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1、(10)申请公布号 CN 103074272 A (43)申请公布日 2013.05.01 CN 103074272 A *CN103074272A* (21)申请号 201210550128.6 (22)申请日 2012.12.17 C12N 1/20(2006.01) A01N 63/00(2006.01) A01P 1/00(2006.01) A01P 3/00(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (71)申请人 漳州三炬生物科技有限公司 地址 363601 福建省漳州市南靖高科技工业 园 （靖城） (72)发明人 林克明 尤越 (74)专利代理机构 厦门市首创君合专。
2、利事务所 有限公司 35204 代理人 张松亭 (54) 发明名称 一 种 甲 基 营 养 型 芽 孢 杆 菌 （Bacillus methylotrophicus） 三炬 -04 及其应用 (57) 摘要 本 发 明 涉 及 一 种 甲 基 营 养 型 芽 孢 杆 菌 （Bacillus methylotrophicus） 三炬 -04 及其应 用， 该菌株保藏于保藏于武汉大学中国典型培养 物保藏中心， 保藏日期为 2012 年 5 月 16 日， 保藏 号为CCTCC No:M2012169。 本发明具有很好的防治 辣椒的青枯病、 柑橘的炭疽病功效， 且较为稳定， 无有毒的化学物残留， 不。
3、污染农产品和环境， 性价 比高和施用方便的优点。 其将在植物的青枯病、 炭 疽病的防治中发挥重要的作用， 应用前景广阔。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 8 页 序列表 1 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103074272 A CN 103074272 A *CN103074272A* 1/1 页 2 1. 一种甲基营养型芽孢杆菌 （Bacillus methylo trophicus） 三炬 -04， 保藏于保藏 于武汉大学中国典型培养物保藏中心， 。
4、保藏日期为 2012 年 5 月 16 日， 保藏号为 CCTCCNo. M2012169。 2. 如权利要求 1 所述的一种甲基营养型芽孢杆菌三炬 -04， 其特征在于 ： 其菌株的 16SrRNA 基因序列如 SEQ ID NO1 所示。 3. 如权利要求 1 所述的一种甲基营养型芽孢杆菌三炬 -04 的用途， 其特征在于 ： 其用 于防治植物的青枯病或炭疽病。 4. 如权利要求 1 所述的一种甲基营养型芽孢杆菌三炬 -04 的用途， 其特征在于 ： 其用 于防治辣椒的青枯病或柑橘的炭疽病。 5. 如权利要求 1 所述的一种甲基营养型芽孢杆菌三炬 -04 的使用方法， 其特征在于 ： 将其。
5、发酵， 制成发酵液使用。 6. 如权利要求 5 所述的一种甲基营养型芽孢杆菌三炬 -04 的使用方法， 其特征在 于 ： 所述的发酵为液体发酵， 以 1-10% 接种量接种发酵罐， 进行好氧深层发酵， 发酵温度 20-30， 发酵周期 36-45h。 7. 如权利要求 6 所述的一种甲基营养型芽孢杆菌三炬 -04 的使用方法， 其特征在 于 ： 液体发酵培养基包括 ： 蔗糖 0.5-2%、 酵母膏 0.5-2%、 磷酸二氢钾 0.05-0.02%、 硫酸镁 0.01-0.10%、 氯化钠 0.01-0.10%、 碳酸钙 0.01-0.10%、 pH5-9。 8. 如权利要求 5 所述的一种甲基。
6、营养型芽孢杆菌三炬 -04 的使用方法， 其特征在于 ： 发酵液再制成液体产品或固体产品使用。 9. 如权利要求 8 所述的一种甲基营养型芽孢杆菌三炬 -04 的使用方法， 其特征在于 ： 发酵液中加入稳定剂后， 经无菌灌装即为液体产品。 10. 如权利要求 8 所述的一种甲基营养型芽孢杆菌三炬 -04 的使用方法， 其特征在于 ： 固态产品为 ： 把发酵液按 10-20% 的比例喷洒在灭菌后的有机培养基上， 混合搅拌均匀， 在 放置至少 10h 后包装成袋。 权 利 要 求 书 CN 103074272 A 2 1/8 页 3 一种甲基营养型芽孢杆菌 （Bacillus methylotro。
7、phicus） 三炬 -04 及其应用 技术领域 0001 本发明涉及一株甲基营养型芽孢杆菌与具体应用， 特别是涉及一株甲基营养型芽 孢杆菌 （Bacillus methylotrophicus） 三炬 -04 菌及其菌剂与该菌剂在防治植物病害中的 应用。 背景技术 0002 青枯病是一种广泛分布于热带、 亚热带和某些温带地区的世界性病害， 是多种农 作物减产的主要原因， 在我国福建、 广东、 广西、 四川、 云南、 湖南、 江西、 浙江、 上海、 江苏、 安 徽等省、 市 （区） 都有分布。辣椒的青枯病是辣椒种植过程中最为严重的土传病害之一， 由于 近几年塑料大棚辣椒春早熟和秋延迟栽培的迅速。
