5,6,7,4’四羟基黄酮及其衍生物在制备防治高尿酸血症和痛风药物中的应用.pdf

摘要
申请专利号：	CN201010234771.9	申请日：	2010.07.19
公开号：	CN102335164A	公开日：	2012.02.01
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	专利权人的姓名或者名称、地址的变更IPC(主分类):A61K 31/352变更事项:专利权人变更前:昆明制药集团股份有限公司变更后:昆药集团股份有限公司变更事项:地址变更前:650100 云南省昆明市高新技术产业开发区科医路166号变更后:650100 云南省昆明市高新技术产业开发区科医路166号\|\|\|授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):A61K 31/352申请日:20100719\|\|\|公开
IPC分类号：	A61K31/352; A61K31/7048; A61P19/06; A61K9/48; A61K9/66; A61K9/22	主分类号：	A61K31/352
申请人：	昆明制药集团股份有限公司
发明人：	张伟; 普俊学; 刘一丹; 刘国光; 杨兆祥; 杨旭娟
地址：	650100 云南省昆明市高新技术产业开发区科医路166号
优先权：
专利代理机构：	北京集佳知识产权代理有限公司 11227	代理人：	冯琼;李玉秋
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内容摘要

本发明涉及医药领域，具体公开了5，6，7，4’-四羟基黄酮及其衍生物在制备防治高尿酸血症和痛风药物中的用途。本发明还提供一种防治高尿酸血症和痛风的胶囊和缓释片。本发明发现5，6，7，4’-四羟基黄酮及其衍生物具有很强的抗痛风作用，小剂量即可以明显降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，活性与别嘌呤醇相当，毒副作用小，安全性高于目前临床上使用的抗痛风药物秋水仙碱、别嘌呤醇和苯磺唑酮，可以用于制备防治高尿酸血症和痛风的药物，具有广泛的临床应用前景。

权利要求书

1：如式Ⅰ所示化合物在制备防治高尿酸血症和痛风的药物中的用途，式Ⅰ中， R1 为 -H、 -CH3、 -COCH3 或葡萄糖醛酸； R2 为 -H、 -CH3 或 -COCH3。
2：一种防治高尿酸血症和痛风的药物制剂，其特征在于，由式Ⅰ所示化合物和药学上可接受的辅料组成，式Ⅰ中， R1 为 -H、 -CH3、 -COCH3 或葡萄糖醛酸； R2 为 -H、 -CH3 或 -COCH3。
3：一种防治高尿酸血症和痛风的胶囊，其特征在于，包含式Ⅰ所示化合物，式Ⅰ中， R1 为 -H、 -CH3、 -COCH3 或葡萄糖醛酸； R2 为 -H、 -CH3 或 -COCH3 ；其内容物组成为：式Ⅰ所示化合物 20 ～ 100 重量份和分散剂 100 ～ 1000 重量份。
4：根据权利要求 3 所述的胶囊，其特征在于，所述分散剂为大豆油、玉米油、花生油、亚麻油、鱼油、月见草油、 α- 亚麻酸、 γ- 亚麻酸、二十二碳六烯酸与二十碳五烯酸中的任意一种。
5：根据权利要求 3 或 4 所述的胶囊，其特征在于，其囊壳组成为：明胶 60 重量份甘油 20 重量份对羟基苯甲酸乙酯 0.01 ～ 0.3 重量份。
6：一种防治高尿酸血症和痛风的缓释片，其特征在于，包含式Ⅰ所示化合物，式Ⅰ中， -CH3、 -COCH3 或葡萄糖醛酸； R2 为 -H、 -CH3 或 -COCH3 ； R1 为 -H、 2 其组成为：式Ⅰ所示化合物 20 ～ 100 重量份骨架剂 100 ～ 1000 重量份填充剂 302000 重量份硬脂酸镁 1 ～ 5 重量份
7：根据权利要求 6 所述的缓释片，其特征在于，所述骨架剂为羟丙基甲基纤维素、硬脂酸、乙基纤维素、蜂蜡中的任意一种或两种以上的混合物。
8：根据权利要求 6 所述的缓释片，其特征在于，所述填充剂为乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维素、微粉硅胶中的任意一种或两种以上的混合物。

