用作单酰甘油脂肪酶抑制剂的杂芳族和芳族哌嗪基氮杂环 丁基酰胺 相关专利申请的交叉引用
本专利申请要求 2009 年 4 月 22 日提交的美国临时申请 No.61/171,661 的权益， 该临时申请全文以引用方式并入本文。
本专利申请与提交于 2009 年 4 月 22 日、 名称为 Heteroaromatic and Aromatic Piperazinyl Azetidinyl Amides as Monoacylglycerol Lipase Inhibitors( 用作单酰甘 油脂肪酶抑制剂的杂芳族和芳族哌嗪基氮杂环丁基酰胺 ) 的美国临时专利申请序列号为 61/171,660 相关。
关于联邦资助研发项目的声明
下文所述的本发明研发项目未受联邦资助。
技术领域 本发明涉及本文所定义的式 (I) 化合物在治疗、 缓解和 / 或预防受试者的 MGL 疾 病方面的用途， 所述受试者包括患有受 MGL 影响的疾病、 综合征或病症的哺乳动物和 / 或人 类。
背景技术 大 麻 (Cannabis sativa) 已 用 于 治 疗 疼 痛 多 年。Δ9- 四 氢 大 麻 酚 是 源 自 大 麻 的 主 要 活 性 成 分 且 为 大 麻 素 受 体 激 动 剂 (Pertwee， Brit J Pharmacol， 2008， 153， 199-215(Pertwee， 《英国药理学杂志》 ， 2008 年， 第 153 卷， 第 199-215 页 ))。已克隆了两 个大麻素 G 蛋白偶联受体， 即 1 型大麻素受体 (CB1， Matsuda et al.， Nature， 1990， 346， 561-4(Matsuda 等人， 《自然》 ， 1990 年， 第 346 卷， 第 561-564 页 )) 和 2 型大麻素受体 (CB2， Munro et al.， Nature， 1993， 365， 61-5(Munro 等人， 《自然》 ， 1993 年， 第 365 卷， 第 61-65 页 ))。CB1 在中枢表达于诸如下丘脑和伏隔核的脑区， 在外周表达于肝脏、 胃肠道、 胰腺、 脂 肪组织和骨骼肌 (Di Marzo et al.， Curr Opin Lipidol， 2007， 18， 129-140(Di Marzo 等人， 《血脂学新见》 ， 2007 年， 第 18 卷， 第 129-140 页 ))。CB2 主要表达于免疫细胞， 例如单核细 胞 (Pacher et al.， Amer J Physiol， 2008， 294， H1133-H1134(Pacher 等人， 《美国生理学杂 志》 ， 2008 年， 第 294 卷， 第 H1133-H1134 页 ))， 并在某些情况下也表达于脑 (Benito et al.， Brit J Pharmacol， 2008， 153， 277-285(Benito 等人， 《英国药理学杂志》 ， 2008 年， 第 153 卷， 第 277-285 页 ))、 骨骼肌 (Cavuoto et al.， Biochem Biophys Res Commun， 2007， 364， 105-110(Cavuoto 等人， 《生物化学与生物物理研究通讯》 ， 2007 年， 第 364 卷， 第 105-110 页 )) 和心肌 (Hajrasouliha et al.， Eur J Pharmacol， 2008， 579， 246-252(Hajrasouliha 等人， 《欧洲药理学杂志》 ， 2008 年， 第 579 卷， 第 246-252 页 ))。使用合成激动剂得出的大 量药理学、 解剖学和电生理学数据表明， CB1/CB2 参与的增强的大麻素信号传导在急性伤害 性反应试验中促进了镇痛并且在慢性神经源性痛和炎性痛模型中抑制了痛觉过敏和 / 或 痛觉超敏 (Cravatt et al.， J Neurobiol， 2004， 61， 149-60(Cravatt 等人， 《神经生物学杂
志》 ， 2004 年， 第 61 卷， 第 149-160 页 ) ； Guindon et al.， Brit J Pharmacol， 2008， 153， 319-334(Guindon 等人， 《英国药理学杂志》 ， 2008 年， 第 153 卷， 第 319-334 页 ))。
合成的大麻素受体激动剂的功效已得到充分的证实。此外， 采用大麻素受体激动 剂和基因敲除小鼠的研究表明， 内源性大麻素系统是伤害性反应的重要调节剂。花生四烯 酸乙醇胺 (AEA)(Devane et al.， Science， 1992， 258， 1946-9(Devane 等人， 《科学》 ， 1992 年， 第 258 卷， 第 1946-1949 页 )) 和 2- 花生四烯酰甘油 (2-AG)(Mechoulam et al.， Biochem Pharmacol， 1995， 50， 83-90(Mechoulam 等 人， 《生 化 药 理 学》 ， 1995 年， 第 50 卷， 第 83-90 页)； Sugiura et al.， Biochem Biophys Res Commun， 1995， 215， 89-97(Sugiura 等人， 《生 物化学与生物物理研究通讯》 ， 1995 年， 第 215 卷， 第 89-97 页 )) 是两种主要的内源性大麻 素。AEA 被脂肪酸酰胺水解酶 (FAAH) 水解， 2-AG 被单酰甘油脂肪酶 (MGL) 水解 (Piomelli， Nat Rev Neurosci， 2003， 4， 873-884(Piomelli， 《自然 — 神经学评论》 )， 2003 年， 第 4 卷， 第 873-884 页 )。FAAH 的基因缺失提高了内源性 AEA 水平并在急性炎性痛模型中起到了 CB1 依赖性镇痛 (Lichtman et al.， Pain， 2004， 109， 319-27(Lichtman 等人， 《疼痛》 ， 2004 年， 第 109 卷， 第 319-327 页 ))， 这表明内源性大麻素系统本身具有抑制伤害性反应的功 能 (Cravatt et al.， J Neurobiol， 2004， 61， 149-60(Cravatt 等人， 《神经生物学杂志》 ， 2004 年， 第 61 卷， 第 149-160 页 ))。与使用 FAAH 基因敲除小鼠时出现的内源性大麻素水 平组成性提高不同， 使用特定的 FAAH 抑制剂只会瞬时提高 AEA 水平并产生体内抗伤害反 应 (Kathuria et al.， Nat Med， 2003， 9， 76-81(Kathuria 等人， 《自然 - 医学》 ， 2003 年， 第 9 卷， 第 76-81 页 ))。有关内源性大麻素介导的抗伤害反应论调经此得到进一步证实 ： 在外 周产生伤害性刺激后在导水管周围灰质 ( 一个已知的疼痛中枢 ) 中形成了 AEA(Walker et al.， Proc Natl Acad Sci USA， 1999， 96， 12198-203(Walker 等人， 《美国国家科学院院刊》 ， 1999 年， 第 96 卷， 第 12198-12203 页 )) 以及相反地， 在脊髓中施用 CB1 反义 RNA 后诱发了 痛觉过敏 (Dogrul et al.， Pain， 2002， 100， 203-9(Dogrul 等人， 《疼痛》 ， 2002 年， 第 100 卷， 第 203-209 页 ))。
对 于 2-AG，在 甩 尾 实 验 (Mechoulam et al.， Biochem Pharmacol， 1995， 50， 83-90(Mechoulam 等 人， 《生 化 药 理 学》 ， 1995 年， 第 50 卷， 第 83-90 页 )) 和 热 板 实 验 (Lichtman et al.， J Pharmacol Exp Ther， 2002， 302， 73-9(Lichtman 等人， 《药理学与实 验治疗学杂志》 ， 2002 年， 第 302 卷， 第 73-79 页 )) 中证实静脉内递送该物质产生了镇痛作 用。 相反， 在热板实验中证实单独给予 2-AG 不会起到镇痛作用， 但与其他 2- 单酰甘油 ( 即， 2- 亚油酸甘油酯和 2- 棕榈酸甘油酯 ) 共同给予时， 达到了显著的镇痛作用， 该现象称为 “协 同效应” (Ben-Shabat et al.， Eur J Pharmacol， 1998， 353， 23-31(Ben-Shabat 等人， 《欧洲 药理学杂志》 ， 1998 年， 第 353 卷， 第 23-31 页 ))。这些 “协同作用” 的 2- 单酰甘油是内源 性脂质， 它们与 2-AG 共同释放， 增强了内源性大麻素的信号传导， 部分上通过抑制 2-AG 分 解， 最可能通过竞争性结合 MGL 上的活性位点起到此作用。这表明合成的 MGL 抑制剂将具 有类似作用。相对较弱的合成的 MGL 抑制剂 URB602 的确在急性炎症鼠模型中表现出抗伤 害反应的作用 (Comelli et al.， Brit J Pharmacol， 2007， 152， 787-794(Comelli 等人， 《英 国药理学杂志》 ， 2007 年， 第 152 卷， 第 787-794 页 ))。
