干试剂、干试剂试剂盒、试剂装置、干试剂的制造方法相关申请的交叉引用
本申请主张以2011年5月26日申请的日本申请特愿2011-118378和
2012年5月24日申请的日本申请特愿2012-118521为基础的优先权，且援
引其公开的全部内容。
技术领域
本发明涉及干试剂(乾燥試薬)、干试剂试剂盒、试剂装置、干试剂
的制造方法。
背景技术
在分子生物学的领域中，作为扩增目标核酸序列的方法，以PCR法为
代表的各种核酸扩增方法被广泛使用。上述核酸扩增是在含有聚合酶、
dNTP等核酸单体、无机盐类、引物和三羟甲基氨基甲烷(正式名称：三
羟基甲基氨基甲烷)等的缓冲剂作为必要成分的反应液中进行。在该核酸
扩增反应中通常可以利用市售的核酸扩增用试剂盒。上述试剂盒例如可举
出将适当组合了上述必要成分的多种液体试剂容纳在单独的容器中的试剂
盒。然而，上述液体试剂存在稳定性较差，难以在常温下长期保存的问
题。
因此，为了避免上述稳定性的问题，提出了组合了含有作为上述必要
成分的一部分的核酸单体和引物的干试剂、以及含有其他必要成分的液体
试剂的核酸扩增用试剂盒(日本特开2007-43997号公报)。该试剂盒中，
例如，在上述干试剂中添加被检测体，将上述干试剂溶解后，在其中混合
上述液体试剂，由此可以进行核酸扩增。然而，上述液体试剂中所含的聚
合酶在液体中的稳定性较差，难以常温(室温)下保存。因此，上述液体
试剂必须进行例如冷藏保存或冷冻保存。但是，考虑到例如需要对多个被
检测体实施核酸扩增的情况和流通等的情况，非常希望上述核酸扩增用试
剂盒能够在常温(室温)下保存。
另一方面，作为将各必要成分制成干燥状态的核酸扩增用试剂盒，还
提出了独立地含有含聚合酶的干试剂、以及含有除此以外的必要成分的干
试剂的试剂盒(日本专利文献特表2008-501331号公报)。
发明内容
然而，本发明人等发现，保存含有聚合酶以外的必要成分的干试剂的
结果是核酸单体的保存后的稳定性会显著降低，难以进行充分的核酸扩
增。
因此，本发明的目的在于，提供一种在例如室温条件下，干燥状态保
存后，也能充分地在核酸扩增中使用的干试剂、干试剂试剂盒、试剂装置
和干试剂的制造方法。
为了实现上述目的，本发明的干试剂是核酸扩增中使用的干试剂，含
有至少一种核酸单体和Mg2+，上述至少一种核酸单体与Mg2+的摩尔比为
1∶0.03～1∶100。另外，本发明的干试剂试剂盒是在核酸扩增中使用的干
试剂试剂盒，含有上述本发明的干试剂。进而，本发明的试剂装置是在核
酸扩增中使用的试剂装置，含有基材(基体材料，例如表面)和上述本发
明的干试剂，在上述基材中(或表面上)配置有上述干试剂。本发明如后
所述，还包括核酸扩增中所述干试剂、所述干试剂试剂盒和/或试剂装置的
使用。
本发明的制造方法是在核酸扩增中使用的干试剂的制造方法，包括使
含有至少一种核酸单体与Mg2+的液体试剂干燥的工序，在上述液体试剂
中，上述至少一种核酸单体与Mg2+的摩尔比为1∶0.03～1∶100。
根据本发明的干试剂，在例如室温条件下保存后，也能够进行核酸扩
增。因此，例如，在对多个被检测体进行核酸扩增的情况下和在流通的情
况下，操作非常简便，可以低成本化。另外，由于能在干燥状态下的保
存，因此例如可以将全部必要成分配置在同一个芯片上，也可以实现芯片
化。由此，由于其既维持保存后的核酸扩增能力又能提高操作性，所以可
以说，本发明的干试剂在利用核酸扩增的基因分析等中是一种非常有用的
工具。
附图说明
图1A～图1F是表示实施例1A和实施例2A中的、反应液的Tm分析
的结果的曲线图，其表示每单位时间的BODIPY FL的荧光强度的变化量
(d荧光强度增加量/dt)与温度之间的关系。纵轴是每单位时间的荧光强
度的变化量(d荧光强度增加量/dt)，横轴是温度(℃)。
图1A表示干试剂D1-1(d27)的结果；
图1B表示干试剂D1-3(d27)的结果；
图1C表示干试剂D1-4(d27)的结果；
图1D表示干试剂D2-1(d17)的结果；
图1E表示干试剂D2-1(d27)的结果；
图1F表示干试剂D2-5(d27)的结果。
具体实施方式
<干试剂>
如上所述，本发明的干试剂是核酸扩增中使用的干试剂，含有至少一
种核酸单体和Mg2+，上述至少一种核酸单体与Mg2+的摩尔比为1∶0.03～
1∶100。在本发明中，上述核酸单体与Mg2+的摩尔比，是指Mg2+相对于
具有碱基的至少一种核酸单体的比。以下，将上述核酸单体(s)与Mg2+
的摩尔比表示为摩尔比(s∶Mg2+)，上述摩尔比的范围中所含的条件，
也称为条件sM。
在本发明的干试剂中，对于上述摩尔比(s∶Mg2+)而言，
下限例如为1∶0.03，优选为1∶1，上限为1∶100，优选为1∶50，更
优选为1∶30、1∶20、1∶15或1∶10；
其范围是1∶0.03～1∶100，优选为1∶0.03～1∶50，更优选为1∶1～
1∶30。
本发明的干试剂中所含的上述核酸单体的种类优选为两种以上，更优
选为三种以上，进一步优选四种以上，特别优选四种或五种。上述干试剂
中所含的上述单体的种类为两种以上时，如上所述，只要至少一种核酸单
体与Mg2+的摩尔比(s∶Mg2+)满足上述条件sM的范围(1∶0.03～1∶
100)即可，例如，优选两种核酸单体各自与Mg2+的摩尔比满足上述范
围，更优选三种、四种或五种核酸单体各自与Mg2+的摩尔比满足上述范
围。
本发明中的核酸单体的碱基例如为构成核酸(DNA或RNA)的代表性
的碱基，可举出A(腺嘌呤)、G(鸟嘌呤)、C(胞嘧啶)、T(胸腺嘧
啶)、U(尿嘧啶)。以下，将具有腺嘌呤的核酸单体称为腺嘌呤核酸单
体，将具有鸟嘌呤的核酸单体称为鸟嘌呤核酸单体，将具有胞嘧啶的核酸
单体称为胞嘧啶核酸单体，将具有胸腺嘧啶的核酸单体称为胸腺嘧啶核酸
单体，将具有尿嘧啶的核酸单体称为尿嘧啶核酸单体。具有上述碱基的核
酸单体，例如可举出腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、胞嘧啶核苷酸、胸腺
嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸等核苷酸，作为具体例，可举出dATP、dGTP
、dCTP、dTTP、dUTP等脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)等。除此以外，上
