骨强度改善剂、皮肤胶原量改善剂以及含有其中至少任1种的口服组合物、医药部外品.pdf

本发明提供骨强度改善剂及皮肤胶原量改善剂、以及含有其中至少任1种的口服组合物、医药部外品。以含有来自燕窝的成分作为主成分为特征的骨强度改善剂及皮肤胶原量改善剂。

1.  一种骨强度改善剂，其特征在于，含有来自燕窝的成分作为主成分。

2.  根据权利要求1所述的骨强度改善剂，其特征在于，所述来自燕窝的成分为燕窝的水提取物、热水提取物或酶分解物中的任一种。

3.  根据权利要求2所述的骨强度改善剂，其特征在于，所述燕窝的酶分解物通过如下工序获得：
利用水使作为原料的燕窝溶胀的工序；
在该溶胀工序之后，添加蛋白酶的酶反应工序；
在该酶反应工序后，使所述蛋白酶失活的工序；
在该酶失活工序之后，将不溶物除去的工序。

4.  根据权利要求1所述的骨强度改善剂，其特征在于，改善骨中的钙含量及磷含量的至少任一者。

5.  根据权利要求1所述的骨强度改善剂，其特征在于，具有抑制由于年龄的增加所导致的骨强度减少的效果。

6.  一种皮肤胶原量改善剂，其特征在于，含有来自燕窝的成分作为主成分。

7.  根据权利要求6所述的皮肤胶原量改善剂，其特征在于，所述来自燕窝的成分为燕窝的水提取物、热水提取物或酶分解物中的任一种。

8.  根据权利要求7所述的皮肤胶原量改善剂，其特征在于，所述燕窝的酶分解物通过如下工序获得：
利用水使作为原料的燕窝溶胀的工序；
在该溶胀工序之后，添加蛋白酶的酶反应工序；
在该酶反应工序后，使所述蛋白酶失活的工序；
在该酶失活工序之后，将不溶物除去的工序。