尽管使用合成的大麻素激动剂决定性地证实了增强的大麻素信号传导产生了镇 痛和抗炎作用， 但很难将这些化合物的有益作用与有害副作用脱离开来。一种可供选择的方法是通过提高 2-AG 水平来增强内源性大麻素系统的信号传导， 而 2-AG 水平的提高可通 过抑制 MGL 来实现， 其中 2-AG 是中枢神经系统 (CNS) 和胃肠道中最高丰度的内源性大麻 素。 因此， MGL 抑制剂在治疗疼痛、 炎症和中枢神经系统紊乱 (Di Marzo et al.， Curr Pharm Des， 2000， 6， 1361-80(Di Marzo 等人， 《当今药物设计》 ， 2000 年， 第 6 卷， 第 1361-1380 页 ) ； Jhaveri et al.， Brit J Pharmacol， 2007， 152， 624-632(Jhaveri 等人， 《英国药理学杂 志》 ， 2007 年， 第 152 卷， 第 624-632 页 ) ； McCarberg Bill et al.， Amer J Ther， 2007， 14， 475-83(McCarberg Bill 等人， 《美国治疗学杂志》 ， 2007 年， 第 14 卷， 第 475-483 页 )) 以 及青光眼和由眼内压升高造成的疾病状态 (Njie， Ya Fatou ； He， Fang ； Qiao， Xhuanhong ； Song， Zhoa-Hui， Exp.Eye Res.， 87， 2008(2) ： 106-14(Njie， Ya Fatou、 He， Fang、 Qiao， Xhuanhong、 Song， Zhoa-Hui， 《实验眼科研究》 ， 2008 年， 第 87 卷第 2 期， 第 106-114 页 )) 方 面具有潜在用处。 发明内容
本发明涉及治疗、 缓解或预防受 MGL 抑制影响的疾病、 综合征、 病症或障碍 ( 如疼 痛、 导致此类疼痛的疾病、 炎症和中枢神经系统紊乱 ) 的方法， 所述方法包括下列步骤、 由 下列步骤组成和 / 或基本上由下列步骤组成 ： 给有需要的受试者施用治疗有效量的式 (I) 化合物
其选自 ： 其中 W 为 N， R1 为 H， 为 X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为
苯氧基甲基， 以及 R3 为 2， 2- 二甲基丙基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -O-C(R2) ＝ N-， 以及 R2为环己基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -O-C(R2) ＝ N-， 以及 R2 为3- 氟代苯基的化合物 ；14CN 102458407 A说为明书4/25 页
其中 W 为 N， R1 为 H，X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为4- 甲基苯基， 以及 R3 为异丁基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯基甲基， 以及 R3 为异丁基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -O-C(R2) ＝ N-， 以及 R2 为4- 氟代苯基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -O-C(R2) ＝ N-， 以及 R2 为4- 甲氧基苯基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为异丁基， 以及 R3 为异丁基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯氧基甲基， 以及 R3 为异丁基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯基， 以及 R3 为 2， 2- 二甲基丙基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯氧基甲基， 以及 R3 为环己基甲基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为环戊基甲基， 以及 R3 为甲基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯基， 以及 R3 为异丁基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为环己基甲基， 以及 R3 为氢的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -O-C(R2) ＝ N-， 以及 R2为 2- 甲氧基苯基甲基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为正丙基， 以及 R3 为甲基的化合物 ；
其 中 W 为 CH， R1 为 2- 甲 氧 基，为X-Y-Z为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯氧基甲基， 以及 R3 为异丁基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯基甲基， 以及 R3 为环己基甲基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -O-C(R2) ＝ N-， 以及 R2为叔丁基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -O-C(R2) ＝ N-， 以及 R2为 3- 甲氧基苯基的化合物 ；
其 中 W 为 CH， R1 为 2- 甲 氧 基，为X-Y-Z为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯基甲基， 以及 R3 为异丁基的化合物 ；16CN 102458407 A说明书为6/25 页
其 中 W 为 CH， R1 为 2- 甲 氧 基，X-Y-Z为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯氧基甲基， 以及 R3 为 2， 2- 二甲基丙基的化合物 ；
其 中 W 为 CH， R1 为 2- 甲 氧 基，为X-Y-ZR2 为苯基甲基， 以及 R3 为环己基甲基的化合物 ； 为 -CH-C(R2)-N(R3)-，
其 中 W 为 CH， R1 为 2- 甲 氧 基，为X-Y-Z为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯基， 以及 R3 为 2， 2- 二甲基丙基的化合物 ；
其中 W 为 CH ，R 1 为 4- 氟代，为X-Y-Z为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为苯基， 以及 R3 为 2， 2- 二甲基丙基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为2- 二甲基丙基的化合物 ； 叔丁基， 以及 R3 为 2，
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -NH-C(R2)-C(R3)-， R2 为4- 甲基苯基， 以及 R3 为甲氧基 - 甲基 - 羰基的化合物 ；
其中 W 为 N， R1 为 H，为X-Y-Z 为 -CH-C(R2)-N(R3)-， R2 为正丙基， 以及 R3 为环己基甲基的化合物 ；
及其对映体、 非对映体、 溶剂化物和可药用盐。
本发明还涉及本文定义的式 (I) 化合物在制备药剂或药物组合物方面的用途， 所 述药剂或药物组合物用于在有需要的受试者中治疗、 缓解或预防受 MGL 抑制所影响的疾 病、 综合征、 病症或障碍。 具体实施方式
一般而言， 根据贯穿本公开内容使用的标准命名原则， 指定侧链的末端部分首先 被描述， 接着描述朝向连接点的相邻官能团。因此， 举例而言， “C1-C6 烷基羰基” 取代基是指 下式表示的基团 ：除非另外指明， 否则在分子内特定位置上任何取代基或变量的定义意在与其在该 分子内其他位置的定义无关。应当了解， 式 (I) 的化合物上的取代基和取代模式可由本领 域的普通技术人员选择， 以提供化学上稳定且可由本领域已知技术及本文所示的那些方法 容易合成的化合物。
本文所用的术语 “受试者” 指已成为治疗、 观察或实验的目标的动物， 优选哺乳动 物， 最优选人类。
如本文所用， 术语 “治疗有效量” 指在组织系统、 动物或人类中引发生物或医学反 应的活性化合物或药用试剂的量， 其为研究人员、 兽医、 医师或其他临床医师所追寻的， 其 包括缓解或部分缓解所治疗的疾病、 综合征、 病症或障碍的症状。
如本文所用， 术语 “组合物” 旨在涵盖包含治疗有效量的特定成分的产物， 以及可 由特定量的特定成分的组合直接或间接得到的任何产物。
如本文所用， 除非另有说明， 否则术语 “治疗 ( 动词 )” 、 “治疗 ( 名词 )” 、 “缓解” 等 应包括出于抗击疾病、 病症或障碍的目的对受试者或患者 ( 优选哺乳动物， 更优选人 ) 进行 管理和护理， 和包括给予本发明的化合物以预防症状或并发症的发作、 减轻症状或并发症 或者消除该疾病、 病症或障碍。
如本文所用， 除非另有说明， 否则术语 “预防 ( 动词 )” 和 “预防 ( 名词 )” 应包括 (a) 减少一种或多种症状的频率 ； (b) 减少一种或多种症状的严重性 ； (c) 延迟或避免另外 的症状的发展 ； 和 / 或 (d) 延迟或避免该障碍或病症的发展。
