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基， 且其中 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ；
     其中所述烃基链中的至多 5 个碳原子可被独立选自以下的基团代替 ： O、 NR45、 S、 S(O)、 S(O)2、 C(O)O、 OC(O)、 NR46C(O)、 C(O)NR47、 NR48S(O)2、 S(O)2NR49、 NR50C(O)NR51、 NR52S(O)2NR53、 OC(O)NR54 和 NR55C(O)O， 条件是所述烃基链中的任意上述基团被至少 2 个碳原 子隔开 ； 和
     其中所述烃基链中的至多 6 个碳原子可形成单环或二环脂族环的部分、 单环或二 环杂脂族环的部分、 单环或二环芳族环的部分或单环或二环杂芳族环的部分， 所述环具有 至多 4 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子， 所述环包含至多 10 个环原子， 且其中所述环任选被 56 57 58 至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 -S(O)0-2R 、 -NR R 、 -S(O)2NR59R60、 -C(O) 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 NR R 、 -C(O)OR 、 -NR S(O)2R 、 -NR C(O)R 、 -NR C(O)OR 、 -NR C(O)NR R 、 -OR 、 C1-6 烷 基和 C3-6 环烷基， 且其中 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基 独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ； 和
     所述烃基链可包含至多 3 个各自独立选择的上述环 ；
     其中 R56、 R65 和 R69 各自独立表示 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ； 和 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 57 58 59 60 61 62 63 64
     R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R66、 R67、 R68、 R70、 R71、 R72 和 R73 各自独立表示氢、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ； 或 R57 和 R58、 R59 和 R60、 R61 和 R62 或 R71 和 R72 中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成 4 至 8 元脂族杂环， 其中所述杂环可包含至多 3 个独立选自 N、 O 和 S 的杂原子， 其中所述环可任 选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所 述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ； 和
     其中所述烃基链可额外包含至多 3 个碳 - 碳双键 ；
     其中所述烃基链可额外包含至多 3 个碳 - 碳叁键 ；
     L1 和 L2 独立表示氢、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基 ； 3 4
     L 和 L 独立表示氢、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任 选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ； 1 3
     另外， L 和 / 或 L 可与连接基 L 中的烃基链中的碳原子相连形成具有至多 6 个环 原子的脂族环， 其中每个环可包含至多 3 个独立选自 N、 O 和 S 的杂原子 ； 1
     R 表示苯环、 4 至 8 元杂脂族环、 3 至 8 元脂族环或 5 至 6 元杂芳基环， 所述环各 自具有至多 4 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子， 其中所述环各自可任选被至多 3 个取代基取 代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 硝基、 SH、 S(O)0-2R5、 NR6R7、 S(O)2NR8R9、 C(O)NR10R11、 C(O) 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 OR 、 NR S(O)2R 、 NR C(O)R 、 NR C(O)OR 、 NR C(O)NR R 、 OR 、 C1-7 烷基、 C3-8 环烷基 ( 其 中所述 C1-7 烷基和 C3-8 环烷基各自可任选被至多 6 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤 5 6 7 8 9 10 11 12 素、 氰基、 硝基、 SH、 S(O)0-2R 、 NR R 、 S(O)2NR R 、 C(O)NR R 、 C(O)OR 、 NR13S(O)2R14、 NR15C(O) R16、 NR17C(O)OR18、 NR19C(O)NR20R21 和 OR22)、 苯环、 4 至 8 元杂脂族环和 5 至 6 元杂芳基环， 所 述 4 至 8 元杂脂族环和 5 至 6 元杂芳基环各自具有至多 4 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子，

