化学治疗组合物 本发明涉及胃肠疾病，和/或者肿瘤的治疗，以及增加体重的方法，其是在需要该治疗的情况下，通过摄入聚合组合物到人、动物或者鸟类体内而进行的。
在猪集中饲养的条件下，断奶后的大肠杆菌病是普遍存在的。比如，整个欧洲，美国和澳大利亚的猪都是集中饲养的。例如，在美国，断奶后的大肠杆菌病是引起断奶猪死亡的最常见的原因(Leman等，1986)。该疾病和断奶后大肠杆菌在小肠前室(前处)的增殖有关，并导致死亡或者幼小断奶动物不能正常的体重增加。其它微生物性疾病也是常见地并通常伴随着在猪以及其它集中饲养的条件下的动物特别是家禽，大肠杆菌病而发生。
过去，通过摄入抗微生物组合物或者接种疫苗以努力控制疾病，但无论哪种方法还没有被证明完全有效。
摄入抗微生物组合物无效的基本解释是这样的事实：蛋白饲料和胃肠道内容物对任何化学治疗剂都提供了一个反应性的和危险的环境，因此，将在体外试验中有效的抗微生物剂用于体内的胃肠道内时，通常是无效的。
而且，要在实际应用中能有效地抗微生物，一般有严格的要求，即该胃肠疾病控制剂应该适当地在十二指肠中维持极低微生物含量，而在肠的下部维持极高的含量。
此外，即使在体内有效的抗菌剂也不总伴随着体重增加，因为那些即使是几种此类市售的抗菌剂的混合液也仅能引起较之于对照动物的不稳定的，部分的或者甚至是负的体重增加的情况是常见的。
因此，有必要改进这种在需要治疗的人和/或者动物和/或者鸟类体内通过摄入抗菌剂组合物以预防和/或者治疗该疾病的方法。而且，有必要使进行该治疗的人和/或者动物和/或者鸟类获得体重的增加。
本发明所提供的聚合物和/或者共聚物优选地衍生于丙烯醛并且具有聚合重复单元：式中：R是H或者烷基，通常是C1到C4或者此单元是以水合的，半缩醛或者缩醛的形式以及未穷举的全部可能的如下结构：式中，n是一或者更大的数，而R如上文所定义；下文中所指“目标聚合物”，作为适于口服治疗的体内广谱的抗菌剂和/或者抗癌剂。
已知分子对膜的透过率和其分子量呈反变关系。因此，本领域广泛并普遍接受的是口服的并且分子量小于1000的分子，它们能严格地透过消化道，并因此可有效地将随后的潜在毒性降至最小。
带有醛基的目标聚合物尤其能和蛋白质反应。(事实上，在微生物分析中，抑制/破坏该目标聚合物活性的常规和方便的方法是加入蛋白质)。因此，不希望该目标聚合物在肠中呈现出明显的微生物活性，特别是在有蛋白性饲料存在下。
因而，本发明提供了一个预防和/或者治疗人、动物或者鸟类的由于微生物感染了胃肠道而引起的胃肠道疾病的方法，以及一个增加那些患胃肠疾病和/或者感染的人、动物或者鸟类的体重的方法，其包括：对该人、动物或者鸟类给予有效量的药物组合物或者食品添加剂，它包括有效剂量的该目标聚合物以及一种药物或者兽药可接受的载体、稀释剂、辅剂、赋形剂或者缓释系统。
本发明的一个目的是提供预防和治疗人、动物或者鸟类的机能障碍/病理状态，特别是那些和大肠杆菌病、腹泻、死亡和/或者体重降低有关的胃肠道状态的方法。
本发明基于下文中的一系列发现：
首先，现已发现目标聚合物，由于是高分子量的，而不能通透生物膜，便于应用到胃肠道，这是由于将透过消化道并进入血流而可能引起的毒性减到了最小程度。尤其是，已发现该目标聚合物具有的分子量大于1000，并且一般大于2000，从而能有效将其透过肠膜的可能性降到最小程度，结果是发现该聚合物尽管在静脉注射后表现出毒性，但当口服给药却没有表现出毒性。因此，已发现该目标聚合物具有最小的毒性，且在任何有消化道膜的物种，如人、动物或鸟类中用于化疗目的时均具有相关的优越性。
