一种注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂的制备方法.pdf

本发明涉及一种注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：称取促肝细胞生长素溶液10000体积分数，无菌条件下搅拌均匀；向溶液中加入骨架剂，调pH值范围为6.0～7.0，定容；除菌过滤2～3次，收集滤液；灌装，冻干，其中，所述冻干的时间依次为-40℃为5小时，-40℃～-15℃为6小时，-15℃～-5℃为3小时，-5℃～5℃为2小时，5℃～40℃为4小时，40℃为8.5小时，冻干总用时28.5小时。

权利要求书
1、  一种注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂的制备方法，其特征在于该制备方法包括以下步骤：
①称取促肝细胞生长素溶液10000体积分数，无菌条件下搅拌均匀；
②向溶液中加入骨架剂，调pH值范围为6.0～7.0，定容；
③除菌过滤2～3次，收集滤液；
④灌装，冻干；
其中，所述冻干的时间依次为-40℃为5小时，-40℃～-15℃为6小时，-15℃～-5℃为3小时，-5℃～5℃为2小时，5℃～40℃为4小时，40℃为8.5小时，冻干总用时28.5小时。

2、  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述骨架剂为甘露醇。

3、  如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述甘露醇用量为60mg～100mg/mL定容后促肝细胞生长素溶液。

4、  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述促肝细胞生长素溶液由促肝细胞生长素原液稀释而成，所述促肝细胞生长素原液的用量为5mg～15mg/mL定容后促肝细胞生长素溶液。

5、  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述除菌过滤包括至少一次0.45μm除菌过滤和至少一次0.22μm除菌过滤。

说明书一种注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂的制备方法
技术领域
本发明涉及一种生物药品的制备方法，尤其涉及一种注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂的制备方法。
背景技术
多年来，研究人员一直在研究能阻止肝细胞坏死和能促进肝细胞再生的物质，并且该领域的研究集中在肝脏本身所产生的肝再生刺激因子的上，其中促肝细胞生长素已被证明具有激肝细胞再生的作用。
促肝细胞生长素是从新鲜乳猪肝脏或未哺乳新生牛肝脏中提取的多组分小分子肽类混合物，分子量在10,000Da以下。其主要药理作用是能明显刺激新生肝细胞的DNA合成，改善肝脏枯否细胞的吞噬功能，对四氯化碳诱导的肝细胞损伤有较好的保护作用，对D-氨基半乳糖诱致的肝衰竭有明显的提高存活率的作用。临床用于各种重型病毒性肝炎，如急性、亚急性、慢性重症肝炎的早期或中期的辅助治疗。
促肝细胞生长素自上市以来，己广泛使用多年，临床疗效确切。促肝细胞生长素系采用匀浆、变性、离心、分级超滤等现代生物技术手段提取纯化制备而成。提取纯化后的母液经过稀释和加入适当的辅助成分后被制备成水针剂等各种剂型，用于临床治疗。
目前，现有的促肝细胞生长素的注射剂多采用水针剂，而在实际应用中，促肝细胞生长素在产品的储存、运输及销售各个环节都要求环境保存温度在一定范围内，而对于水针剂还需要保证在此温度范围内不发生冻结，以避免对药物有效成分的破坏。因此促肝细胞生长素注射液水针剂型在运输和销售时需要的温控条件非常严格，从而使这一环节变得复杂，并且增加了成本。此外，促肝细胞生长素的水溶液在保存和使用过程中对光敏感，从而使产品质量不稳定。