8、发展， 辣椒青枯病呈逐步上升趋势。春早 熟栽培从刚进入盛花结果期 ( 一般在 5 月上旬 ) 开始发生， 秋延迟栽培从 10 11 月份开 始发生。一旦发生， 损失严重， 常常造成 20 30的死亡， 严重的高达 50以上。秋延迟 栽培比春早熟栽培为害更为突出， 也是近年来影响辣椒种植的突出问题。 0003 柑桔炭疽病是一种世界性的、 为害较重的病害。可引起落叶、 枝梢枯死， 严重时会 造成连片的果园感染， 树捎全部枯死， 损失惨重， 2007 年广东的德庆柑橘产区就出现了大面 积感染炭疽病， 造成严重减产， 是一种毁灭性的病害。 对于轻微的果实感染会造成果实腐烂 及落果， 带病果实常在贮运期。
9、间发生腐烂， 所以又是一种重要的采后病害。 柑桔炭疽病对我 国的柑橘主产区福建、 广东、 江西、 四川都造成过严重的危害和较大经济损失， 对柑橘产业 的发展造成严重影响。 0004 对于以上病害传统防治方法大都采用化学农药， 然而化学农药效果大都不显著， 却同时带来了环境污染、 化学残留等副作用， 对农产品的质量造成不良影响。对此， 具有污 染小、 而且对人畜毒性小、 环境兼容性好、 病虫害不易产生抗性等优点的生物修复技术应运 而生。生物修复剂是利用微生物本身或其代谢物防治和修复病、 虫、 杂草等影响的生物制 剂， 其更符合现代社会对农业生产要求。目前我国在生物修复剂生产始终未能形成规模产 业。
10、。生物修复剂和生物农药在农药总量中的占有量只为 4% 左右， 与发达国家相比还有较 大差距。近年来， 我国开发的生物修复剂、 生物农药及其它高新技术越来越受到国际生物、 农药界的关注。但在品种、 剂型、 质量和数量方面与发达国家相差甚远， 仍远远不能满足国 内外市场的需求。 发展生物修复剂、 生物农药产业对保证农业可持续发展、 保障人们的生命 与健康、 保护生态环境都十分重要， 将为我国农产品出口创造十分有利的条件， 极大地增强 我国农产品的国际竞争力。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一株对植物青枯病、 炭疽病具有防治作用的甲基营养型芽孢 杆菌。 该甲基营养型芽孢杆菌 （Bacillu。
11、s methylotrophicus） 三炬-04CCTCC No.M2012169， 该菌株已于 2012 年 5 月 16 日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心， 保藏编号 说 明 书 CN 103074272 A 3 2/8 页 4 CCTCCNo.M2012169。 0006 所 述 的 一 种 甲 基 营 养 型 芽 孢 杆 菌 （Bacillus methylotrophicus）三 炬 -04CCTCCNo.M2012169， 其菌株的 16S rRNA 基因序列如序列表中 SEQ ID NO1 所示。 0007 本发明的另一目的在于提供所述的一种甲基营养型芽孢杆菌三炬 -04。
12、 的用途， 其 用于防治植物的青枯病或炭疽病。尤其是用于防治辣椒的青枯病或柑橘的炭疽病。 0008 本发明的再一目的在于提供前述的甲基营养型芽孢杆菌三炬 -04 的使用方法， 即 将其发酵， 制成发酵液使用。 0009 在本发明的较佳实施例中， 所述的发酵为液体发酵， 以 1-10% 接种量接种发酵罐， 进行好氧深层发酵， 发酵温度 20-30， 发酵周期 36-45h。 0010 在本发明的较佳实施例中， 液体发酵培养基包括 ： 蔗糖 0.5-2%、 酵母膏 0.5-2%、 磷 酸二氢钾0.05-0.02%、 硫酸镁0.01-0.10%、 氯化钠0.01-0.10%、 碳酸钙0.01-0.1。
13、0%、 pH5-9。 0011 在本发明的较佳实施例中， 发酵液再制成液体产品或固体产品使用。 0012 在本发明的较佳实施例中， 发酵液中加入稳定剂后， 经无菌灌装即为液体产品。 0013 在本发明的较佳实施例中， 固态产品为 ： 把发酵液按 10-20% 的比例喷洒在灭菌后 的有机培养基上， 混合搅拌均匀， 在放置至少 10h 后包装成袋。 0014 本发明的有益效果是 ： 0015 本发明提供了一株对辣椒的青枯病、 柑橘的炭疽病具有较高防治效果的甲基营养 型芽 孢杆菌 （Bacillus methylotrophicus） 三炬 -04CCTCC No.M2012169 及其菌剂。该菌 。
14、剂具有很好的防治和修复辣椒的青枯病、 柑橘的炭疽病功效， 且较为稳定， 无有毒的化学物 残留， 不污染农产品和环境， 性价比高和施用方便的优点。本发明将在辣椒的青枯病、 柑橘 的炭疽病的防治中发挥重要的作用， 应用前景广阔。 附图说明 0016 图 1 为本发明菌种的显微照片图 （放大 1000 倍） 具体实施方式 0017 以下通过具体实施方式进一步描述本发明 ： 0018 实施例 1 菌种分离和鉴定 0019 甲基营养型芽孢杆菌 （Bacillus methylotrophicus） 三炬-04CCTCC No.M2012169 菌的分离 ： 采集福建省南靖县和溪镇乐土村六斗山 （东经11。
