用于缓解胃肠道病症相关症状的益生菌.pdf

摘要
申请专利号：	CN200880111026.6	申请日：	2008.10.08
公开号：	CN101998834A	公开日：	2011.03.30
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|著录事项变更IPC(主分类):A23L 1/30变更事项:申请人变更前:丹尼斯克有限公司变更后:杜邦营养生物科学有限公司变更事项:地址变更前:丹麦哥本哈根变更后:丹麦哥本哈根\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):A23L 1/30申请日:20081008\|\|\|公开
IPC分类号：	A23L1/30	主分类号：	A23L1/30
申请人：	丹尼斯克有限公司
发明人：	G·莱尔; A·乌维汉德
地址：	丹麦哥本哈根
优先权：	2007.10.11 US 60/979,187
专利代理机构：	北京市中咨律师事务所 11247	代理人：	黄革生;林柏楠
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内容摘要

本发明提供适于缓解与胃肠病症相关的症状的益生菌组合物。更具体地，本发明提供缓解与功能性肠病相关的症状、肠易激综合征、功能性腹泻、功能性腹胀以及其它症状的组合物和方法。

权利要求书

1：一种膳食补充剂组合物，其含有嗜酸乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种 Bi-07。
2：权利要求 1 的膳食补充剂，其中所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌 (PTA-4797) 且所述动物双歧杆菌乳亚种 Bi-07 是动物双歧杆菌乳亚种 Bi-07(PTA-4802)。
3：一种改善功能性肠病的症状的方法，其包括： i) 提供患有功能性肠病的个体； ii) 提供含有嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌的组合物；和 iii) 在改善所述功能性肠病的症状的条件下向所述个体施用所述组合物。
4：权利要求 3 的方法，其中所述组合物为膳食补充剂。
5：权利要求 3 的方法，其中所述嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌以约 1×109 至约 2×1011CFU 总益生菌 / 天的剂量施用于所述个体。
6：权利要求 3 的方法，其中所述嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌以约 2×1011CFU 总益生菌 / 天的剂量施用于所述个体。
7：权利要求 2 的方法，其中所述功能性肠病的症状包括腹胀和腹部膨胀。

