《一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法.pdf（5页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 102796195 A (43)申请公布日 2012.11.28 CN 102796195 A *CN102796195A* (21)申请号 201210257744.2 (22)申请日 2012.07.24 C07K 16/06(2006.01) C07K 1/36(2006.01) C07K 1/34(2006.01) C07K 1/30(2006.01) (71)申请人 安徽宝迪肉类食品有限公司 地址 235000 安徽省淮北市烈山区宝迪工业 园 （安徽宝迪肉类食品有限公司） (72)发明人 邹国庆 吴明文 卢进峰 徐宝海 姚远新 (74)专利代理机构 天津盛理。
2、知识产权代理有限 公司 12209 代理人 董一宁 (54) 发明名称 一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生 产方法 (57) 摘要 一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生 产方法， 以猪血血浆液为原料， 通过硫酸铵晶体分 步盐析法获得免疫球蛋白 G 固形物， 再将免疫球 蛋白 G 固形物溶解后进行超滤浓缩和低温喷雾干 燥获得免疫球蛋白 G 的喷干粉。本发明采用硫酸 铵晶体沉淀法与超滤法相结合的方法， 分离出的 免疫球蛋白 G 纯度高、 产量大， 并且生产方法操作 简便、 适合规模化生产。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权。
3、局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生产方法， 其特征在于 ： 以猪血血浆液为 原料， 通过硫酸铵晶体分步盐析法获得免疫球蛋白G固形物， 再将免疫球蛋白G固形物溶解 后进行超滤浓缩和低温喷雾干燥获得免疫球蛋白 G 的喷干粉。 2. 根据权利要求 1 所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生产方法， 其特征 在于 ： 上述硫酸铵晶体分步盐析法的具体步骤为 ： 第一步盐析 ： 向猪血浆液中缓慢均匀加入硫酸铵晶体至血浆液硫酸铵饱和度为 202%， 将 pH 调至 5.50.3， 处理 20-40min， 。
4、经过离心后收集上清液 ； 第二步盐析 ： 向上清液中缓慢均匀加入硫酸铵晶体至上清液硫酸铵饱和度为 352%， 将 pH 调至 7.40.2， 处理 20-40min， 经过离心后收集沉淀 ； 第三部盐析 ： 向沉淀中加入纯净水使得免疫球蛋白 G 完全溶解， 再缓慢均匀加入硫酸 铵晶体至硫酸铵饱和度为 352%， 将 pH 调至 7.40.2， 处理 20-40min， 经过离心后收集沉 淀。 3. 根据权利要求 1 所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生产方法， 其特征 在于 ： 上述猪血血浆液的选取条件为 ： 原血使用柠檬酸钠作为抗凝剂， 柠檬酸钠的添加量 为原血的 6-8， 储存。
5、时制冷温度为 6-10， 储存时间不超过 3 天， 分离后立即进行提取。 4. 根据权利要求 1 所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生产方法， 其特征 在于 ： 上述超滤浓缩是在中空纤维膜设备中进行的， 截留分子量为 80000-100000 道尔顿， 操作压力为 0.05-0.10Mpa。 5. 根据权利要求 1 所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生产方法， 其特征 在于 ： 上述低温喷雾干燥的进口温度为 160-180， 出口温度为 75-85。 6. 根据权利要求 2 所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生产方法， 其特征 在于 ： 上述硫酸铵晶体分步盐。