15、7130“， 北纬245620“， 海拔 360 米） 的土壤， 从该土壤中通过营养琼脂平板分离获得一株甲基营养型芽孢杆菌， 命名为三炬 -04， 已于 2012 年 5 月 16 日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心， 保藏 编号 CCTCC No.M2012169。经鉴定， 该菌为甲基营养型芽孢杆菌， 具有以下特征 ： 单个细胞 0.7 0.82 3 微米， 着色均匀。无荚膜， 周生鞭毛， 能运动。革兰氏阳性菌， 芽孢 0.6 0.91.0 1.5 微米， 椭圆到柱状， 位于菌体中央或稍偏， 芽孢形成后菌体不膨大。菌落表 面粗糙不透明， 污白色或微黄色， 在液体培养基中生长时， 常形成皱。
16、醭， 需氧菌， 适宜生长温 度 28 30， 适宜 pH 值为 5-9。菌种的显微照片见图 1。 0020 菌株三炬 -04 生理生化特性 0021 表型及生理生化特性 - 酶活、 碳源同化 说 明 书 CN 103074272 A 4 3/8 页 5 0022 0023 0024 + ： 阳性反应 ； ： 阴性反应 ； W: 弱阳性反应 0025 生理生化特性一碳源同化 0026 说 明 书 CN 103074272 A 5 4/8 页 6 0027 + ： 阳性反应 ； ： 阴性反应 ； W: 弱阳性反应 0028 菌株三炬 -04 的 16S rRNA 基因序列 0029 TGCAAGT。
17、CGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGG 0030 GTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACC 0031 GGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGC 0032 TTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAA 0033 CGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACAC 0034 TGGGACTGAG。
18、ACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTC 0035 CGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTC 0036 GGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGG 0037 CACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCG 0038 CGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGGCGTAAAGGGCTCG 0039 CAGGCGGTTTCT。
19、TAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTC 0040 ATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGT 0041 AGCGGTGAAATGCGTAGAGATGGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCT 0042 AGCGGTGAAATGCGTAGAGAATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCT 0043 CTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTA 0044 GATACCCTGGTAGTCCACGCC。
20、GTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTC 0045 CGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTC 说 明 书 CN 103074272 A 6 5/8 页 7 0046 GCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCA 0047 TGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTG 0048 ACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCA。