一般地，由离子引发/催化而生成的该目标聚合物要比由自由基团引发/催化所生成的要更具有亲水性。并且该目标聚合物的亲水性一般会随着其带有亲水基(特别是羧基)或带有亲水单体(尤其是丙烯酸)而增加。具体地说，在充足的空气下将由离子引发/催化所生成的该目标聚合物小心地从室温加热到100℃，优选达到80-85℃，产生出带有0.1-5摩尔羧基/kg的，尤其在十二指肠的pH中具有水溶性的，并优选应用于本文所述及的胃肠道的目标聚合物。
该目标聚合物有以下特征：
该目标聚合物具有通常为广谱的体内抗菌特性，从而提供了一个治疗人、动物或鸟类的胃肠疾病的方法。
已表明该目标聚合物能使人、动物或鸟类的体重增加。
也已表明该目标聚合物是体内抗癌剂。
根据本发明的第一个实施方案，提供了一个在人、动物或者鸟类体内治疗肿瘤的方法，其包括：给予所述的人、动物或者鸟有效剂量的药物或兽药组合物或者饲料添加剂，其包括一种有效剂量的具有重复单元：
的聚合物和/或者共聚物，式中R是H或者烷基，通常是C1-C4，或者此单元是以水合的，半缩醛或者缩醛的形式以及并未穷举的所有可能结构的如下通式：式中n是一或者更大的数，而R如上文所定义；以及一种药物或者兽药可接受的载体、稀释剂、辅剂、赋形剂和/或者控释系统。
根据本发明的第二个实施方案，提供了一个治疗或者预防人类，动物或者鸟类的由于微生物感染其胃肠道而引起的胃肠疾病和/或者感染的方法，包括：给予所说的病人、动物或鸟类有效剂量的药物或者兽药组合物或者饲料添加剂，其中包括有效剂量的如本发明的第一个实施例中所定义的聚合物和/或者共聚物，以及一种药物或者兽药可接受的载体、稀释剂、辅剂、赋形剂和/或者控释系统。
根据本发明的第三个实施方案，提供了一个增加那些生有肿瘤的和/或者患胃肠微生物性疾病和/或者感染的人、动物或者鸟的体重的方法，包括：给予该病人、动物或者鸟一种有效剂量的药物或者兽药组合物或者饲料添加剂，其中含有有效剂量的如本发明的第一个实施例中所定义的聚合物和/或者共聚物，以及药物或者兽药可接受的载体、稀释剂、辅剂、赋形剂和/或者控释系统。
就作为预防和/或者治疗胃肠疾病的该目标聚合物来说，现已发现那些在大肠杆菌其饮用水中随意地加有该目标聚合物的饲养场小猪的腹泻天数减少了并且其排泄物中的E.coli(大肠杆菌)数也有降低。而且，按照本发明建议方法的效果要比由给药商品化的抗菌剂连同接种疫苗所致的部分效果明显好得多。
此外，现已发现在聚合控释系统中且能降低动物腹泻天数的该目标聚合物，也能引起非常多的体重增加。如同实施例17中所例证，小猪呈现出较低的死亡率，以及高于对照小猪大约46％的体重增加。
因此，建议将本目标聚合物用作一种动物固体饲料的添加剂，并且以聚合控释系统的形式，因为那样该目标聚合物将缓慢地释放并主要存在于十二指肠中。而且，现在建议该存在于控释系统中的目标聚合物将能减少任何一种发生在该目标聚合物和无论是胃肠道组份还是蛋白饲料间的，尤其是在该饲养必需的预加热灭菌过程中的，破坏性的化学反应。而且，还会减少动物的任何由于味觉的拒食。
当将该目标聚合物用于治疗那些需要治疗的人、动物或者鸟类的疾病和/或者感染时，比如治疗患和大肠杆菌相关的腹泻的小猪，优选在断奶后立即给药并总是连续五天，有时连续30天，但优选为至少在断奶后持续15天；随时观察腹泻的症状。优选以控释型进行治疗并且理论上含有5％-50％w/w的目标聚合物，但优选为20％-30％w/w。优选地，将该控释剂型/弹丸剂(pellet)在该饲料生产过程或者喂食过程中加入该饲料中，从而使得该饲料含有1％-20％w/w的且优选为2％-8％w/w的弹丸剂。例如，若一只5kg的小猪每天吃500克带有4％w/w的含25％w/w目标聚合物的控释弹丸剂的饲料，这样可计算出目标聚合物的剂量率为1000mg/kg(活重)/天；控释剂型的剂量率为50-5000mg/kg/天是可行的，但优选为500-2500mg/kg/天。当该目标聚合物是非控释剂型时，应该使用25-500mg/kg/天的较低的剂量率。对于肿瘤和其他微生物感染，剂量方案和剂量率是类似的。
