Β3受体配体及其治疗用途.pdf

本发明涉及新颖的化合物，它们是β-3肾上腺素受体，本发明也涉及这些化合物的制备和治疗用途或者作为所述受体的研究工具。本发明还涉及本发明的化合物的制备方法以及β-3肾上腺素受体的反向激动剂作为药物的用途。

1.  通式(I)所示的化合物及其盐和溶剂化物，

式中：
R代表氢原子、羟基、  烷氧基、烷基、甲醛肟或卤素原子；
R₁代表氢原子或甲基；
R₂代表氢原子、羟基、烷氧基、烷基或卤素原子；
R₃、R₄各自独立地代表烷基，或者R₃代表氢原子，R₄代表烷基；
R₅代表氢原子或烷基。

2.  如权利要求1所述的化合物，其中基团R在苯基的对位或间位上。

3.  如权利要求1或2所述的化合物，其中基团R是氢原子、羟基或卤素原子。

4.  如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中基团R₁是氢原子或甲基。

5.  如权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中基团R₃是氢原子，基团R₄是甲基。

6.  如权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中基团R₃和R₄各自代表甲基。

7.  如权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中基团R₅选自氢原子、甲基和乙基。

8.  如权利要求1至7中任一项所述的化合物，所述的化合物为外消旋体、非对映异构体、对映体或其混合物的形式。

9.  如权利要求1至8中任一项所述的化合物，所述化合物选自如下；
(±)2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1a)；
2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1b)；
2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1c)；
(±)2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1d)；
(2S)-2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1e)；
(2S)-2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1f)；
(2R)-2-[4-[2-(2(2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1g)；
(2R)-2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1h)；
2-[4-[2-((2R)-2-(3-氯苯基)-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1i)；
(R)-2-[4-[2-((1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1j)；
(R)-2-[4-[2-((1S，2S)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1k)；
及其盐、溶剂化物和烷基酯。

10.  如权利要求1至8中任一项所述的化合物，所述化合物选自如下：
(2S)-2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1e)；
(2R)-2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1g)；
及其盐、溶剂化物和烷基酯。

11.  通式(II)所示的化合物及其盐和溶剂化物，

式中：
Y是CH或N；
Z是直接键或者基团-O-CH₂-，其中氧原子与环键合；
n是0、1或2，当n是1或2，X是N，当n是0，X是NH、O或S；
R₆是氢原子、烷基、可任意取代的芳基、可任意取代的杂芳基、卤素原子、-OH、NH₂、-O-烷基、可任意取代的-O-芳基、可任意取代的-O-杂芳基，-NH-CO-R₈、可任意取代的NH-CO-芳基、可任意取代的-NH-CO-杂芳基、-NH-SO₂-烷基、可任意取代的NH-SO₂-芳基、可任意取代的NH-SO₂-杂芳基、NH-SO₂-R₈、硝基；或者当Y是CH时，R₆是与苯环稠合的芳香族基团或者杂芳香族基团，形成萘基或咔唑基；
R₇是R₈SO₂-、可任意取代的R₈CO-，-CO-芳基、可任意取代的-CO-杂芳基、可任意取代的-SO₂-芳基、可任意取代的-SO₂-杂芳基；
R₈是烷基。

12.  如权利要求11所述的化合物，其中所述芳基选自：1-、2-萘基；2-、3-或4-甲氧基；2-、3-或4-卤素；2-、3-或4-硝基；2-、3-或4-氨基；2-、3-或4-烷基；2-、3-和4-羧基。

13.  如权利要求11所述的化合物，其中所述杂芳基选自：
吡啶-2-基；吡啶-3-基；吡啶-4-基；吲哚-2-基；吲哚-3-基；吲哚-4-基；吲哚-5-基；吲哚-6-基；吲哚-7-基；2-噻吩基；3-噻吩基；2-、3-、4-、5-、6-、7-苯并呋喃基；2-呋喃基；3-呋喃基；2-、4-、5-、6-、7-苯并噻唑基；2-、4-、5-、6-、7-苯并咪唑基；2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-喹啉基；1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-异喹啉基；1-、2-、3-、4-咔唑基。

14.  如权利要求11所述的化合物，其中Z是-O-CH₂-，所述氧原子与环键合。

15.  如权利要求11所述的化合物，其中R₆选自氢原子、羟基、氨基、苄氧基和硝基。

16.  如权利要求11所述的化合物，其中Y是CH，R₆是与苯环稠合的芳基或杂芳基，形成萘基或咔唑基。

17.  如权利要求11所述的化合物，其中R₆是烷基、芳基或杂芳基取代的磺酰基氨基。

18.  如权利要求11至17中任一项所述的化合物，所述化合物选自如下：
(S)-1-苯氧基-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2a)；
(S)-1-(4-羟基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2b)；
(S)-1-(4-苄氧基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2c)；
(S)-1-(3-硝基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2d)；
(S)-1-(3-氨基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2e)；
(S)-2-羟基-1-(3-甲烷磺酰基氨基苯氧基)-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2f)；
(S)-1-(3-苯磺酰基氨基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2g)；
(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(3-噻吩磺酰基氨基苯氧基)丙烷(2h)；
(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(萘-1-基氧基)丙烷(2i)；
(S)-1-(咔唑-4-基氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2j)；.
及其盐和溶剂化物。

19.  如权利要求1至18中任一项所述的化合物作为β-3肾上腺素受体的激动剂的用途。

20.  如权利要求10所述的化合物作为β-3肾上腺素受体的反向激动剂的用途。

21.  如权利要求10所述的化合物作为药物的用途。

22.  如权利要求20所述的用途，其特征在于，用于制备治疗代谢综合症、预防恶病质和心衰竭的药物。

23.  作为β-3肾上腺素受体的反向激动剂的化合物在制备治疗代谢综合症、恶病质和心衰竭的药物中的用途。

24.  如权利要求1所述的化合物及其盐、溶剂化物和烷基酯作为β-3肾上腺素受体的激动剂的用途，其中所述化合物选自以下：
(±)2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1a)，
2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1b)，
2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1c)。

25.  如权利要求1所述的化合物及其盐、溶剂化物和烷基酯作为β-3肾上腺素受体的激动剂的用途，其中所述化合物是((±)-2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1d)和(2S)-2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1f)。

26.  如权利要求1所述的化合物及其盐、溶剂化物和烷基酯作为药物的用途，所述化合物选自以下：
2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1a)，
2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸  (1b)，
2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸  (1c)，
((±)-2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1d)，以及
(2S)-2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1f)。

27.  如权利要求11所述的化合物及其盐和溶剂化物作为药物的用途，所述化合物选自以下：
(S)-1-苯氧基-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2a)，
(S)-1-(4-羟基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2b)，
(S)-1-(4-苄氧基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2c)，
(S)-1-(3-硝基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2d)，
(S)-1-(3-氨基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2e)，
(S)-2-羟基-1-(3-甲烷磺酰基氨基苯氧基)-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2f)，
(S)-1-(3-苯磺酰基氨基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2g)，
(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(3-噻吩磺酰基氨基苯氧基)丙烷(2h)，
(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(萘-1-基氧基)丙烷(2i)，
(S)-1-(咔唑-4-基氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2j)。

28.  如权利要求24、25、26或27所述的用途，其特征在于，用于治疗肥胖、糖尿病、膀胱过动症、肠溃疡-发炎疾病、心衰竭、焦虑症、抑郁症以及早产。

29.  一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有至少一种如权利要求1至18中任一项所述的化合物作为活性成分。

30.  一种制备如权利要求1至10中任一项所述的化合物的方法，其特征在于，所述方法包括使通式(III)所示的化合物，

式中R和R₁如上所定义，与通式(IV)所示的化合物，

式中R₂、R₃和R₄如上所定义，R₅是烷基，Hal代表卤素原子，进行N-烷基化反应，任选地，水解得到通式(II)所示的化合物，其中R₅是氢原子。

31.  一种制备如权利要求11至18中任一项所述的化合物的方法，其中所述化合物中Z是基团-O-CH₂-，其特征在于，所述方法包括使通式(V)所示的化合物，

式中R₆和Y如上所定义，与通式(VI)所示的化合物，

式中R₇、X和n如上所定义，在适合的溶剂中加热进行反应。

32.  一种制备如权利要求11至13和15至17中任一项所述的化合物的方法，
其中所述化合物中Z是直接键，其特征在于，所述方法包括使通式(VII)所示的化合物，

式中R₆和Y如上所定义，Hal是卤素原子，与通式(VI)所示的化合物，

式中R₇、X和n如上所定义，在适合的溶剂中加热进行反应。

β-3受体配体及其治疗用途
技术领域
本发明涉及新颖的化合物，它们是β-3肾上腺素受体，本发明还涉及这些化合物的制备和治疗用途或者作为所述受体的研究工具。
发明背景
1967年把β肾上腺素受体分为β-1和β-2。80年代初期，发现在包括人在内的多种物种存在一种新的肾上腺素受体，后来称之β-3肾上腺素受体(Proc.Nutr.Soc.1989，48：215-223)。
β-3肾上腺素受体在多种组织中表达，其中包括脂肪组织、心脏、子宫、膀胱和肠，它在这些组织中调节不同的功能。
已经合成了β-3肾上腺素受体的激动剂和拮抗剂化合物，并且已发现，由激动剂化合物激活该受体可诱导热产生并增加对胰岛素的敏感度；在不同动物模型中，这些作用可减轻体重，舒缓糖尿病症状。
还注意到，增强β-3肾上腺素受体在内脏脂肪积聚物的功能能够有利于增大脂解作用，进而增大门非酯化类脂肪酸的通量，所以对肝的新陈代谢产生有害的影响。事实上，非酯化类脂肪酸刺激极低密度脂蛋白(VLDL)的分泌和葡糖异生，并干扰胰岛素对肝的清除，引致血脂蛋白异常、葡萄糖耐受性和高胰岛素血症，对动脉血压产生影响。
如上所述，关于激动剂和拮抗剂化合物已经有报导了，但迄今为止还未见有关于β-3肾上腺素受体的反向激动剂的描述。
发明内容
本发明的一个目的是提供新颖的β-3肾上腺素受体的配体。
本发明的另一目的是提供具有β-3肾上腺素受体的激动剂活性的新颖化合物。
发明的又一个目的是提供具有β-3肾上腺素受体的反向激动剂活性的新颖化合物。
本发明的再一个目的是提供具有β-3肾上腺素受体的拮抗剂活性的新颖化合物。
附图说明
图1所示为化合物1a-1h的DELFIA测试结果。
具体实施方式
根据第一方面，本发明的主题是通式(I)所示的化合物及其盐和溶剂化物，

式中：
R代表氢原子、羟基、烷氧基、烷基、甲醛肟基团(carbaldoxime group)或卤素原子；
R₁代表氢原子或甲基；
R₂代表氢原子、羟基、烷氧基、烷基、或卤素原子；
R₃、R₄各自独立地代表烷基，或是R₃代表氢原子，R₄是烷基；
R₅代表氢原子或烷基。
根据本发明，术语“烷氧基”指的是较低级的具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基。优选的烷氧基是甲氧基。
根据本发明，术语“烷基”指的是较低级的具有1至6个碳原子的直链或支链烷基。优选的烷基是甲基。
本发明的“卤素原子”指的是四种卤素中任一种：溴、氯、氟和碘；优选氯和溴。
本发明的“溶剂化物”指的是由本发明任一化合物与溶剂，例如与溶剂的一或多个分子，形成的复合物，以便用来分离本发日的化合物。本发明的溶剂化物包括水合物。
根据本发明的一优选方面，基团R位于苯基的对位和间位上。
根据本发明的另一优选方面，基团R是氢原子、羟基或者卤素原子，优选氯原子。
根据本发明另一优选方面，基团R₁是氢原子或甲基。
根据本发明另一优选方面，基团R₃是氢原子，基团R₄是甲基。
根据本发明另一优选方面，基团R₃和R₄各自代表甲基。
根据本发明另一优选方面，基团R₅是氢原子或者甲基或者乙基。
根据另一方面，本发明涉及通式(II)所示的化合物及其盐和溶剂化物，