为改善上述情况，现有技术将上述促肝细胞生长素注射液的水针剂型转变为粉针剂，从而提高了促肝细胞生长素的稳定性。但这些现有技术中的促肝细胞生长素注射液粉针剂的制备方法存在生产周期长，产量低、操作工艺复杂、技术含量要求高等问题。
发明内容
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题在于，克服现有技术中存在的不足，提供一种产品质量稳定可控并且操作工艺简单的注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂的制备方法。
本发明的制备方法包括：①称取促肝细胞生长素溶液10000体积分数，无菌条件下搅拌均匀；②向溶液中加入骨架剂，调pH值范围为6.0～7.0，定容；③除菌过滤2～3次，收集滤液；④灌装，冻干；即得到促肝细胞生长素冻干粉针剂的制备方法，其中，所述冻干的时间依次为-40℃为5小时，-40℃～-15℃为6小时，-15℃～-5℃为3小时，-5℃～5℃为2小时，5℃～40℃为4小时，40℃为8.5小时，冻干总用时28.5小时。
由于本发明将预冻温度控制在促肝细胞生长素溶液共熔点以下10℃～20℃，保持5小时，使药品冻实后再升温，并且由于本发明中升华干燥时的供热量控制得较好，适当放慢了升温速度，控制温度不超过共熔点，因而更好的防止了喷瓶。此外，如果干燥时间过长，也会造成产品外观不合格，因此本发明冻干总用时28.5小时，所得产品质地疏松，加水后迅速溶解，很快恢复药液的原有特性。如果在开始冻结时降温速度快，使制品形成细结晶，密度大，升华受到阻力较大，水分不易蒸发掉，制品会逐渐潮解致使体积收缩而造成外形不饱满或形成团状。如果冻结速度过慢，冰晶成长时间较长，则易发生浓缩，致使药物与溶剂分离、成品结构不均匀。本发明经反复多次试验，制定了本品的最佳冻干曲线，所制得的产品具有足够的强度，不破碎成粉，外形饱满、不萎缩，色泽均匀，含水量低，多孔性好，加水后能迅速复溶。因此，本发明所涉及的制备方法所制得的产品剂量准确，外观优良。
本发明所涉及的注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂的制备方法中，在冻干时要加入骨架剂，该骨架剂优选为甘露醇。甘露醇的用量为甘露醇用量为60mg～100mg/mL定容后促肝细胞生长素溶液。通过加入上述骨架剂甘露醇，可进一步提高采用本发明所涉及的制备方法制得的冻干产品的外观形状和疏松度，并且使产品的表面更加平整。
优选地，所述促肝细胞生长素溶液由促肝细胞生长素原液稀释而成，所述促肝细胞生长素原液的用量为5mg～15mg/mL定容后促肝细胞生长素溶液。
所述除菌过滤包括至少一次0.45μm除菌过滤和至少一次0.22μm除菌过滤。优选为，先后经过一次0.45μm除菌过滤和一次0.22μm除菌过滤，经过两次除菌过滤过率，按照本发明方法制备的冻干粉针剂符合100级的注射药物标准。
因此本发明所涉及的注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂的制备方法，其操作工艺简单、技术含量要求不高、生产周期相对较短，并且所制得的产品质量稳定可控，有利于长期贮存。
附图说明
图1本发明实施例的注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂的冻干曲线。
具体实施方式
以下对本发明的实施例进行进一步详细的说明，但本发明并非仅限于本实施例。
实施例
1.处方：
处方1：
促肝细胞生长素原液            200g
甘露醇                        2400g
注射用水               加至   40000mL
                                        