本领域技术人员将认识到， 在其中本发明涉及预防方法的情况中， 有需要的受试 者 ( 即需要进行预防的受试者 ) 应包括任何已经历或表现出所要预防的障碍、 疾病或病症 的至少一种症状的受试者或患者 ( 优选哺乳动物， 更优选人 )。此外， 有需要的受试者还 可以是没有表现出要预防的障碍、 疾病或病症的任何症状， 但被内科医生、 临床医生或其他 医学专业人士认为有发展所述障碍、 疾病或病症的风险的受试者 ( 优选哺乳动物， 更优选 人 )。例如， 由于该受试者的病史， 包括但不限于家族史、 易患病的体质、 共存的障碍或病症 ( 同时具有的病态 )、 遗传测试等， 该受试者可被认为有发展障碍、 疾病或病症的风险 ( 并因 此需要预防或预防性治疗 )。
术语 “MGL 抑制剂” 旨在涵盖与 MGL 相互作用以降低或消除 MGL 催化活性从而增 加 MGL 底物浓度的化合物。术语 “MGL 调节的” 用来表示受 MGL 酶调节影响的病症， 包括受 MGL 酶抑制影响的病症， 例如疼痛和引发此类疼痛的疾病以及炎症和中枢神经系统紊乱。
如本文所用， 除非另有说明， 否则术语 “影响” 或 “受影响” ( 在涉及受 MGL 抑制所影 响的疾病、 综合征、 病症或障碍时 ) 应意指所述疾病、 综合征、 病症或障碍的一种或多种症 状或临床表现的发生频率和 / 或严重程度下降 ； 和 / 或意指所述疾病、 综合征、 病症或障碍 的一种或多种症状或临床表现的发展被阻止或者疾病、 综合征、 病症或障碍的发展被阻止。
式 (I) 化合物在用于治疗、 缓解和 / 或预防受 MGL 抑制所影响的疾病、 综合征、 病 症或障碍的方法中是有用的。此类方法包括下列步骤、 由下列步骤组成和 / 或基本上由下
列步骤组成 ： 给受试者施用治疗有效量的式 (I) 化合物或其对映体、 非对映体、 溶剂化物或 可药用的盐， 所述受试者包括需要此类治疗、 缓解和 / 或预防的动物、 哺乳动物和人类。具 体地讲， 式 (I) 化合物可用于治疗、 缓解和 / 或防止疼痛 ； 造成此疼痛的疾病、 综合征、 病症 或障碍 ； 炎症和 / 或中枢神经系统紊乱。更具体地讲， 式 (I) 化合物可用于治疗、 缓解和 / 或预防炎性疼痛、 炎性超敏病症和 / 或神经性疼痛， 包括给有需要的受试者施用治疗有效 量的本文定义的式 (I) 化合物。
炎性疼痛的例子包括由于疾病、 病症、 综合征、 障碍或疼痛状态所致的疼痛， 所述 疾病、 综合征、 病症、 障碍或疼痛状态包括 ： 炎性肠疾病、 内脏疼痛、 偏头痛、 术后疼痛、 骨性 关节炎、 类风湿性关节炎、 背痛、 下背痛、 关节痛、 腹痛、 胸痛、 分娩、 肌肉骨骼疾病、 皮肤疾 病、 牙痛、 发热、 烧伤、 晒伤、 蛇咬、 毒蛇咬、 蜘蛛咬、 昆虫叮咬、 神经源性膀胱、 间质性膀胱炎、 尿道感染、 鼻炎、 接触性皮肤炎 / 过敏症、 瘙痒、 湿疹、 咽炎、 黏膜炎、 肠炎、 过敏性肠综合征、 胆囊炎、 胰脏炎、 乳房切除后疼痛症候群、 痛经、 子宫内膜异位症、 因身体创伤而致的疼痛、 头痛、 额窦性头痛、 紧张性头痛、 或蛛网膜炎。
一种类型的炎性疼痛为炎性痛觉过敏 / 超敏。炎性痛觉过敏的例子包括疾病、 综 合征、 病症、 障碍或疼痛状态， 其包括炎症、 骨关节炎、 类风湿性关节炎、 背痛、 关节痛、 腹痛、 肌肉骨骼疾病、 皮肤病、 术后痛、 头痛、 牙痛、 烧伤、 晒伤、 昆虫叮咬、 神经原性膀胱、 尿失禁、 间质性膀胱炎、 泌尿道感染、 咳嗽、 哮喘、 慢性阻塞性肺部疾病、 鼻炎、 接触性皮炎 / 超敏反 应、 搔痒、 湿疹、 咽炎、 肠炎、 过敏性肠综合征、 包括克隆氏病在内的炎性肠疾病、 溃疡性结肠 炎、 尿失禁、 前列腺增生、 咳嗽、 哮喘、 鼻炎、 鼻超敏反应、 疥疮、 接触性皮炎和 / 或皮肤过敏、 以及慢性阻塞性肺部疾病。
在一个实施例中， 本发明涉及用于治疗、 缓解和 / 或预防其中存在内脏过敏增加 的炎性内脏痛觉过敏的方法， 该方法包括下列步骤、 由下列步骤组成和 / 或基本上由下列 步骤组成 ： 给需要该治疗的受试者施用治疗有效量的式 (I) 的化合物、 盐或溶剂化物。 在另 一个实施例中， 本发明涉及用于治疗其中存在对热、 机械和 / 或化学刺激超敏性的炎性躯 体痛觉过敏的方法， 该方法包括给需要该治疗的哺乳动物施用治疗有效量的式 (I) 的化合 物或其对映体、 非对映体、 溶剂化物或可药用盐。
本发明的另一个实施例涉及用于治疗、 缓解和 / 或预防神经性疼痛的方法。神经 性疼痛的例子包括由于疾病、 综合征、 病症、 障碍或疼痛状态所致的疼痛， 所述疾病、 综合 征、 病症、 障碍或疼痛状态包括癌症、 神经障碍、 脊神经和周围神经手术、 脑肿瘤、 外伤性脑 损伤 (TBI)、 脊髓创伤、 慢性疼痛综合征、 纤维肌痛、 慢性疲劳综合征、 狼疮、 结节病、 周围神 经病变、 双侧周围神经病变、 糖尿病性神经病变、 中枢性疼痛、 与脊髓损伤相关的神经病变、 中风、 肌萎缩侧索硬化 (ALS)、 帕金森氏病、 多发性硬化症、 坐骨神经炎、 下颌关节神经痛、 周 围神经炎、 多发性神经炎、 残肢痛、 幻肢痛、 骨折、 口部神经性疼痛、 夏科氏痛、 I 型和 II 型复 杂性区域疼痛综合征 (CRPSI/II)、 神经根病变、 格 - 巴二氏综合征、 感觉异常性股痛、 灼口 综合征、 视神经炎、 发热后神经炎、 游走性神经炎、 节段性神经炎、 贡博氏神经炎、 神经元炎、 颈臂神经痛、 颅部神经痛、 膝状神经节神经痛、 舌咽神经痛、 偏头痛性神经痛、 特发性神经 痛、 肋间神经痛、 乳房神经痛、 摩顿氏神经痛、 鼻睫神经痛、 枕神经痛、 疱疹后神经痛、 灼性神 经痛、 红斑性肢痛病、 斯路德氏神经痛、 蝶腭神经痛、 眶上神经痛、 三叉神经痛、 外阴痛、 或翼 管神经痛。一种类型的神经性疼痛为神经性异常冷痛， 其表征为存在神经病变相关的异常性 疼痛状态 ( 其中存在对冷刺激的超敏反应 )。神经性异常冷痛的例子包括由于疾病、 病症、 综合征、 障碍或疼痛状态所致的异常性疼痛， 该疾病、 病症、 综合征、 障碍或疼痛状态包括神 经性疼痛 ( 神经痛 )、 源自脊神经和周围神经手术或创伤、 外伤性脑损伤 (TBI)、 三叉神经 痛、 疱疹后神经痛、 灼痛、 周围神经病变、 糖尿病性神经病变、 中枢性疼痛、 中风、 周围神经 炎、 多发性神经炎、 I 型和 II 型复杂性区域疼痛综合征 (CRPS I/II) 或神经根病变的疼痛。
在另一个实施例中， 本发明涉及用于治疗、 缓解和 / 或预防其中存在对冷刺激超 敏性的神经性异常冷痛的方法， 该方法包括下列步骤、 由下列步骤组成和 / 或基本上由下 列步骤组成 ： 给需要此类治疗的受试者施用治疗有效量的本文定义的式 (I) 化合物或其对 映体、 非对映体、 溶剂化物或可药用盐。
在另一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解和 / 或预防中枢神经系统紊乱的方法。 中枢神经系统紊乱的例子包括焦虑症如社交焦虑症、 创伤后压力障碍、 恐惧症、 社交恐惧 症、 特定对象恐惧症、 疼痛性病症、 强迫症、 急性压力障碍、 分离焦虑症和广泛性焦躁症， 以 及抑郁症如重症抑郁症、 双相型障碍、 季节性情感障碍、 产后抑郁症、 躁狂抑郁症、 和两极型 忧郁症。
本发明涉及治疗、 缓解和 / 预防受 MGL 抑制影响的障碍、 综合征、 病症或疾病的方 法， 所述方法包括以下步骤、 由以下步骤组成或基本上由以下步骤组成 ： 给有需要的受试者 施用治疗有效量的式 (I) 化合物
其选自 ：
[1-(2， 2- 二 甲 基 - 丙 基 )-2- 苯 氧 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #1)
(2- 环 己 基 - 苯 并唑 -6- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮 杂 环 唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #2)
[2-(3- 氟代苯基 )- 苯并环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #3)
(1- 异丁基 -2- 对甲苯基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #4)
[1- 异 丁 基 -2-(4- 甲 基 苄 基 )-1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #5)
[2-(4- 氟代苯基 )- 苯并唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂 唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮20环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #6)
[2-(4- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #7)CN 102458407 A
说明书10/25 页(1， 2- 二异丁基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环 丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #8)
(1- 异 丁 基 -2- 苯 氧 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #9)