述碱基例如可以使用聚合酶在基质上产生的碱基，作为具体例，可举出肌
苷(inosine)等。另外，上述核酸单体例如可以是天然核苷酸(脱氧核糖
核苷酸、核糖核苷酸)，也可以是人工核苷酸。上述人工核苷酸例如可举
出桥联核酸(Bridged Nucleic Acid)、肽核酸(Peptide Nucleic Acid)等。
以下，作为上述核酸单体，适当例示包括腺嘌呤核酸单体(例如，
dATP)、鸟嘌呤核酸单体(例如，dGTP)、胞嘧啶核酸单体(例如，
dCTP)、和胸腺嘧啶核酸单体(例如，dTTP)和/或尿嘧啶核酸单体(例
如，dUTP)的形式，但是本发明不限于这些例子。
在本发明中，上述核酸单体的摩尔比(比率)可以根据上述核酸单体
的种类求得，例如，可以将上述各种核酸单体的各自的量作为基准而求
得。上述量例如可举出摩尔数、浓度等。上述浓度，例如是在制备上述干
试剂时，干燥前的试剂中的各种核酸单体的浓度。另外，在上述干试剂
中，干燥后的试剂中的各种核酸单体的摩尔数反映了干燥前的试剂中的上
述各种核酸单体的摩尔数。作为具体例，本发明的干试剂含有腺嘌呤核酸
单体(例如，dATP)、鸟嘌呤核酸单体(例如，dGTP)、胞嘧啶核酸单
体(例如，dCTP)和胸腺嘧啶核酸单体(例如，dTTP)和/或尿嘧啶核酸
单体(例如，dUTP)时，可以将各自的上述量作为基准，求出各自的上述
摩尔比。
作为具体例，本发明的干试剂含有例如上述腺嘌呤核酸单体、上述鸟
嘌呤核酸单体、上述胞嘧啶核酸单体和上述胸腺嘧啶核酸单体时，上述四
种中至少一种核酸单体与Mg2+的摩尔比(s∶Mg2+)为上述条件sM的范围
(1∶0.03～1∶100)即可，优选两种的核酸单体各自与Mg2+的摩尔比为上
述范围，更优选三种核酸单体各自与Mg2+的摩尔比为上述范围，进一步优
选四种的核酸单体各自与Mg2+的摩尔比为上述范围。特别优选上述腺嘌呤
核酸单体、上述鸟嘌呤核酸单体和上述胞嘧啶核酸单体各自与Mg2+的摩尔
比为上述范围，最优选的是，在特别优选情况的基础上，上述胸腺嘧啶核
酸单体与Mg2+的摩尔比也为上述范围。
另外，本发明的干试剂中，例如可以代替上述胸腺嘧啶核酸单体而含
有上述尿嘧啶核酸单体。已知使用上述尿嘧啶核酸单体时，一般相比其他
核酸单体，即，相比上述腺嘌呤核酸单体、上述鸟嘌呤核酸单体和/或上述
胞嘧啶核酸单体，将尿嘧啶核酸单体设定为更高浓度(例如，PCR
applications manual 3rdedition，Roche applied science，p109参照)。在本
发明的干试剂含有上述尿嘧啶核酸单体时，其摩尔数例如可例示以下的条
件。对于上述具有腺嘌呤的核酸单体的摩尔数、上述具有鸟嘌呤的核酸单
体的摩尔数和上述具有胞嘧啶的核酸单体的摩尔数的平均摩尔数，与上述
具有尿嘧啶的核酸单体的摩尔数之比而言，
下限例如为1∶0.5，优选为1∶1，更优选为1∶2；
上限例如为1∶10，优选为1∶6，更优选为1∶4；
其范围例如为1∶0.5～1∶10，优选为1∶1～1∶6，更优选为1∶2～
1∶4。
在本发明的干试剂含有例如上述腺嘌呤核酸单体、上述鸟嘌呤核酸单
体、上述胞嘧啶核酸单体和上述尿嘧啶核酸单体时，上述四种中至少一种
核酸单体与Mg2+的摩尔比(s∶Mg2+)为上述条件sM的范围(1∶0.03～
1∶100)即可，优选两种的核酸单体各自与Mg2+的摩尔比为上述范围，更
优选三种或四种核酸单体各自与Mg2+的摩尔比为上述范围。特别优选上述
腺嘌呤核酸单体、上述鸟嘌呤核酸单体和上述胞嘧啶核酸单体各自与Mg2+
的摩尔比为上述范围。此时，上述尿嘧啶核酸单体与Mg2+的摩尔比例如可
以满足上述条件sM的范围，也可以不满足上述范围。后者时，例如，对
于上述尿嘧啶核酸单体与Mg2+的摩尔比(s∶Mg2+)而言，
下限例如为1∶0.003，优选为1∶0.0075，更优选为1∶0.01，进一步优
选为1∶0.075，特别优选为1∶0.25；
上限例如为1∶200，优选为1∶50，更优选为1∶25，进一步优选为1
∶15；
其范围，例如为1∶0.003～1∶200，优选为1∶0.0075～1∶50，更优
选为1∶0.01～1∶50或1∶0.075～1∶50，进一步优选为1∶0.075～1∶25
或1∶0.01～1∶25，特别优选为1∶0.25～1∶15。
在本发明中，上述干试剂中所含的全部核酸单体的总摩尔数与Mg2+的
摩尔数的摩尔比例如为1∶0.03～1∶100。以下，将上述全部核酸单体的
总摩尔数(t)与Mg2+的摩尔数之比表示为摩尔比(t∶Mg2+)，也将上述
数值范围中所含的摩尔比的条件称为条件tM。
在本发明的干试剂中，对于上述摩尔比(t∶Mg2+)，
下限例如为1∶0.0075，优选为1∶0.01，更优选为1∶0.075，进一步优
选为1∶0.1，特别优选为1∶0.2；
上限例如为1∶25，优选1∶20，更优选为1∶10，进一步优选为1∶
6；
其范围例如为1∶0.0075～1∶25，优选为1∶0.0075～1∶20，更优选
为1∶0.1～1∶10，进一步优选为1∶0.2～1∶6。
上述摩尔比(t∶Mg2+)是上述干试剂中所含的各种核酸单体的总量的
摩尔数(总摩尔数)与Mg2+的摩尔数之比。所谓上述干试剂中的上述核酸
单体的总量，即将上述干试剂中所含的各种核酸单体全部视为是一个核酸
单体，并确定其总量的概念。此时，上述干试剂中的各种核酸单体间的比
率例如可以是均等的，也可以不均等。
在使用上述尿嘧啶核酸单体时，如上所述，比其他核酸单体，即，比
上述腺嘌呤核酸单体、上述鸟嘌呤核酸单体和/或上述胞嘧啶核酸单体，尿
嘧啶核酸单体一般被设定为更高浓度。在本发明的干试剂含有上述尿嘧啶
核酸单体时，对于上述摩尔比(t∶Mg2+)而言，可以是基于全部核酸单体
的总摩尔数的值满足上述条件tM(1∶0.03～1∶100)，也可以是以下示
出的计算方法所得的值满足上述条件tM(1∶0.03～1∶100)。后者的计
算方法例如可以在上述尿嘧啶核酸单体的摩尔数比其他核酸单体的各摩尔
数大时采用。即，将上述尿嘧啶核酸单体以外的各核酸单体的平均摩尔数
假定为上述尿嘧啶核酸的摩尔数，将上述尿嘧啶核酸的上述假定摩尔数与
其他各核酸单体的各摩尔数加和在一起，将所得值作为全部核酸单体的假
