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1、10申请公布号CN101993475A43申请公布日20110330CN101993475ACN101993475A21申请号200910101674X22申请日20090821C07K7/06200601C07K1/06200601C07K1/02200601A61P9/10200601A61P7/0220060171申请人杭州诺泰制药技术有限公司地址310018浙江省杭州市下沙六号大街452号3B010372发明人阮小丽54发明名称一种全液相依替巴肽EPTIFIBATIDE的合成方法57摘要本发明属生物化学技术领域，特别涉及了一种新的依替巴肽EPTIFIBATIDE的液相合成方法。技术方案。
2、是1采用TRTMPAOH和HLYSFMOCOME为原料合成二肽，脱去FMOC保护基后运用金属有机催化方法与BOC保护的硫脲进行胍基化反应后水解得到的二肽偶联物TRTMPAHARGBOC2OH；2按照FMOC氮端保护策略液相多肽合成HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSP1NH2片段，其中P1为TRT及ACM保护基；3将TRTMPAHARBOC2OH和HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSP1NH2片段缩合得到全保护肽TRTMPAHARBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSP1NH2；4全保护七肽脱去各侧链保护基团后氧化成环得到依替巴肽EPTIFIBATIDE粗品；。
3、6依替巴肽EPTIFIBATIDE粗品经纯化后冻干制得纯品依替巴肽EPTIFIBATIDE。本发明的方法操作简便，解决了片段胍基化的合成困难问题，提高了收率，改善了二肽偶联物的稳定性；全液相肽合成的应用解决了固相合成成本高的缺陷，大幅度降低了成本。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书4页说明书10页附图2页CN101993478A1/4页21一种液相合成依替巴肽EPTIFIBATIDE的方法，包括以下五个主要阶段1本发明采用过渡金属盐络合催化胍基化液相制备TRTMPAHARGBOC2OH；2为防止消旋，本发明应用DIC/HOCT，DCC/HOAT或HOBT的。
4、混合搭配，于液相中，CN方向合成FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2，FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2，然后将它们与TRTMPAHARGBOC2OH聚合，于液相中得七肽片断TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2；3试剂三氟乙酸/三异丙基硅烷/苯甲醚/茴香硫醚/水9525252525去保护基；4用乙醚沉淀出线性七肽MPAHARGGLYASPTRPPROCYSACMNH2，MPAHARGGLYASPTRPPRO。
5、CYSNH2；5线性七肽MPAHARGGLYASPTRPPROCYSACMNH2，MPAHARGGLYASPTRPPROCYSNH2用80100MM酸性碘/乙醇溶液氧化成环得依替巴肽EPTIFIBATIDE。2根据权利要求1所概括的阶段，其特征在于本发明包括以下二十二个具体步骤1TRTMPALYSFMOCOME的制备。由TRTMPAOH与HLYSFMOCOME偶合得来；反应体系中偶合试剂为DIC/HOCT；溶剂为DMF；反应温度为035；HLYSFMOCOME，TRTMPAOH，偶合试剂的摩尔数均等同；冰乙醚沉淀出反应产物。2TRTMPALYSOME的制备。由TRTMPALYSFMOCOME去。
6、FMOC保护基而得；反应体系中去FMOC试剂为25六氢吡啶/DCM；反应持续一个小时。3TRTMPAHARGBOC2OME的制备。由TRTMPALYSOME与BOCNHCSNHBOC在有机碱存在条件下，金属盐络合剂催化回流反应而得；反应体系中反应溶剂为DMF；回流反应温度为40；BOCNHCSNHBOC的摩尔数是TRTMPALYSOME的摩尔数的2倍；过渡金属盐络合剂的摩尔数与BOCNHCSNHBOC的摩尔数等同；过渡金属盐络合剂包括锰盐，铁盐，钴盐，镍盐，铜盐，银盐，汞盐，镉盐，锌盐以及铅盐；有机碱包括吡啶，三乙胺等叔胺；冰乙醚沉淀出反应产物。4FMOCPROCYSACMNH2的制备。由FM。