式中，
Y是CH或N；
Z是直接键或者基团-O-CH₂-，其中氧原子与环键合；
n是0、1或2，当n是1或2，X是N，当n是0，X是NH、O或S；
R₆是氢原子、烷基、可任意取代的芳基、可任意取代的杂芳基、卤素原子、-OH、NH₂、-O-烷基、可任意取代的-O-芳基、可任意取代的-O-杂芳基，-NH-CO-R₈、可任意取代的NH-CO-芳基、可任意取代的-NH-CO-杂芳基、-NH-SO₂-烷基、可任意取代的NH-SO₂-芳基、可任意取代的NH-SO₂-杂芳基、NH-SO₂-R₈、硝基；或者当Y是CH时，R₆是与苯环稠合的芳香族基团或者杂芳香族基团，形成萘基或咔唑基；
R₇是R₈SO₂-、可任意取代的R₈CO-，-CO-芳基、可任意取代的-CO-杂芳基、可任意取代的-SO₂-芳基、可任意取代的-SO₂-杂芳基；
R₈是烷基。
当n是0，包含氮原子和X的结构是开环结构。
优选的通式(II)化合物包括那些n是2的化合物。
优选的通式(II)化合物包括那些n是2、X是N的化合物。优选的芳基包括：1-，2-萘基；2-，3-或4-甲氧基苯基；2-，3-或4-(卤素)苯基；2-，3-或4-硝基苯基；2-，3-或4-氨基苯基；2-，3-或4-烷基苯基；2-，3-或4-羧基苯基.。
优选的杂芳基包括：吡啶-2-基；吡啶-3-基；吡啶-4-基；吲哚-2-基；吲哚-3-基；吲哚-4-基；吲哚-5-基；吲哚-6-基；吲哚-7-基；2-噻吩基；3-噻吩基；2-、3-、4-、5-、6-、7-苯并呋喃基；2-呋喃基；3-呋喃基；2-、4-、5-、6-、7-苯并噻唑基；2-、4-、5-、6-、7-苯并咪唑基；2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-喹啉基；1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-异喹啉基；1-、2-、3-、4-咔唑基。
优选的通式(II)化合物是这样的化合物：Z是基团-O-CH₂-，其中氧原子与环键合，Y是氮原子或CH。
其他优选的通式(II)化合物是这样的化合物：其中Y是CH，R₆是氢原子、羟基、氨基、苄氧基或硝基。
其他优选的通式(II)化合物是这样的化合物：其中Y是CH，R₆是与苯环稠合的芳香族基团或杂芳香族基团，形成萘基或咔唑基。
其他优选的通式(II)化合物是这样的化合物：其中R₆是用烷基(例如甲基)、芳基(例如苯基)、杂芳基(例如噻吩基)取代的磺酰基氨基。
其他优选的通式(II)化合物是这样的化合物：其中R₆是羟基或卤素。
通式(I)和(II)所示的化合物的盐当被给予人或动物时，必须是药学上可接受的。或者，当所述盐被用来纯化通式(I)或(II)的化合物、用作反应中间体或者用作通式(I)或(II)的化合物作为β-3肾上腺素受体的研究工具时，所述化合物不必是药学上可接受的。
例如，本发明的有用盐的例子是与碱金属或碱土金属形成的盐，例如钠、钾、镁、钙盐等，或者是与胺形成的盐，例如氨基丁三醇、氯代氢氧化物、溴化氢氧化物、硫酸盐、草酸盐等。
以星号表示的碳原子是或者可能是手性碳原子。
具体地，带有羟基的碳原子(下文也称“位置α”)始终是手性碳原子，通式(I)和(II)的化合物可以是(R)或(S)形式或者是(R)/(S)形式的混合物。
此外，带有基团R₁的碳原子(下文也称“位置γ”)是手性碳原子，当通式(I)中R₁不是氢，例如当R₁＝甲基时，所述化合物可以是(R)或(S)形式或者是(R)/(S)形式的混合物。
通式(I)化合物中带有基团R₃和R₄的碳原子(下文也称“位置β”)只有在该两个基团代表不同的取代基时，例如当R₃是氢原子，R₄是烷基或者当它们代表两个不同的烷基，该碳原子才是手性碳原子。在此情况下，所述碳原子可以是(R)或(S)形式或者是(R)/(S)形式的混合物。
外消旋物、非对映异构体、对映体以及以任何相对比例混合的这些化合物都是本发明的主题。
优选的本发明通式(I)所示的化合物如下：
(±)2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1a)；
2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1b)；
2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1c)；
(±)-2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1d)；
(2S)-2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1e)；
(2S)-2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1f)；
(2R)-2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1g)；
(2R)-2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1h)；
2-[4-[2-((2R)-2-(3-氯苯基)-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1i)；
(R)-2-[4-[2-((1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1j)；
(R)-2-[4-[2-((1S，2S)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1k)；
及其盐、其溶剂化物以及其与烷基形成的酯。
优选的本发明通式(II)所示的化合物如下：
(S)-1-苯氧基-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2a)
(S)-1-(4-羟基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2b)；
(S)-1-(4-苄氧基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2c)；
(S)-1-(3-硝基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2d)；
(S)-1-(3-氨基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2e)；
(S)-2-羟基-1-(3-甲烷磺酰基氨基苯氧基)-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2f)；
(S)-1-(3-苯磺酰基氨基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2g)；
(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(3-噻吩磺酰基氨基苯氧基)丙烷(2h)；
(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(萘-1-基氧基)丙烷(2i)；
(S)-1-(咔唑1-4-基氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2j)；
及其盐和其溶剂化物。
通式(I)和(II)所示的化合物对β-3肾上腺素受体具有令人感兴趣的活性。
通式(I)和(II)所示的化合物作为β-3肾上腺素受体的配体的用途是本发明另一个主题。
更具体地，通式(I)所示的化合物，其中带有羟基的手性碳原子是(R)形式，通常对β-3肾上腺素受体具有激动剂活性或部分激动剂活性。
例如，通式(I)的化合物(2S)-2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1f)是特别有效的β-3肾上腺素受体的激动剂。
令人惊讶的是，已发现(±)2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1a)具有β-3肾上腺素受体激动剂的特性，但与其手性原子的构造无关。
因此，根据另一方面，本发明涉及如下化合物：
(±)-2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1a)，
2-[4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1b)，
2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1c)，
及其盐、溶剂化物或者其烷基酯衍生物作为β-3肾上腺素受体激动剂在治疗肥胖、糖尿病、膀胱过动症、肠溃疡-发炎疾病、心衰竭、焦虑症、抑郁症以及早产的用途。
此外，已经发现一些通式(I)的化合物具有β-3肾上腺素受体的反向激动剂活性，它们代表本发明的优选方面。
具体地，通式(I)化合物，其中带有羟基的手性碳原子是(S)形式，例如：
(2S)-2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1e)；
(2R)-2-[4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1g)；
及其盐、溶剂化物和烷基酯，表现β-3肾上腺素受体的反向激动剂活性，可用来制备治疗代谢综合症、心衰竭以及预防各种病源(例如肿瘤及其他)的恶病质的药物中的用途。
另外，本发明具有β-3肾上腺素受体的反向激动剂活性的化合物可用作所述受体的研究工具(也称“实验室工具”)。
本发明另一个主题是β-3肾上腺素受体的反向激动剂在制备治疗代谢综合症、心衰竭和恶病质的药物中的用途。
本说明书的实施例部分也报导了药理学试验结果。
通式(I)的化合物可通过如下方法制备，包括：
使通式(III)所示的化合物，

其中R和R₁如上所定义，与通式(IV)所示的化合物进行N-烷基化反应，

其中R₂、R₃和R₄如上所定义，R₅是烷基，Hal代表卤素原子，较佳为溴原子或氯原子，任选地水解得到通式(I)所示的化合物，其中R₅是氢原子。
Z是-CH₂-O-的通式(II)所示的化合物可通过如下方法制备，包括使通式(V)所示的化合物，

