利血平的分子印迹聚合物和其制备方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN201110331130.X	申请日：	2011.10.27
公开号：	CN102504142A	公开日：	2012.06.20
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C08F 290/10申请公布日:20120620\|\|\|公开
IPC分类号：	C08F290/10; C08F222/14; C08J9/26; B01J20/26; B01J20/28; B01J20/30	主分类号：	C08F290/10
申请人：	成都市龙泉驿区十陵禽业合作社
发明人：	陈大友
地址：	610000 四川省成都市龙泉驿区十陵镇中街268号
优先权：
专利代理机构：	四川省成都市天策商标专利事务所 51213	代理人：	刘兴亮
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内容摘要

一种利血平分子印迹聚合物及其制备方法，包括以下步骤：将功能单体烯丙基-β-环糊精和模板分子利血平溶解于二甲亚砜中，室温混合6-24小时，然后加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯和引发剂，超声脱气，通氮气除氧，密封后热引发聚合，清洗除去模板分子。利用β-环糊精本身的分子识别能力与分子印迹技术的分子识别能力，制备了利血平分子印迹聚合物，通过优化各种原料比例得到了较好的识别效果。由于β-环糊精的修饰对其分子识别效果影响很大，因此选择对其结构变化相对较小的烯丙基引入可聚合单元，充分利用了β-环糊精和分子印迹技术的双重识别能力，提高了识别效果。

权利要求书

1：一种利血平分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将功能单体烯丙基 -β- 环糊精和模板分子利血平溶解于二甲亚砜中，室温混合 6-24 小时，然后加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯和引发剂，超声脱气，通氮气除氧，密封后热引发聚合，清洗除去模板分子。
2：如权利要求 1 所述的方法，其特征在于：功能单体与模板分子的比例为： 1g ∶ 0.1-2.0mmol，优选 1g ∶ 0.2-1.0mmol，更优选 1g ∶ 0.6-1.0mmol，最优选 1g ∶ 0.6mmol。
3：如权利要求 1 或 2 所述的方法，其特征在于：模板分子与交联剂的摩尔比为∶ 1 ∶ 5-50，优选 1 ∶ 20-40，更优选 1 ∶ 25-40，最优选 1 ∶ 33。
4：如权利要求 3 所述的方法，其特征在于：功能单体、模板分子、交联剂的比例为： 1g ∶ 0.6mmol ∶ 20mmol。
5：如权利要求 4 所述的方法，其特征在于：超声脱气时间至少 5 分钟。
6：如权利要求 5 所述的方法，其特征在于：氧气除氧时间至少 5 分钟。
7：如权利要求 6 所述的方法，其特征在于：采用甲醇和乙酸的混合溶液清洗除去模板分子。
8：如权利要求 7 所述的方法，其特征在于：甲醇和乙酸的体积比为 1 ∶ 9。
9：一种利血平分子印迹聚合物，其采用权利要求 1-8 任一项的方法制备。