定的总摩尔数。于是，从上述假定的总摩尔数与Mg2+的摩尔数算出上述摩
尔比(t∶Mg2+)。该值优选满足上述条件tM。
在本发明中，干试剂例如也可以称为“固体试剂”，或“核酸单体干试
剂”。制造上述干试剂时的干燥方法没有特别限制，例如优选冷冻干燥、
旋转干燥、真空干燥、热风干燥、自然干燥等，更优选自然干燥。如果为
自然干燥，例如不需要设备等，可以降低劳动力和成本。
在本发明中，将核酸单体、Mg2+、K+、聚合酶、三羟甲基氨基甲烷
(正式名称三羟基甲基氨基甲烷，以下也称为“Tris”)和引物分别称为“核
酸扩增的必要成分”。这些成分是核酸扩增的必要成分，并不意味着本发
明的干试剂含有全部这些必要成分。
本发明的干试剂，作为具体例，如以下所示，可举出不含K+的第1核
酸单体干试剂和含K+的第2核酸单体干试剂。只要没有特别说明，摩尔数
和摩尔比的说明等可以引用前述的记载。
本发明的第1核酸单体干试剂含有至少一种核酸单体和Mg2+，上述至
少一种核酸单体(s)与Mg2+的摩尔比(s∶Mg2+)为1∶0.3～1∶100，并
且不含K+。在上述第1核酸单体干试剂中，对于上述核酸单体(s)与
Mg2+的摩尔比(s∶Mg2+)的条件sM而言，
下限为例如为1∶0.03，更优选1∶0.3，进一步优选1∶0.5，特别优
选1∶1；
上限为1∶100，优选1∶50，特别优选，1∶30，1∶20，1∶15或1
∶10，
其范围如上所述，例如为1∶0.03～1∶100，优选1∶0.3～1∶100，更
优选为1∶0.5～1∶50，特别优选为1∶1～1∶30。
一般地说，已知在核酸扩增用试剂中过剩量添加Mg2+时，会阻碍反应
(参照http://www.roche-applied-science.com/PROD_INF/MANUALS/
pcr_man/chapter_2.pdf的p18)。因此，上述核酸单体(s)与Mg2+的摩尔
比(s∶Mg2+)例如最大为1∶100左右。
上述第1核酸单体干试剂中所含的上述核酸单体的种类，没有特别限
制，例如，如上所述。上述第1核酸单体干试剂中所含的上述单体的种类
为两种以上时，如上所述，至少一种核酸单体与Mg2+的摩尔比(s∶Mg2+
)满足上述范围即可，例如优选两种的核酸单体各自与Mg2+的摩尔比满足
上述范围，更优选三种、四种或五种核酸单体各自与Mg2+的摩尔比满足上
述范围。
上述第1核酸单体干试剂中，对于上述全部核酸单体的总摩尔数(t)
与Mg2+的摩尔数的摩尔比(t∶Mg2+)而言，
下限例如为1∶0.0075，优选为1∶0.075，更优选为1∶0.1，进一步优
选为1∶0.2；
上限例如为1∶25，优选1∶20，更优选为1∶10，进一步优选为1∶6
；
其范围例如为1∶0.0075～1∶25，优选为1∶0.075～1∶25，更优选为
1∶0.075～1∶20，进一步优选为1∶0.1～1∶10，特别优选为1∶0.2～1∶6
上述第1核酸单体干试剂，例如可以以离子的状态含有Mg2+，也可以
以盐的状态含有Mg2+。Mg2+的盐可举出例如MgCl2、Mg(CH3COO)2、
MgBr2、MgSO4、Mg(NO3)2等。
上述第1核酸单体干试剂，除了上述核酸单体与Mg2+以外，只要是上
述聚合酶，上述引物和K+以外的成分，可以含有任意其他添加成分。上述
其他添加成分，例如可举出表面活性剂、糖类、聚合物等。
上述第1核酸单体干试剂也可含有例如上述Tris，但是优选不含有。
在上述核酸单体干试剂含有上述Tris时，关于上述至少一种核酸单体
(s)与上述Tris的摩尔比(s∶Tris)的条件sT，例如，相对于1份上述
核酸单体上述Tris为60份以下(1∶60以下)，更优选1∶30以下、1∶
20以下、1∶15以下，进一步优选1∶10以下，更进一步优选1∶1以下。
上述第1核酸单体干试剂中，关于上述全部核酸单体的总摩尔数(t)
与Tris的摩尔数的摩尔比(t∶Tris)的条件tT，例如，相对于1份上述全
部核酸单体，上述Tris为15以下(1∶15以下)，优选为1∶6以下，更
优选为1∶4以下。此外，上述全部核酸单体的总摩尔数可以设定为与前
述相同。
上述第1核酸单体干试剂中所含的上述单体的种类为两种以上时，如
上所述，至少一种核酸单体(s)与上述Tris的摩尔比(s∶Tris)优选满足
上述条件sT的范围，更优选两种核酸单体各自与上述Tris的摩尔比满足上
述范围，进一步优选三种、四种或五种核酸单体各自与上述Tris的摩尔比
满足上述范围。
上述第1核酸单体干试剂中，上述各核酸单体和Mg2+的含量，以及任
意含有的上述添加成分的含量，分别都没有特别限制。各自的上述含量，
例如可以为一次核酸扩增所需的量，也可以是多次核酸扩增所需的量。在
前者情况时，例如只要在使用时适当将上述第1核酸单体干试剂在溶剂中
混合，并将该混合液全部用于核酸扩增的反应即可。另外，为后者时，例
如只要在使用时适当将上述第1核酸单体干试剂在溶剂中混合，从该混合
液中采集必要量，在核酸扩增的反应中使用即可。
进行核酸扩增时，在前述的“核酸扩增的必要成分”中，除了在上述第
1核酸单体干试剂中所含的成分以外，例如，可以包括以下的干试剂
(A)和/或干试剂(B)。
(A)含有聚合酶，不含Mg2+、K+、上述Tris、核酸单体和引物的干
试剂
(B)含有引物，不含K+的干试剂
上述干试剂(A)以下也称为“聚合酶干试剂”，上述干试剂(B)以下
也称为“引物干试剂”。上述干试剂(A)和上述干试剂(B)是相对于上述
第1核酸单体干试剂而言独立的干试剂。
使用上述第1核酸单体干试剂进行核酸扩增时，与上述第1核酸单体
干试剂并用的试剂没有特别限制，例如，优选使用上述聚合酶干试剂
(A)和/或上述引物干试剂(B)。例如可以将上述聚合酶干试剂(A)和
上述引物干试剂(B)中的任一种与上述第1核酸单体干试剂并用，也可
以将上述聚合酶干试剂(A)和上述引物干试剂(B)两者与上述第1核酸
单体干试剂并用。在仅将上述聚合酶干试剂(A)和上述引物干试剂(B)
中的一种与上述第1核酸单体干试剂并用时，例如还可以并用液体试剂，
进行核酸扩增反应。上述液体试剂，优选含有核酸扩增的必要成分中的、
上述第1核酸单体干试剂和上述(A)或上述(B)的干试剂之中所含的必
要成分以外的成分。此时，使用时，例如可以通过将上述各种干试剂在上
述液体试剂或被检测体中溶解，由此进行扩增反应。另一方面，在将上述