21、T 0049 GGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGC 0050 AACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGG 0051 TGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGAC 0052 CTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGA 0053 GGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCG 00。
22、54 ACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATA 0055 CGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACC 0056 CGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCC 0057 根据上述检测结果， 将该菌株鉴定为 ： 0058 菌株三炬 -04 ： 甲基营养型芽孢杆菌 （Bacillus methylotrophicus） 0059 实施例 2 菌剂制备 0060 （1） 培养基 ： 斜面培养基 ： 蛋白胨 5.0g、 牛肉膏 3.0g、 土壤浸出液。
23、 250ml、 琼脂 18g、 蒸馏水 750ml、 pH7.2-7.5 ； ( 土壤浸出液 ： 土壤 50g， 加水 200ml， 灭菌 1h, 过滤补水至 250ml。) 液体种子培养基 ： 葡萄糖 1.2%、 酵母膏 0.75%、 磷酸二氢钾 0.1%、 硫酸镁 0.05%、 碳酸钙 0.08%、 pH7.2 ； 液体发酵培养基 ： 蔗糖 1.0%、 酵母膏 0.65%、 磷酸二氢钾 0.08%、 硫 酸镁 0.05%、 氯化钠 0.02%、 碳酸钙 0.05%、 pH7.2。 0061 （2） 生产斜面制备 ： 把配制好的斜面培养基在灭菌锅中 121、 25 分钟灭菌后， 取 出斜置冷。
24、却至室温， 取出保藏斜面， 于无菌室中转管， 1 支保藏斜面转三支生产斜面， 接种好 的生产斜面置于培养箱中 28恒温培养 2-3 天， 即可进行生产接种 ； 0062 （3） 液体种子制备 ： 液体种子培养基配制好后分装于 1000ml 三角瓶中， 置于灭菌 锅 121、 25 分钟灭菌后， 冷却至室温， 取生产斜面接种于三角瓶中， 一支生产斜面接种三 个三角瓶， 接种后置于摇床中 28培养 30-40h 后， 为一级成熟种子 ； 即可接种于二级种子 培养， 接种量为 5%， 培养温度为 28， 时间 28-35h ； 以 5% 接种量接种于种子罐， 28培养 24-30h。 0063 （4。
25、） 液体发酵 ： 以 3% 接种量接种发酵罐， 进行好氧深层发酵， 通风量 ： 1 0.25 0.75（m/m） , 发酵温度 28， 发酵周期 36-45h, 发酵结束以显微镜镜鉴芽孢率 （90%） 来判 定发酵周期的结束。 0064 （5）产品 ： 液体产品 ： 发酵液中加入一定量稳定剂后， 无菌灌装成液体产品 （500-1000ml/ 瓶） ； 固态产品 ： 在无菌包装车间中， 把发教液按 15% 的比例喷洒在灭菌后 的有机培养基 （麸皮） 上， 混合搅拌均匀， 24h 后包装成袋 （20kg/ 袋） 。该两种产品即 为甲基 营养型芽孢杆菌 （Bacillus methylotrophi。
26、cus） 三炬 -04CCTCC No.M2012169。 0065 生产的菌剂产品经过长期的实验室实验和田间试验， 确定具有防治辣椒的青枯 病、 柑橘的炭疽病， 促进作物生长增加作物产量等功能。 0066 实施例 3 对辣椒促生长作用实验 0067 取生长状况， 健康程度都一样的辣椒苗 60 棵， 移栽时设三种处理 ： 添加固态菌剂 作底肥 （一次施用） 、 液体菌剂兑水 400 倍灌根 （三次施用） 和不添加菌剂作底肥以清水为对 说 明 书 CN 103074272 A 7 6/8 页 8 照， 其他的栽培管理措施都一样。30d 调查促进辣椒植株生长的效果。 0068 表 1 菌剂对辣椒生。
27、长的影响 0069 项目 （处理）固态菌剂 液体菌剂 Ck（清水） 单株株高 （cm）79.2173.5866.15 单株地上部分鲜重 （g）29.6628.7220.60 单株根鲜重 （g）1.901.771.02 0070 从表 1 可以看出菌剂对辣椒植株的生长具有明显的促进作用。 0071 实施例 4 对辣椒青枯病防治试验 0072 三炬 -04 菌剂液体 ： 含菌量 2 亿 /ml, 固态 ： 含菌量 2 亿 / 克， 72% 农用硫酸链 霉素 （华北制药股份有限公司生产） ， 供试青枯病菌 （劳尔氏菌 Ralstonia solanacearum） 为 福建农科院提供， 供试辣椒品种。