7、OCPROOH与HCYSACMNH2聚合而得；反应体系中偶合试剂为DIC与HOCT；反应溶剂为DMF；反应温度035；FMOCPROOH，HCYSACMNH2，偶合试剂的摩尔数均等同；冰乙醚沉淀出反应产物。5HPROCYSACMNH2的制备。由FMOCPROCYSACMNH2去FMOC保护基而得；权利要求书CN101993475ACN101993478A2/4页3反应体系中去FMOC保护基试剂为25六氢吡啶/DCM；反应持续一个小时。6FMOCTRPBOCPROCYSACMNH2的制备。由HPROCYSACMNH2与FMOCTRPBOCOH偶合而得；反应体系中偶合试剂为DCC与HOBT；反应溶。
8、剂为DMF；反应温度为035；FMOCTRPBOCOH，HPROCYSACMNH2，偶合试剂的摩尔数均等同；冰乙醚沉淀出反应产物。7HTRPBOCPROCYSACMNH2的制备。由FMOCTRPBOCPROCYSACMNH2去FMOC保护基而得；反应体系中去FMOC保护基试剂为25六氢吡啶/DCM；反应持续一个小时。8FMOCASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2的制备。由HTRPBOCPROCYSACMNH2与FMOCASPOTBUOH偶合而得；反应体系中偶合试剂为DCC与HOAT；反应溶剂为DMF；反应温度为035；FMOCASPOTBUOH，HTRPBOCPROCYSACMN。
9、H2，偶合试剂的摩尔数均等同；冰乙醚沉淀出反应产物。9HASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2的制备。由FMOCASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2去FMOC保护基而得；反应体系中去FMOC保护基试剂为25六氢吡啶/DCM；反应持续一个小时。10FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2的制备。由HASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2与FMOCGLYOH聚合而来；反应体系中偶合试剂为DCC与HOAT；反应溶剂为DMF；反应温度为035；FMOCGLYOH，HASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2，偶合试剂的摩尔数均等同；。
10、冰乙醚沉淀出反应产物。11HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2的制备。由FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2去FMOC保护基而得；反应体系中去FMOC保护基试剂为25六氢吡啶/DCM；反应持续一个小时。12TRTMPAHARGBOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2的制备。由HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2与TRTMPAHARGBOC2OH聚合而来；反应体系中偶合试剂为DIC与HOCT；反应溶剂为DMF；反应温度为035；TRTMPAHARGBOC2OH，HGLYASPOTBUTRPBOCPROC。
11、YSACMNH2，偶合试剂的摩尔数均等同；冰乙醚沉淀出反应产物。权利要求书CN101993475ACN101993478A3/4页413FMOCPROCYSTRTNH2的制备。由FMOCPROOH与HCYSTRTNH2聚合而得；反应体系中偶合试剂为DIC与HOCT；反应溶剂为DMF；反应温度为035；FMOCPROOH的摩尔数，HCYSTRTNH2的摩尔数，偶合试剂的摩尔数均等同；冰乙醚沉淀出反应产物。14HPROCYSTRTNH2的制备。由FMOCPROCYSTRTNH2去FMOC保护基而得；反应体系中去FMOC保护基试剂为25六氢吡啶/DCM；反应持续一个小时。15FMOCTRPBOCPR。
12、OCYSTRTNH2的制备。由HPROCYSTRTNH2与FMOCTRPBOCOH偶合而得；反应体系中偶合试剂为DCC与HOBT；反应溶剂为DMF；反应温度为035；FMOCTRPBOCOH的摩尔数，HPROCYSTRTNH2的摩尔数，偶合试剂的摩尔数均等同；冰乙醚沉淀出产物。16HTRPBOCPROCYSTRTNH2的制备。由FMOCTRPBOCPROCYSTRTNH2去FMOC保护基而得；反应体系中去FMOC保护基试剂为25六氢吡啶/DCM；反应持续一个小时。17FMOCASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2的制备。由HTRPBOCPROCYSTRTNH2与FMOCASPOTB。