其中R₆和Y如上所定义，与通式(VI)所示的化合物，

其中R₇、X和n如上所定义，在合适的溶剂中加热进行反应。
Z是直接键的通式(II)所示的化合物可通过如下方法制备，包括使通式(VII)所示的化合物，

其中R₆和Y如上所定义，Hal是卤素原子，与通式(VI)所示的化合物，

其中R₇、X和n如上所定义，在合适的溶剂中加热进行反应。
通式(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)所示的化合物可按照已知的方法制备。例如，其中一些制备的例子可参见本说明书的实施例部分。
作为药物的用途，通式(I)和(II)所示的化合物可制成药物组合物形式。
根据其中一方面，本发明还包括药物组合物，它们含有通式(I)和(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的一种作为活性成分，任选地可掺合一或个合适的惰性赋形剂。
本发明的药物组合物优选地以剂量单位形式给予。每个剂量单位包含的通式(I)和(II)的化合物的数量适合规定的日剂量。每个剂量单位根据可预见的剂量和类型来适当地制备。
根据病人的年龄、体重和健康状况、疾病的性质和严重性以及给药的方法而可以很大幅度地调整剂量，这可由处方药物的医生来决定。
适当的单位给药形式包括口服形式，例如片剂、胶囊、粉剂、粒剂和溶剂或其口服悬液，舌下和口腔形式、皮下、肌内或静脉给药形式、鼻内或眼内形式、直肠给药形式，可与必要的药学赋形剂一起制备。
用来制备药物组合物的典型赋形剂、赋形剂与活性成分的含量比例和制备药物组合物的方法可由本领域技术人员适当地选择。有机或无机物质、固体或液体物质可用作药物赋形剂。药物赋形剂的量通常是活性成分重量的1％至99％(重量)。
制备固体药物组合物的赋形剂的例子包括，例如，乳糖、糖精、淀粉、滑石、纤维素、糊精、高岭土、碳酸钙等等。制备口服的液体组合物的常规惰性稀释剂可采用水或植物油等。液体组合物除了包括惰性稀释剂之外，也可包含辅助剂，例如润湿剂、悬浮剂、甜味剂、香味剂、染色剂和防腐剂。液体组合物也可包含在可吸收材料如明胶的胶囊中。制备肠胃外给药(例如注射用和栓剂)的溶剂或悬浮技术手段包括水、丙二醇、聚乙二醇、苯甲醇、卵磷脂的油酸乙酯等等。用作栓剂的材料基质例如包括可可油。
以下是阐述本发明的非限制性实施例。
实施例部分
通式(I)的化合物
实施例1
(±)-2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸乙酯(a)
把化合物2-[4-(2-溴乙基)苯氧基]-2-甲基丙酸乙酯和外消旋2-氨基-1-苯基乙醇以大约等摩尔比混合在无水N，N-二甲基甲酰胺中，在氮气气氛和70℃下搅拌70小时。向反应混合物加入乙酸乙酯，混合物用饱和NaCl溶液洗涤，Na₂SO₄干燥。真空除去溶剂，柱层析法(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)分离产物。得率为80％。FT-IR(液膜)：3600-3100，3060，3032，2989，2935，2854，1733，1611，1509，1454，1383，1266，1235，1179，1144，1026，914，850，736，702cm^-1。¹NMRs(300MHz，CDCl₃，d))：1.24(t，J＝7.1Hz，3H，O CH₂CH₃)，1.56(s，6H，C(CH₃)₂)，2.70-2.96(m，6H，CH₂CHOH，CH₂NH，CH₂CH₂NHNH)，3.90-4.10(bs，2H，OH和NH：与重水交换)，4.22(q，J＝7.1Hz，2H，OCH₂CH₃)，4.75(dd，J＝9.2和3.4Hz，1H，CHOH)，6.75-6.78(m，2H，芳香质子)，7.00-7.03(m，2H，芳香质子)，7.23-7.33(m，5H，芳香质子)。¹³C NMRs(75MHz CD Cl₃，δ)：14.31，25.58，35.54，50.88，57.12，61.62，71.82，79.31，119.67，126.03，127.73，128.60，129.54，133.46，142.84，154.03，174.59.GC-MS(70eV)m/z(int.rel.)：353[(M-18)+，4]，298(11)，264(100)，238(9)，235(7)，150(25)，132(68)，121(44)，107(24)，91(11)，77(12)，43(8)。分析(C₂₂H₂₉NO₄)：C，H，N。
实施例2
(±)-2-[4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]丙酸乙酯(d)
把化合物2-[4-(2-溴乙基)苯氧基]丙酸乙酯和外消旋2-氨基-1-苯基乙醇以大约等摩尔比混合在无水N，N-二甲基甲酰胺中，在氮气气氛和70℃下搅拌70小时。化合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaCl溶液洗涤，Na₂SO₄干燥。真空除去溶剂，柱层析法(硅胶，二氯甲烷/乙醇＝40∶1)分离产物。得率为49％。FT-IR(液膜)：3600-3100，3058，3022，2986，2935，2855，1750，1669，1612，1581，1511，1449，1375，1292，1239，1135，1050，1014，826，733，702cm^-1。¹NMRs(300MHz CD Cl₃，δ)：1.23(t，J＝7.1Hz，3H，OCH₂CH₃)，1.58(d，J＝6.8Hz，3H，CH CH₃)，2.66-3.00(m，6H，CH₂CHOH，CH₂NH，CH₂CH₂NH)，4.20(q，J＝7.1Hz，2H，OCH₂CH₃)，4.70(q，J＝6.8Hz，2H，CHCH₃)，4.86(dd，J＝9.3和3.3Hz，1H，CHOH)，5.10-5.30(bs，2H，OH和NH：与重水交换)，6.74-6.82(m，2H，芳香质子)，6.97-7.12(m，2H，芳香质子)，7.24-7.35(m，5H，芳香质子)。¹³C NMRs(75MHz CD Cl₃，δ)：14.35，34.29，50.50，56.52，61.47，66.05，72.90，115.51，126.03，127.86，128.66，129.94，131.84，142.28，156.52，172.47.GC-MS(70eV)m/z(int.rel.)：339[(M-18)+，1]，284(4)，250(100)，221(24)，207(7)，176(10)，150(14)，147(14)，132(69)，121(19)，107(18)，105(14)，104(10)，103(11)，91(10)，77(14)，43(9)。分析(C₂₁H₂₇NO₄)：C，H，N。
实施例(3-8)
参照实施例1或2的步骤，但采用适当的通式(III)和(IV)所示的化合物，得到以下化合物：
(-)-2-{4-[2-((R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}-2-甲基丙酸乙酯(b)(实施例3)
得率为64％。[α]D＝-32.1(c＝1.0，CHCl₃)。分析数据与(2a)的数据相同。(+)-2-{4-[2-((S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}-2-甲基丙酸乙酯(c)(实施例4)
得率为61％。[α]D＝+32.0(c＝1.0，CH Cl₃)。分析数据与(2a)的数据相同。(2S)-2-{4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基丙酸甲酯(d)(实施例5)
得率为31％。[α]D＝+11.8(c＝0.95，CH Cl₃)。FT-IR(液膜)：3600-3200，3029，2987，2937，2885，1752，1612，1585，1512，1451，1426，1377，1348，1299，1250，1207，1181，1137，1100，1071，1047，825，758，700cm^-1。¹NMRs(400MHzCD Cl₃，δ)：1.57(d，J＝6.7Hz，3H，CH CH₃)，2.69-2.93(m，6H，CH₂CHOH，CH₂NH，CH₂CH₂NH)，3.45-3.64(bs，2H，OH和NH：与重水交换)，3.71(s，3H，O CH₃)，4.70(q，J＝6.7Hz，2H，CH CH₃)，4.74(dd，J＝9.3和3.2Hz，1H，CHOH)，6.75-6.77(m，2H，芳香质子)，7.03-7.05(m，2H，芳香质子)，7.21-7.24(m，1H，芳香质子)，7.27-7.32(m，4H，芳香质子)。¹³C NMRs(100MHz CD Cl₃，δ)18.83，35.05，50.79，52.56，56.91，71.53，72.81，115.36，126.03，127.80，128.63，129.99，132.50，142.51，154.31，173.01.GC-MS(70eV)m/z(int.rel.)：325[(M-18)+，9]，325(41)，324(25)，238(31)，206(24)，193(40)，147(30)，134(30)，132(100)，130(21)，120(20)，107(44)，106(21)，105(50)，104(45)，103(30)，91(69)，90(20)，78(20)，77(38)，70(25)，51(19).MS-ESI m/z(％)：344[M+H]⁺(100％)。分析(C₂₀H₂₅NO₄)：C，H，N。
(2S)-2-{4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基)丙酸甲酯(f)(实施例6)
得率为47％。[α]D＝-58.5(c＝1.05，CHCl₃)。分析数据与(e)的数据相同。.
(2R)-2-{4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}丙酸乙酯(g)(实施例7)
得率为66％。[α]D＝+55.6(c＝1.01，CHCl₃)。分析数据与(d)的数据相同。
(2R)-2-{4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}丙酸乙酯(h)(实施例8)
得率为54％。[α]D＝-6.9(c＝0.96，CHCl₃)。分析数据与(d)的数据相同。
实施例9
2-[4-[2-((R)-2-(3-氯苯基)-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸乙酯(I)
把碘化钾(158mg，0.95mM)加入到化合物乙基2-[4-(2-溴乙基)苯氧基]-2-甲基丙烷(500g，1.59mM)与无水DMF(16ml)中。悬液在110℃搅拌30分钟，然后加入NaN₃(382mg，5.87mM)。通过GC分析监测反应的进行，14小时后加入乙酸乙酯终止反应，用水洗涤有机相。对粗反应产物用柱层析法(硅胶；流动相：乙酸乙酯/石油醚＝3∶7)处理，分离产物。得到357mg乙基2-[4-(2-迭氮基乙基)苯氧基]-2-甲基丙烷，为黄色油(得率为97％)。FT-IR(净相)：3439，3328，2981，2921，2871，2099，1733，1611，1510，1464，1381，1366，1347，1281，1237，1178，1140，1024，972，909，850，836，768cm-1；1H NMRs(400MHz CD Cl₃，δ)：7.07-7.05(d，2H，J＝8.6Hz，芳香质子)；6.79-6.76(d，2H，J＝8.6Hz，芳香质子)；4.24-4.18(q，2H，J＝7.1Hz，CH₂CH₃)；3.45-3.41(t，2H，J＝7.2Hz，CH₂C6H4)；2.82-2.78(t，2H，J＝7.2Hz，CH₂N₃)；1.56(s，6H，C(CH₃)₂)；1.24-1.21(t，3H，J＝7.1Hz，CH₃CH₂)。
把10％Pd/C(16mg)加入到乙基2-[4-(2-迭氮基乙基)苯氧基]-2-甲基丙烷(784mg，2.89mM)在甲醇(42ml)中的溶液中，悬液在5atm氢气和室温下搅拌过夜，直至物质消失[TLC(硅胶；流动相：乙酸乙酯/石油醚＝2∶8)]。过滤混合物，除去催化剂，减压除去溶剂。得到539mg乙基2-[4-(2-氨基乙基)苯氧基]-2-甲基丙烷，为无色油(得率为74％)。FT-IR(净相)：3366，2985，2922，2851，1732，1610，1579，1508，1467，1382，1362，1283，1235，1177，1140，1023，971，908，836，768cm-1；1H NMRs(400MHz CD Cl₃，δ)：7.06-7.04(d，2H，J＝8.6Hz，芳香质子)；6.78-6.76(d，2H，J＝8.6Hz，芳香质子)；5.70-5.55(m，2H，NH₂)；4.25-4.19(q，2H，J＝7.1Hz，CH₂CH₃)；2.96-2.92(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂C₆H₄)；2.76-2.69(m，2H，CH₂NH₂)；1.56(s，6H，C(CH₃)₂)；1.26-1.22(t，3H，J＝7.1Hz，CH₃CH₂)。¹³C NMRs(100MHzCD Cl₃，δ)：174.33，153.84，132.84，129.42，119.34，79.04，61.37，43.07，38.13，25.32，14.06。MS-ESI m/z(％)：252[M+H]⁺(100)。MS-MS(252)：235(100)，121(13)。
使化合物乙基2-[4-(2-氨基乙基)苯氧基]-2-甲基丙烷(539mg，2.15mM)和(R)-氧化苯乙烯(361g，2.33mM)与无水甲醇(19ml)的混合物回流4天。通过GC分析监测反应的进行，减压除去溶剂。对残留物用柱层析法(硅胶；流动相：二氯甲烷/乙醇＝20∶1)处理，分离产物。得到229mg 2-[4-[2-((R)-2-(3-氯苯基)-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸乙酯，为橙色油(得率为26％)。[α]D＝-16.9(c 0.811，CHCl₃).1H NMRs(400MHz CD Cl₃，δ)：7.35(s，1H，NH)；7.22-7.18(m，4H，芳香质子)；7.03-7.01(d，2H，J＝8.6Hz，芳香质子)；6.76-6.74(d，2H，J＝8.6Hz，芳香质子)；4.76-4.73(dd，1H，J＝3.3和9.3Hz，CHOH)；4.38(bs，OH)；4.24-4.18(q，2H，J＝7.1Hz，CH₂CH₃)；2.94-2.70(m，6H，CH₂CH₂和CHOHCH₂)；1.55(s，6H，C(CH₃)₂)；1.25-1.21(t，3H，J＝7.1Hz，CH₃CH₂)。¹³C NMRs(100MHz CD Cl₃，δ)：174.27，153.91，144.43，134.30，132.53，129.67，129.95，127.62，125.94，123.92，119.39，79.05，70.42，61.38，56.37，50.38，34.62，25.31，14.06。MS-ESI m/z(％)：406[M+H]⁺(100)。MS-MS(406)：388(100)，274(7)，235(52)，121(44)。
实施例10
(R)-2-[4-[2-((1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苯氧基]丙酸乙酯(j)