说明书

用于缓解胃肠道病症相关症状的益生菌
    相关申请
     本申请要求于 2007 年 10 月 11 日递交的题为 “用于缓解胃肠道病症相关症状的益生菌” 的美国临时专利申请序列号 60/979,187 的优先权。
     发明领域本发明提供适于缓解与胃肠道病症相关的症状的益生菌组合物。更具体地，本发明提供缓解与功能性肠病相关的症状、肠易激综合征、功能性腹泻、功能性腹胀 (bloating) 以及其它症状的组合物和方法。
     发明背景
     依据罗马基金会 (McLean， VA)，功能性肠病 (FBD) 的罗马 II 诊断标准是指定位于中或下胃肠 (GI) 道的各种症状。FBD 包括很多临床亚型，例如肠易激综合征 (IBS)、功能性腹泻、功能性便秘、功能性腹胀等。这些病症的特征在于非归因于受影响患者的结构异常或生物化学异常的、慢性或复发性胃肠症状的各种组合。IBS 是最常见的功能性胃肠疾病，影响着全世界的很多成年人。由于 IBS 和其它 FBD 的病理生理学未能获得很好的理解并且目前可用的药物方案是非常有限的，所以需要适于缓解这些病症的症状的方法和组合物。
     发明概述
     本发明提供适于缓解与胃肠道病症相关的症状的益生菌组合物。更具体地，本发明提供组合物和方法以缓解与功能性肠病相关的症状，肠易激综合征、功能性腹泻、功能性腹胀以及其它症状。
     在某些实施方案中，本发明提供嗜酸乳杆菌 (L.acidophilus) 和动物双歧杆菌乳亚种 (B.animalis subsp.lactics)Bi-07 的组合。在某些优选的实施方案中，本发明提供嗜酸乳杆菌 (PTA-4797) 和动物双歧杆菌乳亚种 Bi-07(PTA-4802) 的组合。在某些进一步特别优选的实施方案中，本发明提供含有嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌 Bi-07 的膳食补充剂。在某些进一步优选的实施方案中，含有嗜酸乳杆菌和乳双 9 11 歧杆菌 Bi-07 的膳食补充剂以约 1×10 CFU 至约 2×10 CFU 总益生菌 / 天的剂量被施用于受试者。在某些替代实施方案中，该剂量为约 2×1011CFU 总益生菌 / 天。然而，本发明并不旨在局限于具体剂量，因为预期在不同的情况中和 / 或不同的患者将使用不同的剂量。
     本发明还提供用于改善 FBD 患者的腹胀和腹部膨胀 (distention) 的症状的方法和组合物。在某些优选的实施方案中，本发明提供含有嗜酸乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物以及其用于缓解 FBD 症状的方法。在某些特别优选的实施方案中，本发明提供含有嗜酸乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种 Bi-07 的组合物以及其用于缓解 FBD 症状的方法。
     发明详述
     本发明提供适于缓解与胃肠道病症相关的症状的益生菌组合物。更具体地，本发明提供组合物和方法以缓解与功能性肠病相关的症状、肠易激综合征、功能性腹泻、功能性气胀以及其它症状。
     更具体地，本发明提供适用于人受试者的乳杆菌属和双歧杆菌属益生菌培养物。在某些特别优选的实施方案中，提供嗜酸乳杆菌与动物双歧杆菌的组合。在又进一步的实施方案中，提供动物双歧杆菌乳亚种 ( 在本文也被称为 “乳双歧杆菌 (B.lactis)” ) 与嗜酸乳杆菌的组合。在更进一步特别优选的实施方案中，提供这些生物的组合。在其它的实施方案中，动物双歧杆菌乳亚种 ( 在本文也被称为 “乳双歧杆菌 ) 是被命名为 PTA-4802 的 ATCC 菌株，并且嗜酸乳杆菌
     是被命名为 PTA-4797 的 ATCC 菌株。在开发本发明的过程中，发现施用这些益生菌可以缓解胃肠 (GI) 症状。因此，本发明提供含有可以用于缓解 FBD 相关症状的这些益生菌的组合的方法和组合物。在某些特别优选的实施方案中，该组合物用于缓解症状，例如腹胀和腹部膨胀。然而，本发明并不旨在局限于这些具体症状。
     定义
     除非另有指出，本发明的实践涉及食品微生物学、营养补充剂、胃肠道医学、流行病学、分子生物学、微生物学、蛋白质纯化和工业酶利用及开发中通常使用的常规技术，所有这些技术都在本领域技术人员的能力范围内。本文的上下文中提及的所有专利、专利申请、论文和出版物都在此明确地并入本文作为参考。
     此外，本文所提供的标题并不是对本发明的各个方面或实施方案的限制，本发明的方面和实施方案可以通过参考说明书整体而得出。因此，下面即将定义的术语通过参考说明书整体将获得更全面的定义。然而，为了利于对本发明的理解，下面提供了多个术语的定义。
     除非本文另有定义，本文所用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员通常所理解的含义。尽管与本文所述的那些相似或等效的任何方法和材料都可用于实践本发明，但是本文描述了优选的方法和材料。因此，下面即将定义的术语通过说明书整体进行更全面的描述。另外，如本文所使用，除非上下文另有明确指示，单数术语 “一” 和 “该” 包括对复数的提及。应理解，本发明并不限于所述的具体方法学、操作方案和试剂，本领域技术人员可根据使用它们的情况而改变它们。
     在整个说明书中给出的每个最大数值限旨在包括每个较小的数值限，就如同本文明确写有这些较小数值限一样。本说明书中给出的每个最小数值限将包括每个较大的数值限，就如同本文明确写有这些较大数值限一样。本说明书中给出的每个数值范围将包括落入该较宽数值范围内的每个较窄的数值范围，如同本文明确写有这些较窄的数值范围一样。
     如本文所使用，术语 “食物” 是指可以向植物和 / 或动物提供营养的任何营养物。该术语并不旨在局限于任何特定物，其用于指可以由植物或动物为存活而摄取和同化的任何物质。该术语也不旨在局限于 “固态” 食物，因为该定义也包括液态营养物。事实上，在某些实施方案中，液态营养物比固态食物产品更优选。在某些优选的实施方案中，该术语具体用于指人类消耗的食物。
     如本文所使用，术语 “饲料” 是指可以向非人动物提供营养的任何营养物。该术语并不旨在局限于任何具体物，其用于指可以由植物或动物为存活而摄取和同化的任何物质。该术语也不旨在局限于 “固态” 食物，因为该定义也包括液态营养物。事实上，在某些实施方案中，液态营养物比固态食物产品更优选。如本文所使用，术语 “营养补充剂” 和 “膳食补充剂” 是指加入膳食中的任何产品。在某些特别优选的实施方案中，通过口摄入营养补充剂并且其通常含有一种或多种膳食成分，包括但不限于维生素、矿物质、草本植物 (herb)、氨基酸、酶和生物培养物。在某些特别优选的实施方案中，在无其它生物活性化合物的情况下提供本发明益生菌。如本文所使用， “生物活性剂” 是指在体内具有活性的组合物 / 化合物。生物活性剂包括具有各种功能的酶和其它组合物，所述功能包括但不限于增加或减少营养物质的吸收、修饰肠道微生物群 (microbiota) 的组成和代谢副产物、改善肠道免疫系统的表达等。
     如本文所使用，术语 “营养药 (neutraceutical)” 是指被认为和 / 或被摄取以提供健康益处的食物 / 膳食补充剂。
     如本文所使用，术语 “益生菌” 是指对健康有益的活微生物食物成分。
     如本文所使用，术语 “益生元 (prebiotic)” 是指可以有益地影响摄取该益生元的人和 / 或其它动物的不可消化的食物成分。在优选的实施方案中，益生元选择性地刺激肠道中有限种类的细菌的生长和 / 或活性，由此改善人和 / 或其它动物的健康。
     如本文所使用，术语 “合生元 (synbiotic)” 是指益生元和益生菌的混合物。
     如本文所使用，术语 “病症” 和 “疾病” 是指通过特征性的一组症状和征候表现出来的、对任何身体部分、器官或系统的正常结构和 / 或功能的任何偏离或中断。该术语包括具有已知或未知的病因和 / 或病理学的病况。
     如本文所使用，术语 “治疗” 是指提供导致疾病、紊乱、或疾病或病症的症状的改善、减轻和 / 或去除的组合物。
     如本文所使用，术语 “口服施用” 和 “经口” 是指经口摄入食物和 / 或补充剂。
     如本文所使用，术语 “病症预防” 和 “疾病预防” 是指采用措施来避免病症 / 疾病的发生。在某些实施方案中，采用 “预防性” 措施以便避免疾病 / 病症。
     如本文所使用，术语 “疾病的症状” 是指任何主观的疾病和 / 或患者的状况。其用于指由患者感知到的任何此类迹象。
     如本文所使用，术语 “疾病的征候” 是指对疾病 / 疾症存在的指示。其用于指可由检查医生和 / 或其它健康护理人员察觉的疾病的任何客观迹象。
     如本文所使用，术语 “胃肠” 和 “GI” 是指人和其它动物的消化道中的胃和肠。然而，也如本文的上下文所使用，术语 “胃肠道” (“GI 道” ) 是指从口腔到直肠的整个消化管 (alimentary canal)。该术语包括从口延伸至肛门的管道，在此管道中肌肉的运动和激素与酶的释放导致食物的消化。胃肠道从口开始，经食管、胃、小肠、大肠、直肠，最终到肛门。