说明书

利血平的分子印迹聚合物和其制备方法
    【技术领域】
     本发明属于饲料添加剂检测领域，特别属于利用分子印迹技术检测饲料中的利血平。背景技术利血平 (Reserpine) 属吲哚类生物碱。在饲料中利血平主要作为镇静类药物添加剂，残留在动物性食品中的利血平，人食用后会产生不良后果，易引起嗜睡、食欲减退等反应，小孩食用后会影响大脑发育，并有致畸作用。因此，农业部、卫生部和国家药品监督管理局第 176 号公告，禁止在饲料和动物饮用水中使用利血平作为饲料添加剂。因此需要对饲料中利血平进行检测。
     分子印迹技术是一种制备具有分子识别能力聚合物的技术。制备分子印迹聚合物一般需要三个过程： (1) 印迹分子 ( 被识别物质 ) 和功能单体相互作用，形成复合物； (2) 通过交联剂，在印迹分子与功能单体复合物周围进行聚合反应，形成具有大孔、网状的聚合物； (3) 选取适当的方法除去印迹分子就可以得到分子印迹聚合物。这样制备得到的分子印迹聚合物中存在着和印迹分子在空间结构完全匹配，并含有与印迹分子互补功能基团的三维孔穴。
     分子印迹聚合物以其优良的性能广泛应用于生物、医学、化学等领域。用茶碱印迹的聚合物测定病人血清中的茶碱含量，所得结果同酶联免疫分析 (EMIT) 的测定结果一致。分子印迹传感器甚至可检测 1 ～ 50μmol 的印迹分子，可见具有高度的选择性和灵敏性。理论上分子印迹技术可对任何物质进行印迹，因此采用分子印迹技术检测饲料中的利血平具有很大的潜质。
     发明内容本发明的目的在于制备一种用于检测利血平的分子印迹聚合物，能够达到良好的利血平检测效果。
     本发明提供的利血平分子印迹聚合物的制备方法，包括以下步骤：
     将功能单体烯丙基 -β- 环糊精和模板分子利血平溶解于二甲亚砜中，室温混合 6-24 小时，然后加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯和引发剂，超声脱气，通氮气除氧，密封后热引发聚合，清洗除去模板分子。
     其中功能单体与模板分子的比例为： 1g ∶ 0.1-2.0mmol，优选 1g ∶ 0.2-1.0mmol，更优选 1g ∶ 0.6-1.0mmol，最优选 1g ∶ 0.6mmol。
     其中模板分子与交联剂的摩尔比为： 1 ∶ 5-50，优选 1 ∶ 20-40，更优选 1 ∶ 25-40，最优选 1 ∶ 33。
     其中功能单体、模板分子、交联剂的比例为： 1g ∶ 0.6mmol ∶ 20mmol。
     其中超声脱气时间至少 5 分钟。
     其中氧气除氧时间至少 5 分钟。
     采用甲醇和乙酸的混合溶液清洗除去模板分子。
     其中甲醇和乙酸的体积比为 1 ∶ 9。
     本发明提供一种利血平分子印迹聚合物，其采用上述方法制备得到。
     本发明达到的效果：
     利用 β- 环糊精本身的分子识别能力与分子印迹技术的分子识别能力，制备了利血平分子印迹聚合物，通过优化各种原料比例得到了较好的识别效果。由于 β- 环糊精的修饰对其分子识别效果影响很大，因此选择对其结构变化相对较小的烯丙基引入可聚合单元，充分利用了 β- 环糊精和分子印迹技术的双重识别能力，提高了识别效果。具体实施方式
     实施例 1
     准确称取功能单体烯丙基 -β- 环糊精 ( 采用文献 “化学试剂， 2002， 24(3)， 131 ～ 132 ； 138” 的方法合成 )1g 和模板分子利血平 0.2mmol 溶解于 50ml 二甲亚砜 (DMSO) 中，室温下混合 12h，使功能单体与模板分子充分作用，然后加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯 (EGDMA)5mmol 和 20mg 引发剂偶氮二异丁腈 (AIBN)，超声脱气 10 分钟，通入氮气 10 分钟，真空下密封， 60℃空气浴中聚合 48h 得到分子印迹聚合物。
     将分子印迹聚合物粉碎后研磨筛分，取 400 目和 500 目之间的颗粒 ( 粒度 30.8 ～ 38.5μm)，用丙酮多次悬浮沉降除去细粉。将 1.5g 聚合物分散于乙醇匀浆液中，在 28MPa 的压力下，用乙醇作顶替液，采用湿法装入尺寸为： 250mm×Φ4mm 的色谱柱中。
     将填充好的色谱柱用甲醇∶乙酸＝ 1 ∶ 9(V ∶ V) 的溶液洗脱，用 HPLC 进行分析， UV 检测器波长 268nm，至基线走平，认为印迹分子进本洗脱完全。实验中，用乙腈测定死时间，保留因子 k ＝ (t-t0)/t0， t 为分析物的保留时间， t0 为死时间。选择性因子 α ＝ k1/k2， k1 为利血平的保留因子， k2 为利血平类似物的保留因子。色谱条件：乙腈为流动相，柱温 27℃，流速 0.3ml/min，以育亨宾 (Yohimbine) 为利血平类似物进行测试。
     实施例 2-9
     实施例 2-9 与实施例 1 的制备方法类似，只是制备时采用的模版分子与交联剂的含量不同，具体结果见表 1。
     实施例 10
     实施例 10 与实施例 1 的制备方法类似，只是制备时采用的功能单体为甲基丙烯酸，并且其模板分子∶功能单体∶交联剂的摩尔比为： 1 ∶ 4 ∶ 25。其选择性因子 α 为 1.17。
     表 1 分离效果
     实施例 1 2 功能单体 (g) 1 1 模板分子 (mmol) 0.2 0.4 交联剂 (mmol) 5 10 选择性因子 α 1.45 1.894CN 102504142 A 3 4 5 6 7 8 9 1 1 1 1 1 1 1 0.6 0.8 1.0 0.6 0.6 0.6 0.6说明书15 20 25 5 10 20 25 3.45 2.11 2.13 2.09 2.45 3.89 3.153/3 页5

