抗人CSF1R抗体及其用途.pdf

本发明涉及针对人CSF-1R的抗体（CSF-1R抗体），它们的生产方法，含有所述抗体的药物组合物，及其用途。

权利要求书一种结合人CSF‑1R的抗体，特征在于与保藏抗体DSM ACC2922结合相同表位。
依照权利要求1的抗体，特征在于包含CDR3区SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:9、或SEQ ID NO:17作为重链可变域CDR3区。
依照权利要求2的抗体，特征在于：
a）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:1、CDR2区SEQ ID NO:2、和CDR1区SEQ ID NO:3，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:4、CDR2区SEQ ID NO:5、和CDR1区SEQ ID NO:6，或
b）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:9、CDR2区SEQ ID NO:10、和CDR1区SEQ ID NO:11，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:12、CDR2区SEQ ID NO:13、和CDR1区SEQ ID NO:14，或
c）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:17、CDR2区SEQ ID NO:18、和CDR1区SEQ ID NO:19，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:20、CDR2区SEQ ID NO:21、和CDR1区SEQ ID NO:22，或
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体。
依照权利要求3的抗体，特征在于包含：
a）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:7，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:8，或
b）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:15，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:16，或
c）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:23，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:24，或
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体。
依照权利要求1至4任一项的抗体，特征在于所述抗体属于人IgG4亚类或属于人IgG1亚类。
一种药物组合物，特征在于包含依照权利要求1至5的抗体或片段。
依照权利要求1至5的抗体，用于癌症的治疗。
依照权利要求1至5的抗体，用于骨丢失的治疗。
依照权利要求1至5的抗体，用于转移的预防或治疗。
依照权利要求1至5的抗体，用于炎性疾病的治疗。
一种编码结合CSF‑1R的抗体的重链的核酸，特征在于所述抗体包含依照权利要求2、3或4的可变域。
一种表达载体，特征在于包含依照权利要求11的核酸，用于在原核或真核宿主细胞中表达结合CSF‑1R的抗体。
一种原核或真核宿主细胞，包含依照权利要求12的载体。
一种用于生产依照权利要求1至5的重组抗体的方法，特征在于在原核或真核宿主细胞中表达依照权利要求11的核酸并自所述细胞或细胞培养物上清液回收所述抗体。
一种结合人CSF‑1R的抗体，特征在于
a）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:1、CDR2区SEQ ID NO:2、和CDR1区SEQ ID NO:3，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:4、CDR2区SEQ ID NO:5、和CDR1区SEQ ID NO:6，或
b）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:9、CDR2区SEQ ID NO:10、和CDR1区SEQ ID NO:11，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:12、CDR2区SEQ ID NO:13、和CDR1区SEQ ID NO:14，或
c）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:17、CDR2区SEQ ID NO:18、和CDR1区SEQ ID NO:19，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:20、CDR2区SEQ ID NO:21、和CDR1区SEQ ID NO:22，或
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体。
依照权利要求15的抗体，特征在于包含：
a）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:7，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:8，或
b）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:15，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:16，或
c）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:23，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:24，或
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体。

说明书抗人CSF‑1R抗体及其用途 
发明领域
本发明涉及针对人CSF‑1R的抗体（CSF‑1R抗体），它们的生产方法，含有所述抗体的药物组合物，及其用途。 
发明背景 
自1986年起就知道CSF‑1受体（CSF‑1R；同义词：M‑CSF受体；巨噬细胞集落刺激因子1受体，EC 2.7.10.1，Fms原癌基因，c‑fms，Swiss Prot P07333，CD115）（Coussens，L.，等人，Nature 320（1986）277‑280）。CSF‑1R是一种生长因子且由c‑fms原癌基因编码（综述见例如Roth，P.，和Stanley，E.R.，Curr.Top.Microbiol.Immunol.181（1992）141‑67）。 
CSF‑1R是M‑CSF（巨噬细胞集落刺激因子，也称作CSF‑1）的受体且介导此细胞因子的生物学效应（Sherr，C.J.，等人，Cell 41（1985）665‑676）。集落刺激因子‑1受体（也称作c‑fms）的克隆第一次记载于Roussel，M.F.，等人，Nature 325（1987）549‑552。在该出版物中，显示了CSF‑1R具有依赖于该蛋白的C端尾中的变化（包括抑制性酪氨酸969磷酸化的丧失，其结合Cbl并由此调节受体下调）的转化潜力（Lee，P.S.，等人，Embo J.18（1999）3616‑3628）。 
CSF‑1R是一种单链，跨膜受体酪氨酸激酶（RTK）及含有免疫球蛋白（Ig）基序的RTK家族的成员，特征在于该受体的胞外部分中的重复Ig域。胞内蛋白质酪氨酸激酶域被独特的插入域中断，该插入域也存在于其它相关RTK III类家族成员中，包括血小板衍生生长因子受体（PDGFR）、干细胞生长因子受体（c‑Kit）和fins样细胞因子受体（FLT3）。不管这个生长因子受体家族中的结构同源性，它们具有截然不同的组织特异性功能。CSF‑1R主要在单核细胞谱系的细胞上及在雌性生殖道和胎盘中表达。另外，已经报告了皮肤中的Langerhans细胞（一个平滑肌细胞子集）（Inaba，T.，等人，J.Biol.Chem.267（1992）5693‑5699）、B细胞（Baker，A.H.，等人，Oncogene 8（1993）371‑378）和小胶质细胞（Sawada，M.，等人，Brain Res.509（1990）119‑124）中的 CSF‑1R表达。 
CSF‑1R信号传导的主要生物学效应是造血前体细胞至巨噬细胞谱系（包括破骨细胞）的分化、增殖、迁移、和存活。CSF‑1R的活化由其配体M‑CSF介导。M‑CSF对CSF‑1R的结合诱导同二聚体的形成和激酶通过酪氨酸磷酸化的活化（Stanley，E.R.，等人，Mol.Reprod.Dev.46（1997）4‑10）。别的信号传导由分别连接PI3K/AKT和Ras/MAPK途径的PI3K之p85亚基和Grb2介导。这两种重要信号传导途径能调节增殖、存活和凋亡。其它结合磷酸化CSF‑1R胞内域的信号传导分子包括STAT1、STAT3、PLCy、和Cb1（Bourette，R.P.，Rohrschneider，L.R.，Growth Factors 17（2000）155‑166）。 
CSF‑1R信号传导在免疫应答中、在骨再建中及在生殖系统中具有生理学作用。已经显示了M‑CSF（Pollard，J.W.，Mol.Reprod.Dev.46（1997）54‑61）或CSF‑1R（Dai，X.M.，等人，Blood 99（2002）111‑120）任一敲除的动物具有骨石化、造血、组织巨噬细胞、和生殖表型与CSF‑1R在各种细胞类型中的作用一致。 
Sherr，C.J.，等人，Blood 73（1989）1786‑1793涉及一些针对CSF‑1R的抗体，它们抑制CSF‑1活性（参见Sherr，C.J.等人，Blood 73（1989）1786‑1793）。Ashmun，R.A.，等人，Blood 73（1989）827‑837涉及CSF‑1R抗体。Lenda，D.，等人，Journal of Immunology 170（2003）3254‑3262涉及CSF‑1缺陷小鼠中降低的巨噬细胞募集，增殖，和活化，导致肾炎症期间降低的管凋亡。Kitaura，H.，等人，Journal of dental research 87（2008）396‑400提及一种抗CSF‑1抗体，其抑制正牙牙齿移动。WO 2001/030381提及CSF‑1活性抑制剂，包括反义核苷酸和抗体，虽然仅仅披露CSF‑1反义核苷酸。WO 2004/045532涉及通过M‑CSF拮抗剂进行癌症转移和骨丢失的预防和对转移癌的治疗，该文献仅仅披露了拮抗性抗CSF‑1抗体。WO 2005/046657涉及通过抗CSF‑1抗体对炎性肠病的治疗。US 2002/0141994涉及集落刺激因子的抑制剂。WO 2006/096489涉及通过抗CSF‑1抗体对类风湿性关节炎的治疗。WO 2009/026303和WO 2009/112245涉及抗CSF‑1R抗体。 
发明概述 
本发明包含一种结合人CSF‑1R的抗体，特征在于与保藏抗体DSM ACC2922结合相同表位。 
在一个实施方案中，该抗体特征在于包含CDR3区SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:9、或SEQ ID NO:17作为重链可变域CDR3区。 
在一个实施方案中，该抗体特征在于： 
a）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:1、CDR2区SEQ ID NO:2、和CDR1区SEQ ID NO:3，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:4、CDR2区SEQ ID NO:5、和CDR1区SEQ ID NO:6，或 
b）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:9、CDR2区SEQ ID NO:10、和CDR1区SEQ ID NO:11，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:12、CDR2区SEQ ID NO:13、和CDR1区SEQ ID NO:14，或 
c）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:17、CDR2区SEQ ID NO:18、和CDR1区SEQ ID NO:19，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:20、CDR2区SEQ ID NO:21、和CDR1区SEQ ID NO:22，或 
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体。 
在一个实施方案中，该抗体特征在于包含： 
a）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:7，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:8，或 
b）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:15，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:16，或 
c）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:23，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:24，或 
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体。 
在一个实施方案中，该结合人CSF‑1R且特征在于上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段的抗体属于人IgG1亚类或属于人IgG4亚类。 
本发明的又一个实施方案是一种药物组合物，其包含依照本发明的抗体。 
本发明进一步包含药物组合物，其特征在于包含结合人CSF‑1R，特征在于上文所述表位结合特性或者上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段的抗体。 
本发明进一步包括特征在于包括结合人CSF‑1R，特征在于上文所述表位 结合特性或者上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段的抗体的抗体制造药物组合物的用途。 