    所述苯环、 4 至 8 元杂脂族环、 3 至 8 元脂族环或 5 至 6 元杂芳基环各自可任选被至多 3 个 取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 硝基、 SH、 S(O)0-2R5、 S(O)2NR8R9、 C(O)NR10R11、 C(O)OR12、 OR22、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个 取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷氧基、 氰基、 硝基、 NH2、 NH(C1-6 烷基 ) 和 N(C1-6 烷基 )2 ； 或 1
     R 表示稠合脂族环、 稠合杂脂族环、 稠合芳族环或稠合杂芳基环， 所述环具有至多 10 个原子且其中至多 4 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子， 其中所述环各自可任选被至多 3 个 取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 硝基、 SH、 S(O)0-2R5、 NR6R7、 S(O)2NR8R9、 C(O) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 NR R 、 C(O)OR 、 NR S(O)2R 、 NR C(O)R 、 NR C(O)OR 、 NR C(O)NR R 、 OR 、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选 自卤素、 羟基、 C1-6 烷氧基、 NH2、 NH(C1-6 烷基 ) 和 N(C1-6 烷基 )2 ； 或 1
     R 还表示 C1-6 烷基链， 其中一个或两个碳原子可被 O、 S 或 N 代替 ； 和 1
     其中 R 可被至多 3 个 C1-3 烷基链取代， 且两个上述链可相连形成 C3-8 环烷基， 其 中所述 C1-3 烷基和 C3-8 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 基、 硝基、 SH、 S(O)0-2R 、 NR R 、 S(O)2NR R 、 C(O)NR R 、 C(O)OR 、 NR S(O)2R 、 NR C(O)R 、 17 18 19 20 21 22 NR C(O)OR 、 NR C(O)NR R 和 OR ； 和 其中所述 C1-6 烷基链还任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 基、 硝基、 SH、 S(O)0-2R 、 NR R 、 S(O)2NR R 、 C(O)NR R 、 C(O)OR 、 NR S(O)2R 、 NR C(O)R 、 17 18 19 20 21 22 NR C(O)OR 、 NR C(O)NR R 、 OR 、 苯环、 4 至 8 元杂脂族环、 3 至 8 元脂族环和 5 至 6 元杂 芳基环， 所述环各自具有至多 4 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子， 且其中每个环任选被至多 5 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 硝基、 S(O)0-2R 、 S(O)2NR8R9、 C(O)NR10R11、 C(O)OR12、 OR22、 C1-7 烷基、 C3-7 环烷基 ( 其中所述 C1-7 烷基和 C3-7 环烷基各自可任选被至多 6 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 硝基、 SH、 S(O)0-2R5、 NR6R7、 S(O)2NR8R9、 C(O) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 NR R 、 C(O)OR 、 NR S(O)2R 、 NR C(O)R 、 NR C(O)OR 、 NR C(O)NR R 和 OR )、 苯环、 4至 8 元杂脂族环、 3 至 8 元脂族环和 5 至 6 元杂芳基环， 所述环各自具有至多 4 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子， 所述苯环、 4 至 8 元杂脂族环、 3 至 8 元脂族环或 5 至 6 元杂芳基环各自可 任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 硝基、 S(O)0-2R5、 S(O)2NR8R9、 C(O)NR10R11、 C(O)OR12、 OR22、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基各自可任选 被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷氧基、 NH2、 NH(C1-6 烷基 ) 和 N(C1-6 烷基 )2 ； 或
     所述 C1-6 烷基链可被稠合脂族环、 稠合杂脂族环、 稠合芳族环或稠合杂芳基环取 代， 所述环具有至多 10 个原子且其中至多 4 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子， 其中所述环各自 可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 硝基、 SH、 S(O)0-2R5、 NR6R7、 S(O)2NR8R9、 C(O)NR10R11、 C(O)OR12、 NR13S(O)2R14、 NR15C(O)R16、 NR17C(O)OR18、 NR19C(O)NR20R21、 OR22、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷氧基、 NH2、 NH(C1-6 烷基 ) 和 N(C1-6 烷基 )2 ； 5 14 18 3-6
     R、 R 和 R 独立表示 C1-6 烷基或 C 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可 任选被一个或多个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷氧基、 NH2、 NH(C1-6 烷 基 ) 和 N(C1-6 烷基 )2 ； 和
     R6、 R7、 R8、 R9、 R10、 R11、 R12、 R13、 R15、 R16、 R17、 R19、 R20、 R21 和 R22 各自独立表示氢、 C1-6 烷 基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基可任选被一个或多个取代基取代， 所述取 6 代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷氧基、 NH2、 NH(C1-6 烷基 ) 和 N(C1-6 烷基 )2 ； 或 R 和 R7、 R8 和 R9、 R10 和 R11 或 R20 和 R21 中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成 4 至 8 元脂族杂 环， 其中所述杂环可任选被一个或多个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷 基、 C1-6 环烷基和 C1-6 烷氧基， 其中所述 C1-6 烷基、 C1-6 环烷基或 C1-6 烷氧基可任选被一个或 多个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷氧基、 NH2、 NH(C1-6 烷基 ) 和 N(C1-6 烷基 )2 ；
     X 表示 O、 S、 S(O)o 或 CR25R26 ；
     m ＝ 0、 1、 2或3；
     n ＝ 1、 2、 3或4； 条件是 m+n 大于或等于 2 ；
     o＝1或2；
     W 表示 CR27R28CR29R30 或 CR31R32CR33R34CR35R36 ；
     V 和 Z 独立表示键、 CR37R38 或 CR39R40CR41R42， 条件是当 X 表示 O、 S 或 S(O)o 时， m、 V和 Z 使环中的所有杂原子被至少两个碳原子隔开 ( 例如当 V 为键时， m 不为 0， 且 Z 不为键 ) ； 43 44
     Y 表示 CO、 CONR 、 SO2 或 SO2NR ； 25 26 27 28 29
     R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R30、 R31、 R32、 R33、 R34、 R35、 R36、 R37、 R38、 R39、 R40、 R41 和 R42 各自独立 表示氢、 氟、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基 ； 和当它们不表示氢或氟时， R25 和 R26 与它们所相连的碳 原子一起、 R27 和 R28 与它们所相连的碳原子一起、 R29 和 R30 与它们所相连的碳原子一起、 R31 和 R32 与它们所相连的碳原子一起、 R33 和 R34 与它们所相连的碳原子一起、 R35 和 R36 与它们 所相连的碳原子一起、 R37 和 R38 与它们所相连的碳原子一起、 R39 和 R40 与它们所相连的碳原 子一起或 R41 和 R42 与它们所相连的碳原子一起还可形成 3 至 6 元脂族环 ； 和 43 44
     R 和 R 各自独立表示氢、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基。
     “β- 肾上腺素受体结合基团” 是指能够与 β- 肾上腺素能受体结合的基团 ； 诸 如参见综述文章 “β-adrenergic receptors in Comprehensive Medicinal Chemistry， 1990， B.E.Main， p187(Pergamon Press)” 。 上 述 基 团 也 参 见 例 如 WO/2005092841、 US/20050215542、 WO/2005070872、 WO/2006023460、 WO/2006051373、 WO/2006087315 和 WO/2006032627。
     β- 肾上腺素受体结合基团的合适实例包括 ：
     M1 为 S、 C(O)、 NA5、 CA6A7、 CH2CH2、 CH ＝ CH、 CH2O 或 OCH2 ； 2 5 6 7
     M 为 S、 C(O)、 NA 、 CA A 、 CH2CH2、 CH ＝ CH、 CH2O 或 OCH2 ； 1 2 3 4
     A、 A、 A 和 A 独 立 为 氢、 卤 素、 三 氟 甲 基、 氰 基、 羧 基、 羟 基、 硝 基、 S(O)2A8、 NA9S(O)2A10、 C(O)NA11A12、 NA13C(O)A14、 C1-6 烷基、 C1-6 烷氧基、 C(O)(C1-6 烷基 ) 或 C(O)OC1-6 烷 基；
     A3 也可以是 CH2OH、 NHCHO、 NHS(O)2NA15A16 或 NHSO2A17 ；
     A5、 A6、 A7、 A9、 A11、 A12、 A13、 A14、 A15 或 A16 独立为氢或 C1-6 烷基 ；
     A8、 A10 和 A17 独立为 C1-6 烷基 ；
     更合适地， β 肾上腺素能受体结合基团 Ar 选自 ：
     其中 M1 为 S、 CH ＝ CH、 CH2O 或 OCH2 ； M2 为 S、 CH ＝ CH、 CH2O 或 OCH2 ； 1 2 4 A、 A 和 A 独立为氢、 卤素、 C1-6 烷基或 C1-6 烷氧基 ； 3 A 也可以是 CH2OH、 NHCHO、 NHS(O)2NA15A16 或 NHSO2A17 ； A15 或 A16 独立选自氢、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基 ； 17 A 为 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基 ； C1-6 烷基的实例包括 C1-4 烷基和 C1-2 烷基。 C3-6 环烷基的实例包括 C3-5 环烷基和 C3-4 环烷基。 C1-6 烷氧基的实例包括 C1-4 烷氧基和 C1-2 烷氧基。 更合适地， β 肾上腺素能受体结合基团 Ar 选自 ：其中 A1、 A2 和 A4 都为氢， A3 为 CH2OH 或 NHCHO， M1 为 S、 CH ＝ CH 或 OCH2， 且 M2 为 S、 CH ＝ CH 或 OCH2。
     更合适地， β 肾上腺素能受体结合基团 Ar 选自 ：
     合适地， L 表示包含具有至多 12 个碳原子或具有至多 10 个碳原子或具有至多 8 个 碳原子的直链或支链烃基链的连接基 ；
     其 中 所 述 烃 基 链 中 的 至 多 两 个 碳 原 子 任 选 被 至 多 4 个 取 代 基 取 代， 所 56 57 58 59 60 61 62 述 取 代 基 独 立 选 自 卤 素、 -S(O)0-2R 、 -NR R 、 -S(O)2NR R 、 -C(O)NR R 、 -C(O) 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 OR 、 -NR S(O)2R 、 -NR C(O)R 、 -NR C(O)OR 、 -NR C(O)NR R 、 -OR 、 C1-6 烷基和 C3-6 环烷 基， 且其中 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ；
     合适地， 所述烃基链中的至多两个碳原子可被独立选自以下的基团代替 ： O、 NR45、 S、 S(O)、 S(O)2、 C(O)O、 OC(O)、 NR46C(O)、 C(O)NR47、 NR48S(O)2、 S(O)2NR49、 NR50C(O)NR51 和 NR52S(O)2NR53 ； 或可被独立选自以下的基团代替 ： O、 S、 S(O)、 S(O)2、 NR46C(O) 和 C(O)NR47 ； 条 件是在每种情况下所述烃基链中的任意上述基团被至少 2 个碳原子隔开 ；
     合适地， 所述烃基链中的至多 4 个碳原子可形成单环或二环脂族环的部分、 单环 或二环杂脂族环的部分、 单环或二环芳族环的部分或单环或二环杂芳族环的部分， 所述环 具有至多 3 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子， 所述环包含至多 10 个环原子， 且其中所述环任 56 57 58 选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 -S(O)0-2R 、 -NR R 、 -S(O)2NR59R60、 -C 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 (O)NR R 、 -C(O)OR 、 -NR S(O)2R 、 -NR C(O)R 、 -NR C(O)OR 、 -NR C(O)NR R 、 -OR 、 C1-6 3-6 烷基和 C3-6 环烷基， 且其中 C1-6 烷基和 C 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代 基独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ；
     合适地， 所述烃基链可包含至多两个或一个各自独立选择的上述环 ；
     合适地， R56、 R65 和 R69 各自独立表示 C1-4 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-4 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-4 烷氧基 ； 和 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 57 58 59 60 61 62 63
     合适地， R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 64 66 67 68 70 71 72 73 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 和 R 各自独立表示氢、 C1-4 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-4 烷 基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-4 烷氧 57 58 59 60 61 62 71 72 基； 或R 和R 、 R 和R 、 R 和 R 或 R 和 R 中的任意一对与它们所相连的氮原子一起
     可形成 4 至 8 元脂族杂环， 其中所述杂环可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选 自卤素、 羟基、 C1-4 烷基和 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-4 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取 代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-4 烷氧基 ；
     可作为烃基连接基的部分而存在的环系的合适实例包括 ：
     其中所述杂环基环是未取代的或被 1 或 2 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤 121 122 123 124 125 126 素、 C1-4 烷基 ( 任选被 OR 、 NR R 或 NR C(O)R 取代 )、 OR 、 NR127R128、 C(O)NR129R130、 NR131C(O)R132、 CN、 S(O)2R133 或 S(O)2NR134R135 ；
     R133 表示 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ； 和 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131
     R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R132、 R134、 R135 和 R136 各自独立 表示氢、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基 取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ； 或 R122 和 R123、 R127 和 R128、 R129 和 R130 或 R134 和 R135 中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成 4 至 8 元脂族杂环， 其中所述杂 环可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素和 羟基 ；
     合适地， 所述烃基链还可包含至多两个碳 - 碳双键或一个碳 - 碳双键。
     合适地， 所述烃基链还可包含至多两个碳 - 碳叁键或一个碳 - 碳叁键。
     合适地， L1、 L2、 L3 和 L4 各自独立表示氢、 C1-4 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-4 烷基 和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素和羟基 ； 另外， L1 和 / 或 L3 可与连接基 L 中的烃基链中的碳原子相连形成具有至多 6 个环原子的脂族环， 其中 所述环可包含至多两个独立选自 N、 O 和 S 的杂原子。
     当所述烃基链中的 4 个碳原子形成单环或二环脂族环的部分、 单环或二环杂脂族 环的部分、 单环或二环芳族环的部分或单环或二环杂芳族环的部分且所述环具有至多 3 个 独立选自 N、 O 或 S 的杂原子时， 在脂族环系的情况下所述环可包含至多 10、 9、 8、 7、 6、 5、 4或 3 个各自独立选择的环原子 ； 在芳族环系的情况下其可包含 10、 9、 6 或 5 个各自独立选择的 环原子 ；
     R1 表示苯环或 5 至 6 元杂芳基环， 所述环各自具有至多 3 个独立选自 N、 O或S的 1 杂原子， 或 R 表示稠合脂族环、 稠合杂脂族环、 稠合芳族环或稠合杂芳基环， 所述环具有至
     多 10 个原子且其中至多 3 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子 ；
     其中每个环可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 硝 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 基、 SH、 S(O)0-2R 、 NR R 、 S(O)2NR R 、 C(O)NR R 、 C(O)OR 、 NR S(O)2R 、 NR C(O)R 、 NR C(O) 18 19 20 21 22 OR 、 NR C(O)NR R 、 OR 、 C1-7 烷基、 C3-8 环烷基 ( 其中所述 C1-7 烷基和 C3-8 环烷基各自可 任选被至多 6 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 硝基、 SH、 S(O)0-2R5、 NR6R7、 S(O)2NR8R9、 C(O)NR10R11、 C(O)OR12、 NR13S(O)2R14、 NR15C(O)R16、 NR17C(O)OR18、 NR19C(O)NR20R21 和 OR22) 和苯环， 所述苯环任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 硝基、 5 8 9 10 11 12 22 SH、 S(O)0-2R 、 S(O)2NR R 、 C(O)NR R 、 C(O)OR 、 OR 、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷氧 基、 氰基、 硝基、 NH2、 NH(C1-6 烷基 ) 和 N(C1-6 烷基 )2 ； 5 14 18
     R、 R 和 R 表示 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 所述 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基或 C1-6 烷氧基 ； 8 9 10 11 12 22
     R、 R、 R 、 R 、 R 和 R 各自独立表示氢或 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷 基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-6 烷氧 8 9 10 11 基； 或 R 和 R 或 R 和 R 中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成 4 至 6 元脂族 杂环， 其中所述杂环可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基、 C1-6 烷 氧基和 C1-6 烷基 ；
     X 表示 O、 S 或 S(O)2。
     m ＝ 0、 1、 2或3；
     n ＝ 1、 2或3；
     W 表示 CR27R28CR29R30 或 CR31R32CR33R34CR35R36
     V 和 Z 独立表示键、 CR37R38 或 CR39R40CR41R42。
     当 X 表示 O、 S 或 S(O)2 时， m、 V 和 Z 使环中的所有杂原子被至少两个碳原子隔开 ( 例如当 V 为键时， m 不为 0， 且 Z 不为键 )。 43
     Y 表示 CO、 CONR 或 SO2。 27 28 29
     R 、 R 、 R 、 R30、 R31、 R32、 R33、 R34、 R35、 R36、 R37、 R38、 R39、 R40、 R41 和 R42 各自独立表示氢、 氟、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基。
     当它们不表示氢或氟时， R27 和 R28 与它们所相连的碳原子一起、 R29 和 R30 与它们所 相连的碳原子一起、 R31 和 R32 与它们所相连的碳原子一起、 R33 和 R34 与它们所相连的碳原 子一起、 R35 和 R36 与它们所相连的碳原子一起、 R37 和 R38 与它们所相连的碳原子一起、 R39 和 R40 与它们所相连的碳原子一起或 R41 和 R42 与它们所相连的碳原子一起可形成 3 至 6 元脂 族环 ； 和
     R43 各自独立表示氢、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基。
     更合适地 ：
     L 表示包含具有至多 8 个碳原子诸如具有至多 7、 6、 5 或 4 个碳原子的直链或支链 烃基链的连接基。 上述链的实例包括具有 4-7、 4-6、 4-5、 5-7、 6-7 和 5-6 个碳原子的那些链。
     L 表示 C4-8 烷基链， 所述 C4-8 烷基链任选被至多 4( 诸如至多 3、 2 或 1) 个氟或甲基 取代 ；
     合适地， 所述烃基链中的至多两个碳原子可被独立选自以下的基团代替 ： O、 S、S(O)2、 NR46C(O)、 C(O)NR47、 NR48S(O)2 和 S(O)2NR49， 条件是在每种情况下所述烃基链中的任意 上述基团被至少 2 个碳原子隔开 ；
     合适地， 所述烃基链中的至多 4 个碳原子诸如至多 3 个或至多 2 个碳原子可形成 单环或二环芳族环的部分或单环或二环杂芳族环的部分， 所述环具有至多 3 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子， 所述环包含至多 10 个环原子， 且其中所述环任选被至多 3 个取代基取代， 56 所述取代基独立选自卤素、 -S(O)0-2R 、 -S(O)2NR59R60、 -C(O)NR61R62、 -OR73、 C1-6 烷基和 C3-6 环 烷基， 且其中 C1-6 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤 素、 羟基和 C1-6 烷氧基 ；
     合适地， 所述烃基链可包含 1 个上述环 ；
     合适地， R56 表示 C1-4 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-4 烷基和 C3-6 环烷基可任选被 至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-4 烷氧基 ； 和 46 47 48 49 59 60 61 62 73
     合适地， R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 和 R 各自独立表示氢、 C1-4 烷基或 C3-6 环 烷基， 其中所述 C1-4 烷基和 C3-6 环烷基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自 59 60 61 62 卤素、 羟基和 C1-4 烷氧基 ； 或 R 和 R 或 R 和 R 中的任意一对与它们所相连的氮原子一 起可形成 4 至 6 元脂族杂环， 其中所述杂环可任选被至多两个取代基取代， 所述取代基独立 选自卤素、 羟基、 C1-4 烷基和 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-4 烷基和 C3-6 环烷基可任选被 1 个取代 基取代， 所述取代基独立选自卤素、 羟基和 C1-4 烷氧基 ； 1 2 3 4
     L、 L、 L 和 L 独立表示氢或甲基 ； 1
     R 表示苯基或 5 至 6 元杂芳基环， 所述 5 至 6 元杂芳基环具有至多 3 个独立选自 N、 O 或 S 的杂原子， 其中所述环各自可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤 12 22 素、 氰基、 硝基、 C(O)OR 、 OR 、 C1-7 烷基或 C3-8 环烷基， 其中所述 C1-7 烷基和 C3-8 环烷基可任 选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 羟基或 C1-3 烷氧基 ； 或 1
     R 表示稠合芳族环或稠合杂芳基环， 所述环具有至多 10 个原子且其中至多 3 个独 立选自 N、 O 或 S 的杂原子， 其中所述环各自可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立 12 22 选自卤素、 氰基、 硝基、 C(O)OR 、 OR 、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基和 C3-6 环烷 基可任选被至多 3 个取代基取代， 所述取代基独立选自卤素、 氰基、 羟基或 C1-3 烷氧基 ； R12 和 R22 各自独立表示氢、 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基， 其中所述 C1-6 烷基或 C3-6 环烷基可任选被 1 个 取代基取代， 所述取代基选自卤素、 羟基或 C1-3 烷氧基 ；
     更合适的环取代基包括卤素 ( 例如氟和例如氯 )。
     更合适地， 基团 -L- 如下所示 ：
     其中环 D 表示苯环、 噻吩环、 呋喃环或噻唑环 ；
     R 表示至多 3 个环取代基， 所述环取代基各自独立选自 H、 F、 Cl、 C1-4 烷基和 CF3 ； t 43 44 ＝0或1； G ＝ O、 CR R 或 S ； 当 G ＝ O 或 S 时， v＝1或2； 当 G ＝ C 时， v ＝ 0、 1 或 2， 且其 中基团 -L- 以任意取向与相邻原子相连。
     更合适地， 基团 -L- 选自 ：
     -( 苯 -1， 4- 亚基 )OCH2-， 其中苯基任选被 3、 2 或 1 个甲基取代 ；
     -( 苯 -1， 4- 亚基 )OCH2CH2- ；
     -CH2( 苯 -1， 4- 亚基 )OCH2-， 其中苯基任选被 Cl 或 F( 独立选择的 ) 中的 3、 2或1 个取代 ；
     -CH2( 苯 -1， 4- 亚基 )- ；
     -CH2( 苯 -1， 4- 亚基 )CH2- ；
     -(CH2)7- ；
     -CH2( 苯 -1， 3- 亚基 )-， 其中所述苯环任选被 C1-3 烷基、 F、 Cl 和 CF3( 独立选择的 ) 中的至多 3 个取代 ；
     -CH2( 噻吩 -2， 5- 亚基 )CH2- ；
     -CH2( 噻吩 -2， 5- 亚基 )- ；
     -CH2( 噻吩 -3， 5- 亚基 )- ；
     -CH2( 噻吩 -2， 4- 亚基 )- ；
     -CH2O( 苯 -1， 3- 亚基 )- ； 和
     -CH2S( 苯 -1， 3- 亚基 )-。
     合适的连接基还包括 ：
     -( 萘 -1， 5- 亚基 )- ；
     -C(CH3)2-( 苯基 -1， 3- 亚基 )- ；
     -( 苯 -1， 3- 亚基 )OCH2CH2
     -( 苯 -1， 3- 亚基 )- ；
     -C(CH3)2-(CH2)4- ；
     -C(CH3)2-(CH2)6- ；
     -CH2( 苯 -1， 3- 亚基 )OCH2- ； 和
     -CH2S(CH2)5- ；
     上述连接基各自独立表示本发明独立的方面。
     更合适地， 基团 -L- 选自 ：
     -CH2( 噻吩 -2， 5- 亚基 )- ；
     -CH2( 苯 -1， 3- 亚基 )-， 其中苯基可被 F 单取代 ；
     -CH2( 噻吩 -2， 4- 亚基 )- ； 和
     -CH2( 噻吩 -3， 5- 亚基 )- ； 1
     更合适地， L、 L2、 L3 和 L4 ＝ H。
     更合适地， R1 选自下述实施例中提供的各个基团中的任意一种。
     X 表示 O 或 S。
     m＝1或2；
     n＝1或2；
     W 表示 CR27R28CR29R30 或 CR31R32CR33R34CR35R36。
     V 和 Z 独立表示键或 CR37R38。
     V 和 Z 使 环 中 的 所 有 杂 原 子 被 至 少 两 个 碳 原 子 隔 开 ( 例 如 当 V 为 键 时， Z为CR37R38)。
     Y 表示 CO、 CONR43 或 SO2 ； 诸如 CO 或 SO2， 例如 CO。 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36
     R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R 、 R37 和 R38 各自独立表示氢、 氟、 C1-3 烷基或 C3 环烷基。
     当它们不表示氢或氟时， R27 和 R28 与它们所相连的碳原子一起、 R29 和 R30 与它们所 相连的碳原子一起、 R31 和 R32 与它们所相连的碳原子一起、 R33 和 R34 与它们所相连的碳原子 一起、 R35 和 R36 与它们所相连的碳原子一起或 R37 和 R38 与它们所相连的碳原子一起可形成 3 至 6 元脂族环。
     R43 各自独立表示氢或 C1-3 烷基或 C3 环烷基。
     更合适地， 在包含 -N-(^)m-C-V-X-W-N(Y-R1)-Z-(C)-(^)n- 的二环环系所涵盖的螺 环中 ：
     (i)m 和 n ＝ 2， v ＝键， Z ＝ CH2， X ＝ O， 且 W ＝ CH2CH2
     (ii)m 和 n ＝ 2， v ＝键， Z ＝ CH2， X ＝ O， 且 W ＝ CF2CH2
     (iii)m 和 n ＝ 1， v ＝键， Z ＝ CH2， X ＝ O， 且 W ＝ CH2CH2
     (iv)m 和 n ＝ 2， v ＝键， Z ＝ CH2CH2， X ＝ O， 且 W ＝ CH2CH2
     更合适地， 所述螺环选自上述 (i) 和 (ii)。
     更合适地， R1 选自噻吩或噻唑或苯并呋喃， 所述噻吩或噻唑或苯并呋喃各自任选 被一个或两个取代基取代。一种任选的取代基合适地选自 H、 Cl、 F 和 C1-3 烷基。其它任选 的取代基选自甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 CH(CH3)CH2、 CH3、 CH2CH(CH3)2、 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基 ；
     本发明示例的每种化合物都表示本发明具体和独立的方面。
     本发明合适的化合物包括实施例 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 11、 12、 14、 15、 19、 22、 23、 25、 26、 27、 28、 29、 36、 37、 38、 40、 42、 44、 45、 47、 48、 52、 56、 57、 58、 66、 67、 70、 71、 75、 76、 82、 83、 84、 86、 87、 88、 91、 93、 99、 105、 109、 111、 115、 265、 266、 278 和 280 中的化合物。
     本发明合适的化合物包括实施例 22、 23、 36、 40、 42、 44、 47、 48、 57、 66、 82、 83、 84、 86、 87、 99、 265 和 266 的化合物。
     本发明合适的化合物包括实施例 40、 42、 47、 48、 82、 84、 99 和 278 的化合物。
     应该理解的是， 本发明某些化合物可按溶剂化形式 ( 例如水合形式 ) 及非溶剂化 形式存在。应该理解的是， 本发明涵盖所有上述溶剂化形式。某些式 (I) 化合物能够以立 体异构形式存在。应该理解的是， 本发明涵盖式 (I) 化合物的所有几何异构体和光学异构 体及它们的混合物 ( 包括外消旋体 )。互变异构体及其混合物也形成本发明一个方面。
     合适地， 与 β- 肾上腺素受体结合基团相邻的羟基取代的碳原子的手性中心具有 R- 立体化学。
     也应该理解的是， 本发明涵盖任意季碳 ( 更具体为存在于螺环系统中的季碳 ) 被 硅原子代替的情况， 例如参见 “Silicon switches of Marketed Drugs ： Mini-reviews in Med.Chem.” ， 2006， 6， 1169-1177。
     在本说明书上下文中， 术语 “杂芳族” 表示这样的基团或基团的部分， 其包含任选 取代的具有 5 至 14 个环原子 ( 优选为 5 至 10 个环原子 ) 的芳族单环或多环有机残基， 其 中至多 4 个环原子为不是碳的元素 ( 例如氮、 氧或硫 )。上述基团的实例包括苯并咪唑基、苯并噁唑基、 苯并噻唑基、 苯并呋喃基、 苯并噻吩基、 呋喃基、 咪唑基、 吲哚基、 吲嗪基、 异噁 唑基、 异喹啉基、 异噻唑基、 噁唑基、 噁二唑基、 吡嗪基、 哒嗪基、 吡唑基、 吡啶基、 嘧啶基、 吡 咯基、 喹唑啉基、 喹啉基、 四唑基、 1， 3， 4- 噻二唑基、 噻唑基、 噻吩基和三唑基。 杂芳基可被一 个或多个取代基取代。 杂芳基可通过任意可用的碳原子或氮原子来与本发明化合物的其余 部分相连。
     术语 “脂族杂环” 表示这样的非芳族环， 其包含至少 1 个选自氮、 氧和硫的杂原子。 本发明 4-8 元脂族杂环的实例包括吡咯烷基、 哌啶基、 哌嗪基、 吗啉基、 高哌嗪基、 高哌啶基 和氮杂环丁烷基。
     除非另有说明， 在本说明书上下文中， 烷基基团和残基可以是直链或支链， 且包括 例如甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基或叔丁基。 环烷基是单环的， 例如环戊基或 环己基。卤素为例如氟、 氯或溴。
     在本说明书上下文中， 当描述基团可任选取代有至多 3 个取代基时， 所述基团可 以是未取代或取代的 ； 当取代时， 所述基团通常可取代有 1、 2 或 3 个取代基。通常， 羟基不 可与这样的碳原子相连， 所述碳原子与氮原子、 另一个氧原子或硫原子相邻。
     本发明还提供了制备上述式 (I) 化合物或其可药用盐的方法， 所述方法包括 ： 1
     (a) 当 L 表示氢时， 在碱 ( 例如碳酸钾、 三乙胺或二异丙基乙基胺 ) 存在下使式 (II) 化合物或其合适的盐与式 (III) 化合物或其合适的盐 ( 例如氢溴酸盐、 乙酸盐或盐酸 盐 ) 反应， 接着除去保护基 ( 例如使用氢氟酸 - 吡啶络合物 )，
     式 (II) 化合物如下 ：
     其中 LG1 表示离去基 ( 例如氯、 溴、 碘、 甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团 )， 且 L、 2 3 4 1 L、 L、 L、 R、 m、 n、 V、 W、 X、 Y 和 Z 如式 (I) 中定义，
     式 (III) 化合物如下 ：
     其中 Ar 如式 (I) 中定义， 且 P1 为氢或保护基 ( 例如叔丁基二甲基甲硅烷基 ) ； 或 1
     (b) 当 L 表示氢时， 在合适的还原剂 ( 例如氰基硼氢化钠、 三乙酰氧基硼氢化钠或 在合适的钯 / 碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气 ) 存在下使式 (IV) 化合物或其合适的盐 与式 (III) 化合物或其合适的盐反应，
     式 (IV) 化合物如下 ：
     其中 L、 L2、 L3、 L4、 R1、 m、 n、 V、 W、 X、 Y 和 Z 如式 (I) 中定义 ； 或 3
     (c) 在碱 ( 例如当 P 为氢时， 碱为碳酸钾、 三乙胺或二异丙基乙基胺， 且当 P3 为 3- 硝基苯基磺酰基时， 碱为氢化钠或二异丙基氨基锂 ) 存在下使式 (V) 化合物或其合适的 盐与式 (VI) 化合物或其合适的盐反应， 接着除去保护基 ( 例如使用氢氟酸 - 吡啶络合物、 苯硫酚或硫代乙酸 )，
     式 (V) 化合物如下 ：
     其中 L、 L1、 L2、 L3、 L4、 R1、 m、 n、 V、 W、 X、 Y 和 Z 如式 (I) 中定义， 且 P3 表示氢或活化 基 ( 例如 3- 硝基苯基磺酰基 )，
     式 (VI) 化合物如下 ：
     其中 Ar 如式 (I) 中定义， LG2 表示离去基 ( 例如氯、 溴、 碘、 甲磺酸酯基团或对甲苯 1 磺酸酯基团 )， 且 P 如式 (III) 中定义 ； 或 3
     在碱 ( 例如当 P 为氢时， 碱为碳酸钾、 三乙胺或二异丙基乙基胺， 且当 P3 为 3- 硝 基苯基磺酰基时， 碱为氢化钠或二异丙基氨基锂 ) 存在下使式 (V) 化合物或其合适的盐与 式 (VII) 化合物或其合适的盐反应， 接着除去保护基 ( 例如三氟乙酸、 苯硫酚或硫代乙酸 )，
     式 (VII) 化合物如下 ：
     其中 Ar 如式 (I) 中定义 ； 或 3
     在碱 ( 例如当 P 为氢时， 碱为碳酸钾、 三乙胺或二异丙基乙基胺， 且当 P3 为 3- 硝 基苯基磺酰基时， 碱为氢化钠或二异丙基氨基锂 ) 存在下使式 (V) 化合物或其合适的盐与 式 (VIII) 化合物或其合适的盐反应， 接着对酮进行还原 ( 例如使用硼氢化钠或硼烷 / 手性
     催化剂络合物 )， 接着除去保护基 ( 例如三氟乙酸、 苯硫酚或硫代乙酸 )，
     式 (VIII) 化合物如下 ：
     其中 Ar 如式 (I) 中定义， 且 LG2 表示离去基 ( 例如氯、 溴、 碘、 甲磺酸酯基团或对 甲苯磺酸酯基团 ) ； 或 3
     (d) 当 L 和 L4 各自表示氢时， 在合适的还原剂 ( 例如氰基硼氢化钠、 三乙酰氧基 硼氢化钠或在合适的钯 / 碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气 ) 存在下使式 (IX) 化合物或 其合适的盐与式 (X) 化合物或其合适的盐反应， 接着除去保护基 ( 例如用盐酸、 三氟乙酸、 苯硫酚或硫代乙酸处理 )，
     式 (IX) 化合物如下 ：
     其中 Ar、 L、 L1 和 L2 如式 (I) 中定义， P1 如式 (III) 中定义， 且 P3 表示保护基 ( 例 如叔丁基氨基甲酸酯基团或 3- 硝基苯基磺酰基 )，
     式 (X) 化合物如下 ：
     其中 R1、 m、 n、 V、 W、 X、 Y 和 Z 如式 (I) 中定义 ； 或 3 4
     (e) 当 L 和 L 中的一个或两个表示氢时， 在碱 ( 例如碳酸钾、 三乙胺或二异丙基 乙基胺 ) 存在下使式 (XI) 化合物或其合适的盐与式 (X) 化合物或其合适的盐反应， 接着除 去保护基 ( 例如三氟乙酸、 苯硫酚或硫代乙酸 )，
     式 (XI) 化合物如下 ：
     其中 Ar、 L、 L1 和 L2 如式 (I) 中定义， P1 如式 (III) 中定义， P3 表示保护基 ( 例如 叔丁基羰基或 3- 硝基苯基磺酰基 )， 且 LG3 表示离去基 ( 例如氯、 溴、 碘、 甲磺酸酯基团或对 甲苯磺酸酯基团 ) ； 或 1
     (f) 当 L 和 L2 各自表示氢时， 使式 (XII) 化合物或其合适的盐与合适的还原剂 ( 例 如硼烷 - 四氢呋喃络合物 ) 反应， 接着除去保护基 ( 例如使用氢氟酸 - 吡啶络合物 )， 且与 式 (XIII) 化合物或其合适的盐反应， 接着除去保护基 ( 例如使用氢氟酸 - 吡啶络合物、 盐 酸或三氟乙酸 )，
     式 (XII) 化合物如下 ：
     其中 Ar、 L、 L3、 L4、 m、 n、 V、 W、 X、 Y 和 Z 如式 (I) 中定义， P1 如式 (III) 中定义， 且 P4 为合适的氮保护基 ( 例如叔丁基氧基甲酸酯基团 )，
     式 (XIII) 化合物如下 ：
     其中 R1 和 Y 如式 (I) 中定义， 且 LG4 表示羟基或离去基 ( 例如卤素或氯 ) 或其合适的盐。 当 LG4 表示羟基时， 所述反应在以下条件下合适地进行 ： 在活化剂 [ 例如羰基 二咪唑、 1- 丙烷膦酸环状酸酐 (1-propanephosphonic acid cyclic anhydride， T3P) 或 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (HATU)] 存在下， 在有 机溶剂 ( 例如 N， N- 二甲基甲酰胺或二氯甲烷 ) 中， 任选在碱 ( 例如三乙胺 ) 存在下， 在例 如范围为 0 至 60℃的温度 ；
     当 LG4 表示卤素 ( 例如氯 ) 时， 所述反应在以下条件下合适地进行 ： 在碱 ( 例如三 乙胺、 二异丙基乙基胺或吡啶 ) 存在下， 在有机溶剂 ( 例如二氯甲烷或四氢呋喃 ) 中， 在例
     如范围为 0 至 25℃的温度 ； 和
     任选在 (a)、 (b)、 (c)、 (d)、 (e) 或 (f) 后进行一个或多个以下步骤 ：
     将所得化合物转化成本发明另一种化合物 ； 和
     形成所述化合物的可药用盐。
     在方法 (a)、 (c) 和 (e) 中， 所述反应可在以下条件下合适地进行 ： 在有机溶剂 ( 诸 如 N， N- 二甲基甲酰胺、 乙醇、 正丁醇或二甲基亚砜 ) 中， 在例如范围为 50 至 140℃的温度。
     在方法 (b) 和 (d) 中， 所述反应可在以下条件下合适地进行 ： 在有机溶剂 ( 诸如甲 醇、 乙醇、 二氯甲烷、 乙酸、 N- 甲基吡咯烷酮或 N， N- 二甲基甲酰胺， 其含有至多 10％ w 水和 乙酸 ) 中。
     在方法 (f) 中， 所述反应可在以下条件下合适地进行 ： 在有机溶剂 ( 诸如四氢呋 喃 ) 中， 在例如范围为 0 至 80℃的温度。
     可选择地， 式 I 化合物 ( 在下述方案中如式 A、 B 和 C 所示 ) 可如下制备 ：
     途径 A
     制备化合物 A 的可选择方法 赫克 (Heck) 反应
     制备化合物 B 的可选择方法
     制备化合物 B 的可选择方法
     制备化合物 C( 其中 LG9 为 Cl 或 Br) 的方法
     途径 B
     途径 C
     式 (II) 化合物可如下制备 ： 在有机溶剂 ( 例如四氢呋喃或乙醚 ) 中在例如范围为0 至 60℃的温度使式 (XIV) 化合物或其合适的盐与式 (XV) 化合物反应， 接着将所得羟基转 化成离去基 ( 例如氯、 溴、 碘、 甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团 )，
     式 (XIV) 化合物如下 ：
     其中 L、 L3、 L4、 R1、 m、 n、 V、 W、 X、 Y 和 Z 如式 (II) 中定义，
     式 (XV) 化合物如下 ：
     L2-Mt(XV)
     其中 L2 如式 (II) 中定义， 且 Mt 表示金属 ( 诸如锂或镁或铝或硼 )( 例如甲基锂、 甲基溴化镁、 氢化锂铝或硼氢化钠 )。
     式 (IV) 化合物可如下制备 ： 在有机溶剂 ( 例如四氢呋喃或乙醚 ) 中在例如范围 为 -10 至 60℃的温度使式 (XIV) 化合物与式 (XV) 化合物反应， 接着所得羟基在有机溶剂 ( 诸如二氯甲烷、 N， N- 二甲基甲酰胺或二甲基亚砜 ) 中在例如范围为 -78 至 60℃的温度用 合适的氧化剂 ( 例如斯韦恩 (Swern) 试剂、 戴斯 - 马丁 (Dess-Martin) 试剂或氯铬酸吡啶 鎓 ) 氧化。
     式 (V) 化合物 ( 其中 L1 表示氢， 且 L、 L2、 L3、 L 4、 P3、 R1、 m、 n、 V、 W、 X、 Y 和 Z 如式 (V) 中定义 ) 可如下制备 ：
     a) 在有机溶剂 ( 例如四氢呋喃、 N， N- 二甲基甲酰胺或二甲基亚砜 ) 中在例如范 围为 25 至 85℃的温度使式 (II) 化合物与叠氮化钠反应， 接着所得叠氮基化合物在有机溶 剂 ( 例如四氢呋喃和水 ) 中使用合适的还原剂 ( 例如三苯基膦 ) 来还原， 最后对所得胺进 行保护 ( 例如在碱 ( 诸如吡啶 ) 存在下用 3- 硝基苯基磺酰氯处理 ) ； 或
     b) 使式 (IV) 化合物与胺 ( 例如苄基胺、 α- 甲基苄基胺、 4- 甲氧基苄基胺或 2， 4- 甲氧基苄基胺 ) 反应， 接着所得亚胺在有机溶剂 ( 诸如甲醇、 乙醇、 二氯甲烷、 乙酸、 N- 甲 基吡咯烷酮或 N， N- 二甲基甲酰胺， 其含有至多 10％ w 水和乙酸 ) 中使用合适的还原剂 ( 例 如氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠 ) 来还原， 接着所得苄基保护基在有机溶剂 ( 例如 乙醇、 甲醇、 四氢呋喃、 二氯甲烷、 乙腈、 水或它们的混合物 ) 中在范围为 25 至 80℃的温度 使用合适的试剂 ( 例如氢气和合适的催化剂 ( 钯 / 碳或氢氧化钯 )、 2， 3- 二氯 -5， 6- 二氰 基苯并苯醌 (DDQ) 或硝酸铈铵 (CAN)) 来除去， 最后对所得胺进行保护 ( 例如在碱 ( 诸如吡 啶 ) 存在下用 3- 硝基苯基磺酰氯处理 ) ；
     式 (V) 化合物 ( 其中 L、 L1、 L2、 L3、 L4、 P3、 R1、 m、 n、 V、 W、 X、 Y 和 Z 如式 (V) 中定义 ) 可如下制备 ： 在胺 ( 例如三乙胺 ) 存在下在有机溶剂 ( 例如叔丁醇、 四氢呋喃、 二氯甲烷、 水 或它们的混合物 ) 中在范围为 25 至 100℃的温度使式 (XVI) 化合物或其合适的盐与试剂诸 如二苯基膦酰叠氮 ( 当 LG5 为羟基时 ) 反应， 或在有机溶剂 ( 例如乙醚、 叔丁醇、 四氢呋喃、 水或它们的混合物 ) 中在范围为 25 至 100℃的温度使式 (XVI) 化合物或其合适的盐与试剂 诸如叠氮化钠 ( 当 LG5 为氯时 ) 反应 (Angewandte Chemie， 2005， 54， 5188)， 最后对所得胺 进行保护 ( 例如在碱 ( 诸如吡啶 ) 存在下用 3- 硝基苯基磺酰氯处理 )，
     式 (XVI) 化合物如下 ：其中 LG5 为离去基 ( 例如羟基或氯 )， 且 L、 L1、 L2、 L3、 L4、 R1、 m、 n、 V、 W、 X、 Y和Z如 式 (V) 中定义。
     式 (III)、 (VI)、 (VII)、 (VIII)、 (XIII) 和 (XV) 化合物是文献中已知的， 或可使用 已知技术来制备。
     式 (IX) 化合物可如下制备 ：
     a) 在碱 ( 例如当 P3 为氢时， 碱为碳酸钾、 三乙胺或二异丙基乙基胺， 且当 P3 为 3- 硝 基苯基磺酰基时， 碱为氢化钠或二异丙基氨基锂 ) 存在下在有机溶剂 ( 诸如 N， N- 二甲基 甲酰胺、 N- 甲基吡咯烷酮、 四氢呋喃、 乙醇、 正丁醇或二甲基亚砜 ) 中在例如范围为 50 至 140℃的温度使式 (XVII) 化合物或其合适的盐与式 (VI)、 (VII) 或 (VIII) 化合物或其合适 的盐反应，
     式 (XVII) 化合物如下 ：其中 P5 为氢或保护基 ( 例如叔丁基二甲基甲硅烷基或四氢吡喃基 )， 且 P3、 L、 L1 和 L2 如式 (IX) 中定义。当所述反应用式 (VIII) 化合物进行时， 需要涉及对酮进行还原的第 二步 ( 例如使用硼氢化钠或硼烷 / 手性催化剂络合物 )。合适地选择性地除去保护基 ( 例 如氢氟酸 - 吡啶络合物、 四丁基氟化铵、 稀盐酸或 Amberlyst-15 树脂 / 甲醇 )， 且所得醇用 合适的氧化剂 ( 氯铬酸吡啶鎓、 戴斯 - 马丁试剂或斯韦恩试剂 ) 氧化成相应醛， 得到式 (IX) 化合物 ； 或
     b) 在碱 ( 例如当 P3 为氢时， 碱为碳酸钾、 三乙胺或二异丙基乙基胺， 且当 P3 为 3- 硝 基苯基磺酰基时， 碱为氢化钠或二异丙基氨基锂 ) 存在下在有机溶剂 ( 诸如 N， N- 二甲基 甲酰胺、 N- 甲基吡咯烷酮、 四氢呋喃、 乙醇、 正丁醇或二甲基亚砜 ) 中在例如范围为 50 至 140℃的温度使式 (XVIII) 化合物或其合适的盐与式 (VI)、 (VII) 或 (VIII) 化合物或其合 适的盐反应，
     式 (XVIII) 化合物如下 ：
     其中 P6 和 P7 表示非环状或环状羰基保护基 ( 例如二甲氧基缩醛、 二乙氧基缩醛、 1 2 3 1， 3- 二氧杂环戊烷或 1， 3- 二氧杂环己烷 )， 且 L、 L、 L 和 P 如式 (IX) 中定义。当与式 (VIII) 化合物反应时， 该反应接着对酮进行还原 ( 例如使用硼氢化钠或硼烷 / 手性催化剂 络合物 )。除去保护基 ( 例如稀盐酸或 Amberlyst-15 树脂 / 甲醇 )， 得到式 (IX) 化合物 ； 或
     c) 当 L1 表示氢时， 在合适的还原剂 ( 例如氰基硼氢化钠、 三乙酰氧基硼氢化钠或 在合适的钯 / 碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气 ) 存在下在有机溶剂 ( 诸如甲醇、 乙醇、 二 氯甲烷、 乙酸、 N- 甲基吡咯烷酮或 N， N- 二甲基甲酰胺， 其含有至多 10％ w 水和乙酸 ) 中使 式 (XIX) 化合物或其合适的盐与式 (III) 化合物或其合适的盐反应， 接着合适地选择性地 除去保护基 ( 例如氢氟酸 - 吡啶络合物、 四丁基氟化铵、 稀盐酸或 Amberlyst-15 树脂 / 甲 醇 )， 且所得醇用合适的氧化剂 ( 氯铬酸吡啶鎓、 戴斯 - 马丁试剂或斯韦恩试剂 ) 氧化成相 应醛，
     式 (XIX) 化合物如下 ：
     其中 P5 为氢或保护基 ( 例如叔丁基二甲基甲硅烷基或四氢吡喃基 )， 且 L 和 L2 如 式 (IX) 中定义 ； 或 1
     d) 当 L 表示氢时， 在合适的还原剂 ( 例如氰基硼氢化钠、 三乙酰氧基硼氢化钠或 在合适的钯 / 碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气 ) 存在下在有机溶剂 ( 诸如甲醇、 乙醇、 二 氯甲烷、 乙酸、 N- 甲基吡咯烷酮或 N， N- 二甲基甲酰胺， 其含有至多 10％ w 水和乙酸 ) 中使 式 (XX) 化合物或其合适的盐与式 (III) 化合物或其合适的盐反应， 接着除去保护基 ( 例如 稀盐酸或 Amberlyst-15 树脂 / 甲醇 )，
     式 (XX) 化合物如下 ：
     其中 P6 和 P7 表示非环状或环状羰基保护基 ( 例如二甲氧基缩醛、 二乙氧基缩醛、 2 1， 3- 二氧杂环戊烷或 1， 3- 二氧杂环己烷 )， 且 L 和 L 如式 (IX) 中定义。
     式 (XI) 化合物可如下制备 ： 选择合适的反应顺序对上述式 (IX) 化合物或式 (IX) 化合物的前体进行转化， 例如将醛还原成醇 ( 例如硼氢化钠 )， 合适地选择性地除去保护基
     ( 例如氢氟酸 - 吡啶络合物、 四丁基氟化铵、 稀盐酸或 Amberlyst-15 树脂 / 甲醇 )， 且将醇 转化成合适的离去基 ( 例如氯、 溴、 碘、 甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团 ) ； 或
     式 (XII) 化合物可如下制备 ： 使式 (XXI) 化合物或其合适的盐与式 (III) 化合物 或其合适的盐反应，
     式 (XXI) 化合物如下 ：
     其中 L、 L3、 L4、 P4、 m、 n、 V、 W、 X 和 Z 如式 (XII) 中定义， 且 LG6 表示羟基或离去基 ( 例如氯 ) ；
     当 LG6 表示羟基时， 所述反应在以下条件下合适地进行 ： 在活化剂 [ 例如羰基二咪 唑、 1- 丙烷膦酸环状酸酐 (T3P) 或 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓 六氟磷酸盐 (HATU)] 存在下， 在有机溶剂 ( 例如 N， N- 二甲基甲酰胺或二氯甲烷 ) 中， 任选 6 在碱 ( 例如三乙胺 ) 存在下， 在例如范围为 0 至 60℃的温度 ； 当 LG 表示氯时， 所述反应在
     以下条件下合适地进行 ： 在碱 ( 例如三乙胺或二异丙基乙基胺 ) 存在下， 在有机溶剂 ( 例如 二氯甲烷或四氢呋喃 ) 中， 在例如范围为 0 至 25℃的温度。
     式 (V)、 (X)、 (XIV)、 (XVI) 和 (XXI) 化合物可如下得到 ： 对式 (XIII) 化合物 [ 其 1 4 中 R 和 Y 如式 (I) 中定义， 且 LG 表示羟基或离去基 ( 例如卤素或氯 )] 或其合适的盐与通 式 (XXII) 化合物或其合适的盐进行常规偶联反应，
     当 LG4 表示羟基时， 所述反应在以下条件下合适地进行 ： 在活化剂 [ 例如羰基二咪 唑、 1- 丙烷膦酸环状酸酐 (T3P) 或 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓 六氟磷酸盐 (HATU)] 存在下， 在有机溶剂 ( 例如 N， N- 二甲基甲酰胺或二氯甲烷 ) 中， 任选 在碱 ( 例如三乙胺 ) 存在下， 在例如范围为 0 至 60℃的温度， 或 4
     当 LG 表示卤素 ( 例如氯 ) 时， 所述反应在以下条件下合适地进行 ： 在碱 ( 例如三 乙胺、 二异丙基乙基胺或吡啶 ) 存在下， 在有机溶剂 ( 例如二氯甲烷或四氢呋喃 ) 中， 在例 如范围为 0 至 25℃的温度，
     通式 (XXII) 化合物如下 ：
     其中 m、 n、 V、 W、 X、 Y 和 Z 如式 (I) 中定义， 和 9 - 对于式 (V) 化合物， P 表示 ：
     其中 L、 L1、 L2、 L3、 L4 和 P3 如式 (V) 中定义 ； - 对于式 (X) 化合物， P9 表示合适的氮保护基 ( 诸如叔丁氧基羰基 )， 或 9 - 对于式 (XIV) 化合物， P 表示 ：
     其中 L、 L3 和 L4 如式 (XIV) 中定义， 其中 P11 和 P12 表示非环状或环状羰基保护基 ( 例如二甲氧基缩醛、 二乙氧基缩醛、 1， 3- 二氧杂环戊烷或 1， 3- 二氧杂环己烷 )， 接着进行 合适的脱保护 ( 例如稀盐酸或 Amberlyst-15 树脂 / 甲醇 ) ； - 对于式 (XVI) 化合物， P9 表示 ：
     其中 L、 L1、 L 2、 L3、 和 L4 如式 (XVI) 中定义， 其中 P14 表示酸保护基 ( 例如甲基、 乙 基或叔丁基 )， 接着进行合适的脱保护 ( 例如氢氧化锂、 氢氧化钠、 三氟乙酸或盐酸 ) ； 9
     - 对于式 (XXI) 化合物， P 表示 ：
     其中 L、 L3 和 L4 如式 (XXI) 中定义， 其中 P14 表示酸保护基 ( 例如叔丁基 )， 接着进 行合适的脱保护 ( 例如三氟乙酸或盐酸 ) ；
     通式 (XXII) 化合物 ( 其中 V 表示键， X 表示 O， W 表示 CR27R28CR29R30， Z 表示 CR37R38， R27、 R28、 R29、 R30、 R37 和 R38 各自表示氢， 且 P9 表示合适的氮保护基 ( 诸如叔丁氧基羰基 )) 可 由式 (XXIII) 化合物通过在合适的溶剂 ( 诸如四氢呋喃 ) 中在 30-70℃用合适的还原剂 ( 诸 如硼烷 -THF 络合物 ) 处理来制备，
     式 (XXIII) 化合物如下 ：
     其中 P9、 m 和 n 如式 (XXII) 化合物中定义，
     其中所得硼络合物在 60-90℃用合适的胺 ( 诸如 N1， N2- 二亚甲基胺 -1， 2- 二胺 )/ 甲醇分解。
     式 (XXIII) 化合物可由式 (XXIV) 化合物通过在合适的溶剂 ( 诸如四氢呋喃 ) 中 在 50-90℃用合适的碱 ( 诸如叔丁醇钾 ) 处理来制备，
     式 (XXIV) 化合物如下 ：
     其中 LG7 为合适的离去基 ( 诸如卤素或甲苯磺酸酯基团 )， 且 P 9、 m 和 n 如式 (XXIII) 化合物中定义。
     式 (XXIV) 化合物可如下制备 ： 使式 (XXV) 化合物与式 (XXVI) 化合物反应，
     式 (XXV) 化合物和式 (XXVI) 化合物如下 ：其中 LG8 表示羟基或卤素 ( 诸如氯 )， 且 P9、 m、 n 和 LG7 如式 (XXIV) 化合物中定义 ；
     对于其中 LG8 表示羟基的情况， 所述反应在以下条件下合适地进行 ： 在活化剂 [ 例 如羰基二咪唑、 1- 丙烷膦酸环状酸酐 (T3P) 或 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ -四 甲基脲鎓六氟磷酸盐 (HATU)] 存在下， 在有机溶剂 ( 例如 N， N- 二甲基甲酰胺或二氯甲烷 ) 中， 任选在碱 ( 例如三乙胺 ) 存在下， 在例如范围为 0 至 60℃的温度 ； 8
     对于其中 LG 表示氯的情况， 所述反应在以下条件下合适地进行 ： 在碱 ( 例如三乙 胺或二异丙基乙基胺 ) 存在下， 在有机溶剂 ( 例如二氯甲烷或四氢呋喃 ) 中， 在例如范围为 0 至 25℃的温度 ；
     式 (XXV) 化合物可如下制备 ： 在合适的溶剂 ( 诸如甲醇 ) 中在范围为 20-60℃的 温度使式 (XXVII) 化合物与氨反应，
     式 (XXVII) 化合物如下 ：
     其中 P9、 m 和 n 如式 (XXV) 化合物中定义 ； 式 (XXVII) 化合物可如下制备 ： 在合适的碱 ( 诸如氢化钠或叔丁醇钾 ) 存在下在合适的溶剂 ( 诸如二甲基亚砜 ) 中在范围为 0-20℃的温度使式 (XXVIII) 化合物与碘化三 甲基氧化锍反应，
     式 (XXVIII) 化合物如下 ：
     其中 P9、 m 和 n 如式 (XXVII) 化合物中定义 ；
     上述方法也涉及简单的氧化和还原步骤， 这些步骤在文献中公知的标准条件下 进行 ( 例如戴斯 - 马丁氧化、 Swern 氧化、 氯铬酸吡啶鎓氧化或吡啶鎓三氧化硫络合物氧 化 )。 这些步骤可在以下条件下合适地进行 ： 在有机溶剂 ( 诸如二氯甲烷 ) 中， 在范围为 -78 至 50℃的温度 (Annual Reports on the Progress of Chemistry， Section B ： Organic Chemistry， 2004， 100， 51-70)。
     通式 (XXII) 化合物 ( 其中 V 表示键， X 表示 O， W 表示 CR27R28CR29R30， Z 表示 CR37R38， R27、 R28、 R29、 R30、 R37 和 R38 各自表示氢， 且 P9 表示合适的氮保护基 ) 可由式 (XXIX) 化合物在 合适的反应条件下 ( 诸如在强酸中 ) 来制备，
     式 (XXIX) 化合物如下 ：
     通式 (XXIX) 化合物可如下制备 ： 使式 (XXVII) 化合物与乙醇胺反应。
     通式 (XXII) 化合物 ( 其中 V 表示键， X 表示 O， W 表示 CR27R28CR29R30， Z 表示 CR37R38， R27、 R28、 R29、 R30、 R37 和 R38 各自表示氢， 且 P9 表示合适的氮保护基 ) 可由式 (XXX) 化合物 [LG11 为合适的离去基 ( 诸如卤素、 OMs( 甲磺酸酯基团 ) 或 OTs( 甲苯磺酸酯基团 )] 来制备。
     通式 (XXX) 化合物可由式 (XXIX) 化合物在合适的条件下来制备。
     式 (XIV) 化合物可由式 (XXXI) 化合物 ( 其中 CH2L5 为 L， 且 R200 为烷基或取代有二 烷基胺基团的烷基 ) 通过在酸性条件 ( 诸如甲酸 ) 下处理来制备。
     式 (XXXI) 化合物可由式 (XXXII) 化合物通过用式 (XXXIII) 化合物处理来制备。
     式 (IV) 或 (XIV) 化合物可由式 (XXXII) 化合物如下制备 ： 在合适的条件下 [ 诸如 在合适的溶剂 ( 诸如含有三氟乙酸的二氯甲烷 ) 中使用戴斯 - 马丁试剂 ] 对所述醇进行氧 化。
     式 (XXXII) 化合物可如下制备 ： 在碱 ( 例如碳酸钾、 三乙胺或二异丙基乙基胺 ) 存 18 在下使式 (XXXIII) 化合物 [ 其中 P 为氢或合适的保护基， 且 LG12 表示离去基 ( 例如氯、 溴、 碘、 甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团 )] 与式 (X) 化合物或其合适的盐反应， 接着除去 保护基 ( 例如三氟乙酸、 苯硫酚或硫代乙酸 ) ；
     式 (XXXII) 化合物可如下制备 ： 在合适的还原剂 ( 例如氰基硼氢化钠、 三乙酰氧 基硼氢化钠或在合适的钯 / 碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气 ) 存在下使式 (XXXIV) 化合 物 ( 其中 P18 表示氢或合适的保护基 ) 与式 (X) 化合物或其合适的盐反应， 接着除去保护基 ( 例如用盐酸、 三氟乙酸、 苯硫酚或硫代乙酸处理 ) ；
     式 (XXXI) 化合物可如下制备 ： 在碱 ( 例如碳酸钾、 三乙胺或二异丙基乙基胺 ) 存 5 200 在下使式 (XXXV) 化合物 [ 其中 CH2L 为 L， R 为烷基或取代有二烷基胺基团的烷基， 且 LG13表示离去基 ( 例如氯、 溴、 碘、 甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团 )] 与式 (X) 化合物或其合 适的盐反应， 接着除去保护基 ( 例如三氟乙酸、 苯硫酚或硫代乙酸 ) ；
     式 (XXXI) 化合物可如下制备 ： 在合适的还原剂 ( 例如氰基硼氢化钠、 三乙酰氧基 硼氢化钠或在合适的钯 / 碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气 ) 存在下使式 (XXXVI) 化合物 ( 其中 CH2L5 为 L， 且 R200 为烷基或取代有二烷基胺基团的烷基 ) 与式 (X) 化合物或其合适 的盐反应， 接着除去保护基 ( 例如用盐酸、 三氟乙酸、 苯硫酚或硫代乙酸处理 ) ；
     合适的式 (IV) 化合物包括这样的化合物， 其中 m 和 n ＝ 2， V ＝键， Z ＝ CH2， X＝ 1 O， W ＝ CH2CH2， Y ＝ CO， 且 R 为噻唑 -4- 基， 所述噻唑 -4- 基在噻唑的 2 位任选被以下基团 取代 ： 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 CH(CH3)CH2CH3、 CH2CH(CH3)2、 1 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基， 或 R 为噻吩 -3- 基， 所述噻吩 -3- 基在噻吩的 5 位任选 被以下基团取代 ： 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 CH(CH3)CH2CH3、 CH2CH(CH3)2、 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基 ； 1
     (XXXVII) 表示 R ＝噻唑 -4- 基和噻吩 -3- 基 ：
     合适的式 (X) 化合物和合适的氮被保护的类似物包括这样的化合物， 其中 m 和 n 1 ＝ 2， V ＝键， Z ＝ CH2， X ＝ O， W ＝ CH2CH2， Y ＝ CO， 且 R 为噻唑 -4- 基， 所述噻唑 -4- 基在噻 唑的 2 位任选被以下基团取代 ： 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 1 CH(CH3)CH2CH3、 CH2CH(CH3)2、 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基， 或 R 为噻吩 -3- 基， 所述噻 吩 -3- 基在噻吩的 5 位任选被以下基团取代 ： 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 CH(CH3)CH2CH3、 CH2CH(CH3)2、 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基 ； 1
     R ＝如式 (XXXVII) 中所示的噻唑 -4- 基和噻吩 -3- 基。
     合适的式 (XIV) 化合物包括这样的化合物， 其中 m 和 n ＝ 2， V ＝键， Z ＝ CH2， X＝ 1 O， W ＝ CH2CH2， Y ＝ CO， 且 R 为噻唑 -4- 基， 所述噻唑 -4- 基在噻唑的 2 位任选被以下基团 取代 ： 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 CH(CH3)CH2CH3、 CH2CH(CH3)2、 1 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基， 或 R 为噻吩 -3- 基， 所述噻吩 -3- 基在噻吩的 5 位任选
     被以下基团取代 ： 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 CH(CH3)CH2CH3、 CH2CH(CH3)2、 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基 ； 1
     R ＝如式 (XXXVII) 中所示的噻唑 -4- 基和噻吩 -3- 基。
     合适的式 (XXXI) 化合物包括这样的化合物， 其中 m 和 n ＝ 2， V ＝键， Z ＝ CH2， X＝ 1 O， W ＝ CH2CH2， Y ＝ CO， 且 R 为噻唑 -4- 基， 所述噻唑 -4- 基在噻唑的 2 位任选被以下基团 取代 ： 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 CH(CH3)CH2CH3、 CH2CH(CH3)2、 1 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基， 或 R 为噻吩 -3- 基， 所述噻吩 -3- 基在噻吩的 5 位任选 被以下基团取代 ： 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 CH(CH3)CH2CH3、 CH2CH(CH3)2、 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基 ； 1
     R ＝如式 (XXXVII) 中所示的噻唑 -4- 基和噻吩 -3- 基。
     合适的式 (XXXII) 化合物包括这样的化合物， 其中 m 和 n ＝ 2， V ＝键， Z ＝ CH2， X 1 ＝ O， W ＝ CH2CH2， Y ＝ CO， 且 R 为噻唑 -4- 基， 所述噻唑 -4- 基在噻唑的 2 位任选被以下基团 取代 ： 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 CH(CH3)CH2CH3、 CH2CH(CH3)2、 1 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基， 或 R 为噻吩 -3- 基， 所述噻吩 -3- 基在噻吩的 5 位任选 被以下基团取代 ： 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 CF3、 CH2CF3、 CH(CH3)2、 CH(CH2CH3)2、 CH(CH3)CH2CH3、 CH2CH(CH3)2、 C(CH3)3、 环丙基、 环丁基和环戊基 ； 1
     R ＝如式 (XXXVII) 中所示的噻唑 -4- 基和噻吩 -3- 基。
     式 (VI)、 (VII)、 (VIII)、 (XIII)、 (XV)、 (XVII)、 (XVIII)、 (XIX)、 (XX)、 (XXVI) 和 (XXVIII) 化合物可商购得到， 是文献中已知的， 或可由本领域技术人员通过上述方法中的 一种或已知的技术来容易地制备。
     其它中间体化合物是新颖的， 且表示本发明独立的方面。 具体地， 本申请描述的多 种新颖中间体化合物为能够阻断 M3 毒蕈碱性受体的化合物。本发明具有毒蕈碱性拮抗剂 活性的中间体化合物包括 ：
     (9-(2-(4-( 羟 基 甲 基 ) 苯 氧 基 ) 乙 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ；
     (9-(9- 羟 基 壬 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 ) 甲酮 ；
     (9-(2-(4-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ；
     (9-(2-(5-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ；
     (9-(4-(2- 羟基乙基 ) 苯乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ；
     9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲 基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ；
     (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲 基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ； 和
     它们的可药用盐。
     本领域技术人员应该理解的是， 在本发明方法中， 试剂中的某些官能团 ( 诸如羟基或氨基 ) 可能需要通过保护基来保护。因此， 式 (I) 化合物的制备可能在合适的阶段涉 及引入或除去一个或多个保护基。
     官能团的保护和脱保护参见 ‘Protective Groups in Organic Chemistry’ ， edited by J.W.F.McOmie， Plenum Press(1973) 和 ‘Protective Groups in Organic rd Synthesis’ ， 3 edition， T.W.Greene and P.G.M.Wuts， Wiley-Interscience(1999)。
     式 (I) 化合物可使用标准操作来转化成另一种式 (I) 化合物。
     式 I 化合物具有作为药物的活性， 特别是双重地作为肾上腺素能 β 受体激动剂和 抗胆碱能药 ( 包括毒蕈碱性受体 (M1、 M2 和 M3) 拮抗剂特别是 M3 拮抗剂 ) 的活性。可用式 (I) 化合物和其可药用盐治疗的疾病和病症包括 ：
     1. 呼吸道 ： 气道阻塞性疾病， 包括哮喘， 包括支气管哮喘、 变应性哮喘、 内源性哮 喘、 外源性哮喘、 运动诱发性哮喘、 药物诱发性 ( 包括阿司匹林和 NSAID 诱发的 ) 哮喘和粉 尘诱发性哮喘， 包括间歇性哮喘和持续性哮喘及各种严重度的哮喘， 及其它原因引起的气 道高反应性 ； 慢性阻塞性肺病 (COPD) ； 支气管炎， 包括传染性支气管炎和嗜酸性支气管炎 ； 肺气肿 ； 支气管扩张 ； 囊性纤维化 ； 结节病 ； 农民肺及相关疾病 ； 超敏感性肺炎 ； 肺纤维化， 包括隐原性纤维化肺泡炎、 特发性间质性肺炎、 抗肿瘤治疗和慢性感染 ( 包括结核病和曲 霉病及其它真菌感染 ) 并发的纤维化 ； 肺移植的并发症 ； 肺血管的血管炎和血栓形成疾病 及肺动脉高压 ； 镇咳活性， 包括治疗与气道炎症和分泌情况相关的慢性咳嗽及医源性咳嗽 ； 急性鼻炎和慢性鼻炎， 包括药物性鼻炎及血管运动性鼻炎 ； 常年性 (perennial) 和季节性 变应性鼻炎， 包括神经性鼻炎 ( 花粉症 ) ； 鼻息肉病 ； 急性病毒感染， 包括普通感冒和由呼吸 道合胞病毒、 流行性感冒、 冠状病毒 ( 包括 SARS) 和腺病毒引起的感染 ； 或嗜酸性食管炎 ；
     2. 骨和关节 ： 与骨关节炎 / 骨关节病相关或包括骨关节炎 / 骨关节病的关节炎， 包括原发性和继发性关节炎， 例如先天性髋关节发育不良 ； 颈和腰脊椎炎及腰背痛和颈部 疼痛 ； 骨质疏松 ； 类风湿性关节炎和斯蒂尔病 (Still’ s disease) ； 血清阴性脊柱关节病， 包括强直性脊柱炎、 牛皮癣性关节炎、 反应性关节炎和未分化的脊柱关节病 ； 脓毒性关节炎 及与其它感染相关的关节病和骨疾病， 例如结核病， 包括波特病 (Potts’ disease) 和蓬塞 综合征 (Poncet’ s syndrome) ； 晶体诱发的急性和慢性滑膜炎， 包括尿酸盐沉积病、 焦磷 酸钙沉积病和与钙磷灰石相关的腱、 粘液囊和滑膜炎症 ； 贝切特病 (Behcet’ s disease) ； 原发性和继发性斯耶格伦综合征 (sjogren’ s syndrome) ； 全身性硬化和局限性硬皮病 ； 系统性红斑狼疮、 混合性结缔组织病和未分化的结缔组织病 ； 炎性肌病， 包括皮肌炎和多 肌炎 ； 风湿性多肌痛 ； 幼年型关节炎， 包括分布在任何关节的特发性炎性关节炎及相关综 合征和风湿热及其全身性并发症 ； 血管炎 (vasculitis)， 包括巨细胞性动脉炎、 高安动脉 炎 (Takayasu’ s arteritis)、 丘 - 施综合征 (Churg-Strauss syndrome)、 结节性多动脉 炎、 显微镜性多动脉炎和与病毒感染、 超敏反应、 冷球蛋白和异蛋白相关的血管炎 ； 腰背痛 ； 家族性地中海热、 穆 - 韦综合征 (Muckle-Wells syndrome)、 家族性爱尔兰热 (Familial Hibernian Fever) 和菊池病 (Kikuchi disease) ； 药物诱发性关节痛、 腱炎和肌病 ；
     3. 由损伤 ( 例如运动损伤 ) 或疾病引起的疼痛和肌肉骨骼疾病的结缔组织再造 ： 关节炎 ( 例如类风湿性关节炎、 骨关节炎、 痛风或晶体性关节病 )、 其它关节疾病 ( 诸如椎间 盘变性或颞下颌关节变性 )、 骨再造疾病 ( 诸如骨质疏松、 佩吉特病 (Paget’ s disease) 或 骨坏死 )、 多软骨炎、 硬皮病、 混合性结缔组织病、 脊椎关节病或牙周病 ( 诸如牙周炎 ) ；4. 皮肤 ： 牛皮癣、 特应性皮炎、 接触性皮炎或其它湿疹性皮肤病及迟发型超敏反 应； 植物性和光照性皮炎 ； 脂溢性皮炎、 疱疹样皮炎、 扁平苔癣、 萎缩性硬化性苔癣、 坏疽性 脓皮症、 皮肤结节病、 盘状红斑狼疮、 天疱疮、 类天疱疮、 大疱性表皮松解、 荨麻疹、 血管性水 肿、 血管炎、 中毒性红斑、 皮肤嗜酸粒细胞增多、 斑秃、 男性型脱发、 斯威特综合征 (Sweet’ s syndrome)、 韦 - 克综合征 (Weber-Christian syndrome) 或多形性红斑 ； 蜂窝组织炎， 包括 传染性和非传染性蜂窝组织炎 ； 脂膜炎 ； 皮肤淋巴瘤、 非黑素瘤皮肤癌和其它发育不良性 损伤 ； 或药物诱发的疾病， 包括固定性药疹 ；
     5. 眼 ： 睑炎 ； 结膜炎， 包括常年性变应性结膜炎或春季性变应性结膜炎 ； 虹膜炎 ； 前色素层炎和后色素层炎 ； 脉络膜炎 ； 自身免疫 ； 影响视网膜的变性或炎性疾病 ； 眼炎， 包 括交感性眼炎 ； 结节病 ； 或感染， 包括病毒、 真菌和细菌感染 ；
     6. 胃肠道 ： 舌炎、 龈炎、 牙周炎 ； 食管炎， 包括返流 ； 嗜酸性胃肠炎、 肥大细胞增多、 克罗恩病 (Crohn’ s disease)、 结肠炎包括溃疡性结肠炎、 直肠炎或肛门瘙痒 ； 或腹部疾病、 肠应激综合征和作用可远离肠的食物相关变态反应 ( 例如偏头痛、 鼻炎或湿疹 ) ；
     7. 腹部 ： 肝炎， 包括自身免疫性、 酒精性和病毒性肝炎 ； 肝纤维化和硬化 ； 胆囊炎 ； 或胰腺炎， 包括急性和慢性胰腺炎 ；
     8. 生殖泌尿系统 ： 肾炎， 包括间质性肾炎和肾小球性肾炎 ； 肾病综合征 ； 膀胱炎， 包括急性和慢性 ( 间质性 ) 膀胱炎和杭纳溃疡 (Hunner’ s ulcer) ； 急性和慢性尿道炎、 前 列腺炎、 附睾炎、 卵巢炎和输卵管炎 ； 女阴阴道炎 ； 佩伦涅病 (Peyronie’ s disease) ； 或勃 起机能障碍 ( 男性和女性 ) ；
     9. 同种异体移植物排斥 ： 例如肾脏、 心脏、 肝脏、 肺脏、 骨髓、 皮肤或角膜移植后或 输血后出现的急性和慢性同种异体移植物排斥 ； 或慢性移植物抗宿主病 ；
     10.CNS ： 阿 耳 茨 海 默 病 (Alzheimer’ s disease) 和 其 它 痴 呆 疾 病 包 括 CJD 和 nvCJD ； 淀粉样变性 ； 多发性硬化和其它脱髓鞘综合征 ； 脑动脉粥样硬化和血管炎 ； 颞动脉 炎； 重症肌无力 ； 急性和慢性疼痛 ( 急性、 间歇性或持续性疼痛 ( 无论是中枢源性还是外周 源性 ))， 包括内脏痛、 头痛、 偏头痛、 三叉神经痛、 不典型面痛、 关节和骨痛、 由癌症和肿瘤 侵入引起的疼痛或神经性疼痛综合征包括糖尿病性神经病、 疱疹后神经病和 HIV 相关神经 病； 神经性肉样瘤病 ； 或恶性、 感染性或自身免疫性过程的中枢和外周神经系统并发症 ；
     11. 其 它 自 身 免 疫 性 和 变 态 反 应 性 疾 病， 包 括 桥 本 甲 状 腺 炎 (Hashimoto’ s thyroiditis)、 格雷夫斯病 (Graves’ disease)、 阿狄森病 (Addison’ s disease)、 糖尿病、 特发性血小板减少性紫癜、 嗜酸性筋膜炎、 高 IgE 综合征或抗磷脂综合征 ；
     12. 其它具有炎性或免疫性组成的疾病， 包括获得性免疫缺陷综合征 (AIDS)、 麻 风病、 塞扎里综合征 (Sezary syndrome) 和瘤外综合征 ；
     13. 心血管 ： 影响冠脉和外周循环的动脉粥样硬化 ； 心包炎 ； 心肌炎 ； 炎性和自身 免疫性心肌病， 包括心肌结节病 ； 缺血性再灌注损伤 ； 心内膜炎、 心瓣炎和主动脉炎， 包括 传染性 ( 例如梅毒性 ) 的 ； 血管炎 ； 或近端和外周静脉疾病， 包括静脉炎和血栓形成 ( 包括 深静脉血栓形成 ) 及静脉曲张的并发症 ；
     14. 肿瘤 ： 对一般癌症的治疗， 包括前列腺、 乳腺、 肺、 卵巢、 胰腺、 肠和结肠、 胃、 皮 肤和脑肿瘤和影响骨髓 ( 包括白血病 ) 和淋巴增殖系统 ( 诸如如何杰金 (Hodgkin’ s) 和 非何杰金淋巴瘤 ) 的恶性肿瘤 ； 包括对转移性疾病和肿瘤复发及瘤外综合征进行预防和治疗； 和 15. 胃肠道 ： 腹部疾病、 直肠炎、 嗜酸性胃肠炎、 肥大细胞增生、 克罗恩病、 溃疡性 结肠炎、 显微镜性结肠炎、 不确定性结肠炎、 肠应激病、 肠应激综合征、 非炎性腹泻或作用可 远离肠的食物相关变态反应 ( 例如偏头痛、 鼻炎或湿疹 )。
     因此， 本发明提供了用于治疗的如上定义的式 (I) 化合物或其可药用盐。
     在另一个方面， 本发明提供了如上定义的式 (I) 化合物或其可药用盐在制备用于 治疗的药物中的用途。
     在本说明书上下文中， 术语 “治疗” 也包括 “预防” ， 除非有相反的具体说明。术语 “治疗的” 和 “治疗地” 应该相应地解释。
     预期预防与对以下患者的治疗特别相关， 所述患者患有所述疾病或病症的先前发 作， 或被视为面临所述疾病或病症的增加风险。面临发展成具体疾病或病症风险的患者通 常包括具有所述疾病或病症家族史的那些患者或通过遗传学测试或筛选而被确定为特别 易于发展成所述疾病或病症的那些患者。
     本发明还提供了治疗炎性疾病或病症 ( 包括可逆性阻塞性气道疾病或病症 ) 或降 低炎性疾病或病症 ( 包括可逆性阻塞性气道疾病或病症 ) 风险的方法， 所述方法包括向有 此需要的患者给药治疗有效量的如上定义的式 (I) 化合物或其可药用盐。
     具体地， 本发明化合物可用于治疗成人呼吸窘迫综合征 (ARDS)、 肺气肿、 支气管 炎、 支气管扩张、 慢性阻塞性肺病 (COPD)、 哮喘和鼻炎。
     就上述治疗用途而言， 给药的剂量当然应该随使用的化合物、 给药的模式、 期望的 治疗和适应的疾病而变化。例如， 本发明化合物的每日剂量当吸入给药时可以是每千克体 重 0.05 微克 (μg/kg) 至每千克体重 100 微克 (μg/kg)。可选择地， 如果本发明化合物是 口服给药的， 则本发明化合物的每日剂量可以是每千克体重 0.01 微克 (μg/kg) 至每千克 体重 100 毫克 (mg/kg)。
     式 (I) 化合物及其可药用盐可单独使用， 但通常可按药物组合物的形式来给药， 其中式 (I) 化合物 / 盐 ( 活性成分 ) 与可药用辅料、 稀释剂或载体是混合的。有关选择和 制备合适药物制剂的常规操作参见例如 “Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Designs” ， M.E.Aulton， Churchill Livingstone， 1988。
     基于给药模式， 所述药物组合物所包含的活性成分可优选为 0.05 至 99％ w( 重量 百分比 )， 更优选为 0.05 至 80％ w， 更优选为 0.10 至 70％ w， 且更优选为 0.10 至 50％ w， 其 中所有重量百分比均基于总组合物。
     本发明还提供了一种药物组合物， 其包含如上定义的式 (I) 化合物或其可药用盐 及可药用辅料、 稀释剂或载体。
     本发明还提供了制备本发明药物组合物的方法， 所述方法包括对如上定义的式 (I) 化合物或其可药用盐与可药用辅料、 稀释剂或载体进行混合。
     所述药物组合物可通过以下形式来局部给药 ( 例如给药至皮肤或给药至肺和 / 或 气道 ) ： 例如乳膏剂、 溶液剂、 悬浮液、 七氟代烷烃 (HFA) 气雾剂和干粉制剂 ( 例如吸入装置 ( 称为 Turbuhaler ) 中的制剂 ) ； 或通过以下形式来全身给药 ： 例如口服给药的片剂、 胶囊 剂、 糖浆剂、 粉剂或颗粒剂 ； 或通过以下形式来肠胃外给药 ： 溶液剂或混悬剂 ； 或通过以下 形式来直肠给药 ： 栓剂 ； 或经皮给药。
     本发明化合物的干粉制剂和加压 HFA 气雾剂可通过口吸入或鼻吸入来给药。就吸 入而言， 期望所述化合物是精细分散的。精细分散的化合物优选具有小于 10μm 的质量中 位直径， 且可悬浮在有分散剂辅助的推进剂混合物中， 所述分散剂为诸如 C8-C20 脂肪酸或其 盐 ( 例如油酸 )、 胆汁盐、 磷脂、 烷基糖、 全氟化表面活性剂、 聚乙氧基化表面活性剂或其它 可药用分散剂。
     本发明化合物也可通过干粉吸入器来给药。 所述吸入器可以是单剂量吸入器或多 剂量吸入器， 且可以是由呼吸驱动的干粉吸入器。
     一种可能性是对精细分散的本发明化合物与载体物质进行混合， 所述载体物质为 例如单糖、 二糖、 多糖、 糖醇或其它多元醇。合适的载体为糖， 例如乳糖、 葡萄糖、 棉子糖、 松 三糖、 乳糖醇、 麦芽醇、 海藻糖、 蔗糖、 甘露醇和淀粉。 可选择地， 精细分散的化合物可通过其 它物质来包衣。也可将粉末混合物分装到硬明胶胶囊中， 其中每个胶囊含有所需剂量的活 性化合物。
     另一种可能性是将精细分散的粉末加工成球， 所述球在吸入过程中破裂。可将该 球化的粉末装填到多剂量吸入器 ( 例如称为 Turbuhaler 的那种吸入器 ) 的药物贮库中， 其中给药单元对所需剂量进行计量， 然后所述剂量被患者吸入。带有或不带有载体物质的 活性成分用该系统递送至患者。
     就口服给药而言， 可对本发明化合物与辅料或载体进行混合， 然后压制成片剂， 所 述辅料或载体为例如乳糖、 蔗糖、 山梨醇或甘露醇 ； 淀粉， 例如土豆淀粉、 玉米淀粉或支链淀 粉； 纤维素衍生物 ； 粘合剂， 例如明胶或聚乙烯基吡咯烷酮 ； 和 / 或润滑剂， 例如硬脂酸镁、 硬脂酸钙、 聚乙二醇、 蜡、 石蜡等。 如果需要包衣片， 则如上所述制备的片芯可用浓的糖溶液 包衣， 所述浓的糖溶液可含有例如阿拉伯胶、 明胶、 滑石和二氧化钛。 可选择地， 片剂可用溶 于易挥发有机溶剂中的合适聚合物包衣。
     就制备软明胶胶囊剂而言， 可对本发明化合物与例如植物油或聚乙二醇进行混 合。硬明胶胶囊剂可含有所述化合物的颗粒， 其中使用上述片剂赋形剂。也可将本发明化 合物的液体或半固体制品装填到硬明胶胶囊中。
     口服的液体制剂可呈糖浆剂形式或混悬剂形式， 例如含有本发明化合物的溶液 剂， 其中其余物质为乙醇、 水、 甘油和丙二醇的混合物和糖。 任选地， 上述液体制剂可含有着 色剂、 矫味剂、 糖精和 / 或作为增稠剂的羧甲基纤维素或本领域技术人员已知的其它赋形 剂。
     具体地， 本发明化合物及其盐可用于治疗炎性疾病诸如 ( 但不限于 ) 类风湿性关 节炎、 骨关节炎、 哮喘、 变应性鼻炎、 慢性阻塞性肺病 (COPD)、 牛皮癣和炎性肠病。本发明化 合物可与以下药物组合 ： 非甾类抗炎药 ( 以下称为 NSAID)， 包括非选择性环氧化酶 COX-1/ COX-2 抑制剂 ( 无论是局部应用还是全身应用 )( 诸如吡罗昔康 ； 双氯芬酸 ； 丙酸类化合 物， 诸如萘普生、 氟比洛芬、 非诺洛芬、 酮洛芬和布洛芬 ； 芬那酸类化合物， 诸如甲芬那酸、 吲哚美辛、 舒林酸和阿扎丙宗 (azapropazone) ； 吡唑酮类化合物， 诸如保泰松 ； 和水杨酸 酯 ( 盐 )， 诸如阿司匹林 ) ； 选择性 COX-2 抑制剂 ( 诸如美洛昔康、 塞来考昔、 罗非考昔、 伐 地考昔、 鲁马考昔 (lumarocoxib)、 帕瑞考昔和艾托考昔 ) ； 抑制环氧化酶的一氧化氮供体 (CINOD) ； 糖皮质激素 ( 无论是通过局部、 口服、 肌内或静脉内途径还是通过关节内途径来 给药 ) ； 甲氨蝶呤 ； 来氟米特 ； 羟氯喹 ； d- 青霉胺 ； 金诺芬或其它肠胃外或口服金制剂 ； 镇痛药； 双醋瑞因 (diacerein) ； 关节内治疗剂， 诸如透明质酸衍生物 ； 和营养补剂， 诸如氨基葡 萄糖。
     本发明化合物也可与用于治疗上述病症的其它化合物联合给药。
     因此， 本发明还涉及联合治疗， 其中本发明化合物或其可药用盐或包含本发明化 合物的药物组合物或制剂与用于治疗上述一种或多种病症的其它治疗剂同时或相继给药， 或与用于治疗上述一种或多种病症的其它治疗剂一起呈组合制剂的形式。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 细胞因子或细胞 因子功能激动剂或拮抗剂 ( 包括作用于细胞因子信号传导路径的药物诸如 SOCS 系统调 节剂 )， 包括 α- 干扰素、 β- 干扰素和 γ- 干扰素 ； I 型胰岛素样生长因子 (IGF-1) ； 白介 素 (IL)， 包括 IL-1 至 IL-17 和白介素拮抗剂或抑制剂 ( 诸如阿那白滞素 ) ； 肿瘤坏死因 子 -α(TNF-α) 抑制剂， 诸如抗 TNF 单克隆抗体 ( 例如英夫利昔单抗 (infliximab)、 阿达 木单抗 (adalimumab) 和 CDP-870) 和 TNF 受体拮抗剂 ( 包括免疫球蛋白分子 ( 诸如依那西 普 ) 和低分子量药物 ( 诸如己酮可可碱 (pentoxyfylline)))。
     另外， 本发明涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 靶向于 B 淋巴 细胞的单克隆抗体 ( 诸如 CD20( 利妥昔单抗 (rituximab))、 MRA-aIL16R) 和靶向于 T 淋巴 细胞的单克隆抗体 (CTLA4-Ig、 HuMax Il-15)。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 趋化因子受体功能 调节剂， 诸如 CCR1、 CCR2、 CCR2A、 CCR2B、 CCR3、 CCR4、 CCR5、 CCR6、 CCR7、 CCR8、 CCR9、 CCR10 和 CCR11(C-C 家族 ) 的拮抗剂 ； CXCR1、 CXCR2、 CXCR3、 CXCR4 和 CXCR5(C-X-C 家族 ) 的拮抗剂 ； 和 CX3CR1(C-X3-C 家族 ) 的拮抗剂。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 基质金属蛋白酶 (MMP) 即溶基质蛋白酶 (stromelysin)、 胶原酶和明胶酶及蛋白聚糖酶 (aggrecanase)( 尤 其是胶原酶 -1(MMP-1)、 胶原酶 -2(MMP-8)、 胶原酶 -3(MMP-13)、 溶基质蛋白酶 -1(MMP-3)、 溶基质蛋白酶 -2(MMP-10) 和溶基质蛋白酶 -3(MMP-11) 及 MMP-9 和 MMP-12) 的抑制剂， 包 括药物， 诸如多西环素。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 白三烯生物合成抑 制剂、 5- 脂肪氧化酶 (5-LO) 抑制剂或 5- 脂肪氧化酶活化蛋白 (FLAP) 拮抗剂， 诸如齐留通 ； ABT-761 ； 芬留顿 ； 替泊沙林 ； Abbott-79175 ； Abbott-85761 ； N-(5- 取代的 )- 噻吩 -2- 烷基 磺酰胺 ； 2， 6- 二叔丁基苯酚腙类化合物 ； 甲氧基四氢吡喃类化合物， 诸如 Zeneca ZD-2138 ； 化合物 SB-210661 ； 吡啶基取代的 2- 氰基萘类化合物， 诸如 L-739,010 ； 2- 氰基喹啉类化合 物， 诸如 L-746,530 ； 或吲哚或喹啉类化合物， 诸如 MK-591、 MK-886 和 BAY×1005。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 白三烯 (LT)B4、 LTC4、 LTD4 和 LTE4 的受体拮抗剂， 其选自吩噻嗪 -3- 基类化合物， 诸如 L-651,392 ； 脒基 类化合物， 诸如 CGS-25019c ； 苯并噁胺 (benzoxalamine) 类化合物， 诸如昂唑司特 ； 苯甲 脒 (benzenecarboximidamide) 类化合物， 诸如 BIIL 284/260 ； 和化合物， 诸如扎鲁司特、 阿鲁司特、 孟鲁司特、 普仑司特、 维鲁司特 (MK-679)、 RG-12525、 Ro-245913、 伊拉司特 (CGP 45715A) 和 BAY×7195。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 磷酸二酯酶 (PDE) 抑制剂， 诸如甲基黄嘌呤 (methylxanthanine) 类化合物， 包括茶碱和氨茶碱 ； 和选择性 PDE同工酶抑制剂， 包括 PDE4 抑制剂或同工型 PDE4D 抑制剂或 PDE5 抑制剂。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 组胺 1 型受体拮抗 剂， 诸如西替利嗪、 氯雷他定、 地氯雷他定、 非索非那定、 阿伐斯汀、 特非那定、 阿司咪唑、 氮 卓斯汀、 左卡巴斯汀、 氯苯那敏、 异丙嗪、 赛克力嗪 (cyclizine) 或咪唑斯汀 ； 口服、 局部或 肠胃外给药。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 质子泵抑制剂 ( 诸 如奥美拉唑 ) 或胃保护性组胺 2 型受体拮抗剂。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 组胺 4 型受体拮抗 剂。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： α1/α2 肾上腺素 受体激动剂、 血管收缩药或拟交感神经药， 诸如丙己君 (propylhexedrine)、 苯福林、 苯丙醇 胺、 麻黄碱、 伪麻黄碱、 盐酸萘甲唑啉、 盐酸羟甲唑啉、 盐酸四氢唑啉、 盐酸木甲唑啉、 盐酸曲 马唑啉或盐酸乙基去甲肾上腺素。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 色原酮， 诸如色甘 酸钠或奈多罗米钠。 本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 糖皮质激素， 诸如 氟尼缩松、 曲安奈德、 二丙酸倍氯美松、 布地奈德、 丙酸氟替卡松、 环索奈德或糠酸莫米松。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 对核激素受体 ( 诸 如 PPARs) 进行调节的药物。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 免疫球蛋白 (Ig) 或 Ig 制品或对 Ig 功能进行调节的拮抗剂或抗体， 诸如抗 IgE( 例如奥马珠单抗 (omalizumab))。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 另一种全身或局部 应用的抗炎药， 诸如沙利度胺 (thalidomide) 或其衍生物、 类维生素 A(retinoid)、 地蒽酚 (dithranol) 或卡泊三醇 (calcipotriol)。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 氨基水杨酸酯 ( 盐 ) 和磺胺吡啶 ( 诸如柳氮磺吡啶、 美沙拉嗪、 巴柳氮和奥沙拉嗪 ) 的组合 ； 免疫调节药， 诸如硫代嘌呤 (thiopurine) ； 和皮质激素， 诸如布地奈德。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 抗菌药， 诸如青 霉素衍生物、 四环素、 大环内酯、 β- 内酰胺、 氟喹诺酮、 甲硝唑、 吸入性氨基糖苷 ； 抗病 毒药， 包括阿昔洛韦、 泛昔洛韦、 伐昔洛韦、 更昔洛韦、 西多福韦、 金刚烷胺、 金刚乙胺、 利 巴 韦 林、 扎 那 米 韦 (zanamavir) 和 奥 塞 米 韦 (oseltamavir) ； 蛋 白 酶 抑 制 剂， 诸如茚地 那韦、 奈非那韦、 利托那韦和沙奎那韦 ； 核苷逆转录酶抑制剂， 诸如去羟肌苷、 拉米夫定、 扎西他宾或齐多夫定 ； 或非核苷逆转录酶抑制剂， 诸如奈韦拉平 司他夫定 (stavudine)、 (nevirapine) 或依法韦仑 (efavirenz)。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 心血管药， 诸如钙 通道阻断剂、 β- 肾上腺素受体阻断剂、 血管紧张素转化酶 (ACE) 抑制剂、 血管紧张素 -2 受 体拮抗剂 ； 降脂药， 诸如他汀类或贝特类 ； 血细胞形态学调节剂， 诸如己酮可可碱 ； 和溶栓 药或抗凝药， 诸如血小板聚集抑制剂。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： CNS 药， 诸如抗抑 郁药 ( 诸如舍曲林 )、 抗帕金森病药 ( 诸如司来吉兰、 左旋多巴、 罗匹尼罗、 普拉克索、 MAOB 抑制剂 ( 诸如司来吉兰和雷沙吉兰 )、 comP 抑制剂 ( 诸如托卡朋 )、 A-2 抑制剂、 多巴胺再摄 取抑制剂、 NMDA 拮抗剂、 烟碱激动剂、 多巴胺激动剂或神经元一氧化氮合酶抑制剂 ) 或抗阿 尔茨海默病药 ( 诸如多奈哌齐、 利凡斯的明、 他克林、 COX-2 抑制剂、 丙戊茶碱或美曲磷酯 )。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 用于治疗急性或慢 性疼痛的药物， 诸如在中枢或外周发挥作用的止痛药 ( 例如阿片样物质或其衍生物 )、 卡马 西平、 苯妥英、 丙戊酸钠、 阿米替林、 其它抗抑郁药、 对乙酰氨基酚或非甾类抗炎药。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： 肠胃外或局部应用 的 ( 包括吸入的 ) 局麻药， 诸如利诺卡因或其衍生物。
     本发明化合物或其可药用盐也可与以下物质联用 ： 抗骨质疏松药， 包括激素药物 ( 诸如雷洛昔芬 (raloxifene)) 或二膦酸盐 ( 诸如阿伦膦酸盐 (alendronate))。
     本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合 ： (i) 类胰蛋白酶 (tryptase) 抑制剂 ； (ii) 血小板活化因子 (PAF) 拮抗剂 ； (iii) 白介素转化酶 (ICE) 抑 制剂 ； (iv)IMPDH 抑 制 剂 ； (v) 粘 附 分 子 抑 制 剂， 包 括 VLA-4 拮 抗 剂 ； (vi) 组 织 蛋 白 酶 ； (vii) 激酶抑制剂， 诸如酪氨酸激酶 ( 诸如 Btk、 Itk、 Jak3 或 MAP) 抑制剂 ( 例如吉非替尼 (gefitinib) 或甲磺酸伊马替尼 (imatinib mesylate))、 丝氨酸 / 苏氨酸激酶抑制剂 ( 诸如 MAP 激酶 ( 诸如 p38， JNK， 蛋白激酶 A、 蛋白激酶 B、 蛋白激酶 C 或 IKK) 抑制剂 ) 或细胞周期调 节中涉及的激酶 ( 诸如细胞周期蛋白依赖性激酶 ) 的抑制剂 ； (viii) 葡萄糖 -6- 磷酸脱氢 酶抑制剂 ； (ix) 激肽 B1 受体或激肽 B2 受体拮抗剂 ； (x) 抗痛风药， 例如秋水仙碱 ； (xi) 黄嘌 呤氧化酶抑制剂， 例如别嘌醇 ； (xii) 排尿酸药， 例如丙磺舒、 磺吡酮或苯溴马隆 ； (xiii) 生 长激素促分泌剂 ； (xiv) 转化生长因子 (TGFβ) ； (xv) 血小板源性生长因子 (PDGF) ； (xvi) 成纤维细胞生长因子， 例如基本的成纤维细胞生长因子 (bFGF) ； (xvii) 粒细胞 - 巨噬细胞 集落刺激因子 (GM-CSF) ； (xviii) 辣椒素油 (capsaicin cream) ； (xix) 速激肽 NK1 受体或 速激肽 NK3 受体拮抗剂， 诸如 NKP-608C、 SB-233412( 他奈坦 (talnetant)) 或 D-4418 ； (xx) 弹性酶抑制剂， 诸如 UT-77 或 ZD-0892 ； (xxi)TNF-α 转化酶抑制剂 (TACE) ； (xxii) 诱导 性一氧化氮合酶 (iNOS) 抑制剂 ； (xxiii)TH2 细胞上表达的化学引诱物受体同源分子 ( 诸 如 CRTH2 拮抗剂 ) ； (xxiv)P38 抑制剂 ； (xxv) 对 Toll 样受体 (TLR) 功能进行调节的药物 ； (xxvi) 对嘌呤能受体活性进行调节的药物， 诸如 P2X7 ； (xxvii) 转录因子活化抑制剂， 诸如 NFkB、 API 或 STATS ； 或 (xxviii) 糖皮质激素受体 (GR 受体 ) 激动剂。
     在另一个方面， 本发明提供了式 (I) 化合物与一种或多种药物的组合 ( 例如用于 治疗 COPD、 哮喘或变应性鼻炎 )， 所述一种或多种药物选自 ：
     ●非甾类糖皮质激素受体 (GR 受体 ) 激动剂 ；
     ● PDE4 抑制剂， 包括同工型 PDE4D 抑制剂 ；
     ●趋化因子受体功能调节剂 ( 诸如 CCR1 受体拮抗剂 ) ；
     ●甾类 ( 诸如布地奈德 ) ； 和
     ● p38 激酶功能抑制剂。
     本发明化合物或其可药用盐也可与用于治疗癌症的现有治疗剂联用， 例如合适的 药物包括 ：(i) 医用肿瘤学中使用的抗增殖 / 抗肿瘤药或其组合， 诸如烷化剂 ( 例如顺铂、 卡 铂、 环磷酰胺、 氮芥、 美法仑、 苯丁酸氮芥、 白消安或亚硝基脲 ) ； 抗代谢剂 ( 例如抗叶酸剂， 诸如氟嘧啶样 5- 氟尿嘧啶或替加氟、 雷替曲塞、 甲氨蝶呤、 阿糖胞苷、 羟基脲、 吉西他滨或 紫杉醇 ) ； 抗肿瘤抗生素 ( 例如蒽环类抗生素， 诸如阿霉素、 博来霉素、 多柔比星、 柔红霉素、 表柔比星、 伊达比星、 丝裂霉素 C、 更生霉素或光辉霉素 ) ； 抗有丝分裂剂 ( 例如长春花属生 物碱， 诸如长春新碱、 长春碱、 长春地辛或长春瑞滨 ； 或紫杉烷类化合物， 诸如泰素 (taxol) 或泰索帝 (taxotere)) ； 或拓扑异构酶抑制剂 ( 例如表鬼臼毒素， 诸如依托泊苷、 替尼泊苷、 安沙可林、 托泊替康或喜树碱 ) ；
     (ii) 细胞生长抑制药， 诸如抗雌激素药 ( 例如他莫昔芬、 托瑞米芬、 雷洛昔芬、 屈 洛昔芬或 iodoxyfene) ； 雌激素受体下调剂 ( 例如氟维司群 ) ； 抗雄激素药 ( 例如比卡鲁胺、 氟他胺、 尼鲁米特或乙酸环丙孕酮 ) ； LHRH 拮抗剂或 LHRH 激动剂 ( 例如戈舍瑞林、 亮丙瑞林 或布舍瑞林 ) ； 孕激素 ( 例如乙酸甲地孕酮 ) ； 芳构酶 (aromatase) 抑制剂 ( 例如阿那曲唑、 来曲唑、 伏氯唑 (vorazole) 或依西美坦 ) ； 或 5α- 还原酶抑制剂 ( 例如非那雄胺 ) ；
     (iii) 抑制癌细胞侵入的药物 ( 例如金属蛋白酶抑制剂 ( 如马立马司他 ) 或尿激 酶纤维蛋白溶酶原激活剂受体功能抑制剂 ) ；
     (iv) 生长因子功能抑制剂， 例如生长因子抗体 ( 例如抗 erbb2 抗体曲妥单抗或 抗 erbb1 抗体西妥昔单抗 [C225]) ； 法尼基转移酶抑制剂 ； 酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸 / 苏氨酸激酶抑制剂 ； 表皮生长因子家族抑制剂 ( 例如 EGFR 家族酪氨酸激酶抑制剂， 诸 如 N-(3- 氯 -4- 氟苯基 )-7- 甲氧基 -6-(3- 吗啉代丙氧基 ) 喹唑啉 -4- 胺 ( 吉非替尼， AZD1839)、 N-(3- 乙 炔 基 苯 基 )-6， 7- 二 (2- 甲 氧 基 乙 氧 基 ) 喹 唑 啉 -4- 胺 ( 埃 罗 替 尼 (erlotinib)， OSI-774) 或 6- 丙烯酰氨基 -N-(3- 氯 -4- 氟苯基 )-7-(3- 吗啉代丙氧基 ) 喹唑啉 -4- 胺 (CI 1033)) ； 血小板源性生长因子家族抑制剂 ； 或肝细胞生长因子家族抑制 剂；
     (v) 抗血管生成药， 诸如抑制血管内皮生长因子作用的抗血管生成药 ( 例如抗 血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗、 WO 97/22596、 WO 97/30035、 WO 97/32856 或 WO 98/13354 中披露的化合物 ) ； 或通过另一种机制来发挥作用的化合物 ( 例如利诺胺、 整联蛋 白 αvβ3 功能抑制剂或血管生长抑素 ) ；
     (vi) 血管损伤剂， 诸如考布他汀 A4 或 WO 99/02166、 WO 00/40529、 WO 00/41669、 WO 01/92224、 WO 02/04434 或 WO 02/08213 中披露的化合物 ；
     (vii) 反义治疗中使用的药物， 例如指向上述靶标之一的反义治疗药物， 诸如 ISIS 2503、 抗 ras 反义物 ；
     (viii) 以下基因治疗方法中使用的药物 ： 例如置换异常基因 ( 诸如异常的 p53 或 异常的 BRCA1 或 BRCA2) 的方法 ； GDEPT( 基因靶向酶前药治疗 ) 方法， 诸如使用胞嘧啶脱氨 酶、 胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些 GDEPT 方法 ； 和提高患者化学治疗或放射治疗耐受 性的方法， 诸如多种药物抵抗基因治疗 ； 或
     (ix) 以下免疫治疗方法中使用的药物 ： 例如提高患者肿瘤细胞免疫原性的离体 和在体方法， 诸如用细胞因子 ( 诸如白介素 2、 白介素 4 或粒细胞 - 巨噬细胞集落刺激因子 ) 进行转染 ； 降低 T 细胞无反应性的方法 ； 使用经转染的免疫细胞 ( 诸如经细胞因子转染的 树突细胞 ) 的方法 ； 使用经细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法 ； 和使用抗个体基因型抗体的方法。 可将上述式 (I) 化合物转化成其可药用盐， 例如酸加成盐， 诸如盐酸盐例如二盐 酸盐 )、 氢溴酸盐 ( 例如二氢溴酸盐 )、 三氟乙酸盐 ( 例如二 ( 三氟乙酸盐 ))、 硫酸盐、 磷 酸盐、 乙酸盐、 富马酸盐、 马来酸盐、 酒石酸盐、 乳酸盐、 枸橼酸盐、 丙酮酸盐、 琥珀酸盐、 草酸 盐、 甲磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
     本发明现将通过参考以下实施例来说明， 但不限于此， 其中使用以下一般方法 ：
     一般方法
     在 Varian Inova 400MHz 或 Varian Mercury-VX 300MHz 仪器上记录 1HNMR 谱。 氯 仿 -d 的中间峰 (δH 7.27ppm)、 二甲基亚砜 -d6 的中间峰 (δH2.50ppm)、 乙腈 -d3 的中间峰 (δH 1.95ppm) 或甲醇 -d4 的中间峰 (δH 3.31ppm) 用作内标。柱色谱使用硅胶即 Fisher Scientific 硅胶 60A( 粒度 35-70 微米 )、 Davisil 或预装填的 0.040-0.63mm Biotage KP-Sil 柱来进行。 除非另有说明， 原料是可商购得到的。 所有溶剂和商购试剂为实验室级， 且按原样使用。
     以下方法用于 LC/MS 分析 ：
     仪器为 Agilent 1100 ； 柱为 Waters Symmetry C18， 2.1×50mm ； 质谱为 APCI 或多 模式 (APCl+ESI) ； 流速为 1mL/min ； 波长为 220nm ； 溶剂 A 为水 +0.1％ TFA ； 溶剂 B 为乙腈 +0.1％ TFA ； 梯度为 5-95％ /B 历时 8min。
     通 过 反 相 制 备 性 HPLC 进 行 的 纯 化 如 下 实 现 ： 以 35mL/min 的 流 速 使 用 乙 腈 /0.2 ％ TFA 水溶液梯度或甲醇 /0.2 ％ TFA 水溶液梯度或乙腈 /0.1 ％甲酸水溶液梯度或 甲醇 /0.1 ％甲酸水溶液梯度且使用 SunFireTMprep C8 OBDTM5μm30×100mm 柱 (Waters Corporation)， 或以 18.5mL/min 的流速使用乙腈 /0.1％乙酸铵水溶液梯度或甲醇 /0.1％ 乙酸铵水溶液梯度或乙腈 /0.1 ％甲酸水溶液梯度或甲醇 /0.1 ％甲酸水溶液梯度且使用 Xbridge 50×19mm 柱 (Waters Corporation)。
     用于实施例 101-115 和 279-285 的一般方法
     以下方法用于 LC/MS 分析 ：
     最终化合物使用 MS3 来分析， 且中间体使用 MS4 来分析。
     MS3 ： 仪器为与 Hewlett Packard HP1100LC 系统相连的 Waters Micromass ZQ 四 极质谱仪。样品注射通过 Gilson 215 自动进样器来进行。质谱仪具有以阳离子模式和阴 离子模式运行的电喷雾源。额外的检测使用 Sedex 55 蒸发光散射检测器来实现。流速为 1ml/min ； 波长为 254nm ； 溶剂 A 为水 +0.1％甲酸 ； 溶剂 B 为乙腈 +0.1％甲酸 ； 梯度为 5-95％ B 历时 20min。
     MS4 ： 仪器为与 Hewlett Packard 1050LC 系统 ( 具有 UV 二级管阵列检测器和自动 进样器 ) 相连的 Finnigan AQA 单四极质谱仪。质谱仪具有以阳离子模式运行的电喷雾源。 额外的检测使用 Sedex 65 蒸发光散射检测器来实现。 流速为 1ml/min ； 波长为 254nm ； 溶剂 A 为水 +0.1％甲酸 ； 溶剂 B 为乙腈 +0.1％甲酸 ； 梯度为 5-95％ B 历时 5min。
     在 3 种仪器之一上记录 NMR 谱 ：
     Varian Unity Inova 400 光谱仪， 其以 400MHz 运行用于 1H， 配备有 5mm 反向检测 1 13 31 三重共振探头用于检测 H、 C 和 P， 及磁场由 9.4 特斯拉 Oxford 仪器超导磁体提供， 且 Sun Microsystems SunBlade 1000 工作站作为主机。
     Bruker Avance DRX 400 光谱仪， 其以 400MHz 运行用于 1H， 配备有 5mm 反向检测 1 13 15 三重共振 TXI 探头用于检测 H、 C 和 N， 及磁场由 9.4 特斯拉 Oxford 仪器超导磁体提供， 且在 Windows XP 下用 WIN-NMR 软件运行的 HP 工作站 WX5000 作为主机。
     Bruker Avance DPX 300 光谱仪， 其以 300MHz 运行用于 1H， 配备有标准 5mm 双频 1 13 探头用于检测 H 和 C， 及磁场由 7.05 特斯拉 Bruker 超导磁体提供， 且在 Windows 2000 下 用 Bruker XWIN-NMR 软件运行的 HP 工作站作为主机。
     柱色谱使用硅胶即 Fluka 硅胶 60( 粒度 35-70 微米 )、 预装填的 Teledyne Isco， Inc.RediSep Rf 柱或预装填的 Isolute Flash Si II SPE 柱来进行。所有溶剂和商购试 剂为实验室级， 且按原样使用。
     通 过 反 相 制 备 性 HPLC 进 行 的 纯 化 如 下 实 现 ： 以 18mL/min 的 流 速 使 用 乙 腈 /0.1％ TFA 水溶液梯度或乙腈 /0.1％甲酸水溶液梯度且使用 Phenomenex Gemini C18 柱 (250×21.2mm， 5 微米 ) 作为固定相。
     实施例中使用的缩写或术语具有以下意义 ：
     SCX ： 强阳离子交换 - 具有磺酸吸附剂的基于硅胶的固相萃取
     HPLC ： 高效液相色谱
     DCM ： 二氯甲烷
     DMF ： N， N- 二甲基甲酰胺
     NMP ： 1- 甲基吡咯烷 -2- 酮
     THF ： 四氢呋喃
     TFA ： 三氟乙酸
     DMSO ： 二甲基亚砜
     aq ： 含水的
     h： 小时
     min ： 分钟
     g： 克
     mL ： 毫升
     RT ： 室温
     MP-TsOH65 ： 结合有大孔聚合物的离子交换树脂 ( 由 Biotage 提供 )
     HATU ： O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐
     NBS ： N- 溴琥珀酰亚胺
     T3P ： 丙烷膦酸酸酐
     TBAF ： 四丁基氟化铵
     CDI ： 1， 1’ - 基羰基二咪唑
     MTBE ： 甲基叔丁基醚
     MCPBA ： 间氯过氧苯甲酸
     Varian 结合洗脱 NH2 柱 ： 强阴离子交换 - 具有 NH2 吸附剂的基于硅胶的固相萃取
     1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐购自 WuXiPharma Tech。
     7-[(1R)-2- 氨基 -1- 羟基 - 乙基 ]-4- 羟基 -3H- 苯并噻唑 -2- 酮乙酸盐或 HCl 盐(WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d) 为 86-94％ ee( 对映异构体过量 )。
     (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333) 为 92-96％ ee。
     针对标题化合物 / 副标题化合物的命名软件包 ：
     来自 CambridgeSoft Corporation 的 Struct ＝ Name 9.0.7
     实施例 1
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)7-(2- 氯 - 乙酰基 )-4- 羟基 -3H- 苯并噻唑 -2- 酮在 配 备 有 置 顶 搅 拌 器 的 烧 瓶 中， 将 乙 醇 (1500mL) 加 至 7- 乙 酰 基 -4- 羟 基 -3H- 苯 并 噻 唑 -2- 酮 (150g)(WO 2004/016578) 和 二 氯 碘 酸 苄 基 三 甲 基 铵 (benzyltrimethylammonium dichloroiodate)(374g) 的混合物中。 将混合物加热至 78℃且 保持 1h， 且冷却至室温过夜。将混合物倒入水 (2L) 中， 过滤收集沉淀物， 用水洗涤， 过滤至 几乎无水， 且悬浮在乙酸乙酯中。将混合物加热至回流， 且在搅拌下冷却至室温。过滤收集 固体， 用冷乙酸乙酯 (200mL) 洗涤， 然后重新悬浮在乙醚 (1L) 中。收集固体， 再次过滤， 用 乙醚 (200mL) 洗涤， 且真空干燥， 得到副标题化合物。收率为 164g。m/z 244(M+H)+(APCI)。
     b)7-(2- 叠氮基 - 乙酰基 )-4- 羟基 -3H- 苯并噻唑 -2- 酮
     将 7-(2- 氯 - 乙酰基 )-4- 羟基 -3H- 苯并噻唑 -2- 酮 ( 实施例 1， 步骤 a)(331g) 溶解在 N， N- 二甲基甲酰胺 (1800mL) 中， 且在冰浴中搅拌 10 分钟。历时 15 分钟逐份加入 叠氮化钠 (88.3g)。 将反应混合物搅拌 72 小时， 然后将反应混合物分成 3 等份， 且每份分别 在冰和水 (2.5L) 中淬灭。滤出固体， 用水 (1L) 洗涤， 且重新悬浮在乙腈 (1.5L) 中。蒸发 溶剂， 加入另一份乙腈 (1L)， 且再次蒸发溶剂以干燥产物。加入乙醚 (1.5L)， 且搅拌混合物 以得到均匀悬浮液悬浮液。收集固体， 且在 35℃真空干燥且保持 24 小时， 得到副标题化合
     物。收率为 285g。m/z 251(M+H)+(APCI)。
     c)7-[(1R)-2- 叠氮基 -1- 羟基 - 乙基 ]-4- 羟基 -3H- 苯并噻唑 -2- 酮
     历时 25 分钟将 (1R， 2S)-(+)- 顺式 -1- 氨基 -2- 茚满醇 (149g) 逐份加至硼烷 - 四 氢呋喃络合物 ( 浓度为 1M 的四氢呋喃溶液， 2997mL) 中且保持温度为 20-25℃。 将混合物在 20℃再搅拌 30 分钟， 冷却至 0℃， 且逐份加入 7-(2- 叠氮基 - 乙酰基 )-4- 羟基 -3H- 苯并噻 唑 -2- 酮 ( 实施例 1， 步骤 b)(250g) 且保持温度为 0-5℃。 将反应混合物在 0℃再搅拌 1h， 然 后用甲醇 (350g， 442mL) 逐滴淬灭 ( 小心沸腾！ )。 放热使温度达到 7℃。 蒸发反应混合物， 得到褐色泡沫状物， 且重新溶解在乙酸乙酯 (1.2L) 中。 加入盐酸水溶液 (87mL 浓 HCl/1.2L 水 )， 且将混合物剧烈搅拌 30 分钟。分离出水层， 且用新鲜乙酸乙酯 (2×600mL) 洗涤。合 并的有机溶液用水 (1.2L) 洗涤。水层通过硅藻土来过滤， 且用乙酸乙酯 (600mL) 萃取。合 并乙酸乙酯溶液， 用 Na2SO4 干燥， 过滤， 且蒸发。 将所得固体悬浮在 5％乙醇 / 二氯甲烷 (2L) 中， 搅拌 3h， 过滤， 且真空干燥， 得到副标题化合物。收率为 213g。m/z 253(M+H)+(APCI)。
     d)7-[(1R)-2- 氨基 -1- 羟基 - 乙基 ]-4- 羟基 -3H- 苯并噻唑 -2- 酮乙酸盐
     将 5％钯 / 碳 87L 型糊状物 (22g) 加至 7-[(1R)-2- 叠氮基 -1- 羟基 - 乙基 ]-4- 羟 基 -3H- 苯并噻唑 -2- 酮 ( 实施例 1， 步骤 c)(225g) 的乙醇 (3L) 溶液中。将反应混合物在 氢气 (3 巴 ) 下搅拌 48h。再加入 10g 催化剂， 且再继续氢化 5 天。对反应混合物进行过滤， 将固体 ( 产物 + 催化剂 ) 悬浮在乙醇 (2.5L) 中， 然后加入乙酸 (150mL)， 且将所有物质搅 拌过夜。再次过滤混合物以除去钯 / 碳催化剂。将溶液蒸发至干， 且与甲苯 (2×1L) 共沸。 将固体在四氢呋喃 (1L) 中浆化 4 小时， 过滤， 且在 40℃真空干燥， 得到副标题化合物。 收率 1 为 57g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ6.85(d， 1H)， 6.69(d， 1H)， 4.54(dd， 1H)， 2.78-2.67(m，
     2H)+5 个可交换的质子。
     e)4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔 丁酯