     如本文所使用，术语 “消化道” (digestive tract) 是指参与营养物质 ( 例如食物和饮料 ) 的消化的所有器官和结构，包括口腔、食管、胃、小肠、大肠和辅助器官 ( 例如肝、胰脏等 )。
     如本文所使用，术语 “胃肠道菌群” 是指栖居于人和其它动物的胃肠系统的微生物。在某些特别优选的实施方案中，该术语用于指细菌生物，但该术语并不旨在局限于此。
     如本文所使用，术语 “肠 (bowel)” 是指肠道 (intestine)。
     如本文所使用，术语 “餐后 (post-prandial)” 是指进食后的时间。如本文所使用，术语 “餐后症状” 是指在受试者用餐后出现的症状。
     如本文所使用，术语 “功能性肠病” (“FBD” ) 是指这样的病症，其包括非归因于人和 / 或其它动物的消化道的结构异常或生物化学异常的、慢性或复发性胃肠症状的各种组合。
     如本文所使用，术语 “肠易激综合征” (“IBS” ) 包括本领域已知的罗马 II 诊断标准。更具体地，该术语用于指在过去的 12 个月内腹部不适或腹痛至少 12 周 ( 不一定连续 )，所述腹部不适或腹痛具有下列三项特征中的至少两项：排便后缓解；和 / 或其发生伴有排便频率的改变；和 / 或其发生伴有粪便 ( 例如外观 ) 性状的改变。支持 IBS 诊断的症状包括：异常的排便频率 ( 例如每天多于 3 次排便和 / 或每周少于 3 次排便 ) ；异常的粪便性状 ( 例如块状 / 硬便或稀 / 水样便 ) ；异常的粪便排出过程 ( 例如排便费力、急迫感和 / 或排便不净感 ) ；排出黏液；和 / 或胃肠胀气或腹部膨胀感。
     如本文所使用，术语 “功能性腹胀” 包括本领域已知的罗马 II 诊断标准。更具体地，该术语用于指在过去的 12 个月内至少 12 周 ( 不一定连续 ) 的腹部饱胀感、胀气和 / 或可见的腹部膨胀；和不够标准诊断为功能性消化不良、肠易激综合征或其它功能性病症。
     如本文所使用，术语 “功能性便秘” 包括本领域已知的罗马 II 诊断标准。更具体地，该术语用于指在过去的 12 个月内至少 12 周 ( 不一定连续 ) 出现下列症状中的至少两个：超过 1/4 的排便有排便费力；超过 1/4 的排便为块状便或硬便；超过 1/4 的排便有不尽感；超过 1/4 的排便有肛门直肠梗阻感 / 阻塞感；超过 1/4 的排便需要手法帮助 ( 例如手指帮助排便、盆底支持 ) ；和 / 或每周少于 3 次排便。如本文所使用，术语 “功能性腹泻” 包括本领域已知的罗马 II 诊断标准。更具体地，该术语用于指在过去的 12 个月内至少有 12 周 ( 不一定连续 ) 受试者有超过 3/4 的时间出现不伴腹痛的松软 ( 例如糊状 ) 或水样便。
     如本文所使用，术语 “非特异性功能性肠病” 包括本领域已知的罗马 II 诊断标准。更具体地，其是指无器质性疾病的肠道症状，其不符合已经定义的功能性肠病类型。
     如本文所使用，术语 “胃肠症状的缓解” 是指胃肠症状 ( 包括但不限于胀气、腹痛、腹泻等 ) 的减轻或终止。
     如本文所使用，术语 “病态” 是指病症 / 疾病。
     如本文所使用，术语 “死亡” 是指死。
     如本文所使用，术语 “发生率” 是指某个事件发生的比率，如在某时间段内特定疾病的新病例数量。
     如本文所使用，术语 “流行性” 是指某时间给定群体中存在的特定疾病和 / 或病况的病例的总数。
     如本文所使用，术语 “后遗症” 是指作为病况和或疾病事件的后果出现的病症 / 疾病和症状 / 征候。在某些实施方案中，后遗症在初始疾病 / 病症消除后很长时间出现。
     如本文所使用，术语 “亚临床感染” 是指不导致疾病的征候或症状产生 / 被观察到的感染。通常，该患者被引起疾病的生物感染，但却没有意识到该感染。
     如本文所使用，术语 “感染” 是指病原微生物在体内的侵入和增殖。
     如本文所使用，术语 “培养物” 是指任何含有一种或多种微生物的样品或产品。 “纯培养物” 是指其中存在的生物仅仅属于一个特定属和种的一个株系的培养物。这与 “混合培养物” 相反， “混合培养物” 是其中存在一种以上的微生物属和 / 或种的培养物。在本发明的某些实施方案中，使用纯培养物。例如，在某些特别优选的实施方案中，使用乳杆菌属
     ( 例如嗜酸乳杆菌 ) 的纯培养物。然而，在替代实施方案中，可以使用混合培养物。例如，在某些特别优选的实施方案中，使用由嗜酸乳杆菌和双歧杆菌组成的培养物。
     如本文所使用，术语 “乳杆菌”是指乳杆菌科 (Lactobacillaceae) 中乳杆菌属的成员。这些细菌是革兰氏阳性兼性厌氧菌，构成常称作 “乳酸细菌”的细菌群的一个主要部分。已经鉴定了乳杆菌属的多个物种，包括但不限于嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus)、干酪乳杆菌 (L.casei)、德氏乳杆菌 (L.delbrueckii)、发酵乳杆菌 (L.fermentum)、植物乳杆菌 (L.plantarum)、罗伊氏乳杆菌 (L.reuteri) 等。虽然本发明并不旨在局限于任何具体的乳杆菌属物种，但是在某些特别优选的实施方案中，本发明使用嗜酸乳杆菌 NFCM。该属旨在包括已经被重新分类的物种 ( 例如，由于遗传和其它研究导致的生物物种形成的改变 ) 或者出于市场和 / 或其它目的而已经被重新命名的物种。
     如本文所使用，术语 “双歧杆菌” 是指双歧杆菌属的成员。这些细菌是革兰氏阳性厌氧菌，是存在于胃肠道菌群中的一类主要细菌菌株。虽然本发明并不旨在局限于任何具体的双歧杆菌属物种，但是在某些特别优选的实施方案中，本发明使用乳双歧杆菌 Bi-07。该属旨在包括已经被重新分类的物种 ( 例如，由于遗传和其它研究导致的生物物种形成的改变 ) 或者出于市场和 / 或其它目的而已经被重新命名的物种。如本文所使用，术语 “抗微生物剂” 是指任何可以抑制微生物生长或杀死微生物的化合物。该术语旨在以其最广义的含义使用，包括但不限于诸如天然或合成产生的抗生素的化合物。该术语还旨在包括可以用于抑制微生物生长或杀死微生物的化合物和元素。
     如本文所使用，术语 “微生物培养基” 和 “培养基” 是指任何适于微生物生长和繁殖的物质。该术语包括固体平板培养基、以及半固体和液体微生物生长体系。
     实施例为了阐述并进一步举例说明本发明某些优选的实施方案和方面，提供下面的实施例，但并不将这些实施例理解为限制本发明的范围。
     在下面的实验公开内容中，使用下面的缩写：
     ℃ ( 摄氏度 ) ； H2O( 水 ) ； gm( 克 ) ； μg 和 ug( 微克 ) ； mg( 毫克 ) ； ng( 纳克 ) ； μl 和 ul( 微升 ) ； ml( 毫升 ) ； mm( 毫米 ) ； nm( 纳米 ) ； μm 和 um( 微米 ) ； M( 摩尔 ) ； mM( 毫摩尔 ) ； μM 和 uM( 微摩尔 ) ； U( 单位 ) ； sec( 秒 ) ； min(s)( 分钟 ) ； hr(s)( 小时 ) ； sd 和 SD( 标准差 ) ； PBS( 磷酸盐缓冲盐水 [150mM NaCl、 10mM 磷酸钠缓冲液、 pH 7.2]) ； w/v( 重量 / 体积 ) ； v/v( 体积 / 体积 ) ； CFU( 菌落形成单位 ) ； y/o( 年龄；年纪 ) ； Becton Dickinson(Becton Dickinson 诊断系统， Sparks， MD) ； (Difco 实验室， Detroit， MI) ； GIBCO BRL 或 GibcoBRL(Life Technologies 公司， Gaithersburg， MD) ； UNC( 北卡罗来纳大学 ) ；和 ATCC( 美国典型培养物中心， Manassas， VA)。
     用于开发本发明的生物是嗜酸乳杆菌 (PTA-4797) 和动物双歧杆菌乳亚种 Bi-07(PTA-4802)。这些菌株于 37 ℃在含有 0.05 ％半胱氨酸的 MRS 培养基 ( 例如 Difco， Becton Dickinson) 中生长。培养物在含有 H2/CO2 空气的 BBL GASPAKTM 厌氧罐 (Becton-Dickinson) 中孵育 48-72 小时。对于大规模生产，菌株在发酵培养基中生长，离心收集并通过本领域已知的方法进行冷冻稳定 (cryostabilized)。将该冷冻稳定的溶液冻干。
     使用前瞻性、随机双盲、安慰剂对照研究，对本发明进行评估，以评价益生菌 ( 乳杆菌属和双歧杆菌属 ) 细菌在 FBD 患者中的功效。研究总持续时间为 14 周。有 2 周筛选期以确定合格性、主要症状和基线的严重度。然后进入 8 周治疗期，在此期间患者随机分成 2 个处理组 ( 即用益生菌补充剂的活性治疗或安慰剂 )。保持患者和研究者均不知道该随机化。在治疗期结束后还有 4 周随访期。
     从北卡罗来纳大学医院的 GI 门诊部、从地方诊所以及通过广告募集受试者。因为腹痛是 IBS 的基本症状，故此项研究的检定力计算 (Powercalculation) 基于报道的益生菌对腹痛的作用 ( 参见例如 Niedzielin 等人， Eur.J.Gatroenterol.Hepatol.， 13 ： 1143-1147