本文公开的该目标聚合物无论是在体内的于胃肠道中有相对大量的反应性蛋白存在下的抗菌活性，还是化疗活性的范围都是令人惊异的。在未公开的研究工作中，还发现该目标聚合物在人类或者各种动物的血液中表现出显著的抗凝血剂活性。这种令人惊异的体内活性的具体范围暗示该目标聚合物具有意想不到的和植物血凝素-复方新诺明(selectin)-氧基哌吲哚型吸附相互作用相关的活性。
用于在本发明的方法中给药的组合物可以通过组合物制备领域(如兽药和药物组合物领域)已知的方法进行制备，该方法包括共混、研磨、匀浆化、悬乳、溶解、乳化、分散以及在合适时，将该目标聚合物和选择的赋形剂，稀释剂，载体和辅剂混合。
对于口服给药而言，该药物或者兽药组合物可以是片剂，锭剂，丸剂，含片，胶囊，酏剂，散(粉)剂，包括冻干粉剂，溶液剂，颗粒剂，悬浮剂，乳剂，糖浆剂以及酊剂。还可以制备缓释剂或延迟释放型，比如包衣颗粒，多层片剂或者微粒。
优选的控释系统包括pH敏感的，交联的，吸水的弹丸剂，且潮湿时呈凝胶状。
口服给药的固体剂型可以含有药物或者兽药可接受的粘合剂，增甜剂，崩解剂，稀释剂，矫味剂，包衣剂，防腐剂，润滑剂和/或者延时剂。合适的粘合剂包括阿拉伯胶，明胶，玉米淀粉，西黄蓍胶，藻酸钠，羧甲基纤维素或者聚乙二醇。合适的增甜剂包括蔗糖，乳糖，葡萄糖，天冬甜二肽或者糖精。合适的崩解剂包括玉米淀粉，甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，黄单胞菌胶，膨润土，藻酸或者琼脂。合适的稀释剂包括乳糖，山梨糖醇，甘露醇，右旋糖，高岭土，纤维素，碳酸钙，硅酸钙或者磷酸二钙。合适的矫味剂包括薄荷油，冬青油，樱桃，橙或者红莓矫味剂。合适的包衣剂包括丙烯酸和/或者甲基丙烯酸和/或者它们的酯和/或它们的氨化物的聚合物或者共聚物，蜡，脂肪醇，玉米蛋白，虫胶或者谷胶。合适的防腐剂包括苯甲酸钠，维生素E，α-生育酚，维生素C，甲基尼泊金，丙基尼泊金或者亚硫酸氢钠。合适的润滑剂包括硬脂酸镁，硬脂酸，油酸钠，氯化钠或者滑石。合适的延时剂包括单硬脂酸甘油酯或者二硬脂酸甘油酯。
除了上述各种物质外，用于口服的液体剂型还包括一种液体载体。合适的液体载体包括水，油如橄榄油，花生油，芝麻油，葵花子油，红花油，花生油，椰子油，液体石蜡，乙二醇，丙二醇，聚乙二醇，乙醇，丙醇，异丙醇，甘油，脂肪醇，甘油三酯或者其混合物。
用于口服的悬浮剂型还可以包括分散剂和/或悬浮剂。合适的悬乳剂包括羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，藻酸钠或者十六醇。合适的分散剂包括卵磷脂，聚氧乙烯的脂肪酸酯如硬脂酸酯，聚氧乙烯山梨醇单或双-油酸酯，-硬脂酸酯或者-月桂酸酯，聚氧乙烯山梨糖醇酐单-或双-油酸酯， -硬脂酸酯或者-月桂酸酯及其类似物。
用于口服的乳化剂型还可包括一种或者多种乳化剂。合适的乳化剂包括上文例示的分散剂或者天然胶如阿拉伯胶或者西黄蓍胶。
根据本发明的第四个实施方案，提供一种制备弹丸剂的方法，该弹丸剂包括如本发明的第一个实施方案中所定义的聚合物和/或者共聚物，以及药物或者兽药可接受的载体，稀释剂，辅剂，赋形剂和/或者控释系统，其主要存在于一种聚合物基材中。该方法包括将一种聚合物基材加入到如本发明的第一个实施方案所定义的聚合物和/或者共聚物的溶液，悬浮液或乳化液中。
根据本发明的第五个实施方案，提供一个制备弹丸剂或者类似的固体组合物的方法，该弹丸剂主要是在一种聚合物基材中含有如本发明的第一个实施方案中所定义的聚合物和/或者共聚物，该方法如本发明的第四个实施方案所定义且包括步骤：
(i)将该聚合物和/或者共聚物溶解于碱的水溶液或碱性溶液中；