6、析法中在猪血血浆中均匀加入硫酸铵晶体时的持续搅拌转速 为 20-30 转 / 分钟。 7. 根据权利要求 2 所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生产方法， 其特征在于 ： 上述硫酸铵晶体分步盐析法中离心使用管式固液分离机， 其离心转速为 15000-16000 转 / 分钟。 权 利 要 求 书 CN 102796195 A 2 1/3 页 3 一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生产方法 技术领域 0001 本发明涉及一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生产方法。 背景技术 0002 猪血由红细胞和血清组成， 血浆蛋白约占血液总量的 4.6%， 血浆蛋白中含量最高 的是白。
7、蛋白， 其次为免疫球蛋白， 免疫球蛋白G的相对分子量约为160000道尔顿， 约占血浆 蛋白的 16.3%， 占血清蛋白总量的 17.0%， 全血的 0.75%， 猪血清的 1.5-1.8%， 血清中免疫球 蛋白总量的 75-80%。 0003 我国猪血资源十分丰富， 但目前我国猪血资源利用的深度和广度都很低， 主要是 用于生产饲料用猪血浆蛋白粉和血球蛋白粉， 并未得到很好地利用。 为实现猪血的 “变废为 宝” ， 因此将猪血中的免疫球蛋白G进行提取纯化选择合适的生产工艺进行工业化生产具有 重要意义。 0004 现有的从动物血液中提取免疫球蛋白 G 的工艺仍然停留在实验室的研究和运用 阶段， 。
8、尤其是以猪血为原料提取免疫球蛋白 G 的方法中， 对血液的质量有很高的要求。而在 实际生产中， 因为采血条件、 储存条件和物流运输的原因， 会导致原血质量有在一定程度上 的降低， 血液中会含有一定量的杂质， 因此很难获得高质量的血浆。并且， 现有的实验室工 艺对设备和实验条件要求太高并不适宜于工业化连续生产。 0005 提取分离免疫球蛋白 G 的方法有硫酸铵晶体沉淀法、 乙醇分离法、 柱色谱分离法 (包括离子交换法、 凝胶过滤法、 亲合色谱法)及超滤法。 其中采用沉淀法与超滤法相结合， 分离出的纯度高、 产量大、 操作简便、 适合规模化生产。 发明内容 0006 本发明的目的就在于克服上述现有。
9、技术中存在的不足， 而提供一种从猪血中提取 免疫球蛋白 G 的工业化生产方法， 该方法采用硫酸铵晶体沉淀法与超滤法相结合的方法， 分离出的免疫球蛋白 G 纯度高、 产量大， 并且生产方法操作简便、 适合规模化生产。 0007 如上构思， 本发明的技术方案是 ： 一种从猪血中提取免疫球蛋白 G 的工业化生产 方法， 其特征在于 ： 以猪血血浆液为原料， 通过硫酸铵晶体分步盐析法获得免疫球蛋白 G 固 形物， 再将免疫球蛋白 G 固形物溶解后进行超滤浓缩和低温喷雾干燥获得免疫球蛋白 G 的 喷干粉。 0008 上述硫酸铵晶体分步盐析法的具体步骤为 ： 0009 第一步盐析 ： 向猪血浆液中缓慢均匀。
10、加入硫酸铵晶体至血浆液硫酸铵饱和度为 202%， 将 pH 调至 5.50.3， 处理 20-40min， 经过离心后收集上清液 ； 0010 第二步盐析 ： 向上清液中缓慢均匀加入硫酸铵晶体至上清液硫酸铵饱和度为 352%， 将 pH 调至 7.40.2， 处理 20-40min， 经过离心后收集沉淀 ； 0011 第三部盐析 ： 向沉淀中加入纯净水使得免疫球蛋白 G 完全溶解， 再缓慢均匀加入 硫酸铵晶体至硫酸铵饱和度为 352%， 将 pH 调至 7.40.2， 处理 20-40min， 经过离心后收 说 明 书 CN 102796195 A 3 2/3 页 4 集沉淀。 0012 上述。
11、猪血血浆液的选取条件为 ： 原血使用柠檬酸钠作为抗凝剂， 柠檬酸钠的添加 量为原血的6-8， 储存时制冷温度为6-10， 储存时间不超过3天， 分离后立即进行提取。 0013 上述超滤浓缩是在中空纤维膜设备中进行的， 截留分子量为 80000-100000 道尔 顿， 操作压力为 0.05-0.10Mpa。 0014 上述低温喷雾干燥的进口温度为 160-180， 出口温度为 75-85。 0015 上述硫酸铵晶体分步盐析法中在猪血血浆中均匀加入硫酸铵晶体时的持续搅拌 转速为 20-30 转 / 分钟。 0016 上述硫酸铵晶体分步盐析法中离心使用管式固液分离机， 其离心转速为 15000-1。