    [2001] ) 进行。检定力计算表明此研究具有足够的检定力。
     满足所有下列入选标准的受试者被确定为对于此项研究是合格的：收到签署的知情同意书； 18-65 岁；门诊病人 (ambulatory outpatient) ；根据功能性胃肠疾病的罗马 II 标准，存在 IBS 或功能性腹泻或功能性腹胀，并且不管当前的治疗，受试者已经有上述症状至少两周 ( 对于腹泻患者，使用平均≥ 2 次排便 / 天或基于 Bristol 粪便性状评分的平均得分≥ 4/ 周的定义 ) ；受试者的症状为轻度至中度的症状严重度 ( 在基线及在 2 周筛选期结束时评估症状严重度以在随机化之前确定合格性 ) ；受试者在最近 5 年内做过标准的软乙状结肠镜检查或结肠镜检查 ( 受试者如果年龄＞ 50y/o，则必须已经做过结肠镜检查 )。如果适用下列标准中的任一项，则排除潜在的受试者：受试者具有消化道的炎症或结构异常 ( 例如炎性肠病 (IBD)、十二指肠溃疡 (DU) 或胃溃疡 (GU)、梗阻、或有症状的胆石病 ) ；受试者在基线时具有重度 FBD 相关症状；受试者具有严重的、不稳定的医学状况；受试者具有胰岛素依赖型糖尿病；受试者在最近两年内具有重性 (major) 精神病诊断或自杀企图；受试者在两年内有酒精或药物滥用史；受试者具有异常的实验室结果 ( 包括 ALT 或 AST 比正常高 2.5 倍，血清肌酸酐＞ 2.0mg/dl，未处理的异常 TSH 值 ) ；受试者在最近 5 年内治疗过恶性肿瘤 ( 除 BCC 或 SCC 皮肤癌之外 ) ；受试者已被诊断为乳糖酶缺乏症，并且这可能解释其症状 ( 即，症状在不含乳糖的饮食下消除或明显地减轻 ) ；受试者在最近 21 天内参与过药物研究；受试者在最近 8 周内接受过抗生素治疗 ( 对于抗生素治疗的受试者，需要 8 周洗脱期 ) ；受试者之前做过胃或肠大手术；或者受试者处于妊娠或泌乳期，或在研究期间不愿维持有效的避孕。
     此项研究包括 57 位满足功能性肠病 (FBD)、 IBS 或功能性腹泻的罗马 II 标准且具有至少 6 个月的复发症状的随机受试者 ( 女性和男性 )。在这些受试者中， 30 位随机分入活性治疗组， 27 位被分配至安慰剂组。在这些受试者中， 33 位为 IBS 患者 (17 位在活性组， 16 位在安慰剂组 ) ； 21 位为 FBD 患者 ( 非 -IBS FBD)(12 位在活性组， 9 位在安慰剂组 ) ； 3 位为功能性腹泻患者 (1 位在活性组， 2 位在安慰剂组 )。下表提供活性组和安慰剂组中每位受试者的人口统计学信息。
     此项研究期间在诊所中观察受试者 4 次： (1) 在筛选期开始时 ( 第 -2 周 ) ； (2) 在治疗期开始时 ( 第 0 周 ) ； (3) 治疗期中途 ( 第 4 周 ) ；和 (4) 在治疗期结束时 ( 第 8 周 )。在治疗期结束后 2 周 ( 第 10 周 ) 和 4 周 ( 第 12 周 ) 通过电话联系受试者。在每次研究访问中，利用下列工具评价受试者的主要和次要结局指标 (outcome measures) ： GSA(“胃肠症状特异的焦虑” )DemMed(“主要医学叙词” )( 仅第 1 次访问 ) ；症状开始调查表 ( 仅第 1 次访问 ) ；抗生素 / 益生菌治疗调查表 ( 仅第 1 次访问 ) ；满意度量表； BDI-II( “Beck 抑郁自评问卷 (Beck Depression Inventory)-II” )；生活质量 (Quality OfLife)(IBS-QOL) ；进食相关症状调查表； IBS 严重度指数；伴随的药物治疗；以及不良事件回顾。
     在随访期中 ( 第 12 周 ) 和结束时 ( 即第 14 周 ) 通过电话联系受试者，并要求他们邮回其每天日记卡。要求受试者在日记卡上记录他们的症状，记录从筛选期开始时起到终止治疗后 4 周结束。受试者记录排便的次数、每次排便的粪便粘稠度、腹痛、腹胀和餐后症状。此外，受试者每天记录所服用药丸的数量。在电话中，受试者被问到其功能性胃肠症状的整体缓解情况、综合健康情况 (overall well being)、伴随的药物治疗以及来自本研
     究的任何不良事件的状况 ( 如果有的话 )。然后每天评定受试者的症状。
     所有受试者都经历各种实验室试验，包括在筛选期间 ( 第 -2 周至第 0 周 ) 评估细菌过度生长和乳糖不耐性的呼吸试验。在最后的 24 个月获得阴性结果的那些受试者是可接受的；发现阳性的那些受试者被排除。在筛选结束时以及在开始治疗之前 ( 第 0 周 )( 基线 )、治疗中途 ( 第 4 周 ) 和治疗结束时 ( 第 8 周 ) 进行血液检验以评价治疗的安全性。这包括作为炎症标记的 ESR( 红细胞沉降率 )、全血细胞计数以及血小板计数和白细胞分类计数 ( 红细胞压积、血红蛋白、红细胞总数、白细胞总数，以及分类以包括：嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、杆状核嗜中性细胞 )、钠、氯、钾、钙、磷、肌酸酐、 BUN、总蛋白、 LFT、白蛋白和血妊娠试验。允许将筛选访问的 6 个月内所获得的实验室结果用作基线值。记录每位患者的实验室结果。虽然对粪便微生物菌群的研究是可选项，但是作出决定不进行这方面的研究，但是其是可包括在随后的研究中的一个方面。
     如上所示，将受试者入选至两个治疗组 ( 也就是活性治疗对安慰剂 ) 中的一个。活性治疗组接受含有嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌 Bi-07 的补充剂。活性治疗组的患 11 10 者以 1×10 总 CFU(5×10 CFU/ 菌株 ) 接受具有等量的每种生物的口服剂量。每天施用胶囊形式的安慰剂和益生菌产品两次，总日剂量为 2×1011CFU。整个研究中，允许受试者维持他们当前的稳定 ( ＞ 1 个月 ) 药物使用 ( 这些包括解痉药、纤维补充剂、止泻药和 / 或轻泻剂，以及抗抑郁药 )。然而，当前服用 “抗气 (anti-gas)” 药物治疗其肠道症状的那些患者被要求在筛选访问之前至少 7 天终止这些药物 ( 即，不允许受试者在进入本研究的筛选期前一周内服用这些药物 )。对于因任何原因服用抗生素的那些受试者，要求在入选本研究之前至少 8 周的洗脱期。还要求受试者在本研究的剩余时间内不服用这些药物。要求参与者保持相同药物使用，以避免在他们的稳定药物使用方面的任何变化，以及避免在研究参与期间根据需要 ( 即， PRN) 服用任何药物。在每次研究访问中回顾在研究期间的药物使用变化并记录。
     此外，允许受试者非故意的益生菌 ( 即酸奶 ) 消耗。但是，要求他们在研究期间避免富含细菌的酸奶和发酵乳。此外，在研究期间不允许服用益生菌补充剂，并且要求受试者在入选本研究之前至少 8 周终止这些补充剂。
     进行数据分析，以评价所有结局指标得分以及实验室试验在治疗前 ( 即，筛选期结束 [ 第 0 周 ])、治疗期结束 ( 第 8 周 ) 与随访期结束 ( 第 12 周 ) 之间的显著变化。对每个具体终点指标的响应性进行评估，以便确定整体响应性和最特异的 / 阳性的症状响应。响应性的指标包括功能性胃肠症状的全面缓解、所有特异的功能性胃肠相关症状、 IBS 严重度指数和健康相关的生活质量。对整个 FBD 组、以及以探索性方式单独对每个亚组 ( 即 IBS、功能性腹泻和非 -IBS 功能性肠病 ) 进行分析。就不良事件的发生率和实验室试验的变化，对治疗的耐受性和安全性进行分析。保存每位患者与整个研究人群的有关报道的不良事件以及实验室异常的最新日志。
     结果表明，在 4 周时益生菌治疗组的腹胀和腹部膨胀与安慰剂组相比显著改善 ( 分别 4.10±3 对 17±3， p ＝ 0.009)，并在 8 周时显示强劲的改善趋势 ( 分别 4.26±3 对 5.84±3， p ＝ 0.06)。仅使用 IBS 亚组 (n ＝ 33) 的二级分析显示相似的结果，即益生菌组 (n ＝ 17) 的腹胀和腹部膨胀与安慰剂组 (n ＝ 15) 相比显著改善 ( 分别 4.24±3 对 6.73±3， p ＝ 0.03)。这些结果表明，含有嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌 Bi-07(2×1011CFU 总
     益生菌 / 天 ) 的膳食补充剂显著改善了 FBD 患者的腹胀和腹部膨胀的症状。因此，预期在处理患有这些病症的患者时可以使用这些益生菌。重要的是，注意到，这些益生菌是在没有添加其他生物活性剂的情况下向受试者提供的。
     本说明书中提及的所有专利和出版物表明本发明所属领域的技术人员的水平。所有专利和出版物在此并入作为参考，就如同明确地且单独地表明其每个出版物并入作为参考一样。
     已经描述了本发明的优选实施方案，对本领域技术人员而言显然可对公开的实施方案进行各种修改，并且这些修改旨在落入本发明的范围内。
     本领域技术人员容易理解，可以对本发明进行适当调整以实现所述目的和获得提及的以及固有的目标和优点。本文所述的组合物和方法代表优选的实施方案，其是示例性的，并且不旨在局限本发明的范围。对本领域技术人员而言很显然可对本文公开的发明进行各种替代和修改而不背离本发明的范围和精神。
     本文举例说明性地描述的本发明可适宜地在缺乏未在本文中具体公开的任何因素或多个因素、任何限制条件或多个限制条件的情况下实施。已经使用的术语和表述被用作描述性术语，是非限制性的，这些术语和表述的使用并不旨在排除所示及所述特征或其部分的任何等效物，可以理解可以在所要求保护的发明范围内进行多种修改。因此，应理解尽管通过优选的实施方案和可选的特征具体公开了本发明，但是本领域技术人员可寻求本文所公开的概念的修改和变化形式，并且这些修改和变化形式被认为落入后附权利要求所限定的本发明的范围内。本文已经广义地且概括性地描述了本发明。落在该一般性公开范围内的每个较窄的下位和具体公开也形成本发明的一部分。这包括附如下条件或负面定义的本发明上位描述，所述条件或负面定义为从该上位描述中排除任何主题，而不论该被排除物是否已经在本文中被具体地述及。
     11

