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1、(10)申请公布号 CN 104352850 A (43)申请公布日 2015.02.18 CN 104352850 A (21)申请号 201410585553.8 (22)申请日 2014.10.28 A61K 36/899(2006.01) A61P 25/22(2006.01) (71)申请人 广西中医药大学 地址 530200 广西壮族自治区南宁市五合大 道 13 号 (72)发明人 银胜高 辛宁 郭敏 辛华 周江煜 龚名师 王柳萍 (74)专利代理机构 广西南宁明智专利商标代理 有限责任公司 45106 代理人 黎明天 (54) 发明名称 竹茹提取物的提取方法 (57) 摘要 本发。
2、明涉及医药技术领域， 特别涉及竹茹提 取物的提取方法。该提取方法获得的竹茹提取物 可以用于制备抗焦虑药物。本发明提供的竹茹提 取物能够有效治疗焦虑症。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 104352850 A CN 104352850 A 1/1 页 2 1. 一种竹茹提取物的提取方法， 其特征在于， 包括如下步骤 ： 步骤 1 ： 取竹茹加水提取， 过滤后收集滤液， 经第一浓缩至相对密度为 1.12 1.15， 获 得第一浸膏 ； 步骤 2 ： 取所述第。
3、一浸膏与氯仿和正丁醇的混合溶液经 Sevage 法脱蛋白， 收集水层， 经第二浓缩至相对密度为 1.20 1.23， 获得第二浸膏 ； 步骤 3 ： 取所述第二浸膏加入浓度为 80 95的乙醇醇沉 20 24h， 离心后收集沉 渣， 加入水搅拌溶解， 经第三浓缩至相对密度为 1.12 1.18， 获得第三浸膏， 过滤后收集滤 液， 即得 ； 以 g/mL 计， 所述第二浸膏与乙醇的质量体积比为 1 ： 1 4， 所述沉渣与水的质量 体积比为 1 3 7。 2. 根据权利要求1 所述的提取方法， 其特征在于步骤1中， 以g/mL 计， 所述竹茹与 水的质量体积比为 1 10 20。 3. 根据权。
4、利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于所述第一浓缩、 第二浓缩或第三浓 缩为在 70 80， 真空度为 0.04 0.06MPa 的条件下浓缩。 4. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于所述混合溶液中氯仿和正丁醇的 体积比为 5 1。 5. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于步骤 2 中所述第一浸膏与所述混 合溶液的体积比为 1 1。 6. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于， 步骤 2 中所述收集水层后、 所述第 二浓缩前还包括经 300 目滤布过滤的步骤。 7. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于步骤 3 中所述离心为在 3000rpm 的。
5、条件下离心 30min。 8. 根据权利要求 1 至 7 任一项提供的提取方法获得的竹茹提取物。 9. 根据权利要求 1 所述的竹茹提取物在制备抗焦虑药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 104352850 A 2 1/3 页 3 竹茹提取物的提取方法 技术领域 0001 本发明属于医药技术领域， 具体涉及一种竹茹提取物的提取方法。 背景技术 0002 焦虑症 （Anxiety） 是一种以焦虑情绪为主的神经症， 主要表现为发作性或持续性 焦虑、 紧张、 惊恐不安等， 伴有一系列躯体症状和病理变化， 发病机制复杂， 主要涉及神经递 质 - 受体、 神经调质 - 受体、 神经内分泌网络的精细调。
6、节。 0003 竹茹为禾本科植物青秆竹Bambusa tuldoides Munro、 大头典竹Sinocalamus beecheyanus (Munro) McClure varpubescens PFLi 或淡竹Phyllostachys nigra (Lodd.) Munro varhenonis (Mitf.) Stapf ex Rendle 的茎秆的干燥中间层。竹茹临 床运用历史悠久， 始载于 金匮要略 ， 名为 “竹皮” ， 其味甘， 性微寒， 归肺、 胃经， 具有清热 化痰， 除烦止呕的功能， 主要含有木栓酮、 羽扇豆烯酮及其同系物为主的五环三萜类化合物 等， 具有抗自由基、 。
