老年性痴呆治疗用脂肪源干细胞.pdf

一种利用志愿者的脂肪组织分离培养出能够用于治疗老年性痴呆的脂肪源干细胞的制备方法，涉及基础医学、神经内科学领域。从志愿者的臀部、大腿及腹部抽吸脂肪组织，经分离提纯，在特定的培养基中进行扩增培养，在细胞总数达到一定数目后，通过静脉输注，治疗老年性痴呆。本细胞可用于老年性痴呆病人的治疗，具有获取容易且量大、不需要特定的血清或基质就可以稳定分化并低水平衰减、在体外增殖速度快，不必进行永生化处理就能获取足够的细胞用于移植等优点，且治疗效果确切，无明显副作用和不良反应。

1.  老年性痴呆治疗用脂肪源干细胞的制备方法，其特征是筛选健康青壮年人，签订脂肪组织捐献同意书，无菌条件下在志愿者的臀部或大腿或腹部抽吸脂肪组织，清除肉眼可见的小血管，PBS液冲洗3次以去除红细胞，剪碎，加入2倍体积的0.1%的Ⅰ型胶原酶，37℃下搅拌消化40min，200目筛网过滤，用等量的含10%胎牛血清的DMEM完全培养液中和胶原酶，800r/min离心6min，沉淀用完全培养液重悬细胞,，以1×10⁴/cm²的密度接种于75ml培养瓶,，放置于37℃，5%CO₂的培养箱中培养，每3d换一次液,至长满80%瓶底时传代。

2.  根据权利要求1所述的老年性痴呆治疗用脂肪源干细胞的制备方法，其特征是传至第4代的细胞即为移植所用细胞。

老年性痴呆治疗用脂肪源干细胞
技术领域
本发明专利是利用志愿者的脂肪组织分离培养出一种能够用于治疗老年性痴呆的脂肪源干细胞，涉及基础医学、神经内科学领域。
背景技术
老年性痴呆(阿尔茨海默病Alzheimer'sdisease)是指老年老化程度超过生理性老化，或过早老化，致使脑功能障碍，引起获得性、持续性智能障碍。衰老是整个机体形态结构和生理机能的全面衰退，是一个动态的、复杂的过程。当前预防和延缓衰老已成为生命科学研究的热点。筋膜学理论认为人体是由尚未分化的非特异性结缔组织（筋膜）支架所构成的支持与储备系统和以已分化功能细胞为基础的功能系统所共同构成。衰老是筋膜中干细胞储备逐渐耗竭的过程，而如何保持筋膜的正常状态，为功能系统提供稳定的细胞来源并维持向功能细胞的正常分化，是延长生命周期的关键。如果衰老时减少的干细胞能得到及时的补充，为机体提供新的细胞储备，可修复机体损伤，延缓衰老、延长生命周期。脂肪源干细胞是筋膜组织中的主要干细胞储备。
脂肪源干细胞是从志愿者的臀部、大腿及腹部等处抽吸脂肪组织，经分离提纯，在特定的培养基中可向成脂肪、成骨、成软骨、成心肌、成神经元等方向分化，与骨髓成体干细胞相比，在细胞的生长方式、多向分化潜能、外源基因导入效果和细胞衰减等方面都无明显差异。但它有如下优势：①获取容易且量大，可以避免从脑部和骨髓获取细胞造成的损伤，且具有重复性，脂肪抽吸术对其生长、传代无影响，抽液的产率为404000±20600个/ml，而骨髓每10⁵个基质细胞中有1个成体干细胞，这就需要体外扩增来获取足量的细胞，即费时费力，又易被污染。②脂肪源干细胞不需要特定的血清或基质就可以稳定分化并低水平衰减，而骨髓成体干细胞却需要特定的血清或基质。患者本身来源的细胞进行自体移植，可以克服异体的排异反应；在体外增殖速度快，不必进行永生化处理就能获取足够的细胞用于移植。
发明内容
本发明专利针对治疗老年性痴呆，而从志愿者的臀部、大腿及腹部抽吸脂肪组织，经分离提纯，在特定的培养基中进行扩增培养，在细胞总数达到一定数目后，通过静脉输注，治疗老年性痴呆。
筛选健康青壮年人，签订脂肪组织捐献同意书，无菌条件下在志愿者的臀部或大腿或腹部抽吸脂肪组织，清除肉眼可见的小血管，PBS液冲洗3次以去除红细胞，剪碎，加入2倍体积的0.1%的Ⅰ型胶原酶，37℃下搅拌消化40min，200目筛网过滤，用等量的含10%胎牛血清的DMEM完全培养液中和胶原酶，800r/min离心6min，沉淀用完全培养液重悬细胞,，以1×10⁴/cm²的密度接种于75ml培养瓶,，放置于37℃，5%CO₂的培养箱中培养，每3d换一次液,至长满80%瓶底时传代。传至第4代的细胞即为移植所用细胞。
本细胞可用于老年性痴呆病人的治疗。本细胞具有获取容易且量大、不需要特定的血清或基质就可以稳定分化并低水平衰减、在体外增殖速度快，不必进行永生化处理就能获取足够的细胞用于移植等优点，且治疗效果确切，无明显副作用和不良反应。
具体实施方式
筛选1名健康青壮年人，签订脂肪组织捐献同意书，无菌条件下在志愿者的腹部抽吸脂肪组织，清除肉眼可见的小血管，PBS液冲洗3次以去除红细胞，剪碎，加入2倍体积的0.1%的Ⅰ型胶原酶，37℃下搅拌消化40min，200目筛网过滤，用等量的含10%胎牛血清的DMEM完全培养液中和胶原酶，800r/min离心6min，沉淀用完全培养液重悬细胞，以1×10⁴/cm²的密度接种于75ml培养瓶,，放置于37℃，5%CO₂的培养箱中培养，每3d换一次液,至长满80%瓶底时传代。传至第4代的细胞后，选取300万细胞，通过1名老年痴呆患者手背静脉网静脉注射进行治疗。