[1-(2， 2- 二 甲 基 - 丙 基 )-2- 苯 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #10)
(1- 环 己 基 甲 基 -2- 苯 氧 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #11)
(2- 环戊基甲基 -1- 甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #12)
(1- 异丁基 -2- 苯基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂 环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #13)
(2- 环己基甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环 丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #14)
[2-(2- 甲氧基 - 苄基 )- 苯并唑 -5- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #15)
(2- 乙基 -1- 甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环 丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #16)
(1- 异丁基 -2- 苯氧基甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-{3-[4-(2- 甲氧基 - 苯基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 氮杂环丁 -1- 基 }- 甲酮 ； ( 化合物 #17)
(2- 苄基 -1- 环己基甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #18)
(2- 叔 丁 基 - 苯 并唑 -6- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮 杂 环 唑 -5- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #19)
[2-(3- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #20)
(2- 苄 基 -1- 异 丁 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 )-{3-[4-(2- 甲 氧 基 - 苯 基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 氮杂环丁 -1- 基 }- 甲酮 ； ( 化合物 #21)
[1-(2， 2- 二甲基 - 丙基 )-2- 苯氧基甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 ]-{3-[4-(2- 甲氧基 - 苯 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 氮杂环丁 -1- 基 }- 甲酮 ； ( 化合物 #22)
(2- 苄 基 -1- 环 己 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 )-{3-[4-(2- 甲 氧 基 - 苯 基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 氮杂环丁 -1- 基 }- 甲酮 ； ( 化合物 #23)
[1-(2， 2- 二 甲 基 - 丙 基 )-2- 苯 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 ]-{3-[4-(2- 甲 氧 基 - 苯 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 氮杂环丁 -1- 基 }- 甲酮 ； ( 化合物 #24)
[1-(2， 2- 二甲基 - 丙基 )-2- 苯基 -1H- 吲哚 -5- 基 ]-{3-[4-(4- 氟代 - 苯基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 氮杂环丁 -1- 基 }- 甲酮 ； ( 化合物 #25)
[2- 叔 - 丁基 -1-(2， 2- 二甲基 - 丙基 )-1H- 吲哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #26)
2- 甲氧基 -1-{5-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁烷 -1- 羰基 ]-2- 对甲苯基 -1H- 吲哚 -3- 基 }- 乙酮 ； ( 化合物 #27)
(1- 环己基甲基 -2- 丙基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #28)
及其对映体、 非对映体、 溶剂化物和可药用盐。优选地， 受 MGL 抑制影响的疾病、 综 合征、 病症或障碍选自如本文所定义的疼痛、 炎性疼痛、 炎性过敏病症和神经性疼痛。
在一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解或预防受 MGL 抑制影响的疾病、 综合征、 病症或障碍， 包括给有需要的受试者施用治疗有效量的式 (Ia) 化合物
或其对映体、 非对映体、 溶剂化物或可药用盐， 其中 R1、 W 和 -X-Y-Z- 如本文所定 义。在另一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解或预防受 MGL 抑制影响的疾病、 综合征、 病症 或障碍， 包括给有需要的受试者施用治疗有效量的式 (Ib) 化合物
或其对映体、 非对映体、 溶剂化物或可药用盐， 其中 R1、 W 和 -X-Y-Z- 如本文所定 义。在另一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解或预防受 MGL 抑制影响的疾病、 综合征、 病症 或障碍， 包括给有需要的受试者施用治疗有效量的式 (Ic) 化合物
或其对映体、 非对映体、 溶剂化物或可药用盐， 其中 R1、 W 和 -X-Y-Z- 如本文所定义。 在另一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解或预防受 MGL 抑制影响的疾病、 综合 征、 病症或障碍， 包括给有需要的受试者施用治疗有效量的选自以下的化合物 ：
[1-(2， 2- 二 甲 基 - 丙 基 )-2- 苯 氧 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡
啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #1)
(2- 环 己 基 - 苯 并唑 -6- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮 杂 环 唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #2)
[2-(3- 氟代苯基 )- 苯并环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #3)
(1- 异丁基 -2- 对甲苯基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #4)
[1- 异 丁 基 -2-(4- 甲 基 苄 基 )-1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #5)
[2-(4- 氟代苯基 )- 苯并唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂 唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #6)
[2-(4- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #7)
(1， 2- 二异丁基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环 丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #8) (1- 异 丁 基 -2- 苯 氧 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #9)
[1-(2， 2- 二 甲 基 - 丙 基 )-2- 苯 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #10)
(1- 环 己 基 甲 基 -2- 苯 氧 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #11)
(2- 环戊基甲基 -1- 甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #12)