使化合物(1S，2R)-(+)-苯丙醇胺(194mg，1.0mM)、乙基(R)-2-[4-(2-溴乙基)苯氧基]丙烷(620mg，2.1mM)与无水DMF(2.2ml)在70℃搅拌2小时。然后冷却反应混合物，用乙酸乙酯处理，饱和NaHCO₃水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤。有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压除去溶剂。通过柱层析法(硅胶；流动相：CH₂Cl₂/乙醇＝40∶1)分离产物。得到225mg产物(得率为43％)，为黄色固体。Pf66.7-69.4℃s。[α]D＝+19.6(c 0.84，CH Cl₃)。FT-IR(净相)：3337，2937，2849，1751，1612，1584，1507，1450，1377，1240，1200，1135，1050，1015，824，740，703cm-1；1H NMRs(300MHz，CD Cl₃，δ)：7.40-7.20(m，5H，芳香质子)；7.11-7.08(d，2H，芳香质子)；6.81-6.78(d，2H，芳香质子)；4.92-4.91(d，1H，J＝3.6Hz，CHOH)；4.74-4.67(q，1H，J＝6.7Hz，CH₃CHCOO)；4.24-4.17(q，2H，J＝7.2Hz，CH₂CH₃)；3.77-3.66(bs，2H，OH和NH：与重水交换)；3.04-2.80(m，5H，CH₃CHNH和CH₂CH₂)；1.61-1.60(d，3H，J＝6.7Hz，OCHCH₃)；1.26-1.22(t，3H，J＝7.2Hz，CH₃CH₂)；0.85(d，3H，J＝6.6Hz，CH₃CHNH)。¹³C NMRs(75MHz CD Cl₃，δ)：172.52，156.48，141.14，132.13，129.96，128.38，127.40，126.19，115.47，72.91，61.51，59.10，48.44，34.84，18.80，14.37，13.34.MS-ESI m/z(％)：372[M+H]⁺(100)；394[M+Na]⁺(39).MS-MS(372)：354(100)，221(47)，147(17)，121(7)。对C₂₂H₂₉NO₄分析计算：C，71.67；H，7.87；N，3.77。结果发现：C，71.61；H，7.59；N，3.66。
实施例11
(R)-2-[4-[2-((4S，5S)-4-甲基-5-苯基恶唑烷-2-酮)乙基]苯氧基]丙酸乙酯(k)
把化合物乙基(R)-2-[4-(2-溴乙基)苯氧基]丙烷(450mg，1.5mM)和(1R，2S)-苯丙醇胺混合在DMF(5ml)中，在氮气气氛和70℃下搅拌72小时。然后，混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaCl溶液洗涤，Na₂SO₄干燥。减压除去溶剂，柱层析法(硅胶；流动相：二氯甲烷/乙醇＝40∶1)分离产物。得到145mg乙基(R)-2-[4-[2-((1R，2S)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苄基]丙烷，为澄清黄色油(得率＝52％)。[α]D＝-0.6(c1.1，CH Cl₃).FT-IR(净相)：3262，3055，2986，2930，1748，1613，1559，1511，1451，1270，1241，1196，1136，1098，1051，1016，743，703cm^-1。¹NMRs(500MHz，CD Cl₃，δ)：7.32-7.22(m，5H，芳香质子)；7.11-7.09(2H，芳香质子)；6.80-6.78(2H，芳香质子)；5.15-5.14(d，1H，J＝4.0Hz，CHOH)；4.76(bs，2H，OH和NH：与重水交换)；4.71-4.67(q，1H，J＝6.7Hz，CH₃CHCO)；4.22-4.18(q，1H，J＝7.2Hz，CH₂CH₃)；3.71-3.67(q，1H，J＝7.0Hz，CH₃CHNH)；3.20-2.91(m，4H，CH₂CH₂)；1.60-1.59(d，3H，J＝6.7Hz，OCH CH₃)；1.25-1.20(m，3H，CH₃CH₂)；0.96-0.94(m，3H，J＝7.0Hz，CH₃CHNH)。¹³C NMRs(125MHz CD Cl₃，δ)：172.23，161.34，156.25，129.69，128.13，127.60，127.17，126.10，125.88，115.22，75.80，72.62，72.40，61.23，58.98，49.72，48.09，34.28，18.51，14.08。MS-ESI m/z(％)：372[M+H]⁺(100)。MS-MS(372)：354(100)，221(55)，147(24)，121(7)。
把乙基(R)-2-[4-[2-((1R，2S)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苄基]丙烷(140mg，0.38mM)加入到二碳酸二叔丁酯(156mg，0.71mM)在THF(5ml)中的溶液中。化合物在室温搅拌48小时，通过TLC(硅胶；流动相：乙酸乙酯/石油醚＝1∶1)监测，然后减压浓缩。粗产物溶解在乙酸乙酯中，依次用10％柠檬酸溶液、饱和NaHCO₃水溶液和饱和NaCl溶液洗涤。有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，减压浓缩。对粗残留物用柱层析法(硅胶；流动相：乙酸乙酯/石油醚＝1∶9)分离产物。得到111mgN-叔丁氧基羰基N-[(R)-乙基2-[4-[2-((1R，2S)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苯氧基]丙烷，为黄色油(得率为66％)。[α]D＝+3.1(c 0.66，CH Cl₃)。FT-IR(净相)：3409，2982，2935，1808，1754，1686，1511，1453，1397，1372，1302，1241，1213，1163，1119，1070，845，876cm^-1。¹NMRs(400MHz，CD Cl₃，δ)：7.30-7.19(m，5H，芳香质子)；7.01-6.99(m，2H，芳香质子)；6.78-6.75(m，2H，芳香质子)；5.15-5.14(d，1H，J＝4.0Hz，CHOH)；4.89(bs，1H，CHOH：与重水交换)；4.68-4.62(q，1H，J＝7.1Hz，CH₃CHCO)；4.19-4.14(m，2H，CH₂CH₃)；3.60-2.59(m，5H，CH₂CH₂和CH₃CHNH)；1.56-1.55(d，3H，J＝6.8Hz，OCHCH₃)；1.40(s，9H，t-Bu)；1.22-1.19(m，6H，CH₃CH₂和CH₃CHNH)。¹³C NMRs(100MHz CD Cl₃，δ)：172.50，156.40，142.8，132.39，130.03，129.91，128.32，127.51，126.36，115.39，80.34，72.90，61.46，50.85，35.38，28.65，18.78，14.34，12.05。MS-ESI m/z(％)：494[M+Na]⁺(100)。MS-MS(494)：438(17)，394(100)。
把MsCl(0.8ml，0.6mM)滴入5℃ N-叔丁氧基羰基N-[(R)-乙基2-[4-[2-((1R，2S)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苯氧基]丙烷(101mg，0.27mM)和三乙胺(0.14ml，1.08mM)的溶液中。混合物室温放置72小时[TLC(硅胶；流动相：乙酸乙酯/石油醚＝3∶7)]。接着，反应混合物用HCl(1M)和饱和NaHCO₃水溶液洗涤。有机相用无水Na₂SO4干燥，过滤，减压除去溶剂。对粗反应产物用柱层析法(硅胶；流动相：乙酸乙酯/石油醚＝3∶7)分离产物。得到108mg(R)-2-[4-[2-((4S，5S)-4-甲基-5-苯基恶唑烷-2-酮)乙基]苯氧基]丙酸乙酯，为黄色油(定量得率)。[α]D＝+16.1(c1.05，CH Cl₃)。FT-IR(净相)：3063，2985，2930，2253，1751，1612，1512，1458，1417，1377，1266，1238，1200，1135，1017，910，826，736cm^-1.¹NMRs(400MHz，CD Cl₃，δ)：7.34-7.19(m，5H，芳香质子)；7.06-7.04(m，2H，芳香质子)；6.75-6.73(m，2H，芳香质子)；4.82-4.80(d，1H，J＝7.2Hz，CHC6H5)；4.68-4.63(q，1H，J＝6.8Hz，CH₃CHCO)；4.20-4.14(q，2H，J＝7.1Hz CH₂CH₃)；3.67-3.60(m，1H，CH₃CHNH)；3.50-2.70(m，4H，CH₂CH₂)；1.57-1.56(d，3H，J＝6.8Hz，OCHCH₃)；1.22-1.19(m，6H，CH₃CH₂和CH₃CHNH)。¹³C NMRs(100MHz CD Cl₃，δ)：172.43，157.57，156.56，138.05，131.44，130.06，129.10，129.01，126.09，115.44，82.63，72.86，61.47，59.63，43.33，33.06，18.76，17.78，14.35。MS-ESIm/z(％)：420[M+Na]⁺(100)。MS-MS(420)：420(14)，392(100)，376(56)，320(65)，213(15)，141(7)。
实施例12-22
酸的制备(通式(II)所示的化合物，R₅＝H)
把1N NaOH(8.4ml，8.4mM)加入到4.2摩尔实施例1-10中任一种酯在THF(10ml)中的溶液中。混合物室温搅拌1小时。真空除去THF，加入2N HCl至pH＝6。形成的沉淀溶解在水中，并用水洗涤。残留物用丙酮处理，得到晶体产物。
由此，得到以下化合物：
(±)-2-{4-[2-(2-苯基2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}-2-甲基丙酸(1a)(实施例12)
Pf223℃(dec)，白色固体(得率为35％)。FT-IR(KBr)：3650-3200，3000，2987，2935，2792，1613，1560，1512，1462，1402，1362，1243，1199，1151，837，703cm^-1.¹NMRs(300MHz DMSO-d₆δ)：1.38(s，6H，C(CH₃)₂)，2.57-2.82(m，6H，CH₂CHOH，CH₂NH，CH₂CH₂NH)，3.00-4.60(bs，3H，OH，NH和COOH：与重水交换)，4.72(dd，J＝5.8和2.6Hz，1H，CHOH)，6.69-6.72(m，2H，芳香质子)，6.86-6.88(m，2H，芳香质子)，7.19-7.34(m，5H，芳香质子)。MS-ESI m/z(％)：344[M+H]⁺(100％)。MS-ESI m/z(％)：342[M-H]-(100％)。分析(C₂₀H₂₅NO₄)：C，H，N。
(2R)-(-)-2-{4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}-2-甲基丙酸(1b)(实施例13)
Pf232-233℃(dec.)，白色固体(得率为61％)。[α]D＝-21.3(c＝0.34，CH₃COOH)。分析数据与(1a)的数据相同。
(2S)(+)-2-{4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}-2-甲基丙酸(1c)(实施例14)
Pf232-233℃(dec.)，白色固体(得率为45％)。[α]D＝+23.6(c＝0.86，CH₃COOH)。分析数据与(1a)的数据相同。
(±)-2-{4-[2-(2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}丙酸(1d)(实施例15)
Pf 165-166℃，白色固体(得率为42％)。FT-IR(KBr)：3600-3200，2998，2807，1613，1585，1511，1453，1423，1227，1138，1099，1037，932，816，747，698cm^-1。¹NMRs(500MHz乙酸-d4δ)：1.61(d，J＝6.8Hz，3H，CHCH₃)，3.06-3.08(m，2H，CH₂CH₂NH)，3.27(dd，J＝12.5和10.7Hz，1H，CH₂CHOH)，3.31-3.37(m，2H，CH₂NH)，3.41(dd，J＝12.5和2.5Hz，1H，CH₂CHOH)，4.84(q，J＝6.8Hz，1H，CHCH₃)，5.26(dd，J＝10.7和2.5Hz，1H，CHOH)，6.86-6.88(m，2H，芳香质子)，7.18-7.19(m，2H，芳香质子)，7.28-7.31(m，1H，芳香质子)，7.34-7.37(m，2H，芳香质子)，7.39-7.41(m，2H，芳香质子)。¹³C NMRs(75MHz CDCl₃，δ)：17.84，31.24，49.56，54.15，69.45，72.18，115.50，126.04，128.43，128.78，129.76，130.12，140.26，156.91，176.99。MS-ESI m/z(％)：330[M+H]⁺(100％)。MS-ESI m/z(％)：328[M-H]-(100％)。分析(C19H₂3NO₄)：C，H，N.。
(2S)-(+)-2-{4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}丙酸(1e)(实施例16)
Pf202℃(dec.)，白色固体(得率为45％)。[α]D＝+0.68(c＝1.19，CH₃COOH)。分析数据与(1d)的数据相同。
(2S)-(-)-2-{4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}丙酸(1f)(实施例17.
Pf 193-194℃，白色固体(得率为41％)。[α]D＝-48.2(c＝1.04，CH₃COOH)。分析数据与(1d)的数据相同。
(2R)-(+)-2-{4-[2-((2S)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}丙酸(1g)(实施例18)
Pf 193-194.5℃，白色固体(得率为65％)。[α]D＝+44.89(c＝1.00，CH₃COOH)。分析数据与(1d)的数据相同。
(2R)-(-)-2-{4-[2-((2R)-2-苯基-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基}丙酸(1h)(实施例19)
Pf202℃(dec.)，白色固体(得率为48％)。[α]D＝-0.41(c＝0.92，CH₃COOH)。分析数据与(1d)的数据相同。
2-[4-[2-((R)-2-(3-氯苯基)-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙酸(1i)(实施例20).
把1N NaOH(1ml，0.99mM)加入到乙基2-[4-[2-((R)-2-(3-氯苯基)-2-羟基乙基氨基)乙基]苯氧基]-2-甲基丙烷(200mg，0.49mM)在THF(2ml)中的溶液中。反应在室温下进行42小时。然后，减压除去溶剂，滴入1M HCl至pH＝6。形成沉淀物，过滤，用水和乙醇洗涤3次。得到90mg产物(得率为47％)。Pf218.5-220.3℃s。FT-IR(净相)：3465，2998，2930，2778，2454，1892，1614，1557，1511，1463，1432，1403，1361，1243，1198，1151，1028，836，782，693，607cm-1；1H NMRs(400MHz CD3COOD，δ)：7.42(s，1H，NH)；7.42-7.23(m，4H，芳香质子)；7.16-7.14(d，2H，J＝8.3Hz，芳香质子)；6.89-6.88(d，2H，J＝8.3Hz，芳香质子)；5.20-5.18(m，1H，CHOH)；3.44-3.24(m，4H，J＝7.1Hz，CH₂NH CH₂)；3.04-3.00(m，2H，CH₂C₆H₄)；2.36(s，6H，C(CH₃)₂)。¹³C NMRs(100MHz CD Cl₃，δ)：174.27，153.91，144.43，134.30，132.53，129.67，129.95，127.62，125.94，123.92，119.39，79.05，70.42，61.38，56.37，50.38，34.62，25.31，14.06。MS-ESI m/z(％)：378[M+H]⁺(100)。MS-MS(378)：360(100)，274(41)，207(57)，121(76)。对C₂₀H₂₃NO₄C1分析计算：C，63.79；H，6.14；N，3.71。结果发现：C，64.06；H，6.10；N，3.98。
(R)-2-[4([2-((1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1j)(实施例21)