13、UOH聚合而得；反应体系中偶合试剂为DCC与HOAT；溶剂为DMF；反应温度为035；FMOCASPOTBUOH，HTRPBOCPROCYSTRTNH2，偶合试剂的摩尔数均等同；冰乙醚沉淀出反应产物。18HASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2的制备。由FMOCASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2去FMOC保护基而得；反应体系中去FMOC保护基试剂为25六氢吡啶/DCM；反应持续一个小时。19FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2的制备。由HASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2与FMOCGLYOH偶合而得；反应体系中；偶合试剂为。
14、DCC与HOAT；反应溶剂为DMF；反应温度为035；FMOCGLYOH，HASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2，偶合试剂的摩尔数均等同；冰乙醚沉淀出反应产物。20HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2的制备。由FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2去FMOC保护基而得；去FMOC保护基试剂为25六氢吡啶/DCM；反应持续一个小时。21TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2的制备。由HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2与TRTMPAHARGBOC2OH偶合而权利要求书。
15、CN101993475ACN101993478A4/4页5得；反应体系中偶合试剂为DIC与HOCT；反应溶剂为DMF；反应温度为035；TRTMPAHARGBOC2OH，HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2，偶合试剂摩尔数等同；冰乙醚沉淀出反应产物。22依替巴肽EPTIFIBATIDE的制备与纯化。TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2，用试剂三氟醋酸/苯甲醚/茴香硫醚/三异丙基硅烷/水9525252525去保护基后用乙醚沉淀出MPAHARGGLYASPTRPPROCYSNH2；TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBU。
16、TRPBOCPROCYSACMNH2用试剂三氟醋酸/苯甲醚/茴香硫醚/三异丙基硅烷/水9525252525去保护基后用乙醚沉淀出MPAHARGGLYASPTRPPROCYSACMNH2；将以上所得二线性七肽用80100MMI2的乙醇溶液氧化环化后均得依替巴肽EPTIFIBATIDE。3根据权利要求2所述的方法，其特征在于在步骤3中，金属催化剂指钴盐，镍盐，锰盐，铁盐，铜盐，铅盐，汞盐，镉盐，锌盐，银盐。有机碱为叔胺类化合物。4根据权利要求2所述的方法，其特征在于在步骤3中，回流温度为40。5根据权利要求2所述的方法，其特征在于在其步骤中，缩合试剂用的是N，N二异丙基碳二亚胺DIC/1羟基1H1。
17、，2，3三唑4羧酸乙酯HOCT，二环己基碳二亚胺DCC/1羟基苯并三唑搭配HOBT，以及二环己基碳二亚胺DCC/N羟基7偶氮苯并三氮唑HOAT的混合交替使用。6根据权利要求2所述的方法，其特征在于在步骤22中，去保护基试剂为三氟醋酸苯甲醚茴香硫醚三异丙基硅烷水9025252525。7根据权利要求2所述的方法，其特征在于在步骤22中，线性七肽用酸性80100MM碘乙醇溶液环化。权利要求书CN101993475ACN101993478A1/10页6一种全液相依替巴肽EPTIFIBATIDE的合成方法0001技术领域该发明名称是一种全液相依替巴肽EPTIFIBATIDE的合成方法，属于生物化学技术领。
18、域，涉及应用金属化合物络合催化得到二肽偶联物后液相合成依替巴肽EPTIFIBATIDE的反应流程。0002背景技术依替巴肽，英文名为EPTIFIBATIDE，分子式为C35H49N11O9S2，分子结构式为00030004该多肽是具特异针对性的血小板糖蛋白IIB/IIIA受体拮抗剂，为美国注册药物INTERGRILIN的主要成份，用于治疗急性冠状动脉粥样硬化以及栓塞等疾病。中国专利02145292X号公开了液相与固相结合的25合成策略合成依替巴肽EPTIFIBATIDE的方法，其中五肽系列GLYASPTRPPROCYSNH2在RINKAM树脂上合成，主要用脲盐作为聚合剂；MPAHARG片断应用。