(ii)用酸中和该溶液；
(iii)在该中和的溶液中加入不溶的，交联的，吸附性的丙烯酸的聚合物和/或者丙烯酰胺和丙烯酸的共聚物，以形成润湿溶涨的弹丸剂；以及
(iv)任意地，将该溶涨的弹丸剂彻底或部分地干燥。
如此制成的潮湿的，溶涨的弹丸剂可以以湿的、部分干的或全干的形式作为添加剂，例如动物饲料的添加剂。还可以进一步设计该系统以使外部的聚合物基材的含羧基基团可以使得该目标聚合物在胃的酸性环境中时能基本上被包含于该基材中。然而，在十二指肠的碱性环境中时，该基材的羧基离子化并互相排斥，并且该弹丸剂迅速膨胀使得该目标聚合物在其自身的离子基团的排斥力的帮助下通过扩散过程而释放，其速度大体和饲料通过十二指肠的速度相当。
在本发明中，术语“控制释放系统”是和“控制药物运送”用在相同的情况，且包括同样范围的实施例(Robinson&Lee，1987)。可以用本领域众所周知的许多其它的pH-敏感的控释系统(Robinson和Lee，1987)代替丙烯酸聚合物或者丙烯酰胺和丙烯酸的共聚物。例如，可溶的阴离子型，或者不溶的，交联的和阴离子型的纤维素系统或者衍生于任何种类的丙烯酸和/或其衍生物的可溶的和阴离子型的，或者不可溶的，交联的和阴离子型的聚合物。该交联的且不溶的聚合物是优选的，因为其能膨胀并且也不太可能被代谢。
总之，本发明所述的组合物可用于控制肿瘤和/或者微生物性疾病，尤其是能使患胃肠感染的人、动物或者鸟的体重增加。本发明能应用于胃肠道患有微生物性疾病(如大肠杆菌)的病人、动物或者鸟类。一个优选的用途是使刚断奶的且患有腹泻以及患和小肠前庭处大肠杆菌增殖相关的疾病的小猪的体重增加。本发明可应用于患有胃肠疾病的人，如源于金黄色葡萄球菌和/或者幽门螺旋菌(Helicobactor pylori bacteria)。
参照具体的实施例对本发明进行说明，而不应该理解成对本发明范围的限制。
实施例1-13
目标聚合物的制备和结构
实施例1
(a)使用一种自由基引发剂/自由基催化剂：
将9.64克蒸馏过的丙烯醛和25克甲醇置于100ml的圆底烧瓶中并用氮气排气。加入0.525克过氧化苯甲酰并在60℃下通氮气搅拌该溶液。让该反应总共大约持续88小时。此后，该反应液变成艳黄并含有30.5％的固相物。13C-NMR(300MHz)δ(相对于49.00处的d4-甲醇)：33.27(CH)；33.53(CH)；33.79(CH)；33.87(CH2)；37.03(CH)；37.29(CH)；37.54(CH)；37.64(CH2)；97.15(CH)；103.37(CH)；104.34(CH)；139.36(CH)；139.78(CH2)；196.72(CH)。该13C-NMR谱显示出一些残留的丙烯醛，其醛基上的碳δ为196.72，而乙烯基的CH2及CH分别为8139.8和8139.36；除了δ196.72(CH)处的共振吸收外，并无其它有关-CHO的吸收峰。该谱和由稠合的四氢吡喃环及一些自由的二羟甲基团所组成的聚合丙烯醛的谱相同。无论是以船状或椅状构型存在这些环所导致的化学迁移比预计的要大。
典型地，作为分子量的指标，在联有Waters Associated Model ALC/GPC204型液相色谱并配有差示折光仪R401的Porasil GPC 60 A柱发现该聚丙烯醛的保留时间少于聚乙二醇2,000。