(1- 异丁基 -2- 苯基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂 环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #13)
(2- 环己基甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环 丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #14)
[2-(2- 甲氧基 - 苄基 )- 苯并唑 -5- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #15)
(2- 乙基 -1- 甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环 丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #16)
(1- 异丁基 -2- 苯氧基甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-{3-[4-(2- 甲氧基 - 苯基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 氮杂环丁 -1- 基 }- 甲酮 ； ( 化合物 #17)
(2- 苄基 -1- 环己基甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #18)
及其对映体、 非对映体、 溶剂化物和可药用盐。
在另一个实施例中， 本发明涉及选自以下的化合物的用途 ：
[1-(2， 2- 二 甲 基 - 丙 基 )-2- 苯 氧 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #1)[2-(3- 氟代苯基 )- 苯并唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #3)
(1- 异丁基 -2- 对甲苯基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #4)
[1- 异 丁 基 -2-(4- 甲 基 苄 基 )-1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #5)
[2-(4- 氟代苯基 )- 苯并唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂 唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #6)
[2-(4- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #7)
(1- 异 丁 基 -2- 苯 氧 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #9)
[1-(2， 2- 二 甲 基 - 丙 基 )-2- 苯 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #10)
(1- 环 己 基 甲 基 -2- 苯 氧 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #11)
(1- 异丁基 -2- 苯基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂 环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #13)
(2- 苄基 -1- 环己基甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #18)
(1- 环己基甲基 -2- 丙基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #28)
及其对映体、 非对映体、 溶剂化物和可药用盐。
在另一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解或预防受 MGL 抑制影响的疾病、 综合 征、 病症或障碍， 包括给有需要的受试者施用治疗有效量的选自以下的化合物 ：
(2- 环 己 基 - 苯 并唑 -6- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮 杂 环 唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #2)
[2-(3- 氟代苯基 )- 苯并环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #3)
[1- 异 丁 基 -2-(4- 甲 基 苄 基 )-1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #5) [2-(4- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并 唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮
杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #7)
[1-(2， 2- 二 甲 基 - 丙 基 )-2- 苯 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 ]-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #10)
(1- 环 己 基 甲 基 -2- 苯 氧 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #11)
(2- 环戊基甲基 -1- 甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #12)(1- 异丁基 -2- 苯基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂 环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #13)
(2- 苄基 -1- 环己基甲基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #18)
[2-(3- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并唑 -5- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #20)
(2- 苄 基 -1- 环 己 基 甲 基 -1H- 吲 哚 -5- 基 )-{3-[4-(2- 甲 氧 基 - 苯 基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 氮杂环丁 -1- 基 }- 甲酮 ； ( 化合物 #23)
2- 甲氧基 -1-{5-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂环丁烷 -1- 羰基 ]-2- 对 甲苯基 -1H- 吲哚 -3- 基 }- 乙酮 ； ( 化合物 #27)
(1- 环己基甲基 -2- 丙基 -1H- 吲哚 -5- 基 )-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮 杂环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #28)
及其对映体、 非对映体、 溶剂化物和可药用盐。
在另一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解或预防受 MGL 抑制影响的疾病、 综合 征、 病症或障碍， 包括给有需要的受试者施用治疗有效量的选自以下的化合物 ：
(2- 环 己 基 - 苯 并唑 -6- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮 杂 环 唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂 唑 -7- 基 ]-[3-(4- 吡啶 -2- 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 氮杂丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #2)
[2-(3- 氟代苯基 )- 苯并 [2-(4- 氟代苯基 )- 苯并 (2- 叔 丁 基 - 苯 并环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #3)
环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #6)
唑 -6- 基 )-[3-(4- 吡 啶 -2- 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 氮 杂 环丁 -1- 基 ]- 甲酮 ； ( 化合物 #19)
及其对映体、 非对映体、 溶剂化物和可药用盐。