19、DCC催化的液相胍基化反应来合成；七肽环合在空气氧化的条件下完成。该策略的长处在于避免了使用BOC固相反应策略，特别是HF裂解反应；另外，固相反应在生产上也相对比较省时。上专利并描述了瑞士BACHEM公司所采用的331合成策略，其片断包括MPATRTHARGLYOH，从MPATRTLYSTFAGLYOME胍基化与皂化后得到；ZASPOTBUOH与TRPPROOME聚合后得到ZASPOTBUTRPPROOME，经催化氢化以及皂化后得到ASPTRPPROOH；MPATRTHARGLYOH与ASPTRPPROOH聚合后得化合物MPATRTHARGGLYASPOTBUTRPPROOH，该化合物随之与C。
20、YSTRTNH2聚合后得MPATRTHARGLYASPOTBUTRPPROCYSNH2，该化合物经去保护基反应，氧化成环，进一步去保护基后得依替巴肽EPTIFIBATIDE。上专利并声明BACHEM同时还采用了BOC固相合成策略，按次将BOCCYSOMEBZLOH，BOCPROOH，BOCTRPOH，BOCASPOCHXOH，BOCGLYOH和BOCLYSFMOCOH连到树脂上，接着去BOC保护基，用3，5二甲基吡唑甲脒胍基化后取得BOCHARGLYASPOCHXTRPPROCYSOMEBZL树脂，去BOC保护后该六肽树脂与SBZLOMEMPA聚合得SBZLOMEMPAHARGLYASPOCH。
21、XTRPPROCYSOMEBZL树脂，该粗产品经去保护基反应后，于树脂上氧化得双硫键成环，用HF裂解纯化后得依替巴肽EPTIFIBATIDE。美国专利申请号2006/0036071记录了另一依替巴肽EPTIFIBATIDE的合成方法，其中氨基端保护的高精氨酸与甘氨酸聚合后得P1HARGGLYOH；羧基上保护的天冬氨酸与TRPPRO二肽片断缩合得三肽P3ASPOP2TRPPROOH；以上两个片断然后聚合得五肽P1HARGLYASPOP2TRPPROOH；该五肽在与半胱氨酸聚合后得P1HARGLYASPOP2TRPPROCYSNH2；该六肽通过一二硫键与巯基丙酸结合，去P1保护基后高精氨酸的N端与。
22、巯基丙酸的羧端偶合后得依替巴肽EPTIFIBATIDE。0005发明内容该发明的目的是公开一种全液相合成依替巴肽EPTIFIBATIDE的方说明书CN101993475ACN101993478A2/10页7法，以调整目前依替巴肽EPTIFIBATIDE制备多依靠固相合成，树酯成本较高的情况；该发明的另一目的是公开一二肽胍基化的方法，以降低依替巴肽EPTIFIBATIDE合成中氨基酸的成本。0006本发明的方法包括以下步骤00071本发明于液相中以过渡金属盐络合催化胍基化制备了TRTMPAHARGBOC2OH；00082本发明应用DIC/HOCT，DCC/HOAT以及DCC/HOBT的混合搭配，。
23、于液相中，CN方向合成五肽片断FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2，FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2，然后将它们与二肽片断TRTMPAHARGBOC2OH聚合，于液相中得七肽片断TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2，TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2；00093裂解试剂三氟乙酸/三异丙基硅烷/茴香硫醚/茴香醚/水9525252525去保护基；00104用乙醚沉淀出线性七肽MPAHARGGLYASPTRPPROCYSACMNH2，MPAHA。
24、RGGLYASPTRPPROCYSNH2；00115线性七肽MPAHARGGLYASPTRPPROCYSACMNH2，MPAHARGGLYASPTRPPROCYSNH2用100MM碘/乙醇溶液环化1小时，得粗品依替巴肽EPTIFIBATIDE；00126依替巴肽EPTIFIBATIDE粗品经离子交换树脂纯化。0013附图说明下面结合附图对本发明进一步说明0014图1液相制备依替巴肽EPTIFIBATIDE的代表性反应流程图0015图2依替巴肽EPTIFIBATIDE制备反应RPHPLC检测图谱MPAHARGGLYASPTRPPROCYSNH2环化0016图3依替巴肽EPTIFIBATIDE制备。
25、反应RPHPLC检测图谱MPAHARGGLYASPTRPPROCYSACMNH2环化具体实施方式00171TRTMPALYSFMOCOMEMW71393的制备。将TRTMPAOHMW34846，HLYSFMOCOMEMW38348与偶合试剂DICMW12620，HOCTMW17115混溶于DMF之中；反应混合物在035搅拌48小时，冰乙醚沉淀出反应产物；0018反应体系中0019偶合试剂为DIC/HOCT；0020偶合试剂摩尔数，HLYSFMOCOME的摩尔数与TRTMPAOH的摩尔数均等同；0021反应通式为002200232TRTMPALYSOMEMW49166的制备。将步骤1所得TRTM。