                       制成   10000瓶
处方2：
促肝细胞生长素原液            400g
甘露醇                        3200g
注射用水               加至   40000mL
                                            
                       制成   10000瓶
处方1：
促肝细胞生长素原液            600g
甘露醇                        4000g
注射用水               加至   40000mL
                                          
                       制成   10000瓶
2.制备方法：
以处方2为例，称取促肝细胞生长素原液400g，解冻成液体，用75％的酒精擦外包装，紫外线消毒，无菌条件下解包合并，搅拌均匀，再向原液中加入3200g的骨架剂甘露醇溶解稀释，将稀释液在无菌条件下调pH值6.0～7.0之间，而后定容至40000mL，0.45μm过滤，收集滤液，无菌条件下再将滤液0.22μm除菌过滤，然后将滤液以4ml/支半加胶塞灌装，进行冻干，从而得到成品促肝细胞生长素冻干粉针剂，其中，冻干的时间依次为预冻-40℃为5小时，-40℃～-15℃为6小时，-15℃～-5℃为3小时，-5℃～5℃为2小时，5℃～40℃为4小时，40℃为8.5小时，冻干总用时28.5小时。
本发明所涉及的骨架剂甘露醇的用量并非仅限于本实施例的320mg/瓶，也可以是240～400mg/瓶之间的任意值，但优选的是320mg/瓶。
上述是以处方2为例，说明本发明的制备方法，对于其他处方的药物，制备方法完全一致，只需要更加处方调整药物中各组分的用量。
[pH值对本品的影响]
由于促肝细胞生长素注射液(预冻液)的pH范围为6.0～7.0，并且本发明涉及的注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂的制备方法中只加入了中性的骨架剂甘露醇，因此对注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂溶液的pH几乎没有影响，故本发明注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂pH范围也设定为6.0～7.0。
[甘露醇用量的考察]
由于本品为冻干制剂，为了使药品冻干后形成很好的外观形状和疏松度，故在冻干时应加入一定量的骨架剂。本发明选用甘露醇作为骨架剂，并对不同的甘露醇用量进行了试验，以按处方2制备的粉针剂为例，其试验结果如表1所示。
表1  甘露醇用量试验结果
  用量(mg/瓶)  外观性状  疏松度  0  乳白色块状物  块状物极少，疏松度极差  80  乳白色块状物  块状物较少，疏松度差  160  乳白色块状物  块状物较少，疏松度一般  240  乳白色块状物  块状物少，疏松度较好  320  乳白色块状物  块状物适中，疏松度较好
  400  乳白色块状物  块状物较多，疏松度一般
试验结果表明，甘露醇用量在320mg/瓶时外观性状和疏松度最佳。考虑到生产成本和方便性，本发明的处方工艺中甘露醇的用量优选为320mg/瓶。对应地，按照同样的实验方法，处方1中甘露醇的用量优选为240mg/瓶；处方3中甘露醇的用量优选为400mg/瓶。
[冻干曲线]
经反复多次试验，制定了本发明涉及产品的最佳冻干时间(如图1所示)：
冻干的时间依次为-40℃为5小时，-40℃～-15℃为6小时，-15℃～-5℃为3小时，-5℃～5℃为2小时，5℃～40℃为4小时，40℃为8.5小时，冻干总用时28.5小时。
按处方和工艺配制药液，冻干，样品外观为浅黄色疏松块状物，表面平整，相应地，按照处方1和处方3生产的粉针剂也是按照上述冻干曲线实现冻干。
[样品质量检验]
按以上处方2和工艺对本品进行了三批小试生产(每批配制500瓶)，三批样品质量均合格，检验结果见表2。
表2  样品的检验结果
  样品批号  1  2  3  性状  乳白色疏松块状  物  乳白色疏松块状  物  乳白色疏松块状  物  鉴别  呈正反应  呈正反应  呈正反应  酸度  6.7  6.8  6.7  水分(％)  1.2  1.2  1.2  装量差异  符合规定  符合规定  符合规定
  澄明度  符合规定  符合规定  符合规定  内毒素  符合规定  符合规定  符合规定  无菌  符合规定  符合规定  符合规定  多肽含量/(与标  示量的百分比)  95.5  96.8  97.1
其中，多肽含量的测定按照药典采用福林酚法测定，含多肽应为标示量的90.0～115.0％。
由此可见，三批产品的质量均符合中国药典规定(以下简称符合规定)，说明本品的处方和工艺是可行的。
相应地，按照处方1和处方3制备粉针剂，也可以在本试验中得出类似的试验结果，可见，三种处方产品的质量均符合中国药典规定(以下简称符合规定)，说明本品的处方和工艺是可行的。
[影响因素试验]
取供试样品1批，进行影响因素试验，分别于光照(4500Lx)、高温(60℃)、高湿(RH92.5％)条件下放置10天，并分别于5天、10天取样考察各项检测指标，并与0天的检测结果比较，检查外观色泽、酸度、水分、溶液的澄明度、蛋白质、其它物质、测定含量，结果见表3。
表3  影响因素试验结果


上述试验结果表明，本品在光照(4500Lx)、高温(60℃)、高湿(RH92.5％)条件下均较稳定。本结果说明了本品工艺的可行性。
另外，对于其他批次及按照其他处方制备的产品，进行上述试验均可得到类似的试验结果。
[原料、辅料来源和质量标准]
促肝细胞生长素原液是新鲜乳猪肝脏或未哺乳新生牛肝脏中提取的多组分小分子肽类混合物，由广东省药物研究所制药厂生化原料车间生产，并大量用于生产促肝细胞生长素注射液。本发明所涉及的注射用促肝细胞生长素冻干粉针剂是依据广东省药物研究所制药厂生产的促肝细胞生长素注射液的质量标准和生产工艺等作为参考而研制的。但是本发明所涉及的原料及溶液并非仅限于由广东省药物研究所制药厂生产，也可以是由其它制药厂生产的原料及溶液。


最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。