聚合酶干试剂(A)和上述引物干试剂(B)两者与上述第1核酸单体干试
剂并用时，例如可以通过将这些干试剂溶解于溶剂或被检测体中，来进行
扩增反应。上述溶剂没有特别限制，例如可以使用水和缓冲液等。上述被
检测体没有特别限制，可举出含有核酸扩增的模板的液体。
除了上述聚合酶以外，上述聚合酶干试剂(A)可以含有任意其他
的、除Mg2+、K+、上述Tris、上述核酸单体和上述引物之外的添加成分。
上述其他添加成分例如可举出酶稳定化剂、表面活性剂、糖类、聚合物
等。上述引物干试剂(B)除了上述引物的之外，可以含有任意的其他K+
以外的成分的添加成分。上述其他添加成分例如可举出酶稳定化剂、表面
活性剂、糖类、聚合物等。
上述第1核酸单体干试剂的制造方法没有特别限制，例如可以通过使
含有上述至少一种核酸单体与Mg2+的第1液体试剂干燥来制造。
上述第1液体试剂例如可以根据上述第1核酸单体干试剂中所含的成
分的种类和成分比来进行制备。上述第1液体试剂中，上述至少一种核酸
单体(s)与Mg2+的摩尔比(s∶Mg2+)如上所述。另外，上述全部核酸单
体的总摩尔数与Mg2+的摩尔比例如也为如上所述。
上述第1液体试剂例如还可以适当含有前述的任意的添加成分。上述
第1液体试剂例如优选不含上述Tris。在上述第1液体试剂含有上述Tris
时，上述核酸单体(s)与上述Tris的摩尔比(s∶Tris)例如与前述相
同。另外，上述全部核酸单体的总摩尔数与Tris的摩尔比例如也与前述相
同。
上述第1液体试剂例如可以通过将前述的各种成分溶解或分散在溶剂
中来制备。上述溶剂没有特别限制，例如可举出水。
另外，本发明的第2核酸单体干试剂含有至少一种核酸单体和Mg2+，
还含有K+。上述第2核酸单体干试剂中，上述核酸单体(s)与Mg2+的摩
尔比(s∶Mg2+)的条件sM为1∶0.03～1∶100。对于上述摩尔比(s∶
Mg2+)而言，
下限为1∶0.03，优选为1∶0.1，优选为1∶0.3，更优选为1∶0.5，
特别优选为1∶1；
上限为1∶100，优选为1∶50，特别优选为1∶30，1∶20，1∶15或
1∶10；
其范围是1∶0.03～1∶100，优选为1∶0.03～1∶50，更优选为1∶
0.3～1∶50或1∶0.3～1∶30，进一步优选为1∶1～1∶50或1∶1～1∶
30，特别优选为1∶1～1∶30。
上述第2核酸单体干试剂中，上述核酸单体(s)与K+的摩尔比(s∶
K+)的条件sK没有特别限制。关于上述摩尔比(s∶K+)，
下限例如为1∶0.01或0.03，优选为1∶0.1，更优选为1∶1；
上限例如为1∶1000，优选为1∶500，更优选为1∶300或1∶100；
其范围是例如，1∶0.01～1∶1000或1∶0.03～1∶1000，优选为1∶
0.1～1∶500，特别优选1∶1～1∶300。
上述第2核酸单体干试剂中所含的上述核酸单体的种类没有特别限制
，例如为如上所述。上述第2核酸单体干试剂中所含的上述单体的种类为
两种以上时，如上所述，Mg2+相对于至少一种核酸单体的摩尔比(s∶
Mg2+)和K+相对于至少一种核酸单体的摩尔比(s∶K+)分别满足上述条
件sM和条件sK的范围即可，例如，优选两种的核酸单体各自与Mg2+和K+
的各摩尔比满足上述范围，更优选三种、四种或五种的核酸单体各自与
Mg2+和K+的各摩尔比满足上述范围。
上述第2核酸单体干试剂中，关于上述全部核酸单体的总摩尔数(t)
与Mg2+的摩尔数的摩尔比(t∶Mg2+)的条件tM，
下限例如为1∶0.0075，优选为1∶0.01，更优选为1∶0.075，进一步优
选为1∶0.1，特别优选为1∶0.2；
上限例如为1∶25，优选为1∶20，更优选为1∶10，进一步优选为1∶
6；
其范围例如为1∶0.0075～1∶25，优选为1∶0.0075～1∶20，更优选
为1∶0.1～1∶10，进一步优选为1∶0.2～1∶6。
上述第2核酸单体干试剂中，上述全部核酸单体的总摩尔数(t)与K+
的摩尔数的摩尔比(t∶K+)的条件tK没有特别限制。
上述第2核酸单体干试剂例如可以以离子的形式含有K+，也可以以盐
的形式含有K+。K+的盐例如可举出KCl、KNO3、K2SO4、KBr、K2CO3
等。
上述第2核酸单体干试剂除了上述核酸单体、Mg2+和K+之外，可以含
有任意的其他作为上述聚合酶和上述引物以外的成分的添加成分。上述其
他添加成分例如可举出表面活性剂、糖类、聚合物等。
上述第2核酸单体干试剂例如可以含有上述Tris，但是优选不含有。在
上述第2核酸单体干试剂含有上述Tris时，上述至少一种核酸单体(s)与
上述Tris的摩尔比(s∶Tris)的条件sT，例如可举出与上述第1核酸单体干
试剂相同的摩尔比。另外，上述全部核酸单体的总摩尔数(t)与上述Tris
的摩尔数的摩尔比(t∶Tris)的条件tT，例如可举出上述第1核酸单体干试
剂与相同的摩尔比。
上述第2核酸单体干试剂中所含的上述单体的种类为两种以上时，如
上所述，上述Tris相对于至少一种核酸单体(s)的摩尔比(s∶Tris)和K+
相对于至少一种核酸单体(s)的摩尔比(s∶K+)优选分别满足上述条件
sT和条件sK的范围，更优选两种核酸单体各自与上述Tris的摩尔比和K+的
摩尔比满足上述各范围，进一步优选三种、四种或五种核酸单体各自与上
述Tris的摩尔比和K+的摩尔比满足上述各范围。
上述第2核酸单体干试剂中，上述各核酸单体、Mg2+和K+含量，以及
任意含有的上述添加成分的含量，分别都没有特别限制，例如为与上述第
1核酸单体干试剂相同。
进行核酸扩增时，前述的“核酸扩增的必要成分”中，除了上述第2核
酸单体干试剂中所含的成分以外，例如，可以包括前述的聚合酶干试剂
(A)和/或引物干试剂(B)。
使用上述第2核酸单体干试剂进行核酸扩增时，并用的试剂没有特别
限制，例如，优选使用上述聚合酶干试剂(A)和/或上述引物干试剂
(B)。上述第2核酸单体干试剂例如与上述聚合酶干试剂(A)和/或上
述引物干试剂(B)并用时，可以与上述第1核酸单体干试剂相同地使
用。
上述第2核酸单体干试剂的制造方法没有特别限制，例如可以通过使
含有上述至少一种核酸单体、Mg2+和K+的第2液体试剂干燥，由此进行制
造。
上述第2液体试剂例如可以根据上述第2核酸单体干试剂中所含的成