26、PALYSFMOCOMEMW71393在035时于六氢吡啶/DCM或DMF，或三2氨基乙基胺/DCM中搅拌一个小时去FMOC保护基。说明书CN101993475ACN101993478A3/10页800243TRTMPAHARGBOC2OHMW72091的制备。将步骤2所得TRTMPALYSOMEMW49166与BOCNHCSNHBOCMW27635，有机碱，金属催化剂混溶或悬浮于DMF中，40回流24小时；用冰乙醚沉淀出反应产物；1NNAOH水解。0025反应体系中0026BOCNHCSNHBOC摩尔数是TRTMPALYSOME摩尔数的2倍；0027过渡金属盐络合剂的摩尔数与BOCNHCSN。
27、HBOC的摩尔数等同；0028过渡金属盐络合催化剂包括锰盐，铁盐，钴盐，镍盐，铜盐，银盐，汞盐，镉盐，锌盐以及铅盐；0029有机碱包括吡啶，三乙胺等叔胺。0030反应通式为003100324FMOCPROCYSACMNH2MW51061的制备。FMOCPROOHMW33737，偶合试剂DICMW12620，HOCTMW17115先混溶于DMF中，然后于035与HCYSACMNH2MW19125的DMF溶液混和，搅拌24小时；用冰乙醚沉淀出反应产物；0033反应体系中0034偶合试剂为DIC与HOCT；0035偶合试剂摩尔数，FMOCPROOH摩尔数及HCYSACMNH2的摩尔数均等同；0036。
28、反应通式为003700385HPROCYSACMNH2MW28836的制备。将步骤4所得FMOCPROCYSACMNH2MW51061在035于六氢吡啶/DCM或DMF，或三2氨基乙基胺/DCM中搅拌一个小时去FMOC保护基。00396FMOCTRPBOCPROCYSACMNH2MW79693的制备。将步骤5所得HPROCYSACMNH2，MW28836，FMOCTRPBOCOHMW52658，偶合试剂DCCMW20633，HOBTMW13512混溶于DMF中，于035搅拌48小时；用冰乙醚沉淀出反应产物。0040反应体系中0041偶合试剂为DCC与HOBT；0042偶合试剂摩尔数，FMOCT。
29、RPBOCOH摩尔数与HPROCYSACMNH2摩尔数均等同；0043反应通式为0044说明书CN101993475ACN101993478A4/10页900457HTRPBOCPROCYSACMNH2MW57560的制备。将步骤6所得FMOCTRPBOCPROCYSACMNH2MW79693在035于六氢吡啶/DCM或DMF，或三2氨基乙基胺/DCM中搅拌一个小时去FMOC保护基。00468FMOCASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2MW96908的制备。将步骤7所得HTRPBOCPROCYSACMNH2MW57560，FMOCASPOTBUOHMW41150，偶合试剂DCCM。
30、W20633，HOATMW13611混溶于DMF中，于035搅拌24小时，用冰乙醚沉淀出反应产物。0047反应体系中0048偶合试剂为DCC与HOAT；0049偶合试剂摩尔数，FMOCASPOTBUOH摩尔数及HTRPBOCPROCYSACMNH2摩尔数等同；0050反应通式为005100529HASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2MW74785的制备。将步骤8所得FMOCASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2MW96908在035于六氢吡啶/DCM或DMF，或三2氨基乙基胺/DCM中搅拌一个小时后去FMOC保护基。005310FMOCGLYASPOTBUTRPBOC。
31、PROCYSACMNH2MW102714的制备。将步骤9所得HASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2MW74785，FMOCGLYOHMW29730，偶合试剂DCCMW20633，HOATMW13611混溶于DMF中，于035搅拌24小时，用冰乙醚沉淀出反应产物；0054反应体系中0055偶合试剂为DCC与HOAT；0056偶合试剂摩尔数，FMOCGLYOH摩尔数与HASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2摩尔数等同；0057反应通式为0058005911HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2MW80591的制备。将步骤10所得FMOCGLYASPOT。