说明书

5， 6， 7， 4′ - 四羟基黄酮及其衍生物在制备防治高尿酸血症和痛风药物中的应用
    【技术领域】
     本发明涉及医药领域，具体涉及 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物在制备药物中的用途。背景技术痛风 (gout) 是一种由于嘌呤代谢紊乱产生过多尿酸及 ( 或 ) 尿酸排泄减少，并在体内蓄积沉淀所致的一组代谢性疾病。尿酸是人类嘌呤代谢的产物，高尿酸血症是痛风的主要生化基础。目前治疗痛风和高尿酸血症的药物非常有限，主要是别嘌呤醇、苯溴马隆和秋水仙碱等，这些药物副作用大，病人常常不能耐受，在一定程度上限制了其使用。因此，寻找新型的高效低毒的抗痛风和高尿酸血症药物依然是目前药学研究的一个热点。
     黄嘌呤氧化酶是尿酸生成的关键酶，体内黄嘌呤氧化酶活性异常增高是形成高尿酸血症的主要机制之一。因而，近年国内外学者以黄嘌呤氧化酶为作用靶点进行了广泛的研究，发现了许多活性的化合物，根据其结构大致有嘌呤类似物 ( 如 8-azaadenine、
     8-phenylhypoxanthine 等 )、非嘌呤类似物 ( 如噻唑羧酸衍生物 TEI-6720、芳基吡唑衍生物 Y-700 等 ) 和其他类 ( 如黄酮类、蒽醌类等 )。其中黄酮类化合物作为一类天然产物备受关注，发现槲皮素、桑黄素、杨梅黄酮、山奈酚、黄芩素、葛根素、木犀草素、大豆黄酮苷等均具有黄嘌呤氧化酶抑制活性，且槲皮素、桑黄素、杨梅黄酮、山奈酚、葛根素 50、 100mg/kg 灌胃给药明显降低氧嗪酸钾所致高尿酸血症小鼠的血尿酸水平，然而，与黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌呤醇相比，体内降低高尿酸血症的活性较低。发明内容本发明的发明目的是提供 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物用于制备防治高尿酸血症和痛风药物的用途， 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物可明显降低血尿酸水平，活性高，毒副作用低。
     本发明所述 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物，结构如式Ⅰ所示，
     式Ⅰ中， R1 为 -H、 -CH3、 -COCH3 或葡萄糖醛酸； R2 为 -H、 -CH3 或 -COCH3。所述葡萄糖醛酸结构式如下：当 R1 为葡萄糖醛酸， R2 为 H，对应化合物为灯盏花乙素；
     当 R1 与 R2 均为 H，对应化合物为 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮；
     当 R1 与 R2 均为 -CH3，对应化合物为 5， 6， 7， 4’ - 四甲氧基黄酮；
     当 R1 与 R2 均为 -COCH3，对应化合物为 4’ ， 5， 6， 7- 四乙酰氧基黄酮；
     当 R1 为 H， R2 为 -COCH3，对应化合物为 7- 羟基 -4’ ， 5， 6- 三乙酰氧基黄酮；
     当 R1 为葡萄糖醛酸， R2 为 -CH3，对应化合物为 4’ ， 5， 6- 三甲氧基灯盏花乙素。
     为了简化，在本发明的说明书中，式Ⅰ所示化合物，其中 R1 为 -H、 -CH3、 -COCH3 或葡萄糖醛酸， R2 为 -H、 -CH3 或 -COCH3，也称为 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物，或简称式Ⅰ 所示化合物，三者含义相同。
     本发明还提供一种防治高尿酸血症和痛风的药物制剂，由式Ⅰ所示化合物和药学上可接受的辅料组成。
     本发明还提供一种防治高尿酸血症和痛风的胶囊剂，其内容物组成为：
     式Ⅰ所示化合物 20 ～ 100 重量份
     分散剂 100 ～ 1000 重量份。
     作为优选，所述分散剂为大豆油、玉米油、花生油、亚麻油、鱼油、月见草油、 α- 亚麻酸、 γ- 亚麻酸、二十二碳六烯酸 (DHA) 与二十碳五烯酸 (EPA) 中的任意一种。
     更优选地，所述胶囊的囊壳组成为：
     明胶 60 重量份
     甘油 20 重量份
     对羟基苯甲酸乙酯 0.01 ～ 0.3 重量份。
     本发明还提供一种防治高尿酸血症和痛风的缓释片，其组成为：
     式Ⅰ所示化合物 20 ～ 100 重量份
     骨架剂 100 ～ 1000 重量份
     填充剂 30 ～ 2000 重量份
     硬脂酸镁 1 ～ 5 重量份。
     作为优选，所述骨架剂为羟丙基甲基纤维素、硬脂酸、乙基纤维素、蜂蜡中的任意一种或两种以上的混合物。
     作为优选，所述填充剂为乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维素、微粉硅胶中的任意一种或两种以上的混合物。
     经过大量试验发明人发现， 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物不但具有已经报道的广泛的药理作用，如清除自由基、抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、消炎抗菌等，还具有增加脑、冠状血管血流量，降低血管阻力，抗血小板聚集、红细胞凝聚，降低血液粘稠度等作用药理作用以及降低高尿酸动物血清尿酸水平的作用。
     对氧嗪酸钾诱导高尿酸血症小鼠进行动物试验发现， 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物具有很强的抗痛风作用， 5mg/kg(17.5μmol/kg) 剂量即可以明显降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的作用，使动物模型小鼠的高血尿酸水平恢复到正常水平，其活性与目前
     防治高尿酸血症药物别嘌呤醇相当。
     进一步研究发现， 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物具有一定的黄嘌呤氧化酶抑制活性，提示 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物可能是通过抑制黄嘌呤氧化酶活力的作用来降低高尿酸动物血清尿酸水平。
     安全性试验表明， 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物毒副作用低，小鼠灌胃给药的最大耐受量为 10g/kg(35mmol/kg)，显示出高效、低毒的特点，作为抗痛风药物，显示出重大的开发应用前景。具体实施方式
     本发明公开了 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物用于制备防治高尿酸血症和痛风药物的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。下面结合实施例，进一步阐述本发明：