分的种类和成分比来进行制备。上述第2液体试剂中，上述至少一种核酸
单体(s)与Mg2+的摩尔比(s∶Mg2+)，上述至少一种核酸单体(s)与
K+的摩尔比(s∶K+)例如为如上所述。另外，上述全部核酸单体的总摩
尔数(t)与Mg2+的摩尔比(t∶Mg2+)，和上述总摩尔数(t)与K+的摩
尔比(t∶K+)也例如为如上所述。
上述第2液体试剂例如还可以适当含有前述的任意的添加成分。上述
第2液体试剂例如优选不含上述Tris。但是在上述第2液体试剂含有上述
Tris时，上述核酸单体(s)与上述Tris的摩尔比(s∶Tris)例如与前述相
同。另外，上述全部核酸单体的总摩尔数(t)与Tris的摩尔比(t∶Tris)
例如也为如上所述。
上述第2液体试剂例如可以通过将前述的各种成分溶解或分散在溶剂
中来进行制备。上述溶剂没有特别限制，例如可举出水。
使用本发明的干试剂的核酸扩增的方法没有特别限制，例如，可举出
PCR法、逆转录(RT)-PCR法、NASBA(核酸序列依赖性扩增法，
Nucleic acid sequence based amplification)法、TMA(转录介导扩增，
Transcription-mediated amplification)法、SDA(链置换扩增，Strand
Displacement Amplification)法等。
另外，作为其他形态，本发明的干试剂可举出如下用于核酸扩增的干
试剂，其中含有至少一种核酸单体和Mg2+、所述干试剂所含有的全部核酸
单体的总摩尔数与Mg2+的摩尔数的摩尔比为1∶0.0075～1∶25。本发明的
干试剂的详细情况可以援引前述的记载。
如上所述，本发明的干试剂试剂盒为在核酸扩增中使用的干试剂试剂
盒，且含有上述本发明的干试剂。本发明的干试剂试剂盒的特征在于，含
有本发明的干试剂，其他构成和条件无任何限制。
本发明的干试剂试剂盒，作为上述本发明的干试剂，例如，可以使用
上述第1核酸单体干试剂和上述第2核酸单体干试剂的任一种。使用了上
述第1核酸单体干试剂的上述干试剂试剂盒也称为第1干试剂试剂盒，使
用了上述第2核酸单体干试剂的上述干试剂试剂盒也称为第2干试剂试剂
盒。
本发明的干试剂试剂盒除了具有上述本发明的核酸单体干试剂，还可
以具备上述聚合酶干试剂(A)和/或上述引物干试剂(B)。具体地说，
除上述核酸单体干试剂之外，还可以使用上述聚合酶干试剂(A)和上述
引物干试剂(B)中的任一种，也可以使用它们两者，优选具有上述核酸
单体干试剂、上述聚合酶干试剂(A)和上述引物干试剂(B)的全部。上
述聚合酶干试剂(A)和上述引物干试剂(B)，例如可以分别与上述本发
明的核酸单体干试剂相同地进行制备。
本发明的干试剂试剂盒，例如可以将上述各干试剂分别配置在单独的
基材上(或基材中)，也可以将各干试剂配置于相同的基材。为后者时，
各干试剂例如可以相邻地配置，也可以隔开任意的距离进行配置。上述基
材的种类无特别限制，只要能够配置上述干试剂、进行核酸扩增反应即
可。上述基材例如可以举出滤纸、多孔介质等测试片、芯片、试管等。上
述干试剂例如可配置于基材的表面，在试管等容器的情况下，可以配置于
其内部。在前者的情况下，所述基材例如优选具有适合于支持上述干试剂
的表面。关于上述干试剂的配置，例如，可以参照后述的本发明的试剂装
置。本发明的干试剂试剂盒优选还具备例如使用说明书。
本发明的试剂装置如上所述为核酸扩增中使用的试剂装置，且含有基
材和上述本发明的干试剂，上述干试剂被配置于上述基材。本发明的试剂
装置，只要在上述基材上配置上述本发明的干试剂即可，其他构成和条件
无任何限制。
本发明的试剂装置中，作为上述本发明的干试剂，例如，可以使用上
述第1核酸单体干试剂和上述第2核酸单体干试剂的任一种。使用了上述
第1核酸单体干试剂的上述试剂装置也称为第1试剂装置，使用了上述第
2核酸单体干试剂的上述试剂装置也称为第2试剂装置。
本发明的试剂装置例如可以还含有上述聚合酶干试剂(A)和/或上述
引物干试剂(B)。具体地说，除了上述核酸单体干试剂之外，可以配制
(设置)上述聚合酶干试剂(A)和上述引物干试剂(B)中的任一种，也
可以配制它们两者，但是优选配制上述核酸单体干试剂、上述聚合酶干试
剂(A)和上述引物干试剂(B)的全部。本发明的试剂装置具备上述核酸
单体干试剂，以及上述聚合酶干试剂(A)和上述引物干试剂(B)中的任
一种或两者时，例如，优选各干试剂分别独立地进行配置。
在本发明的试剂装置如上所述具有两种以上的干试剂时，各干试剂例
如可以独立地配置在上述基材中的1个试剂区域内，也可以分别独立地配
置在2个以上的试剂区域内。为前者时，例如，使用时，可以通过将被检
测体或溶剂导入到上述1个试剂区域内，溶解各干试剂，并进行混合。另
外，为后者的情况时，例如，优选上述试剂区域之间用流路连结。这种情
况下，例如，在使用时，将被检测体或溶剂导入至任一的试剂区域后，该
混合溶液进一步经由上述流路导入其他试剂区域，溶解各干试剂，由此可
以进行混合。另外，本发明的试剂装置中，由于可以进行例如扩增反应，
因此本发明的试剂装置也可以称为反应器。
上述基材的种类没有特别限制，只要能够配置上述干试剂且能进行核
酸扩增反应即可。上述基材，例如可举出滤纸、多孔介质等试验片、芯
片、试管等。
本发明的制造方法，如上所述，为制造在核酸扩增中使用的干试剂的
方法，包括使含有至少一种核酸单体与Mg2+的液体试剂干燥的工序，上述
液体试剂中，上述核酸单体与Mg2+的摩尔比为1∶0.03～1∶100。
本发明的制造方法，例如，在制造上述第1核酸单体干试剂时，作为
上述液体试剂，优选使用上述至少一种核酸单体与Mg2+的摩尔比为1∶
0.3～1∶100，且不含K+的上述第1液体试剂。另外，本发明的制造方
法，例如，在制造上述第2核酸单体干试剂时，作为上述液体试剂，优选
使用含有上述至少一种核酸单体、Mg2+和K+，上述至少一种核酸单体与
Mg2+的摩尔比为1∶0.03～1∶100的上述第2液体试剂。上述液体试剂的
制备方法和条件以及干燥方法，如上所述。
另外，本发明的制造方法中，作为其他形态，可举出包括使含有至少
一种核酸单体和Mg2+的液体试剂干燥的工序，并且上述液体试剂中含有的
全部核酸单体的总摩尔数与Mg2+的摩尔数的摩尔比为1∶0.0075～1∶25
的方法。本发明的制造方法的详细情况，可以援引前述的记载。