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1、10申请公布号CN101998834A43申请公布日20110330CN101998834ACN101998834A21申请号200880111026622申请日2008100860/979,18720071011USA23L1/3020060171申请人丹尼斯克有限公司地址丹麦哥本哈根72发明人G莱尔A乌维汉德74专利代理机构北京市中咨律师事务所11247代理人黄革生林柏楠54发明名称用于缓解胃肠道病症相关症状的益生菌57摘要本发明提供适于缓解与胃肠病症相关的症状的益生菌组合物。更具体地，本发明提供缓解与功能性肠病相关的症状、肠易激综合征、功能性腹泻、功能性腹胀以及其它症状的组合物和方法。3。

2、0优先权数据85PCT申请进入国家阶段日2010040986PCT申请的申请数据PCT/US2008/0791772008100887PCT申请的公布数据WO2009/048934EN2009041651INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书9页CN101998840A1/1页21一种膳食补充剂组合物，其含有嗜酸乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种BI07。2权利要求1的膳食补充剂，其中所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌PTA4797且所述动物双歧杆菌乳亚种BI07是动物双歧杆菌乳亚种BI07PTA4802。3一种改善功能性肠病的症状的方法，其包括I提供患有功能性肠病的个。

3、体；II提供含有嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌的组合物；和III在改善所述功能性肠病的症状的条件下向所述个体施用所述组合物。4权利要求3的方法，其中所述组合物为膳食补充剂。5权利要求3的方法，其中所述嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌以约1109至约21011CFU总益生菌/天的剂量施用于所述个体。6权利要求3的方法，其中所述嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌以约21011CFU总益生菌/天的剂量施用于所述个体。7权利要求2的方法，其中所述功能性肠病的症状包括腹胀和腹部膨胀。权利要求书CN101998834ACN101998840A1/9页3用于缓解胃肠道病症相关症状的益生菌0001相关申请0002本申请要求于2007年10。

4、月11日递交的题为“用于缓解胃肠道病症相关症状的益生菌”的美国临时专利申请序列号60/979,187的优先权。发明领域0003本发明提供适于缓解与胃肠道病症相关的症状的益生菌组合物。更具体地，本发明提供缓解与功能性肠病相关的症状、肠易激综合征、功能性腹泻、功能性腹胀BLOATING以及其它症状的组合物和方法。0004发明背景0005依据罗马基金会MCLEAN，VA，功能性肠病FBD的罗马II诊断标准是指定位于中或下胃肠GI道的各种症状。FBD包括很多临床亚型，例如肠易激综合征IBS、功能性腹泻、功能性便秘、功能性腹胀等。这些病症的特征在于非归因于受影响患者的结构异常或生物化学异常的、慢性或复发。

5、性胃肠症状的各种组合。IBS是最常见的功能性胃肠疾病，影响着全世界的很多成年人。由于IBS和其它FBD的病理生理学未能获得很好的理解并且目前可用的药物方案是非常有限的，所以需要适于缓解这些病症的症状的方法和组合物。0006发明概述0007本发明提供适于缓解与胃肠道病症相关的症状的益生菌组合物。更具体地，本发明提供组合物和方法以缓解与功能性肠病相关的症状，肠易激综合征、功能性腹泻、功能性腹胀以及其它症状。0008在某些实施方案中，本发明提供嗜酸乳杆菌LACIDOPHILUS和动物双歧杆菌乳亚种BANIMALISSUBSPLACTICSBI07的组合。在某些优选的实施方案中，本发明提供嗜酸乳杆菌P。

6、TA4797和动物双歧杆菌乳亚种BI07PTA4802的组合。在某些进一步特别优选的实施方案中，本发明提供含有嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌BI07的膳食补充剂。在某些进一步优选的实施方案中，含有嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌BI07的膳食补充剂以约1109CFU至约21011CFU总益生菌/天的剂量被施用于受试者。在某些替代实施方案中，该剂量为约21011CFU总益生菌/天。然而，本发明并不旨在局限于具体剂量，因为预期在不同的情况中和/或不同的患者将使用不同的剂量。0009本发明还提供用于改善FBD患者的腹胀和腹部膨胀DISTENTION的症状的方法和组合物。在某些优选的实施方案中，本发明提供含有嗜酸乳杆菌。

7、和动物双歧杆菌乳亚种的组合物以及其用于缓解FBD症状的方法。在某些特别优选的实施方案中，本发明提供含有嗜酸乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种BI07的组合物以及其用于缓解FBD症状的方法。0010发明详述0011本发明提供适于缓解与胃肠道病症相关的症状的益生菌组合物。更具体地，本发明提供组合物和方法以缓解与功能性肠病相关的症状、肠易激综合征、功能性腹泻、功能性气胀以及其它症状。说明书CN101998834ACN101998840A2/9页40012更具体地，本发明提供适用于人受试者的乳杆菌属和双歧杆菌属益生菌培养物。在某些特别优选的实施方案中，提供嗜酸乳杆菌与动物双歧杆菌的组合。在又进一步的实施方案中。

8、，提供动物双歧杆菌乳亚种在本文也被称为“乳双歧杆菌BLACTIS”与嗜酸乳杆菌的组合。在更进一步特别优选的实施方案中，提供这些生物的组合。在其它的实施方案中，动物双歧杆菌乳亚种在本文也被称为“乳双歧杆菌是被命名为PTA4802的ATCC菌株，并且嗜酸乳杆菌是被命名为PTA4797的ATCC菌株。0013在开发本发明的过程中，发现施用这些益生菌可以缓解胃肠GI症状。因此，本发明提供含有可以用于缓解FBD相关症状的这些益生菌的组合的方法和组合物。在某些特别优选的实施方案中，该组合物用于缓解症状，例如腹胀和腹部膨胀。然而，本发明并不旨在局限于这些具体症状。0014定义0015除非另有指出，本发明的实。

9、践涉及食品微生物学、营养补充剂、胃肠道医学、流行病学、分子生物学、微生物学、蛋白质纯化和工业酶利用及开发中通常使用的常规技术，所有这些技术都在本领域技术人员的能力范围内。本文的上下文中提及的所有专利、专利申请、论文和出版物都在此明确地并入本文作为参考。0016此外，本文所提供的标题并不是对本发明的各个方面或实施方案的限制，本发明的方面和实施方案可以通过参考说明书整体而得出。因此，下面即将定义的术语通过参考说明书整体将获得更全面的定义。然而，为了利于对本发明的理解，下面提供了多个术语的定义。0017除非本文另有定义，本文所用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员通常所理解的含义。尽管。