9.  根据权利要求6所述的皮肤胶原量改善剂，其特征在于，具有抑制由于年龄的增加所导致的皮肤胶原量减少的效果。

10.  一种口服组合物，其特征在于，含有权利要求1所述的骨强度改善剂。

11.  一种医药部外品，其特征在于，含有权利要求1所述的骨强度改善剂。

12.  一种口服组合物，其特征在于，含有权利要求6所述的皮肤胶原量改善剂。

13.  一种医药部外品，其特征在于，含有权利要求6所述的皮肤胶原量改善剂。

骨强度改善剂、皮肤胶原量改善剂以及含有其中至少任1种的口服组合物、医药部外品
技术领域
本发明涉及骨强度改善剂、皮肤胶原量改善剂以及含有其中至少任1种的口服组合物、医药部外品(日语：医薬部外品，英文：quasi-drug)。
背景技术
人体随着年龄的增加受到各种影响。作为衰老的症状突出呈现的代表部位可以举出骨及皮肤。
作为由于年龄增加所导致的骨的症状，代表地可以举出骨质疏松症。
骨质疏松症是指由于骨吸收速度快于骨形成速度，在骨头上产生很多小孔穴的症状。骨质疏松症在中年以后多见，其中的半数以上为女性。
骨与建筑物所用的钢铁架构等不同，正常时，通过成骨细胞和破骨细胞平衡良好地进行破坏-形成，破骨细胞将旧骨破坏、而成骨细胞不停地制作新骨，整体的骨量通常保持一定的量。但是，特别是对于高龄女性而言，具有提高成骨细胞活动作用的性激素一种的雌激素的产量在闭经后急剧降低，上述破坏-形成的平衡被打破，因此易于患上骨质疏松症。而且，女性与男性相比由于本来骨量就少，因此当破坏-形成的平衡被打破时，症状易于表面化。
目前为止也开发出多个用于预防这种骨质疏松症的技术。专利文献1公开了以增加骨强度、预防并治疗骨质疏松症作为课题的一种营养组合物的相关技术，其特征在于其含有钙含量、镁含量、硅与钙的含有重量比分别为特定范围值的白云石。
专利文献2公开了组合有降钙素及甲状旁腺素的、每周给药1次用的骨疾病予防及/或治疗用的医药复合剂的相关技术。
另一方面，随着年龄增加所产生的肌肤粗糙或小皱纹等皮肤的变化对于女性来说是很重大的问题。引起这种皮肤变化的要因之一可以举出皮肤胶原量的降低。
皮肤胶原是构成皮肤的主要蛋白质。构成胶原的肽链的氨基酸相互聚集、在皮肤组织内形成强大的纤维。将其称作胶原纤维(胶原纤维)。胶原纤维的粗度为数μm～数十μm左右，胶原纤维的合成由成纤维细胞完成。
由于年龄的增加，成纤维细胞所导致的胶原纤维合成量降低，因此所分解的胶原纤维的量提高所合成的该纤维的量，结果会产生皱纹或斑点，引起所谓的皮肤衰老。
目前为止，也开发了数个抑制这种皮肤胶原量的降低的技术。专利文献3公开了以使构成真皮的成纤维细胞活化、促进利用细胞的胶原等的合成为课题的含有オウバウシバナ(鸭跖科的一种植物)提取物作为有效成分的化妆品的相关技术。
专利文献4公开了以增加皮肤中的胶原合成为课题的用于口服的组合物的相关技术，其含有植物提取物和软骨提取物而成，上述植物提取物含有葡萄籽的提取物和番茄提取物而成。
【专利文献1】日本特开2005-52065号公报
【专利文献2】日本特开2006-143603号公报
【专利文献3】日本特开2008-273983号公报
【专利文献4】日本特开2008-273963号公报
发明内容
发明要解决的课题
专利文献1为了验证该文献中所公开的营养组合物的效果，在实施例中的试验例3中阐述了将含有该营养组合物的饮料用于实际具有骨质疏松症的女性的实验，对于重要的实验结果仅有“显示骨密度的显著增加”的定性记载，该文献中实际上完全没有显示骨密度增加了何种程度的定量的·具体的记载。
专利文献2所公开的医药复合剂是具有在并用降钙素及甲状旁腺素时严格限定为每周1次的给药频率的最大特征的发明，因此无法期待例如如一般的食品或饮料、营养辅助剂等那样，在不规则地摄取时具有一定的效果。
专利文献3为了验证该文献中所公开的化妆品的效果，在实施例中的试验例4中阐述了该化妆品有关的监测试验结果，但该结果仅停留在定性的5个阶段评价，因此该文献中并没有示出表示该化妆品具有效果的理由的定量实验结果。
专利文献4为了验证该文献中所公开的用于口服的组合物的效果，在实施例中的试验法A中阐述了可见至少使胶原合成增大35％的效果的主旨，但该试验法是在人成纤维细胞培养内进行的所谓体外实验，该文献中并未公开在生物体内进行的在生物体内是否可见相同的胶原合成增大效果的所谓体内试验结果。另外，专利文献4为了验证该组合物的效果，在实施例中的例5中阐述了与该文献中所公开的组合物有关的消費者试验结果，但该结果仅停留在定性的4阶段评价，因此该文献中并未示出表示该组合物起到胶原合成增大效果的理由的定量实验结果。