室温下使乙基(R)-2-[4-[2-((1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苯氧基]丙烷(210mg，0.6mM)在1N NaOH(1mL)和THF(2mL)中的溶液磁力搅拌5小时。然而，向反应混合物滴入2N HCl(2mL)。形成沉淀物，过滤，在甲醇中结晶析出，再在热丙醇中重结晶。得到白色固体(得率为44％)。Pf 140℃(dec.)。[α]D＝+22.7(c0.50，甲醇)。FT-IR(KBr)：3417，3301，2923，2852，1735，1614，1555，1513，1456，1384，1241，1136，1084，1049，991，827，743，704cm^-1。¹NMRs(500MHz，CD3COOD，δ)：10.76(bs，1H，COOH：与重水交换)；7.45-6.90(m，9H，芳香质子)；5.21-5.20(d，1H，J＝3.6Hz，CHOH)；4.92-4.88(m，1H，CH₃CHCO)；3.56-3.54(m，1H，CH₃CHNH)；3.34-3.33(m，4H，NHCH₂和OH)；3.07-3.03(m，2H，NHCH₂CH₂)；1.60-1.59(d，3H，J＝6.5Hz，CH₃CHCOOH)；1.11-1.09(d，3H，J＝7.0Hz，CH₃CHNH)。¹³C NMRs(125MHz CD Cl₃，δ)：176.33，158.27，141.64，130.98，130.92，129.55，128.92，126.95，116.61，73.57，71.59，60.46，52.77，32.61，18.84，10.13。MS-ESI m/z(％)：342[M+H]⁺(100)。MS-MS(342)：342(7)，298(4)，270(100)，162(2)。
(R)-2-[4-[2-((1S，2S)-1-羟基-1-苯基丙-2-基-氨基)乙基]苯氧基]丙酸(1k)(实施例22)
使化合物乙基(R)-2-[4-[2-((4S，5S)-4-甲基-5-苯基恶唑烷-2-酮)乙基]苯氧基]丙烷(108mg，0.27mM)和KOH(75mg，1.35mmol)在水(1ml)和二恶烷(1ml)的混合物回流36小时[TLC(洗脱液，乙酸乙酯/石油醚＝8/2)]。混合物减压浓缩，将残留物溶解在水中，然后加入2N HCl直至形成白色沉淀物(37mg，得率为30％)。Pf 145℃s(dec)。[α]D＝+5.8(c 0.92，CH Cl₃)。FT-IR(KBr)：3057，2981，2928，l745，1511，1451，1422，1236，1130，1098，1015，759，701cm^-1。¹NMRs(500MHz，CD Cl₃，δ)：10.70(bs，1H，COOH与重水交换)；7.40-7.20(m，5H，芳香质子)；7.11-7.09(d，2H，芳香质子)；6.79-6.78(d，2H，芳香质子)；4.95-4.93(d，1H，J＝7.5Hz，CHOH)；4.72-4.68(q，1H，J＝6.6Hz OCHCOOH)；3.70-3.64(m，3H，CH₃CHNH和OH)；3.55-2.75(m，4H，CH₂CH₂)；1.56-1.55(d，3H，J＝6.6Hz，CH₃CHCOO)；1.26-1.25(d，3H，J＝6.0Hz，CH₃CHNH)。¹³C NMRs(125MHz CD Cl₃，δ)：176.38，159.71，158.01，139.50，132.47，131.01，130.03，129.94，129.21，127.18，116.57，116.35，116.29，73.81，60.88，84.04，43.83，33.53，19.02，17.70。
通式(II)所示的化合物
实施例23
(S)-1-(杂)芳基氧基-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷的制备
通用程序
把1-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪(717mg，2.8mM)和(S)-(杂)芳基氧基甲基环氧乙烷(2mM)(按已知方法制备)在无水甲醇(20ml)中的溶液在氮气气氛下回流，直至完成。然后，真空除去溶剂。把粗产物溶解在乙酸乙酯中，有机相用水洗涤，无水Na₂SO₄干燥，过滤，真空除去溶剂。
实施例24
(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-苯氧基丙烷(2a)
制备方法参照实施例23。
反应时间：24小时。对粗反应产物进行柱层析法(硅胶；流动相：石油醚/乙酸乙酯＝6∶4，然后是1∶1)，分离得到的产物为白色固体(得率为50％)。Pf 136.0-138.0℃(CHCl₃/己烷)。[α]D＝-11.7(c 0.98，CHCl₃)。FT-IR(KBr)：3496，3030，2950，2851，2819，1600，1577，1500，1465，1345，1331，1303，1248，1136，1112，1095，1040，1022，998，990，950，884，847，816，806，752，733，693cm^-1。¹NMRs(300MHz CD Cl₃，δ)：7.72-7.67(m，2H，芳香质子)；7.29-7.23(m，2H，芳香质子)；7.03-6.98(m，2H，芳香质子)；6.97-6.92(m，1H，芳香质子)；6.90-6.86(m，2H，芳香质子)，4.08-4.02(m，1H，CHOH)；3.94-3.92(m，2H，C6H5OCH₂)；3.88(s，3H，OCH₃)；3.20-2.90(bs，5H，OH与重水交换，和2哌嗪CH₂N)；2.79-2.72(m，2H，哌嗪CH₂N)；2.63-2.53(m，4H，哌嗪CH₂N和CHOHCH₂N)。¹³C NMRs(75MHzCD Cl₃，δ)：163.41，158.75，130.15，129.71，127.19，121.37，114.74，114.53，77.46，70.15，66.03，60.51，55.87，52.72，46.21。MS-ESI m/z(％)：407[M+H]⁺(10)；429[M+Na]⁺(100)。对C₂₀H₂₆N₂O₅S分析计算：C，59.09；H，6.45；N，6.89。结果发现：C，59.38；H，6.33；N，7.03。
实施例25
(S)-2-羟基-1-(4-羟基苯氧基)-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2b)
把10％Pd/C(290mg)悬于(S)-1-(4-苄氧基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基)丙烷(实施例26)(583mg，1.14mM)在CH₂Cl₂(10ml)中的溶液中，并在氢气气氛(1atm)下搅拌18小时。硅藻土过滤反应混合物，除去催化剂，真空蒸馏去掉溶剂。油状残留物在乙酸乙酯/石油醚中结晶析出。得到白色固体(得率为90％)。Pf 148.3-149.2℃s。[α]D＝-7.6(c 1.07，CH Cl₃)。FT-IR(KBr)：3466，3050，2969，2941，2921，2896，2864，1593，1576，1511，1468，1458，1445，1348，1328，1306，1254，1234，1200，1177，1165，1136，1101，1051，1017，946，833，804，737cm^-1。¹NMRs(500MHz CD3OD，δ)：7.90-7.80(bs，1H，OH)；7.71-7.68(m，2H，芳香质子)；7.13-7.10(m，2H，芳香质子)；6.75-6.73(m，2H，芳香质子)；6.68-6.66(m，2H，芳香质子)；4.00-3.98(m，1H，CHOH)，3.88(s，3H，OCH₃)，3.86-3.83(dd，1H，J＝9.7和4.4Hz，CH₂OAr)；3.80-3.77(dd，1H，J＝9.7和5.9Hz，CH₂OAr)；3.70-3.50(bs，1H，OH)；2.98(m，4H，2哌嗪CH₂N)；2.60(m，4H，2哌嗪CH₂)；2.55-2.52(dd，1H，J＝13.0和4.8Hz，CHOHCH₂N)；2.50-2.46(dd，1H，J＝13.0和7.5Hz，CHOHCH₂N)。¹³C NMRs(75MHz CD3OD，δ)：163.72，152.47，150.31，129.97，126.98，115.60，115.55，114.25，71.35，67.31，60.45，55.08，52.81，46.07。MS-ESI m/z(％)：445[M+Na]⁺(100)。MS-MS(445)：445(100)，335(69)，292(54)，279(13)，250(8)，222(32)。对C₂₀H₂₆N₂O₅S分析计算：C，56.86；H，6.20；N，6.63。结果发现：C，57.03；H，6.16；N，6.66。
实施例26
(S)-1-(4-苄氧基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2c)
制备方法参照实施例23。
反应时间：24小时。对粗反应产物进行柱层析法(硅胶；流动相：CH₂Cl₂/乙酸乙酯/石油醚＝2∶5∶3)，分离得到的产物为白色固体(得率为64％)。Pf 149.8-151.6℃(甲醇)。[α]D＝-7.9(c 1.0CH Cl₃)。FT-IR(KBr)：3506，3051，2986，2979，2906，2853，2746，1597，1574，1506，1456，1413，1383，1349，1328，1309，1230，1155，1104，1059，1028，927，877，832，804，788，736，698cm^-1。¹NMRs(300MHz CD Cl₃，δ)：2.51-2.63(m，4H，2CH₂哌嗪)；2.73-2.80(m，2H，CH₂N)；3.05(m，4H，2CH₂哌嗪)；3.87-3.89(m，5H，CH₃O和CH₂O)；4.02-4.04(m，1H，CHOH)；5.00(s，2H，CH₂C6H₅)；6.79-6.84(m，2H，芳香质子)；6.86-6.91(m，2H，芳香质子)；6.99-7.03(m，2H，芳香质子)；7.29-7.43(m，5H，芳香质子)；7.67-7.72(m，2H，芳香质子)。¹³C NMRs(75MHz CD Cl₃，δ)：46.19，52.70，55.88，60.51，66.02，70.86，114.55，115.70，116.03，127.08，127.71，128.16，128.80，130.16，137.39，153.10，153.49，163.42。MS-ESI m/z(％)：535[M Na]+(100％)。MS-MS(238)：535(7)，444(100)，292(17)，222(8)。对C₂₇H₃₂N₂O₃S分析计算：C，63.26；H，6.29；N，5.46。结果发现：C，63.24；H，6.28；N，5.41。
实施例27
(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(3-硝基苯氧基)-丙烷(2d)
制备方法参照实施例23。
反应时间：24小时。通过柱层析法(硅胶；流动相：石油醚/乙酸乙酯＝2∶8)分离得到产物，为一种油(得率为87％)。[α]D＝-11.0(c 1.15，CH Cl₃)。FT-IR(净相)：3499，3092，3058，2923，2849，1617，1596，1580，1528，1498，1457，1349，1325，1303，1255，1182，1162，1093，1064，1028，945，836，805，737，706cm^-1。¹NMRs(300MHz CDCl₃，δ)：7.84-7.80(m，1H，芳香质子)；7.73-7.65(m，3H，芳香质子)；7.44-7.39(dd，1H，J＝8.2和8.0Hz，芳香质子)；7.26-7.20(m，1H，芳香质子)；7.03-6.96(m，2H，芳香质子)，4.15-3.94(m，3H，O₂NC₆H₄OCH₂和CHOH)；3.88(s，3H，OCH₃)；3.15-2.75(bs，5H，2哌嗪CH₂N和OH：与重水交换)；2.81-2.74(m，2H，CHOHCH₂N)；2.64-2.52(m，4H，2哌嗪CH₂N)。¹³C NMRs(75MHz CDCl₃，δ)：163.44，127.10，159.34，149.37，130.24，130.14，121.93，116.40，114.55，109.08，70.87，65.72，60.15，55.88，52.67，46.20.MS-ESI m/z(％)：474[M+Na]⁺(100)。对C₂₀H₂₅N₃O₇S分析计算：C，53.21；H，5.54；N，9.31。结果发现：C，53.14；H，5.51；N，9.41。
实施例28
(S)-1-(3-氨基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷(2e)
把20％Pd(OH)₂/C[1.54g，2.2mM Pd(OH)₂]悬于(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基)-1-(3-硝基苯氧基)丙烷(3.30g，7.73mM)(实施例27)在乙酸乙酯(43ml)中的溶液中，并在氢气气氛(10atm)下搅拌30小时。硅藻土过滤反应混合物，除去催化剂，真空蒸馏去掉溶剂。得到白色固体(得率为97％)。Pf 138.5-139.6℃s。[α]D＝-10.7(c 1.06，CHCl₃)。FT-IR(KBr)：3456，3371，3100，3063，2945，2916，2853，1597，1576，1497，1456，1343，1328，1302，1263，1195，1161，1096，948，839，809，773，737，694，660cm^-1。¹NMRs(300MHz CD Cl₃，δ)：7.71-7.67(m，2H，芳香质子)；7.05-6.98(m，3H，芳香质子)；6.30-6.29(d，1H，J＝2.2Hz，芳香质子)；6.27-6.26(m，1H，芳香质子)；6.23-6.22(t，J＝2.2Hz，1H，芳香质子)；4.05-3.97(m，1H，CHOH)；3.89-3.88(m，5H，CH₂O和OCH₃)，3.70-3.10(bs，2H，NH₂)；3.10-2.85(bs，5H，2哌嗪CH₂N和OH)；2.79-2.69(m，2H，哌嗪CH₂N)；2.58-2.45(m，4H，哌嗪CH₂N和CHOHCH₂N)。¹³C NMRs(75MHz CD3OD，δ)：163.39，159.95，148.03，130.35，130.16，127.15，114.51，108.55，104.67，101.90，70.09，66.07，60.46，55.87，52.69，46.28.MS-ESI m/z(％)：444[M+Na]⁺(100)。对C₂₀H₂₇N₃O₅S分析计算：C，56.99；H，6.46；N，9.97。结果发现：C，56.91；H，6.41；N，9.69。
实施例29
(S)-1-(3-取代的磺酰基氨基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷的制备：
通用方法