(b)使用离子型引发剂/催化剂：将1.6克馏出的丙烯醛在一200ml(毫升)的烧杯中用去离子水配成20ml，然后，在搅拌下加入约0.5ml的0.2MNaOH直至pH约为10-11。该溶液变成浑浊并有白色沉淀开始生成。再搅拌该内容物2小时，然后过滤。用去离子水彻底洗涤该沉淀直至该滤液为中性。在接触充份的空气的条件下从室温开始，小心加热干燥该产品到约100℃。或者，在这种情况下可以真空干燥该产品得到白-浅黄色细粉末；溶于甲醇，蒸干，然后再溶于甲醇或其它溶剂。通常，该目标聚合物带有0.1-5摩尔的羧基/kg并且发现其GPC保留时间基本上短于聚乙二醇2,000。13C-NMR(300MHz)δ(相对于49.00处的d4-甲醇)；19-31(CH2)；35.95(CH2)；37-42(CH)；67-73(CH2)；73-81(CH)；92-95(CH)；96-103(CH)；114-120(CH2)；134-141(CH)；196.0(CH)。
在每种病例的实验中，每组取10支瑞士白鼠，共分为二组(一组作为治疗，一组作对照)，发现pH调为8的该目标聚合物的三乙醇胺水溶液的急性静脉注射毒性为320mg/kg，而急性口服毒性＞5000mg/kg(14天内无死亡和异常信号显示)。
实施例2
将6.489克馏出的丙烯酸，0.56克馏出的丙烯醛和15克甲醇置于50ml的圆底烧瓶中并用氮气排气。加入0.33克过氧化苯甲酰并在60-65℃下通氮气搅拌该溶液。让该反应持续大约66小时。此后，该烧瓶中的内容物变得非常粘稠并含有57.7％的固相物(表明100％转化)。
将一份粘稠物置于陪替氏培养皿上并在热板上干燥除去溶剂。在80℃烘箱中彻底干燥，得到透明的微黄色的聚合物。该共聚物能彻底地溶于温水(约50℃)中并且一旦溶解后即使在冷溶液中也能保持这种状态。
为了确保所得固体是聚合的，进行了一个简单的透析试验：将10克含有0.65％固体的水溶液置于透析管中。用水连续灌洗大约66小时。然后，回收该透析管中溶液并测定出该固相内容物为0.68％。由于全部保留了该固体而能透过该透析管的固体的低限为2000mwt(分子量)，所以可以认定该固体是聚合的。
实施例3
将2.8克丙烯醛缩乙二醇置于100ml的圆底烧瓶中并用氮气排气。在搅拌且通氮气下加入0.216克的过硫酸钾的7.5克水溶液。将该烧瓶置于60-70℃的油浴中并搅拌大约20小时。回收黄色固体并在50℃下干燥；重量0.915克。
实施例4
将4克馏出的丙烯酸，4.81克丙烯醛缩乙二醇以及15克甲醇置于50ml的圆底烧瓶中并通氮气排气。然后，加入0.3克过氧化苯甲酰并在60-65℃下通氮气连续搅拌70小时(固相测定表明有50％转化)。13CNMR(300MHz)δ(相对于49.00处的d4-甲醇)：15.58(CH3)；18.31(CH3)；35.52(CH2)；36.24(CH2)；37.07(CH2)；42.36(CH)；42.85(CH)；58.32(CH2)；130.00(CH)；131.57(CH2)；178.51(CH)。
实施例5
将3.8克丙烯醛缩乙二醇，3.3克乙烯吡咯烷酮和10克甲醇置于50ml的圆底烧瓶中并用氮气彻底排气。加入0.71克偶氮二异丁腈并在60-65℃的油浴中于通氮气搅拌下加热该烧瓶72小时，此时其转化率为44％。该共聚物可溶于甲醇中。
实施例6
用类似于上述的技术，将3.9克丙烯醛缩乙二醇，1.16克丙烯酸，7.5毫升水和0.216克过硫酸钾在60-70℃油浴中于通氮气下搅拌加热大约24小时，回收白色蜡状物；其不溶于水，但在甲醇，丙酮，四氢呋喃或丁酮中溶胀。
实施例7
用上述常用的方法加热并搅拌下列物质得到类似的结果：14.5克甲醇，3.62克馏出的丙烯醛，1.21克馏出的丙烯酸和0.265克过氧化苯甲酰。40小时后的转化率为40％。
实施例8-11
将50∶50的单体混合物如下处理：将2.35克馏出的丙烯醛，2.88克馏出的丙烯酸和14.5克甲醇置于50ml的圆底烧瓶中并用氮气排气。加入0.2625克过氧化苯甲酰，60-70℃下加热48小时后的转化率为70％。该聚合物在甲醇中溶胀但不溶于水。