7、抗氧化、 抗疲劳、 抗肿瘤、 降血压等生理和药理活性， 主要用于治疗烦热 呕吐、 呃逆、 痰热咳喘、 恶阻、 胎动、 惊痫等。但用竹茹或竹茹提取物制备抗焦虑药物尚未见 报道。 发明内容 0004 本发明的目的是提供一种竹茹提取物的提取方法。 该提取方法获得的竹茹提取物 可以用于制备抗焦虑药物。 0005 为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技术方案 ： 本发明提供了一种竹茹提取物的提取方法， 包括如下步骤 ： 步骤 1 ： 取竹茹加水提取， 过滤后收集滤液， 经第一浓缩至相对密度为 1.12 1.15， 获 得第一浸膏 ； 步骤 2 ： 取所述第一浸膏与氯仿和正丁醇的混合溶液经 Sevage。
8、 法脱蛋白， 收集水层， 经第二浓缩至相对密度为 1.20 1.23， 获得第二浸膏 ； 步骤 3 ： 取所述第二浸膏加入浓度为 80 95的乙醇醇沉 20 24h， 离心后收集沉 渣， 加入水搅拌溶解， 经第三浓缩至相对密度为 1.12 1.18， 获得第三浸膏， 过滤后收集滤 液， 即得 ； 以 g/mL 计， 所述第二浸膏与乙醇的质量体积比为 1:1 4， 所述沉渣与水的质量 体积比为 1 3 7。 0006 Sevage 法 ： 利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点， 将提取液与 Sevage 试剂 氯仿正丁醇 5 1(V/V) 按照体积比为 1 1 混合， 振荡， 离心， 变性。
9、后的蛋白 质介于提取液与 Sevage 试剂交界处。此法的优点是条件温和， 不会引起多糖的变性。 0007 本发明中， 所述竹茹为禾本科植物青秆竹Bambusa tuldoides Munro、 大头典 竹Sinocalamus beecheyanus (Munro) McClure varpubescens PFLi 或 淡 竹 Phyllostachys nigra (Lodd.) Munro varhenonis(Mitf.) Stapf ex Rendle 的茎秆的 干燥中间层。 说 明 书 CN 104352850 A 3 2/3 页 4 0008 本发明步骤 1 中， 以 g/mL。
10、 计， 所述竹茹与水的质量体积比为 1 10 20。 0009 所述第一浓缩、 第二浓缩或第三浓缩为在 70 80， 真空度为 0.04 0.06MPa 的条件下浓缩。 0010 所述混合溶液中氯仿和正丁醇的体积比为 5 1。 0011 本发明步骤 2 中所述第一浸膏与所述混合溶液的体积比为 1 1。 0012 步骤 2 中所述收集水层后、 所述第二浓缩前还包括经 300 目滤布过滤的步骤。 0013 本发明步骤 3 中所述离心为在 3000rpm 的条件下离心 30min。 0014 本发明还提供了上述提取方法获得的竹茹提取物。 0015 本发明还提供了上述提取方法获得的竹茹提取物在制备抗焦。
11、虑药物中的应用。 0016 本发明提供了一种竹茹提取物的提取方法。 该提取方法获得的竹茹提取物可以用 于制备抗焦虑药物。本发明提供的竹茹提取物能够有效治疗焦虑症。 具体实施方式 0017 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案， 下面结合具体实施例对 本发明作进一步的详细说明。 0018 本发明提供的竹茹提取物的提取方法中， 所用原料及试剂均可由市场购得。 0019 实施例 1 ： 取竹茹药材100g， 粉碎后加10 倍量水， 煎煮60分钟， 提取液过滤， 在温度为80， 真空 度为 0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度 1.15(80 )， 加入同体积的氯仿和正丁醇的混合 溶液 。
12、（氯仿和正丁醇的体积比为 5 1） ， 除去中间白色絮状沉淀， 取水层在温度为 80， 真 空度为0.06MPa的条件下浓缩至相对密度为1.23(80)， 获得浸膏18g， 加入4倍量80乙 醇醇沉， 静置24 小时， 收集沉渣离心， 回收乙醇， 再加入7倍量水搅拌溶解， 在温度为80， 真空度为 0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度 1.18(80 )， 过滤， 喷雾干燥， 即得竹茹提取 物 4.5g。 0020 对获得的竹茹提取物进行检测， 结果如下 ： 竹茹多糖的鉴别 ： 鉴别方法为苯酚 - 硫酸试剂反应 ( 阳性 )， 本发明提供的竹茹提取物 中含有竹茹多糖。 0021 竹茹多糖含量。