     实施例 1 ： 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物对高尿酸血症小鼠的影响
     健康雄性昆明种小鼠，体重 18-22g，由昆明医学院实验动物中心提供 ( 实验动物生产许可证号： SCXK( 滇 )2005-0008)。饲养条件：室温为 22±2℃，相对湿度 45 ～ 55％。
     式Ⅰ中， R1 为 -H、 -CH3、 -COCH3 或葡萄糖醛酸； R2 为 -H、 -CH3 或 -COCH3。
     其中，当 R1 ＝葡萄糖醛酸 Gluconic acid， R2 ＝ H，对应化合物为灯盏花乙素，编号为 DZHS-001 ；
     当 R1 ＝ R2 ＝ H，对应化合物为 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮，编号为 DZHS-002 ；
     当 R1 ＝ R2 ＝ -CH3，对应化合物为 5， 6， 7， 4’ - 四甲氧基黄酮，编号为 DZHS-004 ；
     当 R1 ＝ R2 ＝ -COCH3，对应化合物为 4’ ， 5， 6， 7- 四乙酰氧基黄酮，编号为 DZHS-006 ；
     当 R1 ＝ H， R2 ＝ -COCH3，对应化合物为 7- 羟基 -4’ ， 5， 6- 三乙酰氧基黄酮，编号为 DZHS-007 ；
     当 R1 ＝葡萄糖醛酸 Gluconic acid， R2 ＝ -CH3，对应化合物为 4’ ， 5， 6- 三甲氧基灯盏花乙素，编号为 DZHS-008。
     80 只昆明种小鼠随机分为正常对照组、高尿酸血症模型组、 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮 (DZHS-002)、灯盏花乙素 (DZHS-001)、 4’ ， 5， 6， 7- 四甲氧基黄酮 (DZHS-004)、 4’ ， 5， 6， 7- 四乙酰氧基黄酮 (DZHS-006)、 7- 羟基 -4’ ， 5， 6- 三乙酰氧基黄酮 (DZHS-007)、 4’ ， 5， 6- 三
     甲氧基灯盏花乙素 (DZHS-008) 组，每组 10 只。
     受试化合物用 0.5％羧甲基纤维素钠 (0.5％ CMC-Na) 配制成混悬液，按 5mg/kg 灌胃给药，每天 2 次，共 5 天。
     选用尿酸酶抑制剂氧嗪酸为化学诱导剂，抑制尿酸酶活性，造成高尿酸血症。动物在取血样前 2h 用氧嗪酸钾盐 (Sigma 公司产品 ) 按 400mg/kg 剂量腹腔注射小鼠，正常对照组则注射等体积 0.5％ CMC-Na 溶液， 1h 后灌胃给予末次剂量的受试化合物， 2h 后拔眼采血， 3000rpm 离心 5min，取血清，采用酶比色法 ( 中生北控生物科技股份有限公司试剂盒 ) 测定血清尿酸水平。
     结果表明，腹腔注射氧嗪酸钾后动物血清尿酸水平显著升高，与正常对照组相比，有显著性差异，提示模型成功。
     表 1 受试化合物灌胃给药对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响
     ** 注： x±s， n ＝ 10.*P ＜ 0.05， P ＜ 0.01，与高尿酸血症模型对照组相比 (t-test检验 )。从表 1 看出，给予受试化合物 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物 DZHS-001、 DZHS-002、 DZHS-004、 DZHS-006、 DZHS-007 和 DZHS-008 后，血清尿酸水平明显低于模型对照组，差异有统计学意义；各受试化合物之间相比无显著性差异。
     实施例 2 ： 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物降低高尿酸血症的量效关系研究
     为了评价 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物降低高尿酸血症的量效关系，本实验选取 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮 (DZHS-002) 和灯盏花乙素 (DZHS-001) 进行量效关系研究，具体方法如下：
     健康雄性昆明种小鼠 110 只，体重 18-22g，由昆明医学院实验动物中心提供 ( 实验动物生产许可证号： SCXK( 滇 )2005-2008)。动物随机分为正常对照组、高尿酸血症模型组、 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮 2.5、 5、 10 剂量组、灯盏花乙素 2.5、 5、 10 剂量组和别嘌呤醇 2.38mg/kg 3.13mg/kg 阳性对照组，每组 10 只。受试化合物用 0.5％羧甲基纤维素钠 (0.5％ CMC-Na) 配制成混悬液，灌胃给药，每天 2 次，共 5 天。
     高尿酸血症造型方法同前，即小鼠在取血样前 2h 腹腔注射 400mg/kg 氧嗪酸钾盐造成高尿酸血症，正常对照组则注射等体积 0.5％ CMC-Na 溶液， 1h 后灌胃给予末次剂量的
     受试化合物， 2h 后拔眼采血， 3000rpm 离心 5min，取血清，采用酶比色法 ( 中生北控生物科技股份有限公司试剂盒 ) 测定血清尿酸水平。
     结果表明，腹腔注射氧嗪酸钾后动物血清尿酸水平显著升高，与正常对照组相比，有显著性差异，提示模型成功。给予 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮、灯盏花乙素后，血清尿酸水平明显低于模型对照组，且呈现剂量依赖性，与模型对照组相比差异有统计学意义；此外， 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮 5mg/kg 剂量组与等摩尔剂量的别嘌醇组相比，差异无统计学意义，提示 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮能降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，效价与等摩尔剂量的别嘌醇相当，见表 2。
     表2： 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物灌胃给药对氧嗪酸钾诱导高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响
     ** 注： x±s， n ＝ 10.*P ＜ 0.05， P ＜ 0.01，与高尿酸血症模型对照组相比 (t-test检验 )。实施例 3 ： 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物体外对黄嘌呤氧化酶的影响