如上所述制造的干试剂，稳定性非常优异，因此，例如即使在长时间
保存后，也显示与保存前同等程度的品质，所以利用同等程度的试剂量，
就能进行同样的核酸扩增反应。通过本发明的制造方法制造的干试剂，例
如，能在70℃以下保存，例如，在约50℃以下能保存至少2个月，约
30℃以下能保存至少12个月，20℃以下能保存至少24个月左右，并维持
保存前的品质。
本发明的稳定化方法是核酸扩增中使用的干试剂的稳定化方法，其特
征在于，包括通过上述本发明的制造方法来制造干试剂的工序。本发明的
稳定化方法的特征在于，通过上述本发明的制造方法制造干试剂，其他构
成和条件并无任何限制。
实施例
对本发明的实施例进行说明。但是，本发明不限于下述实施例。此
外，只要没有特别说明，“％”表示w/v％。
实施例1A～1B中，对于含有核酸单体和Mg2+，且不含K+的第1核
酸单体干试剂，确认了其保存稳定性。
[实施例1A]
本例中，作为PCR中使用的必要成分，将核酸单体和Mg2+在容器内
干燥之后，保存得到的核酸单体干试剂，确认其保存稳定性。
(1)干试剂的制备
制备下述表1所示的干燥用液体试剂D1-1～D1-4。将2.5μL上述各干
燥用液体试剂分别点样至单独的容器的内部，在相对湿度小于5％、并且
在25℃的条件下，干燥一夜。由此得到干试剂D1-1(d0)、D1-2
(d0)、D1-3(d0)、D1-4(d0)。“d0”表示没有进行后述的保存的干试
剂(以下相同)。
表1
(2)干试剂的保存
将加入了上述各干试剂D1-1(d0)～D1-4(d0)的各容器密闭，与干
试剂一起放入聚乙烯袋中，在50℃保存17天或27天。将上述保存了17
天的各干试剂作为干试剂D1-1(d17)～D1-4(d17)，将上述保存了27
天的各干试剂作为干试剂D1-1(d27)～D1-4(d27)。
(3)保存后的稳定性评价
使用保存0日、保存17日和保存27日的上述各干试剂，进行基于
PCR的核酸扩增，评价保存后的稳定性。
首先，将上述各干试剂与事先制备的液体试剂充分地混合，制备液量
10μL的下述表2的组成的PCR反应液。上述液体试剂通过与上述干试剂
的混合，制备成使得各成分的最终浓度(上述PCR反应液中的各成分的浓
度)达到下述表2的浓度。
表2
反应液量(10μl)
Tris-HCl(pH8.6)
25mM
KCl
20mM
(CH3COO)2Mg
2mM
dUTP
200μM
d(AUGC)TP
各200μM
探针
0.2μM
引物
1.5μM
BSA
0.001％
Taq聚合酶
0.25U
精制基因组(罗氏公司)
1ng
引物：正向引物和反向引物的合计浓度
上述表2中的探针和引物如以下所述。
探针(序列编号1)
5’-ggagaaggtcaaGgtatc-(BODIPY FL)-3’
正向引物(序列编号2)
5’-cggagcccctgcatgcaa-3’
反向引物(序列编号3)
5’-aatgatactatgaatttggggacttcgaa-3’
对于上述PCR反应液，在用PCR仪(Eppendorf公司制)进行PCR
后，使用全自动SNPs检测装置(商品名i-densy(注册商标)，Arkray公
司制)，进行了Tm分析。上述PCR中，在对上述PCR反应液于95℃进
行1分钟的处理后，以95℃10秒和62℃15秒为1个循环，反复进行50个
循环。而且，上述Tm分析如下进行，将上述反应液在95℃处理1秒后，
将温度的上升速度设为1℃/3秒，从40℃加热至75℃，测定在检测波长
520～555nm下的荧光强度随时间的变化。然后，由Tm分析中的试剂反应
性评价了稳定性。
将上述各干试剂的试剂反应性的结果示于表3。表3示出了上述干试
剂D1-1～D1-4的结果。表3中，“Mg2+浓度”表示上述干燥用液体试剂中
的Mg2+浓度，“核酸单体”表示含有的核酸单体的种类，“摩尔比”表示各核
酸单体(dATP，dGTP，dCTP和dUTP)与Mg2+的摩尔比和全部核酸单体
的合计与Mg2+的摩尔比，表示将上述各核酸单体和上述合计的摩尔数分别
换算为1时的Mg2+的摩尔数。表示“摩尔比”的栏的每三个单元格中，上
面的值为Mg2+相对于dATP、dGTP和dCTP的各摩尔比，第二个值为
Mg2+相对于dUTP的摩尔比，下面的值为Mg2+相对于全部核酸单体的合计
的摩尔比。上述试剂反应性表示Tm分析时的荧光强度变化量的微分值即
“d荧光强度变化量/dt”(dF/dt)的最大值除以荧光值的最大值而得的值。
表3
进而，上述Tm分析的结果示于图1A～图1F。图1A～图1F是表示
伴随温度上升的荧光强度的变化的Tm分析的曲线图，横轴表示测定时的
温度，纵轴表示荧光强度的变化，单位设定为荧光强度变化量的微分值即
“d荧光强度变化量/dt”(dF/dt)。图1A表示使用上述干试剂D1-1(d27)
的结果，图1B表示使用上述干试剂D1-3(d27)的结果，图1C表示使用
上述干试剂D1-4(d27)的结果。
如上所述，上述试剂反应性为Tm分析时的、荧光强度变化量的微分
值即“d荧光强度变化量/dt”(dF/dt)的最大值除以荧光值的最大值而得
值。因此，上述试剂反应性与基于PCR的核酸扩增产物量之间具有相关
性。例如，在上述试剂反应性为0.6的上述D1-1(d27)的情况下，如图
1A所示，不能清晰地检测出峰。另一方面，在上述试剂反应性分别为4.1
和8.8的上述D1-3(d27)和上述D1-4(d27)的情况下，如图1B和图1C
所示，能清晰地检测出峰。
另外，随着上述试剂反应性提高，可以确认Tm分析中的峰趋于越来
越明显。由这些结果可知，例如，在上述试剂反应性小于1的情况下，不
能检测出Tm分析中的峰，可以说不能通过PCR反应进行核酸扩增，在上
述试剂反应性为2以上时能检测出Tm分析中的峰，能够进行基于PCR反
应的核酸扩增。
由以上的结果可知，只要制备表1的D1-3和D1-4的组成的干燥用液
体试剂，并使它们干燥，就可以得到保存稳定性优异的干试剂。
[实施例1B]
本例中，作为PCR中使用的必要成分，在上述核酸单体和Mg2+中还
加入了Tris，确认了上述Tris对核酸单体干试剂的稳定性的影响。
(1)干试剂的制备
制备下述表4所示的干燥用液体试剂D3-1～D3-6，除此以外，与上述
实施例1A相同地，制备干试剂D3-1(d0)～D3-6(d0)。此外，上述各