本发明进一步包括特征在于包括结合人CSF‑1R，特征在于上文所述表位结合特性或者上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段的抗体的抗体制造用于治疗CSF‑1R介导的疾病的药物的用途。 
本发明进一步包括特征在于包括结合人CSF‑1R，特征在于上文所述表位结合特性或者上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段的抗体的抗体用于治疗癌症的用途。 
本发明进一步包括特征在于包括结合人CSF‑1R，特征在于上文所述表位结合特性或者上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段的抗体的抗体用于治疗骨丢失的用途。 
本发明进一步包括特征在于包括结合人CSF‑1R，特征在于上文所述表位结合特性或者上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段的抗体的抗体用于预防或治疗转移的用途。 
本发明进一步包括特征在于包括结合人CSF‑1R，特征在于上文所述表位结合特性或者上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段的抗体的抗体用于治疗炎性疾病的用途。 
本发明的一个方面是一种结合人CSF‑1R的抗体，特征在于包含CDR3区SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:9、或SEQ ID NO:17作为重链可变域CDR3区。 
本发明的另一个方面是一种结合人CSF‑1R的抗体，特征在于： 
a）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:1、CDR2区SEQ ID NO:2、和CDR1区SEQ ID NO:3，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:4、CDR2区SEQ ID NO:5、和CDR1区SEQ ID NO:6，或 
b）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:9、CDR2区SEQ ID NO:10、和CDR1区SEQ ID NO:11，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:12、CDR2区SEQ ID NO:13、和CDR1区SEQ ID NO:14，或 
c）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:17、CDR2区SEQ ID NO:18、和CDR1区SEQ ID NO:19，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:20、CDR2区SEQ ID NO:21、和CDR1区SEQ ID NO:22，或 
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体。 
在一个实施方案中，该抗体特征在于包含： 
a）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:7，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:8，或 
b）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:15，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:16，或 
c）重链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:23，且轻链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:24，或 
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体。 
在本发明的一个方面，依照本发明的抗体以至少10‑8mol/l至10‑12mol/l的亲和力结合人CSF‑1R。 
在本发明的一个方面，依照本发明的抗体是人源化抗体。 
本发明的又一个实施方案是一种编码依照本发明的抗体重链可变域和/或轻链可变域的核酸。优选地，该核酸编码结合人CSF‑1R的抗体的重链，该抗体特征在于包含CDR3区SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:9、或SEQ ID NO:17作为重链可变域CDR3区。 
本发明的又一个实施方案是一种编码依照本发明的抗体的核酸，特征在于 
a）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:1、CDR2区SEQ ID NO:2、和CDR1区SEQ ID NO:3，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:4、CDR2区SEQ ID NO:5、和CDR1区SEQ ID NO:6，或 
b）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:9、CDR2区SEQ ID NO:10、和CDR1区SEQ ID NO:11，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:12、CDR2区SEQ ID NO:13、和CDR1区SEQ ID NO:14，或 
c）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:17、CDR2区SEQ ID NO:18、和CDR1区SEQ ID NO:19，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:20、CDR2区SEQ ID NO:21、和CDR1区SEQ ID NO:22，或 
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体。 
本发明进一步提供含有依照本发明的核酸，能够在原核或真核宿主细胞中表达所述核酸的表达载体，及含有此类载体，用于重组生产此类抗体的宿 主细胞。 
本发明进一步包含原核或真核宿主细胞，其包含依照本发明的载体。 
本发明进一步包含一种用于生产依照本发明的重组人或人源化抗体的方法，特征在于在原核或真核宿主细胞中表达依照本发明的核酸并自所述细胞或细胞培养物上清液回收所述抗体。本发明进一步包含可通过此类重组方法获得的抗体。 
依照本发明的抗体对需要CSF‑1R靶向疗法的患者显示好处。依照本发明的抗体具有新颖的且创造性的特性，即对患有肿瘤疾病（尤其是患有癌症）的患者产生好处。 
本发明进一步提供一种用于治疗患有癌症的患者的方法，包括对诊断为具有此类疾病（且因此需要此类疗法）的患者施用有效量的依照本发明的结合人CSF‑1R的抗体。该抗体优选在药物组合物中施用。 
本发明的又一个实施方案是一种用于治疗患有癌症的患者的方法，特征在于对该患者施用依照本发明的抗体。 
本发明进一步包含依照本发明的抗体用于治疗患有癌症的患者及用于制造依照本发明的药物组合物的用途。另外，本发明包含用于制造依照本发明的药物组合物的方法。 
本发明进一步包含依照药物组合物，其包含依照本发明的抗体，任选与可用于为药学目的配制抗体的缓冲剂和/或佐剂一起。 
本发明进一步提供在药学可接受载体中包含依照本发明的抗体的药物组合物。在一个实施方案中，该药物组合物可以包括在制品或试剂盒中。 
附图说明
图1 10μg/ml浓度的不同抗CSF‑1R单克隆抗体的处理下对3D培养物中BeWo肿瘤细胞的生长抑制。 
X轴：与细胞的ATP含量（CellTiterGlo测定法）对应的存活力均值相对光单位（RLU）。 
Y轴：测试探针：极限培养基（0.5%FBS），小鼠IgG1（mIgG1，10μg/ml），小鼠IgG2a（mIgG2a 10μg/ml），仅CSF‑1，<CSF‑1R>7H5.2G10，<CSF‑1R>10A4.1G11，和SC‑02，克隆2‑4A5。 
用依照本发明的抗CSF‑1R抗体观察到最高的对CSF‑1诱导的生长的抑 制。 
本发明实施方案的详述 
I.定义 
术语“抗体”涵盖各种形式的抗体，包括但不限于完整抗体、抗体片段、人源化抗体、嵌合抗体、T细胞表位消减抗体、和别的遗传工程抗体，只要依照本发明的特征性特性得到保留。 
“抗体片段”包含全长抗体的一部分，优选其可变域，或至少其抗原结合位点。抗体片段的例子包括双抗体、单链抗体分子、和自抗体片段形成的多特异性抗体。scFv抗体例如记载于Houston，J.S.，Methods in Enzymol.203（1991）46‑88。另外，抗体片段包含单链多肽，其具有结合CSF‑1R的VH域（即能够与VL域一起装配）或结合CSF‑1R的VL域（即能够与VH域一起装配）装配成功能性抗原结合位点并由此提供该特性的特征。 
如本文中使用的，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”指单一氨基酸组成的抗体分子的制备物。 
术语“嵌合抗体”指通常通过重组DNA技术制备的，包含来自小鼠的可变区，即结合区和自不同来源或物种衍生的恒定区的至少一部分的单克隆抗体。包含小鼠可变区和人恒定区的嵌合抗体是尤其优选的。此类大鼠/人嵌合抗体是表达的包含编码大鼠免疫球蛋白可变区的DNA区段和编码人免疫球蛋白恒定区的DNA区段的免疫球蛋白基因的产物。本发明涵盖的“嵌合抗体”的其它形式是那些其中类或亚类已经相对于初始抗体修饰或改变的。此类“嵌合”抗体也称作“类转换抗体”。用于生成嵌合抗体的方法涉及本领域现在公知的常规重组DNA和基因转染技术。参见例如Morrison，S.L.，等人，Proc.Natl.Acad Sci.USA 81（1984）6851‑6855；US 5,202,238和US 5,204,244。 
如本申请中使用的，术语“CDR嫁接变体”指通常通过重组DNA技术来制备的，包含来自一个来源或物种的互补决定区（CDR或高变区）和来自不同来源或物种的框架区（FR）的抗体可变域。优选包含鼠CDR和人FR的可变域的CDR嫁接变体。 
如本申请中使用的，术语“T细胞表位消减变体”指经过修饰，通过除去人T细胞表位（可变域内有能力结合MHC II类分子的肽序列），消除或降低了免疫原性的抗体可变域。通过这种方法，鉴定可变域氨基酸侧链和MHC  II类结合沟内的特定结合袋之间的相互作用。突变鉴定出的免疫原性区以消除免疫原性。此类方法一般性地记载于例如WO 98/52976。 
如本申请中使用的，术语“人源化变体”指自非人起源（例如自非人物种）的互补决定区（CDR）和自人起源的框架区（FR）重建的，而且经过进一步修饰，还重建或改进初始非人可变域的结合亲和力和特异性的抗体可变域。此类人源化变体通常通过重组DNA技术来制备。亲本非人可变域的亲和力和特异性的重建是至关重要的步骤，对此当前使用不同方法。在一种方法中，要确定在非人CDR中以及在人FR中引入突变（所谓的回复突变）是否有益。此类回复突变的合适位置可例如通过序列或同源性分析、通过选择人框架（固定框架办法；同源性匹配或最佳拟合）、通过使用共有序列、通过选择来自数种不同人单抗的FR、或通过用在人单抗中找到的最常见残基替换三维表面上的非人残基（“重修表面”(resurfacing)或“镶嵌”(veneering)）来鉴定。 
另外，依照本发明的抗体包括如下的抗体，其具有“保守序列修饰”，不影响或改变上文所述依照本发明的抗体的特征的核苷酸和氨基酸序列修饰。可以通过本领域已知的标准技术来引入修饰，诸如定点诱变和PCR介导的诱变。保守氨基酸替代包括将某个氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基替换。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链（例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸）、酸性侧链（例如天冬氨酸、谷氨酸）、不带电荷的侧链（例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸）、非极性侧链（例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸）、β‑分支侧链（例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸）和芳香族侧链（例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸）的氨基酸。如此，优选地，人抗CSF‑1R抗体中的预测非必需氨基酸残基可以用来自相同侧链家族的另一种氨基酸残基替换。 
可以基于分子建模通过诱变来实施氨基酸替代，如记载于Riechmann，L.，等人，Nature 332（1988）323‑327及Queen，C.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86（1989）10029‑10033。 
如本文中使用的，术语“CSF‑1R”指人CSF‑1R（SEQ ID NO:31）。自1986年起就知道人CSF‑1R（同义词：CSF‑1受体；M‑CSF受体；巨噬细胞集落刺激因子1受体，EC 2.7.10.1，Fms原癌基因，c‑fms，Swiss Prot P07333， CD115）（Coussens，L.，等人，Nature 320（1986）277‑280）。CSF‑1R是一种生长因子且由c‑fms原癌基因编码（综述见例如Roth，P.和Stanley，E.R.，Curr.Top.Microbiol.Immunol.181（1992）141‑67）。 
CSF‑1R是M‑CSF（巨噬细胞集落刺激因子，也称作CSF‑1）的受体且介导这种细胞因子的生物学效应（Sherr，C.J.，等人，Cell 41（1985）665‑676）。集落刺激因子‑1受体（也称作c‑fms）的克隆第一次记载于Roussel，M.F.，等人，Nature 325（1987）549‑552。在该出版物中，显示了CSF‑1R具有依赖于该蛋白的C端尾中的变化（包括抑制性酪氨酸969磷酸化的丧失，其结合Cbl并由此调节受体下调）的转化潜力（Lee，P.S.，等人，Embo J.18（1999）3616‑3628）。 