     将 1- 丙烷膦酸环状酸酐 ( 浓度为 1.57M 的 THF 溶液， 4.18mL) 加至 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐 (WuXi PharmaTech)(1.92g)、 2- 甲基 噻唑 -4- 甲酸 (0.94g) 和三乙胺 (5.48mL) 的 DMF(70mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 16h。将反应混合物倒入水 (500mL) 中， 且用乙酸乙酯 (3×200mL) 萃取。合并的有机溶 液用水 (2×100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色 谱 ( 用乙酸乙酯洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 2.30g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.95(s， 1H)， 3.80-3.45(m， 8H)， 3.18-2.96(m， 2H)， 2.67(s， 3H)， 1.77-1.62(m， 2H)， 1.43-1.31(m， 11H)。
     f)(2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮盐酸 盐
     在 0℃将三氟乙酸 (10mL) 加至 4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 1， 步骤 e)(2.3g) 的 DCM(50mL) 溶液中， 且将 所得混合物搅拌 16h。真空蒸发溶剂。加入甲苯 (50mL)， 且真空蒸发混合物。将残余物溶 解在甲醇 (20mL) 中， 且加载至 SCX 柱 ( 用甲醇预润湿 )。柱用甲醇 (250mL) 洗涤， 且用 3M 氨 / 甲醇溶液 (150mL) 洗脱。真空蒸发洗脱剂， 且将残余物溶解在 MeCN(100mL) 中。加入 HCl( 浓度为 1M 的乙醚溶液， 10mL)， 且真空蒸发溶剂， 得到副标题化合物， 其为黄色固体。 1 收 率 为 1.90g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ9.16(s， 2H)， 7.92(s， 1H)， 4.25(s， 4H)， 3.66-3.58(m， 2H)， 3.12-2.90(m， 4H)， 2.69(s， 3H)， 2.01-1.89(m， 2H)， 1.85-1.73(m， 2H)。
     g)[4-(2， 2- 二乙氧基 - 乙氧基 )- 苯基 ]- 甲醇
     将 碳 酸 铯 (39.4g) 加 至 4- 羟 基 甲 基 - 苯 酚 (10g) 和 2- 溴 -1， 1- 二 乙 氧 基 乙烷 (12.73mL) 的 DMF(200mL) 溶液中， 且将所得混合物在 90 ℃搅拌 16h。将反应混合物倒 入水 (500mL) 中， 且用乙酸乙酯 (3×250mL) 萃取。合并的有机溶液用水 (250mL) 和盐水 (250mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用异己烷至乙醚梯度 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 9.5g。1H NMR(400MHz， CDCl3) δ7.29-7.25(m， 2H)， 6.93-6.88(m， 2H)， 4.83(t， J ＝ 5.2Hz， 1H)， 4.61(s， 2H)， 4.00(d， J＝ 5.2Hz， 2H)， 3.81-3.72(m， 2H)， 3.68-3.58(m， 2H)， 1.25(t， J ＝ 7.0Hz， 6H)。1 个可交换的质 子没有观察。
     h)2-(4-( 羟基甲基 ) 苯氧基 ) 乙醛
     将 2M HCl(4mL) 加至 (4-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 ) 苯基 ) 甲醇 ( 实施例 1， 步骤 g) (0.9g) 的丙酮 (20mL) 溶液中， 且将所得混合物在室温搅拌 16h。 真空浓缩反应混合物， 且所 得水溶液用乙酸乙酯 (3×20mL) 萃取。合并的有机溶液用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为洁净胶状物， 所述胶状物直接用于下一步。收率为 0.50g。
     i)(9-(2-(4-( 羟基甲基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     将 (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮盐 酸盐 ( 实施例 1， 步骤 f)(0.38g) 加至 2-(4-( 羟基甲基 ) 苯氧基 ) 乙醛 ( 实施例 1， 步骤 h) (0.17g) 在 NMP(10mL) 和乙酸 (0.06mL) 中的溶液中。 将所得混合物搅拌 30min， 然后在冰浴 中冷却。 然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.32g)， 将反应混合物温热至室温， 且搅拌 16h。 反 应混合物用甲醇 (30mL) 稀释， 且加载至 SCX 柱 ( 用甲醇预润湿 )。 柱用甲醇 (250mL) 洗涤， 且 用 3M 氨 / 甲醇溶液 (150mL) 洗脱。真空蒸发洗脱剂， 且残余物通过柱色谱 ( 用 95 ∶ 5 乙酸 1 乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶状物。 收率为 0.32g。 H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ7.86(s， 1H)， 7.23-7.16(m， 2H)， 6.85(dt， J ＝ 8.7， 1.1Hz， 2H)， 4.72-4.62(m， 1H)， 4.44-4.38(m， 2H)， 4.10-3.99(m， 2H)， 3.66(d， J ＝ 6.7Hz， 4H)， 3.61-3.55(m， 2H)， 2.71-2.64(m， 5H)， 2.47-2.42(m， 4H)， 1.76-1.64(m， 2H)， 1.59-1.45(m， 2H)。
     j)4-(2-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯甲醛
     将二氧化锰 (0.65g) 加至 (9-(2-(4-( 羟基甲基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 (0.32g)( 实施例 1， 步骤 i) 的 DCM(20mL) 溶液中， 且将所得黑色悬浮液加热回流 1h。冷却后， 使反应混合物通过硅藻 土垫。垫用 DCM(2×30mL) 洗涤， 且真空蒸发合并的滤液和洗涤液， 得到副标题化合物， 其为 1 胶状物。收率为 0.25g。m/z 430(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ9.86(s， 1H)， 7.96(s， 1H)， 7.88-7.83(m， 2H)， 7.13(d， J ＝ 8.5Hz， 2H)， 4.26-4.11(m， 2H)， 3.77-3.46(m， 6H)， 2.78-2.65(m， 5H)， 2.48-2.34(m， 4H)， 1.76-1.36(m， 4H)。
     k)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     将 HCl( 浓度为 2M 的乙醚溶液， 0.29mL) 加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟 基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮乙酸盐 ( 实施例 1， 步骤 d)(0.17g) 的 NMP(1mL) 溶液中， 且将混 合物搅拌 10min。将所得溶液加至 4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯甲醛 ( 实施例 1， 步骤 j)(0.25g) 的 NMP(4mL) 溶 液中， 且搅拌 1h。将反应混合物冷却至 0℃， 且逐份加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.19g)。将 所得混合物温热至室温， 且搅拌 16h。将反应混合物在磷酸缓冲液 (pH 7.2)(50mL) 和乙酸 乙酯 (50mL) 之间分配。分离各层， 且水层用乙酸乙酯 (2×50mL) 萃取。水相用碳酸氢钠碱 化， 且用乙酸乙酯 (3×50mL) 萃取。真空蒸发合并的有机溶液。将残余物重新溶解在乙腈 (50mL) 中， 且用三氟乙酸 (1mL) 酸化。 加入甲苯 (50mL)， 且真空蒸发混合物。 将所得胶状物 溶解在乙腈和水的混合物 (1 ∶ 1， 10mL) 中， 且过滤。 经制备性 HPLC 纯化 (SunfireTM， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 )。 合并含有产物的馏分， 蒸发， 残余物用乙醚研磨， 且真空蒸 1 发， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.35g。 m/z 640(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.26(s， 1H)， 7.91(s， 1H)， 7.46(d， J ＝ 8.5Hz， 2H)， 7.03(d， J ＝ 8.5Hz， 2H)， 6.89(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.75(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.93-4.87(m， 1H)， 4.40-4.35(m， 2H)， 4.19-4.13(m， 2H)， 3.76-3.63(m， 6H)， 3.58-3.51(m， 2H)， 3.43-3.35(m， 2H)， 3.30-3.14(m， 2H)， 3.03-2.96(m， 2H)， 2.68(s， 3H)， 2.11-1.99(m， 2H)， 1.92-1.78(m， 2H)。5 个可交换的质 子没有观察。
     实施例 2
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸 盐)
     a)(9-(9- 羟基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻 唑 -4- 基 ) 甲酮将 9- 溴壬 -1- 醇 (0.29g) 加至 (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮盐酸盐 ( 实施例 1， 步骤 f)(0.4g) 在三乙胺 (0.41mL) 和乙腈 (10mL) 的混合物中的悬浮液中。将所得混合物在 50℃搅拌 16h。真空蒸发溶剂， 且将残余 物在乙酸乙酯 (30mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (30mL) 之间分配。分离各层， 且水层用乙酸乙 酯 (2×30mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (30mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸 发。将残余物溶解在甲醇 (10mL) 中， 且加载至 SCX 柱 ( 用甲醇预润湿 )。柱用甲醇 (10mL) 洗涤， 且用 3M 氨 / 甲醇溶液 (100mL) 洗脱。真空蒸发洗脱剂， 得到副标题化合物， 其为黄色 1 油状物。收率为 0.32g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ7.95(s， 1H)， 4.30(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)，
     3.78-3.44(m， 8H)， 3.42-3.33(m， 2H)， 2.69(s， 3H)， 2.35-2.14(m， 8H)， 1.71-1.57(m， 2H)， 1.55-1.19(m， 12H)。
     b)9-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬醛
     将 DMSO(0.32mL) 和三乙胺 (0.32mL) 加至 (9-(9- 羟基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 2， 步骤 a)(0.32g) 的二氯 甲烷 (5mL) 溶液中。将混合物在冰 - 盐浴中冷却， 且加入吡啶三氧化硫 (0.36g)。将反应混 合物在 -10℃搅拌 1h， 然后温热至室温， 且再搅拌 3h。反应混合物用 DCM(20mL) 稀释， 然后 倒入盐水 (20mL) 中。分离各层， 有机层用盐水 (20mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸 发。经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三 1 乙胺梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。 收率为 0.25g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ9.66(t， J ＝ 1.6Hz， 1H)， 7.95(s， 1H)， 3.72-3.46(m， 8H)， 3.31(s， 2H)， 2.69(s，
     3H)， 2.44-2.18(m， 8H)， 1.73-1.14(m， 12H)。
     c)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸 盐)
     将 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO2007027134， 实 施 例 1， 步 骤 d)(0.17g) 加 至 9-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬醛 ( 实施例 2， 步骤 b)(0.23g) 和乙酸 (0.03mL) 的甲醇 (15mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 10min， 且冷却至 0℃。然后加入三乙酰氧基硼 氢化钠 (0.17g)， 且将混合物搅拌 16h。真空浓缩反应混合物， 且将残余物溶解在水和乙腈 TM 的混合物 (1 ∶ 1， 5mL) 中。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶 液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。残余物用乙醚研磨， 且蒸发， 得到标题化合 1 物， 其为白色固体。收率为 0.15g。m/z 632(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， D6-DMSO， 90℃ ) δ11.42(s， 1H)， 10.75(s， 1H)， 9.01(s， 1H)， 8.72(s， 1H)， 7.92(s， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 5.02-4.93(m， 1H)， 3.78-3.56(m， 6H)， 3.33-3.23(m， 1H)， 3.07-2.88(m， 8H)， 2.69(s， 3H)， 2.07-1.89(m， 4H)， 1.75-1.62(m， 4H)， 1.3-1.24(m， 10H)+1 个质子由于溶剂峰而模糊。
     实施例 3
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二盐酸盐
     a)2-(4-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 ) 苯基 ) 乙醇将碳酸铯 (28.3g) 加至 4-(2- 羟基乙基 ) 苯酚 (10g) 和 2- 溴 -1， 1- 二乙氧基乙 烷 (11.79mL) 的 DMF(150mL) 溶液中。将所得悬浮液在 90℃加热 16h。将反应混合物倒入 水 (500mL) 中。水相用乙酸乙酯 (3×200mL) 萃取。合并的有机溶液用水 (200mL) 和盐水 (200mL) 洗涤， 然后用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用异己烷至 1 ∶ 1 乙 酸乙酯∶异己烷梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 10g。1H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.14(d， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 6.88(d， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 4.83(t， J ＝ 5.0Hz， 1H)， 4.00(d， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 3.87-3.70(m， 4H)， 3.70-3.56(m， 2H)， 2.81(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)， 1.25(t， J ＝ 6.9Hz， 6H)。OH 没有观察。
     b)2-(4-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙醛
     将浓盐酸 (5mL) 加至 2-(4-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 3， 步骤 a)(0.76g) 的 1， 4- 二氧杂环己烷 (10mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 1h。 反应混合物用水 (50mL) 稀释， 且用乙酸乙酯 (3×50mL) 萃取。 合并的有机溶液用水 (50mL) 和盐水 (50mL) 洗 涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其直接使用。收率为 0.35g。
     c)(9-(2-(4-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     将 (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮盐 酸盐 ( 实施例 1， 步骤 f)(0.63g) 加至 2-(4-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙醛 ( 实施例 3， 步 骤 b)(0.541g) 在 NMP(10mL) 和乙酸 (0.11mL) 的混合物中的溶液中。将所得混合物在室 温搅拌 30min， 然后在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.64g)， 将反应混合物 温热至室温， 且搅拌 16h。反应混合物用甲醇 (30mL) 稀释， 且加载至 SCX 柱 ( 用甲醇预润 湿 )。柱用甲醇 (100mL) 洗涤， 且用 3M 氨 / 甲醇溶液 (100mL) 洗脱。真空蒸发洗脱剂， 且残
     余物经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为褐色 1 油状物。收率为 0.74g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ7.86(s， 1H)， 7.09(d， J ＝ 8.4Hz， 2H)， 6.84-6.77(m， 2H)， 4.24-4.15(m， 1H)， 4.02(t， J ＝ 6.0Hz， 2H)， 3.68-3.54(m， 8H)， 3.00(s， 2H)， 2.71-2.61(m， 5H)， 2.51-2.42(m， 4H)， 1.75-1.65(m， 2H)， 1.59-1.45(m， 2H)。
     d)2-(4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯基 ) 乙醛
     将三氟乙酸 (0.04mL) 加至 (9-(2-(4-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 3， 步骤 c)(0.22g) 的 DCM(3mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.31g)， 且将 所得混合物搅拌 5min。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (0.5mL)、 碳酸氢钠溶液 (0.5mL) 和 乙醚 (5mL) 的混合物， 且将所得混合物搅拌 5min。分离出有机层， 且用碳酸氢钠溶液 (1mL) 和水 (1mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状 物， 所述油状物直接使用。收率为 0.19g。
     e)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二盐酸盐
     将 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO2007027134， 实 施 例 1， 步 骤 d)(0.10g) 加 至 2-(4-(2-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 3， 步 骤 d)(0.14g) 和乙酸 (0.02mL) 的甲醇 (1mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。然后 加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.103g)， 将反应混合物搅拌 10min， 且真空蒸发。将残余物溶 解在乙腈和水的混合物 (1 ∶ 1， 5mL) 中。经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 5-50 ％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。将残余物溶解在乙腈 (5mL) 中， 且加入 HCl/ 乙醚 (1M， 2mL)， 然后真空蒸发溶剂。残余物用乙醚研磨， 且真空蒸发， 得 1 到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.075g。m/z 654(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz，
     D6-DMSO)δ11.50-11.14(m， 2H)， 9.22(s， 1H)， 8.87(s， 1H)， 7.91(s， 1H)， 7.20(d， J ＝ 8.5Hz， 2H)， 6.98-6.92(m， 3H)， 6.78(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 5.0-4.96(m， 1H)， 4.42(t， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.83-3.55(m， 5H)， 3.52-3.43(m， 5H)， 3.22-3.04(m， 4H)， 3.01-2.93(m， 2H)， 2.69(s， 3H)， 2.11-1.93(m， 4H)+2 个质子由于溶剂而模糊。
     实施例 4
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(5-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a) 叔丁基二甲基 (2-( 噻吩 -2- 基 ) 乙氧基 ) 甲硅烷将叔丁基二甲基甲硅烷基氯 (12.66g) 逐份加至 2-( 噻吩 -2- 基 ) 乙醇 (9.0g) 和 咪唑 (5.7g) 的 DMF(35mL) 溶液中。将所得溶液搅拌 18h。将反应混合物在乙酸乙酯和水 之间分配。有机层用水洗涤， 用硫酸钠干燥， 且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 99 ∶ 1 至 96 ∶ 4 乙酸乙酯∶异己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 16g。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.13(d， 1H)， 6.92(dd， J ＝ 5.0， 3.2Hz， 1H)， 6.83-6.82(m， 1H)， 3.82(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 3.03(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 0.97(s， 9H)， 0.03(s， 6H)。
     b)5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛
     在 -78 ℃ 将 正 丁 基 锂 ( 浓 度 为 2.5M 的 己 烷 溶 液， 30mL) 滴 加 至 叔 丁 基 二 甲 基 (2-( 噻吩 -2- 基 ) 乙氧基 ) 甲硅烷 ( 实施例 4， 步骤 a)(16g) 的四氢呋喃 (250mL) 溶液中。 将反应混合物温热至 0℃， 且搅拌 1h。然后将反应混合物冷却至 -78℃， 且历时 10min 加入 DMF(34mL)。将反应混合物温热至室温， 且搅拌 18h。将反应混合物在水和乙酸乙酯之间
     分配。分离出有机层， 用水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 93 ∶ 7 异己烷∶乙酸乙酯洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。 收率为 15.4g。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.83(s， 1H)， 7.61(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 6.96(d， 1H)， 3.86(t， J ＝ 6.3Hz， 2H)， 3.06(td， J ＝ 6.1， 0.1Hz， 2H)， 0.88(t， J ＝ 2.9Hz， 9H)， 0.02(s， 6H)。
     c)(5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲醇
     在 0℃将硼氢化钠 (1.74g) 加至 5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻 吩 -2- 甲醛 (12.4g)( 实施例 4， 步骤 b) 的乙醇 (120mL) 溶液中。在 0℃， 将所得溶液搅拌 1h。 将反应混合物在盐水和乙酸乙酯之间分配。 分离出有机层， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空 1 蒸发溶剂， 得到副标题化合物。 收率为 12.1g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ6.82(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 6.69(d， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 4.75(d， J ＝ 4.9Hz， 2H)， 3.81(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 2.99(t， J＝ 6.8Hz， 2H)， 1.65(t， J ＝ 5.5Hz， 1H)， 0.89(d， J ＝ 2.8Hz， 9H)， 0.03(d， J ＝ 3.1Hz， 6H)。
     d)2-(5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙腈
     在 0℃将三苯基膦 (13.04g) 和四溴化碳 (15.71g) 一次性加至 (5-(2-( 叔丁基二 甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲醇 ( 实施例 4， 步骤 c)(10.94g) 的 DCM(20mL) 溶 液中。 将所得溶液在室温搅拌 1h。 将反应混合物冷却至 0℃， 且加入四乙基氰化铵 (8.96g)。 混合物用二氯甲烷 (10mL) 稀释， 且在室温搅拌 40min。将反应混合物在二氯甲烷和盐水之 间分配。分离出有机层， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 至 94 ∶ 6 异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 1 7.6g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ6.87-6.84(m， 1H)， 6.70-6.68(m， 1H)， 3.84(d， J ＝ 0.8Hz， 2H)， 3.80(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)， 2.97(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 0.89(s， 9H)， 0.03(s， 6H)。
     e)2-(5-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙酸
     将 2-(5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙腈 ( 实施例 4， 步骤 d)(3g) 的乙醇 (30mL) 溶液加至搅拌的氢氧化钾 (1.20g) 的水 (30mL) 溶液中。将所 得混合物在 100℃搅拌 4 小时。 真空浓缩反应混合物， 且将所得混合物在盐水和乙酸乙酯之 间分配。水层用冰冷却， 通过滴加浓盐酸来酸化， 且用乙酸乙酯萃取 3 次。合并的有机溶液 用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发溶剂， 得到副标题化合物， 其为黄色固体。收 1 率为 1.75g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ12.44(s， 1H)， 6.72(d， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 6.67(d， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 4.76(s， 1H)， 3.71(s， 2H)， 3.61-3.55(m， 2H)， 2.86(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)。
     f)2-(5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙醇
     历 时 20 分 钟 将 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氯 (6.63g) 逐 份 加 至 咪 唑 (2.99g) 和 2-(5-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙酸 (3.9g)( 实施例 4， 步骤 e) 的 DMF(50mL) 溶液中。 将所得溶液搅拌 1h。然后加入 THF(50mL)， 且在冰浴中冷却反应混合物。然后加入碳酸钾 (4.05g) 的水 (50mL) 溶液， 且将混合物搅拌 20min。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间 分配。分离出有机层， 用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发溶剂。将残余物溶 解在 THF(80mL) 中， 且滴加硼烷 - 四氢呋喃络合物 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 62.8mL)。将 所得溶液搅拌 2h， 且通过滴加甲醇 (30mL) 来淬灭。然后真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 83 ∶ 17 异己烷∶乙酸乙酯洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色液体。收率为 4.6g。 1 H NMR(300MHz， CDCl3)δ6.69-6.63(m， 2H)， 3.87-3.75(m， 4H)， 3.05-2.91(m， 4H)， 0.89(s， 9H)， 0.03(s， 6H)+ 可交换的质子。
     g)2-(5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙醛
     将戴斯 - 马丁高碘剂 (0.38g) 加至 2-(5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙醇 ( 实施例 4， 步骤 f)(0.22g) 的二氯甲烷 (5mL) 溶液中， 且将所得混合物 搅拌 30min。 加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (25mL) 的混合物， 且将所得混合物搅拌 10min。 分离出有机层， 用饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和盐水 (10mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物，
     所述油状物直接使用。收率为 0.21g。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.70(t， J ＝ 2.2Hz， 1H)， 6.73(s， 2H)， 3.83-3.78(m， 4H)， 2.98(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 0.89(s， 9H)， 0.02(s， 6H)。
     h)(2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟 乙酸盐
     将 1- 丙烷膦酸环状酸酐 ( 浓度为 1.57M 的 THF 溶液， 2.49mL) 加至 1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐 (WuXi PharmaTech)(1g)、 2- 甲基噻唑 -4- 甲 酸 (0.56g) 和三乙胺 (3.26mL) 的 DMF(30mL) 溶液中， 且将所得混合物在室温搅拌 16 小时。 将反应混合物在水 (500mL) 和乙酸乙酯 (200mL) 之间分配。分离各层， 且水层用乙酸乙酯 (2×150mL) 萃取。合并的有机溶液用水 (2×100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 然后用硫酸镁 干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。将所得油状物溶解在二氯 甲烷 (30mL) 中， 且滴加三氟乙酸 (3mL)。然后将其搅拌 1 小时， 且真空浓缩。残余物与甲 苯 (20mL) 共沸 2 次。所得胶状物用乙醚研磨， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 1 1.20g。m/z 282(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ8.59-8.18(m， 2H)， 8.00(s， 1H)， 3.86-3.49(m， 6H)， 3.22-2.86(m， 4H)， 2.69(s， 3H)， 2.00-1.90(m， 2H)， 1.74-1.58(m， 2H)。
     i)(9-(2-(5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     将 (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三 氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.25g) 加至 2-(5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙醛 (0.2g)( 实施例 4， 步骤 g) 在 NMP(5mL) 和乙酸 (0.04mL) 的混合物中的 溶液中。将所得混合物搅拌 5min， 然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.22g)。将混合物搅拌 1h， 且倒入缓冲液 (pH 7.2)(50mL) 中。水相用乙酸乙酯 (3×50mL) 萃取。合并的有机层 用缓冲液 (pH 7.2)(50mL) 和盐水 (50mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经 硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 ∶ 0.05 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺洗 D6-DMSO) 脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 0.23g。1H NMR(400MHz， δ7.86(s， 1H)， 6.62(s， 2H)， 3.76(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 3.70-3.57(m， 6H)， 3.30(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 2.91-2.81(m， 4H)， 2.68(s， 3H)， 2.44-2.37(m， 4H)， 1.74-1.66(m， 2H)， 1.58-1.49(m，
     2H)， 0.88-0.84(m， 9H)， 0.01-0.00(m， 6H)。
     j)(9-(2-(5-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     将浓盐酸 (0.5mL) 加至 (9-(2-(5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻 吩 -2- 基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 4， 步骤 i)(0.235g) 的甲醇 (5mL) 溶液中， 且将所得溶液搅拌 1h。真空蒸发溶剂， 残余物与甲苯共沸， 且重新溶解在甲醇 ( ～ 2mL) 中。将残余物溶解在甲醇 (10mL) 中， 且加 载至 SCX 柱 ( 用甲醇预润湿 )。柱用甲醇 (100mL) 洗涤， 且用 1M 氨 / 甲醇溶液 (100mL) 洗 1 H NMR(300MHz， 脱。 真空蒸发洗脱剂， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。 收率为 0.12g。 D6-DMSO)δ7.87(s， 1H)， 6.64(s， 2H)， 4.38(t， J ＝ 4.9Hz， 1H)， 3.70-3.51(m， 8H)， 2.84(t， J ＝ 6.7Hz ， 4H) ， 2.68(s ， 3H) ， 2.60-2.52(m ， 2H) ， 2.4-2.38(m ， 4H) ， 1.76-1.65(m ， 2H) ， 1.60-1.49(m， 2H)。
     k)(R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(2-(5-(2-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     在 0 ℃ 将 三 氟 乙 酸 (0.02mL) 加 至 (9-(2-(5-(2- 羟 基 乙 基 ) 噻 吩 -2- 基 ) 乙 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 4， 步骤 j)(0.128g) 的 DCM(5mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。然后加入戴斯 - 马丁高 碘剂 (0.15g)， 且将混合物搅拌 10min。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶 液 (5mL) 和乙酸乙酯 (25mL) 的混合物， 且将混合物搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。 合并的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和盐水 (10mL) 洗涤， 然后用硫酸 钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 将残余物重新溶解在 MeOH(1mL) 中。 加入乙酸 (0.04mL)， 接着加 入 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.19g)， 且将混合物冷却至 0 ℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.157g)， 且将所得混合物搅拌 1h， 然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈和水的混合物 (1 ∶ 1， 5mL)
     中。经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 5-50 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有 产物的馏分， 真空蒸发， 残余物用乙醚研磨， 且真空蒸发， 得到标题化合物， 其为白色固体。 1 收 率 为 0.04g。m/z 644(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.92(s， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.84-6.73(m， 3H)， 4.89(dd， J ＝ 7.9， 5.4Hz， 1H)， 3.74-3.62(m， 6H)， 3.44-3.07(m， 14H)， 2.68(s， 3H)， 2.11-1.93(m， 2H)， 1.89-1.72(m， 2H)。 6 个可交换的质 子没有观察。
     实施例 5
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)2， 2’ -(1， 4- 亚苯基 ) 二乙醇历时 20min 将硼烷 - 二甲硫醚络合物 ( 浓度为 2M 的四氢呋喃溶液， 80mL) 加至搅 拌的在冰浴中冷却的 2， 2’ -(1， 4- 亚苯基 ) 二乙酸 (10.20g) 的四氢呋喃 (100mL) 溶液中。 16h 后， 反应混合物用甲醇 (40mL) 小心淬灭。真空蒸发溶液， 且将所得胶状物在乙酸乙酯 和饱和氯化铵水溶液之间分配。 分离乙酸乙酯溶液， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到 1 副标题化合物， 其为胶状物。收率为 8.64g。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.18(s， 4H)， 3.86(t， 4H)， 2.85(t， 4H)+2 个可交换的质子。
     b)2-{4-[2-( 叔丁基 - 二甲基 - 甲硅烷基氧基 )- 乙基 ]- 苯基 }- 乙醇
     将叔丁基二甲基氯甲硅烷 (9.68mL) 加至在冰浴中冷却的 2， 2’ -(1， 4- 亚苯基 ) 二 乙醇 ( 实施例 5， 步骤 a)(8.64g) 和咪唑 (10.21g) 的无水 DMF(100mL) 溶液中。 45min 后， 反 应混合物用乙酸乙酯稀释， 用水洗涤 3 次， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 5 ∶ 1 异己烷∶乙 酸乙酯洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。收率为 6.20g。1H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.21-7.13(m， 4H)， 3.92-3.76(m， 4H)， 2.92-2.76(m， 4H)， 0.89(s， 9H)， 0.02(s，6H)。
     c)2-(4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 苯基 ) 乙醛将戴斯 - 马丁高碘剂 (0.38g) 加至 2-(4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙 基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 5， 步骤 b)(0.21g) 的二氯甲烷 (5mL) 溶液中， 且将所得混合物搅 拌 30min。 加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (25mL) 的 混合物， 且将所得混合物搅拌 10min。分离有机相， 用饱和碳酸氢钠溶液 (2×10mL) 和盐水 (10mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物， 所述 1 油状物直接使用。 收率为 0.20g。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ9.74(t， J ＝ 2.4Hz， 1H)， 7.23(d， J ＝ 8.2Hz， 2H)， 7.15(d， J ＝ 8.2Hz， 2H)， 3.82(t， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 3.67(d， J ＝ 2.6Hz， 2H)， 6H)。 2.83(t， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 0.88(s， 9H)， 0.00(s，
     d)(9-(4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 苯乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     将 (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三 氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.26g) 加至 2-(4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 5， 步骤 c)(0.2g) 和乙酸 (0.04mL) 的 NMP(5mL) 溶液中。将所得混合 物搅拌 5min， 然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.23g)。将混合物搅拌 1h， 倒入缓冲液 (pH 7.2)(50mL) 中， 且用乙酸乙酯 (3×50mL) 萃取。合并的有机溶液用缓冲液 (pH 7.2)(50mL) 和盐水 (50mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 80 ∶ 15 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 1 其为黄色油状物。收率为 0.30g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.90(s， 1H)， 7.12(s，
     4H)， 3.80(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 3.71-3.60(m， 6H)， 2.77-2.67(m， 7H)， 2.46-2.41(m， 2H)， 1.76-1.67(m， 2H)， 1.61-1.51(m， 2H)， 0.87(s， 9H)， 0.02(s， 6H)+4 个 质 子 由 于 溶 剂 峰 而 模 糊。
     e)(9-(4-(2- 羟基乙基 ) 苯乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     将浓盐酸 (0.5mL) 加至 (9-(4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 苯乙 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 5， 步骤 d)(0.3g) 的甲醇 (5mL) 溶液中， 且将所得溶液搅拌 1h。真空蒸发溶剂， 残余物与甲苯 共沸， 且重新溶解在甲醇 ( ～ 2mL) 中。残余物用甲醇 (10mL) 稀释， 且加载至 SCX 柱 ( 用甲 醇预润湿 )。柱用甲醇 (100mL) 洗涤， 且用 1M 氨 / 甲醇溶液 (100mL) 洗脱。真空蒸发洗脱 1 剂， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。 收率为 0.2g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.86(s， 1H)， 7.09(s， 4H)， 4.24(t， J ＝ 5.0Hz， 1H)， 3.69-3.55(m， 8H)， 2.68(s， 3H)， 2.45-2.38(m， 4H)， 1.74-1.65(m， 2H)， 1.57-1.48(m， 2H)+6 个质子由于溶剂峰而模糊。
     f)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     在 0℃将三氟乙酸 (0.04mL) 加至 (9-(4-(2- 羟基乙基 ) 苯乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 5， 步骤 e)(0.21g) 的 DCM(5mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.25g)， 且将 混合物搅拌 10min。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (25mL) 的混合物， 且将混合物搅拌 10min。 分离出水层， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。 合并的 有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和盐水 (10mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且真 空蒸发。将残余物重新溶解在 MeOH(1mL) 中。加入乙酸 (0.04mL)， 接着加入 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步 骤 d)(0.19g)， 且将混合物冷却至 0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.157g)， 且将所得混合 物搅拌 1h， 然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈和水的混合物 (1 ∶ 1， 5mL) 中。经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 真空 蒸发， 残余物用乙醚研磨， 且真空蒸发， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.17g。m/ 1 z638(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ7.92(s， 1H)， 7.26-7.18(m， 4H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.96-4.87(m， 1H)， 3.76-2.90(m， 20H)， 2.68(s， 3H)， 2.14-1.75(m， 4H)。6 个可交换的质子没有观察。
     实施例 6
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三 氟乙酸盐 )
     a)2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇在 0℃将硼烷 - 二甲硫醚络合物 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 5.78mL) 滴加至 2-(3-( 溴 甲基 ) 苯基 ) 乙酸 (1.06g) 的 THF(10mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 10min。然后将 反应混合物温热至室温， 且搅拌过夜。然后加入甲醇 (5mL)， 且真空浓缩混合物。经硅胶 色谱 ( 用异己烷至乙醚梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 1g。 1 H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.34-7.24(m， 3H)， 7.22-7.12(m， 1H)， 4.48(s， 2H)， 3.87(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 2.87(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)。OH 没有观察。
     b)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     将 2-(3-( 溴 甲 基 ) 苯 基 ) 乙 醇 ( 实 施 例 6， 步 骤 a)(0.11g) 加 至 (2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步 骤 h)(0.2g) 和三乙胺 (0.17mL) 的乙腈 (5mL) 溶液中， 且将所得混合物在室温搅拌过夜。 真空蒸发溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯 (25mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (25mL) 之间分配。分 离出水层， 且用乙酸乙酯 (2×25mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (25mL) 洗涤， 用硫酸 钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 80 ∶ 15 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至
     95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 1 0.15g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.85(s， 1H)， 7.18(t， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 7.12-7.04(m， 3H)， 4.24(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.71-3.54(m， 8H)， 3.42(s， 2H)， 2.71(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.68(s， 3H)， 2.38-2.27(m， 4H)， 1.74-1.64(m， 2H)， 1.57-1.47(m， 2H)。
     c)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     在 0℃将三氟乙酸 (0.03mL) 加至 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 6， 步骤 b)(0.17g) 的 DCM(5mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.21g)， 且将 混合物搅拌 10min。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙 酯 (25mL) 的混合物， 且将混合物搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并 的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和盐水 (10mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且 蒸发。将残余物重新溶解在甲醇 (25mL) 中。加入乙酸 (0.04mL)， 接着加入 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步 骤 d)(0.16g)， 且将混合物在冰浴中冷却至 0 ℃， 然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.16g)。 将所得混合物搅拌 1h， 且浓缩。将残余物溶解在乙腈和水的混合物 (1 ∶ 1， 5mL) 中。经 TM 制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的 馏分， 真空蒸发， 残余物用乙醚研磨， 且真空蒸发， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 1 0.125g。m/z 624(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.90(s，
     1H)， 7.45-7.31(m， 4H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.92(dd， J ＝ 7.9， 5.1Hz， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.74-3.58(m， 6H)， 3.29-2.97(m， 10H)， 2.67(s， 3H)， 2.13-1.95(m， 2H)， 1.88-1.70(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。
     实施例 7
     (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸 盐)
     在 0℃将三氟乙酸 (0.02mL) 加至 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 6， 步骤 b)(0.11g) 的 DCM(5mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.14g)， 且将 混合物搅拌 10min。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (25mL) 的混合物， 且将混合物搅拌 10min。分离出水层， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并 的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和盐水 (10mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空 蒸发。将残余物重新溶解在甲醇 (25mL) 中。加入乙酸 (0.02mL)， 接着加入 (R)-5-(2- 氨 基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO2004106333) 然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.08g)。将所得 (0.09g)， 且将混合物在冰浴中冷却至 0℃， 混合物搅拌 1h， 且真空浓缩。 将残余物在乙酸乙酯 (50mL) 和缓冲液 (pH 7.2)(50mL) 之间分 配。 分离出水层， 且用乙酸乙酯 (2×50mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用硫 酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。 经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 92 ∶ 8 ∶ 0.8 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 蒸发， 且溶解在 THF(1mL) 中。 加入三乙胺三氢 氟酸盐 (triethylamine trihydrofluoride)(0.05mL)， 且将混合物搅拌过夜。真空蒸发溶 剂， 且将残余物溶解在乙腈和水的混合物 (1 ∶ 1， 5mL) 中。经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度 为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 残余物用乙醚研 1 磨， 且真空蒸发， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.06g。 m/z 618(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.16(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.90(s， 1H)， 7.47-7.30(m， 4H)， 7.13(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.54(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.35(dd， J ＝ 8.5， 4.1Hz， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.74-3.57(m， 4H)， 3.32-2.98(m， 12H)， 2.67(s， 3H)， 2.12-1.92(m， 2H)， 1.87-1.67(m， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。
     实施例 8
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(3-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 丙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)4-(3- 溴丙氧基 ) 苯甲醛将 1， 3- 二溴丙烷 (20.0g) 加至搅拌的 4- 羟基苯甲醛 (4.0g) 和碳酸钾 (7.0g) 在 丙酮 (80mL) 中的悬浮液中。16h 后， 将混合物再加热回流 2h， 冷却， 过滤以除去无机物， 且 真空蒸发溶液。经硅胶色谱纯化， 用异己烷洗脱以除去 1， 3- 二溴丙烷， 然后用二氯甲烷∶ 1 异己烷 2 ∶ 1 洗脱以收集副标题化合物。收率为 3.45g。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ9.89(s， 1H)， 7.84(d， J ＝ 9.2Hz， 2H)， 7.01(d， J ＝ 9.2Hz， 2H)， 4.21(t， J ＝ 5.6Hz， 2H)， 3.62(t， J＝ 6.0Hz， 2H)， 2.36( 五重峰， J ＝ 6.1Hz， 2H)。
     b)4-(3-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 丙氧基 ) 苯甲醛
     在 60℃加热 (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.244g)、 4-(3- 溴丙氧基 ) 苯甲醛 ( 实施例 8， 步骤 a) (0.15g) 和三乙胺 (0.344mL) 在 MeCN(2mL) 中的混合物。16h 后， 真空蒸发反应混合物。经 硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶三乙胺 10 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为油状物。收 率为 0.24g。m/z 444(M+H)+(APCI)。
     c)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(3-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 丙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     将 氯 化 氢 (0.4mL 浓 度 为 1M 的 乙 醚 溶 液 ) 加 至 搅 拌 的 4-(3-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 丙氧基 ) 苯甲醛 ( 实施 例 8， 步骤 b)(0.15g) 和 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 乙酸盐 ( 实施例 1， 步骤 d)(0.15g) 的 MeOH(15mL) 溶液中。5 分钟后， 加入氰基硼氢化钠
     (0.05g)。 16h 后， 将溶液浓缩至～ 2mL， 然后在乙酸乙酯和磷酸缓冲液 (pH 7.2)(20mL) 之间 分配。乙酸乙酯溶液用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在乙腈 和水的混合物 (1 ∶ 1， 5mL) 中。经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 5-35％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 残余物用乙醚研磨， 且真空蒸发， 得到标题 1 化合物， 其为白色固体。收率为 0.045g。m/z 654(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO) δ7.92(s， 1H)， 7.42(d， J ＝ 8.7Hz， 2H)， 6.98(d， J ＝ 8.7Hz， 2H)， 6.89(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.75(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.91-4.84(m， 1H)， 4.18-4.04(m， 4H)， 3.78-2.94(m， 14H)， 2.71(s， 3H)， 2.19-2.00(m， 4H)， 1.85-1.66(m， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。
     实施例 9
     (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸 盐)
     a)4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯
     将 1- 丙烷膦酸环状酸酐 ( 浓度为 1.57M 的 THF 溶液， 0.64mL) 加至 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐 (WuXi PharmaTech)(0.26g)、 5- 甲基噻 吩 -2- 甲酸 (0.142g) 和三乙胺 (0.84mL) 的 DMF(8mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 16h。 将反应混合物倒入水 (100mL) 中， 且用乙酸乙酯 (3×200mL) 萃取。合并的有机溶液用水 (2×100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 然后用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 乙酸乙酯∶异己烷 1 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 0.32g。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.11(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 6.72-6.69(m， 1H)， 3.78-3.67(m， 8H)， 3.60-3.51(m， 2H)， 3.19-3.10(m， 2H)， 2.51(s， 3H)， 1.86-1.79(m， 2H)， 1.45(s， 9H)。
     b)(5- 甲基噻吩 -2- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟 乙酸盐
     4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁 酯 ( 实施例 9， 步骤 a)(0.32g) 的 DCM(3mL) 溶液用三氟乙酸 (1.0g) 处理。2h 后， 真空蒸发 反应混合物， 且与甲苯共沸 2 次， 得到副标题化合物， 其直接使用。收率为 0.32g。
     c)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮
     将 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 6， 步骤 a)(0.136g) 加至搅拌的 (5- 甲 基噻吩 -2- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施 例 9， 步 骤 b)(0.250g) 和 三 乙 胺 (0.278mL) 的 MeCN(5mL) 溶 液 中。1h 后， 浓缩反应混 合物， 且加载至硅胶柱 ( 用乙酸乙酯∶三乙胺 95 ∶ 5 洗脱 )， 得到副标题化合物。收率 1 为 0.24g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.28-7.24(m， 2H)， 7.18-7.15(m， 1H)， 7.11-7.08(m， 2H)， 6.70-6.67(m， 1H)， 3.86(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.77-3.69(m， 4H)， 3.56(s， 2H)， 3.48(s， 2H)， 2.86(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 2.55-2.48(m， 5H)， 2.40-2.32(m， 2H)， 1.89-1.82(m， 2H)， 1.70-1.50( 水峰下的 2H)。1 个可交换的质子没有观察。
     d)2-(3-((4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛
     在氮气下将戴斯 - 马丁高碘剂 (0.16g) 加至搅拌的 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 (0.13g)( 实 施例 9， 步骤 c) 和三氟乙酸 (0.036g) 的 DCM(4mL) 溶液中。0.5h 后， 加入饱和硫代硫酸钠 溶液 (5mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (5mL)， 且反应混合物用乙酸乙酯萃取 2 次。 合并的有机萃 取物用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题化合物。 收 率为 0.13g。直接使用。e)(R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙 酸盐 )
     将 (R)-5-(2- 氨 基 -1-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 ) 乙 基 )-8- 羟 基 喹 啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.179g) 加 至 搅 拌 的 2-(3-((4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 9， 步骤 d)(0.13g) 和乙酸 (0.031mL) 的 MeOH(5mL) 溶液中。5 分钟后， 加入三乙酰氧基硼氢化 钠 (0.114g)。再过 15min 后， 加入乙酸乙酯 (30mL)， 反应混合物用缓冲液 (pH 7)(30mL) 洗涤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 92 ∶ 7 ∶ 1DCM ∶ MeOH ∶ ‘880’氨水洗脱 ) 纯化， 得到甲硅烷基化的中间体。将该中间体溶解在 THF(2mL) 中， 且加入三乙胺三氢氟酸盐 (0.062mL)。16h 后， 真空蒸发反应混合物， 加入甲苯 (150mL)， 且真空蒸发混合物。将残余 物溶解在乙腈和水的混合物 (1 ∶ 1， 5mL) 中。经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 5-50 ％ 乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 残余物用乙醚研磨， 且真空蒸发， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.05g。m/z617(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ10.55-10.45(m， 2H)， 9.95-9.84(m， 0.2H)， 9.68-9.57(m， 0.8H)( 旋 转 异 构 体 )， 8.97-8.74(m， 2H)， 8.16(d， J ＝ 9.5Hz， 1H)， 7.49-7.33(m， 4H)， 7.29-7.26(m， 0.2H)， 7.25-7.21(m， 0.8H))( 旋转异构体 )， 7.15(d， J ＝ 9.5Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 9.5Hz， 1H) ， 6.86-6.81(m ， 1H) ， 6.58(d ， J ＝ 10.1Hz ， 1H) ， 6.27-6.18(m ， 1H) ， 5.37-5.30(m ， 2H) ， 4.44-4.40(m ， 0.5H) ， 4.35-4.29(m ， 1.5H) ， 3.73-3.63(m ， 4H) ， 3.51-3.46(m ， 2H) ， 3.31-2.94(m， 8H)， 2.46(s， 3H)， 2.12-2.00(m， 2H)， 1.70-1.58(m， 2H)。1 个可交换的质子没 有观察。
     实施例 10
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a) 甲磺酸 2-(3- 甲酰基苯氧基 ) 乙基酯将 2- 溴 乙 醇 (10.23g) 和 碳 酸 钾 (11.32g) 加 至 3- 羟 基 苯 甲 醛 (5g) 的 乙 腈 (100mL) 溶液中， 且将所得混合物回流搅拌 72h。冷却反应混合物， 且在乙酸乙酯和冰冷的 稀氢氧化钠水溶液之间分配。分离出有机层， 用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空除 去溶剂。将残余物溶解在 DCM(30mL) 中， 且加入三乙胺 (3.44mL)。将溶液冷却至 0 ℃， 且 用甲磺酰氯 (1.89mL) 逐滴处理。将反应混合物在 0℃搅拌 10 分钟， 然后温热至室温， 且搅 拌 1h。混合物用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 6 ∶ 4 乙酸乙酯∶异己烷洗脱 ) 纯化。真空蒸发纯的馏分， 得到副标题化合物， 其为无色油 1 状物。收率为 3.50g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.98(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.53-7.46(m， 2H)， 7.41-7.39(m， 1H)， 7.22-7.19(m， 1H)， 4.62-4.59(m， 2H)， 4.34-4.30(m， 2H)， 3.10(s， 3H)。
     b)3-(2-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯甲醛
     将甲磺酸 2-(3- 甲酰基苯氧基 ) 乙基酯 ( 实施例 10， 步骤 a)(0.38g) 加至 (2- 甲基 噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.62g) 和三乙胺 (0.55mL) 的乙腈 (5mL) 溶液中， 且将所得混合物在 65℃搅拌 16h。 真空蒸发溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯 (25mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (25mL) 之间分配。 分离 水相， 且用乙酸乙酯 (2×25mL) 萃取。合并有机相， 用盐水 (25mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 0.48g。 1 HNMR(400MHz， D6-DMSO)δ9.97(s， 1H)， 7.96(s， 1H)， 7.56-7.40(m， 3H)， 7.32-7.25(m， 1H)， 4.14(s， 2H)， 3.75-3.47(m， 6H)， 2.80-2.62(m， 5H)， 2.55-2.37(m， 4H)， 1.74-1.40(m， 4H)。
     c)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     将 3-(2-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯甲醛 ( 实施例 10， 步骤 b)(0.24g) 加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙
     基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.15g) 和乙酸 (0.032mL) 在甲醇 (2mL) 中的混合物中。将混合物搅拌 30min， 然后在冰浴中冷 却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.18g)， 且将混合物搅拌 2h。真空蒸发溶剂， 且将残 余物在乙酸乙酯 (50mL) 和磷酸缓冲液 (pH7.2)(50mL) 之间分配。分离水相， 且用乙酸乙 酯 (2×50mL) 萃取。合并的有机相用盐水 (20mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 TM 经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的 馏分， 真空蒸发， 残余物用乙醚研磨， 且真空蒸发， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 1 0.21g。 m/z 640(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.92(s， 1H)， 7.37(t， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 7.19-7.12(m， 2H)， 7.05(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.90(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.76(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.92(t， J ＝ 6.5Hz， 1H)， 4.45-4.31(m， 2H)， 4.26-4.12(m， 2H)， 3.76-3.53(m， 8H)， 3.45-3.36(m， 2H)， 3.31-3.20(m， 2H)， 3.06-3.00(m， 2H)， 2.68(s， 3H)， 2.1-1.97(m， 2H)， 1.92-1.80(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。
     实施例 11
     5- 羟基 -8-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 ) 异构体 1
     a)1-(2， 4- 二羟基 -3- 硝基苯基 ) 乙酮历时 15 分钟将 2- 硝基苯 -1， 3- 二酚 (24.5g) 逐份加至剧烈搅拌的氯化铝 (46.3g) 的硝基苯 (325mL) 溶液中。然后再历时 15 分钟向混合物中滴加乙酸酐 (15.7mL)， 然后将 混合物在 100℃加热 5h。将反应混合物冷却至环境温度， 且用冰冷的 2M 盐酸 (300mL) 小 心淬灭。混合物用乙醚 (2×500mL) 萃取， 然后合并的乙醚萃取物用 2M 氢氧化钠水溶液 (2×400mL) 萃取。 合并的碱性萃取物用乙醚 (4×500mL) 洗涤， 然后用 2M 盐酸 (700mL) 酸化 至 pH 1。 滤出所得沉淀物， 用水洗涤， 且在 40℃真空干燥， 得到副标题化合物， 其为黄色 - 褐 1 色固体。收率为 29.5g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ13.32(s， 1H)， 12.31(s， 1H)， 7.98(d， J ＝ 9.2Hz， 1H)， 6.63(d， J ＝ 28.2Hz， 1H)， 2.59(s， 3H)。
     b)1-(4-( 苄基氧基 )-2- 羟基 -3- 硝基苯基 ) 乙酮
     在氮气下将叔丁醇锂 (4.06g) 加至搅拌的 1-(2， 4- 二羟基 -3- 硝基苯基 ) 乙酮 ( 实施例 11， 步骤 a)(10g) 的 DMF(100mL) 溶液中， 同时保持内部温度低于 30℃。在环境温 度再搅拌 10 分钟后， 加入苄基溴 (6.03mL)， 且将混合物再搅拌 20h。再加入苄基溴 (3mL)， 且将混合物搅拌 24h。 反应混合物用水 (300mL) 淬灭， 加入 1M 氢氧化钠水溶液 (50mL)， 且混 合物用乙醚 (2×300mL) 洗涤， 过滤通过硅藻土以有助于分离。 在冰 / 水中冷却碱性溶液， 用 冰冷的 2M 盐酸 (200mL) 酸化， 滤出所得沉淀物， 用水洗涤， 且干燥， 得到淡褐色固体。固体 用乙醇 (100mL) 浆化 1h， 滤出固体， 用冷乙醇 (20mL) 洗涤， 且在 40℃真空干燥， 得到副标题 1 化合物， 其为淡褐色固体。收率为 6.8g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ13.04(s， 1H)， 8.14(d， J ＝ 9.2Hz， 1H)， 7.45-7.32(m， 5H)， 7.01(d， J ＝ 9.2Hz， 1H)， 5.42(s， 2H)， 2.64(s， 3H)+3 个 可交换的质子没有观察。
     c)1-(3- 氨基 -4-( 苄基氧基 )-2- 羟基苯基 ) 乙酮
     历时 15 分钟将锌粉 (5.5g) 逐份加至 1-(4-( 苄基氧基 )-2- 羟基 -3- 硝基苯基 ) 乙酮 ( 实施例 11， 步骤 b)(5.5g) 的乙酸 (55mL) 悬浮液中， 同时用冰浴保持内部温度低于 40℃。使混合物达到环境温度， 且搅拌 2h。混合物通过硅藻土来过滤 ( 注意 ： 变热 - 不要变 干 )， 用乙酸洗涤， 且将滤液倒入冰 / 水 (500mL) 中。滤出所得沉淀物， 用水洗涤， 且在 40℃ 1 真空干燥， 得到副标题化合物， 其为淡褐色固体。收率为 4.8g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO) δ7.53(m， 2H)， 7.48-7.33(m， 3H)， 7.28(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 6.72(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 5.29(s， 2H)， 2.59(s， 3H)。
     d)8- 乙酰基 -5-( 苄基氧基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮
     将 2- 氯乙酰氯 (1.8mL) 滴加至搅拌的 1-(3- 氨基 -4-( 苄基氧基 )-2- 羟基苯基 ) 乙酮 ( 实施例 11， 步骤 c)(5.2g) 和碳酸氢钠 (3.74g) 在 DMF(30mL) 中的混合物中， 然后搅 拌 2h。加入碳酸铯 (7.90g)， 且将混合物在 100℃加热 20h。将混合物冷却至环境温度， 用 水 (500mL) 淬灭， 用乙酸乙酯 (2×200mL) 萃取， 用水 (3×300mL) 和盐水洗涤， 用无水硫酸 钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。固体残余物用乙醚处理， 过滤， 且干燥， 得到副标题化合物， 其为米色固体。收率为 5.7g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ10.33(s， 1H)， 7.55(m， 2H)， 7.39(m， 2H)， 7.34(d， J ＝ 8.8Hz， 1H)， 7.33(m， 1H)， 6.89(d， J ＝ 9.2Hz， 1H)， 5.27(s， 2H)， 4.67(s， 2H)， 3.32(s， 3H)。
     e)5-( 苄基氧基 )-8-(2- 氯乙酰基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮
     将二氯碘酸苄基三甲基铵 (14.17g) 加至搅拌的 8- 乙酰基 -5-( 苄基氧基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 ( 实施例 11， 步骤 d)(5.5g) 在二氯甲烷 (100mL)、 乙酸 (33mL) 和水 (5.5mL) 的混合物中的溶液中， 且将反应混合物在 65℃搅拌 20h。将反应混合物冷却 至环境温度， 用亚硫酸氢钠水溶液 (5.78g/100mL) 处理， 且再搅拌 30min。混合物用乙醚 (200mL) 稀释， 过滤收集所得固体， 用水和乙醚洗涤， 且在 40℃真空干燥， 得到副标题化合 1 物， 其为淡褐色固体。收率为 5.6g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ10.41(s， 1H)， 7.55(m， 2H)，
     7.44(d， J ＝ 9.4Hz， 1H)， 7.39(m， 2H)， 7.32(m， 1H)， 6.95(d， J ＝ 9.4Hz， 1H)， 5.30(s， 2H)， 4.96(s， 2H)， 4.69(s， 2H)。
     f)8-(2- 叠氮基乙酰基 )-5-( 苄基氧基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮
     将叠氮化钠 (1.176g) 加至 5-( 苄基氧基 )-8-(2- 氯乙酰基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 ( 实施例 11， 步骤 e)(4.8g) 的 DMF(50mL) 悬浮液中， 且搅拌 2h。将混合物 倒在冰 / 水上， 过滤收集所得固体， 用水洗涤， 且在 40℃真空干燥， 得到副标题化合物， 其为 1 淡褐色固体。收率为 4.6g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ10.42(s， 1H)， 7.55(m， 2H)， 7.48(m， 1H)， 7.43-7.29(m， 3H)， 6.97(m， 1H)， 5.31(s， 2H)， 4.69(s， 2H)， 4.63(s， 2H)。
     g)8-(2- 叠 氮 基 -1- 羟 基 乙 基 )-5-( 苄 基 氧 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮异构体 1
     8-(2- 叠氮基乙酰基 )-5-( 苄基氧基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 ( 实施例 11， 步骤 f)(2g) 的乙醇 (80mL) 悬浮液用硼氢化钠 (0.224g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 1.5 小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且 减压蒸发溶剂。粗固体用丙酮 (20mL) 研磨， 得到 1.6g 外消旋的产物。
     对外消旋的混合物进行分离 ：
     将外消旋的 8-(2- 叠氮基 -1- 羟基乙基 )-5-( 苄基氧基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮 (2.5g) 以 10mg/mL 的浓度溶解在甲醇中， 且通过手性 HPLC( 使用 Chiralpak AS(250×50mm ID， 20μm 粒度 ) 柱且用乙醇洗脱 ) 来分离。合并含有第一洗脱异构体的馏 分， 且真空浓缩， 得到副标题化合物。收率为 0.67g。m/z 339(M-H)-(APCI)。
     h)8-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-5- 羟基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮乙酸盐 异构体 1
     在压力为 4 巴的氢气下将 8-(2- 叠氮基 -1- 羟基乙基 )-5-( 苄基氧基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮异构体 1( 实施例 11， 步骤 g)(0.67g) 在乙醇 (30mL)[ 含有 10％钯 / 碳催化剂 (0.210g)] 中的混合物剧烈搅拌 18 小时。 滤出催化剂， 且减压蒸掉溶剂。 将残余 物溶解在乙酸 (15mL) 和乙醇 (15mL) 中， 且在压力为 4 巴的氢气下将混合物与 10％钯 / 碳催 化剂 (0.210g) 一起搅拌 18 小时。 过滤混合物， 加入新鲜 10％钯 / 碳催化剂 (0.210g)， 且在 压力为 4 巴的氢气下继续搅拌 18 小时。 过滤混合物， 加入新鲜 10％钯 / 碳催化剂 (0.210g)， 且在压力为 4 巴的氢气下继续搅拌 18 小时。过滤混合物， 且减压除去溶剂。残余物用乙腈 1 (30mL) 研磨， 得到副标题化合物。收率为 0.33g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ6.85(d， 1H)， 6.50(d， 1H)， 4.74-4.69(m， 1H)， 4.52-4.42(m， 2H)， 2.74-2.50(m， 2H)， 1.83(s， 3H)。 6 个可交 换的质子没有观察。
     i)5- 羟基 -8-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 ) 异构体 1
     将 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 6， 步骤 b)(0.198g) 的 DCM(7mL) 溶液在冰浴中冷却， 且用三氟乙酸 (0.037mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (303mg) 处理。将混合物在 20℃
     搅拌 30 分钟。再加入戴斯 - 马丁高碘剂 (303mg)， 且再继续搅拌 30 分钟。混合物用饱和硫 代硫酸钠溶液 (7mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (7mL) 处理， 且将所有物质剧烈搅拌 10 分钟。混 合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇 (2mL) 中， 滴加至 8-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-5- 羟 基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮乙酸盐异构体 1( 实施例 11， 步骤 h)(110mg) 的甲醇 (5mL) 溶液 ( 其已冷却至 0℃ ) 中， 且用乙酸 (0.022mL) 处理， 接着用 HCl( 浓度为 1M 的乙醚 溶液， 0.387mL) 处理， 然后用氰基硼氢化钠 (37mg) 处理。 将反应混合物在 20℃搅拌 2 小时。 将混合物蒸发至体积为 3mL， 且在乙酸乙酯 (30mL) 和含水磷酸缓冲液 (pH ＝ 7.2)(50mL) 之 间分配。 水层通过加入乙酸来酸化， 且通过 10g SCX 柱。 柱用水洗涤， 然后用 7N 氨 / 甲醇冲 洗以洗脱产物。减压蒸发溶剂。将粗产物溶解在甲醇中， 用乙酸 (0.5mL) 处理， 且减压除去 TM 溶剂。 残余物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-35％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 将含 1 有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。 收率为 0.059g。 m/z 622(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ9.46(s， 1H)， 7.90(s， 1H)， 7.46-7.30(m， 4H)， 6.93-6.89(m， 1H)， 6.58-6.55(m， 1H)， 5.13-5.05(m， 1H)， 4.52(s， 2H)， 4.28(s， 2H)， 3.70(s， 4H)， 3.63(s， 2H)， 3.29-2.98(m， 10H)， 2.68(s， 3H)， 2.09-1.95(m， 2H)， 1.85-1.70(m， 2H)。 5 个可交换的质 子没有观察。
     实施例 12
     (R)-5-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)3- 氧代 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯
     将氯乙酰氯 (4.88mL) 滴加至剧烈在 0 ℃搅拌的碳酸钾 (17.43g)/ 水 (78mL) 和 4-( 氨基甲基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 (10.4g)/ 乙酸乙酯 (92mL) 的混合物中。在 0 ℃保持 30 分钟后， 混合物用乙酸乙酯萃取， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶 剂。将残余物溶解在 THF(200mL) 中， 在氮气下历时 3 小时滴加至搅拌且加热回流的叔丁 醇钾 ( 浓度为 1M 的叔丁醇溶液， 75mL) 和 THF(250mL) 的溶液中。将混合物冷却至室温， 且搅拌 18 小时。减压除去溶剂， 将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 水层用乙酸乙酯重 新萃取， 合并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物通过用乙醚 (30mL)和异己烷 (20mL) 的混合物研磨纯化， 得到副标题产物。收率为 8.20g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.95(s， 1H)， 3.97(s， 2H)， 3.72-3.62(m， 2H)， 3.10(d， 2H)， 3.05-2.93(m， 2H)， 1.77-1.69(m， 2H)， 1.53-1.43(m， 2H)， 1.40(s， 9H)。
     b)1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯
     3- 氧代 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 12， 步骤 a)(8.2g) 的 THF(100mL) 溶液用硼烷 -THF 络合物 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 91mL) 逐滴处理， 且将所得混合物在 55℃加热 2 小时。加入硼烷 - 二甲硫醚络合物 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 15.17mL)， 且将所得混合物在 55℃加热 2 小时。将混合物冷却至室温， 且用甲醇淬灭， 然后 减压蒸发溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (250mL) 中， 溶液用 N1， N2- 二甲基乙 -1， 2- 二胺 (10g) 处理， 且将所得混合物加热回流 6 小时。再加入 N1， N2- 二甲基乙 -1， 2- 二胺 (3g)， 且继续 加热回流 6 小时。将混合物冷却至室温， 减压蒸发溶剂， 残余物通过快速硅胶色谱 ( 用 1％ 三乙胺和 5％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率 1 为 7.40g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ3.72(s， 2H)， 3.68-3.64(m， 2H)， 3.14(t， J ＝ 20Hz， 2H)， 2.87-2.81(m， 2H)， 2.68(s， 2H)， 1.97-1.88(m， 2H)， 1.46(s， 9H)， 1.44-1.36(m， 2H)。 1 个可交 换的质子没有观察。
     c)4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯
     在 0℃和氮气下历时 5 分钟将三氟乙酸酐 (0.496mL) 的 DCM(3mL) 溶液滴加至搅拌 的三乙胺 (0.538mL) 和 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 12， 步骤 b)(0.9g) 的 DCM(20mL) 溶液中。在 0℃， 将所得溶液搅拌 30 分钟。加入水 (20mL)， 且 将混合物剧烈搅拌 10 分钟。分离出有机层， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物 通过快速硅胶色谱 ( 用 40％乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副 标题化合物。收率为 1g。无需纯化即直接使用。
     d)2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮三氟乙酸 盐
     在 20℃将三氟乙酸 (15mL) 加至搅拌的 4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 12， 步骤 c)(1g) 的 DCM(15mL) 溶液中。将所 得溶液在 20℃搅拌 10 分钟。加入甲苯 (50mL)， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率 为 1.4g。m/z 253(M+H)+(APCI)。
     e)2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮
     在 20 ℃历时 2 分钟将 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 6， 步骤 a)(0.223g) 的乙腈 (1mL) 溶液滴加至搅拌的三乙胺 (0.318mL) 和 2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮三氟乙酸盐 ( 实施例 12， 步骤 d)(0.38g) 的乙腈 (2mL) 溶 液中。将所得混合物在 20℃搅拌 3 小时。蒸掉溶剂， 且将残余物在二氯甲烷和水之间分配， 水层用 DCM 重新萃取 2 次， 合并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通 过快速硅胶色谱 ( 用 6％甲醇和 1％三乙胺 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.260g。m/z 387(M+H)+(APCI)。
     f)(R)-5-(1-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-2-(3-((4-(2， 2， 2- 三 氟 乙 酰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮
     在 20 ℃ 将 三 氟 乙 酸 (0.052mL) 加 至 2， 2， 2- 三 氟 -1-(9-(3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 12， 步骤 e)(0.26g) 的 二氯甲烷 (7.0mL) 溶液中。混合物用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.428g) 处理， 且在 20 ℃搅拌 30 分钟。混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (7.0mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (7.0mL) 处理， 且
     将混合物剧烈搅拌 10 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机相用饱和碳酸氢钠 溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇 (7.0mL) 中， 且将 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.225g) 和乙酸 (0.039mL) 加至在 0℃冷却的混合物中。加入三乙酰氧基硼 氢化钠 (0.214g)， 且将所得混合物在 20℃搅拌 90 分钟。蒸掉大部分甲醇， 且将残余物在乙 酸乙酯和含水磷酸缓冲液 (pH ＝ 7.2) 之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶 剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 用 1％浓氨水和 10％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化。将纯的 馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.144g。m/z 703(M+H)+(APCI)。
     g)(R)-2- 羟基 -2-(8- 羟基 -2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 ) 乙基 (3-((4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基 ) 氨基甲酸 叔丁酯
     在 20 ℃ 将 三 乙 胺 三 氢 氟 酸 盐 (0.044mL) 的 甲 醇 (1mL) 溶 液 加 至 搅 拌 的 (R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实 施例 12， 步骤 f)(0.140g) 的 THF(4mL) 溶液中。将所得溶液在 20℃搅拌 18 小时。反应混合 物用三乙胺 (0.111mL) 处理， 接着用一缩二碳酸二叔丁酯 (0.048mL) 的甲醇 (1mL) 溶液处 理。将混合物在 20℃搅拌 3 小时， 然后减压蒸掉溶剂。残余物通过快速硅胶色谱 ( 用 1％ “880” 氨水和 10％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。 收率为 0.100g。m/z689(M+H)+(APCI)。
     h)(R)-3-(1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 甲 基 ) 苯 乙 基 (2- 羟 基 -2-(8- 羟基 -2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯
     (R)-2- 羟 基 -2-(8- 羟 基 -2- 氧 代 -1， 2- 二 氢 喹 啉 -5- 基 ) 乙 基 (3-((4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 12， 步骤 g)(0.100g) 的甲醇 (5.0mL) 溶液用碳酸钾 (0.035g) 的水 (5.0mL) 溶液处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 5 小时。在氮气气流下蒸掉甲醇， 且再加入 水 (5.0mL)。 溶液通过加入乙酸来酸化， 然后通过 10g C18 硅胶柱。 柱用水洗涤， 然后用甲醇 冲洗以洗下产物。 减压蒸掉溶剂， 得到 0.090g 乙酸盐。 将该固体溶解在甲醇 (2mL) 中， 通过 0.700g VARIAN BondElut NH2 树脂， 且减压蒸掉溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.074g。 m/z593(M+H)+(APCI)。
     i)(R)-5-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸 盐)
     (R)-3-(1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 甲 基 ) 苯 乙 基 (2- 羟 基 -2-(8- 羟基 -2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 12， 步 骤 h)(0.068g) 的 DMF(2.0mL) 溶液用三乙胺 (0.048mL) 处理， 接着用 5- 乙基噻吩 -2- 甲 酸 (0.018g) 处理， 然后用 HATU(0.057g) 处理。将混合物在 20℃搅拌 2 小时。加入 “880” 氨水 (4 滴 )， 且继续搅拌 1 小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在二氯甲烷 (1mL) 中， 且溶 液用三氟乙酸 (1mL) 处理。将溶液在 20 ℃静置 10 分钟， 加入甲苯 (20mL)， 减压蒸发溶 TM 剂， 且残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 1 0.039g。m/z 631(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.18(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.46-7.33(m， 4H)， 7.23(d， 1H)， 7.14(d， 1H)， 7.00(d， 1H)， 6.84(d， 1H)， 6.55(d， 1H)， 5.39-5.33(m， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.74-3.63(m， 4H)， 3.54(s， 2H)， 3.29(t， 2H)， 3.21-3.00(m， 8H)， 2.83(q， 2H)， 2.10-1.96(m， 2H)， 1.84-1.69(m， 2H)， 1.26(td， 3H)。6 个可交换的质子没 有观察。
     实施例 13
     5- 羟基 -8-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 ) 异构体 2
     a)8-(2- 叠 氮 基 -1- 羟 基 乙 基 )-5-( 苄 基 氧 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮异构体 2异构体 2 在实施例 11 步骤 g 中详述的手性 HPLC 分离中作为第二洗脱异构体来得 到。合并含有第二洗脱异构体的馏分， 且真空浓缩， 得到副标题化合物。收率为 0.72g。m/ z 339(M-H)-(APCI)。
     b)(S)-8-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-5- 羟基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮乙 酸盐异构体 2
     将 8-(2- 叠 氮 基 -1- 羟 基 乙 基 )-5-( 苄 基 氧 基 )-2H- 苯 并 [b][1， 4] 噁 嗪 -3(4H)- 酮异构体 2( 实施例 13， 步骤 a)(0.72g) 在乙酸 (10mL) 和乙醇 (10mL) 的混合 物中的溶液与 10％钯 / 碳催化剂 (0.225g) 一起在压力为 4 巴的氢气下剧烈搅拌 18 小时。 过滤混合物， 加入新鲜 10％钯 / 碳催化剂 (0.225g)， 且在压力为 4 巴的氢气下继续搅拌 18 小时。过滤混合物， 加入新鲜 10％钯 / 碳催化剂 (0.225g)， 且在压力为 4 巴的氢气下继续 搅拌 18 小时。过滤混合物， 且减压除去溶剂。残余物用乙腈 (30mL) 研磨， 得到副标题化合 物。收率为 0.28g。m/z 222(M-H) (APCI)。 c)5- 羟基 -8-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 ) 异构体 2
     将 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 6， 步骤 b)(0.163g) 的 DCM(7.0mL) 溶液在冰浴中冷却， 且用三氟乙酸 (0.030mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.246g) 处理。将混合物在 20℃ 搅拌 30 分钟， 再用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.246g) 处理， 且在 20℃再搅拌 30 分钟。 混合物用饱 和硫代硫酸钠溶液 (7.0mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (7.0mL) 处理， 且剧烈搅拌 10 分钟。混合 物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇 (2.0mL) 中， 滴加至 8-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-5- 羟 基 -2H- 苯并 [b][1， 4] 噁嗪 -3(4H)- 酮乙酸盐异构体 2( 实施例 13， 步骤 b)(0.090g) 的甲醇 (5.0mL) 溶液 ( 其已冷却至 0℃ ) 中， 且用乙酸 (0.018mL) 处理， 接着用 HCl( 浓度为 1M 的乙 醚溶液， 0.32mL) 处理， 然后用氰基硼氢化钠 (0.030g) 处理。将混合物在 20℃搅拌 2 小时。 将混合物蒸发至体积为 3mL， 且在乙酸乙酯 (30mL) 和含水磷酸缓冲液 (pH ＝ 7.2)(50mL) 之 间分配。 水层通过加入乙酸来酸化， 且通过 10g SCX 柱。 柱用水洗涤， 然后用 7N 氨 / 甲醇冲 洗以洗脱产物。减压蒸发溶剂。将粗产物溶解在甲醇中， 用乙酸 (0.5mL) 处理， 且减压除去 TM 溶剂。残余物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-35％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将
     含有所需产物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.053g。m/z 622(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ9.45(s， 1H)， 7.90(d， J ＝ 4.6Hz， 1H)， 7.45-7.31(m， 4H)， 6.95-6.88(m， 1H)， 6.60-6.54(m， 1H)， 5.14-5.07(m， 1H)， 4.54(s， 2H)， 4.30(s， 2H)， 3.70(s， 4H)， 3.64(s， 2H)， 3.28-2.98(m， 10H)， 2.68(s， 3H)， 2.08-1.97(m， 2H)， 1.88-1.71(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。
     实施例 14
     (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(2-(5-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )1
     a)5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛在 20℃历时 20 分钟将叔丁基二甲基甲硅烷基氯 (2.82g) 逐份加至搅拌的 2-( 噻 吩 -2- 基 ) 乙醇 (2g) 和咪唑 (1.275g) 的 DMF(20mL) 溶液中。 将混合物在 20℃搅拌 18 小时， 然后在乙酸乙酯和水之间分配， 有机层用水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。 残 余物通过快速硅胶色谱 ( 洗脱梯度为 1-4％乙酸乙酯 / 异己烷 ) 纯化。将残余物 (2.7g) 溶 解在 THF(50mL) 中， 将溶液冷却至 -78℃， 历时 10 分钟滴加正丁基锂 ( 浓度为 2.5M 的己烷 溶液， 5.06mL)， 且将所得混合物在 0℃搅拌 1 小时。将反应混合物冷却至 -78℃， 且历时 5 分钟滴加 DMF(5.7mL)。将混合物在 20℃搅拌 3 小时。将反应混合物在水和乙酸乙酯之间 分配， 有机层用水洗涤， 用硫酸钠干燥， 且减压除去溶剂。 粗产物通过快速硅胶色谱 ( 用 7％ 乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 2.3g。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.83(s， 1H)， 7.61(d， 1H)， 6.96(d， 1H)， 3.86(t， 2H)， 3.07(t， 2H)， 0.88(s， 9H)， 0.02(s， 6H)。
     b)(9-((5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙 酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.25g) 和 5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲 醛 ( 实施例 14， 步骤 a)(0.171g) 的 NMP(5mL)[ 含有乙酸 (0.036mL)] 溶液用三乙酰氧基硼 氢化钠 (0.201g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 18 小时。将混合物在乙酸乙酯和饱和 碳酸氢钠溶液之间分配， 有机层用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副 标题化合物。收率为 0.3g。m/z 536(M+H)+(APCI)。
     c)(9-((5-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     (9-((5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 14， 步骤 b)(0.3g) 的 THF(5mL) 溶液用四丁基氟化铵溶液 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 0.672mL) 逐滴处理。将混 合物在 20℃静置 30 分钟。溶剂使用氮气气流来蒸发， 且残余物通过快速硅胶色谱 ( 洗脱
     梯度为 1％三乙胺和 2.5％甲醇 / 二氯甲烷 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合 物。收率为 0.187g。m/z422(M+H)+(APCI)。
     d)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(2-(5-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基 羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 乙 基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮
     (9-((5-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 14， 步骤 c)(0.18g) 的二氯甲烷 (10mL) 溶 液在 20℃用三氟乙酸 (0.033mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.254g) 处理， 且将混合 物在 20℃搅拌 90 分钟。然后混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 处理， 且剧烈搅拌 10 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸 氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇 (2mL) 中， 且 加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO2004106333)(0.143g) 和乙酸 (0.024mL) 的甲醇 (7mL) 溶液中。 将混合物在冰浴中冷却， 移开冰浴， 且将混合物在室温搅拌 1 小时。 蒸掉大部 且加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.136g)。 分甲醇， 将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。 粗产物通过快速硅胶色谱 ( 用 9％甲醇和 1％ ‘880’ 氨水 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.078g。m/z 738(M+H)+(APCI)。
     e)(R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(2-(5-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )
     (R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(2-(5-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 乙 基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 14， 步骤 d)(0.078g) 在 THF(4mL) 和甲醇 (1mL) 的 混合物中的溶液用三乙胺三氢氟酸盐 (0.022mL) 处理， 且将混合物在 20 ℃静置 18 小时。 减压蒸发溶剂， 且残余物与甲苯共沸。粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-30％乙
     腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需产物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 1 0.021g。m/z 624(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ10.50(s， 2H)， 10.15-9.84(m， 1H)， 8.91(s， 1H)， 8.80(s， 1H)， 8.16(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 8.00(s， 1H)， 7.26-7.12(m， 2H)， 7.02-6.94(m， 2H)， 6.58(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 6.21(s， 1H)， 5.36-5.31(m， 1H)， 4.53(s， 2H)， 3.83-3.48(m， 6H)， 3.33-2.93(m， 10H)， 2.68(s， 3H)， 2.16-2.04(m， 2H)， 1.79-1.59(m， 2H)。
     实施例 15
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮三氟乙 酸盐
     将氯化氢 ( 浓度为 2M 的乙醚溶液， 0.504mL) 加至搅拌的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 乙 酸 盐 ( 实 施 例 1， 步 骤 d)(0.222g) 和 2-(3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 9， 步骤 d)(0.320g) 的甲醇 (10mL) 溶液中。5min 后， 加入氰基硼氢化 钠 (0.100g)， 且将反应混合物搅拌过夜。将溶液浓缩至 3mL， 且在缓冲液 (pH 7.2)(80mL) 和乙酸乙酯之间分配。将饱和碳酸氢钠溶液加至水层中， 然后所述水层用乙酸乙酯萃取。 合并乙酸乙酯溶液， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发至干。经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 25-65％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 且真空蒸发至干。 加入乙腈， 真空蒸发溶液， 且重复该操作。加入乙醚， 且研磨胶状物， 得到标题化合物， 其为固体。收率 1 为 0.017g。 m/z 623(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ11.67(s， 1H)， 10.25(s， 1H)， 9.73-9.63(m， 1H)， 8.99-8.89(m， 1H)， 8.85-8.76(m， 1H)， 7.46-7.32(m， 3H)， 7.30-7.20(m， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.86-6.81(m， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.53-6.45(m， 1H)， 4.93-4.86(m， 1H)， 4.45-4.39(m， 0.4H)， 4.35-4.28(m， 1.6H)， 3.74-3.60(m， 4H)， 3.49(s， 2H)， 3.27-3.14(m， 4H)， 3.13-2.89(m， 6H)， 2.46(s， 3H)， 2.12-2.03(m， 2H)， 1.70-1.59(m， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。
     实施例 16
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三 氟乙酸盐 )
     a)2-(4-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇在 20 ℃ 将 硼 烷 - 二 甲 硫 醚 络 合 物 ( 浓 度 为 2M 的 THF 溶 液， 4.37mL) 滴 加 至 2-(4-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙酸 (1.0g) 的 THF(20mL) 溶液中， 且将混合物搅拌 1 小时。滴加甲 醇直到不再冒泡， 且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 30％乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色结晶固体。收率为 0.86g。
     H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.36-7.32(m， 2H)， 7.20(d， J ＝ 8.2Hz， 2H)， 4.68(s， 2H)， 4.64(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.64-3.55(m， 2H)， 2.75-2.67(m， 2H)。
     b)(9-(4-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     1向 (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 三氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.791g) 和三乙胺 (0.697mL) 的乙腈 (10mL) 溶液中加入 2-(4-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 16， 步骤 a)， 且将所得混合物搅拌过夜。真空蒸发溶 剂。将残余物在乙酸乙酯 (25mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (25mL) 之间分配。分离水相， 且用 乙酸乙酯 (2×25mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (25mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真 空蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 0.76g。m/z 416(M+H)+(APCI)。
     c)2-(4-((4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛
     在 0℃将 TFA(0.030mL) 加至 (9-(4-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 16， 步骤 b)(0.16g) 的 DCM(5mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.245g)， 将混合物温热至室 温， 且搅拌 45min。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸 乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物搅拌 10min。 分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。
     合并的有机溶液用盐水洗涤。 然后加入 AcOH(0.1mL)， 混合物用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸 发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物， 所述油状物直接使用。收率为 0.16g。
     d)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     将 2-(4-((4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 苯 基 ) 乙 醛 ( 实 施 例 16， 步 骤 c)(0.08g) 的 甲 醇 (2mL) 溶 液 加 至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.076g) 和乙酸 (0.017mL) 在甲醇 (0.5mL) 中的混合物中。将所得混合 物搅拌 5min， 然后冷却至 0℃。然后加入氰基硼氢化钠 (0.012g)， 将混合物温热至室温， 且 搅拌 2 小时。将反应混合物加载至 C18 柱 (Varian 10g)。柱用水 (50mL) 洗涤， 且用甲醇 TM (50mL) 洗脱。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合
     并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率 1 为 0.66g。m/z624(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.28(s， 1H)， 7.90(s， 1H)， 7.48(d， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 7.34(d， J ＝ 7.3Hz， 2H)， 6.94(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.78(d， J＝ 8.1Hz， 1H)， 4.99-4.88(m， 1H)， 4.31(s， 2H)， 3.76-3.55(m， 6H)， 3.32-2.91(m， 10H)， 2.67(s， 3H)， 2.10-1.67(m， 4H)。5 个可交换的质子没有观察。
     实施例 17
     (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(4-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸 盐)
     将 2-(4-((4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 苯 基 ) 乙 醛 ( 实 施 例 16， 步 骤 c)(0.08g) 的 甲 醇 (2mL) 溶 液 加 至 (R)-5-(2- 氨 基 -1-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 ) 乙 基 )-8- 羟 基 喹 啉 -2(1H)- 酮 (WO02004106333)(0.097g) 和乙酸 (0.017mL) 在甲醇 (0.5mL) 中的混合物中。 将所得混合物 搅拌 5min， 然后冷却至 0℃。然后加入氰基硼氢化钠 (0.018g)， 将混合物温热至室温， 且搅
     拌 2 小时。 将反应混合物加载至 C18 柱 (Varian 10g)。 柱用水 (50mL) 洗涤， 且用甲醇 (50mL) 洗脱。 合并馏分， 蒸发， 且经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨溶液洗脱 ) 纯化。 将残余物溶解在 THF(2mL) 中， 加入三乙胺三氢氟酸盐 (0.047mL)， 且将 TM 混合物搅拌过夜。 经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收 1 率为 0.07g。m/z 618(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ8.18(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 7.90(s， 1H)， 7.48(d， J ＝ 7.7Hz， 2H)， 7.34(d， J ＝ 7.9Hz， 2H)， 7.14(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.00(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 6.54(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.36(dd， J ＝ 8.6， 4.0Hz， 1H)， 4.31(s， 2H)， 3.75-3.58(m， 6H)， 3.33-2.97(m， 10H)， 2.67(s， 3H)， 2.11-1.67(m， 4H)。 6 个可交换的质 子没有观察。
     实施例 18
     (R)-7-(2-(2， 5- 二甲基 -4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)4- 羟基 -2， 5- 二甲基苯甲酸在 -78℃将三溴化硼溶液 ( 浓度为 1M 的 DCM 溶液， 7.21mL) 滴加至 4- 甲氧基 -2， 5- 二甲基苯甲酸 (1g) 的 DCM(5mL) 悬浮液中。将反应混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。将 反应混合物冷却至 -78 ℃， 且加入三溴化硼溶液 ( 浓度为 1M 的 DCM 溶液， 7.21mL)。将反 应混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。将反应混合物小心倒在冰 ( ～ 50mL) 上。所得水溶液用 DCM(5×50mL) 萃取。合并有机溶液， 用盐水 (50mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发， 得 1 到副标题化合物， 其为棕色固体。收率为 0.75g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ12.19(s， 1H)， 9.91(s， 1H)， 7.64(s， 1H)， 6.65(s， 1H)， 2.43(s， 3H)， 2.09(s， 3H)。
     b)4- 羟基 -2， 5- 二甲基苯甲酸甲酯
     将乙酰氯 (0.107mL) 滴加至 4- 羟基 -2， 5- 二甲基苯甲酸 ( 实施例 18， 步骤 a) (0.249g) 的 甲 醇 (15mL) 溶 液 中， 且 将 所 得 混 合 物 在 室 温 搅 拌 72h。 然 后 加 入 乙 酰 氯 (0.107mL)， 将反应混合物加热至 50℃， 且在该温度搅拌过夜。浓缩反应混合物， 且残余物 经硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯至 100％乙酸乙酯梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产 物的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.25g。1H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ10.04(s， 1H)， 7.64(s， 1H)， 6.67(s， 1H)， 3.74(s， 3H)， 2.42(s， 3H)， 2.09(s， 3H)。
     c)4-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 )-2， 5- 二甲基苯甲酸甲酯
     将 2- 溴 -1， 1- 二乙氧基乙烷 (0.31mL) 加至 4- 羟基 -2， 5- 二甲基苯甲酸甲酯 ( 实 施例 18， 步骤 b)(0.25g) 和碳酸铯 (0.68g) 在 DMF(20mL) 中的混合物中。将所得混合物在 85℃搅拌 16h。将反应混合物在水 (200mL) 和乙酸乙酯 (100mL) 之间分配。分离水相， 且用 乙酸乙酯 (2×100mL) 萃取。合并的有机溶液用水 (2×100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 用硫 酸镁干燥， 过滤， 且蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用异己烷至 10 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯梯度 洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收 1 CDCl3)δ7.75(s， 1H)， 6.64(s， 1H)， 4.86(t， J ＝ 5.2Hz， 1H)， 率 为 0.26g。 H NMR(300MHz， 4.04(d， J ＝ 5.4Hz， 2H)， 3.88-3.58(m， 7H)， 2.58(s， 3H)， 2.20(s， 3H)， 1.25(t， J ＝ 7.0Hz， 6H)。
     d)(4-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 )-2， 5- 二甲基苯基 ) 甲醇
     在 0℃将氢化锂铝溶液 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 1.17mL) 滴加至 4-(2， 2- 二乙氧基 乙氧基 )-2， 5- 二甲基苯甲酸甲酯 ( 实施例 18， 步骤 c)(0.231g) 的 THF(20mL) 溶液中。将 所得混合物温热至 RT， 且搅拌 1h。小心加入乙醇 (0.5mL)， 且浓缩反应混合物。将残余物在 1M NaOH(50mL) 和乙酸乙酯 (100mL) 之间分配。 分离出水层， 且用乙酸乙酯 (2×50mL) 萃取。 合并的有机层用盐水 (50mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为 1 澄清油状物。 收率为 0.20g。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.08(s， 1H)， 6.66(s， 1H)， 4.85(t， J＝ 5.3Hz， 1H)， 4.60(s， 2H)， 4.00(d， J ＝ 5.2Hz， 2H)， 3.84-3.58(m， 4H)， 2.33(s， 3H)， 2.20(s， 3H)， 1.25(t， J ＝ 7.0Hz， 6H)。1 个可交换的质子没有观察。
     e)(9-(2-(4-( 羟基甲基 )-2， 5- 二甲基苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     将 (4-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 )-2， 5- 二甲基苯基 ) 甲醇 ( 实施例 18， 步骤 d) (0.2g) 在乙酸 (5mL) 和水 (5mL) 的混合物中的溶液在 65 ℃加热 1h， 且冷却至 RT。将反 应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 中， 且用乙酸乙酯 (3×25mL) 萃取。合并的有机 溶液用盐水 (25mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。将残余物重新溶解在甲醇 (5mL) 中， 加入乙酸 (5mL)， 接着加入 (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.35g)。将所得混合物搅拌 15min， 然后加 入氰基硼氢化钠 (0.07g)， 且将混合物搅拌过夜。蒸发溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯 (50mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 之间分配。分离各层， 且水相用乙酸乙酯 (2×30mL) 萃取。合 并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。 收率为 0.12g。 m/ z 460(M+H)+(APCI)。
     f)2， 5- 二 甲 基 -4-(2-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯甲醛
     将 二 氧 化 锰 (0.32g) 加 至 (9-(2-(4-( 羟 基 甲 基 )-2， 5- 二 甲 基 苯 氧 基 ) 乙 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 18， 步骤 e)(0.17g) 的 DCM(10mL) 溶液中。将所得混合物加热回流 4h。反应混合物通过硅藻土 来过滤， 且滤垫用 DCM(2×50mL) 洗涤。合并母液和洗涤液， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其 为黄色胶状物。收率为 0.17g。m/z 458(M+H)+(APCI)。
     g)(R)-7-(2-(2， 5- 二甲基 -4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     将 2， 5- 二甲基 -4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯甲醛 ( 实施例 18， 步骤 f)(0.08g) 加至 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.07g) 和乙酸 (0.010mL) 在甲醇 (2mL) 中的混合物中。将混合物搅拌 30min， 然后在冰 浴中冷却。 然后加入氰基硼氢化钠 (0.016g)， 且将混合物搅拌 2h。 真空蒸发溶剂， 且将残余 物在乙酸乙酯 (50mL) 和磷酸缓冲液 (pH7.2)(50mL) 之间分配。分离出水层， 且用乙酸乙酯 (2×50mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 残 余物经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 92 ∶ 8 ∶ 0.8DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。 TM 合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。 合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标 1 题化合物， 其为白色固体。收率为 0.069g。m/z668(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.34-11.14(m， 1H)， 7.92(s， 1H)， 7.26(s， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.86(s， 1H)， 6.76(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.94(t， J ＝ 6.5Hz， 1H)， 4.39-4.31(m， 2H)， 4.23-4.09(m， 2H)， 3.78-3.63(m， 6H)， 3.61-3.55(m， 2H)， 3.49-3.20(m， 4H)， 3.13-3.03(m， 2H)， 2.68(s， 3H)， 2.33(s， 3H)， 2.21-2.01(m， 5H)， 1.94-1.78(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。
     实施例 19
     (R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)2-(3-( 溴甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙酸将过氧苯甲酰 (0.05g) 加至 2-(3- 氟 -5- 甲基苯基 ) 乙酸 (0.518g) 和 N- 溴琥珀 酰亚胺 (0.6g) 在 DCM(10mL) 中的混合物中。将反应混合物加热回流 1h。加入 DCM(10mL) 和水 (20mL)， 且分离有机相。 有机层用盐水 (20mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 残余物用甲苯研磨， 且过滤除去所得白色固体。真空蒸发母液， 得到副标题化合物， 其为白 色固体， 所述固体无需进一步纯化即用于下一步。收率为 0.38g。
     b)(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     在 0 ℃将硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 3.85mL) 滴加至 2-(3-( 溴甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙酸 ( 实施例 19， 步骤 a)(0.38g) 的 THF(10mL) 溶液中。将 所得混合物温热至 RT， 且搅拌 1h。 将反应混合物冷却至 0℃， 且滴加甲醇 (1mL) 直到不再冒 泡。 真空蒸发溶剂， 且将残余物重新溶解在 MeCN(10mL) 中。 然后加入 (2- 甲基噻唑 -4- 基 ) (1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.61g)， 接着加入三乙胺 (0.54mL)， 且将所得混合物搅拌 70h。然后真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 99 ∶ 1 ∶ 0.1 至 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含 有产物的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色泡沫状物。收率为 0.57g。m/z 434(M+H)+(APCI)。
     c)2-(3- 氟 -5-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛
     在 0℃将 TFA(0.08mL) 加至 (9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 19， 步骤 b)(0.46g) 的 DCM(5mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.68g)， 且将混 合物在 RT 搅拌 45min。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和 乙酸乙酯 (20mL)， 且将混合物搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的 有机溶液用盐水洗涤， 用乙酸 (0.1mL) 酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题 化合物， 其为黄色胶状物。收率为 0.4g。m/z 432(M+H)+(APCI)。
     d)(R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )
     将 2-(3- 氟 -5-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 19， 步骤 c)(0.2g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至
     (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO2007027134， 实 施例 1， 步骤 d)(0.18g) 和乙酸 (0.04mL) 在甲醇 (0.5mL) 中的混合物中。 将所得混合物搅拌 5min， 然后冷却至 0℃。 然后加入氰基硼氢化钠 (0.03g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌 2h。 真 空蒸发溶剂， 且经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度 TM 洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50％乙 腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标 1 题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.018g。 m/z 642(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.89(s， 1H)， 7.26-7.12(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.94-4.85(m， 1H)， 4.26-4.13(m， 2H)， 3.74-3.59(m， 6H)， 3.35-2.94(m， 10H)， 2.67(s， 3H)， 2.06-1.91(m， 2H)， 1.83-1.68(m， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。
     实施例 20
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-(2-(4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)2-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 乙醇历时 5min 将氢化锂铝 ( 浓度为 1M 的乙醚溶液， 5.55mL) 滴加至搅拌的在冰浴中冷 却的 3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲酸甲酯 (1.0g) 的四氢呋喃 (15mL) 溶液中。1h 后， 反应混合物 用甲醇淬灭， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 先后用乙酸乙酯∶异己烷 2 ∶ 1 和乙酸乙酯洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 0.5g。1H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.31(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 7.26-7.20(m， 2H)， 7.16(d， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 4.67(s， 2H)， 3.86(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.87(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)。2 个可交换的质子没有观察。
     b)3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛
     在室温将二氧化锰 (IV)(2.0g) 加至搅拌的 2-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 20， 步骤 a)(0.50g) 的 DCM(10mL) 溶液中。6h 后， 反应混合物通过硅藻土来过滤 ( 用 DCM 洗脱 )。真空蒸发溶液， 得到副标题化合物， 其为胶状物。直接使用。收率为 0.46g。
     c)2-(3-( 二乙氧基甲基 ) 苯基 ) 乙醇
     将氯化铵 (0.08g) 加至 3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 20， 步骤 b)(0.45g) 和三乙氧基甲烷 (0.55g) 的 EtOH(8mL) 溶液中， 且将反应混合物在 70 ℃加热 3h。冷却 后， 将反应混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。乙酸乙酯溶液用硫酸钠干 燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 0.24g。 1H NMR(300MHz， CDCl 3) δ 7.38-7.25(m ， 3H) ， 7.22-7.16(m ， 1H) ， 5.50-5.47(m ， 1H) ， 3.93-3.82(m ， 2H) ， 3.71-3.47(m， 4H)， 2.94-2.86(m， 2H)， 1.29-1.21(m， 6H)。1 个可交换的质子没有观察。
     d) 甲磺酸 3-( 二乙氧基甲基 ) 苯乙基酯
     将 甲 磺 酰 氯 (0.18g) 的 二 氯 甲 烷 (0.2mL) 溶 液 加 至 搅 拌 的 在 冰 浴 中 冷 却 的 2-(3-( 二乙氧基甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 20， 步骤 c)(0.23g) 和三乙胺 (0.429mL) 的二 氯甲烷 (2.5mL) 溶液中。 1h 后， 将反应混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。 乙 酸乙酯层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题 1 化合物， 其为胶状物。收率为 0.28g。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.40-7.29(m， 3H)， 7.19(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 5.47(s， 1H)， 4.42(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 3.67-3.48(m， 4H)， 3.07(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.86(s， 3H)， 1.24(t， J ＝ 6.8Hz， 6H)。
     e)(9-(3-( 二乙氧基甲基 ) 苯乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮
     将 甲 磺 酸 3-( 二 乙 氧 基 甲 基 ) 苯 乙 基 酯 ( 实 施 例 20， 步 骤 d)(0.30g) 的 乙 腈 (1.5mL) 溶 液 加 至 搅 拌 的 (5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 )(1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 ) 甲 酮 三 氟 乙 酸 盐 ( 实 施 例 9， 步 骤 b)(0.391g) 和 三 乙 胺 (0.415mL) 的 乙 腈 (1.5mL) 溶液中， 且将溶液在 70℃加热 48h。 冷却后， 真空蒸发溶液， 且加载至硅胶柱用于纯
     化 ( 用乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺 60 ∶ 40 ∶ 5 洗脱 )， 得到副标题化合物， 其为胶状物。 收 1 率为 0.2g。H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.30-7.24(m， 3H)， 7.14(d， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 7.11(d， J＝ 3.7Hz， 1H)， 6.69(dd， J ＝ 3.7Hz， 1.1Hz， 1H)， 5.46(s， 1H)， 3.78-3.71(m， 4H)， 3.65-3.49(m， 6H)， 2.82-2.77(m， 2H)， 2.65-2.57(m， 4H)， 2.50(s， 3H)， 2.48-2.39(m， 2H)， 1.94-1.86(m， 2H)， 1.67-1.56(m， 2H)， 1.23(t， J ＝ 7.2Hz， 6H)。
     f)3-(2-(4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 乙基 ) 苯甲醛
     将甲酸 (2mL) 加至搅拌的在冰浴中冷却的 (9-(3-( 二乙氧基甲基 ) 苯乙基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 20， 步骤 e) (0.20g) 在四氢呋喃 (3mL) 和水 (1mL) 中的溶液中。10min 后， 真空蒸发反应混合物， 加入 甲苯， 且真空蒸发反应混合物。 将残余物溶解在乙腈中， 然后真空蒸发， 且重复该操作， 得到 副标题化合物， 其为油状物， 所述油状物直接使用。收率为 0.16g。m/z 413(M+H)+(APCI)。
     g)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-(2-(4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     将 乙 酸 (0.033mL) 加 至 搅 拌 的 3-(2-(4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 20， 步骤 f)(0.17g) 和 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO2007027134， 实 施例 1， 步骤 d)(0.15g) 的甲醇 (10mL) 溶液中。2min 后， 加入氰基硼氢化钠 (0.10g)， 且将 反应混合物在室温搅拌过夜。 将甲醇溶液浓缩至～ 3mL， 且用乙酸乙酯稀释。 形成胶状沉淀 物。滗出乙酸乙酯， 用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤， 且用硫酸钠干燥。将胶状物溶解在少 量甲醇中， 且加至乙酸乙酯中。 过滤乙酸乙酯， 且真空蒸发， 得到白色固体。 将固体溶解在甲 TM 醇中， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 15-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含 有纯产物的馏分， 且蒸发至干。 用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.11g。 1 m/z 623(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.67(s， 1H)， 10.23(s， 1H)，
     9.85-9.75 和 9.61-9.50(m， 总 计 1H)， 9.18-8.98(m， 2H)， 7.45-7.31(m， 4H)， 7.29-7.24(m， 1H)， 6.89(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 6.86-6.83(m， 1H)， 6.75(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 6.48-6.44(m， 1H)， 4.93-4.85(m， 1H)， 4.21-4.14(m， 2H)， 3.74-3.64(m， 4H)， 3.53(s， 2H)， 3.48-3.40(m， 2H)， 3.36-3.27(m， 2H)， 3.08-2.92(m， 6H)， 2.47(s， 3H)， 2.16-2.08(m， 2H)， 1.74-1.61(m， 2H)。
     实施例 21
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-((5-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛
     在 20℃历时 20 分钟将叔丁基二甲基甲硅烷基氯 (2.82g) 逐份加至搅拌的 2-( 噻 吩 -2- 基 ) 乙醇 (2g) 和咪唑 (1.275g) 的 DMF(20mL) 溶液中。 将混合物在 20℃搅拌 18 小时， 然后在乙酸乙酯和水之间分配， 有机层用水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。 残 余物通过快速硅胶色谱 ( 洗脱梯度为 1-4％乙酸乙酯 / 异己烷 ) 纯化。将残余物 (2.7g) 溶 解在 THF(50mL) 中， 将溶液冷却至 -78℃， 历时 10 分钟滴加正丁基锂 ( 浓度为 2.5M 的己烷 溶液， 5.06mL)， 且将所得混合物在 0℃搅拌 1 小时。将反应混合物冷却至 -78℃， 且历时 5 分钟滴加 DMF(5.7mL)。将混合物在 20℃搅拌 3 小时。将反应混合物在水和乙酸乙酯之间 分配， 有机层用水洗涤， 用硫酸钠干燥， 且减压除去溶剂。 粗产物通过快速硅胶色谱 ( 用 7％ 乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 2.3g。H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.83(s， 1H)， 7.61(d， 1H)， 6.96(d， 1H)， 3.86(t， 2H)， 3.07(t， 2H)， 0.88(s， 9H)， 0.02(s， 6H)。
     b)2-(5-( 二乙氧基甲基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙醇
     1
     在氮气下将 5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛 ( 实施例 21， 步骤 a)(1.37g)、 氯化铵 (0.135g) 和原甲酸三乙酯 (0.928mL) 在乙醇 (15mL) 中的混合 物加热回流 3 小时。减压除去大部分乙醇， 且将残留混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。将残余物溶解在 THF(20mL) 中， 且历时 1 分钟滴加四丁基氟化铵 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 5.07mL)。将混合物在室温静置 30 分钟。减压除去溶剂， 且残余物通过快速硅胶色谱 ( 用 25％乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯 化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.940g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO) δ6.85(d， 1H)， 6.73(d， 1H)， 5.64(s， 1H)， 4.79-4.74(m， 1H)， 3.62-3.43(m， 6H)， 2.87(t， 2H)， 1.13(t， 6H)。
     c)5-(2-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛
     2-(5-( 二乙氧基甲基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙醇 ( 实施例 21， 步骤 b)(0.54g) 的二氯甲 烷 (20mL) 溶液用三乙胺 (0.359mL) 处理， 且将混合物在冰浴中冷却。然后历时 2 分钟滴 加甲磺酰氯 (0.183mL) 的二氯甲烷 (3mL) 溶液， 且将反应混合物在 0℃搅拌 1 小时。混合 物用水洗涤， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在乙腈 (7mL) 和 DMF(1mL) 的混合物中， 加入三乙胺 (0.654mL)， 接着加入 (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.5g)， 且在 70℃加 热 10 小时。将混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过 滤， 且减压蒸发溶剂。 将残余物溶解在 THF(5mL) 中， 在冰浴中冷却， 加入甲酸 (4mL)， 接着加 入水 (1mL)。将混合物在 0℃静置 10 分钟。减压除去溶剂， 残余物与甲苯共沸 2 次， 且与乙 腈共沸 2 次。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 1％三乙胺和 2％甲醇 / 二氯甲烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.52g。m/z 420(M+H)+(APCI)。
     d)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-((5-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.22g) 的甲醇 (8mL) 溶液用乙酸 (0.041mL) 处理， 接 着用 5-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛 ( 实施例 21， 步骤 c)(0.3g) 的甲醇 (2mL) 溶液处理。将混合物在冰 浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.067g) 处理。然后将混合物在室温搅拌 18 小时。减压蒸 发大部分甲醇， 且将残余物在 THF(50mL)、 盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 之间分
     配。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。 粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需产物的馏分蒸发至干， 得到标题化合 1 物。 收率为 0.08g。 m/z 630(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.92(s， 1H)， 7.14(d， 1H)， 6.94-6.88(m， 2H)， 6.76(d， 1H)， 4.91-4.85(m， 1H)， 4.37(s， 2H)， 3.70(s， 4H)， 3.66(s， 2H)， 3.40-3.30(m， 4H)， 3.26-3.07(m， 4H)， 3.04-3.02(m， 2H)， 2.68(s， 3H)， 2.09-1.99(m， 2H)， 1.87-1.73(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。
     实施例 22
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯
     将 2- 异丙基噻唑 -4- 甲酸 (1g) 和 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲 酸叔丁酯盐酸盐 (WuXi PharmaTech)(1.71g) 的 DMF(30mL) 溶液在冰浴中冷却， 且用三乙 胺 (2.442mL) 处理， 接着用 HATU(2.89g) 处理。移开冰浴， 且将混合物在 20 ℃搅拌 1 小 时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 70％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯 化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 2g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ ) δ7.93(s， 1H)， 3.71-3.63(m， 6H)， 3.51-3.44(m， 2H)， 3.35-3.26(m， 1H)， 3.18-3.10(m， 2H)， 1.74-1.67(m， 2H)， 1.49-1.41(m， 2H)， 1.39(s， 9H)， 1.34(d， J ＝ 7.6Hz， 6H)。
     b)(2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三 氟乙酸盐
     将 4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲 酸叔丁酯 ( 实施例 22， 步骤 a)(2.3g) 在二氯甲烷 (40mL) 和三氟乙酸 (10mL) 的混合物中的 溶液在 20℃静置 30 分钟。加入甲苯 (50mL)， 且蒸发溶剂， 然后再用甲苯 (50mL) 重复该操 作。残余物用乙醚研磨。然后将胶状物溶解在乙腈中， 且蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收 率为 1.64g。m/z 310(M+H)+(APCI)。
     c)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三 氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.85g) 和 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 6， 步骤 a) (0.432g) 在乙腈 (10mL) 中的混合物在 20℃用三乙胺 (0.616mL) 处理， 然后搅拌 2 小时。 减 压蒸发溶剂， 将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸 发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 洗脱梯度为 1％三乙胺和 3％甲醇 / 二氯甲烷 ) 纯化。 将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.71g。m/z 444(M+H)+(APCI)。
     d)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     (9-(3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 22， 步骤 c)(0.3g) 的二氯甲烷 (10mL) 溶液用三氟 乙酸 (0.052mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.402g) 处理， 且将所得混合物在 20 ℃ 搅拌 1 小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (10mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和乙 酸乙酯 (10mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱
     和碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 用乙酸 (0.039mL) 处理， 且减压蒸发溶剂。将 残余物溶解在甲醇 (2mL) 中， 且加至 0 ℃的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.2g) 和乙酸 (0.039mL) 的甲醇 (10mL) 溶液中。加入氰基硼氢化钠 (0.064g)， 且将混合物在室温搅拌 18 小时。减 压蒸发大部分甲醇， 且将残余物在 THF(50mL)、 盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 之 间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需产物的馏分蒸发至干， 得到 1 标 题 化 合 物。 收 率 为 0.170g。m/z 652(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ ) δ11.27(s， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.45-7.31(m， 4H)， 6.93(d， J ＝ 31.1Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 24.6Hz， 1H)， 4.96-4.87(m， 1H)， 4.27(s， 2H)， 3.70(s， 4H)， 3.65(s， 2H)， 3.35-2.97(m， 11H)， 2.08-1.96(m， 2H)， 1.84-1.67(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 20.7Hz， 6H)。5 个可交换的质子没有观 察。
     实施例 23
     (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙 酸盐 )
     a)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮
     (9-(3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 22， 步骤 c)(0.159g) 的 DCM(10mL) 溶液用三氟乙酸 (0.028mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.213g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 1 小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (10mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和乙酸乙酯 (10mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢
     钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 用乙酸 (0.039mL) 处理， 且减压蒸发溶剂。将残余物溶解 在甲醇 (2mL) 中， 且加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟 基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.12g) 和乙酸 (0.021mL) 的甲醇 (10mL) 溶液中。将 混合物在冰浴中冷却， 且用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.114g) 处理， 然后将混合物在室温搅拌 18 小时。 减压除去甲醇， 将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配， 有机层用硫酸 钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 1％‘880’ 氨水和 8％甲 醇 / 二氯甲烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.127g。 m/z 760(M+H)+(APCI)。
     b)(R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙 酸盐 )
     (R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 苯 乙 基 氨 基 ) 乙 基 )-8- 羟 基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 23， 步骤 a)(0.127g) 的 THF(4mL) 溶液用三乙胺三氢氟酸盐 (0.035mL) 的甲醇 (1mL) 溶液处理， 且将所得混合物在 20℃静置 18 小时。减压除去溶剂， TM 且粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含 有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.085g。m/z 646(M+H)+(APCI)。 1 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.16(d， J ＝ 36.5Hz， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.45-7.33(m， 4H)， 7.13(d， J ＝ 26.1Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 24.2Hz， 1H)， 6.54(d， J ＝ 24.2Hz， 1H)， 5.38-5.32(m， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.70(s， 4H)， 3.64(s， 2H)， 3.32-3.24(m， 3H)， 3.21-3.00(m， 8H)， 2.08-1.97(m， 2H)， 1.82-1.68(m， 2H)， 1.34(d， J ＝ 25.7Hz， 6H)。6 个可交换的质子没 有观察。
     实施例 24
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)2-(3-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 ) 苯基 ) 乙醇将碳酸铯 (8.84g) 加至 3-(2- 羟基乙基 ) 苯酚 (2.5g) 和 2- 溴 -1， 1- 二乙氧基 乙烷 (3.74g) 的 DMF(50mL) 溶液中， 且将所得混合物在 90℃搅拌过夜， 然后冷却。将混合 物倒入水中， 且用乙酸乙酯萃取 3 次。合并的萃取物用水和盐水洗涤， 然后用无水硫酸钠 干燥， 且通过快速硅胶色谱 ( 用乙醚 / 异己烷梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为浅 1 黄色油状物。收率为 3.0g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.21-7.16(m， 1H)， 6.82-6.72(m， 3H)， 4.80(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.97(d， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.81(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 3.78-3.69(m， 2H)， 3.65-3.56(m， 2H)， 2.80(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 1.21(t， J ＝ 6.9Hz， 6H)。1 个可交换的质 子没有观察。
     b)2-(3-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙醛
     将浓盐酸 (1.5mL) 加至 2-(3-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 24， 步骤 a)(0.256g) 的 1， 4- 二氧杂环己烷 (3mL) 溶液中， 且将所得混合物在室温搅拌 1.5 小 时。然后溶液用水稀释， 且用乙酸乙酯萃取 2 次。合并的萃取物用盐水洗涤， 用无水硫酸镁 1 干燥， 且真空浓缩， 得到副标题化合物， 其为白色泡沫状物。 收率为 0.150g。H NMR(400MHz， CDCl 3) δ 9.86(s ， 1H) ， 7.28-7.13(m ， 1H) ， 6.92-6.66(m ， 3H) ， 4.57(s ， 2H) ， 3.87(t ， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 2.86(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。
     c)(9-(2-(3-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     2-(3-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙醛 ( 实施例 24， 步骤 b)(0.143g) 和 (2- 甲基噻 唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步 骤 h)(0.314g) 的甲醇 (10mL) 悬浮液用乙酸 (0.045mL) 处理， 且在室温搅拌 30 分钟。在 冰 - 水中冷却混合物， 用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.254g) 处理， 且搅拌 3 天， 使用冰浴以终 止。 所得溶液通过快速硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 15 ∶ 84 三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得 到粗产物 (0.243g)。通过快速硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 5 ∶ 94 三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱 ) 来进行第二次纯化， 得到稍有不纯的副标题化合物， 其为褐色胶状物。收率为 0.122g。m/z 446(M+H)+(APCI)。
     d)2-(3-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯基 ) 乙醛
     在冰 - 水中冷却 (9-(2-(3-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 24， 步骤 c)(0.152g) 的 DCM(5mL) 溶液， 用三氟乙酸 (0.039mL) 处理， 且搅拌 5 分钟。 加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.221g)， 从冷却 浴中取出混合物， 且在室温搅拌 25 分钟。 反应混合物通过加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (5mL) 来淬灭， 且将所得两相混合物搅拌 10 分钟。然 后混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 且合并的有机萃取物用盐水洗涤。加入乙酸 (0.1mL)， 然后 经酸化的萃取物用无水硫酸镁干燥， 且真空浓缩， 得到副标题化合物， 其为褐色胶状物。收 率为 0.118g。m/z 444(M+H)+(APCI)。
     e)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )
     (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.105g) 的甲醇 (2mL) 溶液用乙酸 (0.023mL) 处理， 且搅拌 5 分钟。然后加入 2-(3-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 24， 步骤 d)(0.117g) 的甲醇 (3mL) 溶液， 将 所得混合物在室温搅拌 1 小时， 然后在冰 - 水中冷却， 且用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.085g) 处理。将混合物在冰中搅拌 1 小时， 然后再加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.086g)。将混合 物在冰中搅拌 1 小时， 然后再加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.169g)， 且将混合物搅拌 1 小 时。再加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.506g)， 将混合物搅拌过夜， 且将其缓慢温热至室温。 第二天， 在冰 - 水中再次冷却混合物， 用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.254g) 处理， 且在冰 - 水 中搅拌 45 分钟， 然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈 (3mL) 和水 (1.5mL) 的混合物中， 且 TM 经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。真空浓缩含有 产物的馏分， 且与乙腈共蒸发 2 次， 得到无色残余物。残余物用乙醚研磨， 得到固体， 过滤 收集所述固体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 1 6 0.011g。m/z654(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D -DMSO)δ11.68( 宽单峰， 1H)， 10.22( 宽 单峰， 1H)， 8.00(s， 1H)， 7.29(t， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 6.96-6.84(m， 4H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.48( 宽 单 峰， 1H)， 4.93-4.85(m， 1H)， 4.36-4.27(m， 2H)， 3.83-3.61(m， 6H)， 3.60-3.51(m， 2H)， 3.50-3.42(m， 2H)， 3.24-3.02(m， 6H)， 3.02-2.84(m， 2H)， 2.69(s， 3H)， 2.15-2.06(m， 2H)， 1.88-1.67(m， 2H)。3 个可交换的质子没有观察。
     实施例 25
     (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2-( 三氟甲基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 (2-( 三氟甲基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲 酮三氟乙酸盐
     1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐 (WuXi PharmaTech) (0.594g) 和 2-( 三氟甲基 ) 噻唑 -4- 甲酸 (0.4g) 的 DMF(10mL) 溶液用三乙胺 (0.848mL) 处 理， 且冷却至 0℃。 加入 HATU(1.003g)， 且将混合物在 20℃搅拌 2 小时。 将混合物在乙酸乙酯 和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通 过快速硅胶色谱 ( 用 40％乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯化， 得到产物， 其为游离碱。将其溶解 在二氯甲烷 (40mL) 中， 且用三氟乙酸 (10mL) 处理， 然后将混合物在 20℃静置 1 小时。加入 甲苯 (60mL)， 且减压除去溶剂， 得到副标题化合物。 收率为 0.740g。 m/z 336(M+H)+(APCI)。
     b)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2-( 三氟甲基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲酮
     将 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 6， 步骤 a)(0.354g) 加至 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 (2-( 三氟甲基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 25， 步骤 a)(0.74g) 和三乙胺 (0.689mL) 的乙腈 (15mL) 溶液中， 且将混合物在 20℃搅拌 2 小时。 减压蒸发溶剂， 将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配， 有机层用硫酸钠 干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 1％三乙胺和 3％甲醇 / 二 氯甲烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.640g。m/z
     470(M+H)+(APCI)。
     c)(R)-5-(1-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-2-(3-((4-(2-( 三 氟 甲 基 ) 噻 唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙 基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮
     (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2-( 三 氟甲基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 25， 步骤 b)(0.211g) 的二氯甲烷 (10mL) 溶液用三氟 乙酸 (0.035mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.266g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅 拌 1 小时。 反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (10mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和乙酸乙 酯 (10mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸 氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 用乙酸 (0.026mL) 处理， 且减压蒸发溶剂。将残余物溶 解在甲醇 (2mL) 中， 且加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟 基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.150g) 和乙酸 (0.026mL) 的甲醇 (10mL) 溶液中。 将 混合物在冰浴中冷却， 且用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.143g) 处理， 然后将混合物在室温搅拌
     18 小时。 减压除去甲醇， 将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配， 有机层用硫酸 钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 1％‘880’ 氨水和 8％甲 醇 / 二氯甲烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.11g。 m/z786(M+H)+(APCI)。
     d)(R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2-( 三氟甲基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     将三乙胺三氢氟酸盐 (0.030mL) 的甲醇 (1mL) 溶液加至 (R)-5-(1-( 叔丁基二甲 基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((4-(2-( 三氟甲基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 25， 步骤 c)(0.11g) 的 THF(4mL) 溶液中， 且将所得溶液在 20℃静置 18 小时。减压除去溶剂， 且粗产
     物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 将含有所需化 1 合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物 (0.075g)。m/z 672(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.78(s， 1H)， 8.52(s， 1H)， 8.18(d， J ＝ 49.2Hz， 1H)， 7.45-7.33(m， 4H)， 7.14(d， J ＝ 21.8Hz， 1H)， 7.00(d， J ＝ 19.8Hz， 1H)， 6.54(d， J ＝ 21.9Hz， 1H)， 5.39-5.33(m， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.75-3.63(m， 4H)， 3.59(s， 2H)， 3.28(t， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 3.21-3.00(m， 8H)， 2.10-1.97(m， 2H)， 1.84-1.67(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。
     实施例 26
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2-( 三氟甲基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 苯 乙 基 氨 基 ) 乙 基 ) 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2-( 三 氟甲基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 25， 步骤 b)(0.268g) 的二氯甲烷 (10mL) 溶液用三氟 乙酸 (0.044mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.339g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅 拌 1 小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (10mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和乙酸 乙酯 (10mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和 碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 用乙酸 (0.033mL) 处理， 且减压蒸发溶剂。将残余 物溶解在甲醇 (2mL) 中， 且加至 0℃的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.15g) 和乙酸 (0.033mL) 的甲 醇 (10mL) 溶液中。加入氰基硼氢化钠 (0.054g)， 且将混合物在室温搅拌 18 小时。减压蒸 发大部分甲醇， 且将残余物在 THF(50mL)、 盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 之间分 配。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。 粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化 1 合物。收率为 0.13g。m/z 678(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s，
     1H)， 8.74(s， 1H)， 8.52(s， 1H)， 7.45-7.31(m， 4H)， 6.93(d， J ＝ 41.1Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 36.9Hz， 1H)， 4.97-4.87(m， 1H)， 4.27(s， 2H)， 3.74-3.69(m， 2H)， 3.69-3.64(m， 2H)， 3.59(s， 2H)， 3.25(t ， J ＝ 14.5Hz， 2H)， 3.19-2.99(m， 8H)， 2.09-1.97(m， 2H)， 1.84-1.69(m， 2H)。 4个 可交换的质子没有观察。
     实施例 27
     (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(5-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     a) 叔丁基二甲基 (2-( 噻吩 -3- 基 ) 乙氧基 ) 甲硅烷
     将叔丁基氯二甲基甲硅烷 (3.88g) 加至搅拌的在冰浴中冷却的 2-( 噻吩 -3- 基 ) 乙醇 (3.00g) 和 1H- 咪唑 (4.78g) 的 DMF(30mL) 溶液中。16h 后， 反应混合物用乙酸乙酯 (300mL) 稀释， 用水 (3×150mL) 洗涤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 先后用异己烷和 1 ∶ 5 乙 1 酸乙酯∶异己烷洗脱 ) 纯化， 收集副标题化合物， 其为油状物。 收率为 5.2g。 H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.23(dd， J ＝ 2.9， 4.9Hz， 1H)， 7.01-6.99(m， 1H)， 6.97(dd， J ＝ 1.3， 4.9Hz， 1H)， 3.80(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.85(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 0.88(s， 9H)， 0.01(s， 6H)。
     b)4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛与 3-(2-( 叔丁基二 甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛的混合物
     将正丁基锂 ( 浓度为 1.6M 的己烷溶液， 7mL) 滴加至搅拌的在 -78 ℃冷却的叔丁 基二甲基 (2-( 噻吩 -3- 基 ) 乙氧基 ) 甲硅烷 ( 实施例 27， 步骤 a)(2.210g) 的四氢呋喃 (60mL) 溶液中。加完后， 将反应混合物在冰浴中搅拌 1h， 然后冷却至 -78℃。历时 5min 滴 加 N， N- 二甲基甲酰胺 (9.00g)， 且再过 10min 后， 移开冷却浴。1h 后， 将反应混合物在水和 乙酸乙酯之间分配， 乙酸乙酯溶液用水洗涤 2 次， 用盐水洗涤 1 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 20 乙酸乙酯∶异己烷洗脱 ) 纯化， 得到 4-(2-( 叔丁基二 甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛和 3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛的 4 ∶ 1 混合物 ( 通过 1H NMR 来确定 )， 其为油状物。收率为 1.3g。
     1 4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛 ： H NMR(400MHz， CDCl3) δ9.93(d， J ＝ 1.2Hz， 1H)， 7.71(d， J ＝ 1.5Hz， 1H)， 7.52(s， 1H)， 3.92-3.84(m， 2H)， 2.91(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 0.92(s， 9H)， 0.04(s， 6H)。 1
     3-(2-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 ) 乙 基 ) 噻 吩 -2- 甲 醛 ： H NMR(400MHz， CDCl3)δ10.08(s， 1H)， 7.69(d， J ＝ 5.0Hz， 1H)， 7.09(d， J ＝ 5.0Hz， 1H)， 3.92-3.84(m， 2H)，
     3.22(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 0.89(s， 9H)， -0.01(s， 6H)。
     c)(9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮
     将 (5- 甲基噻吩 -2- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三 氟乙酸盐 ( 实施例 9， 步骤 b)(0.230g) 加至搅拌的 4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙 基 ) 噻吩 -2- 甲醛和 3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛的 4 ∶ 1 混合物 ( 实施例 27， 步骤 b)(0.20g) 和 AcOH(0.033mL) 的 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (3mL) 溶液 中。5min 后， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.35g)。16h 后， 加入水， 且混合物用乙酸乙酯萃 取。乙酸乙酯层用水洗涤 3 次， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 20 ∶ 80 ∶ 5 乙酸乙酯∶异己 烷∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 分离到两种异构产物， 且得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 1 0.21g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.09(d， J ＝ 3.8Hz， 1H)， 6.86(s， 1H)， 6.75(s， 1H)， 6.69(d， J ＝ 3.8Hz， 1H)， 3.78(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.76-3.69(m， 4H)， 3.64(s， 2H)， 3.56(s， 2H)， 2.76(t， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 2.62-2.54(m， 2H)， 2.50(s， 3H)， 2.41-2.32(m， 2H)， 1.90-1.82(m， 2H)， 1.63-1.52(m， 2H)， 0.88(s， 9H)， 0.01(s， 6H)。
     d)(9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮
     将四丁基氟化铵 ( 浓度为 1M 的四氢呋喃溶液， 2mL) 加至 (9-((4-(2-( 叔丁基二甲 基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 27， 步骤 c)(0.65g) 的四氢呋喃 (7mL) 溶液中。1h 后， 真空蒸发溶液。经硅胶色谱 ( 用 20 ∶ 1 乙酸乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合 1 物， 其为胶状物。收率为 0.45g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.09(d， J ＝ 3.7Hz， 1H)， 6.92(s， 1H)， 6.77(s， 1H)， 6.69(dd， J ＝ 1.0， 3.7Hz， 1H)， 3.83(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)， 3.76-3.70(m， 4H)， 3.66(s， 2H)， 3.56(s， 2H)， 2.82(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)， 2.62-2.55(m， 2H)， 2.50(s， 3H)， 2.43-2.33(m， 2H)， 1.91-1.82(m， 2H)， 1.65-1.50(m， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。
     e)2-(5-((4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙醛
     将戴斯 - 马丁高碘剂 (0.35g) 加至搅拌的 (9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 27， 步骤 d)(0.19g) 和三氟乙酸 (0.052mL) 的 DCM(5mL) 溶液中。1h 后， 加入乙酸乙酯 (30mL)， 接着加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 的混合物。充分振摇反应 混合物， 且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、 水和盐水洗涤。加入乙酸 (0.07mL)， 溶液用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发 ( 浴温为～ 30℃ )， 得到副标题化合物， 其为胶状物。 收率为 0.19g。直接使用。
     f)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(5-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     将乙酸 (0.039g) 加至搅拌的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.17g) 和 2-(5-((4-(5- 甲基噻 吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙醛 ( 实施例 27， 步骤 e)(0.19g) 的 MeOH(10mL) 溶液中。1min 后， 加入氰基硼氢化钠 (0.10g)。 3h 后， 将反应混合物真空浓缩至～ 2mL， 加入 THF(20mL)， 且溶液用盐水 (10mL) 和饱和碳 酸氢钠溶液 (2mL) 的混合物洗涤。有机溶液用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将固体溶 TM 解在甲醇中， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 且真空蒸发至干。加入乙腈， 真空蒸发溶液， 且重复该操作。加入乙 醚， 且研磨胶状物， 得到标题化合物， 其为固体。收率为 0.097g。m/z 629(M+H)+(APCI)。 1 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ11.67(s， 1H)， 10.23(s， 1H)， 9.82-9.67(m， 1H)， 8.93-8.67(m， 2H)， 7.46(s， 1H)， 7.25-7.22(m， 1H)， 7.17(s， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.8Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.8Hz， 1H)， 6.60-6.46(m， 1H)， 6.51-6.46(m， 1H)， 4.92-4.86(m， 1H)， 4.68-4.51(m， 2H)， 3.74-2.88(m， 16H)， 2.46(s， 3H)， 2.15-2.04(m， 2H)， 1.69-1.56(m， 2H)。
     实施例 28
     (R)-5-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三 氟乙酸盐 )
     将 2-(3- 氟 -5-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 19， 步骤 c)(0.2g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.23g) 和乙酸 (0.027mL) 在甲醇 (3mL) 中的混合物中。将所得混合物搅 拌 5min， 然后冷却至 0℃。然后加入氰基硼氢化钠 (0.044g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌 2h。真空蒸发溶剂， 且经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。将残余物溶解在 THF(3mL) 中， 加入三乙胺三氢氟酸盐 (0.11mL)， 且将混合物搅拌过夜。真空浓缩反应混合物。经制备 TM 性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏
     分， 且蒸发， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.021g。m/z 636(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.15(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.90(s， 1H)， 7.29-7.17(m， 3H)， 7.13(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.55(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 5.37-5.29(m， 1H)， 4.35-4.19(m， 2H)， 3.75-3.59(m， 6H)， 3.34-2.98(m， 10H)， 2.67(s， 3H)， 2.06-1.93(m， 2H)， 1.83-1.69(m， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。
     实施例 29
     (R)-7-(2-(4- 氟 -3-((4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)2-(4- 氟 -3- 甲基苯基 ) 乙酸
     将 2-(4- 氟 -3- 甲基苯基 ) 乙腈 (1g) 和氢氧化钠 (0.8g) 在甲醇 (10mL) 和水(3mL) 的混合物中混合。 然后将所得混合物加热回流过夜。 真空浓缩反应混合物， 且将残余 物溶解在水 (25mL) 中。水相用乙醚 (2×25mL) 洗涤， 用浓盐酸酸化， 且用乙醚 (3×25mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 1 其为白色固体。收率为 1.1g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ12.31(s， 1H)， 7.20-6.99(m， 3H)， 3.52(s， 2H)， 2.21(s， 3H)。
     b)(9-(2- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮
     将过氧苯甲酰 (0.058g) 加至 2-(4- 氟 -3- 甲基苯基 ) 乙酸 (0.6g)( 实施例 29， 步骤 a) 和 N- 溴琥珀酰亚胺 (0.7g) 在 DCM(10mL) 中的混合物中。将所得混合物加热回 流 4h。加入 DCM(10mL) 和水 (20mL)， 且分离有机相。有机相用盐水 (20mL) 洗涤， 用硫酸 钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物重新溶解在 THF(10mL) 中， 且在冰浴中冷却。滴加硼 烷 - 二甲硫醚溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 4.46mL)， 且将混合物搅拌 1h。小心加入甲醇 (2mL)， 且不再冒泡后， 真空蒸发溶剂。将残余物重新溶解在乙腈 (10mL) 中， 且加入 (5- 甲 基噻吩 -2- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施 例 9， 步骤 b)(0.7g)， 接着加入三乙胺 (1.49mL)。将所得混合物搅拌过夜， 然后真空浓缩。 经硅胶色谱 ( 用 99 ∶ 1 ∶ 0.1 至 97 ∶ 3 ∶ 0.3 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯 化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为泡沫状物。收率为 0.46g。m/ 1 z 433(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.22-7.16(m， 2H)， 7.14-7.07(m， 1H)， 6.97(dd， J ＝ 10.0， 8.5Hz， 1H)， 6.80-6.76(m， 1H)， 3.67-3.57(m， 6H)， 3.50-3.45(m， 4H)， 2.70(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.46(s， 3H)， 2.41-2.35(m， 4H)， 1.76-1.67(m， 2H)， 1.55-1.45(m， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。
     c)(R)-7-(2-(4- 氟 -3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )
     在 0℃将 TFA(0.032mL) 加至 (9-(2- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 29， 步骤 b)(0.18g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.27g)。将所得黄色
     溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (25mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (25mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸 发。 将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.012mL) 和 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙 基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.17g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.039g)， 将混合物温 热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 真空蒸发。经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合并含有产物的 馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.11g。 m/z 1 641(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.47-7.35(m， 2H)， 7.29-7.17(m， 2H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.82-6.75(m， 2H)， 4.91(dd， J ＝ 8.1， 5.3Hz， 1H)， 4.32-4.20(m， 2H)， 3.74-3.61(m， 4H)， 3.53(s， 2H)， 3.28-2.93(m， 10H)， 2.46(s， 3H)， 2.05-1.97(m， 2H)， 1.82-1.74(m， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。
     实施例 30
     (R)-5-(9-(3-(2-(2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基羰基 ) 噻吩 -2- 甲 酸甲酯二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)4-(5-( 甲氧基羰基 ) 噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 甲酸叔丁酯1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐 (WuXi PharmaTech) (0.6g) 和噻吩 -2， 5- 二羧酸 (1.7g) 的 DMF(10mL) 溶液用三乙胺 (2.75mL) 处理， 且冷却 至 0 ℃。加入 HATU(1.013g)， 且将混合物在 20 ℃搅拌 2 小时。将混合物在乙酸乙酯和盐 水 [ 含有乙酸 (2mL)] 之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发 溶剂。残余物通过快速硅胶色谱 ( 使用 1％乙酸 / 乙酸乙酯作为溶剂 ) 纯化。将该物质溶 解在 THF(30mL) 中， 用羰基二咪唑 (0.332g) 处理， 且将混合物在 45℃静置 1 小时。加入甲 醇 (20mL)， 且将反应混合物在 50℃加热 30 分钟。减压除去溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯
     和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色 谱 ( 使用 40％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合 1 物。收率为 0.45g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.72(d， J ＝ 3.8Hz， 1H)， 7.40(d， J＝ 3.8Hz， 1H)， 3.85(s， 3H)， 3.72-3.68(m， 2H)， 3.63-3.59(m， 2H)， 3.58-3.51(m， 2H)， 3.49(s， 2H)， 3.12-3.04(m， 2H)， 1.77-1.70(m， 2H)， 1.46-1.40(m， 2H)， 1.39(s， 9H)。
     b)5-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基羰基 ) 噻吩 -2- 甲酸甲酯三氟 乙酸盐
     将三氟乙酸 (10mL) 加至 4-(5-( 甲氧基羰基 ) 噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 30， 步骤 a)(0.45g) 的二氯甲烷 (40mL) 溶液 中， 且将所得混合物在 20℃静置 1 小时。加入甲苯 (50mL)， 且减压除去溶剂， 得到副标题化 合物。收率为 0.46g。m/z 325(M+H)+(APCI)。
     c)5-(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基羰 基 ) 噻吩 -2- 甲酸甲酯5-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基羰基 ) 噻吩 -2- 甲酸甲酯三氟乙酸 盐 ( 实施例 30， 步骤 b)(0.46g) 和 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 6， 步骤 a)(0.226g) 的乙腈 (10mL) 溶液用三乙胺 (0.44mL) 处理， 且将混合物在 20℃搅拌 2 小时。减压蒸发溶 剂， 且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且 减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 1％三乙胺和 3％甲醇 / 二氯甲烷作为溶 剂 ) 纯化。 将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。 收率为 0.41g。 m/z 459(M+H)+(APCI)。
     d)(R)-5-(9-(3-(2-(2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基羰基 ) 噻吩 -2- 甲酸甲酯二 ( 三氟乙酸盐 )
     5-(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基羰基 ) 噻吩 -2- 甲酸甲酯 ( 实施例 30， 步骤 c)(0.262g) 的二氯甲烷 (10mL) 溶液用三氟乙 酸 (0.044mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.339g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 1 小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (10mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和乙酸乙 酯 (10mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳 酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 用乙酸 (0.033mL) 处理， 且减压蒸发溶剂。将残余 物溶解在甲醇 (2mL) 中， 且加至 0℃的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.15g) 和乙酸 (0.033mL) 的甲 醇 (10mL) 溶液中。加入氰基硼氢化钠 (0.054g)， 且将混合物在室温搅拌 18 小时。减压蒸 发大部分甲醇， 且将残余物在 THF(50mL)、 盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 之间分 配。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。 粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化 1 合物。收率为 0.175g。m/z 667(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.72(d， J ＝ 3.8Hz， 1H)， 7.44-7.33(m， 5H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.95-4.89(m， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.85(s， 3H)， 3.74-3.69(m， 2H)， 3.66-3.61(m， 2H)， 3.53(s， 2H)， 3.28-2.98(m， 10H)， 2.09-1.99(m， 2H)， 1.77(s， 2H)。5 个可交换的质子没 有观察。
     实施例 31
     (R)-5-(9-(3-(2-(2- 羟基 -2-(8- 羟基 -2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 ) 乙基氨 基 ) 乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基羰基 ) 噻吩 -2- 甲酸甲酯 二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)(R)-5-(9-(3-(2-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(8- 羟基 -2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 羰基 ) 噻吩 -2- 甲酸甲酯
     5-(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基羰 基 ) 噻吩 -2- 甲酸甲酯 ( 实施例 30， 步骤 c)(0.137g) 的二氯甲烷 (10mL) 溶液用三氟乙酸(0.023mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.178g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 1 小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (10mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和乙酸乙酯 (10mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 用乙酸 (0.017mL) 处理， 且减压蒸发溶剂， 得到粗中间体 醛 (0.13g)。将所述醛溶解在甲醇 (2mL) 中， 且加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲 硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.10g) 和乙酸 (0.017mL) 的甲醇 (10mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 且用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.095g) 处理， 然后将混合物在室温搅拌 18 小时。减压除去甲醇， 将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙 酯之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使 用 1％ ‘880’ 氨水和 9％甲醇 / 二氯甲烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标 题化合物。收率为 0.108g。m/z 775(M+H)+(APCI)。
     b)(R)-5-(9-(3-(2-(2- 羟基 -2-(8- 羟基 -2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 ) 乙基 氨基 ) 乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基羰基 ) 噻吩 -2- 甲酸甲 酯二 ( 三氟乙酸盐 )
     (R)-5-(9-(3-(2-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(8- 羟基 -2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 羰基 ) 噻吩 -2- 甲酸甲酯 ( 实施例 31， 步骤 a)(0.108g) 的 THF(4mL) 溶液用三乙胺三氢氟 酸盐 (0.029mL) 的甲醇 (1mL) 溶液处理， 且将溶液在 20℃静置 18 小时。减压除去溶剂， 且 TM 粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有 所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.055g。m/z 661(M+H)+(APCI)。 1 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.18(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 7.72(d， J ＝ 3.8Hz， 1H)， 7.45-7.32(m， 5H)， 7.14(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.00(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.54(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 5.40-5.34(m， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.85(s， 3H)， 3.75-3.70(m， 2H)， 3.66-3.61(m， 2H)， 3.53(s， 2H)， 3.29(t， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 3.22-3.01(m， 8H)， 2.10-1.99(m， 2H)， 1.78(s， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。
     实施例 32
     (R)-7-(2-(3， 4- 二氟 -5-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )
     a)2-(3， 4- 二氟苯基 ) 乙醇在 0℃将硼烷 - 二甲硫醚溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 18.30mL) 小心加至 2-(3， 4- 二氟苯基 ) 乙酸 (2.1g) 的 THF(20mL) 溶液中。 将所得混合物温热至 RT， 且搅拌 1h。 将反 应混合物在冰浴中冷却， 且滴加甲醇 (5mL)。对反应混合物进行搅拌直到不再冒泡， 且真空 蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用异己烷至 4 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。合并含有产物 的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 1.92g。1H NMR(300MHz，
     CDCl3)δ7.14-7.00(m， 2H)， 6.98-6.90(m， 1H)， 3.85(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)， 2.82(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。
     b)2， 3- 二氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛
     在 -70 ℃将 2， 2， 6， 6- 四甲基哌啶 (6.15mL) 加至正丁基锂的己烷溶液 (1.6M， 22.8mL) 中。 滴加 2-(3， 4- 二氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 32， 步骤 a)(1.92g) 的 THF(25mL) 溶液。 加入 THF(25mL)， 且将混合物在 -70℃搅拌 6h。 然后加入 DMF(4.7mL)， 且将混合物在 -70℃搅 拌 1h。然后将混合物温热至 RT， 且搅拌 70h。加入 HCl 水溶液 (2M， 10mL)， 接着加入乙酸乙 酯 (20mL)， 且分离各层。水相用乙酸乙酯 (2×20mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 至 2 ∶ 1 异己烷∶乙醚梯 度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。 1 收率为 1.9g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ10.33(s， 1H)， 7.54-7.47(m， 1H)， 7.39-7.32(m， 1H)，
     3.92-3.86(m， 2H)， 2.88(t， J ＝ 6.3Hz， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。
     c)(9-(2， 3- 二氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮
     将 (5- 甲基噻吩 -2- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟 乙酸盐 ( 实施例 9， 步骤 b)(0.53g) 加至 2， 3- 二氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 32， 步骤 b)(0.25g) 和乙酸 (0.08mL) 的甲醇 (5mL) 溶液中。将反应混合物搅拌 30min， 且在冰 浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.13g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌 18h。真空浓缩反 应混合物。经硅胶色谱 ( 用 99 ∶ 1 ∶ 0.1 至 97 ∶ 3 ∶ 0.3DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度 洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 1 0.08g。m/z 451(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.18(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 7.14-7.06(m， 1H)， 7.04-6.99(m， 1H)， 6.80-6.77(m， 1H)， 4.34-4.29(m， 1H)， 3.68-3.57(m， 6H)， 3.53-3.46(m， 4H)， 2.70(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 2.47-2.34(m， 7H)， 1.77-1.67(m， 2H)， 1.55-1.45(m， 2H)。
     d)(R)-7-(2-(3， 4- 二 氟 -5-((4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )
     在 0℃将 TFA(0.013mL) 加至 (9-(2， 3- 二氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 32， 步骤 c)(0.077g) 的 DCM(2mL) 溶液中。 将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.11g)。 将所得黄色 溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (1mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 和乙酸乙酯 (5mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (25mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸 发。 将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.005mL) 和 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙 基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.045g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.016g)， 将混合物温 热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合并含有产物的 馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.052g。 m/z659(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.46-7.37(m， 1H)，