     为了评价 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物对黄嘌呤氧化酶的影响，本实验选取 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮 (DZHS-002) 和灯盏花乙素 (DZHS-001) 研究体外对黄嘌呤氧化酶的影响，具体方法如下：
     黄嘌呤氧化酶 (EC 1.1.3.22) 为 Sigma 公司产品，用 PBS 配制成适宜浓度备用。 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物用 PBS 配制成系列浓度备用， DMSO 助溶。黄嘌呤氧化酶测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。
     系列浓度的 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物溶液与黄嘌呤氧化酶在 37℃孵育 30min 后，用黄嘌呤氧化酶测定试剂盒测定黄嘌呤氧化酶的活性，结果见表 3。
     表 3、 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物对黄嘌呤氧化酶的影响 (x±s， n ＝ 4)
     8102335164 A CN 102335172 组别 DZHS-002说明书抑制率 (％ ) 36.3±6.7 48.4±8.2 66.1±9.5 65.7±8.8 85.3±10.6 95.4±12.1 22.8±5.3 39.3±6.8 52.8±8.9 60.7±9.5 76.4±10.2 84.5±9.86/8 页浓度 (mmol/L) 5.0×10-9 5.0×10-8 5.0×10-7 5.0×10-6 5.0×10-5 5.0×10-4DZHS-0015.0×10-9 5.0×10-8 5.0×10-7 5.0×10-6 5.0×10-5 5.0×10-4
     结果表明， 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮有一定的抑制黄嘌呤氧化酶活力的作用。
     实施例 4 ： 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物的初步毒性和安全性研究
     选择健康的 ICR 小鼠 20 只，雄雌各半，体重 18-22g，给药前动物禁食约 12 小时， 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮用 0.5％羧甲基纤维素钠配制成混悬液，按最大浓度、最大体积一次灌胃给药 40ml/kg，最终给药剂量为 10g/kg，给药后连续观察 14 天记录动物中毒和死亡情况。
     灌胃给药后，动物未出现明显的异常反应， 14 天连续观察，未见动物出现任何中毒反应，活动自如，进食饮水和大小便均正常，体重正常增长，一般情况良好。20 只动物无一死亡，处死动物后尸检，各脏器未见肉眼可见的病理改变，测得 DZHS-002 小鼠灌胃给药的最大耐受量大于 10g/kg(35.0mmol/kg)， DZHS-002 毒性远远小于别嘌呤醇 ( 小鼠灌胃给药 LD50 ＝ 700mg/kg，相当于 5.14mmol/kg)。
     实施例 5 ： 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮软胶囊的制备
     处方 (1000 粒 ) ：
     内容物：
     5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮 30g
     大豆油 100g
     囊壳：
     明胶 60g
     甘油 20g
     水适量
     对羟基苯甲酸乙酯 ( 尼泊金乙酯 ) 0.12g
     制法：取 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物，加至大豆油中，搅拌使其完全溶解，压制软胶囊，干燥，制成 1000 粒，即得规格为 30mg 的产品。
     实施例 6 ：灯盏花乙素软胶囊的制备
     处方 (1000 粒 ) ：
     内容物：
     灯盏花乙素 200g
     玉米油 200g
     囊壳：
     明胶 60g
     甘油 20g
     水适量
     对羟基苯甲酸乙酯 ( 尼泊金乙酯 ) 0.02g 制法：取 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物，加至玉米油中，搅拌使其完全溶解，压制软胶囊，干燥，制成 1000 粒，即得规格为 200mg 的产品。
     实施例 7 ： 5， 6， 7， 4’ - 四甲氧基黄酮软胶囊的制备
     处方 (1000 粒 ) ：
     内容物：
     5， 6， 7， 4’ - 四甲氧基黄酮 50g
     α- 亚麻酸 1000g
     囊壳：
     明胶 60g
     甘油 20g
     水适量
     对羟基苯甲酸乙酯 ( 尼泊金乙酯 ) 0.2g
     制法：取 5， 6， 7， 4’ - 四羟基黄酮及其衍生物，加至花生油中，搅拌使其完全溶解，压制软胶囊，干燥，制成 1000 粒，即得规格为 50mg 的产品。
     实施例 8 ： 4’ ， 5， 6， 7- 四乙酰氧基黄酮缓释片的制备
     处方 (1000 片 ) ：
     4’ ， 5， 6， 7- 四乙酰氧基黄酮 100g
     蜂蜡 1000g
     乳糖 1500g
     预胶化淀粉 400g
     硬脂酸镁 5g
     制法：将物料分别过 100 目筛，按处方量称取物料，混合均匀，搅拌制软材， 18-24 目筛制粒， 70℃下通风干燥，压片，包薄膜衣，即得规格为 150mg 的产品。
     实施例 9 ： 7- 羟基 -4’ ， 5， 6- 三乙酰氧基黄酮缓释片的制备
     处方 (1000 片 ) ：
     4’ ， 5， 6， 7- 四乙酰氧基黄酮 20g
     蜂蜡 100g
     乳糖 30g
     硬脂酸镁 1g
     制法：将物料分别过 100 目筛，按处方量称取物料，混合均匀，搅拌制软材， 18-24 目筛制粒， 70℃下通风干燥，压片，包薄膜衣，即得规格为 200mg 的产品。
     实施例 10 ： 4’ ， 5， 6- 三甲氧基灯盏花乙素缓释片的制备
     处方 (1000 片 ) ：
     4’ ， 5， 6- 三甲氧基灯盏花乙素 20g
     蜂蜡 1000g
     乳糖 1500g
     预胶化淀粉 400g
     硬脂酸镁 5g
     制法：将物料分别过 100 目筛，按处方量称取物料，混合均匀，搅拌制软材， 18-24 目筛制粒， 70℃下通风干燥，压片，包薄膜衣，即得规格为 20mg 的产品。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
     11