CSF‑1R是一种单链，跨膜受体酪氨酸激酶（RTK）及含有免疫球蛋白（Ig）基序的RTK家族的成员，特征在于该受体的胞外域中的重复Ig域。胞内蛋白质酪氨酸激酶域被独特的插入域中断，该插入域也存在于其它相关RTK III类家族成员中，包括血小板衍生生长因子受体（PDGFR）、干细胞生长因子受体（c‑Kit）和fins样细胞因子受体（FLT3）。不管这个生长因子受体家族中的结构同源性，它们具有截然不同的组织特异性功能。CSF‑1R主要在单核细胞谱系的细胞上及在雌性生殖道和胎盘中表达。另外，已经报告了皮肤中的Langerhans细胞（一个平滑肌细胞子集）（Inaba，T.，等人，J.Biol.Chem.267（1992）5693‑5699）、B细胞（Baker，A.H.，等人，Oncogene 8（1993）371‑378）和小胶质细胞（Sawada，M.，等人，Brain Res.509（1990）119‑124）中的CSF‑1R表达。 
如本文中使用的，术语“结合人CSF‑1R”或“抗CSF‑1R”可互换使用，而且指抗体特异性结合人CSF‑1R抗原。结合亲和力是35℃的KD值1.0x 10‑8mol/l或更低，优选35℃的KD值1.0x10‑9mol/l或更低。结合亲和力在35℃用标准结合测定法测定，诸如表面等离振子共振技术（BIAcore ）（见实施例4）。 
术语“表位”表示能够特异性结合抗体的蛋白质决定簇。表位通常由分子诸如氨基酸或糖侧链的化学活性表面聚组组成，而且表位通常具有特定的三维结构特征，以及特定的电荷特征。构象性和非构象性表位的区别在于对前者而非后者的结合在变性溶剂存在下丧失。优选地，依照本发明的抗体特异性结合天然的CSF‑1R而非变性的CSF‑1R。 
如本文中使用的，术语“与保藏抗体DSM ACC2922结合相同表位”指 如下的本发明抗CSF‑1R抗体，其结合CSF‑1R上抗体<CSF‑1R>7H5.2G10（保藏号DSM ACC2922）所结合的相同表位。本发明抗CSF‑1R抗体的表位结合特性可使用本领域已知技术来确定。在25℃通过表面等离振子共振(SPR)在体外竞争性结合抑制测定法中测量CSF‑1R抗体以测定测试抗体抑制抗体<CSF‑1R>7H5.2G10（保藏号DSM ACC2922）结合CSF‑1R的能力。这可通过BIAcore测定法（Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden）来调查，例如实施例5中的。在实施例5中，本发明CSF‑1R抗体与抗体<CSF‑1R>7H5.2G10（保藏号DSM ACC2922）竞争结合的预期结合响应百分比(%)通过“100*相对响应(一般_稳定性_早期)/r最大”来计算，其中r最大通过“相对响应(一般_稳定性_晚期)*抗体分子量/抗原分子量”来计算，如BIAcore测定法表位作图用法说明中记载的。还从成对的鉴定的抗体1和2计算最小结合响应（见实施例5）。因此，将得到的最大值+50%设置为显著竞争及因此对相同表位的显著结合的阈值（见实施例5，对于抗体<CSF‑1R>7H5.2G10，计算阈值为7+3.5=10.5）。如此，特征在于“与<CSF‑1R>7H5.2G10（保藏号DSM ACC2922）结合相同表位”的结合人CSF‑1R的抗体具有低于10.5的预期结合响应百分比(％)（%预期结合响应<10.5）。 
在一个方面，依照本发明的抗体与保藏抗体DSM ACC2922竞争对人CSF‑1R的结合。此类结合竞争可使用本领域已知技术来确定。在25℃通过表面等离振子共振(SPR)在体外竞争性结合抑制测定法中测量CSF‑1R抗体以测定测试抗体抑制抗体<CSF‑1R>7H5.2G10（保藏号DSM ACC2922）结合人C SF‑1R的能力。这可通过BIAcore测定法（Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden）来调查，例如实施例5中的。 
如本文中使用的，“可变域”（轻链的可变域（VL），重链的可变域（VH））表示轻和重链域对中的每一个，它们直接涉及抗体对抗原的结合。可变轻和重链域具有相同的整体结构，而且每个域包含四个框架（FR）区，它们的序列是广泛保守的，由三个“高变区”（或互补决定区，CDR）连接。框架区采取β‑片层构象，而且CDR可以形成连接β‑片层结构的环。每条链中的CDR通过框架区保持其三维结构，并且与来自另一条链的CDR一起形成抗原结合位点。抗体的重和轻链CDR3区在依照本发明的抗体的结合特异性/亲和力中发挥特别重要的作用，而且因此提供本发明的又一个目的。 
术语“抗体的抗原结合部分”在本文中使用时指抗体中负责抗原结合的 氨基酸残基。抗体的抗原结合部分包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基。“框架”或“FR”区是可变域中那些与本文中定义的高变区残基不同的区。因此，抗体的轻和重链可变域自N至C端包含域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、和FR4。尤其地，重链的CDR3是对抗原结合贡献最大且限定抗体特性的区。CDR和FR区依照Kabat，E.，A.，等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD（1991）的标准定义和/或那些来自“高变环”的残基来确定。 
如本文中使用的，术语“核酸”或“核酸分子”意图包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链的或双链的，但是优选是双链DNA。 
如本本申请内使用的，术语“氨基酸”表示天然存在的羧基α‑氨基酸组，包括丙氨酸（三字母代码：ala，单字母代码：A）、精氨酸（arg，R）、天冬酰胺（asn，N）、天冬氨酸（asp，D）、半胱氨酸（cys，C）、谷氨酰胺（gln，Q）、谷氨酸（glu，E）、甘氨酸（gly，G）、组氨酸（his，H）、异亮氨酸（ile，I）、亮氨酸（leu，L）、赖氨酸（lys，K）、甲硫氨酸（met，M）、苯丙氨酸（phe，F）、脯氨酸（pro，P）、丝氨酸（ser，S）、苏氨酸（thr，T）、色氨酸（trp，W）、酪氨酸（tyr，Y）、和缬氨酸（val，V）。 
“免疫偶联物”指与一种或多种异源分子（包括但不限于细胞毒剂）偶联的抗体。 
“个体”或“受试者”指哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家畜（例如牛、绵羊、猫、犬、和马）、灵长类动物（例如人和非人灵长类诸如猴）、家兔、和啮齿类动物（例如小鼠和大鼠）。在某些实施方案中，个体或受试者指人。 
“分离的”抗体指已经与其天然环境的一种成分分开的抗体。在一些实施方案中，将抗体纯化至根据例如电泳（例如SDS‑PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳）或层析（例如离子交换或反相HPLC）的测定，超过95%或99%纯度。关于抗体纯度评估方法的综述参见例如Flatman等人，J.Chromatogr.B848:79‑87（2007）。 
“分离的”核酸指已经与其天然环境的一种成分分开的核酸分子。分离的核酸包括通常含有该核酸分子的细胞中所含有的核酸分子，但是该核酸分子存在于染色体外或与其天然染色体位置不同的染色体位置。 
“编码抗CSF‑1R抗体的分离的核酸”指编码抗体重和轻链（或其片段）的一种或多种核酸分子，包括单一的载体或分开的载体中的此类核酸分子，及存在于宿主细胞中一个或多个位置的此类核酸分子。 
“天然抗体”指具有不同结构的天然存在免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由成二硫键的两条相同的轻链和两条相同的重链构成。从N端到C端，每条重链具有一个可变区（VH）（也称作可变重域或重链可变域），接着是三个恒定域（CH1、CH2、和CH3）。类似地，从N端到C端，每条轻链具有一个可变区（VL）（也称作可变轻域或轻链可变域），接着是一个恒定轻（CL）域。根据其恒定域的氨基酸序列，抗体的“轻链”可归入两种型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。 
术语“包装插页”用于指通常包括在治疗用产品的商业包装中的说明书，它们包含有关涉及此类治疗用产品应用的适应征、用法、剂量、施用、组合疗法、禁忌症和/或警告的信息。 
关于参考多肽序列的“百分比(%)氨基酸序列同一性”定义为对比序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST‑2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定用于对比序列的适宜参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，%氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN‑2获得的。ALIGN‑2序列比较计算机程序由Genentech公司编写，源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(USCopyright Office,Washington D.C.,20559)，并以美国版权注册号TXU510087注册。公众可自Genentech公司(South San Francisco,California)得到ALIGN‑2程序，或者可以自源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，包括数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN‑2程序设定且不变。 
在采用ALIGN‑2来比较氨基酸序列的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)、与(with)、或针对(against)给定氨基酸序列B的%氨基酸序列同一性（或者可表述为具有或包含相对于、与、或针对给定氨基酸序列B的某一%氨基 酸序列同一性的给定氨基酸序列A）如下计算： 
分数X/Y乘100 
其中X是由序列对比程序ALIGN‑2在该程序的A和B对比中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。可以领会，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的%氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的%氨基酸序列同一性。除非另有具体说明，本文中所使用的所有%氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN‑2计算机程序获得的。 
II.组合物和方法
在一个方面，本发明部分基于与保藏抗体DSM ACC2922相同的表位。本发明的抗体可用于例如诊断或治疗癌症、炎性疾病或骨丢失；或预防或治疗转移。 
例示性抗CSF‑1R抗体 
在一个方面，本发明提供了结合人CSF‑1R的抗体。在某些实施方案中，该抗CSF‑1R抗体特征在于与保藏抗体DSM ACC2922结合相同表位。 
本发明的另一个方面是结合人CSF‑1R的抗体，其特征在于 
a）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:1、CDR2区SEQ ID NO:2、和CDR1区SEQ ID NO:3，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:4、CDR2区SEQ ID NO:5、和CDR1区SEQ ID NO:6，或 
b）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:9、CDR2区SEQ ID NO:10、和CDR1区SEQ ID NO:11，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:12、CDR2区SEQ ID NO:13、和CDR1区SEQ ID NO:14，或 
c）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:17、CDR2区SEQ ID NO:18、和CDR1区SEQ ID NO:19，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:20、CDR2区SEQ ID NO:21、和CDR1区SEQ ID NO:22，或 
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体。 
本发明的另一个方面是结合人CSF‑1R的抗体，其特征在于 
a）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:1、CDR2区SEQ ID NO:2、和CDR1区SEQ ID NO:3，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:4、CDR2区SEQ ID NO:5、和CDR1区SEQ ID NO:6，或 
b）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:9、CDR2区SEQ ID NO:10、和CDR1区SEQ ID NO:11，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:12、CDR2区SEQ ID NO:13、和CDR1区SEQ ID NO:14，或 
c）重链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:17、CDR2区SEQ ID NO:18、和CDR1区SEQ ID NO:19，且轻链可变域包含CDR3区SEQ ID NO:20、CDR2区SEQ ID NO:21、和CDR1区SEQ ID NO:22，或 
d）抗体a)、b)或c)的CDR嫁接抗体变体、人源化抗体变体或T细胞表位消减抗体变体，且 
具有一项或多项下述特性（在实施例2、3、4、6、7和8所述测定法中测定）： 
‑该抗CSF‑1R抗体以75ng/ml或更低的IC50，在一个实施方案中，以50ng/ml或更低的IC50抑制CSF‑1结合CSF‑1R； 
‑该抗CSF‑1R抗体以100ng/ml或更低的IC50，在一个实施方案中，以50ng/ml或更低的IC50抑制CSF‑1诱导的CSF‑1R磷酸化（在NIH3T3‑CSF‑1R重组细胞中）； 
‑该抗CSF‑1R抗体将表达人CSF‑1R(SEQ ID No:15)的重组NIH3T3细胞的生长抑制80%或更多（与抗体缺失下相比），优选90%或更多； 
‑该抗CSF‑1R抗体将BeWo肿瘤细胞(ATCC CCL‑98)的生长抑制70%或更多（在10μg/ml抗体浓度；及与抗体缺失下相比），优选80%或更多； 
‑该抗CSF‑1R抗体抑制巨噬细胞分化（在一个实施方案中，该抗CSF‑1R抗体以1.5nM或更低的IC50，优选以1.0nM或更低的IC50抑制单核细胞的存活）；或 