干试剂中，dATP，dGTP和dCTP与Mg2+的摩尔比分别为1∶10，dUTP
与Mg2+的摩尔比为1∶5，全部核酸单体与Mg2+的摩尔比为1∶2。
表4
然后，对上述各干试剂，与上述实施例1A相同地，进行保存和稳定
性的评价。将上述保存了17天的各干试剂作为干试剂D3-1(d17)～D3-6
(d17)，将上述保存了27天的各干试剂设为干试剂D3-1(d27)～D3-6
(d27)。
对于上述实施例1B，将试剂反应性的结果示于表5。表5表示实施例
1B的干试剂D3-1～D3-6的结果。表5中，“Tris-HCl浓度”表示上述各干
燥用液体试剂中的Tris-HCl浓度，“核酸单体”表示所含有的核酸单体的种
类，“摩尔比”表示各核酸单体(dATP，dGTP，dCTP和dUTP)与Tris-
HCl的摩尔比和全部核酸单体的合计与Tris-HCl的摩尔比，表示将上述各
核酸单体或上述合计的摩尔数分别换算为1时的Tris-HCl的摩尔数。表示
“摩尔比”的栏的每三个单元格中，上面的值为Tris-HCl相对于dATP、
dGTP和dCTP的各摩尔比，第二个的值为Tris-HCl相对于dUTP的摩尔
比，下面的值为Tris-HCl相对于全部核酸单体的摩尔比。表5中，试剂反
应性与上述实施例1A与相同地算出。
表5
如表5所示，在使用了保存了27天的干试剂(d27)时，试剂反应性
在上述D3-1(d27)～D3-6(d27)为7以上，显示了充分的反应性。由这
些结果可知，只要制备表4的D3-1～D3-6的组成的干燥用液体试剂并使
它们干燥，就可以得到保存稳定性优异的干试剂。
在实施例2A～2C中，对于含有核酸单体、Mg2+和K+的第2核酸单体
干试剂，确认了其保存稳定性。
[实施例2A]
本例中，作为PCR中使用的必要成分，将上述核酸单体、Mg2+和K+
在容器内干燥之后，保存得到的核酸单体干试剂，并确认其保存稳定性。
制备下述表6所示的干燥用液体试剂D2-1～D2-5，除此以外，与上述
实施例1A相同地得到上述干试剂D2-1(d0)～D2-5(d0)。此外，上述
各干试剂中，dATP，dGTP和dCTP与Mg2+的摩尔比分别为1∶10，dUTP
与Mg2+的摩尔比为1∶5，全部核酸单体与Mg2+的摩尔比为1∶2。另外，
dATP、dGTP和dCTP与K+的摩尔比分别为1∶100、dUTP与K+的摩尔比
为1∶50。
表6
然后，对于上述各干试剂与上述实施例1A相同地进行保存和稳定性
的评价。将上述保存17天的各干试剂设为干试剂D2-1(d17)～D2-5
(d17)，将上述保存27天的各干试剂设为干试剂D2-1(d27)～D2-5
(d27)。
将上述各干试剂的试剂反应性的结果示于表7。表7表示上述干试剂
D2-1～D2-5的结果。表7中，“Mg2+浓度”表示上述干燥用液体试剂中的
Mg2+浓度，“核酸单体”表示所含的核酸单体的种类，“摩尔比”表示各核酸
单体(dATP，dGTP，dCTP和dUTP)与Mg2+的摩尔比和全部核酸单体的
合计与Mg2+的摩尔比，表示将上述各核酸单体的摩尔数和上述合计的摩尔
数分别换算为1时的Mg2+的摩尔数。表示“摩尔比”的栏的每三个单元格
中，上面的值为Mg2+相对于dATP，dGTP和dCTP的各摩尔比，第二个值
表示Mg2+相对于dUTP的摩尔比，下面的值表示Mg2+相对于全部核酸单
体的合计的摩尔比。表7中，试剂反应性与上述实施例1A相同地算出。
表7
如表7所示，在使用了保存27天的干试剂(d27)时，性在D2-3
(d27)～D2-5(d27)中上述试剂反应为4以上，与此相对D2-1(d27)
和D2-2(d27)小于1。
进而，将上述Tm分析的结果示于图1A～图1F。图1A～图1F表示
随着温度上升的荧光强度的变化的Tm分析的曲线图，横轴表示测定时的
温度，纵轴表示荧光强度的变化，单位设为荧光强度变化量的微分值即“d
荧光强度变化量/dt”(dF/dt)。图1D表示使用了上述干试剂D2-1(d17)
的结果，图1E表示使用了上述干试剂D2-1(d27)的结果，图1F表示使
用了上述干试剂D2-5(d27)的结果。
如上所述，上述试剂反应性是Tm分析时的荧光强度变化量的微分值
即“d荧光强度变化量/dt”(dF/dt)的最大值除以荧光值的最大值所得的
值。因此，上述试剂反应性与基于PCR的核酸扩增产物量之间具有相关
性。对于上述D2-1而言，在17日时，上述试剂反应性为2.1，如图1D所
示，可以清晰地检测出峰，但是27日时，上述试剂反应性为0.5，如图1E
所示，不能清晰地检测出峰。另一方面，在上述试剂反应性为6.9的上述
D2-5(d27)的情况下，在27日时，如图1F所示，也能够清晰地检测出
峰。
由以上的结果可知，只要制备表6的D2-3～D2-5的组成的干燥用液
体试剂，并使它们干燥，就能得到保存稳定性优异的干试剂。
[实施例2B]
本例中，作为PCR中使用的成分，在上述核酸单体、Mg2+和K+中还
加入Tris，确认上述Tris对核酸单体干试剂的稳定性的影响。
(1)干试剂的制备
除了制备下述表8所示的干燥用液体试剂D4-1～D4-6以外，与上述
实施例1A相同地制备干试剂D4-1(d0)～D4-6(d0)。此外，上述各干
试剂中，dATP，dGTP和dCTP与Mg2+的摩尔比分别为1∶10，dUTP与
Mg2+的摩尔比为1∶5，全部核酸单体与Mg2+的摩尔比为1∶2。另外，
dATP，dGTP和dCTP和K+的摩尔比分别为1∶100，dUTP和K+的摩尔比
为1∶50。
表8
然后，对于上述各干试剂，与上述实施例1A相同地进行了保存和稳
定性的评价。将上述保存了17天的各干试剂设为干试剂D4-1(d17)～
D4-6(d17)，将上述保存了27天的各干试剂设为干试剂D4-1(d27)～
D4-6(d27)。
对于上述实施例2B，将试剂反应性的结果示于表9。表9表示实施例
2B的干试剂D4-1～D4-6的结果。表9中，“Tris-HCl浓度”表示上述各干
燥用液体试剂中的Tris-HCl浓度，“核酸单体”表示含有的核酸单体的种
类，“摩尔比”表示各核酸单体(dATP，dGTP，dCTP和dUTP)与Tris-
HCl的摩尔比和全部核酸单体的合计与Tris-HCl的摩尔比，是将上述各核
酸单体和上述合计的摩尔数分别换算为1时的Tris-HCl的摩尔数。表示