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1、10申请公布号CN102335164A43申请公布日20120201CN102335164ACN102335164A21申请号201010234771922申请日20100719A61K31/352200601A61K31/7048200601A61P19/06200601A61K9/48200601A61K9/66200601A61K9/2220060171申请人昆明制药集团股份有限公司地址650100云南省昆明市高新技术产业开发区科医路166号72发明人张伟普俊学刘一丹刘国光杨兆祥杨旭娟74专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人冯琼李玉秋54发明名称5,6,7,4四羟基黄。

2、酮及其衍生物在制备防治高尿酸血症和痛风药物中的应用57摘要本发明涉及医药领域，具体公开了5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物在制备防治高尿酸血症和痛风药物中的用途。本发明还提供一种防治高尿酸血症和痛风的胶囊和缓释片。本发明发现5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物具有很强的抗痛风作用，小剂量即可以明显降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，活性与别嘌呤醇相当，毒副作用小，安全性高于目前临床上使用的抗痛风药物秋水仙碱、别嘌呤醇和苯磺唑酮，可以用于制备防治高尿酸血症和痛风的药物，具有广泛的临床应用前景。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书8页CN102335172A。

3、1/2页21如式所示化合物在制备防治高尿酸血症和痛风的药物中的用途，式中，R1为H、CH3、COCH3或葡萄糖醛酸；R2为H、CH3或COCH3。2一种防治高尿酸血症和痛风的药物制剂，其特征在于，由式所示化合物和药学上可接受的辅料组成，式中，R1为H、CH3、COCH3或葡萄糖醛酸；R2为H、CH3或COCH3。3一种防治高尿酸血症和痛风的胶囊，其特征在于，包含式所示化合物，式中，R1为H、CH3、COCH3或葡萄糖醛酸；R2为H、CH3或COCH3；其内容物组成为式所示化合物20100重量份和分散剂1001000重量份。4根据权利要求3所述的胶囊，其特征在于，所述分散剂为大豆油、玉米油、花生。

4、油、亚麻油、鱼油、月见草油、亚麻酸、亚麻酸、二十二碳六烯酸与二十碳五烯酸中的任意一种。5根据权利要求3或4所述的胶囊，其特征在于，其囊壳组成为明胶60重量份甘油20重量份对羟基苯甲酸乙酯00103重量份。6一种防治高尿酸血症和痛风的缓释片，其特征在于，包含式所示化合物，式中，R1为H、CH3、COCH3或葡萄糖醛酸；R2为H、CH3或COCH3；权利要求书CN102335164ACN102335172A2/2页3其组成为式所示化合物20100重量份骨架剂1001000重量份填充剂302000重量份硬脂酸镁15重量份7根据权利要求6所述的缓释片，其特征在于，所述骨架剂为羟丙基甲基纤维素、硬脂酸、。

5、乙基纤维素、蜂蜡中的任意一种或两种以上的混合物。8根据权利要求6所述的缓释片，其特征在于，所述填充剂为乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维素、微粉硅胶中的任意一种或两种以上的混合物。权利要求书CN102335164ACN102335172A1/8页45，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物在制备防治高尿酸血症和痛风药物中的应用技术领域0001本发明涉及医药领域，具体涉及5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物在制备药物中的用途。背景技术0002痛风GOUT是一种由于嘌呤代谢紊乱产生过多尿酸及或尿酸排泄减少，并在体内蓄积沉淀所致的一组代谢性疾病。尿酸是人类嘌呤代谢的产物，高尿酸血症是痛风的主要生化基础。目前治疗痛风和。