32、BUTRPBOCPROCYSACMNH2102714在035用六氢吡啶/DCM或DMF，或三2氨基乙基胺/DCM中搅拌一个小时去FMOC保护基。006012TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2MW150881的制备。将步骤11所得HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2MW说明书CN101993475ACN101993478A5/10页1080591，步骤3所得TRTMPAHARGBOC2OHMW72091，偶合试剂DICMW12620与HOCTMW17115混溶于DMF中，于035搅拌24小时，用冰乙醚沉淀出反应产物。0061。
33、反应体系中0062偶合试剂为DIC与HOCT；0063偶合试剂摩尔数，HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2摩尔数及TRTMPAHARGBOC2OH摩尔数均等同；0064反应通式为0065006613FMOCPROCYSTRTNH2MW68186的制备。FMOCPROOHMW33737，偶合试剂DICMW12620与HOCTMW17115先混溶于DMF中，然后与HCYSTRTNH2MW36250的DMF溶液混和，于035搅拌24小时，用冰乙醚沉淀出反应产物。0067反应体系中0068偶合试剂为DIC与HOCT；0069偶合试剂的摩尔数，FMOCPROOH的摩尔数及HCYST。
34、RTNH2的摩尔数均等同；0070反应通式为0071007214HPROCYSTRTNH2MW46063的制备。将步骤13所得FMOCPROCYSTRTNH2MW68186在035于六氢吡啶/DCM或DMF，或三2氨基乙基胺/DCM中搅拌一个小时去FMOC保护基。007315FMOCTRPBOCPROCYSTRTNH2MW96920的制备。将步骤14所得HPROCYSTRTNH2MW46063，FMOCTRPBOCOHMW52658，偶合试剂DCCMW20633，与HOBTMW13512混溶于DMF中，于035搅拌48小时，用冰乙醚沉淀出反应产物；0074反应体系中0075偶合试剂为DCC与H。
35、OBT；0076偶合试剂摩尔数，FMOCTRPBOCOH摩尔数及HPROCYSTRTNH2摩尔数均等同；0077反应通式为0078007916HTRPBOCPROCYSTRTNH2MW74796的制备。将步骤15所得FMOCTRPBOCPROCYSTRTNH2MW96920在035于六氢吡啶/DCM或DMF，或三2氨基乙基胺/DCM中搅拌一个小时后去FMOC保护基。008017FMOCASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW114145的制备。将步骤说明书CN101993475ACN101993478A6/10页1116所得HTRPBOCPROCYSTRTNH2MW74796，F。
36、MOCASPOTBUOHMW41150，偶合试剂DCCMW20633，与HOATMW13611混溶于DMF中，于035搅拌24小时，用冰乙醚沉淀出反应产物。0081反应体系中0082偶合试剂为DCC与HOAT；0083偶合试剂摩尔数，FMOCASPOTBUOH摩尔数及HTRPBOCPROCYSTRTNH2摩尔数均等同；0084反应通式为0085008618HASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW92022的制备。将步骤17所得FMOCASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW114145在035于六氢吡啶/DCM或DMF或三2氨基乙基胺/DCM中搅拌一个小时去FMO。
37、C保护基。008719FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW119950的制备。将步骤18所得HASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW92022，FMOCGLYOHMW29730，偶合试剂混溶于DMF中，于035搅拌24小时；用冰乙醚沉淀出反应产物。0088反应体系中0089偶合试剂为DCC与HOAT；0090偶合试剂摩尔数，FMOCGLYOH摩尔数及HASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2摩尔数均等同；0091反应通式为0092009320HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW97827的制备。将步骤19所得F。
