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1、(10)申请公布号 CN 102977066 A (43)申请公布日 2013.03.20 CN 102977066 A *CN102977066A* (21)申请号 201210522278.6 (22)申请日 2012.12.07 C07D 311/36(2006.01) C07D 311/40(2006.01) (71)申请人 山东大学 地址 250100 山东省济南市历城区山大南路 27 号 (72)发明人 张成如 (74)专利代理机构 济南舜源专利事务所有限公 司 37205 代理人 张建成 (54) 发明名称 大豆中异黄酮的提取与纯化方法 (57) 摘要 本发明属于植物提取技术领域。
2、， 尤其涉及一 种从大豆中提取与纯化异黄酮的方法。本发明主 要涉及从大豆中提取并纯化异黄酮的方法， 主要 目的是得到和天然大豆成分一致的大豆异黄酮产 品， 能够符合国家中药生产的要求， 进而开发出中 药产品。本发明的提取方法简单， 设备要求低， 经 醇提后进行萃取并经硅胶柱层析， 可以使大豆异 黄酮的提取率超过 50%， 为从大豆中提取异黄酮 化合物提供了一种新途径， 对于充分利用植物资 源和开发高天然药物具有重要意义。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1。
3、. 大豆中异黄酮的提取与纯化方法， 其特征在于 ： 包括以下步骤 ： （1） 原料准备 ： 取干燥大豆粉碎成粒径为 40 -80 目 ； （2）醇提 ： 按每 20004000mL 5080% 乙醇加入 10kg 原料的比例回流提取 24h， 过 80500 目孔径筛， 取滤液， 上述的提取重复 25 次 ； （3 合并滤液， 浓缩至乙醇浓度 2.5% 浓缩液 ； （4） 萃取 ： 将浓缩液在浓缩体积 25 倍的乙酸乙酯中萃取 24h， 过 80500 目孔径筛， 上 述萃取重复 25 次 ； （5） 将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓度 2.5% ； （6） 硅胶柱层析 ： 按硅胶柱体体积 812。
4、 倍量取乙酸乙酯萃取液经硅胶柱层析 ； 所述硅 胶粒径 100-300 目 ； （7） 洗脱 ： 用丙酮含量为 1050% 的石油醚 - 丙酮混合液洗脱 ； （8） 收集洗脱液， 经过 ODS 高效液相制备柱， 将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得 到大豆中的异黄酮类化合物 ； (9) 干燥、 计算大豆异黄酮的提取率。 2.如权利要求1所述的大豆中异黄酮的提取与纯化方法， 其特征在于 ： 所述的步骤 （6） 中的硅胶粒径优选为 100-200 目。 3.如权利要求1所述的大豆中异黄酮的提取与纯化方法， 其特征在于 ： 所述的步骤 （8） 中的 ODS 是十八烷基硅烷键合硅胶柱。 权 利 要 求。
5、 书 CN 102977066 A 2 1/3 页 3 大豆中异黄酮的提取与纯化方法 技术领域 0001 本发明属于植物提取技术领域， 尤其涉及一种从大豆中提取与纯化异黄酮的方 法。 背景技术 0002 大豆异黄酮是大豆生长中的次级代谢产物， 存在于大豆胚芽及子叶中包括大豆异 黄酮甙和大豆异黄酮甙元。经过多年的研究， 发现大豆异黄酮有多种重要的生理功能和营 养作用， 并逐渐成为研究的一个主要方向， 特别是对诸多病症的预防和抑制作用。 流行病学 调查研究表明， 一些疾病如乳腺癌、 前列腺炎、 结肠炎、 心脏病和骨质疏松症等在西方国家 的发病率远远高于东方国家。科学家对这种现象进行了分析后认为 ：。
6、 东、 西方的饮食差异 是造成这种疾病发病率的主要原因。亚洲人大量食用豆制品， 其人均消费量是西方国家的 20-40倍， 并发现亚洲人食物中含有大量异黄酮类物质。 亚洲人血或尿中的异黄酮类物质及 其代谢产物的水平均是西方人的 20 倍以上。在做了大批对照实验之后， 他们提出 ： 饮食中 的异黄酮类物质具有防癌和治疗乳腺癌、 前列腺炎、 结肠癌、 心血管病和骨质疏松症等疾病 的功效。证实异黄酮类物质是造成这种差异的原因。 0003 有关大豆异黄酮提取工艺的研究， 如美国专利 US5679806 公开的分离与纯化大 豆异黄酮的方法， 该方法以大豆糖蜜或脱脂大豆粉为原料， 经过三步反应分别得到较纯的。