6、高尿酸血症的药物非常有限，主要是别嘌呤醇、苯溴马隆和秋水仙碱等，这些药物副作用大，病人常常不能耐受，在一定程度上限制了其使用。因此，寻找新型的高效低毒的抗痛风和高尿酸血症药物依然是目前药学研究的一个热点。0003黄嘌呤氧化酶是尿酸生成的关键酶，体内黄嘌呤氧化酶活性异常增高是形成高尿酸血症的主要机制之一。因而，近年国内外学者以黄嘌呤氧化酶为作用靶点进行了广泛的研究，发现了许多活性的化合物，根据其结构大致有嘌呤类似物如8AZAADENINE、8PHENYLHYPOXANTHINE等、非嘌呤类似物如噻唑羧酸衍生物TEI6720、芳基吡唑衍生物Y700等和其他类如黄酮类、蒽醌类等。其中黄酮类化合物作为。

7、一类天然产物备受关注，发现槲皮素、桑黄素、杨梅黄酮、山奈酚、黄芩素、葛根素、木犀草素、大豆黄酮苷等均具有黄嘌呤氧化酶抑制活性，且槲皮素、桑黄素、杨梅黄酮、山奈酚、葛根素50、100MG/KG灌胃给药明显降低氧嗪酸钾所致高尿酸血症小鼠的血尿酸水平，然而，与黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌呤醇相比，体内降低高尿酸血症的活性较低。发明内容0004本发明的发明目的是提供5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物用于制备防治高尿酸血症和痛风药物的用途，5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物可明显降低血尿酸水平，活性高，毒副作用低。0005本发明所述5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物，结构如式所示，00060007式中，R1为。

8、H、CH3、COCH3或葡萄糖醛酸；R2为H、CH3或COCH3。所述葡萄糖醛酸结构式如下0008说明书CN102335164ACN102335172A2/8页50009当R1为葡萄糖醛酸，R2为H，对应化合物为灯盏花乙素；0010当R1与R2均为H，对应化合物为5，6，7，4四羟基黄酮；0011当R1与R2均为CH3，对应化合物为5，6，7，4四甲氧基黄酮；0012当R1与R2均为COCH3，对应化合物为4，5，6，7四乙酰氧基黄酮；0013当R1为H，R2为COCH3，对应化合物为7羟基4，5，6三乙酰氧基黄酮；0014当R1为葡萄糖醛酸，R2为CH3，对应化合物为4，5，6三甲氧基灯盏花。

9、乙素。0015为了简化，在本发明的说明书中，式所示化合物，其中R1为H、CH3、COCH3或葡萄糖醛酸，R2为H、CH3或COCH3，也称为5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物，或简称式所示化合物，三者含义相同。0016本发明还提供一种防治高尿酸血症和痛风的药物制剂，由式所示化合物和药学上可接受的辅料组成。0017本发明还提供一种防治高尿酸血症和痛风的胶囊剂，其内容物组成为0018式所示化合物20100重量份0019分散剂1001000重量份。0020作为优选，所述分散剂为大豆油、玉米油、花生油、亚麻油、鱼油、月见草油、亚麻酸、亚麻酸、二十二碳六烯酸DHA与二十碳五烯酸EPA中的任意一种。002。

10、1更优选地，所述胶囊的囊壳组成为0022明胶60重量份0023甘油20重量份0024对羟基苯甲酸乙酯00103重量份。0025本发明还提供一种防治高尿酸血症和痛风的缓释片，其组成为0026式所示化合物20100重量份0027骨架剂1001000重量份0028填充剂302000重量份0029硬脂酸镁15重量份。0030作为优选，所述骨架剂为羟丙基甲基纤维素、硬脂酸、乙基纤维素、蜂蜡中的任意一种或两种以上的混合物。0031作为优选，所述填充剂为乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维素、微粉硅胶中的任意一种或两种以上的混合物。0032经过大量试验发明人发现，5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物不但具有已经报道的广。

11、泛的药理作用，如清除自由基、抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、消炎抗菌等，还具有增加脑、冠状血管血流量，降低血管阻力，抗血小板聚集、红细胞凝聚，降低血液粘稠度等作用药理作用以及降低高尿酸动物血清尿酸水平的作用。0033对氧嗪酸钾诱导高尿酸血症小鼠进行动物试验发现，5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物具有很强的抗痛风作用，5MG/KG175MOL/KG剂量即可以明显降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的作用，使动物模型小鼠的高血尿酸水平恢复到正常水平，其活性与目前说明书CN102335164ACN102335172A3/8页6防治高尿酸血症药物别嘌呤醇相当。0034进一步研究发现，5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生。

12、物具有一定的黄嘌呤氧化酶抑制活性，提示5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物可能是通过抑制黄嘌呤氧化酶活力的作用来降低高尿酸动物血清尿酸水平。0035安全性试验表明，5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物毒副作用低，小鼠灌胃给药的最大耐受量为10G/KG35MMOL/KG，显示出高效、低毒的特点，作为抗痛风药物，显示出重大的开发应用前景。具体实施方式0036本发明公开了5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物用于制备防治高尿酸血症和痛风药物的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产。