38、MOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW119950在035于六氢吡啶/DCM或DMF，或三2氨基乙基胺/DCM中搅拌一个小时去FMOC保护基。009421TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW168117的制备。将步骤20得HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW97827，TRTMPAHARGBOC2OHMW72091，偶合试剂DICMW12620，与HOCTMW17115混溶于DMF中，于035搅拌24小时，用冰乙醚沉淀出反应产物；0095反应体系中0096偶合试剂为DIC与HOCT；009。
39、7偶合试剂的摩尔数，TRTMPAHARGBOC2OH摩尔数与HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2摩尔数均等同；说明书CN101993475ACN101993478A7/10页120098反应通式为0099010022依替巴肽EPTIFIBATIDE的制备MW83196将步骤21所得TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW168117用试剂三氟乙酸/三异丙基硅烷/茴香硫醚/茴香醚/水9525252525去保护基，用乙醚沉淀出MPAHARGGLYASPTRPPROCYSNH2或将步骤12所得TRTMPAHARGBOC2GLYAS。
40、POTBUTRPBOCPROCYSACMNH2MW150881用试剂三氟乙酸/三异丙基硅烷/茴香硫醚/茴香醚/水9525252525去保护基，用乙醚沉淀出MPAHARGGLYASPTRPPROCYSACMNH2，二者用80100MMI2的乙醇溶液氧化环化后均得依替巴肽EPTIFIBATIDE粗品，阴离子交换树酯纯化。0101反应体系中0102去保护基试剂为三氟乙酸/三异丙基硅烷/茴香硫醚/茴香醚/水9525252525；0103I2的摩尔数是MPAHARGGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSP1NH2的摩尔数的510倍，其中P为ACM，TRT保护基。0104反应通式为01050106实。
41、施例与前述过程中所采用的原料列表如下0107NO品名生产厂家1HLYSFMOCOH上海吉尔生化公司2TRTMPAOH上海吉尔生化公司3BOCNHCSNHBOC自制4FMOCCYSACMOHSIGMAALDRICH5FMOCCYSTRTOHSIGMAADRICH6FMOCPROOHSIGMAALDRICH7FMOCTRPBOCOHSIGMAALDRICH说明书CN101993475ACN101993478A8/10页138FMOCASPTBUOHSIGMAADRICH9FMOCGLYOHSIGMAALDRICH10PIP哌啶四川成都三高生化股份公司11TFA三氟乙酸四川成都三高生化股份公司12T。
42、IS三异丙基硅烷四川成都三高生化股份公司13苯甲醚四川成都三高生化股份公司14茴香硫醚四川成都三高生化股份公司15DIC二异丙基碳二酰亚胺SIGMAALDRICH16HOCTSIGMAALDRICH17DMF二甲基甲酰胺SIGMAALDRICH0108实施例1TRTMPALYSFMOCOME的制备0109操作将TRTMPAOHMW34846，5740MMOL20G，HLYSFMOCOMEMW38348，5740MMOL220G，偶合试剂DICMW12620，5740MMOL072G与HOCTMW17115，5740MMOL098G混溶于二甲基甲酰胺DMF10ML中，于冰浴中搅拌48小时，冰乙醚。
43、沉淀得TRTMPALYSFMOCOME。0110实施例2TRTMPAHARGBOC2OH的制备0111操作1TRTMPALYSFMOCOME去FMOC保护将实施例1制得TRTMPALYSFMOCOMEMW71393，2801MMOL20G于25哌啶/DCM5ML中，室温搅拌1小时，旋转蒸发溶剂，甲醇/二氯甲烷系统快速梯度层析分离得TRTMPALYSOME。2TRTMPALYSOME侧链胍基化将步骤1所得TRTMPALYSOMEMW49166，2034MMOL10G，HGCL2MW27150，4068MMOL110G与BOCNHCSNHCOBMW27635，4068MMOL112G，混溶于二甲基。