用不同比例的丙烯醛：丙烯酸单体进行类似的制备，即30∶70(实施例9)，10∶90(实施例10)，2.5：97.5(实施例11)。
实施例10和11的产物可溶于水并且保留于排阻限2,000mwt的透析管中。
实施例12
用类似于上述的方法从1.8克丙烯醛，3.3克吡咯烷酮和0.71克偶氮二异丁腈中制备出转化率为42％的聚合物，其能在甲醇或者水中溶胀。
实施例13
将30毫克过氧化苯甲酰加入到1.02克聚乙二醇丙烯酸酯和0.5毫升丙烯醛的5毫升甲醇溶液中。搅拌该混合物并加热回流48小时得到90％的转化率；将该残留油(1.2克)在Sephadex LH-20(18克)上于甲醇中进行色谱处理。通过NMR分析确认该所得聚合物的结构。
实施例14
将年轻的成熟雌鼠腹膜下接种2.3×106Ehrlich腹水肿瘤细胞，一周后，选出那些腹部肿大的小鼠进行下一步的实验：用150mg/kg鼠的剂量，将该目标聚合物的0.5％碳酸钠水溶液腹膜下注射处理15只这样的鼠(作为一组)，前三天为每天两次而后三天为每天一次；带有Ehrlich腹水肿瘤细胞的鼠15只为对照组，它们仅用碳酸钠水溶液处理。处死所有两组中的小鼠，收集腹水并计算肿瘤细胞数目： 对照组 处理组 鼠号 腹膜细胞×109 鼠号 腹膜细胞×109 1 2.30 16 0.97 2 3.55 17 0.54 3 2.13 18 0.14 4 0.05 19 0.06 5 2.55 20 0.11 6 2.27 21 0.07 7 2.93 22 0.27 8 1.93 23 0.93 9 2.34 24 0.36 10 5.58 25 1.04 11 2.23 26 0.12 12 1.65 27 0.64 13 4.76 28 0.16 14 2.01 29 0.67 15 3.36 30 0.54 x＝2.64 x＝0.44 s＝1.31 s＝0.35
t检验表明该对照组和处理组间有超过99％的置信度的差异。
实施例15
将该目标聚合物悬浮/溶解于小猪的饮用水中，前2-3天以0.1％w/v的剂量，然后在后7天以0.05％w/v的剂量；不限量饮用；消耗的目标聚合物大约为200mg/kg小猪/天。
研究了三组28天的，刚断奶的小猪(平均体重为5.6kg)：
1.仅用目标聚合物处理；
2.仅用以前的疫苗接种方案；
3.不处理(对照)。
在14天的试验中，保持小猪在饲养场里的常规活动，对那些每日检查有腹泻的小猪注射抗生素。 处理 处理 未处理 仅用目标聚合物 仅接种 时照组内的28天小猪数量 15 19 10腹泻天数(平均值/小猪) 0.47 1.11 1.8注射抗生素数量(平均/小猪) 0.6 2.53 4.6粪便中含大量E.coli的小猪数，7天(平均/小猪) 0.53 0.79 0.9体重增加，14天(平均％/小猪) 33 32 37
实施例16
在一个典型的小规模试验中，将目标聚合物(35克)搅拌溶解于含有碳酸钠(19克)的水(638克)中，然后立即用10％的HCl将该溶液的pH中和至7.2；在持续的搅拌下加入蔗糖(32克；增甜剂；可任意地含有)，然后，加入丙烯酸(64克；(ARBOPOL 934，B.F.Goodrich，USA)的聚合物吸附剂或者丙酰胺-丙烯酸(64克；ALCOSORB AB 3S，Allied Colloids，England)的共聚物吸附剂。所得溶涨的颗粒呈现出该目标聚合物于溶液中的典型的浅黄色。该颗粒/弹丸剂可以湿态下使用，但典型地是在使用前于45℃下部分地或彻底地干燥。然而，更高至大约90-100℃的温度也可以使用。基于所加的固相物，该弹丸剂理论上含有大约25％w/w的目标聚合物。
