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1、(10)申请公布号 CN 104255507 A (43)申请公布日 2015.01.07 CN 104255507 A (21)申请号 201410540436.X (22)申请日 2014.10.14 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 南京帝道农业科技有限公司 地址 211225 江苏省南京市溧水区白马镇工 业集中区 (72)发明人 刘东锋 杨成东 (54) 发明名称 一种山香圆再生植株的快速繁殖方法 (57) 摘要 本发明研究了一种山香圆再生植株的快速繁 殖方法， 包括山香圆叶片的消毒、 愈伤组织的诱 导、 愈伤组织的分化、 生根诱导、 炼苗移栽等步骤， 本发明方法建。
2、立了山香圆的植株再生体系， 生长 周期短， 遗传稳定性好， 可以短期内提供大量的山 香圆幼苗。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 (10)申请公布号 CN 104255507 A CN 104255507 A 1/1 页 2 1. 一种山香圆再生植株的快速繁殖方法， 包括山香圆叶片的消毒、 愈伤组织的诱导、 愈伤组织的分化、 生根诱导、 炼苗移栽， 其主要步骤如下 ： （1） 取山香圆幼嫩的叶片， 进行消毒处理 ； （2） 取步骤 （1） 消毒处理过的山香圆叶片接入培养基 MSB+。
3、1.0mg/L6-BA+0.02mg/LNAA 中进行愈伤组织的诱导， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 7g/L， 温度 24， 暗光照， pH5.8 ； （3） 取步骤 （2）诱导出来的愈伤组织放入培养基 MSB+1.0-1.2mg/L6-BA+0.8-1.0mg/ LKT+ 硫酸腺嘌呤 10-20mg/L 进行愈伤组织的分化， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 7g/L， 温度 24， 光照强度 2500lx， 每天光照时间 10h， pH5.8 ； （4） 取步骤 （3） 分化培养出来的不定芽， 放入 MS 培养基中生根诱导， 生根后的试管苗进 行炼苗移栽。 2. 按照权利要求 1 所述的一种。
4、山香圆再生植株的快速繁殖方法， 其特征在于 ： 步骤 （1） 中所述山香圆叶片的消毒方法为选取山香圆幼嫩的叶片， 流水冲洗干净， 用 1% 次氯酸 钠中浸泡 8min， 浸入 70% 酒精 1min， 无菌水冲洗 5 遍至无残留。 3. 按照权利要求 1 所述的一种山香圆再生植株的快速繁殖方法， 其特征在于 ： 步骤 （4） 中山香圆的炼苗方法为已生根的幼苗， 洗去琼脂， 移栽到装有蛭石 ： 泥炭土 =1 ： 1 的育苗 箱内， 覆盖塑料薄膜， 一周后揭膜， 在玻璃温室中生长。 权 利 要 求 书 CN 104255507 A 2 1/2 页 3 一种山香圆再生植株的快速繁殖方法 技术领域 0。
5、001 本发明涉及山香圆组织培养的快繁方法， 属于植物栽培技术领域。 背景技术 0002 山香圆， 小乔木，Turpiniaarguta （Lindl.） Seem.省沽油科， 枝灰白绿色。叶对生， 两面无毛， 圆锥花序顶生， 花较多， 疏松， 花小， 果球形， 皮薄， 紫红色， 喜凉爽湿润的小气候， 苗期稍能耐阴， 成年树喜阳光， 稍耐寒， 在排水良好， 深厚肥沃的土壤。中国南部和西南部。 中南半岛、 印度尼西亚的爪哇和苏门答腊也有。叶含 2,3- 二羟基乌苏 -12- 烯 -28- 羧 酸即2-羟基熊果酸， 2,3,19-三羟基乌苏-12-烯-28-羧酸即2,19-二羟基熊 果酸， - 香。
6、树脂醇， 熊果酸， 19- 羟基熊果酸， 肉豆蔻酸， 胡萝卜甙， 2- 过氧基熊果酸， 药用部分为山香圆的叶。夏、 秋二季叶茂盛时采收， 除去杂质， 晒干。性味苦， 寒。归肺、 肝 经。功能 ： 清热解毒， 利咽消肿， 活血止痛。用于乳蛾喉痹， 咽喉肿痛， 疮疡肿毒， 跌扑伤痛， 用种子繁殖。 发明内容 0003 本发明所要解决的技术问题是提供一种山香圆的快速繁殖方法， 该方法建立了山 香圆的植株再生体系， 生长周期短， 遗传稳定性好， 可以短期内提供大量的山香圆幼苗。 0004 本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的 ： 取山香圆幼嫩的叶片， 流水冲洗干净， 用 1% 次氯酸钠中浸泡。