44、甲酰胺DMF10ML中，三乙胺调节PH至碱性，40回流24小时，冰乙醚沉淀得TRTMPAHARGBOC2OME。3TRTMPAHARGBOC2OME去甲酯将步骤2所得TRTMPAHARGBOC2OMEMW73494，1361MMOL10G加入到5ML1NNAOH中，室温下搅拌1小时，DCM/ETOAC提取纯化后得TRTMPAHARGBOC2OH。0112实施例3五肽片段HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2的制备0113操作1FMOCCYSACMOH酰胺化将FMOCCYSACMOHMW41447，2413MMOL10G溶于氨水中并回流1小时，蒸干溶剂后得FMOCCYSACM。
45、NH2。2五肽片段的合成按液相合成的方法，室温下，依次于5MLDMF中，于步骤1所得HCYSACMNH2MW19125，2614MMOL050G上联接FMOCPROOHMW33737，2614MMOL088G，偶合试剂为DICMW12620，2614MMOL033G与HOCTMW17115，2614MMOL045G；再联接FMOCTRPBOCOHMW52658，2614MMOL138G，缩合剂说明书CN101993475ACN101993478A9/10页14为DCCMW20633，2614MMOL054G与HOBTMW13512，2614MMOL035G；再依次联接FMOCASPOTBUOH。
46、MW41150，2614MMOL108G与FMOCGLYOHMW29730，2614MMOL078G，缩合剂均为DCCMW20633，2614MMOL054G及HOATMW13611，2614MMOL036G，乙醚沉淀得到产品FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2，25六氢吡啶/DCM去保护得五肽片段HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2；3其间利用5ML25哌啶/DCM逐个脱去FMOC保护基。0114实施例4七肽片段TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2的制备操作取实施例3所得五肽片段HGLYASPO。
47、TBUTRPBOCPROCYSACMNH2MW80591，0620MMOL05G，实施例2所得TRTMPAHARGBOC2OHMW72091，0620MMOL045G，偶合试剂DICMW12620，0620MMOL008G与HOCTMW17115，0620MMOL011G混溶于二甲基甲酰胺DMF中，室温下搅拌24小时，乙醚沉淀，得产物TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSACMNH2。0115实施例5五肽片段HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2的制备0116操作1FMOCCYTRTOH酰胺化将FMOCCYSTRTOHMW58571，170。
48、7MMOL10G溶于氨水中并回流1小时，蒸干溶剂后得FMOCCYSTRTNH2。2五肽片段的合成按液相合成的方法，室温下，依次于5MLDMF中，于步骤1所得HCYSTRTNH2MW36250，1379MMOL050G上联接FMOCPROOHMW33737，1379MMOL047G，偶合试剂为DICMW12620，1379MMOL017G与HOCTMW17115，1379MMOL024G；再联结FMOCTRPBOCOHMW52658，1379MMOL073G，偶合试剂为DCCMW20633，1379MMOL028G与HOBTMW13512，1379MMOL019G；再依次联结FMOCASPOTB。
49、UOHMW41150，1379MMOL057G与FMOCGLYOHMW29730，1379MMOL041G，偶合试剂均为DCCMW20633，1379MMOL028G与HOATMW13611，1379MMOL019G，乙醚沉淀得到产品FMOCGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2，25六氢吡啶/DCM去保护基后得五肽片段HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2；3其间利用5ML25哌啶/DCM逐个脱去FMOC保护基。0117实施例6七肽片段TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2的制备操作取实施例5所得五肽片段HGLYASPOTBUTRPBOCPROCYSTRTNH2MW97827，0511MMOL050G，实施例2所得TRTMPAHARGBOC2OHMW72091，0511MMOL037G，偶合试剂DICMW12620，0511MMOL006G与HOCTMW17115，0511MMOL009G混溶于5ML二甲基甲酰胺DMF中，室温下搅拌24小时，乙醚沉淀，得产物TRTMPAHARGBOC2GLYASPOTBUTRPBOCPRO。