本发明鉴于上述事实而完成，其目的在于提供骨强度改善剂及皮肤胶原量改善剂、以及含有它们中至少任1种的口服组合物、医药部外品。
用于解决课题的方法
本发明的骨强度改善剂的特征在于具有来自燕窝的成分作为主成分。
这种构成的骨强度改善剂通过含有作为具有增强骨强度的效果的天然物的来自燕窝的成分为主成分，可以有效地改善骨强度。
本发明的骨强度改善剂优选上述来自燕窝的成分为燕窝的水提取物、热水提取物或酶分解物中的任一种。
这种构成的骨强度改善剂的上述水提取物、热水提取物或酶分解物由于比燕窝本身更易在体内被消化、吸收，因此可以更加发挥骨强度改善的效果。
本发明的骨强度改善剂优选上述燕窝的酶分解物经过以下工序获得：利用水使原料的燕窝溶胀的工序、在该溶胀工序之后添加蛋白酶的酶反应工序、在该酶反应工序之后使上述蛋白酶失活的工序、在该酶失活工序之后将不溶物除去的工序。
这种构成的骨强度改善剂的上述燕窝的酶分解物通过经过利用蛋白酶的分解作用而含有充足量的燕窝所含有效成分，因此与使用未经酶处理燕窝等的情况相比可以更为发挥骨强度改善的效果。
本发明的骨强度改善剂发挥改善骨中的钙含量及磷含量的至少任1者的效果。
本发明的骨强度改善剂发挥抑制由于年龄的增加所导致的骨强度减少的效果。
这种构成的骨强度改善剂特别可以对预防骨质疏松症发挥效果。
本发明的皮肤胶原量改善剂的特征在于含有来自燕窝的成分作为主成分。
这种构成的皮肤胶原量改善剂通过含有作为具有增强皮肤胶原量的效果的天然物的来自燕窝的成分作为主成分，可以有效地改善皮肤胶原量。
本发明的皮肤胶原量改善剂优选上述来自燕窝的成分为燕窝的水提取物、热水提取物或酶分解物中的任一种。
这种构成的皮肤胶原量改善剂由于上述水提取物、热水提取物或酶分解物比燕窝本身更易在体内被消化·吸收，因此可以更为发挥皮肤胶原量改善的效果。
本发明的皮肤胶原量改善剂优选上述燕窝的酶分解物经过以下工序获得：利用水使原料的燕窝溶胀的工序、在该溶胀工序之后添加蛋白酶的酶反应工序、在该酶反应工序之后使上述蛋白酶失活的工序、在该酶失活工序之后将不溶物除去的工序。
这种构成的皮肤胶原量改善剂的上述燕窝的酶分解物通过经过利用蛋白酶的分解作用而含有充足量的燕窝所含有效成分，因此与使用未经酶处理燕窝等的情况相比可以更加发挥皮肤胶原量改善的效果。
本发明的皮肤胶原量改善剂发挥抑制由于年龄的增加所导致的皮肤胶原量减少的效果。
这种构成的皮肤胶原量改善剂特别对防止由于年龄的增加所导致的肌肤粗糙或小皱纹等的皮肤变化发挥效果。
本发明的口服组合物的特征在于，含有上述骨强度改善剂及上述皮肤胶原量改善剂的至少任一种。
这种构成的口服组合物不用严密地遵守用法和用量，即便是随意地摄取也可发挥骨强度改善效果及皮肤胶原量改善效果的至少任一者。
本发明的医药部外品的特征在于，含有上述骨强度改善剂及上述皮肤胶原量改善剂的至少任一种。
这种构成的医药部外品可以发挥骨强度改善效果及皮肤胶原量改善效果的至少任一者。
发明效果
本发明的骨强度改善剂通过含有作为具有增强骨强度的效果的天然物的来自燕窝的成分为主成分，可以有效地改善骨强度。另外，本发明的皮肤胶原量改善剂通过含有作为具有皮肤胶原量的效果的天然物的来自燕窝的成分为主成分，可以有效地改善皮肤胶原量。
附图说明
【图1】在燕窝的酶分解物的生理效果验证中，用柱状图表示各试验区的背胶原纤维层的厚度。
【图2】在燕窝的酶分解物的生理效果验证中，分别用柱状图表示各试验区的骨钙浓度及骨磷浓度。
【图3】在燕窝的酶分解物的生理效果验证中，分别用柱状图表示各试验区的血中钙浓度及血中磷浓度。
【图4】在燕窝的酶分解物的生理效果验证中，用柱状图表示各试验区的骨强度。
【图5】在燕窝的酶分解物的生理效果验证中，用柱状图表示各试验区的骨胶原浓度。
【图6】在未经酶处理的燕窝的生理效果验证中，用柱状图表示各试验区的背胶原纤维层的厚度。
【图7】在未经酶处理的燕窝的生理效果验证中，分别用柱状图表示各试验区的骨钙浓度及骨磷浓度。
【图8】在未经酶处理的燕窝的生理效果验证中，分别用柱状图表示各试验区的血中钙浓度及血中磷浓度。
【图9】在未经酶处理燕窝的生理效果验证中，用柱状图表示各试验区的骨强度。
【图10】在未经酶处理的燕窝的生理效果验证中，用柱状图表示各试验区的骨胶原浓度。
具体实施方式
本发明的骨强度改善剂的特征在于，含有来自燕窝的成分作为主成分。