在另一个实施例中， 本发明涉及选自下表 1 至 3 中所列化合物的任何单一化合物 或化合物集合或其对映体、 非对映体、 溶剂化物或可药用的盐的用途 ； 为有需要的受试者治 疗、 缓解或预防受 MGL 抑制影响的疾病、 综合征、 病症或障碍。本发明的式 (I) 化合物如以 下表 1 至 3 所列。
表1： 式 (Ia) 化合物
表2： 式 (Ib) 化合物
表3： 式 (Ic) 化合物在一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解或预防受 MGL 抑制影响的疾病、 综合征、 病症或障碍， 其中受 MGL 抑制影响的所述疾病、 综合征、 病症或障碍选自炎性疼痛和神经性 疼痛 ； 包括给有需要的受试者 ( 包括哺乳动物和 / 或人类 ) 施用治疗有效量的式 (I) 化合 物
其选自如本文所定义的化合物 ； 及其对映体、 非对映体、 溶剂化物和可药用盐。
在一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解或预防炎性疼痛 ； 包括给有需要的受试者 ( 包括哺乳动物和 / 或人类 ) 施用治疗有效量的式 (I) 化合物
其选自如本文所定义的化合物 ； 及其对映体、 非对映体、 溶剂化物和可药用盐。在 本发明的另一个实施例中， 炎性疼痛选自内脏痛和炎性痛觉过敏， 优选地为内脏痛。
在一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解或预防炎性痛觉过敏， 包括给有需要的受 试者 ( 包括哺乳动物和 / 或人类 ) 施用治疗有效量的式 (I) 化合物
其选自如本文所定义的化合物 ； 及其对映体、 非对映体、 溶剂化物和可药用盐。在 本发明的另一个实施例中， 炎性痛觉过敏为溃疡性结肠炎。
在一个实施例中， 本发明涉及治疗、 缓解或预防神经性疼痛， 包括给有需要的受试 者 ( 包括哺乳动物和 / 或人类 ) 施用治疗有效量的式 (I) 化合物
其选自如本文所定义的化合物 ； 及其对映体、 非对映体、 溶剂化物和可药用盐。在 本发明的另一个实施例中， 神经性疼痛为神经性异常冷痛。
对于在医学中的使用， 式 (I) 化合物的盐指非毒性的 “可药用盐” 。然而， 其他盐可 用于制备式 (I) 化合物或它们的可药用盐。 式 (I) 化合物的合适可药用盐包括酸加成盐， 所 述的酸加成盐可 ( 例如 ) 通过将所述化合物的溶液与诸如盐酸、 硫酸、 富马酸、 马来酸、 琥珀 酸、 乙酸、 苯甲酸、 柠檬酸、 酒石酸、 碳酸或磷酸之类的可药用酸的溶液混合而形成。 此外， 如 果式 (I) 化合物带有酸性部分， 则其合适的可药用盐可包括碱金属盐， 如钠盐或钾盐 ； 碱土 金属盐， 如钙盐或镁盐 ； 以及与合适的有机配体形成的盐， 如季铵盐。 因而， 代表性的可药用 盐包括醋酸盐、 苯磺酸盐、 苯甲酸盐、 碳酸氢盐、 硫酸氢盐、 酒石酸氢盐、 硼酸盐、 溴化物、 依 地酸钙盐、 右旋樟脑磺酸盐、 碳酸盐、 氯化物、 克拉维酸盐、 柠檬酸盐、 二盐酸盐、 依地酸盐、 乙二磺酸盐、 丙酸酯十二烷基硫酸盐、 乙磺酸盐、 延胡索酸盐、 葡庚糖酸盐、 葡糖酸盐、 谷氨 酸盐、 对 α- 羟乙酰氨基苯砷酸盐、 己基间苯二酚盐、 海巴明、 氢溴酸盐、 盐酸盐、 羟萘酸盐、 碘化物、 异硫代硫酸盐、 乳酸盐、 乳糖醛酸盐、 月桂酸盐、 苹果酸盐、 马来酸盐、 扁桃酸盐、 甲 磺酸盐、 甲基溴化物、 甲基硝酸盐、 甲基硫酸盐、 粘液酸盐、 萘磺酸盐、 硝酸盐、 N- 甲基葡糖胺 铵盐、 油酸盐、 双羟萘酸盐 ( 扑酸盐 )、 棕榈酸盐、 泛酸盐、 磷酸盐 / 二磷酸盐、 聚半乳糖醛酸 盐、 水杨酸盐、 硬脂酸盐、 硫酸盐、 碱式乙酸盐、 琥珀酸盐、 鞣酸盐、 酒石酸盐、 茶氯酸盐、 甲苯 磺酸盐、 三乙基碘化物和戊酸盐。
可用于制备可药用的盐的代表性酸和碱包括以下酸 ： 如乙酸、 2， 2- 二氯乙酸、 乙 酰化的氨基酸、 己二酸、 藻酸、 抗坏血酸、 L- 天冬氨酸、 苯磺酸、 苯甲酸、 4- 乙酰氨基苯甲酸、 (+)- 樟脑酸、 樟脑磺酸、 (+)-(1S)- 樟脑 -10- 磺酸、 癸酸、 己酸、 辛酸、 肉桂酸、 柠檬酸、 环拉酸、 十二烷基硫酸、 乙烷 -1， 2- 二磺酸、 乙磺酸、 2- 羟基 - 乙磺酸、 甲酸、 富马酸、 粘酸、 龙胆 酸、 葡庚糖酸、 D- 葡萄糖酸、 D- 葡萄糖醛酸、 L- 谷氨酸、 α- 酮戊二酸、 乙醇酸、 马尿酸、 氢溴 酸、 盐酸、 (+)-L- 乳酸、 (±)-DL- 乳酸、 乳糖酸、 马来酸、 (-)-L- 苹果酸、 丙二酸、 (±)-DL- 扁 桃酸、 甲磺酸、 萘 -2- 磺酸、 萘 -1， 5- 二磺酸、 1- 羟基 -2- 萘酸、 烟酸、 硝酸、 油酸、 乳清酸、 草酸、 棕榈酸、 扑酸、 磷酸、 L- 焦谷氨酸、 水杨酸、 4- 氨基水杨酸、 癸二酸、 硬脂酸、 琥珀酸、 硫 酸、 单宁酸、 (+)-L- 酒石酸、 硫氰酸、 对甲苯磺酸和十一烯酸 ； 以及以下碱 ： 包括氨、 L- 精氨 酸、 苯乙苄胺、 苄星、 氢氧化钙、 胆碱、 二甲基乙醇胺、 二乙醇胺、 二乙胺、 2-( 二乙氨基 ) 乙 醇、 乙醇胺、 乙二胺、 N- 甲基葡萄糖胺、 海巴明、 1H- 咪唑、 L- 赖氨酸、 氢氧化镁、 4-(2- 羟乙 基 ) 吗啉、 哌嗪、 氢氧化钾、 1-(2- 羟乙基 )- 吡咯烷、 氢氧化钠、 三乙醇胺、 氨基丁三醇和氢氧 化锌。
本发明的实施例包括式 (I) 化合物的前药。通常， 此类前药将是化合物的官能化 衍生物， 其在体内可容易地转化成所需的化合物。 因此， 在本发明的治疗或预防实施例的方 法中， 术语 “施用” 涵盖了用具体描述的化合物或未具体描述的化合物治疗或预防所述的多 种疾病、 病症、 综合征和障碍， 但所述未具体描述的化合物在施用至患者后会于体内转化成 所指定的化合物。例如， 在 “Design of Prodrugs” ， ed.H.Bundgaard， Elsevier， 1985(《前 药设计》 ， H.Bundgaard 编辑， Elsevier， 1985 年 ) 中描述了用于选择和制备合适的前药衍生 物的常规程序。
根据本发明实施例的化合物具有至少一个手性中心时， 它们可相应地作为对映体 存在。如果化合物具有两个或更多个手性中心， 则它们还可作为非对映体存在。应当理解， 所有的这类异构体及其混合物均涵盖在本发明的范围内。此外， 化合物的某些结晶形式可 作为多晶型物存在， 并因此也旨在包括在本发明内。 此外， 某些化合物可与水形成溶剂化物 ( 即水合物 ) 或与普通有机溶剂形成溶剂化物， 这类溶剂化合物也旨在涵盖于本发明的范 围内。技术人员将理解， 本文所使用的术语化合物意在包括溶剂化的式 (I) 化合物。
如果用于制备根据本发明某些实施例的化合物的工艺产生立体异构体的混合物， 则可通过诸如制备色谱法之类的常规技术分离这些异构体。化合物可制备为外消旋形式， 或者单独的对映体可通过对映体特异性合成或通过拆分制备。 例如， 可通过标准的技术， 如 通过与光学活性酸 ( 如 (-)- 二对甲基苯甲酰基 -d- 酒石酸和 / 或 (+)- 二对甲基苯甲酰 基 -l- 酒石酸 ) 形成盐来形成非对映体对， 然后分步结晶并再生游离碱而将化合物拆分成 它们的组分对映体。也可通过形成非对映体酯或酰胺， 然后进行色谱分离并除去手性助剂 而拆分化合物。作为另一种选择， 可用手性 HPLC 柱拆分化合物。
本发明的一个实施例涉及一种组合物， 包括药物组合物， 其包含式 (I) 化合物的 (+)- 对映体、 由其组成和 / 或基本上由其组成， 其中所述组合物基本上不含所述化合物的 (-)- 异构体。 在本文中， 基本上不含是指少于约 25％， 优选少于约 10％， 更优选少于约 5％， 更优选少于约 2％， 并且更优选少于约 1％的 (-)- 异构体， 其可如下计算 ：
本发明的另一个实施例为一种组合物， 包括药物组合物， 其包含式 (I) 化合物 的 (-)- 对映体、 由其组成和基本上由其组成， 其中所述组合物基本上不含所述化合物的
(+)- 异构体。 在本文中， 基本上不含是指少于约 25％， 优选少于约 10％， 更优选少于约 5％， 更优选少于约 2％， 并且更优选少于约 1％的 (+)- 异构体， 其可如下计算 ：
在用于制备本发明多个实施例的化合物的任何工艺过程中， 可能有必要和 / 或期 望保护所关注的任何分子上的敏感性或反应性基团。这可使用常规保护基团实现， 例如在 如下文献中描述的那些 ： Protective Groups in Organic Chemistry， Second Edition， J.F.W.McOmie， Plenum Press， 1973(《有机化学中的保护基团》 ， 第二版， J.F.W.McOmie， Plenum Press， 1973 年 ) ； T.W.Greene & P.G.M.Wuts， Protective Groups in Organic Synthesis， John Wiley & Sons， 1991(T.W.Greene 和 P.G.M.Wuts， 《有机合成中的保护基 团》 ， John Wiley & Sons， 1991 年 ) ； 和 T.W.Greene & P.G.M.Wuts， Protective Groups in Organic Synthesis， Third Edition， John Wiley & Sons， 1999(T.W.Greene 和 P.G.M.Wuts， 《有机合成中的保护基团》 ， 第三版， John Wiley & Sons， 1999 年 )。可使用本 领域已知的方法在方便的后续阶段移除保护基团。