‑该抗CSF‑1R抗体在35℃以KD=2.0x 10‑9mol/l或更低的结合亲和力结合人CSF‑1R。 
在另一个方面，依照本发明的抗CSF‑1R抗体在重链可变域(VH)序列中包含a)具有与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19相同或相对于SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1H，b)具有与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:18相同或相对于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:18包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2H，和c)具有与相同SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:17或相对于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:17包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3H。 
在某些实施方案中，包含a)具有与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19相同或相对于SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1H、b)具有与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:18相同或相对于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:18包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2H、和c)具有与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:17相同或相对于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:17包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3H的重链可变域(VH)序列相对于参照序列含有替代（例如保守替代）、插入、或删除，但是包含该序列的抗CSF‑1R抗体保留结合CSF‑1R的能力。 
在另一个方面，依照本发明的抗CSF‑1R抗体在轻链可变域(VL)序列中包含a)具有与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:22相同或相对于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:22包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1L，b)具有与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:21相同或相对于SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:21包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2L，和c)具有与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:20相同或相对于SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:20包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3L。 
在某些实施方案中，包含a)具有与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:22相同或相对于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:22包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1L、b)具有与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:21相同或相对于SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:21包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2L、和c)具有与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:20相同或相对于SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:20包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3L的轻链可变域(VL)序列相对于参照序列含有替代（例如保守替代）、插入、或删除，但是包含该序列的抗CSF‑1R抗体保留结合CSF‑1R的能力。 
在另一个方面，依照本发明的抗CSF‑1R抗体 
‑在重链可变域(VH)序列中包含a)具有与SEQ ID NO:3相同或相对于SEQ ID NO:3包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1H，b)具有与 SEQ ID NO:2相同或相对于SEQ ID NO:2包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2H，和c)具有与SEQ ID NO:1相同或相对于SEQ ID NO:1包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3H，且在轻链可变域(VL)序列中包含d)具有与SEQ ID NO:6相同或相对于SEQ ID NO:6包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1L，e)具有与SEQ ID NO:5相同或相对于SEQ ID NO:5包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2L，和f)具有与SEQ ID NO:4相同或相对于SEQ ID NO:4包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3L；或 
‑在重链可变域(VH)序列中包含a)具有与SEQ ID NO:11相同或相对于SEQ ID NO:11包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1H，b)具有与SEQ ID NO:10相同或相对于SEQ ID NO:10包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2H，和c)具有与SEQ ID NO:9相同或相对于SEQ ID NO:9包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3H，且在轻链可变域(VL)序列中包含d)具有与SEQ ID NO:14相同或相对于SEQ ID NO:14包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1L，e)具有与SEQ ID NO:13相同或相对于SEQ ID NO:13包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2L，和f)具有与SEQ ID NO:12相同或相对于SEQ ID NO:12包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3L；或 
‑在重链可变域(VH)序列中包含a)具有与SEQ ID NO:19相同或相对于SEQ ID NO:19包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1H，b)具有与SEQ ID NO:18相同或相对于SEQ ID NO:18包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2H，和c)具有与SEQ ID NO:17相同或相对于SEQ ID NO:17包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3H，且在轻链可变域(VL)序列中包含d)具有与SEQ ID NO:22相同或相对于SEQ ID NO:22包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1L，e)具有与SEQ ID NO:21相同或相对于SEQ ID NO:21包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2L，和f)具有与SEQ ID NO:20相同或相对于SEQ ID NO:20包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3L。 
在另一个方面，依照本发明的抗CSF‑1R抗体 
‑在重链可变域(VH)序列中包含a)具有与SEQ ID NO:3相同或相对于SEQ ID NO:3包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1H，b)具有与 SEQ ID NO:2相同或相对于SEQ ID NO:2包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2H，和c)具有与SEQ ID NO:1相同或相对于SEQ ID NO:1包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3H，且在轻链可变域(VL)序列中包含d)具有与SEQ ID NO:6相同或相对于SEQ ID NO:6包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1L，e)具有与SEQ ID NO:5相同或相对于SEQ ID NO:5包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2L，和f)具有与SEQ ID NO:4相同或相对于SEQ ID NO:4包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3L；或 
‑在重链可变域(VH)序列中包含a)具有与SEQ ID NO:11相同或相对于SEQ ID NO:11包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1H，b)具有与SEQ ID NO:10相同或相对于SEQ ID NO:10包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2H，和c)具有与SEQ ID NO:9相同或相对于SEQ ID NO:9包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3H，且在轻链可变域(VL)序列中包含d)具有与SEQ ID NO:14相同或相对于SEQ ID NO:14包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1L，e)具有与SEQ ID NO:13相同或相对于SEQ ID NO:13包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2L，和f)具有与SEQ ID NO:12相同或相对于SEQ ID NO:12包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3L；或 
‑在重链可变域(VH)序列中包含a)具有与SEQ ID NO:19相同或相对于SEQ ID NO:19包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1H，b)具有与SEQ ID NO:18相同或相对于SEQ ID NO:18包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2H，和c)具有与SEQ ID NO:17相同或相对于SEQ ID NO:17包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3H，且在轻链可变域(VL)序列中包含d)具有与SEQ ID NO:22相同或相对于SEQ ID NO:22包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR1L，e)具有与SEQ ID NO:21相同或相对于SEQ ID NO:21包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR2L，和f)具有与SEQ ID NO:20相同或相对于SEQ ID NO:20包含1、2、或3处氨基酸残基替代的氨基酸序列的CDR3L，且 
该抗CSF‑1R抗体具有一项或多项下述特性（在实施例2、3、4、6、7和8所述测定法中测定）： 
‑该抗CSF‑1R抗体以75ng/ml或更低的IC50，在一个实施方案中，以50ng/ml 或更低的IC50抑制CSF‑1结合CSF‑1R； 
‑该抗CSF‑1R抗体以100ng/ml或更低的IC50，在一个实施方案中，以50ng/ml或更低的IC50抑制CSF‑1诱导的CSF‑1R磷酸化（在NIH3T3‑CSF‑1R重组细胞中）； 
‑该抗CSF‑1R抗体将表达人CSF‑1R(SEQ ID No:15)的重组NIH3T3细胞的生长抑制80%或更多（与抗体缺失下相比），优选90%或更多； 
‑该抗CSF‑1R抗体将BeWo肿瘤细胞(ATCC CCL‑98)的生长抑制70%或更多（在10μg/ml抗体浓度；及与抗体缺失下相比），优选80%或更多； 
‑该抗CSF‑1R抗体抑制巨噬细胞分化（在一个实施方案中，该抗CSF‑1R抗体以1.5nM或更低的IC50，优选以1.0nM或更低的IC50抑制单核细胞的存活）；或 
‑该抗CSF‑1R抗体在35℃以KD=2.0x 10‑9mol/l或更低的结合亲和力结合人CSF‑1R。 
重组方法和组合物 