本发明的皮肤胶原量改善剂的特征在于，含有来自燕窝的成分作为主成分。
本发明的骨强度改善剂及皮肤胶原量改善剂的特征在于，均以来自燕窝的成分作为主成分，且通过含有该成分来改善作为年龄的增加所导致的课题的骨强度问题或皮肤胶原量问题。
以下阐述本发明的骨强度改善剂及皮肤胶原量改善剂所共通的事项，对于仅与其中任一者有关的事项而言，会进行特别的叙述。
本发明中，“改善”骨强度除了更为增高骨强度之外，还包括抑制由于年龄的增加等事情所导致的骨强度降低。
另外，本发明中“改善”皮肤胶原量除了更为增加皮肤胶原量之外，还包括抑制由于年龄的增加等事情所导致的皮肤胶原量的降低。
燕窝是金丝燕将自己的唾液为丝状制作的巢穴，作为其成分含有很多糖蛋白质，基本不含脂质。
一般市售的燕窝从仅是将毛发或粪便等污物除去进行清洗的物质至集合燕窝的碎片、重复进行漂白和清洗而成形的物质，具有各种种类，本发明中作为原料使用的燕窝优选使用在前处理中未进行过度的清洗或漂白等的燕窝。
本发明中，“来自燕窝的成分”是指燕窝所含的有效成分中的水溶性溶出成分及水溶性酶分解生成成分的两者。
本发明的骨强度改善剂及本发明的皮肤胶原量改善剂优选来自燕窝的成分分别为燕窝的水提取物、热水提取物或酶分解物的任一种。其原因在于，上述水提取物、热水提取物或酶分解物比燕窝本身在体内更易被消化、吸收，因此骨强度改善剂或皮肤胶原量改善剂可以更为发挥骨强度改善或皮肤胶原量改善的效果。
予以说明，来自燕窝的成分特别优选为酶分解物。
燕窝的酶分解物可以通过使用蛋白酶或含有蛋白酶的复合酶等将成为原料的燕窝分解而获得。
本发明的骨强度改善剂及本发明的皮肤胶原量改善剂优选燕窝酶分解物经过以下工序获得：利用水使原料的燕窝溶胀的工序、在该溶胀工序之后添加蛋白酶的酶反应工序、在该酶反应工序之后使上述蛋白酶失活的工序、在该酶失活工序之后将不溶物除去的工序。其原因在于，上述燕窝的酶分解物通过经过利用蛋白酶的分解作用，含有充分量的燕窝所含有效成分，因此与使用未经酶处理的燕窝等的情况相比，可以更加发挥骨强度改善或皮肤胶原量改善的效果。
这4个工序(溶胀工序、酶反应工序、酶失活工序、不溶物除去工序)只要顺序如此并非必须连续进行，例如还可以在溶胀工序和酶反应工序之间进行加热工序或搅拌工序等，根据需要追加其他工序。
予以说明，从可以发挥上述效果的观点出发，燕窝的酶分解物优选使用通过利用蛋白酶的分解作用、将燕窝所含有效成分的95％以上提取的物质。
燕窝的酶分解物的调制具体地可以如下进行。即，在粉碎的燕窝中加入其质量的10～50倍的水使其溶胀后，在60～130℃下加热处理5秒钟～30分钟。之后，添加适量的酶，在酶的最佳pH、最佳温度下进行0.5～48小时的酶反应。酶反应结束后，利用加热处理等使酶失活，过滤反应液将不溶物除去，从而可以获得燕窝的酶分解物。另外，该酶分解物还可根据需要进行干燥、粉末化。予以说明，在上述各工序中，还可适当进行pH调整、脱色、除臭等操作。
酶分解时所使用的蛋白酶优选盼库艾琴(パンクレアチン)(例如盼库艾琴F(商品名。天野制药(株)制)等)、オリエンタ一ゼ22BF(商品名。エイチビイアイ(株)制)、アロア一ゼAP-10(商品名。ヤクルト药品工业(株)制)等。
如上获得的燕窝的酶分解物可以直接作为本发明的骨强度改善剂或皮肤胶原量改善剂使用。另外，还可进一步添加赋形剂、甜味料、香料、着色料等制成颗粒状、片剂、胶囊等。
本发明的骨强度改善剂或皮肤胶原量改善剂的有效摄取量作为燕窝的酶分解物(干品换算)为10～2000mg/1人1日。因此，本发明的骨强度改善剂或皮肤胶原量改善剂中的上述燕窝酶分解物含量优选以干品换算计为每日可摄取10～2000mg、更优选50～1500mg的方式含有该酶分解物。
本发明的骨强度改善剂发挥改善骨中的钙含量及磷含量至少任一者的效果。
另外，本发明的骨强度改善剂发挥抑制由于年龄的增加所导致的骨强度减少的效果。这种骨强度改善剂特别对预防骨质疏松症发挥效果。
本发明的皮肤胶原量改善剂发挥抑制由于年龄的增加所导致的皮肤胶原量减少的效果。这种皮肤胶原量改善剂特别对年龄的增加所导致的肌肤粗糙或小皱纹等皮肤变化发挥效果。
从即便不严密地遵守用法·用量、随意地摄取也可发挥骨强度改善效果及皮肤胶原量改善效果的至少任一者的观点出发，本发明的口服组合物的特征在于，含有上述骨强度改善剂及上述皮肤胶原量改善剂的至少任一者。
因此，口服组合物是指一般食品、点心类、果冻、软糖、糖果、口香糖、小吃点心、烤制点心、半成品食品、快餐食品、营养补充食品、饮料、片状食品、咀嚼品、冻胶状饮料(咀嚼包)、膏状制品、热汤、咸烹海味等。