资源描述

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1、(10)申请公布号 CN 102504142 A (43)申请公布日 2012.06.20 C N 1 0 2 5 0 4 1 4 2 A *CN102504142A* (21)申请号 201110331130.X (22)申请日 2011.10.27 C08F 290/10(2006.01) C08F 222/14(2006.01) C08J 9/26(2006.01) B01J 20/26(2006.01) B01J 20/28(2006.01) B01J 20/30(2006.01) (71)申请人成都市龙泉驿区十陵禽业合作社地址 610000 四川省成都市龙泉驿区十陵镇中街268号。

2、 (72)发明人陈大友 (74)专利代理机构四川省成都市天策商标专利事务所 51213 代理人刘兴亮 (54) 发明名称利血平的分子印迹聚合物和其制备方法 (57) 摘要一种利血平分子印迹聚合物及其制备方法，包括以下步骤：将功能单体烯丙基-环糊精和模板分子利血平溶解于二甲亚砜中，室温混合 6-24小时，然后加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯和引发剂，超声脱气，通氮气除氧，密封后热引发聚合，清洗除去模板分子。利用-环糊精本身的分子识别能力与分子印迹技术的分子识别能力，制备了利血平分子印迹聚合物，通过优化各种原料比例得到了较好的识别效果。由于-环糊精的修饰对其分子识别效果影响很大。

3、，因此选择对其结构变化相对较小的烯丙基引入可聚合单元，充分利用了-环糊精和分子印迹技术的双重识别能力，提高了识别效果。 (51)Int.Cl. 权利要求书1页说明书3页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书 1 页说明书 3 页 1/1页 2 1.一种利血平分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将功能单体烯丙基-环糊精和模板分子利血平溶解于二甲亚砜中，室温混合6-24 小时，然后加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯和引发剂，超声脱气，通氮气除氧，密封后热引发聚合，清洗除去模板分子。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：功能单体与模板分。

4、子的比例为： 1g0.1-2.0mmol，优选1g0.2-1.0mmol，更优选1g0.6-1.0mmol，最优选 1g0.6mmol。 3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：模板分子与交联剂的摩尔比为15-50，优选120-40，更优选125-40，最优选133。 4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：功能单体、模板分子、交联剂的比例为： 1g0.6mmol20mmol。 5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：超声脱气时间至少5分钟。 6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：氧气除氧时间至少5分钟。 7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：采用甲醇和乙酸的混合溶液清洗除去模板分。

5、子。 8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：甲醇和乙酸的体积比为19。 9.一种利血平分子印迹聚合物，其采用权利要求1-8任一项的方法制备。权利要求书CN 102504142 A 1/3页 3 利血平的分子印迹聚合物和其制备方法技术领域 0001 本发明属于饲料添加剂检测领域，特别属于利用分子印迹技术检测饲料中的利血平。背景技术 0002 利血平(Reserpine)属吲哚类生物碱。在饲料中利血平主要作为镇静类药物添加剂，残留在动物性食品中的利血平，人食用后会产生不良后果，易引起嗜睡、食欲减退等反应，小孩食用后会影响大脑发育，并有致畸作用。因此，农业部、卫生部和国家药品监。

6、督管理局第176号公告，禁止在饲料和动物饮用水中使用利血平作为饲料添加剂。因此需要对饲料中利血平进行检测。 0003 分子印迹技术是一种制备具有分子识别能力聚合物的技术。制备分子印迹聚合物一般需要三个过程：(1)印迹分子(被识别物质)和功能单体相互作用，形成复合物；(2) 通过交联剂，在印迹分子与功能单体复合物周围进行聚合反应，形成具有大孔、网状的聚合物；(3)选取适当的方法除去印迹分子就可以得到分子印迹聚合物。这样制备得到的分子印迹聚合物中存在着和印迹分子在空间结构完全匹配，并含有与印迹分子互补功能基团的三维孔穴。 0004 分子印迹聚合物以其优良的性能广泛应用于生物、医学、化学。