分别在胃和十二指肠的模拟pHs下进行两个实验以测定该目标聚合物的释放率。首先，将上述完全干燥的颗粒(200mg)在0.1M HCl(100ml)中轻轻搅拌。定期移出一份(10ml)并用过量的0.2M NaHCO3水溶液稀释；检测约265nm的吸收峰显示在0.1M HCl中的最大释放为大约45分钟后的大约35％。其次，作为对比，在0.1M NaHCO3水溶液中的类似试验表明大约20分钟内有35％释放，而在3-5小时后有90％-100％释放。该颗粒的这些特性不受工业所用的为减少饲料中微生物量的加热条件(90℃/30分钟)的影响。
实施例17
在一个试验中，对两组每组有十只购自商品化猪场的新断奶的21天龄的猪给予口服剂量的溶血性E.coli(大肠杆菌)(50ml；109CFU/ml)，这种溶血的大肠肝菌是在断奶后有大肠杆菌病处培养出来的。在同一天，对一组小猪不限量地喂食含有以3.75％w/w的比例洒在饲料上的完全干燥的颗粒/弹丸剂的含19％粗蛋白的饲料。理论上该弹丸剂含有大约25％w/w的该目标聚合物。此外，对“未处理”组仅给予饲料。每只小猪消耗大约500克饲粒/天。用拭子采集最初的肛门粪便，然后在给予E.coli药剂后48小时又重复一次。在此方案三天后(在此期间有两只未处理组小猪死于急性分泌性腹泻)，处死余下的全部猪并半定量测定十二指肠切片上的E.coli(擦干粘膜后，在培养皿中用普通微生物工作者的稀释计数法评分，最高为4，最低为0)。尸检没发现任何一头猪有任何胃部炎症。
在接种当天和48小时后对两组猪的肛门粪便进行溶血性E.coli评分，结果如下表所示： 原始 48小时后 未处理 处理 未处理 处理 1 2 1 0 0 0 3 1 1 1 4 2 1 0 4 0 0 1 3 1 0 2 2 1 0 1 1 1 1 1 4 0 0 0 4 2 0 0 2 2合计 4 8 28 10
接受了该目标聚合物的猪在48小时后，其粪便中溶血性E.coli数量明显低于未处理猪(x2＝16.24；P＝＜0.001)。
此外，处死后的处理组和未处理组小猪空肠上部(25％)和中部的溶血性E.coli分布如下： 25％ 50％ 未处理 处理 未处理 处理 1 1 2 1 0 0 1 0 1 1 4 4 3* 0 4* 0 2 0 3 1 1 1 2 1 1 3 2 3 4 0 4 0 3* 20 4* 0 1 0 2 0合计 17 6 28 9
*死猪
处理组小猪无论在25％位点(x2＝7.38；P＝＜0.01)还是在50％位点(x2＝16.24；P＝＜0.001)的溶血性E.coli均比未处理小猪显著地减少。
除了每组中15头新断奶小猪外，同样地进行另一个实验。在实验组中的E.coli初始接种量减为前述的三分之一，并且该控释弹丸剂理论上含有20％w/w的目的聚合物。观察该小猪在21天内的腹泻天数和增加的体重。结果表明该处理组较之于对照组具有统计学意义上的显著少的腹泻天数和显著多(46％)的体重增加。 活体重增加和腹泻天数 组别 对照组 处理组数量 15 15平均原始体重(Kg.)，第1天 4.77 4.43标准差 0.22 0.19相对(％) 100.00 92.00平均最终体重(Kg.)，第21天 6.63 7.31标准差 0.35 0.36相对(％) 100.00 110.30平均每天体重(g)，0-21天 94.18 137.33标准差 10.27 13.16相对(％)* 100.00 146.00腹泻天数** 32 13*t＝2.47；p＝0.02(双尾)**十天后所有猪均无腹泻
文献
Leman，A.D.，Straw，B.，Glock，R.D.，Mengeline，W.L.，Perny，R.H.C和Scholl，E.(1986).“猪病”，第六版，依阿华州立大学出版社。
Robinson，J.R.和Lee，V.H.L.(1987)，“控制给药”，Marcell Dekker。