本发明的医药部外品的特征在于，含有上述骨强度改善剂及上述皮肤胶原量改善剂的至少任一者。
因此，医药部外品是指药事法第2条第2项所定义的医药部外品中主要通过口服发挥效果的物质，具体地是指咽喉清涼剂、健胃清涼剂、维生素剂、钙剂、含维生素的保健品等。
本发明的骨强度改善剂通过含有作为具有增强骨强度的效果的天然物的来自燕窝的成分为主成分，可以有效地改善骨强度。另外，本发明的皮肤胶原量改善剂通过含有作为具有增强皮肤胶原量的效果的天然物的来自燕窝的成分为主成分，可以有效地改善皮肤胶原量。
【实施例】
以下举出实施例(燕窝的酶分解物及酶未处理燕窝的制造方法、燕窝的酶分解物的生理效果的验证、未经酶处理的燕窝的生理效果的验证、燕窝的酶分解物中所含氨基酸组成的验证)具体地说明本发明。
1.燕窝的酶分解物及未经酶处理的燕窝的制造方法
通过以下所示的方法、即酶分解(实施例)或简单的粉碎(比较例)获得燕窝的酶分解物(实施例)及未经酶处理的燕窝(比较例)。
[实施例]
利用粉碎机将市售的无漂白燕窝粉碎，获得燕窝粉末，在该燕窝粉末中加入约50倍量(质量)的水在5℃下溶胀3～24小时后，在121℃下加热处理15分钟。
将该处理液冷却后，调整pH，向燕窝粉末添加2质量％的量的含有蛋白酶的酶(商品名“盼库艾琴F”、天野制药(株)制)，在45℃下反应3小时。
在90℃下加热该反应液使酶失活后进行过滤，将滤液回收。将该滤液浓缩后冷冻干燥，获得燕窝的酶分解物。
[比较例]
利用粉碎机将市售的无漂白燕窝粉碎。以下将本比较例的经粉碎的燕窝称作“未经酶处理的燕窝”。
2.燕窝的酶分解物的生理效果的验证
2-1.饲养方法
将44只6周龄大鼠(SD系雌大鼠(日本クレア(株)制))放入保持于25℃的实验室后，在5连笼中进行饲养。进行7天的设施及饲料驯化后(基础饲料如下所示)，随机地分为4组(详细的试验区如下所示)，3组的大鼠在戊巴比妥麻醉下摘除卵巢。剩下的1组进行伪手术。手术后设置数天的恢复期间，饲养10周。饲养在配对饲养下进行。即，将伪摘除组的前一天的平均基础饲料摄取量(13～21g左右)作为当天的剩下3组的给予量。实施配对饲养8周后，在距离剖检的剩下2周内使全体自由地摄取饲料。予以说明，对所有组给予下述标准基础饲料，对考劳卡里尔(コロカイア)100mg/kg/day给予组来说，将规定量的上述实施例中获得的含有燕窝的酶分解物及糊精的考劳卡里尔(商品名、コンビ株式会社制)撒在基础饲料上进行给予。考劳卡里尔10mg/kg/day给予组是将上述考劳卡里尔预先用基础饲料中所用的糊精稀释10倍后使用。试验开始时每周测定1次体重。试验期间水是自由摄取的。
[基础饲料]
AIN93G 20％酪蛋白饮食(Casein diet)
(上述试样1000g中的内容：酪蛋白200g、糊精649.486g、玉米油50g、纤维素50g、AIN-93G 矿物质混合物35g、AIN-93维生素混合物10g、L-半胱氨酸3g、酒石酸氢胆碱盐2.5g、叔丁基氢醌0.014g)
[试验区]
·考劳卡里尔100mg/kg/day给予(作为燕窝的酶分解物20mg/kg/day)组(11只)
·考劳卡里尔10mg/kg/day给予(作为燕窝的酶分解物2mg/kg/day)组(11只)
·卵巢摘除对照组(12只)
·伪摘除组(10只)
2-2.剖检及分析·检查等
饲养上述10周后进行剖检。麻醉用戊巴比妥进行。剖检时从腹部大动脉采血。采集背部皮肤3×3cm左右，用福尔马林固定。另外，采集两大腿骨。
在血液检查中，从所采集的血液中分离血清，测定钙离子浓度、磷浓度。
经福尔马林固定的背部皮肤在固定后根据常规方法进行石蜡包埋，以3～4μm切薄后，进行HE染色及梅森三重纤维染色法染色。在光学显微镜下观察表皮层及胶原纤维层，记录厚度。
使用左大腿骨，进行骨强度的测定。骨强度的测定方法使用光度计(RE-3305 Rheoner(株式会社山电制))进行3点弯曲试验。具体的测定方法为在作为试样的左大腿骨中心部1cm部位以活塞速度30mm/分施加20kg的荷重，测定大腿骨折断的最大破坏力(N)，将该最大破坏力的值作为骨强度。
使用右大腿骨，进行骨钙骨磷及骨胶原浓度的测定。首先作为前处理，使用6mol/L浓度的盐酸在110℃的温度条件下水解右大腿骨24小时。将该水解后的溶于0.1mol/L浓度的盐酸中的溶液作为骨水解试样溶液。