    [1000] 7.28-7.23(m， 1H)， 7.20(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.81-6.74(m， 2H)， 4.91(dd， J ＝ 8.1， 5.0Hz， 1H)， 4.28-4.19(m， 2H)， 3.74-3.62(m， 4H)， 3.53(s， 2H)， 3.25(t， J ＝ 7.9Hz， 2H)， 3.15-2.95(m， 8H)， 2.46(s， 3H)， 2.01-1.93(m， 2H)， 1.80-1.67(m， 2H)。5 个可 交换的质子没有观察。

    [1001] 实施例 33

    [1002] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((8-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-5- 氧杂 -2， 8- 二 氮杂螺 [3.5] 壬烷 -2- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟 乙酸盐 )

    [1003] a)1- 二苯基甲基氮杂环丁烷 -3- 酮将三乙胺 (24.7mL) 加至 1- 二苯基甲基氮杂环丁烷 -3- 醇 (5g) 的 DMSO(25mL) 溶 液中。滴加吡啶三氧化硫 (18g) 的 DMSO(65mL) 溶液， 且将混合物在 20℃搅拌 90 分钟。将 混合物倒在冰 / 水上， 用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用盐水洗涤 3 次， 然后用硫酸钠 干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2％三乙胺 / 异己烷作为溶 剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 2.9g。1H NMR(400MHz， CDCl3) δ7.50-7.46(m， 4H)， 7.30(t， J ＝ 11.4Hz， 4H)， 7.24-7.19(m， 2H)， 4.59(s， 1H)， 4.00(s， 4H)。

    [1007] b)1- 二苯基甲基 -3-( 三甲基甲硅烷基氧基 ) 氮杂环丁烷 -3 甲腈

    [1006] 在 20℃和氮气下历时 15 分钟将四丁基氰化铵 (0.283g) 的二氯甲烷 (50mL) 溶液 滴加至搅拌的 1- 二苯基甲基氮杂环丁烷 -3- 酮 ( 实施例 33， 步骤 a)(2.5g) 和三甲基甲硅 烷基氰化物 (2.82mL) 的二氯甲烷 (50mL) 溶液中。将混合物在 20℃搅拌 1 小时。反应混 合物用水洗涤， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 3.5g。无需纯化即直接使用。c)3-( 氨基甲基 )-1- 二苯基甲基氮杂环丁烷 -3- 醇1- 二苯基甲基 -3-( 三甲基甲硅烷基氧基 ) 氮杂环丁烷 -3 甲腈 ( 实施例 33， 步骤 b)(3.5g) 的 THF(50mL) 溶液用硼烷 - 二甲硫醚络合物 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 20.8mL) 处 理， 且在氮气下将所得混合物在 70℃加热 1 小时。将混合物冷却至室温， 且用甲醇 (50mL) 小心淬灭， 接着用乙二胺 (2.81mL) 处理。将该混合物在 20℃搅拌 1 小时， 然后在 55℃搅拌 1 小时。将混合物冷却至室温， 且用四丁基氟化铵 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 15.6mL) 处理， 然后在室温搅拌 40 分钟。减压蒸发溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 洗脱梯度为 6 至 7％甲 醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 )) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率 为 1.95g。m/z 269(M+H)+(APCI)。

    [1013] d)N-((1- 二苯基甲基 -3- 羟基氮杂环丁烷 -3- 基 ) 甲基 )-2- 氯乙酰胺

    [1012] 在 0℃历时 30 分钟将氯乙酰氯 (0.846mL) 滴加至剧烈搅拌的 3-( 氨基甲基 )-1- 二 苯基甲基氮杂环丁烷 -3- 醇 ( 实施例 33， 步骤 c)(2.1g)/ 乙酸乙酯 (100mL) 和碳酸钾 (3.03g)/ 水 (100mL) 的混合物中。将混合物在 0 ℃再搅拌 30 分钟， 然后用乙酸乙酯萃 取， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 2.6g。m/z 345(M+H)+(APCI)。

    [1016] e)2- 二苯基甲基 -5- 氧杂 -2， 8- 二氮杂螺 [3.5] 壬烷 -7- 酮

    [1015] 在氮气下历时 90 分钟将 N-((1- 二苯基甲基 -3- 羟基氮杂环丁烷 -3- 基 ) 甲 基 )-2- 氯乙酰胺 ( 实施例 33， 步骤 d)(2.6g) 的 THF(50mL) 溶液滴加至剧烈搅拌的 75℃的 叔丁醇钾 ( 浓度为 1M 的叔丁醇溶液， 15.08mL) 和 THF(150mL) 的溶液中。加完后， 将混合 物在 75℃搅拌 10 分钟， 然后冷却至室温。减压除去溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和盐水之 间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂， 得到副标题化合物。收率为 2.05g。 m/z 309(M+H)+(APCI)。

    [1018] f)2- 二苯基甲基 -5- 氧杂 -2， 8- 二氮杂螺 [3.5] 壬烷将硼烷 - 二甲硫醚络合物 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 10.7mL) 加至 2- 二苯基甲 基 -5- 氧杂 -2， 8- 二氮杂螺 [3.5] 壬烷 -7- 酮 ( 实施例 33， 步骤 e)(2g) 的无水 THF(40mL) 溶 液中， 且将所得溶液在 70℃和氮气下搅拌 50 分钟。将混合物冷却至室温， 且用甲醇 (40mL) 逐滴处理， 接着用 N1， N2- 二甲基乙 -1， 2- 二胺 (3.43g) 处理。 将混合物在 70℃加热 6 小时。 减压除去溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减 压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 1％三乙胺和 5％甲醇 / 二氯甲烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 1.35g。m/z 295(M+H)+(APCI)。

    [1022] g)(2- 二 苯 基 甲 基 -5- 氧 杂 -2， 8- 二 氮 杂 螺 [3.5] 壬 烷 -8- 基 )(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 ) 甲酮

    [1021] 在 0℃将 HATU(2.267g) 一次性加至 5- 甲基噻吩 -2- 甲酸 (0.652g)、 2- 二苯基甲 基 -5- 氧杂 -2， 8- 二氮杂螺 [3.5] 壬烷 ( 实施例 33， 步骤 f)(1.35g) 和三乙胺 (1.917mL) 的 DMF(20mL) 溶液中。移开冷却浴， 且将混合物在室温搅拌 2 小时。将混合物在乙酸乙酯 和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产 物通过快速硅胶色谱 ( 洗脱梯度为 0.4 至 5％甲醇 / 二氯甲烷 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至 干， 得到副标题化合物。收率为 1.5g。m/z 419(M+H)+(APCI)。

    [1025] h)(5- 甲基噻吩 -2- 基 )(5- 氧杂 -2， 8- 二氮杂螺 [3.5] 壬烷 -8- 基 ) 甲酮盐酸盐

    [1024] 在 0℃将氯甲酸 1- 氯乙基酯 (0.508mL) 滴加至 (2- 二苯基甲基 -5- 氧杂 -2， 8- 二 氮杂螺 [3.5] 壬烷 -8- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 33， 步骤 g)(1.5g) 的乙 腈 (30mL) 溶液中。然后将混合物在氮气下加热回流 1 小时。减压除去溶剂， 且将残余物 溶解在甲醇 (50mL) 中。将该溶液在氮气下加热回流 30 分钟。减压除去溶剂， 且残余物用 乙酸乙酯 (40mL) 研磨， 然后用乙腈 (7mL) 研磨， 得到副标题化合物。收率为 0.29g。m/z 253(M+H)+(APCI)。i)(2-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-5- 氧杂 -2， 8- 二氮杂螺 [3.5] 壬烷 -8- 基 )(5- 甲 基噻吩 -2- 基 ) 甲酮在 20℃将 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 6， 步骤 a)(0.281g) 加至 (5- 甲基 噻吩 -2- 基 )(5- 氧杂 -2， 8- 二氮杂螺 [3.5] 壬烷 -8- 基 ) 甲酮盐酸盐 ( 实施例 33， 步骤 h) (0.29g) 和三乙胺 (0.42mL) 的乙腈 (15mL) 溶液中， 且将所得混合物在 20℃搅拌 3 小时。 减 压除去溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压 除去溶剂。 粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 3％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶 剂 ) 纯化。 将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。 收率为 0.32g。 m/z 387(M+H)+(APCI)。

    [1031] j)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((8-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-5- 氧杂 -2， 8- 二氮杂螺 [3.5] 壬烷 -2- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1030] (2-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-5- 氧杂 -2， 8- 二氮杂螺 [3.5] 壬烷 -8- 基 )(5- 甲 基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 33， 步骤 i)(0.16g) 的二氯甲烷 (10mL) 溶液用三氟乙酸 (0.032mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.246g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 1 小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (10mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和乙酸乙酯 (10mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸 氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 用乙酸 (0.024mL) 处理， 且减压蒸发溶剂。将残余物 溶解在甲醇 (2mL) 中， 且加至 0 ℃的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.15g) 和乙酸 (0.024mL) 的甲 且将混合物在室温搅拌 18 小时。减压蒸 醇 (10mL) 溶液中。加入氰基硼氢化钠 (0.039g)， 发大部分甲醇， 且将残余物在 THF(50mL)、 盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 之间分 配。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。 粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化 1 合物。收率为 0.13g。m/z 595(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.26(s， 1H)， 7.42-7.29(m， 4H)， 7.24(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.82-6.75(m， 2H)， 4.95-4.88(m， 1H)， 4.36(s， 2H)， 4.09-3.97(m， 4H)， 3.87(s， 2H)， 3.73-3.69(m， 2H)， 3.66-3.62(m， 2H)， 3.24(t， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 3.15-2.97(m， 4H)， 2.46(s， 3H)。5 个可交换的 质子没有观察。

    [1033] 实施例 34

    [1035] (R)-7-(2-(2， 6- 二氟 -3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1036] a)(9-(2， 4- 二氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮

    [1037] 将过氧苯甲酰 (0.03g) 加至 NBS(0.53g) 和 2-(2， 6- 二氟 -3- 甲基苯基 ) 乙酸 (0.5g) 在 DCM(10mL) 中的混合物中。将反应混合物加热回流 4h。加入 DCM(10mL) 和水 (20mL)， 且分离有机相。 有机相用盐水 (20mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。 将残余物 重新溶解在 THF(10mL) 中， 且在冰浴中冷却。 滴加硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 4mL)， 且将混合物搅拌 1h。 小心滴加甲醇 (2mL)， 且不再冒泡后， 蒸发溶剂。 将残余 物重新溶解在乙腈 (10mL) 中， 且加入 (5- 甲基噻吩 -2- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 9， 步骤 b)(0.8g)， 接着加入三乙胺 (1.12mL)。 将所得混合物搅拌过夜， 蒸发， 且经硅胶色谱 ( 用 99 ∶ 1 ∶ 0.1 至 97 ∶ 3 ∶ 0.3DCM ∶甲 醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为洁净泡沫状物。收率为 0.37g。 m/z 451(M+H)+(APCI)。

    [1040] b)2-(2， 6- 二氟 -3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛

    [1039] 在 0℃将 TFA(0.05mL) 加至 (9-(2， 4- 二氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 34， 步骤 a)(0.27g) 的 DCM(5mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.38g)， 且 将混合物在 RT 搅拌 45min。 然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL)

    [1042] 和乙酸乙酯 (20mL)， 且将混合物剧烈搅拌 10min。 分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。 合 并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副 标题化合物， 其为洁净胶状物。收率为 0.27g。m/z 449(M+H)+(APCI)。

    [1043] c)(R)-7-(2-(2， 6- 二 氟 -3-((4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1044] 将 2-(2， 6- 二氟 -3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 34， 步骤 b)(0.135g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.11g) 和乙酸 (0.015mL) 在甲醇 (0.5mL) 中的混合物中。将所得混合物 搅拌 5min， 然后冷却至 0℃。然后加入氰基硼氢化钠 (0.025g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌 2h。浓缩反应混合物， 且经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ TM 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 蒸发， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为

    [1045] 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.1g。m/ 1 z 659(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.64-7.50(m， 1H)， 7.26-7.12(m， 2H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.84-6.69(m， 2H)， 4.91(dd， J ＝ 8.5， 4.9Hz， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.77-3.47(m， 6H)， 3.29-2.99(m， 10H)， 2.46(s， 3H)， 2.10-1.90(m， 2H)， 1.88-1.68(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [1046] 实施例 35

    [1047] (R)-5-(2-(2， 6- 二氟 -3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三 氟乙酸盐 )

    [1048] 将 2-(2， 6- 二氟 -3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 34， 步骤 b)(0.135g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO

    [1049] 2004106333)(0.12g) 和乙酸 (0.017mL) 在甲醇 (3mL) 中的混合物中。将所得混合物搅拌 5min， 然后冷却至 0℃。 然后加入氰基硼氢化钠 (0.028g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌 2h。 浓 缩反应混合物， 且残余物经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 蒸发， 且将残余物溶解在 THF(3mL) 中， 加入 三乙胺三氢氟酸盐 (0.074mL)， 且将混合物搅拌过夜。浓缩反应混合物， 且残余物经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸 1 发， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.12g。 m/z653(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.18(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 7.64-7.51(m， 1H)， 7.22-7.10(m， 3H)， 7.00(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.80(d， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 6.54(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.36(dd， J ＝ 8.7， 4.1Hz， 1H)， 4.34(s， 2H)， 3.76-3.46(m， 6H)， 3.33-3.03(m， 10H)， 2.46(s， 3H)， 2.09-1.95(m， 2H)， 1.87-1.66(m， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1050] 实施例 36

    [1051] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1052] a)(9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1053] 将 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.50g) 加至搅拌的 4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛和 3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛的 4 ∶ 1 混合物 ( 实施例 27， 步骤 b)(0.40g) 和 AcOH(0.085mL) 的 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (6mL) 溶 液中。5min 后， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.48g)。16h 后， 加入水， 且混合物用乙酸乙酯 萃取。乙酸乙酯层用水洗涤 3 次， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶异己烷∶三乙 胺 20 ∶ 80 ∶ 5 洗脱 ) 纯化， 分离到两种异构产物， 且得到副标题化合物， 其为胶状物。收 1 率为 0.27g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.81(s， 1H)， 6.86(s， 1H)， 6.75(s， 1H)， 3.99-3.91(m，1H)， 3.88-3.82(m， 1H)， 3.81-3.72(m， 5H)， 3.69-3.58(m， 3H)， 3.37-3.25(m， 1H)， 2.76(t， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 2.59-2.44(m， 3H)， 2.41-2.29(m， 1H)， 1.89-1.81(m， 2H)， 1.78-1.67(m， 1H)， 1.56-1.50(m， 1H)1.46-1.34(m， 6H)， 0.87(s， 9H)， 0.00(s， 6H)。

    [1056] b)(9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1057] 将四丁基氟化铵 ( 浓度为 1M 的四氢呋喃溶液， 2mL) 加至 (9-((4-(2-( 叔丁基二甲 基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 36， 步骤 a)(0.27g) 的四氢呋喃 (4mL) 溶液中。 1h 后， 真空蒸发溶液。 经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶三乙胺 20 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 1 其为胶状物。 收率为 0.18g。H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.81(s， 1H)， 6.91(s， 1H)， 6.77(s， 1H)， 4.00-3.90(m， 1H)， 3.87-3.80(m， 3H)， 3.79-3.72(m， 3H)， 3.71-3.60(m， 3H)， 3.36-3.25(m， 1H)， 2.82(t， J ＝ 6.6Hz， 3H)， 2.61-2.42(m， 3H)， 2.42-2.30(m， 1H)， 1.90-1.82(m， 2H)， 1.78-1.67(m， 1H)， 1.67-1.58(m， 1H)， 1.44-1.36(m， 6H)。

    [1059] c)2-(5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙醛

    [1058] 将戴斯 - 马丁高碘剂 (0.25g) 加至搅拌的 (9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实 施例 36， 步骤 b)(0.17g) 和三氟乙酸 (0.07mL) 的 DCM(5mL) 溶液中。1h 后， 加入乙酸乙酯 (30mL)， 接着加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 的混合物。充分 振摇反应混合物， 且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、 水和盐水洗涤。加入乙酸 (0.07mL)， 溶液用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发 ( 浴温为～ 30℃ )， 得到副标题化合物， 其 为胶状物。收率为 0.19g。直接使用。

    [1061] d)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1063] 将乙酸 (0.037mL) 加至搅拌的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.170g) 和 2-(5-((4-(2- 异丙基 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙醛 ( 实施例 36， 步骤 c)(0.170g) 的甲醇 (8mL) 溶液中。1min 后， 加入氰基硼氢化钠 (0.08g)。 3h 后， 将反应混合物真空浓缩至～ 2mL， 加入 THF(20mL)， 且溶液用盐水 (10mL) 和饱和碳酸 氢钠溶液 (2mL) 的混合物洗涤。有机溶液用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将固体溶解 TM 在甲醇中， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合 并含有纯产物的馏分， 且蒸发至干。用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 1 D6-DMSO)δ11.67(s， 1H)， 10.24(s， 1H)， 0.026g。m/z 658(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， 10.09-9.78(m， 1H)， 8.91-8.68(m， 2H)， 8.03(s， 1H)， 7.46(s， 1H)， 7.17(s， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.9Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.9Hz， 1H)， 6.51-6.46(m， 1H)， 4.93-4.85(m， 1H)， 4.67-4.51(m， 2H)， 3.85-2.88(m， 17H)， 2.14-2.05(m， 2H)， 1.82-1.58(m， 2H)， 1.34(d， J ＝ 6.8Hz， 6H)。

    [1065] 实施例 37

    [1066] (R)-5-(2-(3-((2， 2- 二氟 -4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三 氟乙酸盐 )

    [1064] a)4-((2- 溴 -2， 2- 二氟乙酰氨基 ) 甲基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸叔丁酯4-( 氨基甲基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 (1.702g) 的 DMF(20mL) 溶液在 20℃ 用 2- 溴 -2， 2- 二氟乙酸乙酯 (1.5g) 处理， 且将混合物在 20℃和氮气下搅拌 90 分钟。将混 合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸

    [1070] 发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 2.5g。m/z 385/387(M-H)-(APCI)。

    [1071] b)2， 2- 二氟 -3- 氧代 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [1072] 在 70℃和氮气下历时 15 分钟将 4-((2- 溴 -2， 2- 二氟乙酰氨基 ) 甲基 )-4- 羟基 哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 37， 步骤 a)(3.2g) 的 THF(40mL) 溶液滴加至搅拌的叔丁醇钾 ( 浓度为 1M 的叔丁醇溶液， 16.53mL) 和 THF(60mL) 的溶液中。加完后， 将混合物再加热 10 分钟， 然后冷却至室温。 将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 30％异己烷 / 乙酸乙酯 ) 纯化。将纯的 馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.55g。m/z 305(M-H)-(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.98(s， 1H)， 3.74(d， J ＝ 13.3Hz， 2H)， 3.43(d， J ＝ 2.8Hz， 2H)， 3.05(s， 2H)， 1.81-1.73(m， 2H)， 1.70-1.61(m， 2H)， 1.40(s， 9H)。

    [1074] c)2， 2- 二氟 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [1073] 将硼烷 - 二甲硫醚络合物 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 2.69mL) 滴加至 2， 2- 二氟 -3- 氧 代 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 37， 步骤 b)(0.55g) 的 THF(15mL) 溶液中。将反应混合物在 55℃和氮气下加热 25 分钟， 然后冷却至室温。混合物 通过小心滴加甲醇 (5mL) 来淬灭。然后加入 N1， N2- 二甲基乙 -1， 2- 二胺 (0.633g)， 且将 混合物在 70℃加热 40 分钟。减压除去溶剂， 且残余物通过快速硅胶色谱 ( 使用 4％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。 收率为 0.32g。直接使用。

    [1077] d)2， 2- 二氟 -4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [1076] 将 HATU(0.541g) 一次性加至在 0 ℃搅拌的 2， 2- 二氟 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 37， 步骤 c)(0.32g)、 5- 甲基噻吩 -2- 甲酸 (0.171g) 和三乙胺 (0.458mL) 的 DMF(20mL) 溶液中。 然后将混合物在 20℃搅拌 7 小时。 将混合物在乙 酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗 产物通过快速硅胶色谱 ( 洗脱梯度为 0.5 至 5％甲醇 / 二氯甲烷 ) 纯化。 将纯的馏分蒸发至 1 干， 得到副标题化合物。 收率为 0.4g。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.29(d， J ＝ 3.6Hz，

    [1079] 1H)， 6.84(dd， J ＝ 3.6， 1.0Hz， 1H)， 4.08(t， J ＝ 8.8Hz， 2H)， 3.79(s， 2H)， 3.65-3.58(m， 2H)， 3.21-3.11(m， 2H)， 1.81-1.73(m， 2H)， 1.66-1.56(m， 2H)， 1.39(s， 9H)+3H( 甲 基 ) 没 有 观 察 ( 在溶剂下 )。

    [1080] e)(2， 2- 二氟 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐

    [1081] 在 20 ℃将三氟乙酸 (5mL) 加至 2， 2- 二氟 -4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 37， 步骤 d)(0.4g) 的二氯甲烷 (20mL) 溶液中。将溶液在 20℃静置 25 分钟。加入甲苯 (40mL)， 且减压除去溶剂。将残余 物与乙腈一起蒸发 2 次。所得胶状物用乙醚研磨， 得到副标题化合物。收率为 0.39g。m/z 1 317(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ8.53(s， 2H)， 7.31(d， J ＝ 3.8Hz， 1H)， 6.88-6.85(m， 1H)， 4.14(t， J ＝ 8.8Hz， 2H)， 3.84(s， 2H)， 3.27-3.21(m， 2H)， 3.13-3.04(m， 2H)， 2.05-1.98(m， 2H)， 1.91-1.81(m， 2H)。甲基质子没有观察 ( 在溶剂下 )。

    [1083] f)(2， 2- 二氟 -9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮

    [1082] 将 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 6， 步骤 a)(0.095g) 加至 (2， 2- 二氟 -1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 37， 步骤 e)(0.19g) 和三乙胺 (0.185mL) 的乙腈 (10mL) 溶液中， 且将反应混合物在 20℃搅 拌 3 小时。减压蒸发溶剂， 将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过 滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2.5％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三 乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.188g。m/z 451(M+H)+(APCI)。

    [1086] g)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((2， 2- 二氟 -4-(5- 甲基噻 吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙 基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮

    [1085] (2， 2- 二 氟 -9-(3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 37， 步骤 f)(0.188g) 的二氯甲烷 (10mL) 溶 液用三氟乙酸 (0.032mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.248g) 处理， 且将所得混合物 在 20℃搅拌 1 小时。 反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (10mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和乙酸乙酯 (10mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层 用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 用乙酸 (0.024mL) 处理， 且减压蒸发溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (2mL) 中， 且加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.14g) 和乙酸 (0.024mL) 的甲醇 (10mL) 用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.133g) 处理， 且在室温搅拌 18 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 小时。减压除去甲醇， 将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配， 有机层用硫酸 钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 1 ％‘880’ 氨水和 8 ％ 甲醇 / 二氯甲烷 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.114g。m/z 767(M+H)+(APCI)。

    [1089] h)(R)-5-(2-(3-((2， 2- 二氟 -4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1088] 将三乙胺三氢氟酸盐 (0.03mL) 的甲醇 (1mL) 溶液加至 (R)-5-(1-( 叔丁基二甲基 甲硅烷基氧基 )-2-(3-((2， 2- 二氟 -4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 37， 步骤 g)(0.114g) 的 THF(4mL) 溶液中， 且将所得溶液在 20℃静置 18 小时。减压除去溶剂， TM 且粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含 有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.080g。m/z 653(M+H)+(APCI)。 1 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ8.16(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 7.46-7.26(m， 5H)， 7.14(d， J＝ 8.2Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.86-6.83(m， 1H)， 6.57-6.52(m， 1H)， 5.37-5.31(m， 1H)， 4.25(s， 2H)， 4.13(t， J ＝ 8.8Hz， 2H)， 3.82(s， 2H)， 3.30-2.99(m， 10H)， 2.10-1.88(m，

    [1091] 4H)。6 个可交换的质子没有观察。甲基质子没有观察 ( 在溶剂下 )。

    [1092] 实施例 38

    [1093] (R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(2-(3-((4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1094] a)(3-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 ) 苯基 ) 甲醇将碳酸铯 (7.87g) 加至 3-( 羟基甲基 ) 苯酚 (2.5g) 和 2- 溴 -1， 1- 二乙氧基乙烷 (3.97g) 的 DMF(40mL) 溶液中， 且将所得混合物在 90℃加热 18 小时。 将混合物冷却至室温， 且在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发 溶剂。 粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 30％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。 将纯的馏分 1 蒸发至干， 得到副标题化合物。 收率为 1.9g。H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.21(t， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 6.91-6.86(m， 2H)， 6.82-6.78(m， 1H)， 5.14(t， J ＝ 5.9Hz， 1H)， 4.79(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 4.46(d， J ＝ 5.9Hz， 2H)， 3.93(d， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.71-3.63(m， 2H)， 3.61-3.52(m， 2H)， 1.14(t， J ＝ 7.0Hz， 6H)。

    [1098] b)(9-(3-(2， 2- 二 乙 氧 基 乙 氧 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮

    [1097] 将甲磺酰氯 (0.1mL) 滴加至在 0℃搅拌的 (3-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 ) 苯基 ) 甲醇 ( 实施例 38， 步骤 a)(0.307g) 和三乙胺 (0.178mL) 的二氯甲烷 (30mL) 溶液中。 将所得混合 物在 20℃搅拌 1 小时。混合物用水洗涤， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。将 残余物溶解在乙腈 (30mL) 中， 且用三乙胺 (1mL) 处理， 接着用 (5- 甲基噻吩 -2- 基 )(1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 9， 步骤 b)(0.42g) 处 理。将混合物在 20℃搅拌 2 小时。减压除去溶剂， 将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配，

    [1100] 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 3％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。 收率为 0.45g。m/z 503(M+H)+(APCI)。

    [1101] c)2-(3-((4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙醛

    [1102] 将 (9-(3-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 38， 步骤 b)(0.45g) 在乙酸 (25mL) 和水 (25mL) 的混合物中的溶液在 65℃和氮气下加热 16 小时。减压除去大部分溶剂， 且将残余 物在乙酸乙酯和过量的饱和碳酸氢钠溶液之间分配。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 加入乙酸 (0.051mL)， 且减压除去溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.38g。直接使用。

    [1104] d)(R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(2-(3-((4-(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1105] 将 氰 基 硼 氢 化 钠 (0.084g) 加 至 搅 拌 的 20 ℃ 的 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.303g)、 2-(3-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 苯氧基 ) 乙醛 ( 实施例 38， 步骤 c)(0.38g) 和乙酸 (0.051mL) 的甲醇 (12mL) 溶液中。 将反应混合物在 20℃搅拌 5 小时。将反应混合物减压蒸发至体积为 3mL， 然后在乙酸乙酯 (20mL) 和水 (20mL) 之间分配。水层用饱和碳酸氢钠溶液 (3mL) 处理。然后含水混合物用 固体氯化钠处理， 得到饱和溶液， 所述饱和溶液用 THF(20mL) 萃取。THF 层用硫酸钠干燥， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.1g。m/ 1 z 639(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.28(s， 1H)， 7.43-7.36(m， 1H)， 7.21(s， 1H)， 7.14(s， 2H)， 7.07(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.95(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.82-6.76(m， 2H)， 5.00-4.91(m， 1H)， 4.36-4.28(m， 4H)， 3.73-3.69(m， 2H)， 3.68-3.63(m， 2H)， 3.54(s， 2H)， 3.45(s， 2H)， 3.25-3.04(m， 6H)， 2.46(s， 3H)， 2.09-1.98(m， 2H)， 1.87-1.72(m， 2H)。 5个 可交换的质子没有观察。

    [1107] 实施例 39

    [1106] 7-((1R)-2-(2- 氟 -2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1109] a)2-(3- 溴苯基 )-2- 氟乙酸乙酯在氮气气氛下将 2-(3- 溴苯基 ) 乙酸乙酯 (1.00g) 和叔丁基二甲基氯甲硅烷 (0.749g) 的 THF(4mL) 溶液冷却至 -78℃， 且用历时 10 分钟滴加的二 ( 三甲基甲硅烷基 ) 氨基锂 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 4.6mL) 处理。将溶液在 -78℃搅拌 5 分钟， 然后从冷却浴 中取出， 且历时 30 分钟温热至室温。真空浓缩溶液， 将残余物悬浮在异己烷中， 且过滤以除 去所沉淀的氯化锂。真空浓缩滤液， 得到油状物 (1.49g)， 将所述油状物溶解在乙腈 (2mL) TM 中， 且在室温滴加至搅拌的 Selectfluor 氟化剂 (1.93g) 的乙腈 (17mL) 悬浮液中， 用乙腈 (3×1mL) 完成加入。 将所得混合物搅拌 1.5 小时， 然后浓缩到硅胶上， 且通过快速硅胶色谱 ( 用 10％乙醚 / 异己烷洗脱 ) 纯化， 得到污染有原料的副标题化合物， 其为无色油状物。收 1 率为 0.884g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.63(s， 1H)， 7.53(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 7.28(t， J＝ 8.0Hz， 2H)， 5.73(d， J ＝ 47.7Hz， 1H)， 4.33-4.19(m， 2H)， 1.28(t， J ＝ 7.1Hz， 3H)。

    [1113] b)2-(3- 溴苯基 )-2- 氟乙醇

    [1112] 历时 7 分钟将氢化锂铝 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 13.0mL) 逐份加至在冰 - 水中预 冷却的 2-(3- 溴苯基 )-2- 氟乙酸乙酯 ( 实施例 39， 步骤 a)(2.94g) 的 THF(35mL) 溶液中。 将所得混合物在冰 - 水中搅拌 30 分钟， 然后通过小心加入甲醇 (5mL)( 历时 30 分钟逐份加 入 ) 来淬灭。将混合物倒入 2M HCl 水溶液中， 且用乙酸乙酯萃取 3 次。合并的有机萃取物 用盐水洗涤， 用无水硫酸镁干燥， 且通过快速硅胶色谱 ( 用 25％乙醚 / 异己烷洗脱 ) 纯化， 1 得到副标题化合物， 其为无色油状物。 收率为 1.39g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.53-7.46(m， 2H)， 7.30-7.24(m， 2H)， 5.53(ddd， J ＝ 48.2， 7.2， 3.3Hz， 1H)， 3.97-3.77(m， 2H)， 1.95(dd， J ＝ 8.2， 5.1Hz， 1H)。

    [1115] c)(2-(3- 溴苯基 )-2- 氟乙氧基 )( 叔丁基 ) 二甲基甲硅烷将 2-(3- 溴 苯 基 )-2- 氟 乙 醇 ( 实 施 例 39， 步 骤 b)(1.38g) 和 咪 唑 (1.29g) 的 DMF(14mL) 溶液在冰 - 水中冷却， 用叔丁基二甲基氯甲硅烷 (1.049g) 处理， 然后从冷却浴中 取出， 且在室温搅拌过夜。将溶液倒入水中， 且用乙醚萃取 2 次。合并的有机萃取物用水洗 涤 2 次， 用盐水洗涤 1 次， 然后用无水硫酸镁干燥， 且通过快速硅胶色谱 ( 用 10％二氯甲烷 / 异己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。收率为 1.94g。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.51-7.49(m， 1H)， 7.46(dt， J ＝ 7.0， 2.0Hz， 1H)， 7.28-7.21(m， 2H)， 5.43(ddd， J＝ 47.5， 6.5， 3.8Hz， 1H)， 3.95-3.76(m， 2H)， 0.88(s， 9H)， 0.03(d， J ＝ 4.6Hz， 6H)。

    [1119] d)3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-1- 氟乙基 ) 苯甲醛

    [1118] 在氮气气氛下将 (2-(3- 溴苯基 )-2- 氟乙氧基 )( 叔丁基 ) 二甲基甲硅烷 ( 实施 例 39， 步骤 c)(1.8g) 的 THF(36mL) 溶液冷却至 -78℃， 且用历时 5 分钟滴加的丁基锂 ( 浓 度为 1.8M 的己烷溶液， 3.3mL) 处理。将溶液在 -78℃搅拌 30 分钟， 用 N， N- 二甲基甲酰胺 (0.63mL) 处理， 在 -78℃再搅拌 30 分钟， 然后从冷却浴中取出， 且历时 140 分钟温热至室 温。 溶液通过加入 10％氯化铵水溶液来淬灭， 且所得混合物用乙醚萃取 2 次。 合并的有机相 用盐水洗涤， 用无水硫酸镁干燥， 且通过快速硅胶色谱 ( 用 50％二氯甲烷 / 异己烷洗脱 ) 纯 1 化， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。 收率为 1.26g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ10.04(s， 1H)， 7.88-7.84(m， 2H)， 7.63(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 7.56(t， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 5.55(ddd， J＝ 47.3， 6.2， 4.0Hz， 1H)， 4.00-3.83(m， 2H)， 0.87(s， 9H)， 0.02(d， J ＝ 3.9Hz， 6H)。

    [1122] e)(9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-1- 氟乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1121] 3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-1- 氟乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 39， 步骤 d) (0.329g) 的 MeOH(4mL) 溶液用乙酸 (0.055mL) 处理， 接着用 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.408g) 处 理， 且在室温搅拌 5 分钟。将溶液在冰 - 水浴中冷却， 用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.309g) 处 理， 在冰 - 水中搅拌 135 分钟， 然后从冷却浴中取出， 且在室温再搅拌 65 分钟。将溶液在 冰 - 水中冷却下来， 再用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.310g) 处理， 且在冰 - 水中搅拌 75 分钟。 再加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.312g)， 且将混合物搅拌 70 分钟。再加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.619g)， 且将混合物搅拌过夜， 使冷却浴缓慢失效。第二天， 再加入三乙酰氧基硼氢 化钠 (0.307g)， 且将混合物搅拌 70 分钟。再加入乙酸 (0.055mL)， 且将混合物搅拌 80 分 钟。将混合物温热至 40℃， 且在该温度搅拌 25 分钟， 然后将其真空浓缩到快速硅胶上。残 余物通过快速硅胶色谱 ( 用 5％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为粘性 1 白色固体。收率为 0.344g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.93(s， 1H)， 7.57-7.11(m， 4H)， 5.64-5.43(m， 1H)， 4.00-3.81(m， 2H)， 3.77-3.55(m， 6H)， 3.31( 七 重 峰， J ＝ 6.8Hz， 1H)， 3.13-2.88(m， 2H)， 2.57-2.35(m， 4H)， 2.16-1.94(m， 2H)， 1.74-1.54(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)， 0.84(s， 9H)， 0.01(s， 6H)。

    [1125] f)(9-(3-(1- 氟 -2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1126] (9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-1- 氟乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 39， 步骤 e)(0.33g) 的 THF(5mL) 溶液用四丁基氟化铵 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 0.69mL) 处理， 且在室温搅拌 50 分 钟。再加入四丁基氟化铵 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 0.69mL)， 且将混合物再搅拌 80 分钟。然 后将溶液浓缩到快速硅胶上， 且残余物通过快速硅胶色谱 ( 用 7.5％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为白色泡沫状物。收率为 0.221g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.91(d， J ＝ 1.5Hz， 1H)， 7.36-7.19(m， 4H)， 5.45(ddd， J ＝ 48.5， 6.6， 3.7Hz， 1H)， 4.86-4.76(m， 1H)， 3.80-3.58(m， 9H)， 3.58-3.44(m， 1H)， 3.31( 七 重 峰， J ＝ 6.8Hz， 1H)， 2.46-2.28(m， 4H)， 1.79-1.67(m， 2H)， 1.66-1.50(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1128] g)2- 氟 -2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛

    [1127] 将 (9-(3-(1- 氟 -2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 ) 甲 酮 ( 实 施 例 39， 步 骤 f)(0.213g) 的 DCM(5mL) 溶 液在冰 - 水中冷却， 用三氟乙酸 (0.053mL) 处理， 且搅拌 5 分钟。加入戴斯 - 马丁高碘 剂 (0.296g)， 从冷却浴中取出混合物， 且在室温搅拌 20 分钟。再加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.295g)， 且将混合物在室温再搅拌 30 分钟。然后反应混合物通过加入饱和硫代硫酸钠 溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (5mL) 来淬灭， 且将所得两相混合物搅拌 10 分钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 且合并的有机萃取物用盐水洗涤。加入乙酸 (0.1mL)， 然后经酸化的萃取物用无水硫酸镁干燥， 且真空浓缩， 得到粗副标题产物， 其为灰 白色泡沫状物。收率为 0.240g。m/z 460(M+H)+(APCI)。

    [1130] h)7-((1R)-2-(2- 氟 -2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1132] (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO 2007027134， 实施例 1 步骤 d)(0.182g) 的甲醇 (3mL) 溶液用乙酸 (0.039mL) 处理， 且搅拌 5 分钟。然后加入 2- 氟 -2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 39， 步骤 g)(0.239g) 的甲醇 (4mL) 溶液， 且将所得混合物在室温搅拌 5 分钟， 然后在冰 - 水中冷却， 且用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.146g) 处理。将混合物在冰中搅拌 25 分钟， 然后再加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.444g)。 然后将混合物搅拌过周末， 且将其缓慢温热至室温。下周一真空浓缩混合物。将残余物溶 梯度为 15-50％乙 解在甲醇 (3mL) 和水 (1.5mL) 的混合物中， 且经制备性 HPLC(SunfireTM， 腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。真空浓缩含有产物的馏分， 且与乙腈共蒸发 3 次， 得到无色残 余物。残余物用乙醚研磨， 得到固体， 过滤分离所述固体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 1 得到标题产物， 其为白色固体 (0.03g)。m/z670(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.94(s， 1H)， 7.60-7.45(m， 4H)， 6.93(dd， J ＝ 8.2， 2.3Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 5.97(dt， J ＝ 49.2， 9.7Hz， 1H)， 4.99-4.89(m， 1H)， 4.36-4.17(m， 2H)， 3.75-3.62(m， 6H)， 3.60-2.90(m， 9H)， 2.08-1.92(m， 2H)， 1.81-1.64(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。6 个 可交换的质子没有观察。

    [1134] 实施例 40

    [1135] (R)-7-(2-(4- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1133] a)2- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛在 -78 ℃将 2， 2， 6， 6- 四甲基哌啶 (3.0g) 滴加至搅拌的正丁基锂 ( 浓度为 1.6M 的己烷溶液， 13mL) 的无水四氢呋喃 (12mL) 溶液中。10min 后， 滴加 2-(4- 氟苯基 ) 乙醇 (1.00g)。将反应混合物在 -78℃搅拌 5h， 然后历时 5min 滴加无水 DMF(3.18mL)。移开冷却 浴， 且将反应混合物温热至室温过夜。加入乙酸乙酯和 HCl 水溶液 (2M)， 且分离溶液。乙酸 乙酯层用水和盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶异 己烷 1 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为油状物。收率为 0.43g。1H NMR(300MHz， CDCl3)δ10.35(s， 1H)， 7.73(dd， J ＝ 6.4 和 2.0Hz， 1H)， 7.52-7.46(m， 1H)， 7.12(dd， J＝ 10.0 和 8.4Hz， 1H)， 3.88(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 2.90(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)。1 个可交换的质子没 有观察。

    [1140] b)(9-(2- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1139] 将三乙酰氧基硼氢化钠 (0.339g) 加至搅拌的 2- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛 ( 实 施例 40， 步骤 a)(0.135g)、 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.339g) 和乙酸 (0.046mL) 的 NMP(7mL) 溶液中。16h 后， 再加入 2- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 40， 步骤 a)(0.135g)， 接着加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.339g)。2h 后， 反应混合物用乙酸乙酯 (60mL) 稀释， 且 用饱和碳酸氢钠溶液 (30mL) 洗涤。水层用乙酸乙酯萃取。真空蒸发合并的乙酸乙酯溶 液。经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶三乙胺 10 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶 状物， 所述胶状物含有 NMP。NMP 如下除去 ： 将胶状物加载至 10g SCX 柱， 首先用甲醇洗 脱， 然后用 20％‘880’ 氨水 / 甲醇洗脱， 收集副标题化合物。将溶液蒸发至干， 且将所得 胶状物加载至硅胶柱， 用乙酸乙酯∶三乙胺 10 ∶ 1 洗脱， 得到副标题化合物， 其为胶状 1 物。 收 率 为 0.31g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.90(s， 1H)， 7.19(d， J ＝ 7.3Hz， 1H)， 7.13-7.07(m， 1H)， 6.97(t， J ＝ 9.3Hz， 1H)， 4.28-4.24(m， 1H)， 3.71-3.55(m， 6H)， 3.46(s， 2H)， 3.35-3.26(m， 1H)， 3.00(s， 2H)， 2.70(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 2.45-2.26(m， 4H)， 1.74-1.65(m， 2H)， 1.59-1.49(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 7.0Hz， 6H)。

    [1142] c)2-(4- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛

    [1143] 将 戴 斯 - 马 丁 高 碘 剂 (0.284g) 加 至 搅 拌 的 (9-(2- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施 例 40， 步骤 b)(0.21g) 和三氟乙酸 (0.046mL) 的 DCM(5mL) 溶液中。1h 后， 加入乙酸乙酯 (30mL)， 接着加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 的混合物。充分 振摇反应混合物， 且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、 水和盐水洗涤。加入乙酸 (0.07mL)， 溶液用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发 ( 浴温为～ 30℃ )， 得到副标题化合物， 其 为胶状物。收率为 0.2g。直接使用。m/z 460(M+H)+(APCI)。

    [1146] d)(R)-7-(2-(4- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1145] 将乙酸 (0.037mL) 加至搅拌的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.17g) 和 2-(4- 氟 -3-((4-(2- 异 丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 40， 步骤 c)(0.20g) 的甲醇 (8mL) 溶液中。1min 后， 加入氰基硼氢化钠 (0.10g)。 3h 后， 将反应混合物真空浓缩至～ 2mL， 加入 THF(20mL)， 且溶液用盐水 (10mL) 和饱和碳酸 氢钠溶液 (2mL) 的混合物洗涤。 水层用乙酸乙酯萃取。 合并 THF 溶液和乙酸乙酯溶液， 且真 TM 空蒸发。将胶状物溶解在甲醇中， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-35％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有纯产物的馏分， 且蒸发至干。用乙醚研磨， 得到标题化合物， 1 其为白色固体。收率为 0.126g。m/z 670(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ ) δ11.33-11.22(m， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.46-7.36(m， 2H)， 7.25(t， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 4.93-4.88(m， 1H)， 4.30-4.20(m， 2H)， 3.70(s， 4H)， 3.66(s， 2H)， 3.35-2.93(m， 11H)， 2.05-1.95(m， 2H)， 1.83-1.67(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 7.0Hz， 6H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [1148] 实施例 41

    [1150] (R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 苯 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮

    [1149] 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1151] a)2-(3-( 溴甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙酸将 过 氧 苯 甲 酰 (0.5g) 加 至 搅 拌 的 2-(3- 氟 -5- 甲 基 苯 基 ) 乙 酸 (5.19g) 和 NBS(6.04g) 在二氯甲烷 (100mL) 中的混合物中。将所得混合物加热回流 5 小时。将反应 混合物冷却至室温， 然后用水洗涤 2 次， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产 物通过快速硅胶色谱 ( 使用 1％乙酸和 17％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏 分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 4.3g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.22-7.17(m，

    [1154] 2H)， 7.09-7.05(m， 1H)， 4.68(s， 2H)， 3.61(s， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [1155] b)2-(3-( 溴甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙醇

    [1156] 在 0 ℃历时 10 分钟将硼烷 - 二甲硫醚络合物 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 17.4mL) 滴加至 2-(3-( 溴甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙酸 ( 实施例 41， 步骤 a)(4.3g) 的 THF(60mL) 溶液 中。将混合物在 0℃搅拌 10 分钟， 然后在 20℃搅拌 1 小时。反应混合物通过滴加甲醇来淬 灭， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 30％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 3.7g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO) δ7.15(s， 1H)， 7.14-7.09(m， 1H)， 7.05-6.99(m， 1H)， 4.66(s， 2H)， 3.61(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.72(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [1158] c)2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮

    [1157] 2-(3-( 溴 甲 基 )-5- 氟 苯 基 ) 乙 醇 ( 实 施 例 41， 步 骤 b)(3.6g) 和 2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮三氟乙酸盐 ( 实施例 12， 步骤 d) (5.66g) 的乙腈 (80mL) 溶液用三乙胺 (5.38mL) 处理， 且将混合物在 20℃搅拌 20 小时。 减压 蒸发溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除 去溶剂。 粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2.5％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶 剂 ) 纯化。 将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。 收率为 4.9g。 m/z 405(M+H)+(APCI)。

    [1161] d)(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 苯基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1162] 将 2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 41， 步骤 c)(0.21g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至氨 (35％水 溶液， 15mL) 中， 且将反应混合物在 20℃搅拌 1 小时。将混合物减压蒸发至干， 且残余物与 乙腈共沸 3 次。将残余物溶解在 DMF(7mL) 中， 且用 2- 苯基噻唑 -4- 甲酸 (0.117g) 处理， 接着用三乙胺 (0.29mL) 处理， 然后用 HATU(0.257g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 1 小 时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.27g。m/z 496(M+H)+(APCI)。

    [1164] e)(R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 苯基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1163] (9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 苯基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 41， 步骤 d)(0.25g) 的二氯甲烷 (20mL) 溶液用三氟乙 酸 (0.039mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.278g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙 酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳 酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.029mL) 加至该溶液中， 然后减压除去 溶剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.199g) 和乙酸 (0.029mL) 的甲醇 (15mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.063g) 处理。移开

    [1166] 冷却浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。 混合物用盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合 1 物。 收率为 0.19g。 m/z 704(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.28(s， 1H)， 8.14(s， 1H)， 7.96-7.91(m， 2H)， 7.54-7.49(m， 3H)， 7.28-7.18(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.94-4.87(m， 1H)， 4.28(s， 2H)， 3.83-3.66(m， 6H)， 3.26(t， J ＝ 7.9Hz， 2H)， 3.21-2.99(m， 8H)， 2.10-2.00(m， 2H)， 1.84-1.69(m， 2H)。5 个可交换的质子 没有观察。

    [1167] 实施例 42

    [1168] (R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1169] a)(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮将 2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 41， 步骤 d)(0.21g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至氨 (35％水 溶液， 15mL) 中， 且将反应混合物在 20℃搅拌 1 小时。将混合物减压蒸发至干， 且残余物与 乙腈共沸 3 次。将残余物溶解在 DMF(7mL) 中， 用 2- 异丙基噻唑 -4- 甲酸 (0.098g) 处理， 接着用三乙胺 (0.290mL) 处理， 然后用 HATU(0.257g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 1 小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.25g。m/z 462(M+H)+(APCI)。

    [1173] b)(R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1172] (9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 42， 步骤 a)(0.23g) 的 DCM(20mL) 溶液用三氟乙酸 (0.038mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.275g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.029mL) 加至该溶液中， 然后减压除去溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.196g) 和乙酸 (0.029mL) 的甲醇 (15mL) 溶液中。 将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.063g) 处理。 移开冷却浴， 且 将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合物用饱 和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减 TM 梯度为 10-40％乙 压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率 1 为 0.15g。m/z 670(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.28-7.16(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.94-4.88(m， 1H)， 4.27(s， 2H)， 3.70(s， 4H)， 3.66(s， 2H)， 3.32-3.23(m， 3H)， 3.17-2.99(m， 8H)， 2.07-1.96(m， 2H)， 1.81-1.69(m， 2H)， 1.35(d， 6H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [1176] 实施例 43

    [1177] (R)-7-(2-(2-(5-((4-(2- 叔 丁 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1175] a)1-(9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙酮将 2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮三氟乙酸 盐 ( 实施例 12， 步骤 d)(1.084g) 加至搅拌的 4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛和 3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛的 4 ∶ 1 混合物 ( 实施例 27， 步骤 b)(1.0g) 和 AcOH(0.16mL) 的 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (15mL) 溶液中。5min 后， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 (1.57g)。16h 后， 加入水， 且混合物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙 酯层用水洗涤 3 次， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺 1 ∶ 20 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 分离到两种异构产物， 且得到副标题化合物， 其为油状物。收率为 1.04g。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ6.87(s， 1H)， 6.75(d， J ＝ 3.7Hz， 1H)， 3.79-3.72(m， 4H)， 3.65(s， 3H)， 3.59-3.55(m， 1H)， 3.52(s， 1H)， 3.37(s， 1H)， 2.76(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.68-2.61(m， 1H)， 2.57-2.50(m， 1H)， 2.46-2.38(m， 1H)， 2.31(t， J ＝ 11.5Hz， 1H)， 1.89-1.75(m， 2H)， 1.68-1.52(m， 2H)， 0.87(s， 9H)， 0.00(s， 6H)。

    [1181] b)9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳将 ‘880’ 氨水 (1.5mL) 加至搅拌的 1-(9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙 酮 ( 实施例 43， 步骤 a)(1.0g) 的甲醇 (5mL) 溶液中。16h 后， 将反应混合物蒸发至干。加 入乙腈， 将溶液真空蒸发至干， 且重复该操作 3 次， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率 1 为 0.78g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ6.94(s， 1H)， 6.87(s， 1H)， 3.91-3.85(m， 2H)， 3.78(t， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 3.72-3.68(m， 2H)， 2.93-2.82(m， 4H)， 2.80-2.73(m， 4H)， 2.62-2.53(m， 2H)， 2.11-2.01(m， 2H)， 1.76-1.64(m， 2H)， 0.87(s， 9H)， 0.00(s， 6H)+1 个 可 交 换 的 质 子 没 有 观 察。

    [1185] c)(9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 叔丁基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1184] 将 HATU(0.306g) 加至搅拌的 2- 叔丁基噻唑 -4- 甲酸 (0.16g)、 9-((4-(2-( 叔丁基 二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 ( 实 施例 43， 步骤 b)(0.300g) 和三乙胺 (0.41mL) 的 DMF(3mL) 溶液中。 1h 后， 将反应混合物在水

    [1187] 和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层用水和盐水洗涤 2 次， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发。 经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺 12 ∶ 90 ∶ 10 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶状物。 收率为 0.3g。 1H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.82(s， 1H)， 6.85(s， 1H)， 6.74(s， 1H)， 4.01-3.92(m， 1H)， 3.92-3.84(m， 1H)， 3.82-3.71(m， 7H)， 3.69-3.58(m， 3H)， 2.79-2.71(m， 2H)， 2.60-2.28(m， 4H)， 1.93-1.79(m， 2H)， 1.44(s， 9H)， 0.87(s， 9H)， -0.01(s， 6H)。

    [1188] d)(2- 叔丁基噻唑 -4- 基 )(9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [1189] 将 TBAF(1.5mL 浓度为 1M 的 THF 溶液 ) 加至搅拌的 (9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲 硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 叔丁基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 43， 步骤 c)(0.300g) 的 THF(3mL) 溶液中。1h 后， 将 反应混合物蒸发成胶状物。经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶三乙胺 20 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得到副 D6-DMSO)δ8.00(s， 1H)， 7.01(s， 标题化合物， 其为胶状物。收率为 0.22g。1H NMR(400MHz， 1H)， 6.84-6.73(m， 1H)， 4.59(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.77-3.48(m， 10H)， 2.64(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 2.54-2.16(m， 4H)， 1.74-1.63(m， 2H)， 1.58-1.43(m， 2H)， 1.41(s， 9H)。

    [1191] e)2-(5-((4-(2- 叔丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙醛

    [1190] 将戴斯 - 马丁高碘剂 (0.316g) 加至搅拌的 (2- 叔丁基噻唑 -4- 基 )(9-((4-(2- 羟 基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施 例 43， 步骤 d)(0.23g) 和 TFA(0.05mL) 的 DCM(5mL) 溶液中。40min 后， 反应混合物用饱和 硫代硫酸钠水溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理。混合物用 乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 加入乙酸 (0.08mL)， 然后溶液 用硫酸钠干燥， 过滤， 然后真空蒸发， 得到副标题化合物。收率为 0.23g。直接使用。m/z 462(M+H)+(APCI)。

    [1194] f)(R)-7-(2-(2-(5-((4-(2- 叔丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻

    [1193] 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1195] 将乙酸 (0.039mL) 加至搅拌的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.180g) 和 2-(5-((4-(2- 叔丁 基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙 醛 ( 实 施 例 43， 步 骤 e)(0.230g) 的 MeOH(8mL) 溶 液 中。1min 后， 加入氰基硼氢化钠 TM (0.125g)。3h 后， 对反应混合物进行过滤， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-35％乙 腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有纯产物的馏分， 且蒸发至干。用乙醚研磨， 得到标题 1 化合物， 其为白色固体。收率为 0.14g。m/z 672(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO) δ11.67(s， 1H)， 10.24(s， 1H)， 8.91-8.71(m， 2H)， 8.04(s， 1H)， 7.46(s， 1H)， 7.18(s， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.54-6.44(m， 1H)， 4.93-4.86(m， 1H)， 4.68-4.51(m， 2H)， 3.82-3.47(m， 8H)， 3.32-3.15(m， 4H)， 3.12-2.87(m， 5H)， 2.15-2.07(m， 2H)， 1.83-1.54(m， 2H)， 1.39(s， 9H)。

    [1197] 实施例 44

    [1198] (R)-5-(2-(3-((2， 2- 二氟 -4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1196] a)2， 2- 二氟 -4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [1202] 在 20 ℃ 将 HATU(1.184g) 加 至 2， 2- 二 氟 -1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 37， 步骤 c)(0.7g)、 2- 异丙基噻唑 -4- 甲酸 (0.41g) 和三乙胺 (1mL) 的 DMF(12mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 1 小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之 间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 30％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题 1 化合物。收率为 0.78g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ8.11(s， 1H)， 4.29-4.20(m， 2H)， 4.03-3.98(m， 2H)， 3.58-3.51(m， 2H)， 3.37-3.30(m， 1H)， 3.26-3.17(m， 2H)， 1.81-1.74(m， 2H)， 1.66-1.57(m， 2H)， 1.40(s， 9H)， 1.35(d， 6H)。

    [1203] b)(2， 2- 二 氟 -1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐

    [1204] 2， 2- 二氟 -4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 44， 步骤 a)(0.78g) 的 DCM(20mL) 溶液用三氟乙酸 (5mL) 处 理， 且将反应混合物在 20℃静置 30 分钟。加入甲苯 (40mL)， 且减压蒸发溶剂。残余物与乙 腈共沸 2 次， 得到副标题化合物。收率为 0.8g。m/z 346(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz， 90 ℃ )δ8.57(s， 2H)， 8.16(s， 1H)， 4.39-4.22(m， 2H)， 4.04(s， 2H)， 3.39-3.28(m， D6-DMSO， 1H)， 3.27-3.19(m， 2H)， 3.16-3.04(m， 2H)， 2.07-1.97(m， 2H)， 1.93-1.80(m， 2H)， 1.37(d， 6H)。

    [1206] c)(2， 2- 二氟 -9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1205] 将 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 6， 步骤 a)(0.21g) 加至 (2， 2- 二氟 -1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施 例 44， 步骤 b)(0.40g) 和三乙胺 (0.37mL) 在乙腈 (15mL) 中的混合物中。将反应混合物在 20℃搅拌 2 小时。减压蒸发溶剂， 将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用硫酸钠干 燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2.5％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.40g。 m/z 480(M+H)+(APCI)。

    [1209] d)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((2， 2- 二氟 -4-(2- 异丙基 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙 基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮

    [1208] (2， 2- 二 氟 -9-(3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 44， 步骤 c)(0.38g) 的 DCM(20mL) 溶液 用三氟乙酸 (0.061mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.437g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层 用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.045mL) 加至该溶液中， 然后 减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基 甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.345g) 的甲醇 (15mL) 且一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.252g)。将反应混合 溶液中。将混合物冷却至 0℃， 物在 20℃搅拌 3 小时。 减压除去溶剂， 将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 10％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％“880” 氨水 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化 合物。收率为 0.32g。m/z 796(M+H)+(APCI)。

    [1212] e)(R)-5-(2-(3-((2， 2- 二氟 -4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1211] 将三乙胺三氢氟酸盐 (0.082mL) 的甲醇 (2mL) 溶液加至 (R)-5-(1-( 叔丁基二甲 基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((2， 2- 二氟 -4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 44， 步骤 d)(0.32g) 的 THF(8mL) 溶液中， 且将反应混合物在 20℃静置 18 小时。减压除去溶 TM 剂， 且粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将 含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。 收率为 0.21g。 m/z 682(M+H)+(APCI)。

    [1214] 1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.18-8.11(m， 2H)， 7.44-7.31(m， 4H)， 7.14(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 6.55(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.37-5.31(m， 1H)， 4.31(s， 2H)， 4.23(s， 2H)， 4.01(s， 2H)， 3.40-2.98(m， 11H)， 2.08-1.99(m， 2H)， 1.98-1.88(m， 2H)，1.36(d， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1215] 实施例 45

    [1216] (R)-7-(2-(2， 6- 二 氟 -3-((4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1217] a)2-(2， 6- 二氟苯基 ) 乙醇在 0 ℃将硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 26mL) 小心加至 2-(2， 6- 二氟苯基 ) 乙酸 (3g) 的 THF(50mL) 溶液中。然后将反应混合物温热至 RT， 且搅拌 3h。 将反应混合物在冰浴中冷却， 且用甲醇 (10mL) 小心淬灭。 蒸发溶剂， 且残余物经硅胶色 谱 ( 用 9 ∶ 1 至 4 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 1 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。 收率为 2.2g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.20-7.13(m， 1H)， 6.94-6.82(m， 2H)， 3.85(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.97(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)。1 个可交换的质 子没有观察。

    [1221] b)2， 4- 二氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛

    [1220] 在 -70℃将 2， 2， 6， 6- 四甲基哌啶 (5mL) 加至丁基锂 ( 浓度为 1.6M 的己烷溶液， 19mL) 的 THF(25mL) 溶液中。滴加 2-(2， 6- 二氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 45， 步骤 a)(1.6g) 的 THF(25mL) 溶液， 且将所得混合物搅拌 2h。然后加入 DMF(3.9mL)， 且将混合物在 -70℃搅拌 1h。然后将混合物温热至 RT， 且搅拌 70h。反应混合物用 HCl 溶液 (2M， 50mL) 淬灭， 用乙 酸乙酯 (100mL) 稀释， 且分离各层。水相用乙酸乙酯 (2×50mL) 萃取。合并的有机层用盐 水 (100mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 至 2 ∶ 1 异 己烷∶乙醚梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发。将所得油状物溶解在乙酸乙 酯 (50mL) 中， 用 HCl 溶液 (2M， 30mL) 和盐水 (30mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发， 得 1 到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 1.1g。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ10.28(s， 1H)， 7.84-7.74(m， 1H)， 7.05-6.95(m， 1H)， 3.89(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.01(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)。1个可交换的质子没有观察。

    [1224] c)(9-(2， 4- 二氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1225] 将 2， 4- 二氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 45， 步骤 b)(0.35g) 加至 (2- 异 丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施 例 22， 步骤 b)(0.67g) 和乙酸 (0.09mL) 的 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (1mL) 溶液中。将所得混 合物搅拌 1h， 然后通过历时 5min 滴加三乙酰氧基硼氢化钠 (0.335g) 来淬灭。将所得混合 物搅拌过夜， 用乙腈 (20mL) 稀释， 且加载至 SCX 柱 (10gVarian， 用乙腈 (50mL) 预润湿 )。 柱用乙腈 (50mL) 洗涤， 且用 10％‘880’ 氨水 / 乙腈溶液 (50mL) 洗脱。蒸发洗脱剂， 与甲 苯共沸， 且经硅胶色谱 ( 用 77.5 ∶ 17.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸 乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色胶状物。收率为 0.74g。m/ 1 D6-DMSO)δ8.00(s， 1H)， 7.32-7.16(m， 1H)， 7.00(t， z 480(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 4.80(t， J ＝ 5.5Hz， 1H)， 3.78-3.38(m， 11H)， 2.77(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 2.46-2.26(m， 4H)， 1.76-1.40(m， 4H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1227] d)2-(2， 6- 二氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛

    [1226] 在 0℃将 TFA(0.11mL) 加至 (9-(2， 4- 二氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 45， 步骤 c)(0.7g) 的 DCM(5mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.93g)， 且 将混合物在 RT 搅拌 45min。 然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL)， 且将混合物搅拌 10min。分离出水层， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合 并的有机层用盐水洗涤， 用几滴乙酸酸化， 混合物用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题 化合物， 其为洁净胶状物。收率为 0.64g。m/z 478(M+H)+(APCI)。

    [1230] e)(R)-7-(2-(2， 6- 二氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1229] 将 2-(2， 6- 二氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 45， 步骤 d)(0.323g) 的甲醇 (3mL) 溶液加 至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.23g) 和乙酸 (0.034mL) 在甲醇 (2mL) 中的混合物中。将所得混合物搅 拌 5min， 然后冷却至 0℃。加入氰基硼氢化钠 (0.057g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌 2h。蒸 发溶剂， 且残余物经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水 TM 梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 蒸发， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50％ 乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 蒸发， 且用乙醚研磨， 得到标题化合 1 物， 其为白色固体。收率为 0.21g。m/z 688(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ ) δ11.27(s， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.62-7.53(m， 1H)， 7.23-7.14(m， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.92(dd， J ＝ 8.1， 4.7Hz， 1H)， 4.31(s， 2H)， 3.75-3.61(m， 6H)， 3.34-3.02(m， 11H)， 2.10-1.95(m， 2H)， 1.86-1.71(m， 2H)， 1.34(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。5 个 可 交换的质子没有观察。

    [1233] 实施例 46

    [1234] (R)-5-(2-(2， 6- 二氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1232] 将 2-(2， 6- 二氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 45， 步骤 d)(0.29g) 的甲醇 (3mL) 溶液 加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.20g) 和乙酸 (0.034mL) 在甲醇 (3mL) 中的混合物中。将所得混合物 搅拌 5min， 然后冷却至 0℃。然后加入氰基硼氢化钠 (0.057g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌 2h。蒸发溶剂， 且残余物经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发。将残余物溶解在 THF(3mL) 中， 加入 三乙胺三氢氟酸盐 (0.29mL)， 且将混合物搅拌过夜。浓缩反应混合物， 且残余物经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 蒸发， 且用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.23g。 m/z 682(M+H)+(APCI)。 1 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.19(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.65-7.51(m， 1H)， 7.24-7.10(m， 2H)， 7.01(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 6.53(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.37(dd， J＝ 8.6， 4.0Hz， 1H)， 4.34(s， 2H)， 3.75-3.59(m， 6H)， 3.34-3.03(m， 11H)， 2.11-1.95(m， 2H)， 1.88-1.72(m， 2H)， 1.34(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1237] 实施例 47

    [1238] (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1239] a)2-(5-( 溴甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇将过氧苯甲酰 (0.14g) 加至 NBS(1.53g) 和 2-(2- 氟 -5- 甲基苯基 ) 乙酸 (1.45g) 的 DCM(50mL) 溶液中， 且将所得混合物加热回流 12h。蒸发溶剂， 且将白色固体在乙酸乙酯 (100mL) 和 10％氯化钠溶液 (50mL) 之间分配。 分离各层， 有机相用 10％氯化钠溶液 (50mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。将所得白色固体重新溶解在四氢呋喃 (25mL) 中， 且在 冰浴中冷却。 小心加入硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 13mL)， 然后将混 合物温热至 RT， 且搅拌 2h。将反应混合物在冰浴中冷却， 且用甲醇小心淬灭。不再冒泡后， 蒸发溶剂， 且残余物经硅胶色谱 ( 用 9 ∶ 1 至 4 ∶ 1 乙酸乙酯∶异己烷梯度洗脱 ) 纯化， 得 1 到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 1.35g。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.32-7.21(m， 2H)， 7.04-6.97(m， 1H)， 4.46(s， 2H)， 3.87(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 2.93-2.87(m， 2H)。1 个可交 换的质子没有观察。

    [1243] b)(9-(4- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1242] 将 2-(5-( 溴甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 47， 步骤 a)(0.16g) 加至 (2- 异丙基 噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.3g) 和三乙胺 (0.3mL) 的乙腈 (10mL) 溶液中。将所得混合物搅拌过夜， 用乙腈 (20mL) 稀释， 且加载至 SCX 柱 (10g Varian， 用乙腈 (50mL) 预润湿 )。柱用乙腈 (50mL) 洗 涤， 且用 10％ ‘880’ 氨水 / 乙腈溶液 (50mL) 洗脱。蒸发洗脱剂， 与甲苯共沸， 且经硅胶色谱 ( 用 77.5 ∶ 17.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色胶状物。收率为 0.22g。 1 m/z 462(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.91(s， 1H)， 7.22-7.14(m， 1H)， 7.14-7.06(m， 1H)， 7.00(dd， J ＝ 10.0， 8.3Hz， 1H)， 4.40(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.72-3.52(m， 8H)， 3.43-3.23(m， 3H)， 2.74(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 2.42-2.23(m， 4H)， 1.75-1.65(m， 2H)， 1.59-1.47(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1246] c)(R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1247] 在 0℃将三氟乙酸 (0.033mL) 加至 (9-(4- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 47， 步骤 b)(0.2g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.28g)。将所得 黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (1mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 和乙酸乙酯 (5mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸 乙酯 (5mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (5mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (2mL) 中， 然后加入乙酸 (0.025mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步 骤 d)(0.17g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。 然后加入氰基硼氢化钠 (0.04g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。 TM 经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合并含 有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 1 0.14g。 m/z670(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.52-7.42(m， 2H)， 7.25(t， J ＝ 9.2Hz， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.93(dd， J ＝ 7.9， 4.6Hz， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.80-3.58(m， 6H)， 3.34-2.95(m， 11H)， 2.11-1.95(m， 2H)， 1.87-1.64(m， 2H)， 1.34(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。 5 个可交换的质子没有观察。

    [1248] 实施例 47A

    [1250] (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮

    [1251] a)2-(5-( 溴甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇

    [1252] 将过氧苯甲酰 (1g) 加至 NBS(10.6g) 和 2-(2- 氟 -5- 甲基苯基 ) 乙酸 (10g) 的 DCM(250mL) 溶液中， 且将所得混合物加热回流 12h。蒸发溶剂， 且将白色固体在乙酸乙 酯 (250mL) 和 10％氯化钠溶液 (500mL) 之间分配。分离各层， 有机相用 10 ％氯化钠溶液 (500mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发。将所得白色固体重新溶解在四氢呋喃 (150mL) 中， 且在冰浴中冷却。 小心加入硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 89mL)， 然后将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。 将反应混合物在冰浴中冷却， 且用甲醇小心淬灭。 不 再冒泡后， 蒸发溶剂， 且残余物用异己烷和乙醚的 4 ∶ 1 混合物研磨。 经硅胶色谱 ( 用 9 ∶ 1 至 4 ∶ 1 乙酸乙酯∶异己烷梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 1 CDCl3)δ7.32-7.21(m， 2H)， 7.04-6.97(m， 1H)， 4.46(s， 2H)， 3.87(t， 6.5g。 H NMR(300MHz， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 2.93-2.87(m， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [1254] b)(9-(4- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1253] 将 2-(5-( 溴甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 47A， 步骤 a)(5.2g) 加至 (2- 异丙基 噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(9.4g) 和碳酸钾 (6.8g) 的乙醇 (75mL) 悬浮液中。 将所得混合物搅拌过夜， 且过滤。 滤饼用乙醇 (50mL) 洗涤， 且蒸发合并的滤液和洗涤液。将残余物在水 (100mL) 和乙酸乙酯 (250mL) 之间分配， 分离各层， 有机层用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。 经 硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得 1 到副标题化合物， 其为黄色胶状物。收率为 7.9g。m/z 462(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.91(s， 1H)， 7.22-7.14(m， 1H)， 7.14-7.06(m， 1H)， 7.00(dd， J ＝ 10.0， 8.3Hz， 1H)， 4.40(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.72-3.52(m， 8H)， 3.43-3.23(m， 3H)， 2.74(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 2.42-2.23(m， 4H)， 1.75-1.65(m， 2H)， 1.59-1.47(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1257] c)(R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮

    [1258] 在 0℃将三氟乙酸 (1.32mL) 加至 (9-(4- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 47A， 步骤 b)(7.9g)

    [1256] 的 DCM(200mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (12.3g)。将所得 黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (100mL)、 饱和碳酸氢钠溶 液 (100mL) 和乙酸乙酯 (500mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且 用乙酸乙酯 (100mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (100mL) 洗涤， 用乙酸 (2mL) 酸化， 用 硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (140mL) 中， 然后加入 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(4.5g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (1.6g)， 将混 合物温热至 RT， 且搅拌过夜。 真空浓缩反应混合物， 且在盐水和饱和碳酸氢钠溶液的混合物 (10 ∶ 1， 100mL) 和 THF(100mL) 之间分配。分离各层， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 蒸发， 且 残余物与乙腈共沸。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发， 得到标题化合物， 其为白色固 1 体。收率为 4.1g。m/z 670(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.52-7.42(m， 2H)， 7.25(t， J ＝ 9.2Hz， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.93(dd， J ＝ 7.9， 4.6Hz， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.80-3.58(m， 6H)， 3.34-2.95(m， 11H)， 2.11-1.95(m， 2H)， 1.87-1.64(m， 2H)， 1.34(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。5 个可交换的质子没 有观察。

    [1259] 实施例 47B

    [1260] (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 (1S)-(+)-10- 樟脑磺酸盐

    [1261] 将 1S-(+)- 樟脑磺酸 (41mg) 加至 (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基 羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙 基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 ( 实施例 47A)(59mg) 的乙醇 (5mL) 溶液中， 且将所 得澄清溶液蒸发至干， 得到 (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二樟脑磺酸盐， 其为无定形白色固体。收率为 0.1g。

    [1262] 将异丙醇 (1mL) 加至 (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )4- 羟基苯 并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二樟脑磺酸盐 (20mg) 中， 且将所得澄清溶液搅拌 2 天。形成白 色固体， 且将悬浮液再搅拌 5 天。固体通过离心过滤来分离， 且在高真空下干燥， 得到 (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二樟脑磺 酸盐， 其为白色结晶固体。收率为 5mg。

    [1263] 在 50 ℃ 对 (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 (4.3g， 6.42mmol)( 实施例 47A)、 (1S)-(+)-10- 樟脑磺酸 (2.98g， 12.84mmol) 和异丙醇 (300mL) 的混合物进行加热直到形成澄清溶液， 种晶， 冷却至 RT， 且搅拌 4 天。固 体通过过滤来分离， 用异丙醇 (100mL) 和乙醚 (2×200mL) 洗涤， 且抽吸干燥， 得到标题化合 物， 其为白色结晶固体。收率为 5.1g。标题化合物的对映异构体过量高于实施例 47A 中得到的化合物。( 实施例 47A ＝ 86％ ee， 标题化合物＞ 96％ ee)

    [1265] 分析性手性方法 ： Chiralcel OJ-H 4.6×250mm， 80 ∶ 20 异己烷∶乙醇 +0.1％乙 二胺， 1ml/min， 35℃， 225+ 或 -10nm， 历时 30min。

    [1266] R 对映异构体的保留时间＝ 15.91min。

    [1267] S 对映异构体的保留时间＝ 22.85min。 1

    [1268] H NMR(300MHz， DMSO， 90 ℃ )δ11.42(s， 1H)， 9.95(s， 1H)， 8.89(s， 2H)， 7.95(s， 1H)， 7.61-7.54(m， 1H)， 7.53-7.46(m， 1H)， 7.27(t， J ＝ 9.2Hz， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.97-4.90(m， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.74-3.59(m， 6H)， 3.35-3.02(m， 9H)， 2.93(d， J ＝ 14.6Hz， 2H)， 2.76-2.61(m， 2H)， 2.44(d， J ＝ 14.6Hz， 2H)， 2.29-2.23(m， 2H)， 2.22-2.16(m， 2H)， 2.13-2.00(m， 2H)， 1.96-1.68(m， 6H)， 1.34(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)， 1.32-1.20(m， 4H)， 1.06(s， 6H)， 0.76(s， 6H)。2 个可交换的质子没有观察。

    [1269] 二 (1S)-(+)-10- 樟脑磺酸盐变化形式 (modification)A 的 XRPD 图示于图 1 中。

    [1270] 变化形式 A 的一些特征峰

    [1271] 实施例 47C

    [1273] (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 富马酸盐变化形式 A

    [1274] 将 (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 (13mg)( 实施例 47D， 步骤 a) 和富马酸 (2mg) 的甲醇 (0.75mL) 溶液在 RT 搅拌 7 天。所得白 色固体通过过滤来分离， 且在高真空下干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 5mg。 m/z 670(M+H)+(APCI)。

    [1275] 富马酸盐变化形式 A 的 XRPD 图示于图 2 中。

    [1276] 富马酸盐变化形式 A 的一些特征峰

    [1272] 实施例 47D

    [1279] (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 单富马酸盐变化形式 B

    [1278] a)(R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮

    [1281] 将 (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 (1S)-(+)-10- 樟脑磺酸盐 ( 实施例 47B)(4.1g) 在新蒸馏的 2- 甲基 -THF(100mL) 和饱 和碳酸氢钠溶液 (100mL) 之间分配。分离各层， 有机层用饱和碳酸氢钠溶液 (100mL) 和盐 水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。所得玻璃状固体用乙醚研磨 2 次， 得到 副标题化合物， 其为白色固体。收率为 2.6g。

    [1282] b)(R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 单富马酸盐变化形式 B

    [1283] 在 50 ℃ 将 (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 (2.4g) 溶解在乙醇 (240mL) 中。加入富马酸 (0.416g)， 且将混合物加热回流 直到形成澄清溶液。将所得溶液冷却至 60℃， 且用形式 A( 实施例 47C)(50mg) 种晶。将所 得混合物在 50℃搅拌过夜， 然后历时 3 小时冷却至 RT。所得白色固体通过过滤来分离， 用 乙醇 (50mL) 和乙醚 (2×200mL) 洗涤， 且抽吸干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率 1 DMSO， 90℃ )δ7.89(s， 1H)， 7.19-7.09(m， 为 2.3g。 m/z 670(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， 2H)， 7.01(dd， J ＝ 9.9， 8.3Hz， 1H)， 6.86(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.69(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.59(d， J ＝ 1.0Hz， 2H)， 4.65-4.59(m， 1H)， 3.73-3.56(m， 6H)， 3.41(s， 2H)， 3.30( 七重峰， J ＝ 3.3Hz， 1H)， 2.90-2.71(m， 6H)， 2.42-2.26(m， 4H)， 1.75-1.64(m， 2H)， 1.59-1.48(m， 2H)， 1.35(dd， J ＝ 6.8， 1.2Hz， 6H)+6 个可交换的质子没有观察。

    [1284] 富马酸盐变化形式 B 的 XRPD 图示于图 3 中。

    [1285] 富马酸盐变化形式 B 的一些特征峰

    [1286] XRPD-PANalytical CubiX PRO

    [1288] XRPD 数据用 PANalytical CubiX PRO 机器收集， 其中配置为 θ-2θ， 扫描范围为 2°至 40° 2θ， 及暴露为 100 秒 /0.02°增量。 X 射线通过铜制的长的小焦点 X 射线管来产

    [1287] 生， 其以 45kV 和 40mA 操作。铜 X 射线的波长为数据在零背景容器上收集， 将～2mg 化合物置于所述容器上。容器由单晶硅制造， 所述单晶硅沿非衍射平面被切割， 然后在 光学平面精制机上抛光。X 射线在该平面上的入射通过布拉格 (Bragg) 消光来抵销。

    [1289] 实施例 47E

    [1290] (R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮a)4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [1292] 将 1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 甲 酸 叔 丁 酯 盐 酸 盐 ( 限 定 试 剂 (limiting reagent)) 和 2- 异丙基噻唑 -4- 甲酸 (1.1 摩尔当量 ) 的混合物悬浮在 2-MeTHF(2- 甲基四氢呋喃 )(10 倍体积 ) 中， 且冷却至 10-15℃。在 10-15℃逐份加入三乙 胺 (7.2 摩尔当量 )。将稠悬浮液冷却至 5-10 ℃， 且在 5-10 ℃历时 0.5 小时滴加 T3P(1.3 摩尔当量浓度为 1.57M 的 THF 溶液 )。将反应混合物温热至环境温度 (35min)， 且搅拌 2.5 小时。混合物用水 (10 倍体积， 5℃放热 ) 稀释， 且将混合物剧烈搅拌 ； 分离出水层 (pH10)， 且用 2-MeTHF(2×2 倍体积 ) 萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液 (2 倍体积 ) 和水 (2×2 倍体积 ) 洗涤。蒸发有机相， 且与 MeCN(2×2 倍体积 ) 共沸， 得到褐色胶状物， 将所述 1 DMSO)δ8.03(s， 胶状物在 35℃真空干燥 24 小时。收率 ： 理论值的 89％。 H NMR(300MHz， 1H)， 3.76-3.44(m， 8H)， 3.37-3.25(m， 3H)， 3.16-3.00(m， 2H)， 1.76-1.66(m， 2H)， 1.39(s， 9H)， 1.33(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1294] b)(2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三 氟乙酸盐

    [1293] 在 10-15℃向 4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 限定试剂 )( 步骤 a) 的 DCM(5 倍体积 ) 溶液中逐份加入三氟乙酸 (13.4 摩尔当量 )。将溶液温热至环境温度， 且搅拌 16 小时。蒸发溶剂， 且将残余物溶解在乙醚 (10 倍体积 ) 中。将溶液在冰中冷却， 且刮擦， 实现沉淀 ； 将浆液在 0-10℃搅拌 0.5 小时， 然后冷过滤。滤饼用乙醚 (5 倍体积 ) 洗涤， 且在 35℃真空干燥， 得到米色粉末。收率 ： 理 1 论值的 91 ％。 H NMR(300MHz， DMSO)δ8.70-8.37(m， 2H)， 8.05(s， 1H)， 3.82-3.52(m， 6H)， 3.42-3.25(m， 1H)， 3.19-3.07(m， 2H)， 3.05-2.90(m， 2H)， 2.02-1.91(m， 2H)， 1.74-1.54(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。

    [1297] c)4- 溴 -1- 氟 -2-(2- 甲氧基乙烯基 ) 苯 ( 顺式和反式异构体的混合物 )

    [1296] 在 -3 ℃ (+ 或 -2 ℃ ) 历时 30 分钟将叔丁醇钾 (1.2 摩尔当量 ) 逐份加至搅拌的( 甲氧基甲基 ) 三苯基氯化鏻 (1.3 摩尔当量 ) 的 THF(2.5 倍体积 ) 悬浮液中。出现深红 色。历时 0.5 小时将温度变至 18℃， 且将反应混合物再搅拌 1.5 小时。然后历时 90 分钟 加入 5- 溴 -2- 氟苯甲醛 ( 限定试剂 ) 的 THF(5 倍体积 ) 溶液， 从而使反应混合物的温度不 超过 24℃。然后将反应混合物在室温搅拌 2 小时。将反应混合物倒入饱和氯化铵水溶液 (10 倍体积 ) 中， 且用 t-BME( 叔丁基甲基醚 )(2×2.5 倍体积 ) 萃取。合并的萃取物用盐水 (3×2 倍体积 ) 洗涤， 干燥 (Na2SO4)， 过滤， 且真空蒸发。油性残余物用异己烷 (8×0.5 倍体 积 ) 萃取。过滤合并的异己烷萃取物， 然后用冰乙酸 (2 倍体积 ) 和 50％冰乙酸 / 水 (2 倍 体积 ) 洗涤。干燥 (Na2SO4) 且过滤后， 溶剂用旋转蒸发器除去， 得到浅橙色油状物。收率为 理论值的 90％。 1

    [1300] 顺式 - 异构体 ： H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ8.07(d， J ＝ 9.4Hz， 1H)， 7.41-7.39(m， 1H)， 7.13(q， J ＝ 1.8Hz， 1H)， 6.54(d， J ＝ 7.1Hz， 1H)， 5.31(d， J ＝ 7.1Hz， 1H)， 3.83(s， 3H)。 1

    [1301] 反 式 - 异 构 体： H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ7.73-7.68(m， 1H)， 7.44(d， J ＝ 12.9Hz， 1H)， 7.41-7.39(m， 1H)， 7.18-7.09(m， 1H)， 5.79(d， J ＝ 12.9Hz， 1H)， 3.67(s， 3H)。

    [1302] d)4- 氟 -3-(2- 甲氧基乙烯基 ) 苯甲醛

    [1303] 将 4- 溴 -1- 氟 -2-(2- 甲氧基乙烯基 ) 苯 ( 限定试剂 )( 步骤 c) 溶解在 2- 甲基 四氢呋喃 (5 倍体积 ) 中， 且将溶液冷却至 -10℃。滴加异丙基氯化镁 (0.37 摩尔当量浓度 为 2M 的 THF 溶液 )， 历时约 30 分钟将温度保持在 -7℃ (+ 或 -2℃ )， 接着加入丁基锂 (0.74 摩尔当量浓度为 1.5M 的己烷溶液 )， 历时约 1 小时控制温度在 -6℃ (+ 或 -2℃ )。搅拌 45 分钟， 然后在 -5℃加至 4- 甲酰基吗啉 (2 摩尔当量 ) 的 2- 甲基四氢呋喃 (7 倍体积 ) 溶液 中。该加入历时约 90 分钟。然后将反应混合物搅拌 1 小时， 在此期间内部温度升至 5℃。 将反应混合物倒入饱和氯化铵水溶液 (10 倍体积 ) 中， 且用 t-BME(2×3 倍体积 ) 萃取。合 并的萃取物用饱和氯化铵水溶液洗涤 ( 直到洗涤液的 pH 为约 6)(2×3 倍体积 )， 用水 (5 倍 体积 ) 洗涤， 干燥 (Na2SO4)， 过滤， 且蒸发， 得到可流动的橙色油状物。

    [1305] 油状物经硅胶色谱 ( 使用 5％乙酸乙酯 / 异己烷作为洗脱剂 ) 纯化。收率为理论 值的 80％。 1

    [1306] 反式 - 异构体： H NMR(400MHz， CDCL3)δ9.93(s， 1H)， 7.83(d， J ＝ 9.5Hz， 1H)， 7.66-7.61(m， 1H)， 7.25(d， J ＝ 13.1Hz， 1H)， 7.17(d， J ＝ 10.3Hz， 1H)， 5.87(d， J ＝ 13.1Hz， 1H)， 3.74(s， 3H)。 1

    [1307] 顺式 - 异构体： H NMR(400MHz， CDCL3)δ9.95(s， 1H)， 8.57(d， J ＝ 9.5Hz， 1H)， 7.70-7.66(m， 1H)， 7.12(d， J ＝ 11.5Hz， 1H)， 6.34(d， J ＝ 7.2Hz， 1H)， 5.48(d， J ＝ 6.9Hz， 1H)， 3.86(s， 3H)。

    [1308] e)(9-(4- 氟 -3-(2- 甲 氧 基 乙 烯 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 - 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1304] 向 4- 氟 -3-(2- 甲氧基乙烯基 ) 苯甲醛 ( 限定试剂 )( 步骤 d) 和 (2- 异丙基噻 唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 (1.05 摩尔当 量 )( 步骤 b) 的 2- 甲基四氢呋喃 (25 倍体积 ) 悬浮液中一次性加入三乙胺 (1.73 摩尔当 量 )(4℃放热 )。将混合物搅拌 0.5 小时 ； 然后一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠 (1.5 摩尔 当量 )( 无放热 )， 且将所得溶液搅拌 16 小时。

    [1311] 加入饱和 NaHCO3 水溶液 (25 倍体积 )， 且将混合物剧烈搅拌。分离有机相， 且水层 (pH8) 用 2-MeTHF(100mL) 萃取 ； 合并的有机层用水 (2×50mL) 洗涤， 干燥 (Na2SO4)， 过滤， 1 且蒸发， 得到深色油状物。收率 ： 理论值的 78％。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)( 顺式和反式 异构体的混合物 ) ： δ7.97(s， 1H)， 7.86-7.79(m， 0.5H)， 7.34-7.20(m， 1H)， 7.07-6.98(m， 2H)， 6.41(d， J ＝ 7.1Hz， 0.5H)， 5.82(d， J ＝ 12.9Hz， 0.5H)， 5.32(d， J ＝ 6.9Hz， 0.5H)， 3.77(s， 0.5H)， 3.66(s， 2.5H)， 3.42-3.19(m， 7H)， 2.41-2.26(m， 4H)， 1.76-1.63(m， 3H)， 1.59-1.45(m， 3H)， 1.35(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。

    [1312] f)(R)-7-(2-(2- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮

    [1310] (9-(4- 氟 -3-(2- 甲 氧 基 乙 烯 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 限定试剂 )( 步骤 e) 的 THF(5 倍体积 ) 溶液用 水 (2.5 倍体积 ) 处理， 接着用浓盐酸 (6 摩尔当量 ) 处理。将溶液在 55-60℃加热 1.5 小 时； 将溶液冷却至环境温度， 且用水 (2.5 倍体积 ) 稀释。THF 通过蒸发来除去， 且将含水残 余物加至搅拌的碳酸氢钠 (7 摩尔当量 )、 水 (5 倍体积 ) 和 DCM(10 倍体积 ) 的混合物中。

    [1315] 分离出有机层， 且水层 (pH8) 用 DCM(5 倍体积 ) 萃取。 合并的有机层用饱和 NaHCO3 水溶液 (5 倍体积 ) 和水 (2×5 倍体积 ) 洗涤， 干燥 ( 硫酸钠 )， 且过滤。滤液用 MeOH(10 倍 体积 ) 稀释， 且在 35℃ /405 毫巴蒸发 DCM。醛的甲醇溶液用乙酸 (2 摩尔当量 ) 处理， 且一 次性加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (1 摩尔 当量 ) 中 ； 将混合物冷却至 0-5℃， 且搅拌 5min， 得到溶液。向其中一次性加入氰基硼氢化 钠 (1.5 摩尔当量 )， 将混合物在 5℃搅拌 0.5 小时， 然后温热至环境温度， 且搅拌 0.5 小时。 蒸发溶剂， 且将残余物在 2-MeTHF(10 倍体积 ) 和饱和 NaHCO3 溶液 (5 倍体积 ) 之间分配 ； 有机层用 20％盐水溶液 (5 倍体积 ) 洗涤， 干燥 (Na2SO4)， 过滤， 且蒸发。得到黄色泡沫状 物， 将所述泡沫状物在乙酸乙酯 (13 倍体积 ) 中浆化， 过滤收集所得固体， 且真空干燥。得

    [1314] 到浅黄色固体， 所述固体通过硅胶 ( 粗反应混合物重量的 20 倍 )( 洗脱剂为 DCM/10-15％ MeOH/1-1.5％氨 ) 纯化。收率 ： 理论值的 29％。m/z 670(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ7.99(s， 1H)， 7.23-7.02(m， 3H)， 6.84(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.69(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.58(q， J ＝ 4.1Hz， 1H)， 3.75-3.24( 宽多重峰， 10H)， 2.80-2.59(m， 6H)， 2.41-2.11(m， 7H)， 1.76-1.41(m， 4H)， 1.34(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1316] 实施例 48

    [1317] (R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1318] a)2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛在 -70℃将 2， 2， 6， 6- 四甲基哌啶 (10.8mL) 加至丁基锂 ( 浓度为 1.6M 的己烷溶液， 40.1mL) 的 THF(40mL) 溶液中。滴加 2-(2- 氟苯基 ) 乙醇 (3g) 的 THF(40mL) 溶液， 且将所 得混合物在 -70℃搅拌 6h。然后加入 DMF(8.29mL)， 且将混合物在 -70℃搅拌 1h。然后将混 合物温热至 RT， 且搅拌 70h。反应混合物用 HCl 溶液 (2M， 50mL) 淬灭， 用乙酸乙酯 (100mL) 稀释， 且分离各层。水相用乙酸乙酯 (2×100mL) 萃取。合并的有机溶液用 HCl 溶液 (2M， 50mL) 和盐水 (20mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 至 2 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合 物， 其为黄色油状物。收率为 1.2g。1H NMR(300MHz， CDCl3)δ10.37(s， 1H)， 7.80-7.71(m， 1H)， 7.54(td， J ＝ 7.4， 1.9Hz， 1H)， 7.22(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 3.96-3.87(m， 2H)， 2.99(td， J ＝ 6.5， 1.2Hz， 2H)， 1.53(t， J ＝ 5.6Hz， 1H)。

    [1322] b)(9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1321] 将 2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 48， 步骤 a)(0.19g) 加至 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步 骤 b)(0.32g) 和乙酸 (0.043mL) 的 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (5mL) 溶液中。 将所得混合物搅拌 1h， 然后历时 5min 逐份加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.24g)。 将所得混合物搅拌过夜， 用乙腈 (20mL) 稀释， 且加载至 SCX 柱 (10g Varian， 用乙腈 (50mL) 预润湿 )。柱用乙腈 (50mL) 洗 涤， 且用 10％ ‘880’ 氨水 / 乙腈溶液 (50mL) 洗脱。蒸发洗脱剂， 与甲苯共沸， 且经硅胶色谱 ( 用 77.5 ∶ 17.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色胶状物。收率为 0.33g。 1 m/z462(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.91(s， 1H)， 7.23-7.13(m， 2H)， 7.03(t， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 4.40(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.72-3.56(m， 9H)， 3.48(s， 2H)， 2.75(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.46-2.26(m， 4H)， 1.75-1.63(m， 2H)， 1.59-1.46(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1325] c)(R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1326] 在 0℃将 TFA(0.044mL) 加至 (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 48， 步骤 b)(0.3g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.37g)。将所得黄色 溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (5mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (2mL) 中， 然后加入乙酸 (0.033mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.054g)， d)(0.28g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。 经 TM 制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。 合并含有产 物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.14g。 1 m/z670(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.51(t， J ＝ 6.9Hz， 1H)， 7.44(t， J ＝ 7.0Hz， 1H)， 7.25(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.93(dd， J ＝ 8.3， 4.7Hz， 1H)， 4.34(s， 2H)， 3.77-3.60(m， 6H)， 3.36-3.04(m， 11H)， 2.09-1.97(m， 2H)， 1.87-1.72(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。5 个 可 交换的质子没有观察。

    [1327] 实施例 49

    [1329] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(5-((4-(2- 甲基苯并 [d] 噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1330] a)(9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基苯并 [d] 噻唑 -5- 基 ) 甲酮

    [1331] 将 HATU(0.333g) 加 至 搅 拌 的 2- 甲 基 苯 并 [d] 噻 唑 -5- 甲 酸 (0.17g)、 9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 ( 实施例 43， 步骤 b)(0.3g) 和三乙胺 (0.407mL) 的 DMF(3mL) 溶液中。1h 后， 将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层用水洗涤 2 次， 用盐水洗涤 1 次， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺 2 ∶ 8 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 0.36g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.06(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 7.38(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 7.87(s， 1H)， 6.96(s， 1H)， 6.78(s， 1H)， 3.77(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 3.68-3.63(m， 2H)， 3.58(s， 2H)， 3.53-3.46(m， 2H)， 3.42-3.36(m， 2H)， 2.82(s， 3H)， 2.70(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.42-2.31(m， 4H)， 1.81-1.72(m， 2H)， 1.52-1.41(m， 2H)， 0.86(s， 9H)， 0.00(s， 6H)。

    [1334] b)(9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 甲基苯并 [d] 噻唑 -5- 基 ) 甲酮

    [1333] 将 TBAF( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 1.5mL) 加至搅拌的 (9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲 硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 甲基苯并 [d] 噻唑 -5- 基 ) 甲酮 ( 实施例 49， 步骤 a)(0.36g) 的 THF(2mL) 溶液中。1h 后， 将反应混合物蒸发成胶状物。 经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶三乙胺 20 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得 1 到副标题化合物， 其为胶状物。 收率为 0.2g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ8.05(d， J＝ 7.5Hz， 1H)， 7.37(d， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 7.86(s， 1H)， 6.94(s， 1H)， 6.76(s， 1H)， 4.30-4.23(m， 1H)， 3.68-3.54(m， 6H)， 3.54-3.44(m， 2H)， 3.43-3.33(m， 2H)， 2.81(s， 3H)， 2.71-2.62(m， 2H)， 2.47-2.29(m， 4H)， 1.81-1.71(m， 2H)， 1.55-1.40(m， 2H)。

    [1337] c)2-(5-((4-(2- 甲基苯并 [d] 噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙醛

    [1336] 将戴斯 - 马丁高碘剂 (0.27g) 加至搅拌的 (9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基苯并 [d] 噻唑 -5- 基 ) 甲酮 ( 实 施例 49， 步骤 b)(0.20g) 和三氟乙酸 (0.033mL) 的 DCM(5mL) 溶液中。 40min 后， 反应混合物 用饱和硫代硫酸钠水溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理。 混合物 用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 加入乙酸 (0.08mL)， 然后溶 液用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 收率为 0.2g。 直接用于下一步。 m/z 470(M+H)+(APCI)。

    [1340] d)(R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(2-(5-((4-(2- 甲 基 苯 并 [d] 噻 唑 -5- 基 羰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1339] 将乙酸 (0.037mL) 加至搅拌的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.168g) 和 2-(5-((4-(2- 甲 基苯并 [d] 噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻 吩 -3- 基 ) 乙醛 ( 实施例 49， 步骤 c)(0.200g) 的 MeOH(8mL) 溶液中。 1min 后， 加入氰基硼氢 TM 化钠 (0.107g)。 3h 后， 对反应混合物进行过滤， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-35％ 乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有纯产物的馏分， 且蒸发至干。用乙醚研磨， 得到标 1 题化合物， 其为白色固体。收率为 0.15g。m/z 680(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 1H)， 7.90(s， 1H)， 7.42-7.37(m， 2H)， 7.15(s， 90 ℃ )δ11.29(s， 1H)， 8.07(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 4.94-4.86(m， 1H)， 4.50-4.41(m， 2H)， 3.73-3.63(m， 2H)， 3.58-3.33(m， 4H)， 3.29-2.90(m， 10H)， 2.81(s， 3H)， 2.16-2.00(m， 2H)， 1.78-1.62(m， 2H)。4 个可交换的质子没有观察。

    [1343] 实施例 50

    [1344] (R)-7-(2-(3-((4-(2- 叔丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-5- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1342] a)(2- 叔丁基噻唑 -4- 基 )(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [1346] 将 2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺[5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 41， 步骤 d)(0.21g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至氨 (35％水 溶液， 15mL) 中， 且将反应混合物在 20℃搅拌 1 小时。将混合物减压蒸发至干， 且残余物与 乙腈共沸 3 次。将残余物溶解在 DMF(7mL) 中， 用 2- 叔丁基噻唑 -4- 甲酸 (0.096g) 处理， 接着用三乙胺 (0.290mL) 处理， 然后用 HATU(0.257g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 1 小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.22g。m/z 476(M+H)+(APCI)。

    [1349] b)(R)-7-(2-(3-((4-(2- 叔丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-5- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1350] (2- 叔丁基噻唑 -4- 基 )(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 50， 步骤 a)(0.22g) 的 DCM(20mL) 溶液用三氟乙 酸 (0.036mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.255g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙 酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳 酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.026mL) 加至该溶液中， 然后减压除去 溶剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.182g) 和乙酸 (0.026mL) 的甲醇 (15mL) 溶液中。 将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.058g) 处理。 移开冷 却浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混 合物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化 1 合物。收率为 0.135g。m/z 684(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.95(s， 1H)， 7.27-7.16(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.94-4.88(m， 1H)， 4.21(s， 2H)， 3.71(s， 4H)， 3.66(s， 2H)， 3.26(t， J ＝ 7.9Hz， 2H)， 3.15-2.98(m， 8H)， 2.06-1.95(m， 2H)， 1.79-1.67(m， 2H)， 1.41(s， 9H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1352] 实施例 51

    [1353] (R)-5-(2-(2-(5-((2， 2- 二氟 -4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1351] a)(9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-2， 2- 二 氟 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮将 (2， 2- 二 氟 -1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 44， 步骤 b)(0.40g) 加至搅拌的 4-(2-( 叔丁基二甲 基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛和 3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻 吩 -2- 甲醛的 4 ∶ 1 混合物 ( 实施例 27， 步骤 b)(0.36g) 和 AcOH(0.05mL) 的 N- 甲基吡咯 烷 -2- 酮 (5mL) 溶液中。 5min 后， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.28g)。 16h 后， 加入水， 且混合 物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用水洗涤 3 次， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 20 ∶ 80 ∶ 5 乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 分离到两种异构产物， 且得到副标题化合物， 其 1 为 胶 状 物。 收 率 为 0.24g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.11(s， 1H)， 7.00(s， 1H)， 6.82(s， 1H)， 4.28-4.16(m， 2H)， 4.05-3.95(m， 2H)， 3.78(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.64(s， 2H)， 3.40-3.31(m， 1H)， 2.71(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 1.85-1.77(m， 2H)， 1.74-1.64(m， 2H)， 1.39(d， J ＝ 6.8Hz， 6H)， 0.86(s， 9H)， 0.86(s， 6H)， 4 个质子在溶剂峰下。

    [1358] b)(2， 2- 二氟 -9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1357] 将 TBAF( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 1.5mL) 加至搅拌的 (9-((4-(2-( 叔丁基二甲基甲 硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-2， 2- 二氟 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 51， 步骤 a)(0.30g) 的 THF(3mL) 溶液中。 1h 后， 将反应混合物真空蒸发成胶状物。经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶三乙胺 20 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 0.2g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.19(s，

    [1360] 1H)， 7.02(s， 1H)， 6.81(s， 1H)， 4.60(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 4.54-4.39(m， 1H)， 4.20-3.98(m， 3H)， 3.88-3.75(m， 1H)， 3.66-3.53(m， 5H)， 2.65(t， J ＝ 7.0Hz， 3H)， 1.81-1.73(m， 2H)， 1.72-1.60(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 6.4Hz， 6H)。2 个质子由于溶剂峰而模糊。

    [1361] c)2-(5-((2， 2- 二氟 -4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙醛

    [1362] 将戴斯 - 马丁高碘剂 (0.20g) 加至搅拌的 (2， 2- 二氟 -9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻 吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 51， 步骤 b)(0.15g) 和三氟乙酸 (0.031mL) 的 DCM(4mL) 溶液中。40min 后， 反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 加入乙酸 (0.08mL)， 然后溶剂用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。收率为 0.19g。直接使用。m/z 484(M+H)+(APCI)。

    [1364] d)(R)-5-(2-(2-(5-((2， 2- 二氟 -4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1363] 将 (R)-5-(2- 氨 基 -1-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 ) 乙 基 )-8- 羟 基 喹 啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.156g) 加至搅拌的 2-(5-((2， 2- 二氟 -4-(2- 异丙基噻 唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙醛 ( 实施例 51， 步骤 c)(0.15g) 和乙酸 (0.027mL) 的甲醇 (8mL) 溶液中。5 分钟后， 加入氰基 硼氢化钠 (0.078g)。 3h 后， 将反应混合物真空蒸发至～ 3mL， 且在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠 之间分配。 乙酸乙酯溶液用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 将所得胶状物溶解 在 THF(2mL) 中， 且加入三乙胺三氢氟酸盐 (0.064g)。16h 后， 加入甲苯， 且真空蒸发溶液。 TM 经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-35％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有产物的 馏分， 蒸发至干， 与 MeCN 共沸， 然后用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为固体。 收率为 0.14g。 1 m/z 688(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ10.52-10.47(m， 2H)， 8.85-8.70(m， 2H)， 8.22(s， 1H)， 8.15(d， J ＝ 9.6Hz， 1H)， 7.49-7.43(m， 1H)， 7.21-7.12(m， 1H)， 7.15(d， J ＝

    [1366] 6.9Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.58(d， J ＝ 10.6Hz， 1H)， 6.24-6.17(m， 1H)， 5.33(d， J ＝ 8.9Hz， 1H)， 4.66-4.51(m， 2H)， 3.44-2.91(m， 10H)， 2.15-2.03(m， 2H)， 1.95-1.77(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。6 个质子由于溶剂峰而模糊。

    [1367] 实施例 52

    [1368] (R)-7-(2-(3- 氯 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1369] a)2-(3-( 溴甲基 )-5- 氯苯基 ) 乙酸将过氧苯甲酰 (0.112g) 加至 2-(3- 氯 -5- 甲基苯基 ) 乙酸 (0.752g) 和 N- 溴琥 珀酰亚胺 (0.801g) 的 DCM(15mL) 悬浮液中， 且将所得混合物在 50℃和氮气下加热过夜。 真 空浓缩混合物以除去二氯甲烷， 且将残余物溶解在乙酸乙酯 (10mL) 中。 将溶液在 85℃和氮 气下加热 4 小时， 然后冷却。溶液用水洗涤 3 次， 用盐水洗涤 1 次， 然后用无水硫酸镁干燥， 且通过快速硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 20 ∶ 79 乙酸∶乙酸乙酯∶异己烷洗脱 ) 纯化， 得到粗副标 1 题化合物， 其为浅黄色固体。收率为 0.735g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.33-7.31(m， 1H)， 7.24-7.22(m， 1H)， 7.21-7.18(m， 1H)， 4.41(s， 2H)， 3.64(s， 2H)。1 个可交换的质子没有观 察。

    [1373] b)2-(3-( 溴甲基 )-5- 氯苯基 ) 乙醇

    [1372] 在室温历时 5 分钟将硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 2.8mL) 逐份加至 2-(3-( 溴甲基 )-5- 氯苯基 ) 乙酸 ( 实施例 52， 步骤 a)(0.73g) 的无水 THF(10mL) 溶液中。将所得冒泡溶液搅拌 1 小时， 然后在冰 - 水中冷却， 且通过历时 5 分钟滴加甲醇 (3mL) 来淬灭。 将溶液在室温再搅拌 20 分钟， 然后真空浓缩。 残余物通过快速硅胶色谱 ( 用 25％乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯化， 得到粗副标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.46g。

    [1375] 168102083839 A CN 1020838471说明书160/380 页H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.29-7.24(m， 1H)， 7.19-7.13(m， 2H)， 4.41(s， 2H)， 3.87(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 2.84(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [1376] c)(9-(3- 氯 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1377] 将三乙胺 (0.18mL) 加至 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.217g) 和 2-(3-( 溴甲基 )-5- 氯苯 基 ) 乙醇 ( 实施例 52， 步骤 b)(0.160g) 的乙腈 (5mL) 悬浮液中， 且将所得溶液在室温搅拌过 夜。 然后溶液通过快速硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 5 ∶ 94 三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到 胶状物。将胶状物溶解在二氯甲烷中， 溶液用水洗涤 3 次， 用无水硫酸镁干燥， 且真空浓缩， 1 得到副标题化合物， 其为浅黄色泡沫状物。收率为 0.254g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ ) δ7.90(s， 1H)， 7.21-6.92(m， 3H)， 4.31(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.79-3.49(m， 8H)， 3.42(s， 2H)， 2.43-2.22(m， 4H)， 1.77-1.65(m， 3.31( 七 重 峰， J ＝ 6.8Hz， 1H)， 2.71(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 2H)， 1.60-1.48(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1379] d)2-(3- 氯 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛

    [1378] 将 (9-(3- 氯 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 ) 甲 酮 ( 实 施 例 52， 步 骤 c)(0.242g) 的 DCM(5mL) 溶 液在冰 - 水中冷却， 用三氟乙酸 (0.059mL) 处理， 且搅拌 5 分钟。加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.323g)， 然后从冷却浴中取出混合物， 且在室温搅拌 30 分钟。溶液用饱和硫代硫酸钠溶 液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (5mL) 稀释， 且将所得混合物剧烈搅拌 10 分 钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机相用盐水洗涤， 用乙酸 (0.1mL) 酸化， 用 无水硫酸镁干燥， 且真空浓缩， 得到粗副标题化合物， 其为黄色泡沫状物。收率为 0.297g。 m/z476(M+H)+(APCI)。

    [1382] e)(R)-7-(2-(3- 氯 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1381] (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.220g) 的甲醇 (3mL) 溶液用乙酸 (0.047mL) 处理， 且搅拌 5 分钟。然后加入 2-(3- 氯 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 52， 步骤 d)(0.296g) 的甲醇 (4mL) 溶液， 将所得混合物在室温搅拌 5 分钟， 然后在冰 - 水中冷却， 且用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.181g) 处理。将混合物在冰 - 水中搅拌 10 分钟， 然后在室温搅拌 45 分钟， 然后在冰 - 水 中冷却， 且再用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.533g) 处理。然后将混合物搅拌过夜， 且将其缓慢 温热至室温。第二天上午， 真空浓缩混合物。将残余物溶解在甲醇 (1.5mL)、 乙腈 (1.5mL) TM 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水 和水 (1.5mL) 的混合物中， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 溶液 ) 纯化。真空浓缩含有产物的馏分， 且与乙腈共蒸发 3 次， 得到无色残余物。残余物 用乙醚研磨， 得到固体， 过滤分离所述固体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 得到标题化 合物， 其为白色固体。收率为 0.092g。m/z 686(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.94(s， 1H)， 7.50-7.44(m， 1H)， 7.44-7.37(m， 1H)， 7.34-7.26(m， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.90(dd， J ＝ 7.9， 5.4Hz， 1H)， 4.26-4.08(m， 2H)， 3.77-3.59(m， 6H)， 3.35-3.21(m， 3H)， 3.16-2.91(m， 8H)， 2.06-1.90(m， 2H)， 1.81-1.63(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1385] 实施例 53

    [1386] (R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(4- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1384] a)4- 异丙基噻唑 -2- 甲酸乙酯历时 15 分钟将 1- 溴 -3- 甲基丁 -2- 酮 (3.72g) 的乙醇 (15mL) 溶液滴加至回流的 2- 氨基 -2- 硫代乙酸乙酯 (3g) 的乙醇 (120mL) 溶液中。将混合物加热回流 2 小时， 然后冷 却至室温。 减压蒸发溶剂至体积为 30mL， 将该溶液加至冰 / 水 (200mL) 中， 且混合物通过滴 加 ‘880’ 浓氨水来中和。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用盐水洗涤， 用硫酸钠 干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 用 20％乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 2.2g。m/z 200(M+H)+(APCI)。

    [1391] b)4- 异丙基噻唑 -2- 甲酸

    [1390] 4- 异 丙 基 噻 唑 -2- 甲 酸 乙 酯 ( 实 施 例 53， 步 骤 a)(2.2g) 在 甲 醇 (10mL) 和 THF(20mL) 的混合物中的溶液用氢氧化锂 (0.264g) 的水 (20mL) 溶液处理。将反应混合 物在 20℃搅拌 24 小时。减压除去有机溶剂， 且将残留含水混合物在乙酸乙酯和水之间分 配。水层用 2M 盐酸酸化， 用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物用环己烷研磨， 得到副标题化合物。收率为 0.93g。m/z 1 D6-DMSO)δ7.67(s， 1H)， 3.16-3.05(m， 1H)， 1.26(d， 6H)。 170(M-H) (APCI)。 H NMR(400MHz， 1 个可交换的质子没有观察。

    [1394] c)(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(4- 异丙基噻唑 -2- 基 ) 甲酮

    [1393] 将 2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 41， 步骤 d)(0.21g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至氨 (35％水 溶液， 15mL) 中， 且将反应混合物在 20℃搅拌 1 小时。 将混合物减压蒸发至干， 且残余物与乙 腈共沸 3 次。将残余物溶解在 DMF(7mL) 中， 用 4- 异丙基噻唑 -2- 甲酸 ( 实施例 53， 步骤 b) (0.089g) 处理， 接着用三乙胺 (0.290mL) 处理， 然后用 HATU(0.257g) 处理， 且将所得混合物 在 20℃搅拌 1 小时。 将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸 钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。 收率为 0.325g。 m/z 462(M+H)+(APCI)。

    [1397] d)(R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(4- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1396] (9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (4- 异丙基噻唑 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 53， 步骤 c)(0.23g) 的 DCM(20mL) 溶液用三氟乙酸 (0.038mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.275g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.029mL) 加至该溶液中， 然后减压除去溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.196g) 和乙酸 (0.029mL) 的甲醇 (15mL) 溶液中。 将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.063g) 处理。 移开冷却浴， 且 将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合物用饱 和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减 TM 压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙 腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率 1 为 0.140g。 m/z 670(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.51(s， 1H)， 7.28-7.16(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.95-4.88(m， 1H)， 4.26(s， 2H)， 4.19-3.82(m， 4H)， 3.80-3.74(m， 2H)， 3.27(t， J ＝ 7.9Hz， 2H)， 3.19-2.98(m， 9H)， 2.09-1.98(m， 2H)， 1.85-1.73(m， 2H)， 1.27(d， J ＝ 7.1Hz， 6H)。5 个可交换的质子没有 观察。

    [1400] 实施例 54

    [1401] (R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(5- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1399] a)5- 异丙基噻唑 -2- 甲酸乙酯将溴 (0.162mL) 在 DCM(1.2mL) 和二氧杂环己烷 (0.3mL) 的混合物中的溶液缓慢 滴加至在 0℃冷却的 3- 甲基丁醛 (0.272g) 在 DCM(1.6mL) 和二氧杂环己烷 (0.4mL) 的混合 物中的溶液中。将混合物在 5℃搅拌 2 小时。将反应混合物冷却至 0℃， 且在氮气气流下除 去溶剂。残余物仍在 0℃用 2- 氨基 -2- 硫代乙酸乙酯 (0.42g) 逐滴处理。在氮气下历时 15 分钟将所得混合物由 0℃加热至 70℃。然后将混合物在冰浴中冷却， 用乙酸乙酯和饱和 碳酸氢钠溶液处理， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色 谱 ( 使用 30％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合 物。收率为 0.105g。m/z 200(M+H)+(APCI)。

    [1406] b)5- 异丙基噻唑 -2- 甲酸

    [1405] 5- 异丙基噻唑 -2- 甲酸乙酯 ( 实施例 54， 步骤 a)(0.105g) 的甲醇 (5mL) 溶液用 氢氧化锂 (0.025g) 的水 (3mL) 溶液处理， 且将所得混合物在 20℃剧烈搅拌 2 小时。减压蒸 掉甲醇， 且残留水溶液用盐水 (10mL) 稀释。水层用乙醚洗涤， 然后在冰浴中冷却， 且通过滴 加浓盐酸水溶液来酸化。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次。合并的乙酸乙酯层用盐水洗涤， 用 1 硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.048g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.84(s， 1H)， 3.34-3.26(m， 1H)， 1.31(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。1 个可交换的质子没有 观察。

    [1409] c)(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(5- 异丙基噻唑 -2- 基 ) 甲酮

    [1408] 将 2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 41， 步骤 d)(0.113g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至氨 (35％ 水溶液， 15mL) 中， 且将反应混合物在 20℃搅拌 1 小时。将混合物减压蒸发至干， 且残余物 与乙腈共沸 3 次。将残余物溶解在 DMF(7mL) 中， 用 5- 异丙基噻唑 -2- 甲酸 ( 实施例 54， 步 骤 b)(0.048g) 处理， 接着用三乙胺 (0.156mL) 处理， 然后用 HATU(0.139g) 处理， 且将所得 混合物在 20℃搅拌 1 小时。 将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2.5％甲醇 / 二氯 甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率 为 104mg。m/z 462(M+H)+(APCI)。

    [1411] d)(R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(5- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1413] (9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (5- 异丙基噻唑 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 54， 步骤 c)(0.104g) 的 DCM(20mL) 溶液用三氟乙酸 (0.017mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.124g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.013mL) 加至该溶液中， 然后减压除去溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.089g) 和乙酸 (0.013mL) 的甲 且用氰基硼氢化钠 (0.028g) 处理。移开冷却 醇 (15mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合 物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化 1 合物。收率为 0.045mg。m/z 670(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.67(s， 1H)， 7.28-7.16(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.94-4.89(m， 1H)， 4.26(s， 2H)， 4.11-3.79(m， 4H)， 3.78-3.73(m， 2H)， 3.31-3.24(m， 2H)， 3.18-2.99(m， 9H)， 2.06-1.97(m， 2H)， 1.85-1.74(m， 2H)， 1.31(d， J ＝ 7.0Hz， 6H)。 6 个可交换的质子没有观察。

    [1415] 实施例 55

    [1416] (R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1414] a)2- 异丙基噻唑 -5- 甲酸乙酯将 2- 甲基硫代丙酰胺 (2-methylpropanethioamide)(3.3g) 和 2- 氯 -3- 氧代丙 酸乙酯 (4.82g) 在丙酮 (50mL) 中的混合物在氮气下加热回流 3 小时。将混合物冷却至室 温， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 12％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 1.6g。m/z 200(M+H)+(APCI)。

    [1421] b)2- 异丙基噻唑 -5- 甲酸

    [1420] 2- 异丙基噻唑 -5- 甲酸乙酯 ( 实施例 55， 步骤 a)(0.33g) 的甲醇 (6mL) 溶液用氢 氧化锂 (0.079g) 的水 (3mL) 溶液处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 2 小时。减压蒸掉甲 醇， 且将残余物在乙醚和盐水之间分配。 水层通过滴加稀盐酸来酸化， 且混合物用乙酸乙酯 萃取。有机层用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率 1 D6-DMSO)δ13.38(s， 1H)， 8.22(s， 1H)， 为 0.185g。m/z 172(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， 3.35-3.26(m， 1H)， 1.34(d， J ＝ 6.8Hz， 6H)。