7、 8min， 浸入 70% 酒 精 1min， 无菌水冲洗 5 遍至无残留， 消毒处理过的山香圆叶片接入培养基 MSB+1.0mg/ L6-BA+0.02mg/LNAA 中进行愈伤组织的诱导， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 7g/L， 温度 24， 暗光 照， PH5.8， 诱导出来的愈伤组织放入培养基 MSB+1.0-1.2mg/L6-BA+0.8-1.0mg/LKT+ 硫酸 腺嘌呤 10-20mg/L 进行愈伤组织的分化， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 7g/L， 温度 24， 光照强度 2500lx， 每天光照时间 10h， PH5.8， 分化培养出来的不定芽， 放入 MS 培养基中生根。
8、诱导， 生 根后的试管苗洗去琼脂， 移栽到装有蛭石 ： 泥炭土 =1 ： 1 的育苗箱内， 覆盖塑料薄膜， 一周后 揭膜， 在玻璃温室中生长， 一个月后统计成活率。 0005 采用本发明制备的山香圆成活率高， 周期短， 产量大， 污染小， 利于大规模种植。 0006 下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述， 但本发明要求保护的范围并不 局限于下列实施方式。 具体实施方式 0007 实施例 1 取山香圆幼嫩的叶片， 流水冲洗干净， 用 1% 次氯酸钠中浸泡 8min， 浸入 70% 酒 精 1min， 无菌水冲洗 5 遍至无残留， 消毒处理过的山香圆叶片接入培养基 MSB+1.0mg/ L6。
9、-BA+0.02mg/LNAA 中进行愈伤组织的诱导， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 7g/L， 温度 24， 暗光 照， PH5.8， 诱导出来的愈伤组织放入培养基 MSB+1.0mg/L6-BA+0.8mg/LKT+ 硫酸腺嘌呤 说 明 书 CN 104255507 A 3 2/2 页 4 10mg/L进行愈伤组织的分化， 附加蔗糖30g/L， 琼脂7g/L， 温度24， 光照强度2500lx， 每天 光照时间 10h， pH5.8， 分化培养出来的不定芽， 放入 MS 培养基中生根诱导， 生根后的试管苗 洗去琼脂， 移栽到装有蛭石 ： 泥炭土 =1 ： 1 的育苗箱内， 覆盖塑料薄膜， 。
10、一周后揭膜， 在玻璃 温室中生长， 一个月后统计成活率， 成活率 88%。 0008 实施例 2 取山香圆幼嫩的叶片， 流水冲洗干净， 用 1% 次氯酸钠中浸泡 8min， 浸入 70% 酒 精 1min， 无菌水冲洗 5 遍至无残留， 消毒处理过的山香圆叶片接入培养基 MSB+1.0mg/ L6-BA+0.02mg/LNAA 中进行愈伤组织的诱导， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 7g/L， 温度 24， 暗光 照， PH5.8， 诱导出来的愈伤组织放入培养基 MSB+1.2mg/L6-BA+1.0mg/LKT+ 硫酸腺嘌呤 20mg/L进行愈伤组织的分化， 附加蔗糖30g/L， 琼脂7g/L。
11、， 温度24， 光照强度2500lx， 每天 光照时间 10h， pH5.8， 分化培养出来的不定芽， 放入 MS 培养基中生根诱导， 生根后的试管苗 洗去琼脂， 移栽到装有蛭石 ： 泥炭土 =1 ： 1 的育苗箱内， 覆盖塑料薄膜， 一周后揭膜， 在玻璃 温室中生长， 一个月后统计成活率， 成活率 89%。 0009 实施例 3 取山香圆幼嫩的叶片， 流水冲洗干净， 用 1% 次氯酸钠中浸泡 8min， 浸入 70% 酒 精 1min， 无菌水冲洗 5 遍至无残留， 消毒处理过的山香圆叶片接入培养基 MSB+1.0mg/ L6-BA+0.02mg/LNAA 中进行愈伤组织的诱导， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 7g/L， 温度 24， 暗光 照， PH5.8， 诱导出来的愈伤组织放入培养基 MSB+1.2mg/L6-BA+0.8mg/LKT+ 硫酸腺嘌呤 20mg/L进行愈伤组织的分化， 附加蔗糖30g/L， 琼脂7g/L， 温度24， 光照强度2500lx， 每天 光照时间 10h， pH5.8， 分化培养出来的不定芽， 放入 MS 培养基中生根诱导， 生根后的试管苗 洗去琼脂， 移栽到装有蛭石 ： 泥炭土 =1 ： 1 的育苗箱内， 覆盖塑料薄膜， 一周后揭膜， 在玻璃 温室中生长， 一个月后统计成活率， 成活率 90%。 说 明 书 CN 104255507 A 4 。