：
1)需要的设备简单，成本低，易实现产业化；
2)生产工艺简捷、易操作；
3)破壁率高，达98％以上，对营养成分破坏较小；
4)能够改良花粉的脱敏、脱苦、脱涩等。
具体实施方式实施例1花粉发酵破壁方法步骤如下：
1、养基制备：
1)黄豆用粉碎机碾碎，按1∶10的比例加水，在高压锅中蒸煮65min，用纱布过滤，提取黄豆汁，按10mg黄豆，3mg蔗糖，4mg琼脂的比例制备培养基，pH自然状态。
2)虎红(孟加拉红)培养基：将蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g，琼脂20g，1/3000虎红水溶液100ml，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液，分装后，高压灭菌(121℃，20min)。
3)霉菌培养基：将蛋白胨5g，酵母浸出液2g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g，琼脂20g，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解，调pH为6.8，煮沸，加20g葡萄糖，溶解后，过滤调pH为6.6，使灭菌后pH为6.5，高压灭菌(115℃，20min)。
4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：将马铃薯去皮切块，加蒸馏水，煮沸20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000ml，加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，高压灭菌(121℃，20min)。
2、灭菌、接种：将刚制备的培养基趁热分装于Φ9cm的培养皿中，每个培养皿中10ml，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌15min，冷却至室温，在超净工作台上接种试管菌种，置29℃的恒温培养箱中培养48小时。
3、曲子制备：采用麦麸培养基，每100g原料加水40g，搅拌均匀后，分装于250ml的三角瓶(每瓶35g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌15min，冷却至室温，在超净工作台将培养皿中35％的菌种接入三角瓶，在30℃的恒温培养箱中发酵36小时。
4、酶液制备：将已发酵完全的曲子方入适量的温水，约为原料的90％，浸泡3小时，然后用手积压曲子，收集发酵液，得酶液。
5、发酵酶液：将油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎过筛，得均匀花粉粒，用无水酒精喷洒灭菌，放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝2∶1)按10∶15的比例多次混合均匀，置培养皿中于恒温培养箱中37℃发酵12小时，pH为4.5，即可得破壁花粉。
6、破壁效果：破壁率为100％。实施例2
1、培养基制备：
1)黄豆用粉碎机碾碎，按1∶12的比例加水，将黄豆包在纱布中，在高压锅中蒸煮80min，提取黄豆汁，按12mg黄豆，4mg蔗糖，5mg琼脂的比例制备培养基，pH自然状态。
2)虎红(孟加拉红)培养基：将蛋白胨6g，葡萄糖12g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.6g，琼脂22g，氯霉素0.2g，加入1000ml蒸馏水中溶解后，再加1/3000虎红水溶液120ml，分装后，高压灭菌(121℃，30min)。
3)霉菌培养基：将蛋白胨6g，酵母浸出液3g，磷酸氢二钾1.5g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.6g，琼脂20g，氯霉素0.2g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解，调pH为6.8，煮沸，加20g葡萄糖，溶解后，过滤调pH为6.8，使灭菌后pH为6.4，高压灭菌(115℃，30min)。
4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：将马铃薯去皮切块，加蒸馏水，煮沸20min。用纱布过滤，用蒸馏水定容至1000ml，加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，高压灭菌(121℃，30min)。
2、灭菌、接种：将刚制备的培养基趁热分装于Φ9cm的培养皿中，每个培养皿加入15ml，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌30min，冷却至室温，在超净工作台上接种试管菌种，置30℃的恒温培养箱中培养48小时。
3、曲子制备：采用麦麸培养基，每100g原料加水45g，搅拌均匀后，分装于250ml的三角瓶(每瓶40g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌20min，冷却至室温，在超净工作台将培养皿中40％的菌种接入三角瓶，在30℃的恒温培养箱中发酵36小时。
4、酶液制备：将已发酵完全的曲子放入适量的温水，约为原料的100％，浸泡4小时，然后用手积压曲子，收集发酵液，得酶液。
5、发酵酶液：将油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎过筛，得均匀花粉粒，用无水酒精喷洒灭菌，放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝3∶1)按11∶16的比例多次混合均匀，置培养皿中于恒温培养箱中37℃发酵14小时，pH为5.0，即可得破壁花粉。
6、破壁效果：破壁率为99.1％实施例3
1)培养基制备：
(1)黄豆用粉碎机碾碎，按1∶8的比例加水，将黄豆包在纱布中，在高压锅中蒸煮80min，提取黄豆汁，按8mg黄豆，2mg蔗糖，4mg琼脂的比例制备培养基，pH自然状态；
(2)虎红(孟加拉红)培养基：将蛋白胨4g，葡萄糖8g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.3g，琼脂18g，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸馏水中溶解后，再加入1/3000虎红水溶液80ml，分装后，高压灭菌(121℃，20min)；
(3)霉菌培养基：将蛋白胨4g，酵母浸出液1g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.6g，琼脂18g，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解，调pH为6.5，煮沸，加18g葡萄糖，溶解后，过滤调pH为6.0，高压灭菌(115℃，30min)；
(4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：将马铃薯去皮切块，加蒸馏水，煮沸10min。用纱布过滤，用蒸馏水定容至1000ml，加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，高压灭菌(121℃，20min)；
2)灭菌、接种：将刚制备的培养基趁热分装于Φ9cm的培养皿中，每个培养皿加入15ml，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌20min，冷却至室温，在超净工作台上接种试管菌种，置30℃的恒温培养箱中培养48小时；
3)曲子制备：采用麦麸培养基，每100g原料加水40g，搅拌均匀后，分装于250ml的三角瓶(每瓶30g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌10min，冷却至室温，在超净工作台将培养皿中40％的菌种接入三角瓶，在30℃的恒温培养箱中发酵36小时；
4)液制备：将已发酵完全的曲子放入适量的温水，约为原料的80％，浸泡4小时，然后用手积压曲子，收集发酵液，得酶液；
5)酵酶液：将油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎过筛，得均匀花粉粒，用无水酒精喷洒灭菌，放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用，将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝2∶1)按10∶15的比例多次混合均匀，置培养皿中于恒温培养箱中37℃发酵12小时，pH为4.5，即可得破壁花粉。
6、破壁效果：破壁率为98.5％。