    [1424] c)2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙醇

    [1423] 将 ‘880’氨 溶 液 (5mL) 加 至 2， 2， 2- 三 氟 -1-(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 41， 步骤 d)(2.2g) 的甲醇 (25mL) 溶液中。 将所得混合物搅拌 90min， 且蒸发溶剂。 残余物与乙腈共沸 3 次， 且浓缩， 得 1 到副标题化合物， 其为洁净胶状物。收率为 1.96g。m/z309(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ6.97(s， 1H)， 6.94(s， 1H)， 6.91(s， 1H)， 3.65-3.56(m， 4H)， 3.49-3.39(m， 2H)， 2.85-2.78(m， 2H)， 2.76-2.68(m， 4H)， 2.48-2.39(m， 2H)， 2.32-2.21(m， 2H)， 1.89-1.77(m， 2H)， 1.58-1.44(m， 2H)。2 个可交换的质子没有观察。

    [1426] d)(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -5- 基 ) 甲酮

    [1429] 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 55， 步骤 c)(0.153g) 的 DMF(7mL) 溶液用三乙胺 (0.208mL) 处理， 接着用 2- 异丙基噻 唑 -5- 甲酸 ( 实施例 55， 步骤 b)(.085g) 处理。 将混合物冷却至 0℃， 且加入 HATU(0.245g)。 将反应混合物在 20℃搅拌 2 小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗 涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2.5％甲 醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合 物。收率为 0.130g。m/z 462(M+H)+(APCI)。

    [1430] e)(R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1431] (9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -5- 基 ) 甲酮 ( 实施例 55， 步骤 d)(0.13g) 的 DCM(20mL) 溶液用三氟乙酸 (0.022mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.155g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.016mL) 加至该溶液中， 然后减压除去溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.111g) 和乙酸 (0.016mL) 的甲醇 (15mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.035g) 处理。移开冷却浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合物用 饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且 TM 减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％ 乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收 1 率为 0.1g。 m/z 670(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.92(s， 1H)， 7.30-7.18(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.95-4.89(m， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.75-3.70(m， 2H)， 3.68-3.63(m， 2H)， 3.54(s， 2H)， 3.33-3.24(m， 3H)， 3.22-3.00(m， 8H)， 2.07-1.98(m， 2H)， 1.84-1.72(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。5 个可交 换的质子没有观察。

    [1433] 实施例 56

    [1434] (R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1432] a)2- 丁酰氨基 -3- 巯基丙酸乙酯将三乙胺 (4.5mL) 加至 2- 氨基 -3- 巯基丙酸乙酯盐酸盐 (5g) 的 DCM(50mL) 悬 浮液中。将所得混合物在冰 / 盐浴中冷却， 且滴加丁酰氯 (3.3mL)。将所得混合物温热 至 RT， 且搅拌过夜。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 淬灭， 且分离各层。水相用 DCM(2×100mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。 所得白色固体经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 至 1 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱 ) 纯化。合并 含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 3g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.21(d， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 4.43-4.37(m， 1H)， 4.13-4.06(m， 2H)， 2.88-2.80(m， 1H)， 2.78-2.69(m， 1H)， 2.12(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 1.60-1.47(m， 2H)， 1.22-1.14(m， 3H)， 0.90-0.81(m， 3H)。1 个可交换的质子没有观察。m/z 218(M-H) (APCI)。

    [1439] b)2- 丙基噻唑 -4- 甲酸乙酯

    [1438] 将 HCl 溶 液 ( 浓 度 为 4M 的 1， 4- 二 氧 杂 环 己 烷 溶 液， 20mL) 加 至 2- 丁 酰 氨 基 -3- 巯基丙酸乙酯 ( 实施例 56， 步骤 a)(3g) 的乙醇 (20mL) 溶液中， 且将所得混合物搅 拌过夜。蒸发溶剂， 且残余物与甲苯共沸 2 次。将残余物重新溶解在乙腈 (50mL) 中， 加入 二氧化锰 (11.9g)， 且将混合物加热回流过夜。反应混合物通过硅藻土垫来过滤。滤垫用 MeCN(3×100mL) 洗涤。 蒸发合并的滤液和洗涤液， 且残余物经硅胶色谱 ( 用 9 ∶ 1 异己烷∶ 乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。 1 CDCl3)δ8.05(s， 1H)， 4.42(q， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 3.04(t， J＝ 收率为 0.24g。 H NMR(400MHz， 7.7Hz， 2H)， 1.89-1.77(m， 2H)， 1.40(t， J ＝ 7.0Hz， 3H)， 1.02(t， J ＝ 7.4Hz， 3H)。

    [1442] c)2- 丙基噻唑 -4- 甲酸

    [1441] 将氢氧化锂一水合物 (0.2g) 加至 2- 丙基噻唑 -4- 甲酸乙酯 ( 实施例 56， 步骤 b)(0.24g) 在 THF(4mL) 和水 (1mL) 的混合物中的溶液中。将所得悬浮液在 RT 搅拌过夜。 反应混合物用 HCl 水溶液 (2M， 3mL) 酸化， 且蒸发。将残余物在盐水 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 之间分配。分离各层， 且水相用乙酸乙酯 (2×20mL) 萃取。合并的有机溶液用硫酸 钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.17g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ12.91(s， 1H)， 8.31(s， 1H)， 2.96(t， J ＝ 7.4Hz， 2H)， 1.79-1.68(m， 2H)， 0.95(t， J ＝ 7.4Hz， 3H)。

    [1445] d)(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1446] 将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.25g) 加 至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 55， 步骤 c)(0.16g)、 2- 丙基噻唑 -4- 甲酸 ( 实施例 56， 步骤 c)(0.09g) 和三乙胺 (0.29mL) 的 DMF(7mL) 溶液中， 且将所得黄色溶液搅拌 30min。将混合物在乙酸乙酯 (100mL) 和盐水 (100mL) 之间分配。分离有机相， 用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发溶 剂。 所得胶状物经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸 乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且蒸发混合物， 得 1 到副标题化合物， 其为洁净胶状物。 收率为 0.14g。 m/z 462(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.89(s， 1H)， 6.95(s， 1H)， 6.89(s， 1H)， 6.86(s， 1H)， 4.31(t， J ＝ 4.7Hz， 1H)， 3.69-3.59(m， 8H)， 3.44(s， 2H)， 2.98(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 2.72(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.43-2.28(m， 4H)， 1.82-1.66(m， 4H)， 1.59-1.50(m， 2H)， 0.97(t， J ＝ 7.3Hz， 3H)。

    [1448] e)(R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(2- 丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1447] 在 0℃将 TFA(0.023mL) 加至 (9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 56， 步骤 d)(0.14g) 的

    [1450] DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.19g)。将所得黄色 溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.017mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.12g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.029g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸 TM 发。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合 并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率 1 为 0.077g。m/z670(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.93(s， 1H)， 7.29-7.15(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.95-4.88(m， 1H)， 4.28-4.21(m， 2H)， 3.73-3.61(m， 6H)， 3.27(t， J ＝ 7.9Hz， 2H)， 3.16-2.93(m， 10H)， 2.05-1.95(m， 2H)， 1.83-1.70(m， 4H)， 0.96(t， J ＝ 7.3Hz， 3H)。 5 个可交换的质子没有观察。

    [1451] 实施例 57

    [1452] (R)-7-(2-(3-((4-(2- 环丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-5- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1453] a)2-( 环丙烷甲酰氨基 )-3- 巯基丙酸乙酯在 0℃将环丙烷甲酰氯 (3.1mL) 加至三乙胺 (4.68mL) 和 2- 氨基 -3- 巯基丙酸乙 酯盐酸盐 (5.2g) 的 DCM(200mL) 悬浮液中。将所得混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。反应混 合物用乙醇淬灭， 且蒸发溶剂。将残余物悬浮在乙酸乙酯 (200mL) 中， 用饱和碳酸氢钠溶 液 (2×150mL)、 HCl 水溶液 (2M， 2×150mL) 和盐水 (150mL) 洗涤， 然后用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发。所得白色固体经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯洗脱 ) 纯化， 得到副标题 1 化合物， 其为白色固体。收率为 5g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ8.51(d， J ＝ 7.7Hz， 1H)，

    [1456] 4.44(td， J ＝ 7.5， 5.3Hz， 1H)， 4.17-4.05(m， 2H)， 2.91-2.67(m， 2H)， 2.53-2.52(m， 1H)， 1.78-1.60(m， 1H)， 1.19(t， J ＝ 6.8Hz， 3H)， 0.71-0.66(m， 4H)。

    [1457] b)2- 环丙基噻唑 -4- 甲酸乙酯

    [1458] 将 2-( 环丙烷甲酰氨基 )-3- 巯基丙酸乙酯 ( 实施例 57， 步骤 a)(5g) 和甲苯磺酸 (tosic acid)(0.875g) 的甲苯 (100mL) 溶液在迪安 - 斯托克 (Dean and Stark) 条件下加 热回流过夜。冷却反应混合物， 甲苯溶液用饱和碳酸氢钠溶液 (3×100mL) 洗涤， 用硫酸钠 干燥， 过滤， 且蒸发。将所得褐色胶状物重新溶解在乙腈 (100mL) 中。加入二氧化锰 (40g)， 且将混合物加热回流过夜。反应混合物通过硅藻土来过滤， 且滤垫用 MeCN(3×100mL) 洗 涤。 蒸发合并的滤液和洗涤液， 且残余物经硅胶色谱 ( 用 9 ∶ 1 至 4 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯 梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收 1 CDCl3)δ7.94(s， 1H)， 4.40(q， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 2.45-2.37(m， 率为 0.15g。 H NMR(400MHz， 1H)， 1.39(t， J ＝ 7.2Hz， 3H)， 1.20-1.04(m， 4H)。

    [1460] c)2- 环丙基噻唑 -4- 甲酸

    [1459] 将氢氧化锂一水合物 (0.13g) 加至 2- 环丙基噻唑 -4- 甲酸乙酯 ( 实施例 57， 步 骤 b)(0.15g) 在 THF(8mL) 和水 (2mL) 的混合物中的溶液中， 且将所得混合物搅拌过夜。反 应混合物用 HCl 水溶液 (2M， 3mL) 酸化， 且蒸发溶剂。将残余物在盐水 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 之间分配。分离各层， 且水相用乙酸乙酯 (2×30mL) 萃取。合并的有机溶液用硫酸 1 钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为灰白色固体。 收率为 0.12g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ12.88(s， 1H)， 8.19(s， 1H)， 2.48-2.37(m， 1H)， 1.18-1.09(m， 2H)， 1.01-0.94(m， 2H)。

    [1463] d)(2- 环丙基噻唑 -4- 基 )(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [1462] 将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.34g) 加 至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 55， 步骤 c)(0.21g)、 2- 环丙基噻唑 -4- 甲酸 ( 实施例 57， 步骤 c)(0.12g) 和三乙胺 (0.38mL) 的 DMF(7mL) 溶液中， 且将所得黄色溶液搅拌 30min。 将混合物在乙酸乙酯和盐水 (100mL) 之 间分配， 有机层用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发溶剂。所得胶状物经

    [1465] 硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯 度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合 1 物， 其为洁净胶状物。 收率为 0.15g。 m/z 460(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ ) δ 7.79(s ， 1H) ， 6.96(s ， 1H) ， 6.90(s ， 1H) ， 6.86(s ， 1H) ， 4.35(s ， 1H) ， 3.67-3.56(m ， 8H) ， 3.44(s， 2H)， 2.72(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 2.46-2.30(m， 5H)， 1.75-1.66(m， 2H)， 1.58-1.47(m， 2H)， 1.17-1.10(m， 2H)， 1.01-0.94(m， 2H)。

    [1466] e)(R)-7-(2-(3-((4-(2- 环丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-5- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1467] 在 0 ℃将三氟乙酸 (0.025mL) 加至 (2- 环丙基噻唑 -4- 基 )(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 57， 步骤 d) (0.15g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.21g)。 将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢 钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫 酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.019mL) 和 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.13g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼 氢化钠 (0.031g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的 馏分， 且真空蒸发。 经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进 一步纯化。 合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白 色固体。收率为 0.085g。m/z668(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.81(s， 1H)， 7.28-7.16(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.97-4.86(m， 1H)， 4.26(s， 2H)， 3.72-3.58(m， 6H)， 3.31-2.99(m， 10H)， 2.06-1.92(m， 2H)， 1.82-1.68(m， 2H)， 1.19-0.90(m， 4H)。1 个质子由于 DMSO 而模糊， 且 6 个可交换的质子没有观察。

    [1469] 实施例 58

    [1470] (R)-7-(2-(3-((4-(2- 环丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-5- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1468] a)2-( 环丁烷甲酰氨基 )-3- 巯基丙酸乙酯将三乙胺 (15mL) 加至环丁烷甲酸 (2.57mL) 和 2- 氨基 -3- 巯基丙酸乙酯盐酸盐 (5g) 的 DMF(40mL) 悬浮液中。 将所得混合物在冰浴中冷却， 且滴加 T3P 溶液 ( 浓度为 1.57M 的 THF 溶液， 20.6mL)。将所得混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。反应混合物用饱和碳酸氢 钠溶液 (50mL) 淬灭， 且分离各层。水相用 DCM(2×100mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。所得白色固体经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 至 1 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其 1 D6-DMSO)δ8.05(d， J 为澄清油状物。 收率为 3.20g。 m/z 230(M-H) (APCI)。H NMR(400MHz， ＝ 7.9Hz， 1H)， 4.41-4.32(m， 1H)， 4.14-4.05(m， 2H)， 2.89-2.68(m， 2H)， 2.21-1.70(m， 7H)， 1.18(t， J ＝ 7.1Hz， 3H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [1475] b)2- 环丁基噻唑 -4- 甲酸乙酯

    [1474] 将 HCl 溶液 ( 浓度为 4M 的 1， 4- 二氧杂环己烷溶液， 3.46mL) 加至 2-( 环丁烷甲酰 氨基 )-3- 巯基丙酸乙酯 ( 实施例 58， 步骤 a)(3.2g) 的乙醇 (20mL) 溶液中， 且将所得混合 物搅拌过夜。蒸发溶剂， 且残余物与甲苯共沸 2 次。将残余物重新溶解在乙腈 (50mL) 中， 加入二氧化锰 (12g)， 且将混合物加热回流过夜。反应混合物通过硅藻土垫来过滤， 然后所 述硅藻土垫用 MeCN(3×100mL) 洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液， 且残余物经硅胶色谱 ( 用 9 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其 1 为澄清油状物。收率为 0.48g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ8.06(s， 1H)， 4.42(q， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 4.00-3.89(m， 1H)， 2.56-2.45(m， 2H)， 2.41-2.29(m， 2H)， 2.16-1.90(m， 2H)， 1.40(t， J ＝ 7.0Hz， 3H)。

    [1477] 182c)2- 环丁基噻唑 -4- 甲酸102083839 A CN 102083847说明书174/380 页将氢氧化锂一水合物 (0.38g) 加至 2- 环丁基噻唑 -4- 甲酸乙酯 ( 实施例 58， 步骤 b)(0.48g) 在 THF(8mL) 和水 (2mL) 的混合物中的溶液中。将所得悬浮液在 RT 搅拌过夜。 反应混合物用 HCl 水溶液 (2M， 5mL) 酸化， 且蒸发至干。将残余物在盐水 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 之间分配。分离各层， 且水相用乙酸乙酯 (2×20mL) 萃取。合并的有机溶液用硫酸 钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.38g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ12.91(s， 1H)， 8.32(s， 1H)， 3.94-3.83(m， 1H)， 2.46-2.35(m， 2H)， 2.32-2.21(m， 2H)， 2.09-1.97(m， 1H)， 1.94-1.81(m， 1H)。

    [1481] d)(2- 环丁基噻唑 -4- 基 )(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [1480] 将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.32g) 加 至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 55， 步骤 c)(0.2g)、 2- 环丁基噻唑 -4- 甲酸 ( 实施例 58， 步骤 c)(0.12g) 和三乙胺 (0.36mL) 的 DMF(7mL) 溶液中， 且将所得黄色溶液搅拌 30min。将混合物在乙酸乙酯和盐水 (100mL) 之间分配， 且分离各层。有机相用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发溶剂。 所得胶状物经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸 乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且蒸发溶剂， 得到 1 副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 0.18g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.91(s， 1H)， 6.95(s， 1H)， 6.89(s， 1H)， 6.86(s， 1H)， 4.36-4.25(m， 1H)， 3.87(q， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 3.70-3.57(m， 8H)， 3.43(s， 2H)， 2.72(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 2.46-2.26(m， 8H)， 2.11-1.91(m， 2H)， 1.76-1.66(m， 2H)， 1.60-1.51(m， 2H)。

    [1484] e)(R)-7-(2-(3-((4-(2- 环丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-5- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1483] 在 0℃将 TFA(0.026mL) 加至 (2- 环丁基噻唑 -4- 基 )(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 58， 步骤 d)(0.16g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.22g)。将所得 黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸 乙酯 (20mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.019mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.13g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.032g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸 TM 发。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合 并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率 1 为 0.12g。m/z682(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.26(s， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.30-7.17(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.99-4.89(m， 1H)， 6H)， 3.32-2.99(m， 10H)， 2.47-2.39(m， 4.35-4.25(m， 2H)， 3.93-3.81(m， 1H)， 3.75-3.62(m， 2H)， 2.31-2.20(m， 2H)， 2.10-1.72(m， 6H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [1487] 实施例 59

    [1488] (R)-7-(2-(3-((4-(2- 环戊基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-5- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1489] a)2-( 环戊烷甲酰氨基 )-3- 巯基丙酸乙酯将 CDI(8.5g) 加至环戊烷甲酸 (5.2mL) 的 DMF(40mL) 溶液中。将所得混合物搅 拌 1h， 且在冰浴中冷却。加入 2- 氨基 -3- 巯基丙酸乙酯盐酸盐 (8.88g)， 接着加入三乙胺 (10mL)。将所得混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 淬灭， 且分离各层。水层用 DCM(2×100mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (100mL) 洗涤， 用

    [1492] 硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。所得固体经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 至 1 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯梯 度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 1 7.7g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.15(d， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 4.41-4.34(m， 1H)， 4.14-4.05(m， 2H)， 2.89-2.61(m， 3H)， 1.81-1.45(m， 9H)， 1.18(t， J ＝ 7.0Hz， 3H)。

    [1493] b)2- 环戊基 -4， 5- 二氢噻唑 -4- 甲酸乙酯

    [1494] 将甲苯磺酸一水合物 (0.78g) 加至 2-( 环戊烷甲酰氨基 )-3- 巯基丙酸乙酯 ( 实施 例 59， 步骤 a)(5g) 的甲苯 (40mL) 溶液中。将所得混合物在迪安 - 斯托克条件下加热回流 6h。 冷却反应混合物， 然后甲苯溶液用饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 洗涤， 且蒸发溶剂。 残余物 与甲苯共沸。所得白色固体经硅胶色谱 ( 用 9 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。合并含 1 有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。 收率为 3.2g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ5.08-4.99(m， 1H)， 4.26(q， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 3.56-3.44(m， 2H)， 3.08-2.99(m， 1H)， 2.03-1.93(m， 2H)， 1.83-1.70(m， 4H)， 1.64-1.59(m， 2H)， 1.31(t， J ＝ 7.2Hz， 3H)。

    [1496] c)2- 环戊基噻唑 -4- 甲酸乙酯

    [1495] 将二氧化锰 (24g) 加至 2- 环戊基 -4， 5- 二氢噻唑 -4- 甲酸乙酯 ( 实施例 59， 步 骤 b)(3.2g) 的乙腈 (100mL) 溶液中， 且将所得混合物加热回流过夜。冷却反应混合物， 且 通过硅藻土垫来过滤。滤垫用乙腈 (2×100mL) 洗涤， 且蒸发合并的滤液和洗涤液。残余 物经硅胶色谱 ( 用 9 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 蒸发， 且 重新溶解在乙醇 (20mL) 中。加入钯 / 碳 (5 ％， 0.66g) 的水 (0.5mL) 浆液， 且将所得悬浮 液在压力为 5 巴的氢气气氛下搅拌 2h。混合物通过硅藻土垫来过滤， 所述硅藻土垫用乙醇 (3×50mL) 洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 1 0.9g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ8.04(s， 1H)， 4.41(q， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 3.60-3.48(m， 1H)， 2.29-2.18(m， 2H)， 1.89-1.67(m， 6H)， 1.40(t， J ＝ 7.0Hz， 3H)。

    [1499] d)2- 环戊基噻唑 -4- 甲酸

    [1498] 将氢氧化锂一水合物 (0.67g) 加至 2- 环戊基噻唑 -4- 甲酸乙酯 ( 实施例 59， 步 骤 c)(0.9g) 在 THF(40mL) 和水 (10mL) 的混合物中的溶液中。将所得混合物搅拌过夜。反 应混合物用 HCl 水溶液 (2M， 10mL) 酸化， 且蒸发溶剂。将残余物在盐水 (50mL) 和乙酸乙酯 (50mL) 之间分配， 且分离各层。水相用乙酸乙酯 (2×50mL) 萃取。合并的有机溶液用硫酸 1 钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为浅黄色固体。 收率为 0.77g。 H NMR(400MHz，

    [1501] D6-DMSO)δ12.89(s， 1H)， 8.30(s， 1H)， 3.51-3.41(m， 1H)， 2.17-2.07(m， 2H)， 1.82-1.59(m， 6H)。

    [1502] e)(2- 环戊基噻唑 -4- 基 )(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [1503] 将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.33g) 加 至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 55， 步骤 c)(0.21g)、 2- 环戊基噻唑 -4- 甲酸 ( 实施例 59， 步骤 d)(0.13g) 和三乙胺 (0.38mL) 的 DMF(7mL) 溶液中， 且将所得黄色溶液搅拌 30min。 将混合物在乙酸乙酯和盐水 (100mL) 之 间分配， 有机相用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发溶剂。所得胶状物经 硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯 度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合 1 物， 其为洁净胶状物。 收率为 0.19g。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.89(s， 1H)， 6.95(s， 1H)， 6.88(s， 1H)， 6.86(s， 1H)， 4.30(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.69-3.61(m， 8H)， 3.43(s， 2H)， 2.76-2.69(m， 3H)， 2.42-2.28(m， 4H)， 2.18-2.06(m， 2H)， 1.86-1.64(m， 8H)， 1.60-1.49(m， 2H)。

    [1505] f)(R)-7-(2-(3-((4-(2- 环戊基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-5- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1504] 在 0 ℃将三氟乙酸 (0.028mL) 加至 (2- 环戊基噻唑 -4- 基 )(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 59， 步骤 e) (0.18g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.23g)。 将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢 钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫 酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.021mL) 和 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134，

    [1507] 实施例 1， 步骤 d)(0.14g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼 氢化钠 (0.034g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物 TM 的馏分， 且真空蒸发。 经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来 进一步纯化。 合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为 1 白色固体。收率为 0.7g。m/z696(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.92(s， 1H)， 7.28-7.15(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.97-4.86(m， 1H)， 4.30-4.20(m， 2H)， 3.74-3.58(m， 6H)， 3.52-3.42(m， 1H)， 3.27(t， J ＝ 7.9Hz， 2H)， 3.19-2.96(m， 8H)， 2.18-1.93(m， 4H)， 1.84-1.59(m， 8H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1508] 实施例 60

    [1509] (R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(4- 甲 基 噻 吩 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1510] a)(9-(3- 氟 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(4- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮将 2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 41， 步骤 d)(0.17g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至氨 (35％ 水溶液， 15mL) 中， 且将反应混合物在 20℃搅拌 1 小时。将混合物减压蒸发至干， 且残余物 与乙腈共沸 3 次。将残余物溶解在 DMF(6mL) 中， 且用 4- 甲基噻吩 -2- 甲酸 (0.060g) 处 理， 接着用三乙胺 (0.176mL) 处理， 然后用 HATU(0.208g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅 拌 1 小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2.5％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％ 三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.120g。m/ z 433(M+H)+(APCI)。

    [1514] b)(R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(4- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮

    [1513] 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1515] (9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (4- 甲基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 60， 步骤 a)(0.120g) 的 DCM(20mL) 溶液用三氟乙酸 (0.021ml) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.153g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸 氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.016ml) 加至该溶液中， 然后减压除去溶 剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.109g) 和乙酸 (0.016ml) 且用氰基硼氢化钠 (0.035g) 处理。移开 的甲醇 (15mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 冷却浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。 混合物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。有机层用硫酸钠 干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得 1 到标题化合物。收率为 0.075g。m/z 641(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ ) δ7.30-7.17(m， 5H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.94-4.89(m， 1H)， 4.27(s， 2H)， 3.73-3.69(m， 2H)， 3.67-3.63(m， 2H)， 3.54(s， 2H)， 3.27(t， J ＝ 7.9Hz， 2H)， 3.19-2.99(m， 8H)， 2.22(s， 3H)， 2.05-1.97(m， 2H)， 1.82-1.71(m， 2H)。6 个可交换的质子没 有观察。

    [1517] 实施例 61

    [1518] (R)-7-(2-(4- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1516] a)5-( 羧基甲基 )-2- 氯苯甲酸将氢氧化钾 (0.969g) 的水 (10mL) 溶液加至 2- 氯 -5-( 氰基甲基 ) 苯甲酸 (1.25g) 的乙醇 (10mL) 溶液中， 且将所得混合物加热回流 2.25 小时， 然后冷却。真空浓缩混合物以 除去乙醇， 然后用水稀释， 且用乙酸乙酯洗涤 2 次。弃去有机相， 同时水相用浓盐酸酸化至 pH 1， 且用乙酸乙酯萃取 2 次。合并的萃取物用无水硫酸镁干燥， 且真空浓缩， 得到副标题 1 化合物， 其为褐色胶状物。收率为 1.38g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ12.93( 宽单峰， 2H)， 7.69(d， J ＝ 2.1Hz， 1H)， 7.48(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 7.42(dd， J ＝ 8.3， 2.2Hz， 1H)， 3.66(s， 2H)。

    [1523] b)2-(4- 氯 -3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 乙醇

    [1522] 在室温历时 5 分钟将硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 6.50mL) 逐份加至 5-( 羧基甲基 )-2- 氯苯甲酸 ( 实施例 61， 步骤 a)(1.37g) 的无水 THF(20mL) 溶液 中。 将所得冒泡溶液在室温搅拌 1.5 小时， 然后加热至回流且保持 1 小时。 冷却的混合物通 过历时 5 分钟滴加甲醇 (5mL) 来淬灭。将溶液在室温搅拌 2 小时， 然后通过快速硅胶色谱 ( 用 5％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。收率为 0.933g。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.36(d， J ＝ 2.1Hz， 1H)， 7.30(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 7.11(dd， J＝ 8.1， 2.2Hz， 1H)， 4.77(s， 2H)， 3.87(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 2.86(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)。2 个可交换 的质子没有观察。

    [1526] c)2- 氯 -5-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛

    [1525] 将二氧化锰 (IV)(1.00g) 加至 2-(4- 氯 -3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 61， 步骤 b)(0.200g) 的 DCM(5mL) 溶液中， 且将所得悬浮液在室温搅拌过夜。 然后混合物通过硅 藻土来过滤， 且残余物用 DCM 充分洗涤。真空浓缩滤液和洗涤液， 得到副标题化合物， 其为 1 无色油状物。收率为 0.197g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ10.47(s， 1H)， 7.80(d， J ＝ 2.1Hz， 1H)， 7.42(d， J ＝ 2.1Hz， 1H)， 7.41(s， 1H)， 3.89( 宽 三 重 峰， J ＝ 5.9Hz， 2H)， 2.90(t， J＝ 6.4Hz， 2H)， 1.42( 宽单峰， 1H)。

    [1529] d)(9-(2- 氯 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1528] (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟 乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.294g) 的 NMP(2mL) 溶液用乙酸 (0.039mL) 处理， 且搅拌 5 分 钟。然后加入 2- 氯 -5-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 61， 步骤 c)(0.189g) 的 NMP(3mL) 溶液， 将所得溶液搅拌 1 小时， 然后用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.217g) 处理。将混合物在室 温搅拌过夜， 然后倒入饱和碳酸氢钠中， 且用乙酸乙酯萃取 2 次。合并的萃取物用水洗涤 3 次， 用盐水洗涤 1 次， 然后用无水硫酸镁干燥， 且通过快速硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 2 ∶ 97 三乙 胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色胶状物。收率为 0.238g。 1 HNMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.91(s， 1H)， 7.29(d， J ＝ 1.8Hz， 1H)， 7.25(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.09(dd， J ＝ 8.2， 2.1Hz， 1H)， 4.29(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.70-3.59(m， 8H)， 3.51(s， 2H)， 3.32( 七 重 峰， J ＝ 6.9Hz， 1H)， 2.71(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.45-2.29(m， 4H)， 1.75-1.66(m， 2H)， 1.60-1.51(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。

    [1532] e)2-(4- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛

    [1533] 将 (9-(2- 氯 -5-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 ) 甲 酮 ( 实 施 例 61， 步 骤 d)(0.230g) 的 DCM(5mL) 溶 液在冰 - 水中冷却， 用三氟乙酸 (0.074mL) 处理， 且搅拌 5 分钟。加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.313g)， 然后从冷却浴中取出混合物， 且在室温搅拌 40 分钟。溶液用饱和硫代硫酸钠溶 液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (5mL) 稀释， 且将所得混合物剧烈搅拌 10 分 钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机相用盐水洗涤， 用乙酸 (0.1mL) 酸化， 用 无水硫酸镁干燥， 且真空浓缩， 得到粗副标题化合物， 其为黄色泡沫状物。收率为 0.274g。 m/z476(M+H)+(APCI)。

    [1535] f)(R)-7-(2-(4- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1534] (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.225g) 的甲醇 (3mL) 溶液用乙酸 (0.029mL) 处理， 且

    [1537] 搅拌 5 分钟。然后加入 2-(4- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 61， 步骤 e)(0.274g) 的甲醇 (4mL) 溶液， 将所得混合物在室温搅拌 5 分钟， 然后在冰 - 水中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.051g) 处理。移开冷却浴， 且将混合物在室温搅拌 140 分钟， 然后再用氰基硼氢化钠 (0.055g) 处理。然后将混合物搅拌过夜。第二天上午， 真空浓缩混合物。将残余物溶解在 甲醇 (1.5mL)、 乙腈 (1.5mL) 和水 (1.5mL) 的混合物中， 且经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。真空浓缩含有产物的馏分， 且与乙腈共蒸发 3 次， 得到无色残余物。残余物用乙醚研磨， 得到固体， 过滤收集所述固体， 用乙醚洗涤， 且在室 温真空干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.062g。m/z 686(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.93(s， 1H)， 7.52-7.43(m， 2H)， 7.35-7.26(m， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.89(dd， J ＝ 7.8， 5.5Hz， 1H)， 3.76-3.60(m， 6H)， 3.36-3.16(m， 3H)， 3.15-2.83(m， 8H)， 2.02-1.84(m， 2H)， 1.80-1.63(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。1 个亚甲基 (2 个质子 ) 是非常宽的， 且 6 个可交换的质子没有观察。

    [1538] 实施例 62

    [1539] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-((5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 萘 -1- 基 ) 甲 基 氨 基 ) 乙 基 ) 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1540] a)(9-((5-( 溴 甲 基 ) 萘 -1- 基 ) 甲 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1541] 将三乙胺 (0.185mL) 加至 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.225g) 的乙腈 (5mL) 悬浮液中， 得 到无色溶液， 将所述溶液在室温搅拌过夜， 然后真空浓缩。将残余物溶解在 NMP(5mL) 中， 且再用三乙胺 (0.111mL) 处理。同时， 将 1， 5- 二 ( 溴甲基 ) 萘 (0.500g) 在乙腈 (5mL) 和 NMP(5mL) 中的悬浮液在室温搅拌过夜， 然后真空浓缩以除去乙腈， 得到溶液。然后历时 35 分钟滴加上述胺溶液， 再用 NMP(1mL) 完成加入。 将所得溶液搅拌 75 分钟， 然后倒入水中， 且 用乙醚萃取 3 次。合并的萃取物用水洗涤 3 次， 用盐水洗涤 1 次， 然后用无水硫酸镁干燥，

    [1543] 且通过快速硅胶色谱 ( 用三乙胺∶二氯甲烷∶乙酸乙酯 (1 ∶ 49 ∶ 50) 洗脱 ) 纯化， 得到 副标题化合物， 其为白色泡沫状物。收率为 0.132g。m/z542/544(M+H)+(APCI)。

    [1544] b)(R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-((5-((4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 萘 -1- 基 ) 甲基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1545] 将 三 乙 胺 (0.16mL) 加 至 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.188g) 的甲醇 (5mL) 溶液中， 得到悬浮液， 真空浓缩所述悬浮液， 且重新溶解在 NMP(4mL) 中。再加入三乙胺 (0.16mL)， 且历时 30 分钟滴加 (9-((5-( 溴甲基 ) 萘 -1- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 62， 步骤 a)(0.126g) 的 NMP(3mL) 溶液， 再用 NMP(1mL) 完成加入。将所得溶液在室温搅拌过夜。然后过滤溶液， 用三氟乙酸 TM (0.27mL) 酸化， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。

    [1546] 真空浓缩含有产物的馏分， 与乙腈共蒸发 1 次， 且与甲醇共蒸发 2 次。 残余物用乙醚研磨， 得 到固体， 过滤分离所述固体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 得到标题化合物， 其为浅黄色 1 固体。收率为 0.056g。m/z 688(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ8.42(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 8.31( 宽二重峰， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 7.93(s， 1H)， 7.87-7.61(m， 4H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.76(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 5.00-4.94(m， 1H)， 4.75(dd， J ＝ 23.6， 14.1Hz， 2H)， 3.80-3.56(m， 6H)， 3.45-2.99(m， 9H)， 2.08-1.87(m， 2H)， 1.81-1.58(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1547] 实施例 63

    [1548] (R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基磺酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1549] a)2-(3- 氟 -5-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基磺酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醇

    [1550] 将 5- 甲基噻吩 -2- 磺酰氯 (0.15g) 的 DCM(3mL) 溶液滴加至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-5- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 55， 步骤 c)(0.21g) 和 N- 乙基 -N- 异丙基丙 -2- 胺 (0.14mL) 的 DCM(20mL) 溶液中。 将所得混合物搅拌 1h， 且蒸发 溶剂。将残余物在乙酸乙酯 (50mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 之间分配。分离各层， 且 水层用乙酸乙酯 (2×50mL) 萃取。合并的有机层用盐水 (50mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其 1 为黄色胶状物。收率为 0.21g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.46(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 7.02(dd， J ＝ 3.6， 1.0Hz， 1H)， 6.97(s， 1H)， 6.94(s， 1H)， 6.91(s， 1H)， 4.64(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.73-3.67(m， 2H)， 3.63-3.57(m， 2H)， 3.44(s， 2H)， 2.88-2.83(m， 2H)， 2.74-2.69(m， 4H)， 2.53(s， 3H)， 2.44-2.35(m， 2H)， 2.31-2.22(m， 2H)， 1.80-1.72(m， 2H)， 1.60-1.51(m， 2H)。

    [1553] b)(R)-7-(2-(3- 氟 -5-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基磺酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1552] 在 0℃将 TFA(0.033mL) 加至 2-(3- 氟 -5-((4-(5- 甲基噻吩 -2- 基磺酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 63， 步骤 a)(0.2g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.27g)。将所得 黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸 乙酯 (20mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.024mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步 骤 d)(0.17g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。 然后加入氰基硼氢化钠 (0.04g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸 TM 发。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合 并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。收 1 率为 0.7g。m/z677(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.43(d， J ＝ 3.7Hz， 1H)， 7.30-7.16(m， 3H)， 7.00-6.96(m， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.92(dd， J ＝ 7.9， 5.4Hz， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.79-3.71(m， 2H)， 3.32-3.23(m， 2H)， 3H)， 2.13-2.02(m， 2H)， 1.90-1.74(m， 2H)。6 个可 3.17-2.93(m， 10H)， 2.85(s， 2H)， 2.53(s， 交换的质子没有观察。

    [1556] 实施例 64

    [1557] (R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(2-(3-((4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1558] a)(9-(3-(2， 2- 二 乙 氧 基 乙 氧 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮将甲磺酰氯 (0.110mL) 滴加至在 0℃搅拌的 (3-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 ) 苯基 ) 甲 醇 ( 实施例 38， 步骤 a)(0.307g) 和三乙胺 (0.196mL) 的 DCM(30mL) 溶液中。将所得混合物

    [1561] 在 20℃搅拌 1 小时。混合物用水洗涤， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。将残 余物溶解在乙腈 (30mL) 中， 且用三乙胺 (1mL) 处理， 接着用 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.400g) 处理。将混合物在 20℃搅拌 2 小时。减压除去溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分 配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2.5％ 甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化 合物。收率为 0.360g。m/z 532(M+H)+(APCI)。

    [1562] b)2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙醛

    [1563] (9-(3-(2， 2- 二 乙 氧 基 乙 氧 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 64， 步骤 a)(0.36g) 的乙酸 (20mL) 溶液 用水 (20mL) 处理， 然后在氮气下将反应混合物在 65℃加热 18 小时。 减压蒸发溶剂， 且残余 物与甲苯共沸， 得到副标题化合物。收率为 0.31g。直接使用。

    [1565] c)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1564] 2-(3-((4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 苯 氧 基 ) 乙 醛 ( 实 施 例 64， 步 骤 b)(0.31g) 的 甲 醇 (10mL) 溶 液 用 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.267g) 处理， 接着用乙酸 (0.039mL) 处理， 且将混合物在冰浴中冷却。 加入氰基硼氢化钠 (0.085g)， 且将混合物在室温搅拌 4 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗 涤。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备 TM 性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的 馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.2g。m/z 668(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.39(t， J ＝ 8.0Hz， 1H)， 7.16-7.13(m，2H)， 7.09-7.05(m， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.98-4.93(m， 1H)， 4.36-4.28(m， 4H)， 3.70(s， 4H)， 3.65(s， 2H)， 3.47-3.42(m， 2H)， 3.34-3.26(m， 1H)， 3.23-3.05(m， 6H)， 2.09-1.98(m， 2H)， 1.84-1.71(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 7.1Hz， 6H)。5 个可交 换的质子没有观察。

    [1568] 实施例 65

    [1569] (R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(2-(3-((4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基硫基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1570] a)3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基硫基 ) 苯甲酸将 (2- 溴 乙 氧 基 )( 叔 丁 基 ) 二 甲 基 甲 硅 烷 (1.48mL) 滴 加 至 3- 巯 基 苯 甲 酸 (1.07g) 和碳酸钾 (1.91g) 的 DMF(15mL) 悬浮液中。将所得悬浮液搅拌 2h。反应混合物 通过滴加 HCl 水溶液 (2M， 10mL) 来小心酸化， 且倒入水 (100mL) 中。所得水层用乙酸乙酯 (3×100mL) 萃取。合并的有机层用盐水 (50mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到 1 副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 2.8g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ13.11(s， 1H)， 7.89(t， J ＝ 1.7Hz， 1H)， 7.79-7.74(m， 1H)， 7.66-7.61(m， 1H)， 7.47(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 3.82(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)， 3.19(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)， 0.87(s， 9H)， 0.05(s， 6H)。

    [1574] b)2-(3-( 羟基甲基 ) 苯基硫基 ) 乙醇

    [1573] 将 硼 烷 - 二 甲 硫 醚 络 合 物 ( 浓 度 为 2M 的 THF 溶 液， 17.3mL) 滴 加 至 冰 冷 的 3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基硫基 ) 苯甲酸 ( 实施例 65， 步骤 a)(2.16g) 的 THF(50mL) 溶液中。将反应混合物温热至 RT， 然后加热回流 2h。将反应混合物在冰浴中冷 却， 且滴加 HCl 水溶液 (2M， 50mL)。将所得混合物搅拌过夜。浓缩反应混合物至其原体积的 一半， 且所得水层用 DCM(3×100mL) 萃取。合并的有机层用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干 燥， 过滤， 且蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯至 100％乙酸乙酯梯度 洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 1 0.77g。H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.29-7.23(m， 2H)， 7.21-7.17(m， 1H)， 7.13-7.09(m， 1H)， 5.20(t， J ＝ 5.8Hz， 1H)， 4.92(t， J ＝ 5.6Hz， 1H)， 4.47(d， J ＝ 5.9Hz， 2H)， 3.59-3.53(m，

    [1576] 2H)， 3.02(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)。

    [1577] c)3-(2- 羟基乙基硫基 ) 苯甲醛

    [1578] 将二氧化锰 (1.36g) 加至 2-(3-( 羟基甲基 ) 苯基硫基 ) 乙醇 ( 实施例 65， 步骤 b)(0.29g) 的 DCM(10mL) 溶液中。将所得混合物加热回流 4h， 冷却， 且通过硅藻土来过滤。 滤垫用 DCM(3×20mL) 洗涤。合并滤液和洗涤液， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色胶状 物。收率为 0.2g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ9.99(s， 1H)， 7.84(s， 1H)， 7.71-7.64(m， 2H)， 7.54(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 4.99(t， J ＝ 5.6Hz， 1H)， 3.64-3.57(m， 2H)， 3.13(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)。

    [1580] d)(9-(3-(2- 羟基乙基硫基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1581] 将 3-(2- 羟基乙基硫基 ) 苯甲醛 ( 实施例 65， 步骤 c)(0.16g) 加至 (2- 异丙基噻 唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.25g) 和乙酸 (0.046mL) 的 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (5mL) 溶液中， 将所得混合物 搅拌 1h， 且在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.26g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。将反应混合物倒入碳酸氢钠溶液 (20mL) 和水 (80mL) 的混合物中。水相用 乙醚 (3×100mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸 发。粗产物经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏 分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 0.22g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.94-7.83(m， 1H)， 7.28-7.18(m， 3H)， 7.12-7.05(m， 1H)， 4.61-4.53(m， 1H)， 3.70-3.54(m， 8H)， 3.47-3.39(m， 2H)， 3.37-3.27(m， 1H)， 3.06-2.96(m， 2H)， 2.42-2.25(m， 4H)， 1.75-1.65(m， 2H)， 1.59-1.50(m， 2H)， 1.41-1.32(m， 6H)。

    [1583] e)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基硫基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1582] 在 0℃将三氟乙酸 (0.033mL) 加至 (9-(3-(2- 羟基乙基硫基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 65， 步骤 d)(0.22g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.29g)。将所得

    [1585] 黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸 乙酯 (20mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.026mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.15g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.044g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。 经 TM 制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。 合并含有产 物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.54g。 1 m/z684(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.94(s， 1H)， 7.54-7.34(m， 4H)， 6.91(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.76(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.88(dd， J ＝ 8.7， 4.6Hz， 1H)， 4.24(s， 2H)， 3.74-3.61(m， 6H)， 3.38-2.95(m， 11H)， 2.08-1.94(m， 2H)， 1.82-1.68(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1586] 实施例 66

    [1587] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(4- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1588] a)4-(4- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [1590] 将 HATU(0.924g) 一次性加至在 0℃搅拌的 4- 异丙基噻唑 -2- 甲酸 (0.32g)、 1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 12， 步骤 b)(0.547g) 和三乙胺 (0.781mL) 的 DMF(12mL) 溶液中。 将反应混合物在室温搅拌 2 小时。 将混合物在乙酸乙酯和 盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过 快速硅胶色谱 ( 使用 30％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到 1 副标题化合物。 收率为 0.54g。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.50(s， 1H)， 3.77-3.72(m， 2H)， 3.52-3.45(m， 2H)， 3.21-3.13(m， 2H)， 3.12-3.04(m， 1H)， 3.00(s， 4H)， 1.74-1.67(m， 2H)， 1.52-1.43(m， 2H)， 1.39(s， 9H)， 1.26(d， J ＝ 6.8Hz， 6H)。

    [1591] b)(4- 异丙基噻唑 -2- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮4-(4- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔 丁酯 ( 实施例 66， 步骤 a)(0.54g) 的 DCM(20mL) 溶液用三氟乙酸 (5mL) 处理， 且将反应混合 物在 20℃静置 20 分钟。加入甲苯 (40mL)， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次， 得到 副标题化合物。收率为 0.56g。m/z 310(M+H)+(APCI)。

    [1595] c)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (4- 异丙基噻唑 -2- 基 ) 甲酮

    [1594] (4- 异丙基噻唑 -2- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实 施例 66， 步骤 b)(0.28g) 和 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 6， 步骤 a)(0.171g) 的乙 腈 (20mL) 溶液用三乙胺 (0.276mL) 处理， 且将反应混合物在 20℃搅拌 2 小时。减压蒸发 溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2.5％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙 胺 ) 作为溶剂 ) 纯化， 得到副标题化合物。收率为 0.25g。m/z 444(M+H)+(APCI)。

    [1598] d)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(4- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1597] (9-(3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 ) (4- 异丙基噻唑 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 66， 步骤 c)(0.25g) 的 DCM(20mL) 溶液用三氟乙酸 (0.043mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.311g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.032mL) 加至该溶液中， 然后减压除去溶剂。

    [1600] 将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.222g) 和乙酸 (0.032mL) 的甲醇 (20mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.071g) 处理。移开冷却浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合物用 饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且 TM 减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％ 乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需产物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率 1 为 0.18g。m/z 652(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.35(s， 1H)， 7.53(s， 1H)， 7.43-7.32(m， 4H)， 6.93(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.97-4.89(m， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.76(s， 2H)， 4.17-3.30(m， 4H)， 3.28-3.15(m， 4H)， 3.14-2.98(m， 7H)， 2.10-1.97(m， 2H)， 1.87-1.70(m， 2H)， 1.26(d， J ＝ 7.1Hz， 6H)。 5 个可交换的质子没有观察。

    [1601] 实施例 67

    [1602] (R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(2-(2， 2， 2- 三氟乙基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1603] a)3， 3， 3- 三氟丙酰胺在 0 ℃， 3， 3， 3- 三氟丙酸 (4g) 的乙醚 (150mL) 的溶液用五氯化磷 (6.06g) 一次 性处理。将混合物在氮气下加热回流 2.5 小时。将反应混合物冷却至室温。再加入乙醚 (100mL)， 且将混合物在冰浴中冷却。 将氨气鼓泡通过搅拌的混合物且保持 30 分钟。 减压除 去溶剂， 且将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配。 水层用乙酸乙酯重新萃取 2 次， 合并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂， 得到副标题化合物。收率为 3.9g。 直接使用。

    [1607] b)3， 3， 3- 三氟硫代丙酰胺

    [1606] 将五硫化二磷 (1.603g) 一次性加至 3， 3， 3- 三氟丙酰胺 ( 实施例 67， 步骤 a) (3.9g) 的 MTBE(150mL) 溶液中。将反应混合物在 20℃搅拌 20 小时。过滤混合物， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 4g。产物直接用于下一步。

    [1610] c)2-(2， 2， 2- 三氟乙基 ) 噻唑 -4- 甲酸乙酯

    [1611] 将 3， 3， 3- 三氟硫代丙酰胺 ( 实施例 67， 步骤 b)(4g) 和 3- 溴 -2- 氧代丙酸乙酯 (5.45g) 的 THF(120mL) 溶液加热回流 2 小时。减压除去溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和饱 和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快 速硅胶色谱 ( 使用 17％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副 1 标题化合物。收率为 1.9g。m/z240(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ8.23(s， 1H)， 4.45(q， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 3.94(q， J ＝ 10.2Hz， 2H)， 1.42(t， J ＝ 7.0Hz， 3H)。

    [1613] d)2-(2， 2， 2- 三氟乙基 ) 噻唑 -4- 甲酸

    [1612] 在氮气下将 2-(2， 2， 2- 三氟乙基 ) 噻唑 -4- 甲酸乙酯 ( 实施例 67， 步骤 c)(0.3g) 在浓盐酸 (7mL) 和水 (7mL) 中的混合物在 80℃加热 5 小时。在氮气气流下蒸发溶剂， 且将 残余物在乙酸乙酯 (40mL) 和盐水 (3mL) 之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸 1 发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.23g。m/z 210(M-H) (APCI)。 H NMR(300MHz， CDCl3) δ8.36(s， 1H)， 3.95(q， J ＝ 10.0Hz， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [1616] e)2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮

    [1615] 将 2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 48， 步骤 a)(1.05g) 加至 2， 2， 2- 三 氟 -1-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮三氟乙酸盐 ( 实施例 12， 步骤 d)(2.08g) 和乙酸 (0.33mL) 的 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (10mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 15min， 然后在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (1.81g)， 且将混合物搅拌过夜。 将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和水 (100mL) 的混合物中。水层用乙酸乙酯 (3×100mL) 萃取。合并的有机层用水 (50mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯 +5％三乙胺至乙酸乙酯 +5％三 乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。 收率为 1.9g。直接使用。

    [1619] f)2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇

    [1618] 将 ‘880’氨水溶液 (5mL) 加至 2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 67， 步骤 e)(1.9g) 的 甲醇 (25mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 90min， 且蒸发溶剂。残余物经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏 分， 且蒸发， 得到胶状物， 其在静置时固化。白色固体用异己烷研磨， 且用硫酸钠干燥， 得到 1 副标题化合物， 其为白色固体。收率为 1g。m/z309(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO) δ7.24-7.15(m， 2H)， 7.06(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 4.69(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.64-3.54(m， 2H)， 3.53-3.43(m， 4H)， 2.74(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 2.60(t， J ＝ 4.9Hz， 2H)， 2.45-2.35(m， 2H)， 2.34-2.24(m， 2H)， 1.83-1.74(m， 2H)， 1.47-1.36(m， 2H)。2 个质子由于溶剂峰而模糊， 且1 个可交换的质子没有观察。

    [1622] g)(9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2-(2， 2， 2- 三氟乙基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1621] 将 HATU(0.181g) 一次性加至在 0 ℃搅拌的 2-(2， 2， 2- 三氟乙基 ) 噻唑 -4- 甲 酸 ( 实施例 67， 步骤 d)(0.077g)、 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲 基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 67， 步骤 f)(0.113g) 和三乙胺 (0.153mL) 的 DMF(5mL) 溶 液中。将反应混合物在室温搅拌 2 小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用 盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.180g。 m/z 502(M+H)+(APCI)。

    [1625] h)(R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(2-(2， 2， 2- 三氟乙基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1624] (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2-(2， 2， 2- 三氟乙基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 67， 步骤 g)(0.18g) 的 DCM(15mL) 溶 液用三氟乙酸 (0.028mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.198g) 处理， 且将所得混合 物在 20 ℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的 有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.021mL) 加至该溶液 中， 然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙 基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.141g) 和乙酸 (0.021mL) 的甲醇 (15.0mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.045g) 处理。移开冷却浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏 分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.091g。m/z 710(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.15(s， 1H)， 7.52-7.40(m， 2H)， 7.25(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.94-4.89(m， 1H)， 4.29(s， 2H)， 4.20(q， J ＝ 11.0Hz， 2H)， 1.85-1.72(m， 2H)。6 个可交 2H)， 3.74-3.61(m， 6H)， 3.28-3.02(m， 10H)， 2.06-1.96(m， 换的质子没有观察。

    [1628] 实施例 68

    [1629] (R)-7-(2-(3-((4-( 苯并 [b] 噻吩 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1630] a) 苯并 [b] 噻吩 -5- 基 (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [1631] 将 HATU(0.181g) 一 次 性 加 至 在 0 ℃ 搅 拌 的 苯 并 [b] 噻 吩 -5- 甲 酸 (0.065g)、2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 67， 步骤 f)(0.113g) 和三乙胺 (0.153mL) 的 DMF(5mL) 溶液中。将反应混合物在室温搅拌 2 小 时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.160g。m/z 469(M+H)+(APCI)。

    [1634] b)(R)-7-(2-(3-((4-( 苯并 [b] 噻吩 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1635] 苯并 [b] 噻吩 -5- 基 (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 68， 步骤 a)(0.160g) 的 DCM(15mL) 溶液用三氟乙 酸 (0.026mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.188g) 处理， 且将所得混合物在 20 ℃搅 拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙 酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱 和碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.02mL) 加至该溶液中， 然后减压 除去溶剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟 基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.135g) 和乙酸 (0.02mL) 的甲醇 (15mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.043mg) 处理。移开冷却浴， 且将混合物在 20 ℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加 入 THF(20mL)。混合物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。有 机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏 分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.116g。m/z 677(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.28(s， 1H)， 8.04(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.91(s， 1H)， 7.80(d， J ＝ 5.4Hz， 1H)， 7.52-7.42(m， 3H)， 7.38-7.35(m， 1H)， 7.25(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.78(t， J ＝ 4.1Hz， 1H)， 4.95-4.90(m， 1H)， 4.35(s， 2H)， 3.69(t， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 3.53-3.44(m， 4H)， 3.28-3.19(m， 4H)， 3.16-3.04(m， 6H)， 2.11-2.03(m， 2H)， 1.80-1.68(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [1637] 实施例 69

    [1638] (R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基 -5- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1636] a)2- 异丙基 -5- 甲基噻唑 -4- 甲酸甲酯将 3- 溴 -2- 氧代丁酸甲酯 (4.6g) 和 2- 甲基硫代丙酰胺 (2.5g) 在 THF(100mL) 中的混合物加热回流 18 小时。减压蒸发溶剂。将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液 之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。残余物通过快速硅胶色谱 ( 使用 17％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率 为 1.7g。m/z 200(M+H)+(APCI)。

    [1643] b)2- 异丙基 -5- 甲基噻唑 -4- 甲酸

    [1642] 将氢氧化锂一水合物 (0.2g) 的水 (3mL) 溶液加至 2- 异丙基 -5- 甲基噻唑 -4- 甲 酸甲酯 ( 实施例 69， 步骤 a)(0.5g) 的甲醇 (7mL) 溶液中， 且将反应混合物在 20℃搅拌 3 小 时。减压除去甲醇， 且残留水溶液用乙酸乙酯洗涤。水层通过滴加浓 HCl 水溶液来酸化， 且该混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。所得胶状物 在静置时结晶。用异己烷 (4mL) 和乙醚 (1mL) 的混合物研磨， 得到副标题化合物。收率为 1 0.160g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ3.29-3.18(m， 1H)， 2.78(s， 3H)， 1.38(d， J ＝ 7.1Hz， 6H)。 1 个可交换的质子没有观察。

    [1646] c)(9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基 -5- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1645] 将 HATU(0.175g) 一次性加至在 0℃搅拌的 2- 异丙基 -5- 甲基噻唑 -4- 甲酸 ( 实施 例 69， 步骤 b)(0.066mg)、 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-2- 氟

    [1648] 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 67， 步骤 f)(0.109g) 和三乙胺 (0.148mL) 的 DMF(5mL) 溶液中。将 反应混合物在室温搅拌 2 小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗 涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.155mg。m/z 476(M+H)+(APCI)。

    [1649] d)(R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基 -5- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1650] (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基 -5- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 69， 步骤 c)(0.155g) 的 DCM(15mL) 溶液用三 氟乙酸 (0.025mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.180g) 处理， 且将所得混合物在 20℃ 搅拌 40 分钟。 反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸 乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳 酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.019mL) 加至该溶液中， 然后减压除去 溶剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.128g) 和乙酸 (0.019mL) 且用氰基硼氢化钠 (41mg) 处理。移开 的甲醇 (15.00mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 冷却浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。 混合物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干 燥， 过滤， 且减压除去溶剂。 残余物与乙腈共沸 2 次。 粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度

    [1651] 为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化 1 合物。收率为 0.12g。m/z 684(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.28(s， 1H)， 7.50-7.39(m， 2H)， 7.28-7.22(m， 1H)， 6.93(d， J ＝ 24.1Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 26.1Hz， 2H)， 3.58-3.43(m， 4H)， 3.26-3.00(m， 11H)， 1H)， 4.93-4.88(m， 1H)， 4.26(s， 2H)， 3.67(s， 2.43(s， 3H)， 2.03-1.94(m， 2H)， 1.81-1.65(m， 2H)， 1.30(d， J ＝ 6.8Hz， 6H)。5 个可交换的 质子没有观察。

    [1652] 实施例 70

    [1653] (R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1654] a)(9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(5- 异丙基噻吩 -3- 基 ) 甲酮将 HATU(0.183g) 一次性加至在 0 ℃搅拌的 5- 异丙基噻吩 -3- 甲酸 (0.063g)、 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 67， 步骤 f)(0.114g) 和三乙胺 (0.155mL) 的 DMF(5mL) 溶液中。将反应混合物在室温搅拌 2 小 时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2.5 ％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1 ％三 乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.100g。m/z 461(M+H)+(APCI)。

    [1658] b)(R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1657] (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (5- 异丙基噻吩 -3- 基 ) 甲酮 ( 实施例 70， 步骤 a)(0.100g) 的 DCM(15mL) 溶液用三氟乙酸 (0.017mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.120g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.012mL) 加至该溶液中， 然后减压除去溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.086g) 和乙酸 (0.012mL) 的甲醇 (15.00mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.027g) 处理。移开冷却

    [1660] 浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。 减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。 混合物 用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， TM 且减压除去溶剂。 残余物与乙腈共沸 2 次。 粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％ 乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收 1 率为 0.052mg。 m/z 669(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.51-7.46(m， 2H)， 7.43(t， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 7.25(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 6.95-6.89(m， 2H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.95-4.90(m， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.69-3.65(m， 2H)， 3.55-3.51(m， 2H)， 3.45(s， 2H)， 3.24(t， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 3.20-3.03(m， 9H)， 2.05-1.97(m， 2H)， 1.79-1.69(m， 2H)， 1.28(d， J ＝ 6.8Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1661] 实施例 71

    [1662] (R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(2-( 戊 -3- 基 ) 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1663] a)2- 乙基丁酰胺将 2- 乙基丁酰氯 (5g) 小心滴加至冰冷的 35％氨水 (50mL) 中， 且将所得悬浮液搅 拌 1h。 反应混合物用 DCM(3×100mL) 萃取。 合并的有机层用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干 1 燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色固体。 收率为 3.4g。H NMR(400MHz， D6-DMSO)

    [1666] δ7.23(s， 1H)， 6.71(s， 1H)， 1.98-1.88(m， 1H)， 1.50-1.27(m， 4H)， 0.81(t， J ＝ 7.4Hz， 6H)。

    [1667] b)2- 乙基硫代丁酰胺

    [1668] 将 五 硫 化 二 磷 (1.54g) 加 至 2- 乙 基 丁 酰 胺 ( 实 施 例 71， 步 骤 a)(3.4g) 的 MTBE(300mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 3h。反应混合物通过硅藻土来过滤， 且滤垫用 MTBE(100mL) 洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率 为 3.8g。直接使用。

    [1670] c)2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸乙酯

    [1669] 将 3- 溴 -2- 氧代丙酸乙酯 (2.5mL) 滴加至 2- 乙基硫代丁酰胺 ( 实施例 71， 步骤 b)(3.8g) 的乙醇 (100mL) 溶液中， 且将所得混合物加热回流过夜。蒸发溶剂， 且将残余物 在乙酸乙酯 (100mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (100mL) 之间分配。分离各层， 且水相用乙酸乙 酯 (2×100mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。 残余物经硅胶色谱 ( 用 20 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸 1 发， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。 收率为 2.8g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.42(s， 1H)， 4.29(q， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 2.99-2.89(m， 1H)， 1.82-1.58(m， 4H)， 1.30(t， J ＝ 7.0Hz， 3H)， 0.81(t， J ＝ 7.4Hz， 6H)。

    [1673] d)2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸

    [1672] 将氢氧化锂一水合物 (2.07g) 加至 2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸乙酯 ( 实施例 71， 步骤 c)(2.8g) 在 THF(80mL) 和水 (20mL) 的混合物中的溶液中。将所得混合物搅拌过 夜。反应混合物用浓盐酸 (6mL) 酸化， 且蒸发挥发物。所得含水混合物用氯化钠饱和， 且用 乙酸乙酯 (3×100mL) 萃取。合并的有机溶液用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化 1 合物， 其为白色固体。收率为 2.3g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ12.91(s， 1H)， 8.34(s， 1H)， 2.98-2.86(m， 1H)， 1.84-1.56(m， 4H)， 0.81(t， J ＝ 7.3Hz， 6H)。

    [1676] e)(9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1675] 在 0℃将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.2g) 加至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施 例 67， 步骤 f)(0.13g)、 2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸 ( 实施例 71， 步骤 d)(0.081g) 和三 乙胺 (0.23mL) 的 DMF(7mL) 溶液中。将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 2h。将混合物在 乙酸乙酯和盐水 (100mL) 之间分配， 有机相用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 然后蒸发。所得胶状物经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且减 压蒸发溶剂， 得到副标题化合物， 其为洁净胶状物。收率为 0.25g。m/z 490(M+H)+(APCI)。 1 HNMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.93(s， 1H)， 7.22-7.14(m， 2H)， 7.03(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 4.39-4.32(m， 1H)， 3.69-3.58(m， 6H)， 3.52-3.46(m， 2H)， 2.97-2.90(m， 1H)， 2.75(t， J ＝ 7.3Hz， 2H)， 2.70(s， 2H)， 2.46-2.29(m， 4H)， 1.82-1.66(m， 6H)， 1.58-1.47(m， 2H)， 0.85(t， J