虽然本发明实施例的化合物 ( 包括它们的可药用盐和可药用溶剂化物 ) 可单独施 用， 但它们一般与可药用载体、 可药用赋形剂和 / 或可药用稀释剂 ( 根据施用途径和标准药 用或兽医实践而选择 ) 混合施用。因此， 本发明的具体实施例涉及药用和兽医用组合物， 所 述组合物包含式 (I) 化合物和至少一种可药用载体、 可药用赋形剂和 / 或可药用稀释剂。
举例来说， 在本发明实施例的药物组合物中， 可将式 (I) 化合物与任何合适的粘 合剂、 润滑剂、 助悬剂、 包衣剂、 增溶剂以及它们的组合混合。
视情况而定， 含有本发明化合物的固体口服剂型 ( 如片剂或胶囊剂 ) 可一次以至 少一种剂型施用。也可按持续释放制剂的方式施用该化合物。
本发明化合物可以之施用的其他口服剂型包括酏剂、 溶液剂、 糖浆剂和混悬剂 ； 各 剂型任选地含有调味剂和着色剂。
作为另一种选择， 式 (I) 化合物可通过吸入 ( 气管内或鼻内 ) 施用或者以栓剂或 阴道栓剂形式施用， 或者它们可以洗剂、 溶液剂、 霜膏、 油膏剂或扑粉的形式局部施用。例 如， 可将它们掺入霜剂中， 所述霜剂包含聚乙二醇或液态石蜡的水性乳液， 由其组成和 / 或 基本上由其组成。以霜剂的重量计， 它们也可按约 1％至约 10％的浓度掺入油膏剂中， 所述 油膏剂包含白蜡或白软石蜡基料以及任何稳定剂和防腐剂 ( 有可能需要 )， 由其组成和 / 或 基本上由其组成。替代的施用手段包括通过使用皮肤贴剂或透皮贴剂来透皮施用。
本发明的药物组合物 ( 以及单独的本发明化合物 ) 也可通过非肠道注射， 例如海 绵体内、 静脉内、 肌内、 皮下、 皮内或鞘内注射。 在这种情况下， 组合物还将包含合适的载体、 合适的赋形剂以及合适的稀释剂中的至少一种。
对于非肠道施用， 本发明的药物组合物最好以无菌水溶液形式使用， 其可含有其 他物质， 例如足够的盐和单糖以制备与血液等渗的溶液。
对于颊面或舌下施用， 本发明的药物组合物可以片剂或锭剂形式施用， 所述片剂 或锭剂可以常规方式配制。
作为其他例子， 含有至少一种式 (I) 化合物的药物组合物可根据常规药用混合技
术， 通过将化合物与可药用载体、 可药用稀释剂和 / 或可药用赋形剂混合而制备。载体、 赋 形剂和稀释剂可采取各种各样的形式， 这取决于所需的施用途径 ( 例如口服、 非肠道等 )。 因此， 对于液体口服制剂如混悬剂、 糖浆剂、 酏剂和溶液剂而言， 合适的载体、 赋形剂和稀释 剂包括水、 二醇类、 油类、 醇类、 调味剂、 防腐剂、 稳定剂、 着色剂等 ； 对于固体口服制剂如散 剂、 胶囊剂和片剂而言， 合适的载体、 赋形剂和稀释剂包括淀粉、 糖类、 稀释剂、 粒化剂、 润滑 剂、 粘合剂、 崩解剂等。 固体口服制剂也可任选地用糖等物质包衣， 或包肠溶衣， 以便调节吸 收和崩解的主要部位。对于非肠道施用， 载体、 赋形剂和稀释剂通常包括无菌水， 并且可加 入其他成分以增加组合物的溶解度和可保存性。 注射用混悬剂或溶液剂也可用水性载体与 适当的添加剂如增溶剂和防腐剂一起制备。
式 (I) 化合物或其药物组合物的治疗有效量包括 ： 在每日约 1 至 4 次的用药法中， 对于一般 (70kg) 的人而言， 剂量范围为约 0.1mg 至约 3000mg， 或其中的任何量或范围， 特别 是约 1mg 至约 1000mg 或其中的任何量或范围， 更特别地是约 10mg 至约 500mg 或其中的任 何量或范围的式 (I) 化合物 ； 但是对于本领域技术人员来说显而易见的是， 式 (I) 化合物的 治疗有效量将随所治疗的疾病、 综合征、 病症和障碍而有所变化。
对于口服施用， 药物组合物优选以含有约 0.01、 约 10、 约 50、 约 100、 约 150、 约 200、 约 250 和约 500 毫克式 (I) 化合物的片剂形式提供。
有利的是， 式 (I) 的化合物可以单次日剂量施用， 或者每日总剂量可以每日两次、 三次和四次的分剂量施用。
待施用的式 (I) 化合物的最佳剂量可容易确定， 并且将随所使用的具体化合物、 施用模式、 制剂强度以及疾病、 综合征、 病症或障碍的进程而变化。 另外， 与接受治疗的具体 受试者相关的因素 ( 包括受试者年龄、 体重、 饮食和施用时间 ) 将导致需要调整剂量以实现 适当的治疗水平和所需的疗效。因而上述剂量是一般情况的示例。当然， 可能会存在其中 较高或较低剂量范围是有益的个别情况， 并且这类情况也在本发明的范围内。
本领域技术人员将认识到， 使用合适的、 已知的且通常接受的细胞和 / 或动物模 型， 体内试验和体外试验均能预测试验化合物治疗或预防给定病症的能力。本领域技术人 员还将认识到， 在健康患者和 / 或遭受给定疾病的患者中进行的人体临床实验 ( 包括人体 首次使用实验、 剂量探索实验和药效实验 ) 可按照临床和医学领域熟知的方法来完成。
式 (I) 化合物可以在任何上述组合物和给药方案中施用， 或者借助于本领域已确 立的那些组合物和给药方案施用， 只要式 (I) 的化合物的使用是需要它的受试者所要求 的。
一般合成方法
本发明的代表性化合物可根据下文所述的和在之后的方案中说明的一般合成方 法合成。由于方案是举例说明性的， 所以本发明不应理解为受到方案和实例中所述的具体 化学反应和具体条件的限制。 用于方案中的不同起始物质可商购获得或者可通过精通本领 域的技术人员熟知的方法制备。 变量如本文中所定义并在精通本领域的技术人员的技术范 围内。
本说明书中， 尤其是 “方案” 和 “实例” 中所用的缩写如下 ：
可以根据以下方案 1 中所述的方法制备本发明的式 (I) 化合物。方案 1
因此， 在存在如 DIPEA、 吡啶等 ( 优选地不是 TEA) 等有机碱的情况下， 将适当取 代的式 (V) 化合物 ( 已知的化合物或通过已知方法制备的化合物 ) 与适当取代的式 (VI) 化合物 ( 已知的化合物或通过已知方法制备的化合物， 其中 PG1 为适当选择的氮保护基， 如 -CH( 苯基 )2、 苄基、 叔丁基、 甲基等， 优选地为 -CH( 苯基 )2) 在有机溶剂 ( 如乙腈、 THF、 DCM 等 ) 中反应 ( 优选地在约 50℃至约 90℃温度范围内 )， 得到相应的式 (VII) 化合物。
根据已知的方法将式 (VII) 化合物去保护， 以产生相应的式 (VIII) 化合物。 例如，
其中 PG1 为 -CH( 苯基 )2， 式 (VII) 化合物通过与氯甲酸 -1- 氯乙酯在有机溶剂 ( 如二氯甲 烷 ) 中反应去保护， 然后在有机溶剂 ( 如甲醇 ) 中回流， 获得相应的式 (VIII) 化合物。
在存在适当选择的偶联剂 ( 如 HATU、 HBTU、 DCC 等 )、 适当选择的有机碱 ( 如 DIPEA、 TEA、 吡啶等 ) 的情况下， 将式 (VIII) 化合物与适当取代的式 (IX) 化合物 ( 已知的化合物或 通过已知方法制备的化合物， 其中 LG1 选自 -C(O)Cl 和 C(O)OH， 并且其中 LG1 连接在式 (IX) 化合物的苯并融合部分的苯环上的所需键合位置 ) 在有机溶剂 ( 如乙腈、 DMF、 DCM 等 ) 中 反应， 得到相应的式 (I) 化合物。
以下实例是为了帮助理解本发明而给出的， 并无意于且不应该被解释为以任何方 式限制实例后面的权利要求书中所列出的本发明。
在随后的实例中， 列出了一些已经作为残余物分离出来的合成产物。本领域技术 人员应该理解， “残余物” 不限制产物被分离时的物理状态， 并且可包括例如固体、 油状物、 泡沫、 胶状物、 浆状物等。
在室温下向 4- 氨基 -3- 羟基 - 苯甲酸甲酯 (5g， 29.91mmol)/CH3OH(150mL) 溶液加 入环己基甲醛 (3.6mL， 29.91mmol)。 将所得的混合物在室温下搅拌 2h。 通过蒸发去除溶剂， 将 CH3CN(150mL) 加入残余物中。 在 N2 气氛下加入一部分醋酸铅 (IV)(13.26g， 29.91mmol)， 将所得的混合物回流 10 分钟。冷却后， 过滤所得的固体并用 CH3CN 洗涤。然后向滤液加 入 3N NaOH(40mL)。在 50℃下将所得的混合物搅拌 18 小时。通过蒸发去除溶剂， 通过在 硅胶上进行快速柱色谱法纯化所得的残余物， 获得 2- 环己基 - 苯并 唑 -6- 羧酸。MS m/z(M+H+)246.2。
向 2- 环 己 基 - 苯 并唑 -6- 羧 酸 (0.47g， 1.9mmol) 和 HBTU(0.94g， 2.5mmol)的 DMF(10mL) 溶液加入 DIPEA(1.4mL， 7.6mmol)。在室温下将所得的混合物搅拌 10 分钟， 然后加入氮杂环丁烷 -3- 醇 (0.452g， 4.7mmol) 的盐酸盐。在室温下将所得的混合物搅拌 1 小时， 然后用反相液相色谱法纯化。冻干包含产物的馏分， 获得 (2- 环己基 - 苯并 唑 -6- 基 )-(3- 羟基 - 氮杂环丁 -1- 基 )- 甲酮。MS m/z(M+H+)301。
步骤 C ： 2- 环己基 -6-{[3-(4- 吡啶 -2- 基哌嗪 -1- 基 ) 氮杂环丁 -1- 基 ] 羰基 }