把乙酸酐(1.67ml，17.6mM)加入到(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基)-1-(3-硝基苯氧基)丙烷(1.99g，4.4mM)(实施例27)在CH₂Cl₂(4ml)和吡啶(2ml)中的溶液中。混合物室温搅拌21小时。然后先用1N HCl，再用饱和NaHCO₃水溶液处理。分离两相，有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，真空除去溶剂。得到一种油，对该种油进行柱层析法(硅胶，流动相：石油醚/乙酸乙酯＝1∶1)，分离得到产物(S)-2-乙酰氧基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(3-硝基苯氧基)丙烷(得率为69％)。[α]D＝-10.0(c 1.04，CHCl₃)。FT-IR(净相)：3092，2930，2850，1740，1597，1576，1531，1499，1458，1373，1350，1329，1307，1259，1234，1164，1095，944，805，737cm^-1。¹NMRs(400MHz CDCl₃，δ)：7.82-7.79(m，1H，芳香质子)；7.68-7.65(m，3H，芳香质子)；7.42-7.38(t，1H，J＝8.2Hz，芳香质子)；7.21-7.18(dd，1H，J＝8.4Hz，2.6和0.9Hz，芳香质子)；7.00-6.97(m，2H，芳香质子)；5.30-5.20(m，1H，CHOAc)；4.17-4.13(dd，1H，J＝10.3和3.5Hz，CH₂OAr)，4.12-4.08(dd，1H，J＝10.3和6.4Hz，CH₂OAr)；3.86(s，3H，OCH₃)；3.10-2.90(m，4H，2哌嗪CH₂N)；2.70-2.50(m，6H，2哌嗪CH₂N和CHOHCH₂N)；2.04(s，3H，CH₃CO)。¹³C NMRs(100MHz CDCl₃，δ)：170.29，163.03，158.88，149.03，129.99，129.81，126.92，121.81，116.15，114.21，108.63，94.40，68.08，57.36，55.56，52.74，46.01，21.04.MS-ESI m/z(％)：494[M+H]⁺(22)；516[M+Na]⁺(100).MS-MS(516)：516(3)，435(22)，434(100)，295(10)，269(26)，263(13)。对C₂₂H₂₇N₃O₈S分析计算：C，53.55；H，5.48；N，8.52。结果发现：C，53.51；H，5.41；N，8.69。
把10％Pd/C(70mg)悬于(S)-2-乙酰氧基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(3-硝基苯氧基)丙烷(1.406g，2.86mM)在乙酸乙酯(12ml)中的溶液中。反应混合物在氢气气氛(10atm)下搅拌24小时。硅藻土过滤除去催化剂，真空蒸馏去掉溶剂。得到含有(S)-2-乙酰氧基-1-(3-氨基苯氧基)-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷的油状产物(得率为99％)。
[α]D＝-12.8(c 1.06，CHCl₃)。FT-IR(净相)：3460，3381，2928，2851，1737，1597，1497，1458，1374，1347，1331，1303，1261，1240，1191，1164，1095，947，836，806，736cm^-1。¹NMRs(400MHz CDCl₃，δ)：7.68-7.64(m，2H，芳香质子)；7.08-6.96(m，3H，芳香质子)；6.28-6.23(m，2H，芳香质子)；6.19-6.18(dd，1H，J＝2.4和2.2Hz，芳香质子)；5.23-5.18(m，1H，CHOAc)，4.35-3.50(bs，2H，NH₂)；4.00-3.97(dd，1H，J＝10.5和4.1Hz，CH₂OAr)；3.97-3.93(dd，1H，J＝10.5和5.1Hz，CH₂OAr)；3.86(s，3H，OCH₃)；3.06-2.90(m，4H，2哌嗪CH₂N)；2.72-2.56(m，6H，2哌嗪CH₂N和CHOHCH₂N)；2.02(s，3H，CH₃CO)。¹³C NMRs(100MHzCDCl₃，δ)：170.51，163.07，159.56，147.83，130.08，129.87，126.96，114.26，108.32，104.300，101.69，69.36，67.23，57.56，55.63，55.60，55.56，52.65，45.88，21.18。MS-ESI m/z(％)：464[M+H]⁺(17)；486[M+Na]⁺(100)。MS-MS(486)：404(40)，295(6)，148(100)。对C₂₂H₂₉N₃O₆S分析计算：C，57.02；H，6.26；N，9.07。结果发现：C，56.99；H，6.21；N，9.09。
把合适的磺酰氯(1.2mM)加入到(S)-1-(3-氨基苯氧基)-2-乙酰氧基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基)丙烷(1mM)在CH₂Cl₂(1.2ml)和吡啶(0.5ml)中的溶液中。混合物室温摇动直至反应完成。然后用CH₂Cl₂稀释，并先后用饱和Na₂CO₃水溶液和水洗涤。有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤，真空蒸馏去掉溶剂。得到(S)-2-乙酰氧基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(3-磺酰基氨基苯氧基)丙烷。
把2N KOH(3ml，6mM)加入到(S)-2-乙酰氧基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(3-磺酰基氨基苯氧基)丙烷(1mM)在THF(10ml)中的溶液中。混合物室温强烈搅拌直至反应完成。加入水，然后用乙酸乙酯萃取。有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，真空蒸馏去掉溶剂。得到(S)-1-(3-烷基或芳基磺酰基氨基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷。按照类似方法，制备得到以下化合物。
实施例30
(S)-2-羟基-1-(3-甲烷磺酰基氨基苯氧基)-3-[4-(4-乙氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基)丙烷(2f)
反应时间：16小时。通过柱层析法(硅胶，流动相：石油醚/乙酸乙酯＝3∶7)分离得到产物，为灰色固体(得率为86％)。Pf 109.0-110.0℃(己烷)。[α]D＝-7.6(c 0.30，CHCl₃)。FT-IR(KBr)：3455，3267，3014，2929，2851，1597，1578，1498，1458，1399，1328，1261，1181，1162，1149，1095，1025，946，838，806，737cm^-1。¹NMRs(400MHz CDCl₃，δ)：7.71-7.64(m，2H，芳香质子)；7.24-7.20(dd，1H，J＝8.2和7.9Hz，芳香质子)；7.03-7.00(m，2H，芳香质子)；6.83-6.82(dd，1H，J＝3.8和2.0Hz，芳香质子)；6.76-6.74(dd，1H，J＝7.9和1.9Hz，芳香质子)；6.71-6.69(dd，1H，J＝8.2和2.4Hz，芳香质子)，4.06-4.01(m，1H，CHOH)；3.97-3.86(m，5H，O CH₃和CH₂OAr)；3.10-2.98(s，bs和am叠合，8H，CH₃SO₃，OH和2哌嗪CH₂N)；2.78-2.73(m，2H，NCH₂CHOH)；2.61-2.50(m，6H，3哌嗪CH₂N)。¹³C NMRs(100MHz CDCl₃，δ)：163.14，159.58，137.91，130.48，129.90，126.78，114.27，112.87，111.10，106.91，70.05，65.56，59.94，55.62，52.35，46.01，39.26。MS-ESI m/z(％)：500[M+H]⁺(3)，522[M+Na]⁺(100)。MS-MS(522)：522(55)，443(26)，335(22)，313(65)，292(11)，273(10)，272(100)，266(25)，222(18)。对C₂₁H₂₉N₃O₇S₂分析计算：C，50.49；H，5.85；N，8.41。结果发现：C，50.28；H，5.75；N，8.55。
实施例31
(S)-1-(3-苯磺酰基氨基苯氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基)丙烷(2g)
反应时间：17小时。通过柱层析法(硅胶，流动相：石油醚/乙酸乙酯＝3∶7)分离得到产物，为白色固体(得率为66％)。Pf 127.5-128.3℃(己烷)。[α]D＝-6.4(c 1.05CHCl₃)。FT-IR(KBr)：3503，3256，3100，3070，2924，2852，1597，1578，1498，1458，1448，1345，1329，1309，1261，1158，1112，1093，1025，946，836，806，736，689cm^-1。¹NMRs(400MHz CDCl₃，δ)：7.77-7.75(m，2H，芳香质子)；7.72-7.68(m，2H，芳香质子)；7.54-7.49(m，1H，芳香质子)；7.43-7.39(m，2H，芳香质子)；7.05-7.09(dd，1H，J＝8.2和8.1Hz，芳香质子)；7.03-6.99(m，2H，芳香质子)；6.72-6.71(t，1H，J＝2.2Hz，芳香质子)；6.62-6.58(m，2H，芳香质子)；4.04-3.98(m，1H，CHOH)；3.89-3.81(m，5H，OCH₃和CH₂OAr)；3.10-2.98(m，5H，2哌嗪CH₂N和OH)；2.76-2.72(m，2H，CHOHCH₂N)；2.57-2.46(m，4H，2哌嗪CH₂N)。¹³C NMRs(100MHz CDCl₃，δ)：163.25，159.05，138.90，137.64，133.02，130.08，129.86，129.01，127.13，126.72，114.38，113.82，111.42，107.69，69.79，65.29，60.27，55.62，52.50，45.37。MS-ESI m/z(％)：584[M+Na]⁺(100)。MS-MS(584)：443(15)，335(20)，335(20)，328(31)，313(51)，292(9)，272(100)，269(8)，222(30)，174(5)。对C₂₆H₃₁N₃O₇S₂分析计算：C，55.60；H，5.56；N，7.48；结果发现：C，55.64：H，5.65：N，7.34。
实施例32
(S)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基)-1-(3-噻吩磺酰基氨基苯氧基)丙烷(2h)
反应时间：19小时。通过柱层析法(硅胶，流动相：石油醚/乙酸乙酯＝4∶6)分离得到产物，为褐色固体(得率为70％)。Pf 123.0-123.9℃(dec)。[α]D＝-6.4(c 0.98，CHCl₃)。FT-IR(KBr)：3478，3252，3100，2925，2852，1596，1578，1498，1458，1404，1345，1329，1308，1262，1154，1113，1094，1020，946，836，806，736cm^-1。¹NMRs(400MHz CDCl₃，δ)：7.71-7.68(m，2H，芳香质子)；7.52-7.50(dd，1H，J＝4.9和1.3Hz，芳香质子)；7.49-7.48(dd，1H，J＝3.8和1.3Hz，芳香质子)；7.14-7.10(dd，1H，J＝8.2和8.1Hz，芳香质子)；7.02-7.00(m，2H，芳香质子)；6.99-6.97(dd，1H，J＝4.9和3.8Hz，芳香质子)；6.77-6.75(t，1H，J＝2.2Hz，芳香质子)，6.76-6.64(m，2H，芳香质子)；4.09-4.03(m，1H，CHOH)；3.92-3.85(m，6H，OCH₃，CH₂OAr和OH)；3.16-2.98(m，4H，2哌嗪CH₂N)；2.80-2.77(m，2H，CHOHCH₂N)；2.63-2.53(m，4H，2哌嗪CH₂N)。¹³C NMRs(100MHz CDCl₃，δ)：163.16，159.18，139.28，137.47，132.80，132.38，130.06，129.89，127.29，126.69，114.31，113.84，111.65，107.72，69.99，65.56，59.91，55.63，52.35，45.87，MS-ESIm/z(％)：590[M+Na]⁺(100)。MS-MS(590)：443(16)，335(30)，334(43)，314(9)，313(90)，273(10)，272(100)，269(12)，222(23)。对C₂₄H₂₉N₃O₇S₃分析计算：C，50.78；H，5.15；N，7.40。结果发现：C，50.72；H，5.02；N，7.22。
实施例33
(S)-2-羟基-1-(萘-1-基氧基)-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基)丙烷(2i)
制备方法参照实施例23。
反应时间：42小时。通柱层析法(硅胶，流动相：石油醚/乙酸乙酯＝2∶8)分离得到产物，为白色固体(得率为91％)。Pf67.1-68.0℃。[α]D＝-12.1(c 1.00CHCl₃)。FT-IR(KBr)：3449，3098，3053，2924，2850，2823，1596，1580，1498，1457，1348，1329，1303，1261，1241，1162，1100，1066，1021，947，836，805，794，773，736cm^-1。¹NMRs(400MHz CDCl₃，δ)：8.22-8.20(m，1H，芳香质子)；7.80-7.78(m，1H，芳香质子)；7.71-7.67(m，2H，芳香质子)；7.51-7.42(m，3H，芳香质子)；7.36-7.32(m，1H，芳香质子)；7.02-6.98(m，2H，芳香质子)；6.79-6.77(m，1H，芳香质子)；4.21-4.16(m，1H，CHOH)；4.14-4.06(m，2H，C₁₀H₇OCH₂)；3.86(s，3H，OCH₃)；3.10-2.82(bs，5H，OH：与重水交换，和2哌嗪CH₂N)；2.78-2.73(m，2H，哌嗪CH₂N)；2.69-2.62(m，2H，CHOHCH₂N)；2.60-2.55(m，2H，哌嗪CH₂N)。¹³C NMRs(100MHz CDCl₃，δ)：167.90，158.94，139.19，134.65，132.27，131.52，131.24，130.51，130.21，130.04，126.51，125.43，109.62，119.02，75.00，70.66，65.20，60.40，57.21，50.76。MS-ESI m/z(％)：457[M+H]⁺(80)；479[M+Na]⁺(100)。MS-MS(479)：313(100)，269(26)，183(12)。对C₂₄H₂₈N₂O₅S分析计算：C，63.14；H 6.18；N，6.14。结果发现：C，63.17；H，6.20；N，5.90。
实施例34
(S)-1-(咔唑-4-基氧基)-2-羟基-3-[4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基)丙烷(2j)
制备方法参照实施例23。
反应时间：24小时。通柱层析法(硅胶，流动相：石油醚/乙酸乙酯＝1∶1)分离得到白色固体(CHCl₃/乙醚)，得率为52％。FT-IR(KBr)：3404，3057，2926，2840，1596，1508，1497，1456，1347，1331，1305，1262，1161，1097，1024，947，836，806，786，755，735cm^-1。¹NMRs(300MHz CDCl₃，δ)：2.54-2.65(m，2H，CH₂N)，2.67-2.69(m，2H，CH₂哌嗪)，3.04(m，4H，2CH₂哌嗪)，3.87(s，3H，CH₃O)，4.16-4.26(m，2H，CH₂O)，6.60-6.63(d，J＝8.0Hz，1H，芳香质子)，6.97-7.02(m，2H，芳香质子)，7.02-7.05(d，J＝7.7Hz，1H，芳香质子)，7.18-7.40(m，4H，芳香质子)，7.67-7.72(m，2H，芳香质子)，8.20-8.22(m，2H，1芳香质子和NH，与重水交换)。¹³C NMRs(75MHz DMSO-d₆δ)：46.24，52.71，55.88，60.80，66.28，70.28，101.35，104.25，110.40，112.87，114.53，119.86，122.63，123.02，125.30，126.85，127.04，130.17，138.97，141.16，155.22，163.40。MS-ESI m/z(％)：238[M-H]-(100％)。MS-MS(494)：297(100)，253(7)，241(14)，196(11)，181(5)，156(5)。
通式(I)化合物的中间体的制备
实施例35
按照以下流程1的方法，使经酰化反应制备的通式(IV)所示的化合物的前体与Et₃SiH进行还原反应，得到通式(IV)所示的化合物，