10、与本文所述的那些相似或等效的任何方法和材料都可用于实践本发明，但是本文描述了优选的方法和材料。因此，下面即将定义的术语通过说明书整体进行更全面的描述。另外，如本文所使用，除非上下文另有明确指示，单数术语“一”和“该”包括对复数的提及。应理解，本发明并不限于所述的具体方法学、操作方案和试剂，本领域技术人员可根据使用它们的情况而改变它们。0018在整个说明书中给出的每个最大数值限旨在包括每个较小的数值限，就如同本文明确写有这些较小数值限一样。本说明书中给出的每个最小数值限将包括每个较大的数值限，就如同本文明确写有这些较大数值限一样。本说明书中给出的每个数值范围将包括落入该较宽数值范围内的每个较窄的。

11、数值范围，如同本文明确写有这些较窄的数值范围一样。0019如本文所使用，术语“食物”是指可以向植物和/或动物提供营养的任何营养物。该术语并不旨在局限于任何特定物，其用于指可以由植物或动物为存活而摄取和同化的任何物质。该术语也不旨在局限于“固态”食物，因为该定义也包括液态营养物。事实上，在某些实施方案中，液态营养物比固态食物产品更优选。在某些优选的实施方案中，该术语具体用于指人类消耗的食物。0020如本文所使用，术语“饲料”是指可以向非人动物提供营养的任何营养物。该术语并不旨在局限于任何具体物，其用于指可以由植物或动物为存活而摄取和同化的任何物质。该术语也不旨在局限于“固态”食物，因为该定义也包。

12、括液态营养物。事实上，在某些实施方案中，液态营养物比固态食物产品更优选。说明书CN101998834ACN101998840A3/9页50021如本文所使用，术语“营养补充剂”和“膳食补充剂”是指加入膳食中的任何产品。在某些特别优选的实施方案中，通过口摄入营养补充剂并且其通常含有一种或多种膳食成分，包括但不限于维生素、矿物质、草本植物HERB、氨基酸、酶和生物培养物。在某些特别优选的实施方案中，在无其它生物活性化合物的情况下提供本发明益生菌。如本文所使用，“生物活性剂”是指在体内具有活性的组合物/化合物。生物活性剂包括具有各种功能的酶和其它组合物，所述功能包括但不限于增加或减少营养物质的吸收、。

13、修饰肠道微生物群MICROBIOTA的组成和代谢副产物、改善肠道免疫系统的表达等。0022如本文所使用，术语“营养药NEUTRACEUTICAL”是指被认为和/或被摄取以提供健康益处的食物/膳食补充剂。0023如本文所使用，术语“益生菌”是指对健康有益的活微生物食物成分。0024如本文所使用，术语“益生元PREBIOTIC”是指可以有益地影响摄取该益生元的人和/或其它动物的不可消化的食物成分。在优选的实施方案中，益生元选择性地刺激肠道中有限种类的细菌的生长和/或活性，由此改善人和/或其它动物的健康。0025如本文所使用，术语“合生元SYNBIOTIC”是指益生元和益生菌的混合物。0026如本文。

14、所使用，术语“病症”和“疾病”是指通过特征性的一组症状和征候表现出来的、对任何身体部分、器官或系统的正常结构和/或功能的任何偏离或中断。该术语包括具有已知或未知的病因和/或病理学的病况。0027如本文所使用，术语“治疗”是指提供导致疾病、紊乱、或疾病或病症的症状的改善、减轻和/或去除的组合物。0028如本文所使用，术语“口服施用”和“经口”是指经口摄入食物和/或补充剂。0029如本文所使用，术语“病症预防”和“疾病预防”是指采用措施来避免病症/疾病的发生。在某些实施方案中，采用“预防性”措施以便避免疾病/病症。0030如本文所使用，术语“疾病的症状”是指任何主观的疾病和/或患者的状况。其用于指。

15、由患者感知到的任何此类迹象。0031如本文所使用，术语“疾病的征候”是指对疾病/疾症存在的指示。其用于指可由检查医生和/或其它健康护理人员察觉的疾病的任何客观迹象。0032如本文所使用，术语“胃肠”和“GI”是指人和其它动物的消化道中的胃和肠。然而，也如本文的上下文所使用，术语“胃肠道”“GI道”是指从口腔到直肠的整个消化管ALIMENTARYCANAL。该术语包括从口延伸至肛门的管道，在此管道中肌肉的运动和激素与酶的释放导致食物的消化。胃肠道从口开始，经食管、胃、小肠、大肠、直肠，最终到肛门。0033如本文所使用，术语“消化道”DIGESTIVETRACT是指参与营养物质例如食物和饮料的消化。

16、的所有器官和结构，包括口腔、食管、胃、小肠、大肠和辅助器官例如肝、胰脏等。0034如本文所使用，术语“胃肠道菌群”是指栖居于人和其它动物的胃肠系统的微生物。在某些特别优选的实施方案中，该术语用于指细菌生物，但该术语并不旨在局限于此。0035如本文所使用，术语“肠BOWEL”是指肠道INTESTINE。0036如本文所使用，术语“餐后POSTPRANDIAL”是指进食后的时间。如本文所使用，术语“餐后症状”是指在受试者用餐后出现的症状。0037如本文所使用，术语“功能性肠病”“FBD”是指这样的病症，其包括非归因于人说明书CN101998834ACN101998840A4/9页6和/或其它动物的。

17、消化道的结构异常或生物化学异常的、慢性或复发性胃肠症状的各种组合。0038如本文所使用，术语“肠易激综合征”“IBS”包括本领域已知的罗马II诊断标准。更具体地，该术语用于指在过去的12个月内腹部不适或腹痛至少12周不一定连续，所述腹部不适或腹痛具有下列三项特征中的至少两项排便后缓解；和/或其发生伴有排便频率的改变；和/或其发生伴有粪便例如外观性状的改变。支持IBS诊断的症状包括异常的排便频率例如每天多于3次排便和/或每周少于3次排便；异常的粪便性状例如块状/硬便或稀/水样便；异常的粪便排出过程例如排便费力、急迫感和/或排便不净感；排出黏液；和/或胃肠胀气或腹部膨胀感。0039如本文所使用，术。

18、语“功能性腹胀”包括本领域已知的罗马II诊断标准。更具体地，该术语用于指在过去的12个月内至少12周不一定连续的腹部饱胀感、胀气和/或可见的腹部膨胀；和不够标准诊断为功能性消化不良、肠易激综合征或其它功能性病症。0040如本文所使用，术语“功能性便秘”包括本领域已知的罗马II诊断标准。更具体地，该术语用于指在过去的12个月内至少12周不一定连续出现下列症状中的至少两个超过1/4的排便有排便费力；超过1/4的排便为块状便或硬便；超过1/4的排便有不尽感；超过1/4的排便有肛门直肠梗阻感/阻塞感；超过1/4的排便需要手法帮助例如手指帮助排便、盆底支持；和/或每周少于3次排便。0041如本文所使用，。

19、术语“功能性腹泻”包括本领域已知的罗马II诊断标准。更具体地，该术语用于指在过去的12个月内至少有12周不一定连续受试者有超过3/4的时间出现不伴腹痛的松软例如糊状或水样便。0042如本文所使用，术语“非特异性功能性肠病”包括本领域已知的罗马II诊断标准。更具体地，其是指无器质性疾病的肠道症状，其不符合已经定义的功能性肠病类型。0043如本文所使用，术语“胃肠症状的缓解”是指胃肠症状包括但不限于胀气、腹痛、腹泻等的减轻或终止。0044如本文所使用，术语“病态”是指病症/疾病。0045如本文所使用，术语“死亡”是指死。0046如本文所使用，术语“发生率”是指某个事件发生的比率，如在某时间段内特定。