在 -40 ℃ 和 氮 气 气 氛 下 将 甲 基 磺 酰 氯 (0.152mL， 1.9mmol) 逐 滴 加 入 到 (2- 环 唑 -6- 基 )-(3- 羟 基 - 氮 杂 环 丁 -1- 基 )- 甲 酮 (0.48g， 1.6mmol) 和己基-苯并DIPEA(0.558mL， 3.2mmol) 的 DCM(20mL) 溶液中。加入之后立即移除冷却浴， 让混合物缓慢 升温至室温。 然后用水洗涤所得的混合物， 用硫酸镁进行干燥， 过滤， 并在减压下移除溶剂。 将所得的残余物溶解到乙腈 (1mL) 中。加入 DIPEA(0.41mL， 2.4mmol) 和 N-(2- 吡啶基 ) 哌 嗪 (1.6mmol)。然后在 160 ℃下将所得的混合物微波加热 4 小时。将 DMF(3mL) 加入所得 的混合物中， 然后用反相液相色谱法进行纯化。用 1N HCl(5mL) 稀释包含产物的馏分， 然 后冻干， 获得其相应盐酸盐形式的 2- 环己基 -6-{[3-(4- 吡啶 -2- 基哌嗪 -1- 基 ) 氮杂环 丁 -1- 基 ] 羰基 }-1， 3- 苯并
1唑。H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 9.21(s， 1H)， 8.15(d， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 7.96(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 7.81(br.s.， 1H)， 7.16-7.22(m， 1H)， 7.06(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.88(s， 1H) ， 4.54(br.s. ， 2H) ， 4.38(d ， J ＝ 6.6Hz ， 2H) ， 4.13(br.s. ， 1H) ， 3.73(br.s. ， 8H) ， 3.31-3.60(m ， 1H) ， 1.77(d ，J ＝ 13.7Hz ， 4H) ， 1.65(br.s. ， 1H) ， 1.32-1.44(m ， 2H) ， + 1.15-1.32(m， 2H)， 1.06(t， J ＝ 7.0Hz， 1H)。MS m/z(M+H )446。
可以根据以上实例 1 所述的步骤通过替换本领域技术人员已知的经适当选择和 / 或替代的试剂、 原料和纯化方法来相似地制备化合物 #2 至 28。
实例 2 ： ( 体外检测分析 ) ： MGL 酶活性测定
在 30μL 总体积的黑色 384- 孔聚丙烯 PCR 微孔板 (Abgene) 中进行所有基于 大鼠的检测分析。将底物 4- 甲基伞形酮丁酸酯 (4MU-B， Sigma) 和纯化的突变型 MGL 酶 (mut-MGLL 11-313 L179S L186S) 分别稀释到包含 150mM NaCl 和 0.001％吐温 20 的 20mM PIPES 缓 冲 剂 (pH 7) 中。 用 Cartisian Hummingbird 移 液 器 (Genomic Solutions(Ann Arbor， MI)) 将式 (I) 化合物预分散 (50nL) 到分析板中， 然后加入 4MU-B(25μL 的 1.2X 溶 液， 最终浓度为 10μM)， 接着加入酶 (5μL 的 6X 溶液， 最终浓度为 5nM) 以引发反应。最终 的化合物浓度在 17 至 0.0003μM 范围内。在 37℃下分别以 335nm 和 440nm 的激发和发射 波长， 以及 10nm 的带宽 (Safire2， Tecan) 监测因 4MU-B 裂解而发生的荧光变化， 时间为 5 分 钟。
使用 Excel， 由对作为抑制剂浓度函数的部分活性的浓度 - 响应图拟合公式， 测定 式 (I) 化合物的 IC50 值。
ThermoFluor(TF) 测定为基于 384 孔板的结合测定， 其可测量蛋白质的热稳定性 (Pantoliano， M.W.， Petrella， E.C.， Kwasnoski， J.D.， Lobanov， V.S.， Myslik， J.， Graf， E.， Carver， T.， Asel， E.， Springer， B.A.， Lane， P.， and Salemme， F.R.J Biomol Screen 2001， 6， 429-40(Pantoliano， M.W.、 Petrella， E.C.、 Kwasnoski， J.D.、 Lobanov， V.S.、 Myslik， J.、Graf， E.、 Carver， T.、 Asel， E.、 Springer， B.A.、 Lane， P. 和 Salemme， F.R.， 《生物分子筛选杂 志》 ， 2001 年， 第 6 卷， 第 429-440 页 ) ； Matulis， D.， Kranz， J.K.， Salemme， F.R.， and Todd， M.J.Biochemistry 2005， 44， 5258-66(Matulis， D.、 Kranz， J.K.、 Salemme， F.R. 和 Todd， M.， 《生物化学杂志》 ， 2005 年， 第 44 卷， 第 5258-5266 页 ))。实验使用得自来自 Johnson & Johnson Pharmaceutical Research & Development， LLC 的仪器来进行。所有实验中使用 的 TF 染料为 1， 8-ANS(Invitrogen ： A-47)。用于 MGL 研究的最终 TF 测定条件为溶于 50mM PIPES(pH ＝ 7.0) 中的 0.07mg/ml 纯化突变型 MGL(mut-MGLL 11-313 L179S L186S)、 100μM ANS、 200mM NaCl、 0.001％吐温 -20。
筛选化合物板包含单一浓度的 100％ DMSO 化合物溶液。 就后续浓度 - 响应研究而 言， 将化合物排列在预分散的板中 (Greiner Bio-one ： 781280)， 其中将连续 11 行中的化合 物连续稀释于 100％ DMSO 中。第 12 和 24 行用作 DMSO 参照物， 并且不包含化合物。对于 单个和多个化合物浓度 - 响应实验而言， 都是用 Cartesian Hummingbird 移液器 (Genomic Solutions(Ann Arbor， MI)) 将化合物等分试样 (50nL) 自动地直接预分散到黑色 384 孔 聚丙烯 PCR 微孔板 (Abgene ： TF-0384/k) 上。化合物分散后， 加入蛋白质和染料溶液， 获得 3μL 的最终测定体积。在测定溶液上铺一薄层 1μL 的硅油 (Fluka， DC 200 ： 85411 型 ) 以 防止蒸发。
用自动机将编上条码的分析板载入到恒温控制的 PCR- 型热块上， 然后所有的实 验均以 1℃ /min 的坡度速率从 40 加热至 90℃。采用紫外光 (Hamamatsu LC6) 连续照射以 测量荧光， 其中紫外光由光纤提供并通过带通滤光片 (380-400nm， ＞ 6 OD cutoff) 过滤。 通过使用过滤检测 500±25nm 的 CCD 相机 (Sensys， Roper Scientific) 测量光强度， 产生 同时和独立的所有 384 孔的读数， 来检测整个 384- 孔板的荧光发射。 各温度下收集 20 秒曝 光时间的单一影像， 并且记录分析板指定区域内像素强度相对于温度的加和， 并且与标准 公式拟合， 获得 Tm。(Pantoliano， M.W.， Petrella， E.C.， Kwasnoski， J.D.， Lobanov， V S.， Myslik， J.， Graf， E.， Carver， T.， Asel， E.， Springer， B.A.， Lane， P.， and Salemme， F.R.， J Biomol Screen 2001， 6， 429-40(Pantoliano， M.W.、 Petrella， E.C.、 Kwasnoski， J.D.、 Lobanov， V S.、 Myslik， J.、 Graf， E.、 Carver， T.、 Asel， E.、 Springer， B.A.、 Lane， P. 和 Salemme， F.R.， 《生物分子筛选杂志》 ， 2001 年， 第 6 卷， 第 429-440 页 ))。
实例 4 ： 2-AG 积累测定
将海拉细胞用 Polytron 在 10ml( 约 4 亿个细胞 )HEPES 缓冲液 (HEPES 20mM， pH 7.4， NaCl 125mM， EDTA 1mM， KCl 5mM， 葡萄糖 20mM) 中匀化。将得自 0.2 亿个细胞 (0.5ml) 的匀浆用 MGL 抑制剂温育 15 分钟， 以阻滞 MGL 活性， 然后将 HEPES 缓冲液用钙 (10mM) 温育 20 分钟。总的反应体积为 5ml。通过 6mL 有机溶剂萃取 (2 ∶ 1 氯仿 / 甲醇 ) 终止反应。将 甲基花生四烯基氟代膦酸酯 (MAFP) 用作阳性对照。 在不存在 MAFP 的情况下， 2-AG 水平为约 3.4 皮摩 / 样品。 在存在 100nM MAFP 的情况下， 2-AG 水平增至 174 皮摩 / 样品。 用 HPLC/MS 法根据以下公式测量有机相中积累的 2-AG ： ％ MAFP ＝ ( 化合物 2-AG/MAFP 2-AG)×100。
根据上文实例 2、 3 和 4 中所述的程序测试式 (I) 的代表性化合物， 结果列于表 4 中。
表4
实例 5 ： 口服制剂 - 假想实例
作为口服组合物的一个具体实施例， 将 100mg 的实例 1 中制备的化合物 #1 与充分 粉碎的乳糖一起配制， 以提供 580-590mg 的总量来填充 O 尺寸硬胶囊。
尽管上述说明书教导了本发明的原理， 以示例为目的提供了实例， 但应该理解本 发明的实施涵盖落入所附的权利要求及它们的等同形式的范围内的所有通常的变型形式、 改变形式和 / 或修改形式。
36