骨钙浓度的测定对于上述骨水解试样溶液而言，使用原子吸光光度计(Z-5310(日立制))利用原子吸光法进行。
骨磷浓度的测定对于上述骨水解试样溶液而言，利用钼蓝比色法进行。
骨胶原浓度以羟基脯氨酸浓度为指标。羟基脯氨酸浓度的测定对于上述骨水解试样溶液而言，使用Bergman and Loxley(1970，AnalChem.)的方法利用吸光光度法进行。
2-3.统计学解析
对于各参数，在全部4组的解析中进行平行检测，确认水平间的等分散性。可以确认等分散时进行单因素方差分析，在水平间具有显著性差异时对组间的检测进行参数型的Sheffe’s F检测。无法确认等分散时进行Kruskal-Wallis检测，水平间没有显著性差异时对组间的检测进行非参数型的Sheffe’s F检测。
在摘除了卵巢的3组间的解析中进行F检测，通过等分散性的有无实施Student’s t检测或Welch’s t检测。将p＜0.05判断为有显著性差异。
2-4.试验结果
图1～图5分别以柱状图表示各试验区的背胶原纤维层的厚度、骨钙浓度、骨磷浓度、血中钙浓度、血中磷浓度、骨强度及骨胶原浓度。予以说明，对于各图而言，S组的柱状图表示伪摘除组的结果、C组的柱状图表示卵巢摘除对照组的结果、L组的柱状图表示考劳卡里尔10mg/kg/day给予组的结果、H组的柱状图表示考劳卡里尔100mg/kg/day给予组的结果。另外，表中所示的＊(星号1个)符号表示2组间可见0.05(5％)的显著性差异、＊＊(星号2个)符号表示2组间可见0.01(1％)的显著性差异。
图1以柱状图表示各试验区的背胶原纤维层的厚度。由图可知，平均背胶原纤维层厚度在S组为0.69mm、C组为0.67mm、L组为0.75mm、H组为0.79mm。4组的解析中，C组和H组间可见0.05的显著性差异。因此可知，在摘除了卵巢的3组中，给予了考劳卡里尔100mg/kg/day的组(H组)与未给予考劳卡里尔的组(C组)相比，背胶原纤维层增厚。
图2分别用柱状图表示各试验区的骨钙浓度及骨磷浓度。
由图可知，平均骨钙浓度(黑色柱状图)在S组为8.10mmol/g干股骨、C组为6.77mmol/g干股骨、L组为7.59mmol/g干股骨、H组为8.32mmol/g  干股骨。4组的解析中，在C组和H组间可见0.05的显著性差异。因此可知，在摘除了卵巢的3组中，给予了考劳卡里尔100mg/kg/day的组(H组)与未给予考劳卡里尔的组(C组)相比，骨钙浓度增高。
另外，由图可知，平均骨磷浓度(白色柱状图)在S组为6.73mmol/g干股骨、C组为6.11mmol/g干股骨、L组为7.90mmol/g干股骨、H组为9.32mmol/g干股骨。4组的解析中，在C组和H组间可见0.01的显著性差异。因此可知，在摘除了卵巢的3组中，给予了考劳卡里尔100mg/kg/day的组(H组)与未给予考劳卡里尔的组(C组)相比，骨磷浓度增高。
图3分别用柱状图表示各试验区的血中钙浓度及血中磷浓度。
由图可知，平均血中钙浓度(黑色柱状图)在S组为10.6mg/dL、C组为10.2mg/dL、L组为10.3mg/dL、H组为10.4mg/dL。4组的解析中未见显著性差异。
另外，由图还可知平均血中磷浓度(白色柱状图)在S组为4.5mg/dL、C组为4.8mg/dL、L组为5.7mg/dL、H组为6.0mg/dL。4组的解析中，在C组和H组间可见0.01的显著性差异。因此可知，在摘除了卵巢的3组中，给予了考劳卡里尔100mg/kg/day的组(H组)与未给予燕窝的组(C组)相比，血中磷浓度增高。
图4用柱状图表示各试验区的骨强度。
由图可知，平均骨强度在S组为143.7N、C组为134.3N、L组为145.8N、H组为149.5N。4组的解析中，在C组和H组间可见0.05的显著性差异。因此可知，在摘除了卵巢的3组中，给予了考劳卡里尔100mg/kg/day的组(H组)与未给予燕窝的组(C组)相比，骨强度增高。
图5用柱状图表示各试验区的骨胶原浓度。
由图可知，平均骨胶原浓度在S组为603.1nmol/g干股骨、C组为570.4nmol/g干股骨、L组为593.6nmol/g干股骨、H组为644.9nmol/g干股骨。4组的解析中未见显著性差异。
2-5.结果的考察