流程1-反应：(I)(卤素)乙酰卤化物，AlCl₃，CH₂Cl₂/回流；(ii)Et₃SiH，TFA，70℃。
通式(II)化合物的中间体的制备
实施例36
1-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪的合成
把4-甲氧基苯磺酰氯(6.2g，30mM)在CH₂Cl₂(180ml)中的溶液加入到哌嗪(12.9g，150mM)在CH₂Cl₂(570ml)和吡啶(2.7ml)中的溶液中。溶液在室温搅拌15小时。然后真空除去溶剂。把残留物溶解在3N HCl中，用乙醚洗涤。除去有机相，使水相碱化，用乙酸乙酯萃取。有机相用Na₂SO₄干燥，真空除去溶剂。得到白色固体(得率为88％)。P.f.：184.3-185.6℃。FT-IR(KBr)：3082，3058，2975，2944，2907，2840，2810，1597，1580，1495，1465，1442，1413，1346，1318，1298，1286，1254，1179，1159，1110，1095，1066，1027，947，830，805，734，657，634cm^-1。¹NMRs(300MHz CDCl₃，δ)：2.48-2.51(m，4H，2CH₂哌嗪)，2.88-2.94(m，5H，2CH₂哌嗪和NH)，3.86(s，3H，OCH₃)，6.95-7.00(m，2H，芳香质子)，7.64-7.68(m，2H，芳香质子)。¹³C NMRs(75MHz CDCl₃，δ)：46.25，50.57，55.85，77.82，77.25，77.67，79.95，114.40，114.58，127.32，130.12，163.27。GC-MS(70eV)m/z(int.rel.)：258[(34S)M+，1]，256[(32S)M+，10]，171(8)，108(7)，92(10)，85(100)，77(11)，64(6)，63(4)，56(30)。分析(C₁₁H₁₆N₂O₃S)：计算：C，51.54；H，6.29；N，10.93。结果发现：C，51.59；H，6.25；N，10.96。
实施例37
(S)-(杂)芳基氧基甲基环氧乙烷的合成：通用方法
把适量的苯酚(7.7mM)加入到氢化钠(185mg，7.7mM)在无水N，N-二甲基甲酰胺(40ml)的悬液中，在氮气气氛和室温下搅拌。当化合物变得澄清时，滴入(S)-间硝基苯磺酸缩水甘油酯(2g，7.7mM)在无水N，N-二甲基甲酰胺(40ml)中的溶液中。混合物室温搅拌直至反应完成。然后用水稀释，用乙酸乙酯萃取4次。合并的有机相先后用饱和Na₂CO₃溶液和水洗3次，Na₂SO₄干燥，真空除去溶剂。
实施例38
(S)-(4-苄氧基苯氧基)甲基环氧乙烷
反应时间：21小时。P.f.：77.2-78.6℃(乙酸乙酯/己烷)，为白色固体。得率为65％。[α]D＝+2.87(c 1.01 CHCl₃)。FT-IR(KBr)：3104，3062，3035，3010，2908，2876，2861，2918，1510，1452，1466，1386，1337，1288，1239，1225，1136，1120，1041，1030，1018，995，918，860，826，782，733，692cm^-1。¹NMRs(300MHz CDCl₃，δ)：2.73-2.76(dd，J＝2.7Hz和4.9Hz，1H，CH₂环氧化物)，2.88-2.91(dd，J＝4.1Hz和4.9Hz，1H，CH₂环氧化物)，3.31-3.36(m，1H，CH环氧化物)，3.89-3.94(dd，J＝5.5Hz和11.0Hz，1H，CH₂O)，4.15-4.19(dd，J＝3.3Hz和11.0Hz，1H，CH₂O)，5.02(s，2H，CH₂C₆H₅)，6.82-6.94(m，4H，芳香质子)，7.29-7.44(m，5H，芳香质子)。¹³C NMRs(75MHz CDCl₃，δ)：44.97，50.49，69.70，70.87，115.91，116.05，127.72，128.15，128.79，137.43，153.08，153.60.GC-MS(70eV)m/z(int.rel.)：256(M+，22)，165(4)，109(2)，91(100)，65(8)，57(7)。分析(C₁₆H₁₆O₃)：计算：C，74.98；H，6.29。结果发现：C，74.80；H，6.33。
实施例39
(S)-(咔唑-4-基氧基)甲基环氧乙烷
反应时间：14小时，为褐色固体。层析法：硅胶，流动相：石油醚/乙酸乙酯＝7∶3。得率为79％。[α]D＝+17.2(c 1.06CH Cl₃)。FT-IR(KBr)：3295，3078，3017，2926，1851，1630，1610，1587，1510，1456，1444，1349，1337，1306，1288，1265，1226，1215，1096，1015，904，860，796，784，755，725cm^-1。¹NMRs(300MHz DMSO-d₆δ)：2.82-2.84(dd，J＝2.5Hz和4.9Hz，1H，CH₂环氧化物)，2.90-2.93(dd，J＝4.4Hz和4.9Hz，1H，CH₂环氧化物)，3.50-3.55(m，1H，CH环氧化物)，4.04-4.10(dd，J＝6.3Hz和11.3Hz，1H，CH₂O)，4.51-4.56(dd，J＝2.5Hz和11.3Hz，1H，CH₂O)，6.66-6.69(d，J＝8.0Hz，1H，芳香质子)，7.07-7.10(d，J＝8.2Hz，1H，芳香质子)，7.12-7.17(t，J＝7.4Hz，1H，芳香质子)，7.25-7.36(m，2H，芳香质子)，7.46-7.43(d，J＝8.0Hz，1H，芳香质子)，8.15-8.17(d，J＝7.7Hz，1H，芳香质子)，11.28(br s，1H，NH与重水交换)。¹³C NMRs(75MHz DMSO-d₆δ)：44.50，50.62，69.44，101.35，104.93，111.16，112.16，119.34，122.25，122.98，125.35，127.14，139.64，141.81，155.17。MS-ESI m/z(％)：238[M-H]-(67％)。MS-MS(238)：220(12)，208(17)，194(48)，183(9)，182(100)，181(5)。分析(C₁₅H₁₃NO₂)：计算：C，75.30；H，5.48；N，5.85。结果发现：C，75.28；H，5.50；N，5.86。
实施例40
(S)-2-乙酰氧基-1-(3-甲烷磺酰基氨基苯氧基)-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷
制备方法参照实施例29。
反应时间：17小时。对粗反应产物进行柱层析法(硅胶，流动相：石油醚/乙酸乙酯＝4：6)，分离得到产物，为一种油，得率为75％。[α]D＝-8.3(c 1.00 CHCl₃)。FT-IR(净相)：3453，3263，2929，2851，1739，1597，1499，1458，1329，1261，1238，1163，1149，1095，947，806，737cm^-1。¹NMRs(400MHz CDCl₃，δ)：7.68-7.64(m，2H，芳香质子)；7.20-7.16(t，1H，J＝8.1Hz，芳香质子)；7.12(bs，1H，NH)；7.00-6.96(m，2H，芳香质子)；6.81-6.80(t，1H，J＝2.2Hz，芳香质子)；6.78-6.76(dd，1H，J＝7.9和1.5Hz，芳香质子)；6.66-6.64(m，1H，芳香质子)；5.24-5.17(m，1H，CHOAc)；4.05-4.01(dd，1H，J＝10.3和3.8Hz，CH₂OAr)；4.01-3.97(dd，1H，J＝10.3和5.1Hz，CH₂OAr)；3.85(s，3H，OCH₃)；3.02-2.92(m，7H，CH₃SO₃和2哌嗪CH₂N)；2.65-2.55(m，6H，2哌嗪CH₂N和CHOHCH₂N)；2.02(s，3H，CH₃CO)。¹³C NMRs(100MHz CDCl₃，δ)：170.46.163.02，159.38，138.10，130.36，129.86，129.79，126.91，114.19，112.97，111.18，106.91，69.19，67.55，57.48，55.62，55.51，52.64，45.97，39.11，21.10。
实施例41
(S)-2-乙酰氧基-1-(3-苯磺酰基氨基苯氧基)-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]丙烷
制备方法参照实施例29。
反应时间：17小时。通过柱层析法(硅胶，流动相：石油醚/乙酸乙酯＝4∶6)分离得到产物，为一种油，得率为80％。[α]D＝-9.5(c 0.99，CHCl₃)。FT-IR(净相)：3433，3257，3066，2922，2850，1739，1597，1498，1458，1346，1330，1262，1238，1156，1094，947，736cm^-1。¹NMRs(400MHz CDCl₃，δ)：7.78-7.76(m，2H，芳香质子)；7.68-7.65(m，2H，芳香质子)；7.53-7.50(m，1H，芳香质子)；7.42-7.38(dd，2H，J＝8.0和7.3Hz，芳香质子)；7.35-7.30(bs，1H，NH)；7.06-7.02(t，1H，J＝8.2Hz，芳香质子)；7.00-6.96(m，2H，芳香质子)；6.71-6.70(t，1H，J＝2.2Hz，芳香质子)，6.61-6.56(m，2H，芳香质子)；5.22-5.14(m，1H，CHOAc)；3.99-3.95(dd，1H，J＝10.2和3.8Hz，CH₂OAr)；3.95-3.91(dd，1H，J＝10.2和5.3Hz，CH₂OAr)；3.85(s，3H，OCH₃)；3.02-2.90(m，4H，2哌嗪CH₂N)；2.70-2.50(m，6H，2哌嗪CH₂N和CHOHCH₂N)；2.03(s，3H，CH₃CO)。¹³C NMRs(100MHz CDCl₃，δ)：170.42，163.03，159.08，138.92，132.94，129.85，129.80，137.72，128.93，127.09，126.94，114.21，113.69，111.41，107.63，67.50，57.47，55.61，55.51，52.64，45.93，21.09。
实施例42
(S)-2-乙酰氧基-3-[4-(4-甲氧基苯基磺酰基)哌嗪-1-基]-1-(3-噻吩磺酰基氨基苯氧基)丙烷
制备方法参照实施例29。
反应时间：17小时。通过柱层析法(硅胶，流动相：石油醚/乙酸乙酯＝4∶6)分离得到产物，为一种油，得率为83％。[α]D＝-8.5(c 1.05，CH Cl₃)。FT-IR(净相)：3249，3103，2921，2851，1738，1596，1498，1457，1374，1345，1307，1262，1163，1094，1018，946，837，806，736，693cm^-1。¹NMRs(400MHz CDCl₃，δ)：7.71-7.65(m，2H，芳香质子)；7.51-7.48(m，3H，芳香质子)；7.39-7.33(abs，1H，NH)；7.11-7.07(dd，1H，J＝8.2和8.1Hz，芳香质子)；7.00-6.96(m，3H，芳香质子)；6.76-6.75(t，1H，J＝2.1Hz，芳香质子)；6.61-6.64(m，1H，芳香质子)；5.22-5.17(m，1H，CHOAc)；4.02-3.98(dd，1H，J＝10.4和3.8Hz，CH₂OAr)；3.98-3.94(dd，1H，J＝10.4和5.3Hz，CH₂OAr)；3.85(s，3H，OCH₃)；3.02-2.90(m，4H，2哌嗪CH₂N)；2.68-2.52(m，6H，2哌嗪CH₂N和CHOHCH₂N)；2.02(s，，CH₃CO)。¹³C NMRs(100MHz CDCl₃，δ)：170.48，163.03，159.11，139.29，137.49，132.80，132.40，129.86，129.80，127.30，126.92，113.85，114.22，111.81，107.75，67.54，57.46，55.63，55.53，52.64，45.94，21.11。
药理学活性
实施例43
β-3肾上腺素受体的活性的测定
通过测量表达克隆人β-3肾上腺素受体的CHO-K1细胞系中cAMP的水平来测定通式(I)化合物的β-3肾上腺素受体的活性。cAMP的积聚与化合物的β-3肾上腺素受体的活性直接相关，是配体有效性的预示衡量。采用离解-增强-镧系元素荧光免疫分析术(Dissociation Enhanced Lanthanide Fluorescence Immunoassay，DELFIA)(Gabriel，D.；Vernier，M.；Pfeifer，M.J.；Dasen，B.；Tenaillon，L.；Bouhelal，R.Assay和Drug Development Technologies 2003，1，291-303)来确定化合物1a-1h产生的cAMP的积聚，用DELFIA测定细胞系中cAMP的水平比[α-³²P]放射性同位素方法(Hoffmann，C.；Leitz，M.R.；Obendorf-Maass，S.；Lohse，M.J.；Klotz，K.-N.Naunyn-Schmiedeberg′s Arch.Pharmacol.2004，369，151-159)或[³H](Nannies，K.M.；Briend-Sutren，M.M.；Emorine，L.J.；Delavier-Klutchko，C.；Marullo，S.；Strosberg，A.D.Eur.J.Biochem.1991，196，357-361)的灵敏度和准确度要高。
表1.化合物1a-k和2a-2j的β-3肾上腺素受体活性