“摩尔比”的栏的每三个单元格中，上面的值是Tris-HCl相对于dATP、
dGTP和dCTP的各摩尔数，第二个值为Tris-HCl相对于dUTP的摩尔数，
下面的值为Tris-HCl相对于全部核酸单体的合计的摩尔比。表9中，试剂
反应性与上述实施例1A相同地算出。
表9
如表9所示，使用了保存了27天的干试剂(d27)时，上述D4-1
(d27)～D4-6(d27)中试剂反应性在为7以上，显示了充分的反应性。
由这些结果可知，只要制备表8的D4-1～D4-6的组成的干燥用液体试剂
并使其干燥，就可以得到保存稳定性优异的干试剂。
[实施例2C]
本例中，将PCR中使用的成分分成3组，分别在单独的容器内干燥
后，保存得到的三种干试剂，确认了其保存稳定性。
(1)各干试剂的制备
制备下述表10所示的干燥用液体试剂D5～D7，除此以外，与上述实
施例1A相同地得到干试剂D5～D7。上述D6中的聚合酶和上述D7中的
引物和探针分别使用与上述实施例1A相同的物质。
表10
D5
KCl
80mM
dUTP
800μM
d(AUGC)TP
各800μM
MgCl2
8mM
D6
20％BSA
0.2％
Taq聚合酶
1.5U
UNG(已透析)
0.2U
D7
Tris-HCl(pH8.6)
100mM
探针
0.8μM
引物
6μM
引物：正向引物和反向引物的合计浓度
(2)干试剂的保存
将加入了上述各干试剂的各容器密闭，与干试剂一同加入聚乙烯袋
中，在30℃和50℃下，分别保存30天、60天、240天、370天。
(3)保存后的稳定性评价
使用保存0日、30日、60日、240日、370日的上述各干试剂D5～
D7，进行基于PCR的核酸扩增，评价保存后的稳定性。此外，D5～7分
别将相同的保存日数的试剂组合使用。
首先，将精制的来源于人的核酸(30pg/μL)10μL添加到加入了上述
干试剂D5的容器中，混合上述精制核酸和上述干试剂D5。将得到的混合
液添加到加入了上述干试剂D6的容器中，混合上述混合液和上述干试剂
D6。进而，将得到的上述混合液添加到加入了上述干试剂D7的容器中，
混合上述混合液和上述干试剂D7。由此，将作为模板核酸的上述精制核
酸与上述干试剂D5、D6和D7混合。对该混合液作为PCR反应液进行
PCR和Tm分析。PCR和Tm分析中，将PCR条件设定为于95℃1分处理
之后，以在95℃处理1秒和在60℃处理15秒作为1个循环，进行了50循
环，除此以外与上述实施例1A相同地进行。
本实施例中的试剂反应性的结果示于表11。表11中，上述试剂反应
性与上述实施例1A相同地计算。
表11
*：未测定
如表11所示，在30℃的条件保存时，即使保存370天，上述试剂反
应性也显示7以上。另外，在50℃保存时，即使保存60天，上述试剂反
应性也显示了证明能够被检测的结果。由这些结果可知，只要分别制备表
10的组成的干燥用液体试剂并使其干燥，就可以得到在30℃至少能稳定
保存12个月，在50℃至少能稳定保存2个月的干试剂D5、D6和D7。
[比较例1]
本例中，将PCR中使用的成分的一部分在单独的容器内干燥后，保存
得到的干试剂，确认了其保存稳定性。
(1)干试剂的制备
制备下述表12所示的干燥用液体试剂D8和D9，在相对湿度小于
10％，且为25℃的条件下，使其干燥一夜，除此以外，与上述实施例1A
相同地得到干试剂D8和D9。此外，D8未添加Mg2+，D9与上述实施例
2B中的D4-8组成相同。上述D8中的引物和探针分别使用与上述实施例
1A相同的物质。
表12
D8
dUTP
0.2mM
d(AUGC)TP
0.2mM
Tris-HCl(pH8.6)
25mM
KCl
20mM
探针
0.2μM
引物
总计1.5μM
引物：正向引物和反向引物的合计浓度
D9
dUTP
0.2mM
d(AUGC)TP
0.2mM
Tris-HCl(pH8.6)
25mM
KCl
20mM
(CH3COO)2Mg
2mM
(2)干试剂的保存
将加入了上述各干试剂的各容器密闭，与干试剂一同加入聚乙烯袋
中，在50℃保存14天。将保存0日的各干试剂设为干试剂D8(d0)和
D9(d0)，将保存14日的各干试剂设为干试剂D8(d14)和D9
(d14)。
(3)保存后的稳定性评价
使用保存0日、14日的上述各干试剂D8和D9，进行基于PCR的核
酸扩增，评价保存后的稳定性。
在加入了上述干试剂D8的容器中，添加下述表13所示的组成的干试
剂D8用液体试剂和人基因组(100拷贝/μL)1μL，制备合计10μL的PCR
反应液，与上述实施例1相同地进行PCR和Tm分析。另外，在加入了上
述干试剂D9的容器中，添加下述表13所示的组成的干试剂D9用液体试
剂和人基因组(100拷贝/μL)1μL，制备合计10μL的PCR反应液，与上
述实施例1A与相同地进行PCR和Tm分析。下述表13中各成分的浓度表
示上述PCR反应液10μL中的最终浓度。
表13
干燥试剂D8用液体试剂
(CH3COO)2Mg
2mM
BSA
0.10％
GeneTaq FP
0.25U
干燥试剂D9用液体试剂
(CH3COO)2Mg
2mM
BSA
0.10％
GeneTaq FP
0.25U
探针
0.2μM
引物
1.5μM
引物：正向引物和反向引物的合计浓度
Gene Taq FP：聚合酶，Nippon Gene公司制
将本比较例中的试剂反应性的结果示于表14。表14中，上述试剂反
应性与上述实施例1A相同地算出。
表14
如表14所示可知，当干试剂D8和D9在50℃保存14天时，上述试
剂反应性小于1，为保存稳定性低的干试剂。
根据本发明的干试剂，例如即使在室温条件下保存之后，也能进行核
酸扩增。因此，例如，在多个被检测体进行核酸扩增的情况下或流通的情
况下，操作变得非常简便。另外，由于能够在干燥状态下的保存，例如，
因此可以将全部必要成分配置在相同的芯片上，能够进行芯片化。由此，
因为维持保存后的核酸扩增能力且操作性也提高，本发明在利用核酸扩增
的基因分析等中，是非常有用的工具。
本发明可以在不脱离其精神或实质特点的情况下以其他形式实现。本
申请中公开的实施例旨在作为说明在各个方面考虑并且并非限制性的。本
发明的范围由所附权利要求而不是由前述说明书指出，并且权利要求的含
义之内以及权利要求的等价范围之内的所有变形均包含在内。