优选地，通过重组手段来生成依照本发明的抗体。此类方法是本领域现有技术中广泛知道的，而且包括原核和真核细胞中的蛋白质表达及随后分离抗体多肽和通常纯化至药学可接受纯度。为了蛋白质表达，通过标准方法将编码轻和重链或其片段的核酸插入表达载体中。在适宜的原核或真核宿主细胞中实施表达，诸如CHO细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、HEK293细胞、COS细胞、酵母、或大肠杆菌细胞，并自细胞（自上清液或在细胞裂解后）回收抗体。 
抗体的重组生成是本领域现有技术中公知的，而且记载于例如综述性论文Makrides，S.C.，Protein Expr.Purif.17（1999）183‑202；Geisse，S.，等人，Protein Expr.Purif.8（1996）271‑282；Kaufman，R.J.，Mol.Biotechnol.16（2000）151‑161；Werner，R.G.，Drug Res.48（1998）870‑880。 
抗体可以存在于完整细胞中、细胞溶胞物中、或部分纯化的或实质性纯的形式。通过标准技术，包括碱/SDS处理、CsCl成带、柱层析、琼脂糖凝胶电泳、和本领域公知的其它技术实施纯化，以消除其它细胞成分或其它污染物，例如其它细胞核酸或蛋白质。参见Ausubel，F.，等人编，Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing and Wiley Interscience，New York（1987）。 
NS0细胞中的表达记载于例如Barnes，L.M.，等人，Cytotechnology 32（2000）109‑123；Barnes，L.M.，等人，Biotech.Bioeng.73（2001）261‑270。瞬时表达记载于例如Durocher，Y.，等人，Nucl.Acids.Res.30（2002）E9。可变域的克隆记载于Orlandi，R.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86（1989）3833‑3837；Carter，P.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89（1992）4285‑4289；Norderhaug，L.，等人，J.Immunol.Methods 204（1997）77‑87。一种优选的瞬时表达系统（HEK 293）记载于Schlaeger，E.‑J.，Christensen，K.，Cytotechnology 30（1999）71‑83及Schlaeger，E.‑J.，J.Immunol.Methods 194（1996）191‑199。 
适合于原核生物的控制序列包括例如启动子、任选的操纵基因序列、和核糖体结合位点。已知真核细胞利用启动子、增强子和聚腺苷酸化信号。 
在将核酸放置在与另一种核酸序列的功能性关系中时，它是“可操作连接的”。例如，若前序列或分泌前导的DNA以参与多肽分泌的前蛋白表达，则它与多肽的DNA可操作连接；若启动子或增强子影响序列的转录，则它与编码序列可操作连接；或者若核糖体结合位点定位为使得便于翻译，则它与编码序列可操作连接。一般而言，“可操作连接的”意指所连接的DNA序列是连续的，而且在分泌前导的情况中，是连续的且在读码框中。然而，增强子不必是连续的。通过在方便的限制性位点处的连接来实现连接。若不存在此类位点，则依照常规的实践使用合成的寡核苷酸衔接头或接头。 
通过常规免疫球蛋白纯化规程，诸如例如蛋白A‑Sepharose、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析、或亲和层析，恰当地将单克隆抗体与培养液分开。使用常规规程，容易分离编码单克隆抗体的DNA和RNA及测序。杂交瘤细胞可充当此类DNA和RNA的来源。一旦分离，可以将该DNA插入表达载体中，然后将该表达载体转染入不另外生成免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞（诸如HEK 293细胞、CHO细胞、或骨髓瘤细胞）中，以获得该宿主细胞中重组单克隆抗体的合成。 
通过本领域已知的多种技术来制备编码抗CSF‑1R抗体氨基酸序列变体的核酸分子。这些方法包括但不限于自天然来源分离（在天然存在氨基酸序列变体的情况中）或通过对先前制备的变体或非变体形式的人源化抗CSF‑1R抗体进行的寡核苷酸介导的（或定点）诱变、PCR诱变、和盒式诱变来制备。 
将依照本发明的重和轻链可变域与启动子、翻译起始、恒定区、3′非翻 译区、聚腺苷酸化、和翻译终止的序列组合以形成表达载体构建物。可以将重和轻链表达构建物组合入单一载体中，共转染，序贯转染，或分开转染入宿主细胞中，然后融合以形成表达双链的单一宿主细胞。 
如本文中使用的，表述“细胞”、“细胞系”、和“细胞培养物”可互换使用，而且所有此类名称包括后代。如此，词语“转化子”和“经转化细胞”包括原代受试细胞及自其衍生的培养物，不管转移的次数。还理解，由于有意的或无意的突变，所有后代的DNA内容可以不是精确相同的。包括具有初始转化细胞所筛选的相同功能或生物学活性的变异后代。 
抗体的“Fc部分”不直接涉及抗体对抗原的结合，但是展现出多种效应器功能。“抗体的Fc部分”是熟练技术人员公知的术语，而且基于木瓜蛋白酶对抗体的切割定义。根据其重链恒定区的氨基酸序列，抗体或免疫球蛋白分成类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的数种可以进一步分成亚类（同种型），例如IgG1、IgG2、IgG3、和IgG4、IgA1、和IgA2。依照重链恒定区，不同类的免疫球蛋白分别称作α、δ、ε、γ、和μ。抗体的Fc部分直接涉及基于补体激活、C1q结合和Fc受体结合的ADCC（抗体依赖性细胞介导的细胞毒性）和CDC（补体依赖性细胞毒性）。补体激活（CDC）是通过补体因子C1q结合大多数IgG抗体亚类的Fc部分启动的。虽然抗体对补体系统的影响依赖于某些条件，但是对C1q的结合是由Fc部分中的限定结合位点引起的。此类结合位点是本领域现有技术中已知的，而且记载于例如Boackle，R.J.，等人，Nature 282（1979）742‑743，Lukas，T.J.，等人，J.Immunol.127（1981）2555‑2560，Brunhouse，R.，Cebra，J.J.，Mol.Immunol.16（1979）907‑917，Burton，D.R.，等人，Nature 288（1980）338‑344，Thommesen，J.E.，等人，Mol.Immunol.37（2000）995‑1004，Idusogie，E.E.，等人，J.Immunol.164（2000）4178‑4184，Hezareh，M.，等人，J.Virology 75（2001）12161‑12168，Morgan，A.，等人，Immunology 86（1995）319‑324，EP 0307434。此类结合位点是例如L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331和P329（依照Kabat，E.A.的EU索引的编号方式，参见下文）。亚类IgG1、IgG2和IgG3的抗体通常显示补体激活及C1q和C3结合，而IgG4不激活补体系统，而且不结合C1q和C3。 
在一个实施方案中，依照本发明的抗体包含自人起源衍生的Fc部分和优选地，人恒定区的所有其它部分。如本文中使用的，术语“自人起源衍生的 Fc部分”表示如下的Fc部分，其是属于亚类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的人抗体的Fc部分，优选来自人IgG1亚类的Fc部分、来自人IgG1亚类的突变型Fc部分（优选具有L234A+L235A上的突变）、来自人IgG4亚类的Fc部分或来自人IgG4亚类的突变型Fc部分（优选具有S228P上的突变）。最优选人重链恒定区SEQ ID NO:27（人IgG1亚类）、SEQ ID NO:28（具有突变L234A和L235A的人IgG1亚类）、SEQ ID NO:29（人IgG4亚类）、或SEQ ID NO:30（具有突变S228P的人IgG4亚类）。 
在一个实施方案中，依照本发明的抗体特征在于恒定链是人起源的。此类恒定链是本领域现有技术公知的，而且记载于例如Kabat，E.A.，（参见例如Johnson，G.，Wu，T.T.，Nucleic Acids Res.28（2000）214‑218）。例如，一种有用的人重链恒定区包含氨基酸序列SEQ ID NO:25。例如，一种有用的人轻链恒定区包含κ轻链恒定区氨基酸序列SEQ ID NO:26。进一步优选抗体是小鼠起源且包含依照Kabat的小鼠抗体的抗体可变序列框架。 
免疫偶联物 
本发明还提供包含本文中抗CSF‑1R抗体的免疫偶联物，该抗体与一种或多种细胞毒剂诸如化疗剂或药物、生长抑制剂、毒素（例如蛋白质毒素、细菌、真菌、植物、或动物起源的酶活性毒素、或其片段）、或放射性同位素偶联。 
在一个实施方案中，免疫偶联物是抗体‑药物偶联物(ADC)，其中抗体与一种或多种药物偶联，包括但不限于美登木生物碱(maytansinoid)（参见美国专利No.5,208,020、No.5,416,064和欧洲专利EP 0 425 235 B1）；auristatin诸如单甲基auristatin药物模块DE和DF（MMAE和MMAF）（参见美国专利No.5,635,483和No.5,780,588，及No.7,498,298）；多拉司他汀(dolastatin)；加利车霉素(calicheamicin)或其衍生物（参见美国专利No.5,712,374、No.5,714,586、No.5,739,116、No.5,767,285、No.5,770,701、No.5,770,710、No.5,773,001、和No.5,877,296；Hinman等人，Cancer Res.53:3336‑3342（1993）；及Lode等人，Cancer Res.58:2925‑2928（1998））；蒽环类抗生素诸如道诺霉素(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)（参见Kratz等人，Current Med.Chem.13:477‑523（2006）；Jeffrey等人，Bioorganic & Med.Chem.Letters 16:358‑362（2006）；Torgov等人，Bioconj.Chem.16:717‑721（2005）；Nagy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829‑834（2000）；Dubowchik等人，Bioorg.& Med. Chem.Letters 12:1529‑1532（2002）；King等人，J.Med.Chem.45:4336‑4343（2002）；及美国专利No.6,630,579）；甲氨蝶呤；长春地辛(vindesine)；紫杉烷诸如多西他赛(docetaxel)、帕利他赛(paclitaxel)、larotaxel、tesetaxel、和ortataxel；单端孢菌素(trichothecene)；和CC1065。 
在另一个实施方案中，免疫偶联物包含本文所述抗体，该抗体与酶活性毒素或其片段偶联，包括但不限于白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链（来自铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa）、蓖麻毒蛋白(ricin)A链、相思豆毒蛋白(abrin)A链、蒴莲根毒蛋白(modeccin)A链、α‑帚曲霉素(sarcin)、油桐(Aleutites fordii)毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)毒蛋白（PAPI、PAPII和PAP‑S）、苦瓜(Momordica charantia)抑制物、麻疯树毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制物、白树毒蛋白(gelonin)、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(trichothecenes)。 
在另一个实施方案中，免疫偶联物包含本文所述抗体，该抗体与放射性原子偶联以形成放射偶联物。多种放射性同位素可用于生成放射偶联物。实例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素。在将放射偶联物用于检测时，它可包含放射性原子用于闪烁照相研究，例如Tc99m或I123，或自旋标记物用于核磁共振（NMR）成像（也称为磁共振成像，mri），诸如碘‑123、碘‑131、铟‑111、氟‑19、碳‑13、氮‑15、氧‑17、钆、锰或铁。 
可使用多种双功能蛋白质偶联剂来制备抗体和细胞毒剂的偶联物，诸如N‑琥珀酰亚氨基‑3‑(2‑吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚氨基‑4‑(N‑马来酰亚氨基甲基)环己烷‑1‑羧酸酯(SMCC)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酸酯（诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯）、活性酯类（诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯）、醛类（诸如戊二醛）、双叠氮化合物（诸如双(对‑叠氮苯甲酰基)己二胺）、双重氮衍生物（诸如双(对‑重氮苯甲酰基)乙二胺）、二异氰酸酯（诸如甲苯2,6‑二异氰酸酯）、和双活性氟化合物（诸如1,5‑二氟‑2,4‑二硝基苯）的双功能衍生物。例如，可如Vitetta et al.,Science 238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳‑14标记的1‑异硫氰酸苯甲基‑3‑甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX‑DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体偶联的例示性螯合剂。参见WO  94/11026。接头可以是便于在细胞中释放细胞毒药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头、肽酶敏感接头、光不稳定接头、二甲基接头、或含二硫化物接头（Chari et al.,Cancer Research 52:127‑131(1992);美国专利No.5,208,020）。 