13、品及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。0037下面结合实施例，进一步阐述本发明0038实施例15，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物对高尿酸血症小鼠的影响0039健康雄性昆明种小鼠，体重1822G，由昆明医学院实验动物中心提供实验动物生产许可证号SCXK滇20050008。饲养条件室温为222，相对湿度4555。00400041式中，R1为H、CH3、COCH3或葡萄糖醛酸；R2为H、CH3或COCH3。0042其中，当R1葡萄糖醛酸GLUCONICACID，R2H，对应化合物为灯。

14、盏花乙素，编号为DZHS001；0043当R1R2H，对应化合物为5，6，7，4四羟基黄酮，编号为DZHS002；0044当R1R2CH3，对应化合物为5，6，7，4四甲氧基黄酮，编号为DZHS004；0045当R1R2COCH3，对应化合物为4，5，6，7四乙酰氧基黄酮，编号为DZHS006；0046当R1H，R2COCH3，对应化合物为7羟基4，5，6三乙酰氧基黄酮，编号为DZHS007；0047当R1葡萄糖醛酸GLUCONICACID，R2CH3，对应化合物为4，5，6三甲氧基灯盏花乙素，编号为DZHS008。004880只昆明种小鼠随机分为正常对照组、高尿酸血症模型组、5，6，7，4四。

15、羟基黄酮DZHS002、灯盏花乙素DZHS001、4，5，6，7四甲氧基黄酮DZHS004、4，5，6，7四乙酰氧基黄酮DZHS006、7羟基4，5，6三乙酰氧基黄酮DZHS007、4，5，6三说明书CN102335164ACN102335172A4/8页7甲氧基灯盏花乙素DZHS008组，每组10只。0049受试化合物用05羧甲基纤维素钠05CMCNA配制成混悬液，按5MG/KG灌胃给药，每天2次，共5天。0050选用尿酸酶抑制剂氧嗪酸为化学诱导剂，抑制尿酸酶活性，造成高尿酸血症。动物在取血样前2H用氧嗪酸钾盐SIGMA公司产品按400MG/KG剂量腹腔注射小鼠，正常对照组则注射等体积05C。

16、MCNA溶液，1H后灌胃给予末次剂量的受试化合物，2H后拔眼采血，3000RPM离心5MIN，取血清，采用酶比色法中生北控生物科技股份有限公司试剂盒测定血清尿酸水平。0051结果表明，腹腔注射氧嗪酸钾后动物血清尿酸水平显著升高，与正常对照组相比，有显著性差异，提示模型成功。0052表1受试化合物灌胃给药对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响00530054注XS，N10P005，P001，与高尿酸血症模型对照组相比TTEST检验。0055从表1看出，给予受试化合物5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物DZHS001、DZHS002、DZHS004、DZHS006、DZHS007和DZHS008后，血清。

17、尿酸水平明显低于模型对照组，差异有统计学意义；各受试化合物之间相比无显著性差异。0056实施例25，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物降低高尿酸血症的量效关系研究0057为了评价5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物降低高尿酸血症的量效关系，本实验选取5，6，7，4四羟基黄酮DZHS002和灯盏花乙素DZHS001进行量效关系研究，具体方法如下0058健康雄性昆明种小鼠110只，体重1822G，由昆明医学院实验动物中心提供实验动物生产许可证号SCXK滇20052008。动物随机分为正常对照组、高尿酸血症模型组、5，6，7，4四羟基黄酮25、5、10剂量组、灯盏花乙素25、5、10剂量组和别嘌呤醇238。

18、MG/KG313MG/KG阳性对照组，每组10只。受试化合物用05羧甲基纤维素钠05CMCNA配制成混悬液，灌胃给药，每天2次，共5天。0059高尿酸血症造型方法同前，即小鼠在取血样前2H腹腔注射400MG/KG氧嗪酸钾盐造成高尿酸血症，正常对照组则注射等体积05CMCNA溶液，1H后灌胃给予末次剂量的说明书CN102335164ACN102335172A5/8页8受试化合物，2H后拔眼采血，3000RPM离心5MIN，取血清，采用酶比色法中生北控生物科技股份有限公司试剂盒测定血清尿酸水平。0060结果表明，腹腔注射氧嗪酸钾后动物血清尿酸水平显著升高，与正常对照组相比，有显著性差异，提示模型成。

19、功。给予5，6，7，4四羟基黄酮、灯盏花乙素后，血清尿酸水平明显低于模型对照组，且呈现剂量依赖性，与模型对照组相比差异有统计学意义；此外，5，6，7，4四羟基黄酮5MG/KG剂量组与等摩尔剂量的别嘌醇组相比，差异无统计学意义，提示5，6，7，4四羟基黄酮能降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，效价与等摩尔剂量的别嘌醇相当，见表2。0061表25，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物灌胃给药对氧嗪酸钾诱导高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响006200630064注XS，N10P005，P001，与高尿酸血症模型对照组相比TTEST检验。0065实施例35，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物体外对黄嘌呤氧化酶的影响。