28、明椒 3 号、 中椒 11 号， 供试病菌于 LB 和 NA 培养基在往复式 摇床 93rpm、 28 度震动培养 35-40h。田间小区试验地点选择南靖县龙山镇， 试验共设四个 处理， 分别为固态三炬 -04 菌剂、 液体三炬 -04 菌剂、 72% 农用硫酸链霉素 （2000 倍稀释） 和 清水对照。试验在辣椒苗移栽时进行 ： 、 固态三炬 -04 菌剂在移栽时每亩用量 100 公斤， 直接施入穴中后再栽上辣椒苗， 本项处理整个过程只一次 ； 、 液体三炬 -04 菌剂兑水稀释 400 倍， 移栽时当定根水浇灌， 后每隔 10 天浇灌一次连续两次， 用量每株 10ml， 整个过程罐 根共计。
29、 3 次 ； 、 72% 农用硫酸链霉素兑水稀释 2000 倍， 施用方法与处理 2 相同 ； 清水， 施 用与处理 2 相同。其他的栽培管理措施都一样， 每处理三次重复， 每小区 22 平方米。出现 发病后， 每 10 天调查一次各处理区的发病情况， 计算发病率， 并最终测定各处理区的产量。 同时在各处理区随机抽取 15 株， 测其平均株高。 0073 处理后结果分析见表 2 ： 用固态三炬 -04 菌剂处理的效果， 略高于液体三炬 -04 菌 剂处理的效果， 液体三炬-04菌剂处理效果明显要好于链霉素的效果， 说明三炬-04菌剂对 辣椒的青枯病的防治有显著的效果。 从防治效果看， 固态菌剂。
30、要优于液体菌剂， 从成本角度 分析液体菌剂要优于固态菌剂。 0074 表 2 ： 三炬 -04 菌剂对辣椒青枯病抗病防治增产效果 0075 0076 从表 2 的株高和产量可以看出有用菌剂的辣椒株高明显高于链霉素和对照， 产量 也分别提高了 26.96%、 72.22% 和 18.9%、 60.18%， 说明菌剂对辣椒抗病增产效果是非常显著 说 明 书 CN 103074272 A 8 7/8 页 9 的。 0077 实施例 5 对柑橘炭疽病的防治试验 0078 试验方法 ： 0079 处理 ： 甲基营养型芽孢杆菌 （Bacillus methylotrophicus） 三炬 -04 液体菌剂。
31、 兑水稀释 400 倍 ； 0080 处理 ： 25% 吡唑醚菌酯 EC 兑水稀释 2000 倍 ； 0081 处理 ： 20% 苯醚甲环唑 EW 兑水稀释 4000 倍 ； 0082 处理 ： CK 清水对照 0083 各取 8 年生处于盛产期并在上一年度出现过炭疽病危害柑橘 6 棵作为处理一小 区， 每个处理设三个重复， 共计 12 小区。从柑橘炭疽病的初发期开始喷药， 喷药工具为手摇 式喷雾器， 喷药的用水量约为每亩 400 斤 （即 3000kg/hm2） , 均匀喷施于柑橘的叶面、 叶背、 枝干和果实， 喷至叶面稍滴水为止， 每隔 7 天喷一次药， 连喷 3 次。 0084 在用药前。
32、、 第一次用药后 7 天、 14 天 （第二次用药后 7 天） 和 21 天 （第三次用药后 7 天） 各调查一次， 共调查 4 次。每小区调查 3 株柑橘树， 每株随机抽查 10 条叶梢， 调查新梢 全部叶片， 每片叶病斑情况和病级， 同时观察果实生长情况， 记录叶片总数、 病叶数， 计算病 情指数及平均防效， 病叶分级标准 ： 0 级 ： 无病斑 ； 1 级 ： 病斑面积占整个叶片面积的 5以 下 ； 3级 ： 病斑面积占整个叶片面积的615； 5级 ： 病斑面积占整个叶片面积的16 25； 7级 ： 病斑面积占整个叶片面积的2650； 9级 ： 病斑面积占整个叶片面积的51 以上。试验结。
33、果见表 3。 0085 表 3 ： 三炬 -04 菌剂对柑橘炭疽病的效果 0086 0087 表 4 ： 第一次施药后 7 天防效方差分析 0088 0089 表 5 ： 第二次施药后 7 天防效方差分析 说 明 书 CN 103074272 A 9 8/8 页 10 0090 0091 表 6 ： 第三次施药后 7 天防效方差分析 0092 0093 从表 3 可以看出 ： 0094 甲基营养型芽孢杆菌 （Bacillus methylotrophicus） 三炬 -04 液体菌剂兑水稀释 400倍平均防效与25%吡唑醚菌酯EC兑水稀释2000倍和20%苯醚甲环唑EW兑水稀释4000 倍的平均防效相当， 甲基营养型芽孢杆菌的防效略好于 2 种对照药剂。 0095 从统计分析结果表 4、 表 5、 表 6 可以看出， 第一次施药后 7 天， 各药剂处理的显著 水平值为 0.240， 说明各药剂之间无显著性差异。第二次施药后 7 天和第三次施药后 7 天， 显著水平值分别为 0.007 和 0.005， 说明各药剂处理防效之间有显著性差异。 说 明 书 CN 103074272 A 10 1/1 页 11 0001 序 列 表 CN 103074272 A 11 1/1 页 12 图 1 说 明 书 附 图 CN 103074272 A 12 。