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1、(10)申请公布号 CN 103146585 A (43)申请公布日 2013.06.12 CN 103146585 A *CN103146585A* (21)申请号 201310063383.2 (22)申请日 2013.02.28 CCTCC NO ： M2012436 2012.10.28 C12N 1/14(2006.01) C12G 3/02(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (71)申请人 贵州大学 地址 550025 贵州省贵阳市花溪区贵州大学 （北区） 科技处 申请人 贵州青酒集团有限责任公司 (72)发明人 邱树毅 胥思霞 王晓丹 吴海 胡靖 (74)。
2、专利代理机构 贵阳东圣专利商标事务有限 公司 52002 代理人 袁庆云 (54) 发明名称 一种紫色红曲霉及其用途 (57) 摘要 本发明公开了一种紫色红曲霉及其用途， 其 形态特征 ： 该菌株在 MEA 平板上， 31， 7d， 菌落直 径6770mm， 菌落平坦， 稀疏至中度密集， 有时具 有少量而且短的气生菌丝， 然而通常丛卷毛状， 菌 丝体初为白色， 随菌落成熟而变成橙色 ； 而在 CA 培养基平板上， 菌落直径2730mm， 菌落隆起， 稀 疏， 表面质地呈丛毛状， 菌丝体白色， 背面呈淡色 或橙红色。 本紫色红曲霉200855对己酸乙酯的酯 化力高， 对自然环境条件的适应范围广，。
3、 对不良环 境的耐受力强， 容易培养和保存及工业化生产， 生 产成本低， 不污染环境。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 103146585 A CN 103146585 A *CN103146585A* 1/1 页 2 1. 一种紫色红曲霉 200855 （Monascus purpureus 200855） ， 其特征在于所述菌种的保 藏号为 CCTCC NO: M 2012436。 2. 如权利要求 1 所述的紫色红曲霉 200。
4、855 在产香脂液中的用途。 权 利 要 求 书 CN 103146585 A 2 1/3 页 3 一种紫色红曲霉及其用途 技术领域 0001 本发明涉及生物技术领域， 具体来说涉及一种紫色红曲霉， 同时还涉及该紫色红 曲霉在产香脂液中的用途。 0002 背景技术 0003 众所周知， 中国浓香型白酒酿制传统工艺是在窖池内进行的， 酒窖愈老酒质愈好， 同时， 浓香型白酒是是中国白酒品种中产量最大、 市场占有率最广的一类白酒， 在人们日常 生活中扮演着十分重要的角色。但是， 就目前而言优质浓香型白酒在生产时还面对着诸如 生产周期长、 优质频率低和生产成本较高等亟待解决的问题。 己酸乙酯， 作为浓。
5、香型白酒的 主要香味成分之一， 其含量高低直接决定了浓香型白酒的优质品率。 研究发现， 细菌、 酵母、 霉菌都可以用于酯香液的生产， 这类微生物被称作酯化微生物， 但是广泛用于香酯液生产 的微生物并不多。 0004 发明内容 0005 本发明的目的在于克服上述问题而提供的一种对己酸乙酯的酯化力高， 对自然环 境条件的适应范围广， 对不良环境的耐受力强， 容易培养和保存及工业化生产， 生产成本 低， 不污染环境的紫色红曲霉。 0006 本发明的另一目的在于提供该紫色红曲霉在产香脂液中的用途。 0007 一种腐霉属菌种， 其形态特征 ： 该菌株在 MEA 平板上， 31， 7d， 菌落直径 67 。
6、70 mm， 菌落平坦， 稀疏至中度密集， 有时具有少量而且短的气生菌丝， 然而通常丛卷毛状， 菌丝 体初为白色， 随菌落成熟而变成橙色 ； 而在 CA 培养基平板上， 菌落直径 27 30mm， 菌落隆 起， 稀疏， 表面质地呈丛毛状， 菌丝体白色， 背面呈淡色或橙红色。 0008 该菌种已于 2012 年 10 月 28 保藏在中国典型培养物保藏中心 （地址 ： 中国 武 汉 武汉大学） ， 保藏号 ： CCTCC NO: M2012436， 名称为 ： 紫色红曲霉 200855（Monascus purpureus 200855） （一） 对紫色红曲霉 200855（Monascus p。
7、urpureus 200855） 的分离步骤 ： 称取 25g 大曲及糟醅样品放入盛 225ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中， 振荡约 20min。取 1ml 样品悬液进行 10 倍梯度稀释分别由 10-3、 10-4、 10-5 稀释度的样品悬液中 各取 0.1ml 涂布于分离培养基上， 30静止培养 7d， 挑取具有透明圈的单菌落进一步筛选， 选择透明圈大的菌落反复划线分离纯化菌株接种到斜面培养基上保藏 . （二） 培养基 ： 保藏培养基 ： 麸皮浸出液培养基， 麸皮250g/L， 葡萄糖20g/L， 酵母粉5g/L， 琼脂15g/L， pH 自然。 0009 固体发酵培养基 ： 麸皮。