20、疾病的新病例数量。0047如本文所使用，术语“流行性”是指某时间给定群体中存在的特定疾病和/或病况的病例的总数。0048如本文所使用，术语“后遗症”是指作为病况和或疾病事件的后果出现的病症/疾病和症状/征候。在某些实施方案中，后遗症在初始疾病/病症消除后很长时间出现。0049如本文所使用，术语“亚临床感染”是指不导致疾病的征候或症状产生/被观察到的感染。通常，该患者被引起疾病的生物感染，但却没有意识到该感染。0050如本文所使用，术语“感染”是指病原微生物在体内的侵入和增殖。0051如本文所使用，术语“培养物”是指任何含有一种或多种微生物的样品或产品。“纯培养物”是指其中存在的生物仅仅属于一个。

21、特定属和种的一个株系的培养物。这与“混合培养物”相反，“混合培养物”是其中存在一种以上的微生物属和/或种的培养物。在本发明的某些实施方案中，使用纯培养物。例如，在某些特别优选的实施方案中，使用乳杆菌属说明书CN101998834ACN101998840A5/9页7例如嗜酸乳杆菌的纯培养物。然而，在替代实施方案中，可以使用混合培养物。例如，在某些特别优选的实施方案中，使用由嗜酸乳杆菌和双歧杆菌组成的培养物。0052如本文所使用，术语“乳杆菌”是指乳杆菌科LACTOBACILLACEAE中乳杆菌属的成员。这些细菌是革兰氏阳性兼性厌氧菌，构成常称作“乳酸细菌”的细菌群的一个主要部分。已经鉴定了乳杆菌。

22、属的多个物种，包括但不限于嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌LBULGARICUS、干酪乳杆菌LCASEI、德氏乳杆菌LDELBRUECKII、发酵乳杆菌LFERMENTUM、植物乳杆菌LPLANTARUM、罗伊氏乳杆菌LREUTERI等。虽然本发明并不旨在局限于任何具体的乳杆菌属物种，但是在某些特别优选的实施方案中，本发明使用嗜酸乳杆菌NFCM。该属旨在包括已经被重新分类的物种例如，由于遗传和其它研究导致的生物物种形成的改变或者出于市场和/或其它目的而已经被重新命名的物种。0053如本文所使用，术语“双歧杆菌”是指双歧杆菌属的成员。这些细菌是革兰氏阳性厌氧菌，是存在于胃肠道菌群中的一类主要细菌菌株。。

23、虽然本发明并不旨在局限于任何具体的双歧杆菌属物种，但是在某些特别优选的实施方案中，本发明使用乳双歧杆菌BI07。该属旨在包括已经被重新分类的物种例如，由于遗传和其它研究导致的生物物种形成的改变或者出于市场和/或其它目的而已经被重新命名的物种。0054如本文所使用，术语“抗微生物剂”是指任何可以抑制微生物生长或杀死微生物的化合物。该术语旨在以其最广义的含义使用，包括但不限于诸如天然或合成产生的抗生素的化合物。该术语还旨在包括可以用于抑制微生物生长或杀死微生物的化合物和元素。0055如本文所使用，术语“微生物培养基”和“培养基”是指任何适于微生物生长和繁殖的物质。该术语包括固体平板培养基、以及半固。

24、体和液体微生物生长体系。实施例0056为了阐述并进一步举例说明本发明某些优选的实施方案和方面，提供下面的实施例，但并不将这些实施例理解为限制本发明的范围。0057在下面的实验公开内容中，使用下面的缩写0058摄氏度；H2O水；GM克；G和UG微克；MG毫克；NG纳克；L和UL微升；ML毫升；MM毫米；NM纳米；M和UM微米；M摩尔；MM毫摩尔；M和UM微摩尔；U单位；SEC秒；MINS分钟；HRS小时；SD和SD标准差；PBS磷酸盐缓冲盐水150MMNACL、10MM磷酸钠缓冲液、PH72；W/V重量/体积；V/V体积/体积；CFU菌落形成单位；Y/O年龄；年纪；BECTONDICKINSON。

25、BECTONDICKINSON诊断系统，SPARKS，MD；DIFCO实验室，DETROIT，MI；GIBCOBRL或GIBCOBRLLIFETECHNOLOGIES公司，GAITHERSBURG，MD；UNC北卡罗来纳大学；和ATCC美国典型培养物中心，MANASSAS，VA。0059用于开发本发明的生物是嗜酸乳杆菌PTA4797和动物双歧杆菌乳亚种BI07PTA4802。这些菌株于37在含有005半胱氨酸的MRS培养基例如DIFCO，BECTONDICKINSON中生长。培养物在含有H2/CO2空气的BBLGASPAKTM厌氧罐BECTONDICKINSON中孵育4872小时。对于大规模生。

26、产，菌株在发酵培养基中生长，离心收集并通过本领域已知的方法进行冷冻稳定CRYOSTABILIZED。将该冷冻稳定的溶液冻干。说明书CN101998834ACN101998840A6/9页80060使用前瞻性、随机双盲、安慰剂对照研究，对本发明进行评估，以评价益生菌乳杆菌属和双歧杆菌属细菌在FBD患者中的功效。研究总持续时间为14周。有2周筛选期以确定合格性、主要症状和基线的严重度。然后进入8周治疗期，在此期间患者随机分成2个处理组即用益生菌补充剂的活性治疗或安慰剂。保持患者和研究者均不知道该随机化。在治疗期结束后还有4周随访期。0061从北卡罗来纳大学医院的GI门诊部、从地方诊所以及通过广告募。

27、集受试者。因为腹痛是IBS的基本症状，故此项研究的检定力计算POWERCALCULATION基于报道的益生菌对腹痛的作用参见例如NIEDZIELIN等人，EURJGATROENTEROLHEPATOL，13114311472001进行。检定力计算表明此研究具有足够的检定力。0062满足所有下列入选标准的受试者被确定为对于此项研究是合格的收到签署的知情同意书；1865岁；门诊病人AMBULATORYOUTPATIENT；根据功能性胃肠疾病的罗马II标准，存在IBS或功能性腹泻或功能性腹胀，并且不管当前的治疗，受试者已经有上述症状至少两周对于腹泻患者，使用平均2次排便/天或基于BRISTOL粪便性。

28、状评分的平均得分4/周的定义；受试者的症状为轻度至中度的症状严重度在基线及在2周筛选期结束时评估症状严重度以在随机化之前确定合格性；受试者在最近5年内做过标准的软乙状结肠镜检查或结肠镜检查受试者如果年龄50Y/O，则必须已经做过结肠镜检查。0063如果适用下列标准中的任一项，则排除潜在的受试者受试者具有消化道的炎症或结构异常例如炎性肠病IBD、十二指肠溃疡DU或胃溃疡GU、梗阻、或有症状的胆石病；受试者在基线时具有重度FBD相关症状；受试者具有严重的、不稳定的医学状况；受试者具有胰岛素依赖型糖尿病；受试者在最近两年内具有重性MAJOR精神病诊断或自杀企图；受试者在两年内有酒精或药物滥用史；受试。

29、者具有异常的实验室结果包括ALT或AST比正常高25倍，血清肌酸酐20MG/DL，未处理的异常TSH值；受试者在最近5年内治疗过恶性肿瘤除BCC或SCC皮肤癌之外；受试者已被诊断为乳糖酶缺乏症，并且这可能解释其症状即，症状在不含乳糖的饮食下消除或明显地减轻；受试者在最近21天内参与过药物研究；受试者在最近8周内接受过抗生素治疗对于抗生素治疗的受试者，需要8周洗脱期；受试者之前做过胃或肠大手术；或者受试者处于妊娠或泌乳期，或在研究期间不愿维持有效的避孕。0064此项研究包括57位满足功能性肠病FBD、IBS或功能性腹泻的罗马II标准且具有至少6个月的复发症状的随机受试者女性和男性。在这些受试者中。