20、0066为了评价5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物对黄嘌呤氧化酶的影响，本实验选取5，6，7，4四羟基黄酮DZHS002和灯盏花乙素DZHS001研究体外对黄嘌呤氧化酶的影响，具体方法如下0067黄嘌呤氧化酶EC11322为SIGMA公司产品，用PBS配制成适宜浓度备用。5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物用PBS配制成系列浓度备用，DMSO助溶。黄嘌呤氧化酶测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。0068系列浓度的5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物溶液与黄嘌呤氧化酶在37孵育30MIN后，用黄嘌呤氧化酶测定试剂盒测定黄嘌呤氧化酶的活性，结果见表3。0069表3、5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生。

21、物对黄嘌呤氧化酶的影响XS，N40070说明书CN102335164ACN102335172A6/8页9组别浓度MMOL/L抑制率DZHS00250109363675010848482501076619550106657885010585310650104954121DZHS001501092285350108393685010752889501066079550105764102501048459800710072结果表明，5，6，7，4四羟基黄酮有一定的抑制黄嘌呤氧化酶活力的作用。0073实施例45，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物的初步毒性和安全性研究0074选择健康的ICR小鼠20只，雄。

22、雌各半，体重1822G，给药前动物禁食约12小时，5，6，7，4四羟基黄酮用05羧甲基纤维素钠配制成混悬液，按最大浓度、最大体积一次灌胃给药40ML/KG，最终给药剂量为10G/KG，给药后连续观察14天记录动物中毒和死亡情况。0075灌胃给药后，动物未出现明显的异常反应，14天连续观察，未见动物出现任何中毒反应，活动自如，进食饮水和大小便均正常，体重正常增长，一般情况良好。20只动物无一死亡，处死动物后尸检，各脏器未见肉眼可见的病理改变，测得DZHS002小鼠灌胃给药的最大耐受量大于10G/KG350MMOL/KG，DZHS002毒性远远小于别嘌呤醇小鼠灌胃给药LD50700MG/KG，相当。

23、于514MMOL/KG。0076实施例55，6，7，4四羟基黄酮软胶囊的制备0077处方1000粒0078内容物00795，6，7，4四羟基黄酮30G0080大豆油100G0081囊壳0082明胶60G说明书CN102335164ACN102335172A7/8页100083甘油20G0084水适量0085对羟基苯甲酸乙酯尼泊金乙酯012G0086制法取5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物，加至大豆油中，搅拌使其完全溶解，压制软胶囊，干燥，制成1000粒，即得规格为30MG的产品。0087实施例6灯盏花乙素软胶囊的制备0088处方1000粒0089内容物0090灯盏花乙素200G0091玉米油2。

24、00G0092囊壳0093明胶60G0094甘油20G0095水适量0096对羟基苯甲酸乙酯尼泊金乙酯002G0097制法取5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物，加至玉米油中，搅拌使其完全溶解，压制软胶囊，干燥，制成1000粒，即得规格为200MG的产品。0098实施例75，6，7，4四甲氧基黄酮软胶囊的制备0099处方1000粒0100内容物01015，6，7，4四甲氧基黄酮50G0102亚麻酸1000G0103囊壳0104明胶60G0105甘油20G0106水适量0107对羟基苯甲酸乙酯尼泊金乙酯02G0108制法取5，6，7，4四羟基黄酮及其衍生物，加至花生油中，搅拌使其完全溶解，压制软胶。

25、囊，干燥，制成1000粒，即得规格为50MG的产品。0109实施例84，5，6，7四乙酰氧基黄酮缓释片的制备0110处方1000片01114，5，6，7四乙酰氧基黄酮100G0112蜂蜡1000G0113乳糖1500G0114预胶化淀粉400G0115硬脂酸镁5G0116制法将物料分别过100目筛，按处方量称取物料，混合均匀，搅拌制软材，1824目筛制粒，70下通风干燥，压片，包薄膜衣，即得规格为150MG的产品。0117实施例97羟基4，5，6三乙酰氧基黄酮缓释片的制备说明书CN102335164ACN102335172A8/8页110118处方1000片01194，5，6，7四乙酰氧基黄酮。

26、20G0120蜂蜡100G0121乳糖30G0122硬脂酸镁1G0123制法将物料分别过100目筛，按处方量称取物料，混合均匀，搅拌制软材，1824目筛制粒，70下通风干燥，压片，包薄膜衣，即得规格为200MG的产品。0124实施例104，5，6三甲氧基灯盏花乙素缓释片的制备0125处方1000片01264，5，6三甲氧基灯盏花乙素20G0127蜂蜡1000G0128乳糖1500G0129预胶化淀粉400G0130硬脂酸镁5G0131制法将物料分别过100目筛，按处方量称取物料，混合均匀，搅拌制软材，1824目筛制粒，70下通风干燥，压片，包薄膜衣，即得规格为20MG的产品。0132以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。说明书CN102335164A。

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