本文中的免疫偶联物或ADC明确涵盖但不限于用下列交联剂制备的此类偶联物，包括但不限于：商品化（如购自Pierce Biotechnology Inc.,Rockford,IL，U.S.A）的BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC‑SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、sulfo‑EMCS、sulfo‑GMBS、sulfo‑KMUS、sulfo‑MBS、sulfo‑SIAB、sulfo‑SMCC、和sulfo‑SMPB、和SVSB（琥珀酰亚胺基‑(4‑乙烯基砜)苯甲酸酯）。 
治疗方法和组合物 
本发明包含用于治疗需要治疗的患者的方法，特征在于对该患者施用治疗有效量的依照本发明的抗体。 
本发明包含依照本发明的抗体用于治疗的用途。 
本发明的一个优选实施方案是本发明的CSF‑1R抗体，其用于治疗“CSF‑1R介导的疾病”，或本发明的CSF‑1R抗体，其用于制备治疗“CSF‑1R介导的疾病”的药物，可以如下描述： 
CSF‑1R信号传导有可能通过3种独特机制涉及肿瘤生长和转移。第一种是在源自雌性生殖系统（乳房/乳腺、卵巢、子宫内膜、宫颈）的肿瘤细胞中找到CSF配体和受体的表达（Scholl，S.M.，等人，J.Natl.Cancer Inst.86（1994）120‑126；Kacinski，B.M.，Mol.Reprod.Dev.46（1997）71‑74；Ngan，H.Y.，等人，Eur.J.Cancer 35（1999）1546‑1550；Kirma，N.，等人，Cancer Res 67（2007）1918‑1926），而且该表达与乳腺癌异种移植物生长以及乳腺癌患者中的较差预后有关。在一项研究中测试的急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病和脊髓发育不良患者的约10‑20%中看到CSF‑1R中的两处点突变，而且发现突变之一破坏受体周转（Ridge，S.A.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA 87（1990）1377‑1380）。然而，没能在稍后的研究中确认突变的发生率（Abu‑Duhier，F.M.，等人，Br.J.Haematol.120（2003）464‑470）。还在一些肝细胞癌（Yang，D.H.，等人，Hepatobiliary Pancreat.Dis.Int.3（2004）86‑89）和特发性骨髓纤维变性（Abu‑Duhier，F.，M.，等人，Br.J.Haematol.120（2003）464‑470）病例中发现突变。 
色素沉着绒毛结节性滑膜炎（PVNS）和腱鞘巨细胞瘤（TGCT）可以因使M‑CSF基因与胶原基因COL6A3融合并导致M‑CSF过表达的易位而发生（West，R.B.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103（2006）690‑695）。有人提出景观效应（landscape effect）与导致由受表达M‑CSF的细胞吸引的单核细胞组成的肿瘤块有关。TGCT是较小的肿瘤，能相对容易地自指（主要发生处）切除。PVNS更具攻击性，因为它能在大关节中重现，而且不易通过手术来控制。 
第二种机制基于阻断骨中的转移位点处经由M‑CSF/CSF‑1R的信号传导，其诱导破骨细胞发生、骨再吸收和溶骨性骨损害。乳腺癌、多发性骨髓瘤和肺癌是已经发现转移至骨并引起溶骨性骨病导致骨骼并发症的癌症的例子。由肿瘤细胞和基质释放的M‑CSF与受体活化物核因子κ‑B配体‑RANKL合作诱导造血髓样单核细胞祖先分化成成熟破骨细胞。在此过程中，M‑CSF通过给予破骨细胞以存活信号来起许可因子的作用（Tanaka，S.，等人，J.Clin.Invest.91（1993）257‑263）。在破骨细胞分化和成熟期间用抗CSF‑1R抗体抑制CSF‑1R活性有可能预防转移性疾病中引起溶骨性疾病及有关骨骼相关事件的破骨细胞活性失衡。虽然乳腺癌、肺癌和多发性骨髓瘤通常导致溶骨性损害，但是在前列腺癌中，转移至骨最初具有成骨细胞性外观，其中升高的骨形成活性产生与正常骨的典型层状结构不同的“编织骨”。在疾病进展期间，骨损害展示显著的溶骨成分以及高血清水平的骨再吸收，而且提示抗再吸收疗法可能是有用的。二膦酸盐已经显示出抑制溶骨性损害形成及减少骨骼相关事件数目（只在具有激素不应性转移性前列腺癌的男性中），但是在这点上，它们对成骨细胞损害的效果是有争议的，而且二膦酸盐至今未显示在预防骨转移或激素响应性前列腺癌中是有益的。抗再吸收剂在混合型溶骨/成骨细胞前列腺癌中的效果仍在进行临床研究（Choueiri，M.B.，等人，Cancer Metastasis Rev.25（2006）601‑609；Vessella，R.L.和Corey，E.，Clin.Cancer Res.12（20 Pt 2）（2006）6285s‑6290s）。 
第三种机制基于最近在乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌和宫颈癌的实体瘤中找到的肿瘤相关巨噬细胞（TAM）与较差的预后有关联的观察结果（Bingle，L.，等人，J.Pathol.196（2002）254‑265；Pollard，J.W.，Nat.Rev.Cancer 4（2004）71‑78）。巨噬细胞被M‑CSF和其它趋化因子募集至肿瘤。然后巨噬细胞可经由分泌血管发生性因子、蛋白酶和其它生长因子和细胞因子来促进 肿瘤进展，而且可通过抑制CSF‑1R信号传导来阻断。最近，Zins，K.，等人，Cancer Res.67（2007）1038‑1045）显示了肿瘤坏死因子α（TNFα）、M‑CSF或二者组合的siRNA的表达会在小鼠异种移植物模型中在肿瘤内注射相应siRNA后将肿瘤生长降低34%到50%。由人SW620细胞分泌的靶向TNFα的siRNA降低小鼠M‑CSF水平并导致肿瘤中的巨噬细胞减少。另外，用针对M‑CSF的抗原结合片段处理MCF7肿瘤异种移植物在与化疗剂组合给予时确实导致40%肿瘤生长抑制，逆转对化疗剂的抗性及改善小鼠存活（Paulus，P.，等人，Cancer Res.66（2006）4349‑4356）。 
TAM是慢性炎症和癌症之间出现的联系的唯一例子。炎症和癌症之间的联系有别的证据，如许多慢性病与升高的癌症风险有关，在慢性炎症位点处发生癌症，在许多癌症中发现炎症的化学介导物；消除炎症的细胞或化学介导物则抑制实验性癌症的发生，而且长期使用抗炎剂降低一些癌症的风险。许多炎性状况存在与癌症的联系，其中有幽门螺旋杆菌（H.pylori）诱导的胃炎对于胃癌，血吸虫病对于膀胱癌，HHVX对于卡波西（Kaposi）氏肉瘤，子宫内膜异位对于卵巢癌和前列腺炎对于前列腺癌（Balkwill，F.，等人，Cancer Cell 7（2005）211‑217）。巨噬细胞是慢性炎症中的关键细胞且有差异地响应其微环境。有两类巨噬细胞被认为是连续的功能状态的极端：M1巨噬细胞涉及1型反应。这些反应涉及微生物产物引起的激活及因此对致病性微生物的杀伤，产生反应氧中介物。另一个极端是M2巨噬细胞，其涉及2型反应，促进细胞增殖，调节炎症和适应性免疫及促进组织重塑、血管发生和修复（Mantovani，A.，等人，Trends Immunol.25（2004）677‑686）。导致瘤形成建立的慢性炎症通常与M2巨噬细胞有关。介导炎性反应的一种关键细胞因子是TNFα，顾名思义能在高剂量刺激抗肿瘤免疫和出血性坏死，但最近还发现由肿瘤细胞表达且起肿瘤促进物的作用（Zins，K.，等人，Cancer Res.67（2007）1038‑1045；Balkwill，F.，Cancer Metastasis Rev.25（2006）409‑416）。仍然需要更好地了解巨噬细胞关于肿瘤的具体作用，包括对其功能的潜在空间和时间依赖性及与特定肿瘤类型的关联。 
如此，本发明的一个实施方案是本发明的CSF‑1R抗体，用于治疗癌症。如本文中使用的，术语“癌症”可以是例如肺癌、非小细胞肺（NSCL）癌、支气管肺泡细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、胃的癌症、结肠癌、乳腺癌、 子宫的癌症、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴门癌、何杰金（Hodgkin）氏病、食管癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆囊癌、中枢神经系统（CNS）新生物、脊柱轴肿瘤、脑干胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、施旺细胞瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、脑脊膜瘤、鳞状细胞癌、垂体腺瘤、淋巴瘤、淋巴细胞性白血病，包括任何上述癌症的顽固形式，或一种或多种上述癌症的组合。优选地，此类癌症是乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌或前列腺癌。优选地，此类癌症进一步特征在于CSF‑1或CSF‑1R表达或过表达。本发明的又一个实施方案是本发明的CSF‑1R抗体，用于同时治疗原发性肿瘤和新转移。 
如此，本发明的另一个方面是本发明的CSF‑1R抗体，用于治疗牙周炎、组织细胞增多病X、骨质疏松症、佩吉特（Paget）氏骨病（PDB）、癌症治疗所致骨丢失、假体周围骨质溶解、糖皮质激素诱导的骨质疏松、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、炎性关节病（inflammatory arthridities）、和炎症。 
Rabello，D.，等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.347（2006）791‑796证明了CSF1基因中的SNP展现与攻击性牙周炎（由于牙槽骨的再吸收引起牙丧失的一种牙周组织炎性疾病）的正关联。 
组织细胞增多病X（也称作朗格汉斯（Langerhans）氏细胞组织细胞增多病，LCH）是朗格汉斯树突细胞（其表现出在骨和额外的骨LCH损伤中分化成破骨细胞）的一种增殖性疾病。朗格汉斯细胞衍生自循环中的单核细胞。发现在血清和损伤中测量到的升高的M‑CSF水平与疾病严重性有关联（da Costa，C.E.，等人，J.Exp.Med.201（2005）687‑693）。该疾病主要发生于儿科患者群，而且在该疾病变成系统性或复发时不得不用化疗来治疗。 
骨质疏松的病理生理学是由形成骨的成骨细胞损失和破骨细胞依赖性骨再吸收升高介导的。支持性数据记载于Cenci等人，显示了抗M‑CSF抗体注射在切除了卵巢的小鼠中保持骨密度且抑制骨再吸收（Cenci，S.，等人，J.Clin.Invest.105（2000）1279‑1287）。最近，鉴定出雌激素缺乏所致绝经后骨丢失之间的一种潜在联系，而且发现生成TNFα的T细胞的存在影响骨代谢（Roggia，C.，等人，Minerva Med.95（2004）125‑132）。一种可能的机 制是在体内TNFα对M‑CSF的诱导。M‑CSF在TNF‑α诱导的破骨细胞发生中的重要作用得到了下述效果的证实，即针对M‑CSF的抗体在小鼠中阻断TNFα诱导的骨质溶解，由此使得CSF‑1R信号传导的抑制物成为炎性关节炎的潜在靶物（Kitaura，H.，等人，J.Clin.Invest.115（2005）3418‑3427）。 
佩吉特氏骨病（PDB）是骨质疏松之后第二位最常见的骨代谢病症，其中骨周转升高的灶性异常导致并发症诸如骨痛、畸形、病理性骨折和耳聋。已经鉴定了四种基因中的突变调节正常破骨细胞功能且使个体易患PDB及相关病症：编码核因子（NF）κB的受体激活物（RANK）‑（破骨细胞功能的关键调节物）的TNFRSF11A中的插入突变，编码骨保护素（RANK配体的的诱饵受体）的TNFRSF11B的失活突变，编码NFκB途径中的一种重要支架蛋白的隔离体（sequestosome）1基因（SQSTM1）的突变，和含缬酪肽蛋白（VCP）基因中的突变。此基因编码VCP，其在使NFκB抑制剂靶向蛋白酶体所致降解中具有作用（Daroszewska，A.，Ralston，S.H.，Nat.Clin.Pract.Rheumatol.2（2006）270‑277）。被靶向的CSF‑1R抑制物提供机会来间接阻断RANKL信号传导的失调及对当前使用的二膦酸盐添加另外的治疗选项。 
癌症治疗诱导的骨丢失（尤其是在乳腺癌和前列腺癌患者中）是靶向CSF‑1R抑制剂能预防骨丢失的另一种适应证（Lester，J.E.，等人，Br.J.Cancer 94（2006）30‑35）。随着早期乳腺癌的预后改善，辅助疗法的长期后果变得更加重要，因为一些疗法（包括化疗、照射、芳香酶抑制剂和卵巢切除）通过降低骨矿物质密度而影响骨代谢，导致骨质疏松及相关骨折风险升高（Lester，J.E.，等人，Br.J.Cancer 94（2006）30‑35）。与乳腺癌中的辅助芳香酶抑制剂疗法等同的是前列腺癌中的雄激素消融疗法，其导致骨矿物质密度损失和骨质疏松相关骨折风险显著升高（Stoch，S.A.，等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.86（2001）2787‑2791）。 
CSF‑1R信号传导的靶向抑制在其它适应证中以及在靶定细胞类型包括破骨细胞和巨噬细胞（例如治疗响应类风湿性关节炎所致关节置换术的特定并发症）时可能是有益的。假体周骨丢失及因此假体松动所致植入失败是关节置换术的一种主要并发症，而且需要反复手术，给患者个人和保健系统带来较高的社会经济负担。至今，没有批准的药物疗法来预防或抑制假体周骨质溶解（Drees，P.，等人，Nat.Clin.Pract.Rheumatol.3（2007）165‑171）。 
糖皮质激素诱导的骨质疏松（GIOP）是另一种适应证，其中CSF‑1R抑 制剂能预防因各种状况（例如慢性阻塞性肺病、哮喘和类风湿性关节炎）而给予长期使用糖皮质类固醇后的骨丢失（Guzman‑Clark，J.R.，等人，Arthritis Rheum.57（2007）140‑146；Feldstein，A.C.，等人，Osteoporos.Int.16（2005）2168‑2174）。 
类风湿性关节炎、银屑病关节炎和炎性关节病本身是CSF‑1R信号传导抑制剂的潜在适应证，原因在于它们由巨噬细胞成分组成及不同程度的骨破坏（Ritchlin，C.T.，等人，J.Clin.Invest.111（2003）821‑831）。骨关节炎和类风湿性关节炎是由巨噬细胞在结缔组织中积累和巨噬细胞浸润入滑液（这至少部分是由M‑CSF介导的）引起的炎性自身免疫病。Campbell，I.K.，等人，J.Leukoc.Biol.68（2000）144‑150证明了M‑CSF在体外由人关节组织细胞（软骨细胞、滑液成纤维细胞）生成，而且发现于类风湿性关节炎患者的滑液，提示它有助于滑膜组织增殖和巨噬细胞浸润，这与该疾病的发病机制有关。抑制CSF‑1R信号传导有可能控制关节中的巨噬细胞数目及减轻来自有关骨破坏的疼痛。为了使不利影响最小化及进一步了解CSF‑1R信号传导在这些适应症中的影响，一种方法是特异性抑制CSF‑1R，而不靶向无数的其它激酶，诸如Raf激酶。 