7、等领域。用茶碱印迹的聚合物测定病人血清中的茶碱含量，所得结果同酶联免疫分析(EMIT)的测定结果一致。分子印迹传感器甚至可检测150mol的印迹分子，可见具有高度的选择性和灵敏性。理论上分子印迹技术可对任何物质进行印迹，因此采用分子印迹技术检测饲料中的利血平具有很大的潜质。发明内容 0005 本发明的目的在于制备一种用于检测利血平的分子印迹聚合物，能够达到良好的利血平检测效果。 0006 本发明提供的利血平分子印迹聚合物的制备方法，包括以下步骤： 0007 将功能单体烯丙基-环糊精和模板分子利血平溶解于二甲亚砜中，室温混合 6-24小时，然后加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯和引发剂，。

8、超声脱气，通氮气除氧，密封后热引发聚合，清洗除去模板分子。 0008 其中功能单体与模板分子的比例为：1g0.1-2.0mmol，优选1g0.2-1.0mmol，更优选1g0.6-1.0mmol，最优选1g0.6mmol。 0009 其中模板分子与交联剂的摩尔比为：15-50，优选120-40，更优选125-40，最优选133。 0010 其中功能单体、模板分子、交联剂的比例为：1g0.6mmol20mmol。 0011 其中超声脱气时间至少5分钟。 0012 其中氧气除氧时间至少5分钟。说明书CN 102504142 A 2/3页 4 0013 采用甲醇和乙酸的混合溶液清洗除去模。

9、板分子。 0014 其中甲醇和乙酸的体积比为19。 0015 本发明提供一种利血平分子印迹聚合物，其采用上述方法制备得到。 0016 本发明达到的效果： 0017 利用-环糊精本身的分子识别能力与分子印迹技术的分子识别能力，制备了利血平分子印迹聚合物，通过优化各种原料比例得到了较好的识别效果。由于-环糊精的修饰对其分子识别效果影响很大，因此选择对其结构变化相对较小的烯丙基引入可聚合单元，充分利用了-环糊精和分子印迹技术的双重识别能力，提高了识别效果。具体实施方式 0018 实施例1 0019 准确称取功能单体烯丙基-环糊精(采用文献“化学试剂，2002，24(3)，131 132；13。

10、8”的方法合成)1g和模板分子利血平0.2mmol溶解于50ml二甲亚砜(DMSO)中，室温下混合12h，使功能单体与模板分子充分作用，然后加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯 (EGDMA)5mmol和20mg引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)，超声脱气10分钟，通入氮气10分钟，真空下密封，60空气浴中聚合48h得到分子印迹聚合物。 0020 将分子印迹聚合物粉碎后研磨筛分，取400目和500目之间的颗粒(粒度30.8 38.5m)，用丙酮多次悬浮沉降除去细粉。将1.5g聚合物分散于乙醇匀浆液中，在28MPa 的压力下，用乙醇作顶替液，采用湿法装入尺寸为：250mm4mm的色谱柱中。 0021 。

11、将填充好的色谱柱用甲醇乙酸19(VV)的溶液洗脱，用HPLC进行分析， UV检测器波长268nm，至基线走平，认为印迹分子进本洗脱完全。 0022 实验中，用乙腈测定死时间，保留因子k(t-t0)/t0，t为分析物的保留时间，t0 为死时间。选择性因子k1/k2，k1为利血平的保留因子，k2为利血平类似物的保留因子。色谱条件：乙腈为流动相，柱温27，流速0.3ml/min，以育亨宾(Yohimbine)为利血平类似物进行测试。 0023 实施例2-9 0024 实施例2-9与实施例1的制备方法类似，只是制备时采用的模版分子与交联剂的含量不同，具体结果见表1。 0025 实施例10 002。

12、6 实施例10与实施例1的制备方法类似，只是制备时采用的功能单体为甲基丙烯酸，并且其模板分子功能单体交联剂的摩尔比为：1425。其选择性因子为 1.17。 0027 表1分离效果 0028 实施例功能单体(g) 模板分子(mmol) 交联剂(mmol) 选择性因子 1 1 0.2 5 1.45 2 1 0.4 10 1.89 说明书CN 102504142 A 3/3页 5 3 1 0.6 15 3.45 4 1 0.8 20 2.11 5 1 1.0 25 2.13 6 1 0.6 5 2.09 7 1 0.6 10 2.45 8 1 0.6 20 3.89 9 1 0.6 25 3.15 说明书CN 102504142 A 。

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