a)EC₅₀数值代表产生一半的最大积聚cAMP的配体浓度；
b)SEM，由至少3个实验得到的标准误差(n≥3)；
c)分别定义由异丙基肾上腺素(10^-4M)诱导的最大cAMP浓度和在不存在激动剂情况下得到的cAMP浓度为100％和0％，每个化合物的最大应答表示为固有活性(IA)；
d)nd＝未测定。
图1所示为化合物1a-1h的DELFIA测试结果(曲线对应于右边所示化合物的垂直顺序)。
为了验证配体(I)对克隆人肾上腺素β1-和β2-受体具有选择性，对化合物1a-1h进行结合测试(表2)。在结合实验采用的[³H]-二氢阿普洛尔(dihydroalprenolol)的浓度下(见生物方法部分)，特异性结合分别为总结合的大约76％和85％。所有配体对β1-和β2-肾上腺素受体的亲和力都很低(分别为K_i＞7000nM和K_i＞5000nM)。
表2化合物1a-1k和2a-2j对人β1-和β2-肾上腺素受体亚型的亲和力

a)按照Cheng-Prusoff的方程式(Cheng，Y.C.；Prusoff，W.H.Biochem.Pharmacol.1973，22，3099-3108)计算得到K_i(nM)；
b)nd＝未测定。
生物方法
细胞培养和膜的制备
把分别表达人肾上腺素受体三个亚型β1、β2或β3的“中国仓鼠卵巢细胞”(CHO)的细胞系在37℃、含5％CO₂和95％空气的大气下置于DMEM(Dulbecco′sModified Eagle Medium)培养基中生长，所述培养基含有加入了10％胎牛血清、2mML-谷氨酰胺、100单位/ml青霉素G和100μg/ml链球菌的F1₂(DMEM/F1₂)营养混合物。
预汇合细胞用冷PBS洗涤，从板的表面取出，收集在冷溶胞缓冲液(10×10⁶/ml；5mM Tris/HCl，2mM EDTA，pH 7.4，4℃)中，用Brinkmann Polytron均浆机均化(5次，3×10秒)。得到的细胞膜再在4℃、1000g均化10分钟。上清液在4℃、10000g离心30分钟。得到的膜沉淀物重悬于冷的培养缓冲液(β1-肾上腺素受体结合实验：50mM Tris/HCl，10mM MgCl₂，pH 7.4；β2-肾上腺素受体结合实验：50mM Tris/HCl，pH 7.4)中，然后测定其蛋白质含量。得到的膜悬液立即使用或者储存在-80℃，直至用在结合实验中。
化合物1a-1h对β1-和β2-肾上腺素受体的结合实验：
饱和度实验按照以下方法进行：使细胞膜(50μg蛋白质)在500μl培养缓冲液中培育，所述培养缓冲液含有浓度增加的[³H]-二氢阿普洛尔(0.1nM、0.5nM、1nM、3nM、5nM、10nM)。β1-肾上腺素受体在30℃培育30分钟，β2-肾上腺素受体则培育90分钟。与10μM烯丙洛尔(Alprenolol)进行平行培育，以测定非特异性结合。快速在Whatman GF/C玻璃纤维滤膜过滤，终止反应，所述玻璃纤维滤膜平衡60分钟，β1-肾上腺素受体采用0.5％聚乙烯亚胺平衡，β2-肾上腺素受体采用0.3％聚乙烯亚胺平衡。然后用冷培养缓冲液洗涤滤膜(3×1ml)。使用Beckmann LS6500多用途闪烁器测量滤膜的残留放射性。
竞赛实验按照以下方法进行：使50μg蛋白质与数量渐增的测试化合物(从10^-9M至10^-4M)以及4nM[³H]-二氢阿普洛尔(β1-肾上腺素受体)或者0.4nM[³H]-二氢阿普洛尔(β2-肾上腺素受体)在总体积500μl培养缓冲液中一起培养。在10μM烯丙洛尔存在下测量非特异性结合。然后终止反应，使用Beckmann LS6500多用途闪烁器测量放射性。
烯丙洛尔在表达β1-肾上腺素受体的CHO中K_D值是12.49nM，最大结合数Bmax是2970fmol/mg蛋白质，而烯丙洛尔在表达β2-肾上腺素受体的CHO中K_D值是0.50nM，Bmax是540fmol/mg蛋白质。
DELFIA cAMP-Eu分析测定β3-肾上腺素受体的活性
按照PerkinElmer Life Science提供的方法进行DELFIA试验，以便测量cAMP的水平。最佳实验条件(细胞数量、培养时间)如下。
使铺满一板的细胞胰蛋白酶化，并把细胞重悬于上述培养基中，96孔板每孔50000个细胞/200μl，在CO₂培养箱中培养过夜。每孔均吸出培养基，用100μl预热至37℃的不含血清的培养基质置换。再把孔板放回CO₂培养箱，在37℃保留30分钟。然后在所有孔都加入50μl IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)1mM，它是磷酸二酯酶的抑制剂。在某些孔中加入不同浓度(100nM、500nM、1μM、10μM、50μM)的50μl毛喉素(forskolin)(用来验证DELFIA的化合物)，在另外一些孔中加入与毛喉素相同浓度的50μl待测试化合物；再把孔板在37℃培养30分钟。此时，将细胞溶解，室温培育5分钟。立即对孔板进行测试，以确定cAMP的水平，或者储存在4℃直至进行测试。采用PerkinElmer 1420检测仪以多标记时间分辨荧光分析技术测量荧光。激发和发射波长分别是340nm和615nm。