最近的文献报告将升高的循环M‑CSF与慢性冠状动脉病中的动脉粥样硬化进展和较差的预后关联起来（Saitoh，T.，等人，J.Am.Coll.Cardiol.35（2000）655‑665；Ikonomidis，I.，等人，Eur.Heart.J.26（2005）1618‑1624）；M‑CSF通过帮助形成表达CSF‑1R且代表初始斑的泡沫细胞（摄入了氧化型LDL的巨噬细胞）来影响动脉粥样硬化过程（Murayama，T.，等人，Circulation 99（1999）1740‑1746）。 
在激活的小胶质中发现M‑CSF和CSF‑1R的表达和信号传导。小胶质（即中枢神经系统的驻留巨噬细胞）可被多种损伤激活，包括感染和外伤。M‑CSF被认为是脑中炎症应答的一种关键调节物，而且M‑CSF水平在HIV‑1、脑炎、阿尔茨海默（Alzheimer）氏病（AD）和脑瘤中升高。小胶质增生（microgliosis）（作为通过M‑CSF/CSF‑1R的自分泌信号传导的后果）导致对炎性细胞因子和氮氧化物释放的诱导，如通过例如使用实验性神经元损害模型证明的（Hao，A.J.，等人，Neuroscience 112（2002）889‑900；Murphy，G.M.，Jr.，等人，J.Biol.Chem.273（1998）20967‑20971）。发现CSF‑1R表达升高的小胶质在AD中及在AD的淀粉样前体蛋白V717F转基因小鼠模型中包围斑 （Murphy，G.M.，Jr.，等人，Am.J.Pathol.157（2000）895‑904）。另一方面脑中小胶质较少的op/op小鼠导致与正常对照相比A‑β的小纤维沉积和神经元损失，提示小胶质确实在op/op小鼠中的AD缺失的发生中具有神经保护功能（Kaku，M.，等人，Brain Res.Brain Res.Protoc.12（2003）104‑108）。 
M‑CSF和CSF‑1R的表达和信号传导与炎性肠病（IBD）有关（WO 2005/046657）。术语“炎性肠病”指严重的、慢性的肠道病症，特征在于胃肠道中多个位点处的慢性炎症，而且具体包括溃疡性结肠炎（UC）和克罗恩（Crohn）氏病。 
本发明抗体特征在于包括结合人CSF‑1R的抗体，特征在于上文所述表位结合特性或在于上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段，用于治疗癌症。 
本发明抗体特征在于包括结合人CSF‑1R的抗体，特征在于上文所述表位结合特性或在于上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段，用于治疗骨丢失。 
本发明抗体特征在于包括结合人CSF‑1R的抗体，特征在于上文所述表位结合特性或在于上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段，用于预防或治疗转移。 
本发明抗体特征在于包括结合人CSF‑1R的抗体，特征在于上文所述表位结合特性或在于上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段，用于治疗炎性疾病。 
本发明抗体特征在于包括抗体（特征在于包括结合人CSF‑1R的抗体，其特征在于上文所述表位结合特性或在于上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段）用于治疗癌症或用于制备治疗癌症的药物的用途。 
本发明包括抗体（特征在于包括结合人CSF‑1R的抗体，其特征在于上文所述表位结合特性或在于上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段）用于治疗骨丢失或用于制备治疗骨丢失的药物的用途。 
本发明包括抗体（特征在于包括结合人CSF‑1R的抗体，其特征在于上文所述表位结合特性或在于上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段）用于预防或治疗转移或用于制备预防或治疗转移的药物的用途。 
本发明包括抗体（特征在于包括结合人CSF‑1R的抗体，其特征在于上文所述表位结合特性或在于上文所述氨基酸序列和氨基酸序列片段）用于治疗炎性疾病或用于制备治疗炎性疾病的药物的用途。在一个实施方案中，依照本发明的抗体以75ng/ml或更低的IC50抑制CSF‑1结合CSF‑1R，在一个实施 方案中，以50ng/ml或更低的IC50抑制CSF‑1结合CSF‑1R。抑制CSF‑1结合CSF‑1R的IC50可以如实施例2中所示来测定。 
在一个实施方案中，依照本发明的抗体以150ng/ml或更低的IC50抑制CSF‑1诱导的CSF‑1R磷酸化，在一个实施方案中，以100ng/ml或更低的IC50抑制CSF‑1诱导的CSF‑1R磷酸化，在一个实施方案中，以50ng/ml或更低的IC50抑制CSF‑1诱导的CSF‑1R磷酸化，在一个实施方案中，以25ng/ml或更低的IC50抑制CSF‑1诱导的CSF‑1R磷酸化（在NIH3T3‑CSF‑1R重组细胞中）。抑制CSF‑1诱导的CSF‑1R磷酸化的IC50可以如实施例3中所示来测定。 
在一个实施方案中，依照本发明的抗体将表达人CSF‑1R(SEQ ID No:15)的重组NIH3T3细胞的生长抑制80%或更多（与抗体缺失下相比），优选90%或更多。%生长抑制如实施例6中所示来测定，其中测量%存活。如下自%存活计算%生长抑制：%生长抑制=100‑%存活。例如，<CSF‑1R>7G5.3B6显示100‑2=98%的对表达野生型人CSF‑1R的NIH3T3细胞的生长抑制。 
在一个实施方案中，依照本发明的抗体将表达人突变型CSF‑1R L301S Y969F (SEQ ID No:16)的重组NIH3T3的生长刺激5%或更多（与抗体缺失下相比），在一个实施方案中，20%或更多。%生长刺激如实施例6中所示来测定，其中测量%存活。如下自%存活计算%生长刺激：%生长刺激=‑(100‑%存活)。例如，<CSF‑1R>7G5.3B6显示‑(100‑0)=‑(100‑112)%=+12%的对表达突变型人CSF‑1R的NIH3T3细胞的生长刺激。 
在一个实施方案中，依照本发明的抗体将BeWo肿瘤细胞(ATCC CCL‑98)的生长抑制70%或更多（在10μg/ml抗体浓度；及与抗体缺失下相比），优选80%或更多。%生长抑制如实施例7中所示来测定。例如，<CSF‑1R>7G5.3B6显示89%的对BeWo肿瘤细胞的生长抑制。 
在一个实施方案中，依照本发明的抗体抑制巨噬细胞分化。在一个实施方案中，依照本发明的抗体以1.5nM或比1.5nM更低的IC50，优选以1.0nM或比1.0nM更低的IC50抑制单核细胞的存活。对单核细胞存活的抑制如实施例8中所示来测定。 
本发明的又一个实施方案是用于生产针对CSF‑1R的抗体的方法，特征在于将编码依照本发明的结合人CSF‑1R的人IgG1类抗体的重链的核酸（所述经修饰核酸）和编码所述抗体的轻链的核酸的序列插入表达载体中，将所述载体插入真核宿主细胞中，表达并自宿主细胞或上清液回收编码的蛋白质。 
药物配制剂 
术语“药物配制剂”指制剂其形式允许其中包括的活性组分的生物学活性有效，且不含有对配制剂要施用的受试者有不可接受的毒性的别的成分。 
在另一个方面，本发明提供含有一种或一组本发明的单克隆抗体或其抗原结合部分，与药学可接受载体一起配制的组合物，例如药物组合物。 
“药学可接受载体”指药物配制剂中除活性组分以外的，对受试者没有毒性的组分。药学可接受载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂、或防腐剂。如本文中使用的，“药学可接受载体”包括任何和所有生理学相容的溶剂、分散介质、涂层、抗细菌和抗真菌剂、等张和吸收/再吸收延迟剂、等等。优选地，载体适合于注射或输注。 
可以通过本领域已知的多种方法来施用本发明的组合物。正如技术人员会领会的，施用的路径和/或模式会随期望的结果而变化。 
药学可接受载体包括无菌水溶液或分散体和用于制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。此类介质和药剂对药学活性物质的使用是本领域已知的。在水之外，载体可以是例如等张缓冲盐水溶液。 
不管选择的施用路径，通过本领域技术人员知道的常规方法将可以以合适水合形式使用的本发明的化合物和/或本发明的药物组合物配制成药学可接受剂量形式。 
本发明的药物组合物中活性组分的实际剂量水平可以变化以获得对特定患者、组合物、和施用模式有效实现期望治疗响应，对患者没有毒性的活性组分量（有效量）。选择的剂量水平会取决于多种药动学因素，包括采用的本发明特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性、施用路径、施用时间、采用的特定化合物的排泄速率、与采用的特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或材料、治疗的患者的年龄、性别、重量、状况、一般健康和在先医学史、及医学领域公知的类似因素。 
本发明包括依照本发明的抗体用于治疗患有癌症（尤其是结肠、肺或胰腺癌）的患者的用途。 
本发明还包括一种用于治疗患有此类疾病的患者的方法。 
本发明进一步提供一种用于制备包括有效量的依照本发明的抗体以及药学可接受载体的药物组合物的方法及依照本发明的抗体对此类方法的用 途。 
本发明进一步提供有效量的依照本发明的抗体用于制备药物制剂的用途，优选地，与药学可接受载体一起，用于治疗患有癌症的患者。 
本发明还提供有效量的依照本发明的抗体用于制备药物制剂的用途，优选地，与药学可接受载体一起，用于治疗患有癌症的患者。 
制品 
在本发明的另一个方面，提供了含有上文所述可用于治疗、预防和/或诊断病症的材料的制品。所述制品包括容器和所述容器上或与所述容器相连的标签或包装插页。合适的容器包括例如药瓶、药管、注射器、IV溶液袋、等。所述容器可以用多种材料制成，诸如玻璃或塑料。所述容器装有独自或与组另一组合物合有效治疗、预防和/或诊断所述疾患的组合物，而且可以具有无菌存取口（例如所述容器可以是静脉内溶液袋或带有皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶）。所述组合物中的至少一种活性药剂是本发明的抗体。所述标签或包装插页指明该组合物用于治疗选择的疾患。此外，制品可包括(a)其中装有组合物的第一容器，其中所述组合物包括本发明的抗体；和(b)其中装有组合物的第二容器，其中所述组合物包括别的细胞毒剂或其它治疗剂。本发明此实施方案中的制品还可包括指示所述组合物可用于治疗特定疾患的包装插页。或者/另外，所述制品可进一步包括第二（或第三）容器，其中装有药学可接受的缓冲液，诸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏(Ringer)溶液和右旋糖溶液。它可进一步包括从商业和用户立场出发需要的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、滤器、针头、和注射器。 
要理解，任何上述制品可包括本发明的免疫偶联物代替或补充抗CSF‑1R抗体。 
提供下面的实施例和序列表来帮助理解本发明，所附权利要求书列出本发明的真实范围。本领域技术人员理解，可以在所列规程中进行更改而不偏离本发明的精神。 
抗体保藏 
  细胞系   保藏号   保藏日   <CSF‑1R>7H5.2G10  DSM ACC2922   10.06.2008
[0212] 序列表说明 


提供下面的实施例、序列表和附图来帮助理解本发明，所附权利要求书列出本发明的真实范围。本领域技术人员理解，可以在所列规程中进行更改而不偏离本发明的精神。 
III.实施例 
实施例1
生成抗CSF‑1R抗体的杂交瘤细胞系的产生 
NMRI小鼠的免疫规程 
利用电穿孔用编码huCSF‑1R之胞外域的表达载体pDisplayTM（Invitrogen，USA）免疫NMRI小鼠。每只小鼠用100μg DNA免疫4次。当发现抗huCSF‑1R的血清滴度足够时，在融合前4天和3天另外用200μl PBS中的50μg的huCSF‑1R ECD/huCSF‑1R ECDhuFc嵌合体1∶1混合物对小鼠进行静脉内（i.v.）增强免疫一次。 
抗原特异性ELISA 
通过抗原特异性ELISA测定受免疫小鼠的血清中的抗CSF‑1R滴度。 
用0.1mg/ml生物素化的抗Fcγ（Jackson ImmunoResearch.，Cat.No.109‑066‑098）将0.3μg/ml huCSF 1R‑huFc嵌合体（可溶性胞外域）捕捉到链霉亲合素板（MaxiSorb；MicroCoat，DE，Cat.No.11974998/MC1099）上，然后加入1/800稀释于PBS/0.05% Tween20/0.5% BSA中的辣根过氧化物酶（HRP）‑缀合的F(ab’)2抗小鼠IgG（GE Healthcare，UK，Cat.No.NA9310V）。将来自所有取血（tap）的血清1/40稀释于PBS/0.05%Tween20/0.5%BSA并系列稀释至1/1638400。将稀释后的血清加入孔中。取血前的（pre‑tap）血清用作阴性对照。从500ng/ml至0.25ng/ml的小鼠抗人CSF‑1R Mab3291（R&D Systems，UK）系列稀释液用作阳性对照。将所有组分一起保温1.5小时。将孔用PBST（PBS/0.2% Tween20）清洗6次，然后用新鲜制备的ABTS 溶液（1mg/ml）（ABTS：2,2’‑连氮基‑双(3‑乙基苯并噻唑啉‑6‑磺酸)）对测定进行室温显色10分钟。测量405nm的吸光度。 
杂交瘤产生 
可基于产生杂交瘤的标准方案将小鼠淋巴细胞分离并用PEG与小鼠骨髓瘤细胞系融合。然后针对抗原特异抗体的产生筛选所产生的杂交瘤。例如，用50%PEG将来自受免疫小鼠之脾衍生淋巴细胞的单细胞悬浮液与Ag8非分泌性小鼠骨髓瘤细胞P3X63Ag8.653（ATCC，CRL‑1580）融合。将细胞以大约104接种于平底96孔微量滴定板，然后在选择性培养基上保温约两周。然后通过针对人抗CSF‑1R单克隆IgM和IgG抗体的ELISA筛选各个孔。一旦出现广泛的杂交瘤生长，就将分泌抗体的杂交瘤重接种，再次筛选，然后若对于人IgG，抗CSF‑1R单克隆抗体仍然是阳性的，则可通过FACS进行亚克隆。然后将稳定的亚克隆体外培养以在组织培养基中产生抗体供表征。 
杂交瘤的培养 