由上可知，通过对卵巢摘除大鼠给予含有燕窝的酶分解物的考劳卡里尔，对于背胶原纤维层的厚度、骨钙浓度、骨磷浓度、血中磷浓度及骨强度的各数值而言，特别在考劳卡里尔100mg/kg/day给予组中，与未给予考劳卡里尔的对照组相比，可见显著性差异。由此结果可知通过至少摄取考劳卡里尔100mg/kg B.W./天，对于抑制人更年期障碍的代表症状的骨强度的降低、以及抑制皮肤胶原量的降低具有效果。予以说明，整个试验期间未见考劳卡里尔给予所导致的副作用。
3.未经酶处理的燕窝的生理效果的验证
3-1.饲养方法
将25只6周龄大鼠(SD系雌大鼠(日本クレア(株)制))放入保持于25℃的实验室后，在5连笼中进行饲养。进行7天的设施及饲料驯化后(基础饲料使用上述2-1的饲料)，随机地分为3组(详细的试验区如下所示)，2组的大鼠在戊巴比妥麻醉下摘除卵巢。剩下的1组进行伪手术。手术后设置数天的恢复期间，饲养10周。饲养在配对饲养下进行。即，将伪摘除组的前一天的平均基础饲料摄取量(13～21g左右)作为当天的剩下2组的给予量。实施配对饲养8周后，在距离剖检的剩下2周内使全体自由地摄取饲料。予以说明，对所有组给予上述标准基础饲料，对未经酶处理的燕窝23.18mg/kg/day给予组来说，将规定量的上述比较例中获得的未经酶处理的燕窝撒在基础饲料上进行给予。试验开始时每周测定1次体重。试验期间水是自由摄取的。
[试验区]
·未经酶处理的燕窝23.18mg/kg/day给予组(10只)
·卵巢摘除对照组(9只)
·伪摘除组(6只)
3-2.剖检及分析·检查等
饲养上述10周后进行剖检。麻醉用戊巴比妥进行。剖检时从腹部大动脉采血。采集背部皮肤3×3cm左右，用福尔马林固定。另外，采集两大腿骨。
血液检查中，与上述2-2同样地测定钙离子浓度、磷浓度。
经福尔马林固定的背部皮肤与上述2-2同样地处理，在光学显微镜下观察表皮层及胶原纤维层，记录厚度。
使用左大腿骨与上述2-2同样地进行骨强度测定。
使用右大腿骨与上述2-2同样地测定骨钙、骨磷及骨胶原浓度。
3-3.统计学的解析
对于各参数，在全部3组的解析中进行平行检测，确认水平间的等分散性。可以确认等分散时进行单因素方差分析，在水平间具有显著性差异时对组间的检测进行参数型的Sheffe’s F检测。无法确认等分散时进行Kruskal-Wallis检测，水平间没有显著性差异时对组间的检测进行非参数型的Sheffe’s F检测。
在摘除了卵巢的2组间的解析中进行F检测，通过等分散性的有无实施Student’s t检测或Welch’s t检测。将p＜0.05判断为有显著性差异。
3-4.试验结果
图6～图10分别以柱状图表示各试验区的背胶原纤维层的厚度、骨钙浓度、骨磷浓度、血中钙浓度、血中磷浓度、骨强度及骨胶原浓度。予以说明，对于各图而言，S组的柱状图表示伪摘除组的结果、C组的柱状图表示卵巢摘除对照组的结果、H组的柱状图表示未经酶处理的燕窝23.18mg/kg/day给予组的结果。另外，表中所示的＊(星号1个)符号与上述2-4所示者相同。
图6以柱状图表示各试验区的背胶原纤维层的厚度。由图可知，平均背胶原纤维层厚度在S组为0.44mm、C组为0.58mm、H组为0.58mm。3组的解析中未见显著性差异。因此可知，在摘除了卵巢的2组中，给予了未经酶处理的燕窝23.18mg/kg/day的组(H组)与未给予未经酶处理的燕窝的组(C组)相比，背胶原纤维层的厚度没有变化。
图7分别用柱状图表示各试验区的骨钙浓度及骨磷浓度。
由图可知，平均骨钙浓度(黑色柱状图)在S组为6.34mmol/g干股骨、C组为5.40mmol/g干股骨、H组为5.68mmol/g干股骨。3组的解析中未见显著性差异。因此可知，在摘除了卵巢的2组中，给予了未经酶处理的燕窝23.18mg/kg/day的组(H组)与未给予未经酶处理的燕窝的组(C组)相比，骨钙浓度没有变化。
另外，由图可知，平均骨磷浓度(白色柱状图)在S组为3.65mmol/g干股骨、C组为3.37mmol/g干股骨、H组为3.31mmol/g干股骨。3组的解析中未见显著性差异。因此可知，在摘除了卵巢的2组中，给予了未经酶处理的燕窝23.18mg/kg/day的组(H组)与未给予未经酶处理的燕窝的组(C组)相比，骨磷浓度没有变化。
图8分别用柱状图表示各试验区的血中钙浓度及血中磷浓度。
由图可知，平均血中钙浓度(黑色柱状图)在S组为10.9mg/dL、C组为10.4mg/dL、H组为10.6mg/dL。3组的解析中在S组和C组间可见显著性差异，但摘除了卵巢的2组解析中未见显著性差异。因此，在摘除了卵巢的2组中，给予了未经酶处理的燕窝23.18mg/kg/day的组(H组)与未给予未经酶处理的燕窝的组(C组)相比，血中钙浓度没有变化