13、 ： 47.1 ( 用苯酚 - 硫酸法测定 )（参考 中国药典 2010 年版二 部） 实施例 2 ： 取竹茹药材 100g， 粉碎后加 20 倍量水， 煎煮 40 分钟， 提取液过滤， 在温度为 70， 真 空度为 0.04MPa 的条件下浓缩至相对密度 1.12(80 )， 加入同体积的氯仿和正丁醇的混 合溶液 （氯仿和正丁醇的体积比为 5 1） ， 除去中间白色絮状沉淀， 取水层在温度为 80， 真空度为 0.05MPa 的条件下浓缩至相对密度为 1.20(80 )， 获得浸膏 19g， 加入 3 倍量 95乙醇醇沉， 静置 24 小时， 收集沉渣离心， 回收乙醇， 再加入 5 倍量水搅。
14、拌溶解， 在温度 为80， 真空度为0.04MPa 的条件下浓缩至相对密度1.12(80)， 过滤， 喷雾干燥， 即得竹 茹提取物 5.1g。 0022 对获得的竹茹提取物进行检测， 结果如下 ： 竹茹多糖的鉴别 ： 鉴别方法为苯酚 - 硫酸试剂反应 ( 阳性 )， 本发明提供的竹茹提取 说 明 书 CN 104352850 A 4 3/3 页 5 物中含有竹茹多糖。 0023 竹茹多糖含量 ： 49.3 ( 用苯酚 - 硫酸法测定 )（参考 中国药典 2010 年版二 部） 实施例 3 ： 取竹茹药材100g， 粉碎后加15 倍量水， 煎煮30分钟， 提取液过滤， 在温度为75， 真空 度为。
15、 0.05MPa 的条件下浓缩至相对密度 1.13(80 )， 加入同体积的氯仿和正丁醇的混合 溶液 （氯仿和正丁醇的体积比为51） ， 除去中间白色絮状沉淀， 收集水层， 经300目滤布过 滤， 滤液在温度为 80， 真空度为 0.04MPa 的条件下浓缩至相对密度为 1.22(80 )， 获得 浸膏17g， 加入1倍量80乙醇醇沉， 静置24 小时， 收集沉渣离心， 回收乙醇， 再加入3倍量 水搅拌溶解， 在温度为 80， 真空度为 0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度 1.15(80 )， 过 滤， 喷雾干燥， 即得竹茹提取物 4.8g。 0024 对获得的竹茹提取物进行检测， 结果如。
16、下 ： 竹茹多糖的鉴别 ： 鉴别方法为苯酚 - 硫酸试剂反应 ( 阳性 )， 本发明提供的竹茹提取 物中含有竹茹多糖。 0025 竹茹多糖含量 ： 50.9 ( 用苯酚 - 硫酸法测定 )（参考 中国药典 2010 年版二 部） 临床试验 ： 一、 一般资料 60 例焦虑症患者， 符合 中国精神障碍分类和诊断标准 第 3 版焦虑症的诊断标准， HAMA 14 分。无系统疾病、 无药物滥用史及过敏史， 无脑部器质性病变。排除妊娠及哺乳 期妇女， 排除合并有严重的器官疾病， 排除伴有严重的躯体疾病的抑郁症患者。 其中男性27 例， 女性 33 例， 年龄 18 60 岁， 病程 2 11 个月， 。
17、平均病程 5.41.5 个月。 0026 二、 治疗方法 本组病例均采用口服实施例 1 制备的竹茹提取物， 每日三次， 每次 3 5g, 连续服用 8 周。 允许患者同时使用常规剂量的唑吡坦、 佐匹克隆、 咪达唑仑、 阿普唑仑、 氯硝西泮等改善 睡眠， 均睡前服用， 连续使用不超过 2 周。但禁用其他精神药物、 系统心理治疗和电痉挛治 疗等。 0027 三、 疗效评价 抗焦虑疗效评价采用 中国精神障碍分类和诊断标准 第 3 版的焦虑量表 ( HAMA) ， 同 时对血常规、 肝肾功能、 心电图等检查项目进行监测。在治疗前与治疗后第 4 周及第 8 周分 别进行疗效评价。 0028 四、 临床效果 本组病例在治疗前后， HAMA 总分分值差异显著(P 0.05) , 治疗后HAMA 总分分值呈 下降趋势， 第 4 周差异显著 ( P 0.05) ， 第 8 周差异非常显著 ( P 0.01)。其中第 4 周 有效 34 例， 有效率 56.7% ； 第 8 周累计有效 55 例， 累计有效率 91.7%。 0029 提示本发明中的竹茹提取物对焦虑症具有显著的治疗效果。 说 明 书 CN 104352850 A 5 。