将所产生的muMAb杂交瘤在补充有2mM L‑谷氨酰胺（GIBCO‑Cat.No.35050‑038）、1mM丙酮酸钠（GIBCO‑Cat.No.11360‑039）、1x NEAA（GIBCO‑Cat.No.11140‑035）、10%FCS（PAA‑Cat.No.A15‑649）、1x Pen Strep（Roche‑Cat.No.1074440）、1x Nutridoma CS（Roche‑Cat.No.1363743）、50μM巯基乙醇（GIBCO‑Cat.No.31350‑010）和50U/ml小鼠IL‑6（Roche‑Cat.No.1444581）的RPMI 1640（PAN‑Cat.No.PO4‑17500）中于37℃和5%CO2进行培养。 
实施例2
对CSF‑1结合CSF‑1R的抑制（ELISA） 
在384孔微量滴定板（MicroCoat，DE，Cat.No.464718）上于室温进行测试。在每一保温步骤之后平板均用PBST清洗3次。 
开始，用0.5mg/ml山羊F(ab′)2生物素化抗Fcγ（Jackson ImmunoResearch.，Cat.No.109‑006‑170）包被平板1小时（h）。 
此后将孔用补充有0.2% Tween ‑20和2%BSA（Roche Diagnostics GmbH，DE）的PBS封闭0.5小时。将75ng/ml的huCSF‑1R‑huFc嵌合体（可溶性胞外域）固定化至平板上1小时。然后将稀释于PBS/0.05% Tween20/0.5%BSA中的纯化抗体保温1小时。在加入3ng/ml CSF‑1（Biomol，DE，Cat.No.60530）、50ng/ml生物素化抗CSF‑1克隆BAF216（R&D Systems，UK）和1:5000稀释之链霉亲合素HRP（Roche Diagnostics GmbH，DE，Cat.No.11089153001）的混合物1小时后，将平板用PBST清洗6次。抑制配体‑受体相 互作用的抗CSF‑1R SC‑02，克隆2‑4A5（Santa Cruz Biotechnology，US）被用作阳性对照。将平板用新鲜配制的BM blue POD底物溶液（BM blue 3,3′‑5,5′‑四甲基联苯胺，Roche Diagnostics GmbH，DE，Cat.No.11484281001）在室温显色30分钟。测量370nm处的吸光度。所有的抗CSF‑1R抗体均显示了对CSF‑1结合CSF‑1R的显著抑制（见表1）。抑制配体‑受体相互作用的抗CSF‑1R SC‑02，克隆2‑4A5（Santa Cruz Biotechnology，US）被用作参照对照。 
表1：对CSF‑1/CSF‑1R相互作用的抑制的IC50计算值 
  抗体   IC50CSF‑1/CSF‑1R抑制[ng/ml]   <CSF‑1R>7H5.2G10  26.9   <CSF‑1R>10A4.1G11  63.4   <CSF‑1R>6G4.1C8  21.2   SC‑02，克隆2‑4A5   30.9
实施例3
对NIH3T3‑CSF‑1R重组细胞中CSF‑1‑诱导之CSF‑1R磷酸化的抑制 
4.5x103个用全长CSF‑1R的表达载体以逆转录病毒方式感染的NIH 3T3细胞在DMEM（PAA Cat.No.E15‑011）、2mM L‑谷氨酰胺（Sigma，Cat.No.G7513）、2mM丙酮酸钠、1x非必需氨基酸、10%FKS（PAA，Cat.No.A15‑649）和100μg/ml PenStrep（Sigma，Cat.No.P4333[10mg/ml]）中培养至它们达到汇合。此后用补充有亚硒酸钠[5ng/ml]（Sigma，Cat.No.S9133）、运铁蛋白[10μg/ml]（Sigma，Cat.No.T8158）、BSA[400μg/ml]（Roche Diagnostics GmbH，Cat.No.10735078）、4mM L‑谷氨酰胺（Sigma，Cat.No.G7513）、2mM丙酮酸钠（Gibco，Cat.No.11360）、1x非必需氨基酸（Gibco，Cat:11140‑035）、2‑巯基乙醇[0,05mM]（Merck，Cat.No.M7522）、100μg/ml和PenStrep（Sigma，Cat.No.P4333）的无血清DMEM培养液（PAA Cat.No.E15‑011）清洗细胞并在30μl相同培养基中保温16小时以使受体上调。将10μl的已稀释抗CSR‑1R抗体加至细胞中1.5小时。然后用10μl的100ng/ml huM‑CSF‑1（Biomol Cat.No.60530）刺激细胞5分钟。保温后，去除上清液，将细胞用80μl的冰冷PBS漂洗2次并加入50μl新鲜配制的冰冷裂解缓冲液（150mM NaCl/20mM Tris pH 7.5/1mM EDTA/1mM EGTA/1%Triton  X‑100/1片蛋白酶抑制剂片剂（Roche Diagnostics GmbH，Cat.No.1836170）每10ml缓冲液/10μl/ml磷酸酶抑制剂鸡尾酒样混合物1（Sigma，Cat.No.P‑2850，100x储液）/10μl/ml蛋白酶抑制剂1（Sigma，Cat.No.P‑5726，100x储液）/10μl/ml 1M NaF）。冰置30分钟后，将平板在平板摇床上剧烈振荡3分钟，然后以2200rpm离心10分钟（Heraeus Megafuge 10）。 
用ELISA分析细胞裂解物中磷酸化的和总的CSF‑1受体的存在。使用来自R&D Systems（Cat.No.DYC3268‑2）的试剂盒依照供应商的说明书检测磷酸化的受体。为了检测总的CSF‑1R，用试剂盒中所包括的捕捉抗体将10μl的裂解物固定化在平板上。之后加入1:750稀释的生物素化抗CSF‑1R抗体BAF329（R&D Systems）和1∶1000稀释的链霉亲合素‑HRP缀合物。60分钟后将平板用新鲜配制的ABTS 溶液显色并检测吸光度。数据计算为无抗体下阳性对照的百分率和所表达的磷酸化/总受体比例值。阴性对照限定为不加入M‑CSF‑1。抗CSF‑1R SC‑02，克隆2‑4A5（Santa Cruz Biotechnology，US，也可参阅Sherr，C.J.，等人，Cell 41（1985）665‑676），抑制配体‑受体相互作用，被用作参照对照。 
表2：对CSF‑1受体磷酸化的抑制的IC50计算值。 
  抗体   IC50 CSF‑1R磷酸化[ng/ml]   <CSF‑1R>7H5.2G10  49.0   <CSF‑1R>10A4.1G11  15.4   <CSF‑1R>6G4.1C8  82.6   SC‑02,clone 2‑4A5  412.0
实施例4
抗CSF‑1R抗体对CSF‑1R的亲和力的测定 
仪器：BIACORE A100 
芯片：CM5（Biacore BR‑1006‑68） 
偶联：胺偶联 
缓冲液：PBS（Biacore BR‑1006‑72），pH 7.4，35℃ 
为了亲和力测量，将36μg/ml抗小鼠Fcγ抗体（来自山羊，Jackson Immuno Reasearch JIR115‑005‑071）偶联至芯片表面上以捕捉针对CSF‑1R的抗体。以溶液中不同浓度添加人CSF‑1R ECD（R&D‑Systems 329‑MR或内部 亚克隆的pCMV‑presS‑HisAvitag‑hCSF‑1R‑ECD）。通过在35℃ 1.5分钟的CSF‑1R注射测量结合；通过在35℃用缓冲液清洗芯片表面10分钟来测量解离。抑制配体‑受体相互作用的抗CSF‑IR SC‑02，克隆2‑4A5（Santa Cruz Biotechnology，US;还可参加Sherr,C.J.,等人,Cell 41(1985)665‑676）用作参照对照。 
为了计算动力学参数使用了Langmuir 1∶1模型。 
表3：通过SPR（BIACORE A100）在35℃测量的亲和力数据 
  抗体   KD(nM)   ka(1/Ms)  kd(1/s) t1/2(min)   <CSF‑1R>7H5.2G10  0.54   7.0E+05   3.8E‑04   30.40   <CSF‑1R>10A4.1G11  1.77   7.4E+05   1.3E‑03   8.89   <CSF‑1R>6G4.1C8  0.52   5.7E+05   2.9E‑04   39.43   SC‑02，克隆2‑4A5   2.73   5.09E+05   1.39E‑03   8.31
实施例5
利用SPR基于交叉竞争对抗CSF‑1R单克隆抗体的表位作图 
仪器：BIACORE A100 
芯片：CM5（Biacore BR‑1006‑68） 
偶联：胺偶联 
缓冲液：PBS（Biacore BR‑1006‑72），pH 7.4，25℃ 
为了经由交叉竞争的表位作图测定法，将36μg/ml抗小鼠Fcγ抗体或抗大鼠Fcγ抗体（来自山羊，Jackson Immuno Reasearch JIR115‑005‑071和Cat.No.112‑005‑071）偶联至传感器芯片表面上以呈现针对CSF‑1R的抗体。自5μg/ml抗CSF‑1R单克隆抗体捕捉后，用250μg/ml小鼠或大鼠免疫球蛋白（Pierce Cat.No.31202和Pierce Cat.No.31233）封闭捕捉抗体的游离结合能力，接着注射12.5μg/ml CSF‑1R（R&D‑Systems Cat.No.329‑MR）2分钟。通过注射2分钟来分析第二抗CSF‑1R抗体的结合，通过用缓冲液清洗5分钟来测量解离。测定和测量在25℃进行。第二抗CSF‑1R抗体的特异性结合参照针对相同芯片设置但仅仅不注射CSF‑1R的点。以第二抗CSF‑1R抗体的预期结合响应百分比(%)计算交叉竞争数据。第二抗体的结合的术语“预期结合响应百分比(%)”通过“100*相对响应(一般_稳定性_早期)/r最大”来计算，其中r最大通过“相对响应(一般_稳定性_晚期)*抗体分子量/抗原分子量”来计算，如Biacore表位作图用法说明（用于BIACORE A100仪器）中记载的。 
还从成对的鉴定的抗体1和2计算最小结合响应。因此，将得到的最大值+50%设置为显著结合竞争的阈值（见表X，例如对于抗体<CSF‑1R>7H5.2G10，计算阈值为7+3.5=10.5）。如此，“抗CSF‑1R抗体与<CSF‑1R>7H5.2G10结合相同表位”具有>10.5的预期结合响应百分比(%)。 
抑制配体‑受体相互作用的抗CSF‑IR SC‑02，克隆2‑4A5（Santa Cruz Biotechnology，US；还可参加Sherr，C.J.，等人，Cell 41（1985）665‑676）用作参照对照。 
表4：抗CSF‑1R抗体经由交叉竞争数据的表位作图 

结果指示抗体<CSF‑1R>7H5.2G10、<CSF‑1R>10A4.1G11都结合相同表位，而例如SC‑2‑4A5结合另一表位且不与依照本发明的抗体交叉反应（竞争结合）。 
实施例6
在用抗CSF‑1R单克隆抗体处理下对3D培养中的NIH3T3‑CSF‑1R重组细胞的生长抑制（CellTiterGlo测定法） 
用全长野生型CSF‑1R（SEQ ID NO:31）或突变型CSF‑1R L301S Y969F（SEQ ID NO:32）的表达载体经逆转录病毒感染的NIH 3T3细胞在poly‑HEMA（聚甲基丙烯酸‑2‑羟乙酯（poly(2‑hydroxyethylmethacrylate)））（Polysciences，Warrington，PA，USA））包被（以防止粘附至塑料表面）的平皿上培养于补充有2mM L‑谷氨酰胺、2mM丙酮酸钠和非必需氨基酸和10%胎牛血清（Sigma，Taufkirchen，Germany）的DMEM高葡萄糖培养基（PAA，Pasching，Austria）中。细胞接种于用5ng/ml亚硒酸钠、10mg/ml运铁蛋白、400μg/ml BSA和0.05mM 2‑巯基乙醇替换血清的培养基中。在用 100ng/ml huCSF‑1（Biomol，Hamburg，Germany）处理时，表达wtCSF‑1R的细胞形成三维生长的密集椭球体，被称为停泊独立(anchorage independence)的特性。这些椭球体近似于原位实体肿瘤的三维结构和组织。突变型CSF‑1R重组细胞能够不依赖于CSF‑1配体而形成椭球体。在10μg/ml抗体存在下将椭球体培养物保温3天。用CellTiterGlo测定法通过测量细胞的ATP含量来检测细胞的生存能力。 
表5： 

**15次不同实验的平均， 
***6次不同实验的平均。 
实施例7
在用抗CSF‑1R单克隆抗体处理下对3D培养中的BeWo肿瘤细胞的生长抑制（CellTiterGlo‑测定法） 
将BeWo绒毛膜癌细胞（ATCC CCL‑98）培养于补充有10%FBS（Sigma）和2mM L‑谷氨酰胺的F12K培养基（Sigma，Steinheim，Germany）中。将5x104个细胞/孔接种于装有补充了0.5%FBS和5%BSA之F12K培养基的96孔poly‑HEMA（聚甲基丙稀酸‑2‑羟乙酯）包被的平板中。伴随地加入200ng/ml huCSF‑1和10μg/ml不同抗CSF‑1R单克隆抗体并保温6天。用CellTiterGlo测定法通过以相对光单位（RLU）测量细胞的ATP含量来检测细胞的生存能力。当用不同抗CSF‑1R抗体（10μg/ml）处理BeWo椭球体培养物时，观察到了对CSF‑1诱导的生长的抑制。为了计算抗体介导的抑制作用，从所有样品中减去未刺激BeWo细胞的RLU均值。CSF‑1刺激细胞的RLU均值任意设置为 100%。将用CSF‑1刺激和用抗CSF‑1R抗体处理的细胞的RLU均值计算为CSF‑1刺激RLU的百分率。表6显示了计算数据；图1描述了RLU均值。每个均值得自三份重复实验。 
表6： 

实施例8
在用抗CSF‑1R单克隆抗体处理下对巨噬细胞分化/单核细胞存活的抑制（CellTiterGlo测定法） 
使用RosetteSepTM人单核细胞富集鸡尾酒（StemCell Tech.‑Cat.No.15028）从外周血中分离单核细胞。将富集的单核细胞群于37℃和5%CO2接种于96孔微量滴定板（2.5x104个细胞/孔）内补充有10%FCS（GIBCO‑Cat.No.011‑090014M）、4mM L‑谷氨酰胺（GIBCO‑Cat.No.25030）和1x PenStrep（Roche Cat.No.1074440）的100μl RPMI 1640（Gibco‑Cat.No.31870）中。当在培养基中加入150ng/ml huCSF‑1时，可观察到清楚地分化成粘附性巨噬细胞。此分化通过添加抗CSF‑1R抗体可被抑制。此外，单核细胞的存活受影响并可通过CellTiterGlo（CTG）分析试验进行分析。从抗体处理对单核细胞存活的浓度依赖性抑制，计算IC50（见表7）。 
表7： 
  抗体   IC50[nM]  <CSF‑1R>7H5.2G10  1.0   <CSF‑1R>10A4.1G11  0.4   SC‑02，克隆2‑4A5   2.4
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