12、6000 转 / 分钟。 0017 本发明具有如下的优点和积极效果 ： 0018 1、 本发明使用硫酸铵晶体代替常规的硫酸铵饱和溶液， 减少生产操作和生产成 本， 更加适宜于工业生产 ； 0019 2、 本发明采用硫酸铵晶体分步盐析沉淀的方法并使用管式固液分离机进行离心， 操作简单、 生产成本低、 原料利用率高 ； 0020 3、 本发明使用中空纤维膜进行超滤浓缩、 低温喷雾干燥， 在提高免疫球蛋白 G 的 纯度、 保护免疫球蛋白 G 的活性的同时节约了生产成本 ； 0021 4、 本发明中免疫球蛋白 G 的喷干粉免疫球蛋白纯度在 65% 以上， 粗蛋白达 90% 以 上， 得率在 15g/k。
13、g 以上， 可以达到工业化生产的要求 ； 0022 5、 本发明可以连续性加工生产， 有利于工业化生产。 具体实施方式 ： 0023 实施例 1 ： 0024 在 100kg 血浆液中缓慢均匀加入 11kg 硫酸铵晶体至血浆液硫酸铵饱和度为 202%， 并调节血浆液 pH 为 5.6， 处理 30min 后通过管式离心机进行离心收集上清液 ； 在上 清液中缓慢均匀加入 11kg 硫酸铵晶体至上清液硫酸铵饱和度为 352%， 调节 pH 为 7.2 处 理 30min 后通过管式离心机进行离心收集沉淀 ； 在沉淀中加入 90kg 纯水溶解， 再加入硫酸 铵晶体 22kg 至硫酸铵饱和度为 352。
14、%， 调节 pH 为 7.2 处理 30min 后通过管式离心机进行 离心收集沉淀 ； 将沉淀加入 90kg 纯水溶解后进行超滤浓缩除盐， 操作压力为 0.06MPa， 浓缩 至体积为 15L 进行低温喷雾干燥， 喷雾干燥进口温度为 170， 出口温度为 75， 收集免疫 球蛋白 G 喷干粉共 1539g， 相关指标见附表 1。上述硫酸铵晶体分步盐析法中在猪血血浆中 均匀加入硫酸铵晶体时的持续搅拌转速为 20-30 转 / 分钟。上述硫酸铵晶体分步盐析法中 离心使用管式固液分离机， 其离心转速为 15000-16000 转 / 分钟。 0025 实施例 2 ： 0026 在 5.0t 血浆液加。
15、入 0.6t 硫酸铵晶体至血浆液硫酸铵饱和度为 202%， 并调节血 浆液 pH 为 5.7， 在血浆罐中反应 20min 后通过管式离心机进行离心收集上清液 ； 在上清液 中加入0.5t硫酸铵晶体至上清液硫酸铵饱和度为352%， 调节pH为7.2在罐中处理20min 后通过管式离心机进行离心收集沉淀 ； 在沉淀中加入 5.0t 纯水溶解， 再加入硫酸铵晶体 1.1t 至硫酸铵饱和度为 352%， 调节 pH 为 7.2 在罐中处理 20min 后通过管式离心机进行 说 明 书 CN 102796195 A 4 3/3 页 5 离心收集沉淀 ； 将沉淀加入 4.0t 纯水溶解后进行超滤浓缩除盐。
16、， 操作压力为 0.06MPa， 浓缩 至体积为 ,1.0t 时进行低温喷雾干燥， 喷雾干燥进口温度为 175， 出口温度为 75， 收集 免疫球蛋白 G 喷干粉 82.7kg， 相关指标见附表 2。上述硫酸铵晶体分步盐析法中在猪血血 浆中均匀加入硫酸铵晶体时的持续搅拌转速为 20-30 转 / 分钟。上述硫酸铵晶体分步盐析 法中离心使用管式固液分离机， 其离心转速为 15000-16000 转 / 分钟。 0027 附表 1 ： 实例 1 得到的免疫球蛋白 G 各项指标如下 ： 0028 项目 指标 （%） 粗蛋白质 90.58 免疫球蛋白 G 69.36 灰分 2.52 水分 2.63 粗纤维 0.02 食盐 0.11 总磷 0.16 钙 0.14 0029 附表 2 ： 实例 2 得到的免疫球蛋白 G 各项指标如下 ： 0030 项目 指标 （%） 粗蛋白质 91.25 免疫球蛋白 G 67.43 灰分 3.12 水分 2.42 粗纤维 0.03 食盐 0.21 总磷 0.16 钙 0.13 说 明 书 CN 102796195 A 5 。