另外，由图还可知平均血中磷浓度(白色柱状图)在S组为5.3m g/dL、C组为4.9mg/dL、H组为5.7mg/dL。3组的解析中未见显著性差异。因此，在摘除了卵巢的2组中，即便给予了未经酶处理的燕窝23.18mg/kg/day的组(H组)与未给予未经酶处理的燕窝的组(C组)相比，血中磷浓度没有变化。
图9用柱状图表示各试验区的骨强度。
由图可知，平均骨强度在S组为154.6N、C组为180.5N、H组为179.9N。3组的解析中未见显著性差异。因此可知，在摘除了卵巢的2组中，给予了未经酶处理的燕窝23.18mg/kg/day的组(H组)与未给予未经酶处理的燕窝的组(C组)相比，骨强度没有变化。
图10用柱状图表示各试验区的骨胶原浓度。
由图可知，平均骨胶原浓度在S组为1286.0nmol/g干股骨、C组为1291.3nmol/g干股骨、H组为1306.9nmol/g干股骨。3组的解析中未见显著性差异。因此可知，在摘除了卵巢的2组中，给予了未经酶处理的燕窝23.18mg/kg/day的组(H组)与未给予未经酶处理的燕窝的组(C组)相比，骨胶原浓度没有变化。
3-5.结果的考察
由上可知，即便对卵巢摘除大鼠给予未经酶处理的燕窝，也未见背胶原纤维层的厚度、骨钙浓度、骨磷浓度、血中钙浓度、血中磷浓度、骨强度及骨胶原浓度的各数值改善效果。由该结果和上述含有燕窝的酶分解物的考劳卡里尔的生理效果的实验结果(上述2-5)可知，对燕窝进行酶处理对于改善背胶原纤维层的厚度、骨钙浓度、骨磷浓度、血中磷浓度及骨强度是必要的。予以说明，在试验期间未见给予未经酶处理的燕窝所导致的副作用。
4.燕窝的酶分解物中所含氨基酸组成的验证
4-1.燕窝的酶分解物中所含总氨基酸组成的验证
使用氨基酸分析装置通过常规方法详细地分析在上述实施例中获得的含有燕窝的酶分解物的考劳卡里尔(商品名。コンビ株式会社制)中的总氨基酸组成。
分析的结果表明在100g的考劳卡里尔中含有作为必须氨基酸的430mg(3.74％)赖氨酸、820mg(7.13％)苯丙氨酸、870mg(7.57％)亮氨酸、370mg(3.22％)异亮氨酸、880mg(7.65％)缬氨酸、860mg(7.48％)苏氨酸、230mg(2.00％)色氨酸、70mg(0.61％)蛋氨酸、430mg(3.74％)组氨酸。另外，除了必须氨基酸以外，同样在100g的考劳卡里尔中含有310mg(2.70％)半胱氨酸、750mg(6.52％)精氨酸、690mg(6.00％)酪氨酸、340mg(2.96％)丙氨酸、480mg(4.17％)甘氨酸、840mg(7.30％)谷氨酸、1170mg(10.17％)天冬氨酸、1000mg(8.70％)丝氨酸、960mg(8.35％)脯氨酸。即，在通常构成蛋白质的20种氨基酸中，除了天冬氨酸和谷氨酸以外的18种在燕窝的酶分解物中共含11.5g，另外，其中特别在必须氨基酸中含有很多的缬氨酸、在氨基酸全体中含有很多的天冬氨酸。
上述的氨基酸中，在100g的考劳卡里尔中含有多达960mg的脯氨酸。脯氨酸是胶原的主要成分，因此本发明中使用的酶分解物对皮肤的胶原合成或骨强度的增加具有效果。
另外，在上述氨基酸中，在100g的考劳卡里尔中含有多达1000mg的丝氨酸。丝氨酸在体内会变换成具有美肤·提高保湿效果的作用的半胱氨酸，因此认为本发明中使用的酶分解物发挥美肤·保湿效果。
4-2.燕窝的酶分解物中所含游离氨基酸组成的验证
利用与上述总氨基酸组成的分析法相同的方法详细地分析上述的考劳卡里尔中的游离氨基酸组成。予以说明，游离氨基酸是指不构成蛋白质的氨基酸。
分析的结果表明在100g的考劳卡里尔中作为游离氨基酸含有作为必须氨基酸的赖氨酸53mg、苯丙氨酸150mg、亮氨酸92mg、异亮氨酸17mg、缬氨酸21mg、苏氨酸3mg、色氨酸33mg、组氨酸17mg。予以说明，未检测到作为必须氨基酸的蛋氨酸(＜3mg/100g)。另外，除了必须氨基酸以外，同样在100g的考劳卡里尔中含有精氨酸205mg、酪氨酸150mg、丙氨酸8mg、甘氨酸2mg、谷氨酸2mg、丝氨酸2mg。予以说明，未检测到半胱氨酸(＜3mg/100g)、天冬氨酸(＜2mg/100g)、脯氨酸(＜1mg/100g)、天冬氨酸、谷氨酸。即，通常构成蛋白质的20种氨基酸中，作为游离氨基酸在燕窝的酶分解物中至少含有14种，其中特别在必须氨基酸中作为游离氨基酸含有很多的苯丙氨酸、在氨基酸全体中作为游离氨基酸含有很多的精氨酸。