8、培养基。 说 明 书 CN 103146585 A 3 2/3 页 4 0010 鉴定培养基 ： 查氏培养基 （CA） ， 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 （PDA） ， 麦芽汁琼脂培养 基 （MEA） ， 麸皮浸出液培养基。 0011 （三） 菌种的保种和传代 ： 麸皮浸出液培养基， 麸皮 250g/L， 葡萄糖 20g/L， 酵母粉 5g/L， 琼脂 15g/L， pH 自然。 0012 保存方法有 3 种 ： （1） 每周一次， 从已长满的平板上切取一块带菌丝的琼脂培养基块转种到新的平板上。 0013 （2） 用 15200mm 的试管， 盛琼脂培养基 5ml， 做成斜面， 接种真菌， 25培养。
9、 2 3 天， 倒 10ml 左右灭菌石蜡油覆盖其上， 置 25保存。3 个月转种一次。 0014 （3） 水保存法。用 10100mm 带盖试管， 加蒸馏水 3ml， 亚麻籽 3 粒， 高温消毒， 冷 却， 无菌条件下取 2 带菌丝的琼脂块 （约 50 mm2） 加于其中， 加盖， 置 25， 半年转种一次。 0015 （四） 菌种的生态特征 ： 该菌形成的菌落在 MEA 平板上， 31， 培养 7d， 菌落直径 67 70 mm， 菌落平坦， 稀疏 至中度密集， 有时具有少量而且短的气生菌丝， 然而通常丛卷毛状， 菌丝体初为白色， 菌丝 有隔膜， 分生孢子单生， 呈倒梨型 812811m 。
10、； 闭囊壳单身在似柄的菌丝上， 直径 （25） 4560（70 ； ） m， 成熟子囊果直径在 60m 左右， 发育中的闭囊壳和分生孢子极多随菌落 成熟而变成橙色。 0016 （五） 菌种的培养特性 （1） 培养温度 20 34， 最适温度 30 34 ； （2） . 培养 pH 5 12 ； 最佳范围为 9 11。 0017 菌丝有隔膜， 分生孢子单生， 呈倒梨型 812811m ； 闭囊壳单身在似柄的菌丝 上， 直径 （25） 4560（70 ； ） m， 成熟子囊果直径在 60m 左右， 发育中的闭囊壳和分生 孢子极多， 根据根据真菌鉴定手册描述， 鉴定该菌株属于红曲属 （Monascu。
11、s） ， 将这一菌株 记为紫色红曲霉 200855（Monascus purpureus 200855） 。 0018 本发明与现有技术相比， 具有明显的有益效果， 从以上技术方案可知 ： 本发明的紫 色红曲霉 200855 对己酸乙酯的酯化力高， 对温度、 pH 等自然环境条件的适应范围广， 对不 良环境的耐受力强， 容易培养和保存及工业化生产， 生产成本低， 不污染环境， 不破坏生态 平衡。 0019 具体实施方式 0020 本发明的紫色红曲霉 200855（Monascus purpureus 200855） 分离方法 ： 从贵州 省黔东南苗族侗族自治州镇远县青溪镇五里牌贵州某酒厂酒曲中。
12、,称取25g大曲及糟醅样 品放入盛 225ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中 , 振荡约 20min。取 1ml 样品悬液进行 10倍梯度稀释分别由10-3、 10-4、 10-5 稀释度的样品悬液中各取0.1ml涂布于分离培养基 上,30静止培养7d, 挑取具有透明圈的单菌落进一步筛选,选择透明圈大的菌落反复划 线分离纯化菌株接种到斜面培养基上保藏 . 该菌形成的菌落在 MEA 平板上， 31， 培养 7d， 菌落直径 67 70 mm， 菌落平坦， 稀疏 至中度密集， 有时具有少量而且短的气生菌丝， 然而通常丛卷毛状， 菌丝体初为白色， 菌丝 有隔膜， 分生孢子单生， 呈倒梨型 8128。
13、11m ； 闭囊壳单身在似柄的菌丝上， 直径 （25） 说 明 书 CN 103146585 A 4 3/3 页 5 4560（70 ； ） m， 成熟子囊果直径在 60m 左右， 发育中的闭囊壳和分生孢子极多随菌落 成熟而变成橙色。 0021 产酯能力测定 ： 吸取50ml馏出液， 加2滴5g/L酚酞指示剂， 用0.1mol/L NaOH标准 溶液滴定至微红。再准确加入 0.1mol/L NaOH 标准溶液 25ml， 于沸水浴中回流皂化 30min， 冷却后用 0.1mol/L 硫酸 （1/2H2SO4） 标准溶液滴定到酚酞粉红色消失为终点。根据下式计 算， 酯化力 mg/g=（c1V1-。
14、 c2V2） 144100/501/m， 式中， c1， V1 为 NaOH 标准溶液浓度 与加入体积 ； c2， V2 为硫酸 （1/2 H2SO4） 标准溶液的浓度于消耗体积 ； 144 为消耗 1ml 1mol/ LNaOH 标准溶液相当于己酸乙酯的质量， mg/mmol ； 50 为吸取馏出液体积 ； 100 为馏出液体 积 ； 5 为麸曲质量， g。酯化力是以 1g 干曲在 3032反应 100h 所产生的己酸乙酯的毫克 （mg） 数表示。 0022 该菌株对己酸乙酯的酯化力达 62.79mg/g， 作为己酸乙酯脂肪酶产生菌有着较大 的潜力。 0023 结论 ： 从浓香大曲中得到一株产己酸乙酯脂肪酶的菌株， 综合形态特征及 18r RNA 系统发育分析， 将菌株 200855 鉴定为紫色红曲霉 200855（Monascus purpureus 200855） 。并且对该菌株进行了生理生化能力的研究， 经测定， 该菌的己酸乙酯酯化力在以 见报道的文献中处于较高水平， 可作为己酸乙酯香酯液产生菌用于工业生产。 说 明 书 CN 103146585 A 5 。