30、，30位随机分入活性治疗组，27位被分配至安慰剂组。在这些受试者中，33位为IBS患者17位在活性组，16位在安慰剂组；21位为FBD患者非IBSFBD12位在活性组，9位在安慰剂组；3位为功能性腹泻患者1位在活性组，2位在安慰剂组。下表提供活性组和安慰剂组中每位受试者的人口统计学信息。0065说明书CN101998834ACN101998840A7/9页900660067此项研究期间在诊所中观察受试者4次1在筛选期开始时第2周；2在治疗期开始时第0周；3治疗期中途第4周；和4在治疗期结束时第8周。在治疗期结束后2周第10周和4周第12周通过电话联系受试者。在每次研究访问中，利用下列工具评价受。

31、试者的主要和次要结局指标OUTCOMEMEASURESGSA“胃肠症状特异的焦虑”DEMMED“主要医学叙词”仅第1次访问；症状开始调查表仅第1次访问；抗生素/益生菌治疗调查表仅第1次访问；满意度量表；BDIII“BECK抑郁自评问卷BECKDEPRESSIONINVENTORYII”；生活质量QUALITYOFLIFEIBSQOL；进食相关症状调查表；IBS严重度指数；伴随的药物治疗；以及不良事件回顾。0068在随访期中第12周和结束时即第14周通过电话联系受试者，并要求他们邮回其每天日记卡。要求受试者在日记卡上记录他们的症状，记录从筛选期开始时起到终止治疗后4周结束。受试者记录排便的次数、。

32、每次排便的粪便粘稠度、腹痛、腹胀和餐后症状。此外，受试者每天记录所服用药丸的数量。在电话中，受试者被问到其功能性胃肠症状的整体缓解情况、综合健康情况OVERALLWELLBEING、伴随的药物治疗以及来自本研说明书CN101998834ACN101998840A8/9页10究的任何不良事件的状况如果有的话。然后每天评定受试者的症状。0069所有受试者都经历各种实验室试验，包括在筛选期间第2周至第0周评估细菌过度生长和乳糖不耐性的呼吸试验。在最后的24个月获得阴性结果的那些受试者是可接受的；发现阳性的那些受试者被排除。在筛选结束时以及在开始治疗之前第0周基线、治疗中途第4周和治疗结束时第8周进行。

33、血液检验以评价治疗的安全性。这包括作为炎症标记的ESR红细胞沉降率、全血细胞计数以及血小板计数和白细胞分类计数红细胞压积、血红蛋白、红细胞总数、白细胞总数，以及分类以包括嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、杆状核嗜中性细胞、钠、氯、钾、钙、磷、肌酸酐、BUN、总蛋白、LFT、白蛋白和血妊娠试验。允许将筛选访问的6个月内所获得的实验室结果用作基线值。记录每位患者的实验室结果。虽然对粪便微生物菌群的研究是可选项，但是作出决定不进行这方面的研究，但是其是可包括在随后的研究中的一个方面。0070如上所示，将受试者入选至两个治疗组也就是活性治疗对安慰剂中的一个。活性治疗组接受含。

34、有嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌BI07的补充剂。活性治疗组的患者以11011总CFU51010CFU/菌株接受具有等量的每种生物的口服剂量。每天施用胶囊形式的安慰剂和益生菌产品两次，总日剂量为21011CFU。0071整个研究中，允许受试者维持他们当前的稳定1个月药物使用这些包括解痉药、纤维补充剂、止泻药和/或轻泻剂，以及抗抑郁药。然而，当前服用“抗气ANTIGAS”药物治疗其肠道症状的那些患者被要求在筛选访问之前至少7天终止这些药物即，不允许受试者在进入本研究的筛选期前一周内服用这些药物。对于因任何原因服用抗生素的那些受试者，要求在入选本研究之前至少8周的洗脱期。还要求受试者在本研究的剩余时间内不。

35、服用这些药物。要求参与者保持相同药物使用，以避免在他们的稳定药物使用方面的任何变化，以及避免在研究参与期间根据需要即，PRN服用任何药物。在每次研究访问中回顾在研究期间的药物使用变化并记录。0072此外，允许受试者非故意的益生菌即酸奶消耗。但是，要求他们在研究期间避免富含细菌的酸奶和发酵乳。此外，在研究期间不允许服用益生菌补充剂，并且要求受试者在入选本研究之前至少8周终止这些补充剂。0073进行数据分析，以评价所有结局指标得分以及实验室试验在治疗前即，筛选期结束第0周、治疗期结束第8周与随访期结束第12周之间的显著变化。对每个具体终点指标的响应性进行评估，以便确定整体响应性和最特异的/阳性的症。

36、状响应。响应性的指标包括功能性胃肠症状的全面缓解、所有特异的功能性胃肠相关症状、IBS严重度指数和健康相关的生活质量。对整个FBD组、以及以探索性方式单独对每个亚组即IBS、功能性腹泻和非IBS功能性肠病进行分析。就不良事件的发生率和实验室试验的变化，对治疗的耐受性和安全性进行分析。保存每位患者与整个研究人群的有关报道的不良事件以及实验室异常的最新日志。0074结果表明，在4周时益生菌治疗组的腹胀和腹部膨胀与安慰剂组相比显著改善分别4103对173，P0009，并在8周时显示强劲的改善趋势分别4263对5843，P006。仅使用IBS亚组N33的二级分析显示相似的结果，即益生菌组N17的腹胀和。

37、腹部膨胀与安慰剂组N15相比显著改善分别4243对6733，P003。这些结果表明，含有嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌BI0721011CFU总说明书CN101998834ACN101998840A9/9页11益生菌/天的膳食补充剂显著改善了FBD患者的腹胀和腹部膨胀的症状。因此，预期在处理患有这些病症的患者时可以使用这些益生菌。重要的是，注意到，这些益生菌是在没有添加其他生物活性剂的情况下向受试者提供的。0075本说明书中提及的所有专利和出版物表明本发明所属领域的技术人员的水平。所有专利和出版物在此并入作为参考，就如同明确地且单独地表明其每个出版物并入作为参考一样。0076已经描述了本发明的优选实施。

38、方案，对本领域技术人员而言显然可对公开的实施方案进行各种修改，并且这些修改旨在落入本发明的范围内。0077本领域技术人员容易理解，可以对本发明进行适当调整以实现所述目的和获得提及的以及固有的目标和优点。本文所述的组合物和方法代表优选的实施方案，其是示例性的，并且不旨在局限本发明的范围。对本领域技术人员而言很显然可对本文公开的发明进行各种替代和修改而不背离本发明的范围和精神。0078本文举例说明性地描述的本发明可适宜地在缺乏未在本文中具体公开的任何因素或多个因素、任何限制条件或多个限制条件的情况下实施。已经使用的术语和表述被用作描述性术语，是非限制性的，这些术语和表述的使用并不旨在排除所示及所述特征或其部分的任何等效物，可以理解可以在所要求保护的发明范围内进行多种修改。因此，应理解尽管通过优选的实施方案和可选的特征具体公开了本发明，但是本领域技术人员可寻求本文所公开的概念的修改和变化形式，并且这些修改和变化形式被认为落入后附权利要求所限定的本发明的范围内。0079本文已经广义地且概括性地描述了本发明。落在该一般性公开范围内的每个较窄的下位和具体公开也形成本发明的一部分。这包括附如下条件或负面定义的本发明上位描述，所述条件或负面定义为从该上位描述中排除任何主题，而不论该被排除物是否已经在本文中被具体地述及。说明书CN101998834A。

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