7、 大豆异黄酮甙和大豆异黄酮甙元， 没有得到纯度较高的总大豆异黄酮。且该工艺存在以下 不足 ： 1. 用甲醇进行浸提， 浸提后大豆废渣不能再做饲料或他用。 0004 2. 柱层析时用甲醇作淋洗剂， 残留甲醇对人体有害。 0005 3. 用聚甲基丙烯酸甲酯进行柱层析， 价格较高， 不易于工业化生产。 0006 公开号为 CN 1174839A 的中国专利公开了从大豆废糖蜜中回收异黄酮的方法。 该方法主要目的是得到大豆异黄酮甙元， 但该工艺采用离心分离进行浓缩， 用昂贵的酶水 解， 工业化不易实现。公开号为 CN 1211573 的中国专利公开了一种提取大豆异黄酮的方 法， 该方法以大豆粉为原料， 。
8、用正己烷脱去脂肪， 再经两步水解得到大豆异黄酮甙和大豆异 黄酮甙元， 主要目的为得到不同的甙和甙元， 但是该方法得到的大豆异黄酮纯度有待进一 步提高。 0007 发明内容 ： 本发明主要涉及从大豆中提取并纯化异黄酮的方法， 主要目的是得到和天然大豆成分 一致的大豆异黄酮产品， 能够符合国家中药生产的要求， 进而开发出中药产品。 0008 本发明的方法包括以下步骤 ： （1） 原料准备 ： 取干燥大豆粉碎成粒径为 40 -80 目 ； （2）醇提 ： 按每 20004000mL 5080% 乙醇加入 10kg 原料的比例回流提取 24h， 过 80500 目孔径筛， 取滤液， 上述的提取重复 2。
9、5 次 ； （3） 合并滤液， 浓缩至乙醇浓度 2.5% 浓缩液 ； 说 明 书 CN 102977066 A 3 2/3 页 4 （4） 萃取 ： 将浓缩液在浓缩体积 25 倍的乙酸乙酯中萃取 24h， 过 80500 目孔径筛， 上 述萃取重复 25 次 ； （5） 将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓度 2.5% ； （6） 硅胶柱层析 ： 按硅胶柱体体积 812 倍量取乙酸乙酯萃取液经硅胶柱层析 ； 所述硅 胶粒径 100-300 目 ； （7） 洗脱 ： 用丙酮含量为 1050% 的石油醚 - 丙酮混合液洗脱 ； （8） 收集洗脱液， 经过 ODS 高效液相制备柱， 将所得到的流动相脱除石油。
10、醚和丙酮即得 到大豆中的异黄酮类化合物。 0009 (9) 干燥、 计算大豆异黄酮的提取率。 0010 其中上述步骤 （6） 中的硅胶粒径优选为 100-200 目。 0011 其中上述步骤 （8）中， 所述的制备柱直径和长度分别为 ： 直径为 1.5cm 长度为 70cm 其中上述步骤 （8） 中的 ODS 是十八烷基硅烷键合硅胶柱， 一般直接写 ODS。 0012 本发明的有益效果为 ： 本发明的提取方法简单， 设备要求低， 经醇提后进行萃取并 经硅胶柱层析， 可以使大豆异黄酮的提取率超过 50%， 为从大豆中提取异黄酮化合物提供了 一种新途径， 对于充分利用植物资源和开发高天然药物具有重。
11、要意义。 具体实施方式 0013 下面结合具体实施例对本发明的技术方案进行详细的说明。 0014 实施例 1 取干燥的粉碎的大豆颗粒为原料， 按每 3000mL60% 的乙醇加入 10kg 原料回流提取 2.0h， 过 80 目的孔径筛， 取过滤液， 截留物再按 10kg/2500mL60% 的乙醇比例重复回流提取 2 次， 合并滤液， 减压浓缩并脱醇至乙醇浓度 2% 得浓缩液， 将浓缩液在浓缩体积 2 倍的乙酸 乙酯中萃取 2h， 过 140 目筛， 截留物重复进行 2 次萃取， 将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓度 2%， 按硅胶柱体体积 8 倍量取乙酸乙酯萃取液经 100 目硅胶柱层析， 用丙。
12、酮含量为 15% 的石 油醚-丙酮混合液洗脱， 收集洗脱液， 经过反相ODS高效液相制备柱， 固定相为硅胶， 颗粒度 为 325 目， 将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物。干燥、 计 算大豆异黄酮的提取率为 55%， 其提取质量为 13.75g。 0015 实施例 2 取干燥的粉碎的大豆颗粒为原料， 按每 3000mL65% 的乙醇加入 10kg 原料回流提取 2.5h， 过 80 目的孔径筛， 取过滤液， 截留物再按 10kg/2500mL65% 的乙醇比例重复回流提取 2 次， 合并滤液， 减压浓缩并脱醇至乙醇浓度 2% 得浓缩液， 将浓缩液在浓缩体积 2 倍的乙。
13、酸 乙酯中萃取 2.5h， 过 500 目筛， 截留物重复进行 2 次萃取， 将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓 度 2%， 按硅胶柱体体积 10 倍量取乙酸乙酯萃取液经 120 目硅胶柱层析， 用丙酮含量为 30% 的石油醚-丙酮混合液洗脱， 收集洗脱液， 经过反相ODS高效液相制备柱， 固定相为硅胶， 颗 粒度为 500 目， 将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物。干 燥、 计算大豆异黄酮的提取率为 63%， 其提取质量为 15.75g。 0016 实施例 3 取干燥的粉碎的大豆颗粒为原料， 按每 3000mL70% 的乙醇加入 10kg 原料回流提取 说 明 书 CN 。
14、102977066 A 4 3/3 页 5 2.5h， 过 80 目的孔径筛， 取过滤液， 截留物再按 10kg/2500mL70% 的乙醇比例重复回流提取 3 次， 合并滤液， 减压浓缩并脱醇至乙醇浓度 2% 得浓缩液， 将浓缩液在浓缩体积 2.5 倍的乙 酸乙酯中萃取 3h， 过 140 目筛， 截留物重复进行 2 次萃取， 将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓 度 2%， 按硅胶柱体体积 10 倍量取乙酸乙酯萃取液经 120 目硅胶柱层析， 用丙酮含量为 50% 的石油醚-丙酮混合液洗脱， 收集洗脱液， 经过反相ODS高效液相制备柱， 固定相为硅胶， 颗 粒度为 800 目， 将所得到的流动相脱。
15、除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物。干 燥、 计算大豆异黄酮的提取率为 75%， 其提取质量为 15.75g。 0017 实施例 4 取干燥的粉碎的大豆颗粒为原料， 按每 3000mL75% 的乙醇加入 10kg 原料回流提取 3.0h， 过 100 目的孔径筛， 取过滤液， 截留物再按 10kg/2500mL75% 的乙醇比例重复回流提 取 3 次， 合并滤液， 减压浓缩并脱醇至乙醇浓度 2% 得浓缩液， 将浓缩液在浓缩体积 2.5 倍的 乙酸乙酯中萃取 3.5h， 过 140 目筛， 截留物重复进行 2 次萃取， 将所得萃取液浓缩至乙酸乙 酯浓度 2%， 按硅胶柱体体积 10 倍量。
16、取乙酸乙酯萃取液经 120 目硅胶柱层析， 用丙酮含量为 50% 的石油醚 - 丙酮混合液洗脱， 收集洗脱液， 经过反相 ODS 高效液相制备柱， 固定相为硅 胶， 颗粒度为 800 目， 将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合 物。干燥、 计算大豆异黄酮的提取率为 90%， 其提取质量为 22.50g。 0018 实施例 5 取干燥的粉碎的大豆颗粒为原料， 按每 3000mL80% 的乙醇加入 10kg 原料回流提取 3.0h， 过200目的孔径筛， 取过滤液， 截留物再按10kg/2500mL80%的乙醇比例重复回流提取 3 次， 合并滤液， 减压浓缩并脱醇至乙醇浓度 2% 得浓缩液， 将浓缩液在浓缩体积 2.5 倍的乙 酸乙酯中萃取 4h， 过 200 目筛， 截留物重复进行 2 次萃取， 将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓 度2%， 按硅胶柱体体积8倍量取乙酸乙酯萃取液经120目硅胶柱层析， 用丙酮含量为25%的 石油醚-丙酮混合液洗脱， 收集洗脱液， 经过反相ODS高效液相制备柱， 固定相为硅胶， 颗粒 度为 200 目， 将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物。干燥、 计算大豆异黄酮的提取率为 89%， 其提取质量为 22.25g。 说 明 书 CN 102977066 A 5 。