    [1678] ＝ 7.3Hz， 6H)。

    [1679] f)(R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1680] 在 0 ℃ 将 三 氟 乙 酸 (0.031mL) 加 至 (9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2-( 戊 -3- 基 ) 噻 唑 -4- 基 ) 甲 酮 ( 实 施 例 71， 步骤 e)(0.2g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.25g)。将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。 分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙 酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.023mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然 (WO2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.13g)， 后加入氰基硼氢化钠 (0.038g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶 色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合 TM 并含有产物的馏分， 且真空蒸发。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-35 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得 1 到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.17g。m/z 698(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.26(s， 1H)， 8.01-7.83(m， 1H)， 7.56-7.38(m， 2H)， 7.30-7.19(m， 1H)， 7.01-6.89(m， 1H)， 6.83-6.71(m， 1H)， 4.99-4.88(m， 1H)， 4.38-4.23(m， 2H)， 3.78-3.57(m， 6H)， 3.33-2.86(m， 11H)， 2.10-1.97(m， 2H)， 1.87-1.61(m， 6H)， 0.91-0.76(m， 6H)。5 个可交 换的质子没有观察。

    [1682] 实施例 72

    [1683] (R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1681] a)3- 甲基丁酰胺将 3- 甲基丁酰氯 (10mL) 小心滴加至冰冷的 35％氨水 (50mL) 中， 且将所得悬浮液 搅拌 1h。反应混合物用 DCM(3×100mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫 1 酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 5.6g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ7.20(s， 1H)， 6.67(s， 1H)， 1.99-1.88(m， 3H)， 0.87(d， J ＝ 6.4Hz， 6H)。

    [1688] b)3- 甲基硫代丁酰胺

    [1687] 将 五 硫 化 二 磷 (2.9g) 加 至 3- 甲 基 丁 酰 胺 ( 实 施 例 72， 步 骤 a)(5.6g) 的 MTBE(300mL) 悬浮液中， 且将所得混合物搅拌 3h。反应混合物通过硅藻土来过滤， 且滤垫 用 MTBE(100mL) 洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收 1 率为 5.6g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ9.32(s， 1H)， 9.10(s， 1H)， 2.33(d， J ＝ 7.3Hz， 2H)， 2.22-2.07(m， 1H)， 0.88(d， J ＝ 6.4Hz， 6H)。

    [1691] c)2- 异丁基噻唑 -4- 甲酸乙酯

    [1690] 向 3- 甲基硫代丁酰胺 ( 实施例 72， 步骤 b)(5.6g) 的乙醇 (100mL) 溶液中加入 3- 溴 -2- 氧代丙酸乙酯 (6.7mL)。将所得混合物在 RT 搅拌过夜， 然后加热回流 5h。蒸发 溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯 (250mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (100mL) 之间分配。分离各层， 有机相用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 20 ∶ 1 至 10 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题 1 化合物， 其为黄色油状物。收率为 5.2g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.39(s， 1H)， 4.29(q， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 2.88(d， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 2.10-1.97(m， 1H)， 1.30(t， J ＝ 7.2Hz， 3H)， 0.93(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。

    [1694] d)2- 异丁基噻唑 -4- 甲酸

    [1693] 将氢氧化锂一水合物 (4.1g) 加至 2- 异丁基噻唑 -4- 甲酸乙酯 ( 实施例 72， 步骤 c)(5.2g) 在 THF(80mL) 和水 (20mL) 的混合物中的溶液中。 将所得混合物搅拌过夜。 反应混 合物用浓盐酸 (10mL) 小心酸化， 且蒸发挥发物。将所得含水混合物倒入盐水 (50mL) 中， 且 用乙酸乙酯 (3×100mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水 (50mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 1 蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色固体。 收率为 3.8g。H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ12.90(s， 1H)， 8.32(s， 1H)， 2.87(d， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 2.11-1.96(m， 1H)， 0.94(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。

    [1697] e)(9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丁基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1696] 在 0 ℃将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.2g) 加至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 67， 步骤 f)(0.13g)、 2- 异丁基噻唑 -4- 甲酸 ( 实施例 72， 步骤 d)(0.08g) 和三 乙胺 (0.23mL) 的 DMF(7mL) 溶液中， 将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 2h。将混合物在乙 酸乙酯和盐水 (100mL) 之间分配， 有机相用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 然后蒸发。所得胶状物经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且减 压蒸发溶剂， 得到副标题化合物， 其为洁净胶状物。收率为 0.24g。m/z 476(M+H)+(APCI)。 1 HNMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.90(s， 1H)， 7.22-7.14(m， 2H)， 7.03(t， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 4.35(t， J ＝ 4.7Hz， 1H)， 3.68-3.57(m， 6H)， 3.52-3.42(m， 2H)， 2.89(d， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.76(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 2.70(s， 2H)， 2.45-2.28(m， 4H)， 2.12-2.03(m， 1H)， 1.74-1.65(m， 2H)， 1.57-1.48(m， 2H)， 0.96(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。

    [1700] f)(R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1699] 在 0℃将三氟乙酸 (0.031mL) 加至 (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丁基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 72， 步骤 e)(0.19g)

    [1702] 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.25g)。将所得 黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸 乙酯 (20mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.023mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.13g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.038g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。 TM 经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-35％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合并 含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率 1 为 0.10g。m/z 684(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.39-11.19(m， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.53-7.40(m， 2H)， 7.25(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.92(dd， J ＝ 8.5， 4.9Hz， 1H)， 4.33-4.26(m， 2H)， 3.72-3.59(m， 6H)， 3.28-3.01(m， 10H)， 2.88(d， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.11-1.95(m， 3H)， 1.84-1.69(m， 2H)， 0.95(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [1703] 实施例 73

    [1704] (R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(5- 异丙基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1705] a)(9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(5- 异丙基噻吩 -2- 基 ) 甲酮在 0℃将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.2g) 加至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 67， 步骤 f)(0.13g)、 5- 异丙基噻吩 -2- 甲酸 (0.07g) 和三乙胺 (0.23mL) 的 DMF(7mL) 溶液 中。 将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 2h。 将混合物在乙酸乙酯 (100mL) 和盐水 (100mL) 之 间分配， 有机相用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发溶剂。所得胶状物经

    [1708] 硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯 度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且蒸发溶剂， 得到副标题化合物， 1 其为洁净胶状物。收率为 0.23g。m/z 461(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ ) δ7.22-7.15(m， 3H)， 7.03(t， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 6.83(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 4.35(t， J ＝ 5.0Hz， 1H)， 3.69-3.58(m， 6H)， 3.49(s， 2H)， 3.21-3.13(m， 1H)， 2.76(t， J ＝ 8.4Hz， 2H)， 2.70(s， 2H)， 2.42-2.36(m， 4H)， 1.75-1.68(m， 2H)， 1.56-1.46(m， 2H)， 1.29(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。

    [1709] b)(R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(5- 异丙基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1710] 在 0℃将三氟乙酸 (0.031mL) 加至 (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 异丙基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 73， 步骤 a)(0.18g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.25g)。将所得 黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸 乙酯 (20mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.023mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.13g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.025g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸 TM 发。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。 合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 1 收 率 为 0.12g。m/z 669(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.26(s， 1H)， 7.54-7.40(m， 2H)， 7.28-7.21(m， 2H)， 6.94(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.84(dd， J ＝ 3.6， 0.8Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.93(dd， J ＝ 8.5， 4.9Hz， 1H)， 4.34(s， 2H)， 3.73-3.64(m， 4H)， 3.54(s， 2H)， 3.29-3.03(m， 11H)， 2.07-1.98(m， 2H)， 1.85-1.73(m， 2H)， 1.29(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [1712] 实施例 74

    [1713] (R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(4- 异丙基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮

    [1711] 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1714] a)1-(4- 异丙基噻吩 -2- 基 ) 乙酮将 1-( 噻吩 -2- 基 ) 乙酮 (5.4mL) 加至冰冷的氯化铝 (33g) 的无水氯仿 (100mL) 悬浮液中。然后历时 5min 滴加 2- 溴丙烷 (5.2mL)。将反应混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。 将深色悬浮液小心倒在冰上， 且将混合物搅拌 10min。分离各层， 且水相用 DCM(100mL) 萃 取。合并的有机层用氢氧化钠溶液 (2M， 200mL) 和水 (200mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 2 ％乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏 分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为浅黄色油状物。收率为 5.4g。1H NMR(400MHz， CDCl3) δ7.58(d， J ＝ 1.3Hz， 1H)， 3.01-2.92(m， 1H)， 2.55(s， 3H)， 1.27(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。1 个噻 吩质子由于 CDCl3 信号～ 7.26 而模糊。

    [1718] b)4- 异丙基噻吩 -2- 甲酸

    [1717] 在 60 ℃将 1-(4- 异丙基噻吩 -2- 基 ) 乙酮 ( 实施例 74， 步骤 a)(1g) 的 1， 4- 二 氧杂环己烷 (10mL) 溶液小心加至氢氧化钠 (1.19g) 在次氯酸钠水溶液 (8 ％， 50mL) 中的 溶液中。将所得混合物加热至 75℃， 且搅拌 1h。冷却反应混合物， 且水相用 DCM(50mL) 洗 涤。水相用亚硫酸氢钠水溶液 (10 ％， 20mL) 处理， 且用浓盐酸小心酸化。所得混合物用 DCM(3×50mL) 萃取。合并的有机溶液用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到黄色油状物。经制 备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 5-95％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 1 蒸发， 且在高真空下干燥， 得到副标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.5g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ12.95(s， 1H)， 7.65(d， J ＝ 1.5Hz， 1H)， 7.51-7.49(m， 1H)， 2.94( 七 重 峰， J＝ 6.9Hz， 1H)， 1.20(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1721] c)(9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(4- 异丙基噻吩 -2- 基 ) 甲酮

    [1720] 在 0 ℃将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.2g) 加至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 67， 步骤 f)(0.13g)、 4- 异丙基噻吩 -2- 甲酸 ( 实施例 74， 步骤 b)(0.07g) 和三乙 胺 (0.23mL) 的 DMF(7mL) 溶液中。将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 2h。将混合物在乙酸 乙酯 (100mL) 和盐水 (100mL) 之间分配， 有机层用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且蒸发。所得胶状物经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且减 压蒸发溶剂， 得到副标题化合物， 其为洁净胶状物。收率为 0.23g。m/z 461(M+H)+(APCI)。 1 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.30-7.14(m， 4H)， 7.05-7.00(m， 1H)， 4.35(s， 1H)， 3.68-3.58(m， 6H)， 3.51-3.47(m， 2H)， 2.98-2.92(m， 1H)， 2.75(t， J ＝ 7.3Hz， 2H)， 2.70(s， 2H)， 2.41-2.34(m， 4H)， 1.75-1.68(m， 2H)， 1.56-1.47(m， 2H)， 1.21(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1724] d)(R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(4- 异丙基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1723] 在 0 ℃ 将 三 氟 乙 酸 (0.031mL) 加 至 (9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(4- 异丙基噻吩 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 74， 步骤 c)(0.18g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.25g)。 将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢 钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫 酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.023mL) 和 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼 实施例 1， 步骤 d)(0.13g)， 氢化钠 (0.025g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物 TM 的馏分， 且真空蒸发。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 )

    [1726] 来进一步纯化。合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 1 其为白色固体。收率为 0.13g。m/z 669(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ ) δ11.26(s， 1H)， 7.53-7.47(m， 1H)， 7.47-7.41(m， 1H)， 7.31(s， 1H)， 7.29(s， 1H)， 7.25(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.93(dd， J ＝ 8.3， 4.7Hz， 1H)， 4.35-4.31(m， 2H)， 3.73-3.62(m， 4H)， 3.54(s， 2H)， 3.26-3.03(m， 10H)， 2.94( 七重峰， J ＝ 7Hz， 1H)， 2.08-1.98(m， 2H)， 1.85-1.71(m， 2H)， 1.21(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。5 个可交换的质 子没有观察。

    [1727] 实施例 75

    [1728] (R)-7-(2-(2- 氯 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1729] a)3-( 羧基甲基 )-4- 氯苯甲酸将氢氧化钾 (1.549g) 的水 (15mL) 溶液加至 4- 氯 -3-( 氰基甲基 ) 苯甲酸 (2.07g) 的乙醇 (15mL) 悬浮液中， 且将所得溶液加热回流 4 小时， 然后冷却。真空浓缩混合物以除 去乙醇， 然后用水稀释， 且用乙酸乙酯洗涤 2 次。弃去有机相， 同时水相用浓盐酸酸化至 pH 1， 且用乙酸乙酯萃取 2 次。合并的萃取物用盐水洗涤， 用无水硫酸镁干燥， 且真空浓缩， 得 + 到副标题化合物， 其为浅褐色固体。收率为 2.06g。m/z 214(M )(EI)。

    [1733] b)2-(2- 氯 -5-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 乙醇

    [1732] 在室温历时 3 分钟将硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 12.0mL) 逐份加至 3-( 羧基甲基 )-4- 氯苯甲酸 ( 实施例 75， 步骤 a)(2.06g) 的无水 THF(30mL) 悬 浮液中。将所得冒泡稠悬浮液在室温搅拌 1 小时， 然后加热至回流且保持 1 小时。冷却的 混合物通过历时 2 分钟滴加甲醇 (10mL) 来淬灭。将溶液在室温搅拌 30 分钟， 然后浓缩到 硅胶上， 且通过快速硅胶色谱 ( 用 5％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其

    [1735] 为白色固体。收率为 0.983g。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.35(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.28(d， J ＝ 2.1Hz， 1H)， 7.18(dd， J ＝ 8.2， 2.1Hz， 1H)， 4.65(s， 2H)， 3.89(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 3.02(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)。2 个可交换的质子没有观察。

    [1736] c)4- 氯 -3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛

    [1737] 将二氧化锰 (IV)(1.00g) 加至 2-(2- 氯 -5-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 75， 步骤 b)(0.205g) 的 DCM(10mL) 溶液中， 且将所得悬浮液在室温搅拌过夜。然后混合物通过 硅藻土来过滤， 且滤垫用 DCM 充分洗涤。真空浓缩滤液和洗涤液， 得到副标题化合物， 其为 1 无色油状物。收率为 0.159g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.97(s， 1H)， 7.81(d， J ＝ 2.0， 1H)， 7.70(dd， J ＝ 2.0， 8.2， 1H)， 7.53(t， J ＝ 6.7， 1H)， 3.94(dd， J ＝ 6.4， 11.6， 2H)， 3.10(t， J ＝ 6.6， 2H)， 1.46(t， J ＝ 5.2， 1H)。

    [1739] d)(9-(4- 氯 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1738] (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟 乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.178g) 的 NMP(2mL) 溶液用乙酸 (0.032mL) 处理， 且搅拌 5 分 钟。然后加入 4- 氯 -3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 75， 步骤 c)(0.154g) 的 NMP(3mL) 溶液， 将所得溶液搅拌 1 小时， 然后用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.181g) 处理， 且在室温搅拌过 夜。再加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.404g)， 且将混合物再搅拌 6 小时， 然后倒入饱和碳酸 氢钠中， 且用乙酸乙酯萃取 2 次。合并的萃取物用水洗涤 3 次， 用盐水洗涤 1 次， 然后用无 水硫酸镁干燥， 且通过快速硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 2 ∶ 97 三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱 ) 纯 化， 得到副标题化合物， 其为无色胶状物。收率为 0.157g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ ) δ7.90(s， 1H)， 7.29(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.24(d， J ＝ 1.4Hz， 1H)， 7.11(dd， J ＝ 8.2， 1.8Hz， 1H)， 4.37(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.73-3.56(m， 8H)， 3.41(s， 2H)， 3.35-3.28(m， 1H)， 2.85(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.41-2.10(m， 4H)， 1.75-1.62(m， 2H)， 1.60-1.46(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。

    [1742] e)2-(2- 氯 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛

    [1741] 将 (9-(4- 氯 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 ) 甲 酮 ( 实 施 例 75， 步 骤 d)(0.152g) 的 DCM(5mL) 溶液在冰 - 水中冷却， 用三氟乙酸 (0.049mL) 处理， 且搅拌 5 分钟。加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.205g)， 然后从冷却浴中取出混合物， 且在室温搅拌 30 分钟。溶液用饱和硫代硫酸钠溶 液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (5mL) 稀释， 且将所得混合物剧烈搅拌 10 分 钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机相用盐水洗涤， 用乙酸 (0.1mL) 酸化， 用 无水硫酸镁干燥， 且真空浓缩， 得到粗副标题化合物， 其为黄色胶状物。收率为 0.197g。m/ z476(M+H)+(APCI)。

    [1745] f)(R)-7-(2-(2- 氯 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1746] (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.145g) 的甲醇 (2mL) 溶液用乙酸 (0.024mL) 处理， 且 搅拌 5 分钟。然后加入 2-(2- 氯 -5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 75， 步骤 e)(0.197g) 的甲醇 (3mL) 溶液， 将所得混合物在室温搅拌 5 分钟， 然后在冰 - 水中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.039g) 处理。移开冷却浴， 且将混合物在室温搅拌 140 分钟， 然后再用氰基硼氢化钠 (0.040g) 处 理。然后将混合物搅拌过夜。第二天上午， 混合物用 1 滴水淬灭， 过滤溶液， 且经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 15-35 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。真空浓缩含有产物的馏 分， 且与乙腈共蒸发 3 次， 得到无色残余物。残余物用乙醚研磨， 得到固体， 过滤收集所述 固体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.077g。 1 m/z 686/688(M+H)+(APCI)。 HNMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.94(s， 1H)， 7.53(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.48-7.39(m， 2H)， 6.94(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.91(dd， J ＝ 8.5， 4.9Hz， 1H)， 4.22(s， 2H)， 3.75-3.60(m， 6H)， 3.52-2.96(m， 11H)， 2.09-1.90(m， 2H)， 1.83-1.62(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1748] 实施例 76

    [1749] (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(4- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙 酸盐 )

    [1747] a)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((4-(4- 异丙基噻唑 -2- 基羰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮

    [1751] (9-(3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 ) (4- 异丙基噻唑 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 66， 步骤 c)(0.195g) 的 DCM(20mL) 溶液用三氟乙酸 (0.034ml) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.242g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.025ml) 加至该溶液中， 然后减压除去溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(191mg) 的甲醇 (15mL) 溶液中。 将混合物 冷却至 0℃， 且一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.140g)。将反应混合物在 20℃搅拌 3 小 时。减压除去溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫酸 钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 9％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含 有 1％‘880’ 氨水 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.133g。m/z760(M+H)+(APCI)。

    [1754] b)(R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(4- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙 酸盐 )

    [1753] 将三乙胺三氢氟酸盐 (0.034mL) 的甲醇 (1mL) 溶液加至 (R)-5-(1-( 叔丁基二甲 基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((4-(4- 异丙基噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 76， 步骤 a) (0.133g) 的 THF(4mL) 溶液中， 且将反应混合物在 20℃静置 18 小时。减压除去溶剂， 且粗 TM 产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所 需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.090g。m/z 646(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.17(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.51(s， 1H)， 7.44-7.33(m， 4H)， 7.14(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.00(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.54(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.38-5.33(m， 1H) ， 4.28(s ， 2H) ， 3.78-3.74(m ， 2H) ， 4.13-3.47(m ， 4H) ， 3.28(t ，J ＝ 8.2Hz ， 2H) ， 3.21-3.00(m， 9H)， 2.09-1.99(m， 2H)， 1.84-1.72(m， 2H)， 1.26(d， J ＝ 6.8Hz， 6H)。6 个可交 换的质子没有观察。

    [1757] 实施例 77

    [1758] (R)-5-(2-(2， 3- 二氟 -4-(2-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1756] a)2-(2， 3- 二氟 -4- 羟基苯基 ) 乙酸在 -78 ℃将三溴化硼溶液 ( 浓度为 1M 的 DCM 溶液， 13.4mL) 滴加至 2-(2， 3- 二 氟 -4- 甲氧基苯基 ) 乙酸 (1.18g) 的 DCM(5mL) 悬浮液中。将反应混合物温热至 RT， 且搅拌 过夜。将反应混合物冷却至 -78℃， 且加入三溴化硼溶液 ( 浓度为 1M 的 DCM 溶液， 13.4mL)。 将反应混合物温热至 RT， 且搅拌 1h。将反应混合物倒在冰上。所得水溶液用 DCM(5×50mL) 萃取。然后水相用乙酸乙酯 (3×100mL) 萃取。合并有机溶液， 用盐水 (50mL) 洗涤， 用硫酸 1 镁干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为棕色固体。收率为 1.09g。 H NMR(400MHz，

    [1762] D6-DMSO)δ12.43(s， 1H)， 10.24(s， 1H)， 6.91(td， J ＝ 8.3， 2.1Hz， 1H)， 6.72(td， J ＝ 8.3， 1.8Hz， 1H)， 3.54(s， 2H)。

    [1763] b)2， 3- 二氟 -4-(2- 羟基乙基 ) 苯酚

    [1764] 在 0 ℃将硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 14.4mL) 滴加至 2-(2， 3- 二氟 -4- 羟基苯基 ) 乙酸 ( 实施例 77， 步骤 a)(1.08g) 的四氢呋喃 (25mL) 溶液中， 将所得混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。 反应混合物用甲醇淬灭， 且当不再冒泡时， 蒸发溶剂。 残余物经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯至乙酸乙酯梯度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物 1 的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.95g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO) δ10.08(s， 1H)， 6.87(td， J ＝ 8.3， 2.2Hz， 1H)， 6.69(td， J ＝ 8.4， 1.9Hz， 1H)， 4.68(t， J＝ 5.3Hz， 1H)， 3.58-3.49(m， 2H)， 2.66(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)。

    [1766] c)2-(4-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 )-2， 3- 二氟苯基 ) 乙醇

    [1765] 将碳酸铯 (0.99g) 加至 2， 3- 二氟 -4-(2- 羟基乙基 ) 苯酚 ( 实施例 77， 步骤 b) (0.44g) 和 2- 溴 -1， 1- 二乙氧基乙烷 (0.4mL) 的 DMF(10mL) 溶液中。 将所得悬浮液在 90℃ 加热 18h。冷却反应混合物， 且倒入水 (100mL) 中。含水混合物用乙醚 (3×100mL) 萃取。 合并的有机溶液用水 (200mL) 和盐水 (200mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发。粗物质 经硅胶色谱 ( 用异己烷至 1 ∶ 1 乙酸乙酯∶异己烷梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏 分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 0.49g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO) δ7.06-6.93(m， 2H)， 4.81(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 4.70(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 4.02(d， J ＝ 5.4Hz， 2H)， 3.73-3.62(m， 2H)， 3.61-3.50(m， 4H)， 2.71(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 1.13(t， J ＝ 7.0Hz， 6H)。

    [1769] d)2-(2， 3- 二氟 -4-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙醛

    [1768] 将浓盐酸 (5mL) 加至 2-(4-(2， 2- 二乙氧基乙氧基 )-2， 3- 二氟苯基 ) 乙醇 ( 实施 例 77， 步骤 c)(0.49g) 的 1， 4- 二氧杂环己烷 (10mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 1h。混 合物用水 (50mL) 小心稀释， 且用乙酸乙酯 (3×50mL) 萃取。合并的有机层用水 (50mL) 和 盐水 (50mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其直接使用。收率为 0.31g。

    [1772] e)(9-(2-(2， 3- 二氟 -4-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺

    [1771] [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1773] 将 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.5g) 加至 2-(2， 3- 二氟 -4-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙 醛 ( 实施例 77， 步骤 d)(0.31g) 在 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (10mL) 和乙酸 (0.07mL) 中的溶液 中。 将所得混合物搅拌 30min， 然后在冰浴中冷却。 然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.38g)， 将反应混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。将反应混合物在乙酸乙酯 (100mL) 和水 (100mL) 之 间分配。水相用饱和碳酸氢钠溶液碱化， 且分离各层。水相用乙酸乙酯 (2×100mL) 萃取。 合并的有机溶液用水 (100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。残余物 经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 5 ％三乙胺 / 乙酸乙酯 洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为洁净胶状物。收率为 1 0.41g。 m/z 510(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.93(s， 1H)， 7.06-6.85(m， 2H)， 4.58-4.36(m， 1H)， 4.13(t， J ＝ 5.7Hz， 2H)， 3.73-3.51(m， 8H)， 3.36-3.23(m， 1H)， 2.76-2.63(m， 4H)， 1.76-1.45(m， 4H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)+4 个质子由于 DMSO 峰而模糊。

    [1775] f)(R)-5-(2-(2， 3- 二氟 -4-(2-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1774] 在 0℃将三氟乙酸 (0.03mL) 加至 (9-(2-(2， 3- 二氟 -4-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施 例 77， 步骤 e)(0.18g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将反应混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马 丁高碘剂 (0.225g)。将混合物温热至 RT， 且搅拌 1h。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱 和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL)， 且将混合物剧烈搅拌 5min。分离各层， 且水层 用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的有机层用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干 燥， 过滤， 且蒸发。将残余物重新溶解在甲醇 (5mL) 中， 加入乙酸 (0.02mL) 和 (R)-5-(2- 氨

    [1777] 基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO2004106333) (0.12g)， 将混合物搅拌 5min， 且在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.033g)， 将反应 混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。浓缩反应混合物， 且经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发。将残 余物溶解在 THF(5mL) 中， 加入三乙胺三氢氟酸盐 (0.17mL)， 且将混合物搅拌过夜。蒸发溶 TM 剂， 且残余物与甲苯共沸 2 次。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 蒸发， 且用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固 1 体。收率为 0.11g。m/z 712(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.18(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 7.96(s， 1H)， 7.18-6.96(m， 4H)， 6.54(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.36(dd， J ＝ 8.7， 4.1Hz， 1H)， 4.50-4.42(m， 2H)， 3.76-3.65(m， 6H)， 3.62-3.54(m， 2H)， 3.44-2.98(m， 11H)， 2.12-2.01(m， 2H)， 1.90-1.75(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。 6 个可交换的质子没有观察。

    [1778] 实施例 78

    [1779] (R)-7-(2-(3-((4-(2- 丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1780] a) 叔丁基 (2- 氟苯乙氧基 ) 二甲基甲硅烷将叔丁基二甲基甲硅烷基氯 (6.45g) 加至搅拌的在冰浴中冷却的 2-(2- 氟苯基 ) 乙醇 (5.00g) 和 1H- 咪唑 (7.29g) 的无水 DMF(30mL) 溶液中。45min 后， 反应混合物用乙 酸乙酯稀释， 用水洗涤 3 次， 且真空蒸发。将所得胶状物溶解在异己烷中， 且加载至硅胶柱 ( 先后用异己烷和 1 ∶ 3 乙酸乙酯∶异己烷洗脱 )， 收集产物， 其为油状物。收率为 9.0g。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.28-7.18(m， 2H)， 7.13-7.00(m， 2H)， 3.84(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.89(t， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 0.89(s， 9H)， 0.008(s， 6H)。

    [1784] b)3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苯甲醛

    [1783] 历时 5 分钟将叔丁基 (2- 氟苯乙氧基 ) 二甲基甲硅烷 ( 实施例 78， 步骤 a)(5.00g) 加至搅拌的冷却至 -78℃的仲丁基锂 ( 浓度为 1.4M 的环己烷溶液， 14.0mL) 和 N1-(2-( 二甲 基氨基 ) 乙基 )-N1， N2， N2- 三甲基乙 -1， 2- 二胺 (4.10mL) 的 THF(25mL) 溶液中。2h 后， 加入 N， N- 二甲基甲酰胺 (10.06g)， 将反应混合物在 -78℃搅拌 1h， 然后移开冷却浴。再 过 0.5h 后， 反应混合物用水淬灭。加入乙酸乙酯 (300mL)， 反应混合物用水 (3×150mL)、 2M HCl(2×50mL)、 水 (2×50mL) 和盐水洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副 1 标题化合物， 其为油状物。收率为 5.3g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ10.40(s， 1H)， 7.76(dt， J ＝ 2.0 和 6.8Hz， 1H)， 7.54(dt， J ＝ 1.6 和 7.2Hz， 1H)， 7.21(t， J ＝ 7.2Hz， 1H)， 3.88(t， J ＝ 5.2Hz， 2H)， 2.95(dt， J ＝ 1.2 和 6.4Hz， 2H)， 0.88(s， 9H)， 0.008(s， 6H)。

    [1787] c)1-(9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙酮

    [1788] 将 3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苯甲醛 ( 实施例 78， 步骤 b) (2.159g) 加至搅拌的 2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 三氟乙酸盐 ( 实施例 12， 步骤 d)(2.80g) 和乙酸 (0.438mL) 的 NMP(25mL) 溶液中。 5 分钟后， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 (3.24g)。16h 后， 加入水， 且将混合物在水 (250mL) 和乙酸乙酯 (250mL) 之间分配。 乙酸乙酯溶液用水 (3×250mL) 和盐水洗涤， 然后蒸发至干。 经硅胶色谱 ( 用 20 ∶ 1 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶状物。 收率为 2.5g。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.27-7.20(m， 1H)， 7.20-7.13(m， 1H)， 7.08-7.01(m， 1H)， 3.84(t， J ＝ 7.2Hz， 3H)， 3.80-3.77(m， 2H)， 3.71-3.67(m， 1H)， 3.64-3.58(m， 3H)， 3.56(s， 1H)， 3.41(s， 1H)， 2.90(q， J ＝ 6.4Hz， 2H)， 2.69-2.62(m， 1H)， 2.52-2.44(m， 1H)， 2.43-2.35(m， 1H)， 1.92-1.80(m， 2H)， 1.72-1.60(m， 2H)， 0.89(s， 9H)， 0.00(s， 6H)。

    [1790] d)9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳

    [1789] 将 ‘880’ 氨水 (3.0mL) 加至搅拌的 1-(9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙 基 )-2- 氟苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙酮 ( 实施 例 78， 步骤 c)(2.5g) 的 MeOH(10mL) 溶液中。1h 后， 将反应混合物蒸发至干。加入乙腈， 将 溶液真空蒸发至干， 且将该操作重复 3 次， 得到副标题化合物， 其为油状物。收率为 2.07g。 直接使用。m/z 423(M+H)+(APCI)。

    [1793] e) 硫代戊酰胺

    [1792] 将五硫化二磷 (5.56g) 加至搅拌的戊酰胺 (10.0g) 的甲基叔丁基醚 (300mL) 悬 浮液中。16h 后， 混合物通过硅藻土来过滤， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色油状 物。收率为 11.4g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ9.35-9.23( 宽单峰， 1H)， 9.15-9.05( 宽单 峰， 1H)， 2.52-2.42(m， 2H)， 1.68-1.55(m， 2H)， 1.35-1.22(m， 2H)， 0.87(t， J ＝ 7.6Hz， 3H)。

    [1796] f)2- 丁基噻唑 -4- 甲酸乙酯

    [1795] 将 3- 溴 -2- 氧代丙酸乙酯 (6.76mL) 极小心加至搅拌的硫代戊酰胺 ( 实施例 78， 步骤 e)(6.30g) 的乙醇 (100mL) 溶液中。然后将溶液加热回流 16h。冷却后， 反应混合物用 乙酸乙酯稀释， 用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 6 乙酸乙酯∶ 异己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 6.5g。1H NMR(400MHz， CDCl 3) δ 8.05(s ， 1H) ， 4.42(q ， J ＝ 7.1Hz ， 2H) ， 3.02-3.05(m ， 2H) ， 1.85-1.75(m ， 2H) ， 1.50-1.38(m， 5H)， 0.95(t， J ＝ 7.1Hz， 3H)。

    [1799] g)2- 丁基噻唑 -4- 甲酸

    [1798] 将氢氧化锂 (5.00g) 加至搅拌的 2- 丁基噻唑 -4- 甲酸乙酯 ( 实施例 78， 步骤 f) (6.50g) 在 THF(80mL) 和水 (20mL) 中的混合物中。16h 后， 加入浓盐酸 (10mL)， 且将溶液 浓缩至～ 40mL。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配。水层用乙酸乙酯萃取 3 次。 合并的有机层用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为灰白色固体。收 1 率 为 4.6g。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ8.18(s， 1H)， 3.11-3.03(m， 2H)， 1.88-1.78(m， 2H)， 1.52-1.38(m， 2H)， 0.97(t， J ＝ 7.2Hz， 3H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [1802] h)(9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 丁基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1801] 将 2-(3H-[1， 2， 3] 三 唑 并 [4， 5-b] 吡 啶 -3- 基 )-1， 1， 3， 3- 四 甲 基 异 脲 鎓 六 氟 磷 酸 盐 (V)(0.378g) 加 至 搅 拌 的 2- 丁 基 噻 唑 -4- 甲 酸 ( 实 施 例 78， 步 骤 g)(0.193g)、 9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 ( 实施例 78， 步骤 d)(0.4g) 和三乙胺 (0.383g) 的 DMF(4mL) 溶液中。1h 后， 将反应

    [1804] 混合物在水和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层用水和盐水洗涤 2 次， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 7 ∶ 1 ∶ 0.5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 得到 1 副标题化合物， 其为胶状物。收率为 0.35g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.94(s， 1H)， 7.30-7.16(m， 2H)， 7.13-7.05(m， 1H)， 3.88-3.80(m， 2H)， 3.74-3.62(m， 6H)， 3.55-3.49(m， 2H)， 3.09-3.00(m， 水 峰 下 的 2H)， 2.87-2.79(m， 2H)， 2.49-2.32(m， 4H)， 1.84-1.68(m， 4H)， 1.62-1.51(m， 2H)， 1.50-1.39(m， 2H)， 0.97(t， J ＝ 7.9Hz， 3H)， 0.87(s， 9H)， 0.00(s， 6H)。

    [1805] i)(2- 丁基噻唑 -4- 基 )(9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [1806] 将 TBAF( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 2.0mL) 加至 (9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧 基 ) 乙基 )-2- 氟苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 丁基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 78， 步骤 h)(0.350g) 的 THF(4mL) 溶液中。0.5h 后， 浓缩溶液。经硅胶色谱 ( 用 10 ∶ 1 乙酸乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶状物。 收率为 0.24g。 1 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.88(s， 1H)， 7.22-7.13(m， 2H)， 7.03(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 4.35(t， J ＝ 5.2Hz， 1H)， 3.68-3.56(m， 12H)， 3.48(s， 2H)， 3.00(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 2.75(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 2.44-2.28(m， 4H)， 1.78-1.65(m， 2H)， 1.45-1.33(m， 2H)， 0.91(t， J ＝ 7.5Hz， 3H)。

    [1808] j)2-(3-((4-(2- 丁 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醛

    [1807] 将 戴 斯 - 马 丁 高 碘 剂 (0.278g) 加 至 搅 拌 的 (2- 丁 基 噻 唑 -4- 基 ) (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 78， 步骤 i)(0.240g) 和三氟乙酸 (0.058mL) 的 DCM(5mL) 溶液中。1h 后， 加入乙酸 乙酯 (30mL)， 接着加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 的混合物。 充分振摇反应混合物， 且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、 水和盐水洗涤。加入乙 酸 (0.08mL)， 溶液用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发 ( 浴温为～ 30℃ )， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 0.24g。直接使用。m/z 474(M+H)+(APCI)。

    [1810] k)(R)-7-(2-(3-((4-(2- 丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1811] 将乙酸 (0.044mL) 加至搅拌的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.200g) 和 2-(3-((4-(2- 丁基 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醛 ( 实施例 78， 步骤 j)(0.240g) 的 MeOH(10mL) 溶液中。 1min 后， 加入氰基硼氢化钠 (0.064g)。 TM 1.5h 后， 对反应混合物进行过滤， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有纯产物的馏分， 且真空蒸发。 加入乙腈 (200mL)， 且将溶液真空 蒸发成胶状物。将该操作重复 2 次。加入乙醚， 收集标题化合物， 其为固体。收率为 0.15g。 1 m/z 684(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.28( 宽单峰， 1H)， 7.92(s， 1H)， 7.52-7.37(m， 2H)， 7.25(t， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.94-4.87(m， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.70( 宽 单 峰， 6H)， 3.63(s， 2H)， 3.28-2.92(m， 10H)， 2.06-1.94(m， 2H)， 1.82-1.66(m， 4H)， 1.43-1.31(m， 2H)， 0.90(t， J ＝ 7.6Hz， 3H)。5 个可交 换的质子没有观察。

    [1814] 实施例 79

    [1815] (R)-7-(2-(3-((4-( 苯并 [b] 噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1813] a) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 (9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苄 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [1819] 将 2-(3H-[1， 2， 3] 三唑并 [4， 5-b] 吡啶 -3- 基 )-1， 1， 3， 3- 四甲基异脲鎓六氟磷酸 盐 (V)(0.378g) 加至搅拌的苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸 (0.186g)、 9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 ( 实施例 78， 步骤 d)(0.40g) 和三乙胺 (0.383g) 的 DMF(4mL) 溶液中。 1h 后， 将反应混合物在水和乙酸乙酯之 间分配。乙酸乙酯层用水洗涤 2 次， 用盐水洗涤 1 次， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发。经 硅胶色谱 ( 用 7 ∶ 1 ∶ 0.5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其 1 为胶状物。收率为 0.38g。 HNMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.14-8.08(m， 1H)， 8.05-7.99(m， 1H)， 7.82(s， 1H)， 7.57-7.51(m， 2H)， 7.33-7.23(m， 2H)， 7.14(t， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 3.86(t， J ＝ 7.3Hz， 2H)， 3.81-3.72(m， 4H)， 3.63(s， 2H)， 3.56(s， 2H)， 3.38(s， 2H)， 2.86(t， J ＝ 7.4Hz， 2H)， 2.46-2.34(m， 2H)， 1.89-1.81(m， 2H)， 1.66-1.52(m， 2H)， 0.88(s， 9H)， 0.00(s， 6H)。

    [1820] b) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [1821] 将 TBAF( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 2mL) 加至苯并 [b] 噻吩 -2- 基 (9-(3-(2-( 叔丁基 二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 79， 步骤 a)(0.370g) 的 THF(4mL) 溶液中。0.5h 后， 浓缩溶液。经硅胶色 谱 ( 用 10 ∶ 1 乙酸乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 1 0.26g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.99-7.95(m， 1H)， 7.93-7.88(m， 1H)， 7.67(s， 1H)， 7.46-7.39(m， 2H)， 7.17(q， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 7.01(t， J ＝ 8.0Hz， 1H)， 4.39-4.33(m， 1H)， 3.72-3.57(m， 4H)， 3.54(s， 2H)， 3.48(s， 2H)， 2.99(s， 2H)， 2.75(t， J ＝ 7.6Hz， 2H)， 2.46-2.32(m， 4H)， 1.80-1.71(m， 2H)， 1.58-1.48(m， 2H)。

    [1823] c)2-(3-((4-( 苯并 [b] 噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醛

    [1822] 将 戴 斯 - 马 丁 高 碘 剂 (0.282g) 加 至 搅 拌 的 苯 并 [b] 噻 吩 -2- 基 (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 79， 步骤 b)(0.240g) 和三氟乙酸 (0.059mL) 的 DCM(5mL) 溶液中。1h 后， 加入乙酸 乙酯 (30mL)， 接着加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 的混合物。 充分振摇反应混合物， 且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、 水和盐水洗涤。加入乙 酸 (0.08mL)， 然后溶液用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发 ( 浴温为～ 30℃ )， 得到副标题化合 物， 其为胶状物。收率为 0.24g。直接使用。m/z 467(M+H)+(APCI)。

    [1826] d)(R)-7-(2-(3-((4-( 苯并 [b] 噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮

    [1825] 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1827] 将乙酸 (0.044mL) 加至搅拌的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.203g) 和 2-(3-((4-( 苯并 [b] 噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醛 ( 实施例 79， 步骤 c)(0.240g) 的 MeOH(10mL) 溶液中。 1min 后， 加入氰基硼氢化钠 (0.081g)。 TM 1.5h 后， 对反应混合物进行过滤， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有纯产物的馏分， 且真空蒸发。 加入乙腈 (200mL)， 且将溶液真空 蒸发成胶状物。将该操作重复 2 次。加入乙醚， 收集标题化合物， 其为固体。收率为 0.19g。 1 D6-DMSO， 90℃ )δ11.28(s， 1H)， 8.00-7.95(m， 1H)， m/z 677(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， 7.92-7.88(m， 1H)， 7.69(s， 1H)， 7.50-7.38(m， 4H)， 7.25(t， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 4.90(dd， J ＝ 4.2 和 8.56Hz， 1H)， 4.35-4.19(m， 2H)， 3.76-3.68(m， 4H)， 3.59(s， 2H)， 3.27-2.99(m， 10H)， 2.09-1.99(m， 2H)， 1.82-1.70(m， 2H)。 5 个可交换的质子没有观察。

    [1829] 实施例 80

    [1830] (R)-7-(2-(2- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1828] a)2- 氯 -3-( 氰基甲基 ) 苯甲酸3-( 溴 甲 基 )-2- 氯 苯 甲 酸 (6.39g) 的 DMF(75mL) 溶 液 用 氰 化 钾 (3.34g) 的 水 (25mL) 溶液处理， 且将所得溶液在室温搅拌过夜。混合物用水稀释， 且用乙酸乙酯萃取 2 次。 弃去有机相， 同时水相用浓盐酸 (25mL) 小心酸化， 且通过氮气气流将所释放的任意 HCN 排到漂洗溶液中。搅拌 2 小时后， 水相用乙酸乙酯再萃取 2 次。合并的有机相用水洗涤 3 次， 用盐水洗涤 1 次， 然后用无水硫酸镁干燥， 且真空浓缩， 得到粗副标题化合物， 其为浅褐 1 色固体。 收率为 4.12g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.73(dd， J ＝ 7.7， 1.5Hz， 1H)， 7.69(dd， J ＝ 7.8， 1.7Hz， 1H)， 7.48(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 4.16(s， 2H)+1 个可交换的质子没有观察。

    [1835] b)3-( 羧基甲基 )-2- 氯苯甲酸

    [1836] 将氢氧化钾 (2.976g) 的水 (30mL) 溶液加至 2- 氯 -3-( 氰基甲基 ) 苯甲酸 ( 实施 例 80， 步骤 a)(4.12g) 的乙醇 (30mL) 悬浮液中， 且将所得溶液加热回流 2 小时， 然后冷却过 夜。真空浓缩混合物以除去乙醇， 然后用水稀释， 且用乙酸乙酯洗涤 2 次。弃去有机相， 同 时水相用浓盐酸酸化至 pH 1， 且用乙酸乙酯萃取 3 次。 合并的萃取物用无水硫酸镁干燥， 且 真空浓缩， 得到粗副标题化合物， 其为黄色固体。收率为 4.11g。直接使用。

    [1838] c)2-(2- 氯 -3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 乙醇

    [1837] 在室温历时 5 分钟将硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 20mL) 逐份加至 3-( 羧基甲基 )-2- 氯苯甲酸 ( 实施例 80， 步骤 b)(4.11g) 的无水 THF(100mL) 悬 浮液中。将所得冒泡悬浮液在室温搅拌 30 分钟， 然后加热至回流且保持 60 分钟， 且冷却至 室温过夜。混合物通过历时 15 分钟滴加甲醇 (15mL) 来淬灭。混合物再用甲醇稀释， 得到 溶液， 然后真空浓缩所述溶液， 得到浆状物。浆状物通过快速硅胶色谱 ( 用 2％甲醇 / 二氯 甲烷洗脱 ) 纯化， 得到粗副标题化合物， 其为白色固体。收率为 1.44g。m/z 186(M+)(EI)。

    [1841] d)2- 氯 -3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛

    [1840] 将二氧化锰 (IV)(1.599g) 加至 2-(2- 氯 -3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 80， 步骤 c)(0.342g) 的 DCM(20mL) 溶液中， 且将所得悬浮液在室温搅拌过夜。然后将混合物浓 缩到硅胶上， 且通过快速硅胶色谱 ( 用 25％乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化 1 合物， 其为白色结晶固体。收率为 0.223g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ10.54(d， J ＝ 0.8Hz， 1H)， 7.83(dd， J ＝ 7.7， 1.5Hz， 1H)， 7.55(dd， J ＝ 7.7， 1.8Hz， 1H)， 7.35(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 3.94(dd， J ＝ 11.0， 6.4Hz， 2H)， 3.11(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 1.46(t， J ＝ 4.9Hz， 1H)。

    [1844] e)(9-(2- 氯 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一

    [1843] 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1845] (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三 氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.325g) 的 NMP(3mL) 溶液用乙酸 (0.067mL) 处理， 且搅 拌 5 分钟。然后加入 2- 氯 -3-(2- 羟基乙基 ) 苯甲醛 ( 实施例 80， 步骤 d)(0.217g) 的 NMP(4mL) 溶液， 将所得溶液搅拌 1 小时， 然后用三乙酰氧基硼氢化钠 (1.025g) 处理。将 混合物在室温搅拌过夜， 然后倒入饱和碳酸氢钠中， 且用乙酸乙酯萃取 2 次。合并的萃 取物用水洗涤 3 次， 用盐水洗涤 1 次， 然后用无水硫酸镁干燥， 且通过快速硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 2 ∶ 97 三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色胶状物。收 1 率为 0.411g。 HNMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.91(d， J ＝ 1.3Hz， 1H)， 7.30(d， J ＝ 7.2Hz， 1H)， 7.24-7.16(m， 2H)， 4.36(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.73-3.59(m， 8H)， 3.55(s， 2H)， 3.32( 七重 峰， J ＝ 6.8Hz， 1H)， 2.89(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 2.46-2.40(m， 1H)， 2.40-2.28(m， 1H)， 2.17(t， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 1.91( 五重峰， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 1.77-1.65(m， 2H)， 1.62-1.50(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 6.5Hz， 6H)。

    [1847] f)2-(2- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛

    [1846] 将 (9-(2- 氯 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 ) 甲 酮 ( 实 施 例 80， 步 骤 e)(0.386g) 的 DCM(5mL) 溶 液在冰 - 水中冷却， 用三氟乙酸 (0.125mL) 处理， 且搅拌 5 分钟。加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.519g)， 然后从冷却浴中取出混合物， 且在室温搅拌 35 分钟。溶液用饱和硫代硫酸钠溶 液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (5mL) 稀释， 且将所得混合物剧烈搅拌 10 分 钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机相用盐水洗涤， 用乙酸 (0.1mL) 酸化， 用 无水硫酸镁干燥， 且真空浓缩， 得到粗副标题化合物， 其为浅黄色胶状物。收率为 0.494g。 m/z476(M+H)+(APCI)。

    [1850] g)(R)-7-(2-(2- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1849] (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO2007027134， 实 施 例 1， 步 骤 d)(0.181g) 的 甲 醇 (2mL) 溶 液 用 乙 酸 (0.030mL) 处 理， 且搅拌 10 分钟。然后加入 2-(2- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 80， 步骤 f)(0.247g) 的甲 醇 (3mL) 溶液， 将所得混合物在室温搅拌 10 分钟， 然后在冰 - 水中冷却， 且用氰基硼氢化 钠 (0.102g) 处理。移开冷却浴， 且将混合物在室温搅拌过夜。第二天， 再加入氰基硼氢化 钠 (0.099g)， 且将混合物再搅拌 4 小时。溶液通过加入 1 滴水来淬灭， 过滤， 且经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。真空浓缩含有产物的馏 分， 且与乙腈共蒸发 3 次， 得到无色残余物。残余物用乙醚研磨， 得到固体， 过滤收集所述固 体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.053g。m/ 1 z 686/688(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ11.68(s， 1H)， 10.23(s， 1H)， 8.91( 宽 二 重 峰， J ＝ 26.7Hz， 2H)， 8.03(s， 1H)， 7.68-7.56(m， 1H)， 7.54-7.40(m， 2H)， 6.93(d， J＝ 8.5Hz， 1H)， 6.78(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.56-6.43(m， 1H)， 4.91( 宽 二 重 峰， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.57-4.43(m， 2H)， 3.90-3.42(m， 6H)， 3.38-3.25(m， 4H)， 3.24-3.02(m， 7H)， 2.08( 宽 二 重 峰， J ＝ 13.3Hz， 2H)， 1.92-1.54(m， 2H)， 1.34(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。1 个可交换的质子没有观 察。

    [1853] 实施例 81

    [1854] (R)-5-(2-(2- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三 氟乙酸盐 )

    [1852] a)(R)-5-(1-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-2-(2- 氯 -3-((4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙 基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮(R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.261g) 的甲醇 (2mL) 溶液用乙酸 (0.030mL) 处理， 且搅拌 10 分钟。然 后加入 2-(2- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 80， 步骤 f)(0.247g) 的甲醇 (3mL) 溶液， 将所得混 合物在室温搅拌 10 分钟， 然后在冰 - 水中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.102g) 处理。移开冷 却浴， 且将混合物在室温搅拌过夜。再加入氰基硼氢化钠 (0.101g)， 且将混合物搅拌过第 二夜。然后将溶液真空浓缩到快速硅胶上， 且所得粉末通过快速硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 3 ∶ 96 至 1 ∶ 5 ∶ 94 三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状 1 物。收率为 0.130g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.40(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 8.10(s， 1H)， 7.48(dd， J ＝ 7.3， 2.1Hz， 1H[)， 7.38-7.30(m， 2H)， 7.17(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.09(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.65(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 5.26(dd， J ＝ 7.6， 5.0Hz， 1H)， 3.91-3.78(m， 6H)， 3.72(s， 2H)， 3.55-3.46(m， 1H)， 3.10-3.03(m， 1H)， 2.99(s， 4H)， 2.93-2.86(m， 1H)， 2.68-2.47(m， 4H)， 1.94-1.84(m， 2H)， 1.80-1.68(m， 2H)， 1.55(d， J ＝ 7.0Hz， 6H)， 0.99(s， 9H)， 0.18(d， J ＝ 4.6Hz， 6H)。3 个可交换的质子没有观察。

    [1859] b)(R)-5-(2-(2- 氯 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三 氟乙酸盐 )

    [1858] 将 (R)-5-(1-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-2-(2- 氯 -3-((4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙 基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 81， 步骤 a)(0.124g) 和三乙胺三氢氟酸盐 (0.051mL) 的 THF(5mL) 溶液在室温搅拌过夜， 然后真空浓缩。将残余物溶解在甲醇 (4mL) 中， 过滤所 TM 得溶液， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。真空

    [1861] 浓缩含有产物的馏分， 且与乙腈共蒸发 3 次， 得到无色残余物。残余物用乙醚研磨， 得到固 体， 过滤收集所述固体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 得到标题化合物， 其为白色粉末。 1 收 率 为 0.076g。m/z 680/682(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.17(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.94(s， 1H)， 7.55(d， J ＝ 7.2Hz， 1H)， 7.47-7.34(m， 2H)， 7.14(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.55(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.34(dd， J ＝ 9.1， 4.0Hz， 1H)， 4.33-4.09( 宽 多 重 峰， 2H)， 3.77-3.60(m， 6H)， 3.44-2.87(m， 11H)， 2.02-1.87(m， 2H)， 1.81-1.65(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1862] 实施例 82

    [1863] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1864] a)2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 ) 苯基 ) 乙醇将 ‘880’ 氨溶液 (5mL) 加至 2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 12， 步骤 e)(2.02g) 的甲醇 (25mL) 溶液中。 将所得混合物搅拌 90min， 且蒸发溶剂。 残余物经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得 1 到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 1.44g。m/z291(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.18(t， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 7.13-7.02(m， 3H)， 4.34(s， 1H)， 3.61(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 3.51-3.45(m， 2H)， 3.41(s， 2H)， 2.71(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.62(t， J ＝ 4.9Hz， 2H)， 2.52(s， 2H)， 2.42-2.23(m， 4H)， 1.82-1.72(m， 2H)， 1.53-1.38(m， 2H)。1 个可交换的质

    [1867] 子没有观察。

    [1868] b)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (5- 异丙基噻吩 -3- 基 ) 甲酮

    [1869] 在 0 ℃将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.55g) 加至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施 例 82， 步骤 a)(0.32g)、 5- 异丙基噻吩 -3- 甲酸 (0.19g) 和三乙胺 (0.61mL) 的 DMF(7mL) 溶 液中。 将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 2h。 将混合物在乙酸乙酯 (100mL) 和盐水 (100mL) 之间分配， 有机相用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发溶剂。所得胶状物 经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙 胺梯度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题 化合物， 其为洁净胶状物。收率为 0.4g。m/z 443(M+H)+(APCI)。

    [1871] c)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1872] 在 0℃将三氟乙酸 (0.035mL) 加至 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 异丙基噻吩 -3- 基 ) 甲酮 ( 实施例 82， 步骤 b)(0.2g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.29g)。将所得黄色 溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.026mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.14g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.043g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸 TM 发。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合 并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。收 1 D6-DMSO， 90℃ )δ7.50-7.32(m， 5H)， 率为 0.07g。m/z 651(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， 6.96-6.88(m， 2H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.98-4.88(m， 1H)， 4.28(s， 2H)， 3.72-3.63(m， 2H)， 3.59-3.34(m， 4H)， 3.29-2.97(m， 11H)， 2.11-1.93(m， 2H)， 1.86-1.68(m， 2H)， 1.28(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1873] 实施例 83

    [1875] (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙 酸盐 )

    [1874] 在 0℃将 TFA(0.04mL) 加至 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 异丙基噻吩 -3- 基 ) 甲酮 ( 实施例 82， 步骤 b)(0.2g) 的 DCM(5mL) 溶液中。 将反应混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.29g)。 将混合物温热至 RT， 且搅拌 1h。 加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL)， 且将混合物剧烈搅拌 5min。分离各层， 且水层用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的有机层用 盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。将残余物重新溶解在甲 醇 (5mL) 中， 加入乙酸 (0.03mL) 和 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙 基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.15g)， 然后将混合物搅拌 5min， 且在冰浴 中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.043g)， 将反应混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。浓缩反 应混合物， 且经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨梯度 洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发。将残余物溶解在 THF(5mL) 中， 加入三乙胺三 氢氟酸盐 (0.22mL)， 且将混合物搅拌过夜。蒸发溶剂， 且残余物与甲苯共沸 2 次。经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 蒸 发， 且用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.06g。 m/z 645(M+H)+(APCI)。 1 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ8.17(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 7.48(s， 1H)， 7.45-7.33(m， 4H)， 7.14(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.00(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.90(s， 1H)， 6.54(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.36(dd， J ＝ 8.5， 4.1Hz， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.72-3.63(m， 2H)， 3.57-3.38(m， 4H)， 3.28(t， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 3.22-2.98(m， 9H)， 2.10-1.95(m， 2H)， 1.81-1.62(m， 2H)， 1.28(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [1878] 实施例 84

    [1879] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 异丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1877] a)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丁基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1881] 在 0 ℃将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.34g) 加至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实 施例 82， 步骤 a)(0.2g)、 2- 异丁基噻唑 -4- 甲酸 (0.13g) 和三乙胺 (0.38mL) 的 DMF(7mL) 溶液中。将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 2h。将混合物在乙酸乙酯 (100mL) 和盐水 (100mL) 之间分配， 有机相用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发溶剂。所 得胶状物经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙 酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且减压蒸发溶剂， 得 1 到副标题化合物， 其为洁净胶状物。收率为 0.2g。m/z 458(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.99(s， 1H)， 7.26-7.03(m， 4H)， 4.60(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.72-3.50(m， 8H)， 3.46-3.34(m， 2H)， 2.94-2.84(m， 2H)， 2.71(t， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 2.43-2.01(m， 5H)， 1.74-1.37(m， 4H)， 1.01-0.90(m， 6H)。

    [1884] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 异丁基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1883] 在 0℃将三氟乙酸 (0.032mL) 加至 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丁基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 84， 步骤 a)(0.19g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.26g)。将所得 黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸 乙酯 (20mL) 萃取。 合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.024mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步 骤 d)(0.11g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。 然后加入氰基硼氢化钠 (0.04g)，将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸 TM 发。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-35％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合 并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率 1 为 0.1g。m/z 666(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.93(s， 1H)， 7.44-7.33(m， 4H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.92(dd， J ＝ 7.9，5.1Hz， 1H)， 4.34-4.21(m， 2H)， 3.73-3.60(m， 6H)， 3.28-2.96(m， 10H)， 2.88(d， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.11-1.95(m， 3H)， 1.84-1.64(m， 2H)， 0.95(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。5 个可交换的质子没有 观察。

    [1887] 实施例 85

    [1888] (R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(6- 异丙基吡啶 -2- 甲酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1889] a)2- 异丙基吡啶在 -70℃历时 20min 将丁基锂溶液 ( 浓度为 1.6M 的己烷溶液， 50mL) 滴加至 2- 乙 基吡啶 (9.34mL) 的四氢呋喃 (50mL) 溶液中。将混合物搅拌 2h， 然后历时 15min 滴加甲基 碘 (5mL)。将所得橙色浆液温热至 RT， 且搅拌过夜。蒸发溶剂， 且残余物用乙醚 (100mL) 稀 释。有机层用水 (2×100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到 1 副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 9.1g。m/z 122(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ8.56-8.52(m， 1H)， 7.60(td， J ＝ 7.7， 2.1Hz， 1H)， 7.19-7.15(m， 1H)， 7.09(ddd， J＝ 7.4， 4.9， 1.2Hz， 1H)， 3.06( 七重峰， J ＝ 6.9Hz， 1H)， 1.31(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [1893] b)2- 异丙基吡啶 -1- 氧化物

    [1892] 将 MCPBA(22.0g) 加至 2- 异丙基吡啶 ( 实施例 85， 步骤 a)(9.1g) 的 DCM(250mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 3h。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液 (4×100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。 经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯至 10％甲醇 / 乙 酸乙酯梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色油状 1 物。收率为 3.9g。m/z 138(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMS0)δ8.23(dd， J ＝ 6.2， 1.5Hz， 1H)， 7.41(dd， J ＝ 7.7， 2.3Hz， 1H)， 7.35-7.24(m， 2H)， 3.56( 七重峰， J ＝ 7Hz， 1H)， 1.20(d， J ＝ 7Hz， 6H)。

    [1896] c)6- 异丙基吡啶 -2- 甲腈

    [1895] 将三甲基甲硅烷基氰化物 (1.53mL) 加至 2- 异丙基吡啶 -1- 氧化物 ( 实施例 85， 步骤 b)(1.3g) 的 DCM(40mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 5min。加入二乙基氨基甲酰氯 (1.2mL)， 且将混合物搅拌 3 天。加入碳酸钾水溶液 (10％， 40mL)， 且将混合物搅拌 10min。 分离各层， 且水相用 DCM(2×40mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (40mL) 洗涤， 用硫酸钠干 燥， 过滤， 且蒸发。经硅胶色谱 ( 用 3 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。合并含有产物的 馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。 收率为 1.23g。 m/z 147(M+H)+(APCI)。 1 H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.74(t， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 7.51(dd， J ＝ 7.6， 0.9Hz， 1H)， 7.39(dd， J ＝ 8.1， 0.9Hz， 1H)， 3.11( 七重峰， J ＝ 6.7Hz， 1H)， 1.31(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。

    [1899] d)6- 异丙基吡啶 -2- 甲酸

    [1898] 将浓盐酸 (15mL) 加至 6- 异丙基吡啶 -2- 甲腈 ( 实施例 85， 步骤 c)(1.23g) 的甲醇 (30mL) 溶液中。将所得混合物加热回流 17h， 且冷却至 RT。将混合物小心倒入氢氧化钠溶 液 (10M， 50mL) 中， 且在 RT 搅拌过夜。浓缩反应混合物， 且使用 2M HCl 溶液将 pH 调整至 5。 含水混合物用氯仿 (3×100mL) 萃取。合并有机溶液， 用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。 收率为 0.94g。 m/z 166(M+H)+(APCI)。 1 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.89-7.81(m， 2H)， 7.48(dd， J ＝ 7.2， 1.3Hz， 1H)， 3.05( 七重峰， J ＝ 6.9Hz， 1H)， 1.22(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [1902] e)(9-(2- 氟 -3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(6- 异丙基吡啶 -2- 基 ) 甲酮

    [1901] 在 0 ℃将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.20g) 加至 9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 ( 实施例 78， 步骤 d)(0.17g)、 6- 异丙基吡啶 -2- 甲酸 ( 实施例 85， 步骤 d)(0.07g) 和三乙胺 (0.22mL) 的 DMF(7mL) 溶液中。将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 2h。 将混合物在乙酸乙酯 (100mL) 和盐水 (100mL) 之间分配。分离有机相， 用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发溶剂。 将残余物溶解在 THF(10mL) 中， 且加入 TBAF 的 THF 溶液 (1M， 0.8mL)。将所得混合物搅拌 2h， 且蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物 的馏分， 加入甲苯 (50mL)， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物， 其为洁净胶状物。收率为 0.2g。m/z 456(M+H)+(APCI)。

    [1904] f)(R)-7-(2-(2- 氟 -3-((4-(6- 异丙基吡啶 -2- 甲酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1906] 在 0℃将 TFA(0.034mL) 加至 (9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(6- 异丙基吡啶 -2- 基 ) 甲酮 ( 实施例 85， 步骤 e)(0.2g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.28g)。将所得黄色 溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.025mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步 骤 d)(0.12g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。 然后加入氰基硼氢化钠 (0.04g)，

    [1907] 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。 经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-35％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合并 含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.057g。m/z 664(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.81(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 7.54-7.21(m， 5H)， 6.94(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.97-4.82(m， 1H)， 4.40-4.25(m， 2H)， 3.77-3.47(m， 6H)， 3.29-2.99(m， 11H)， 2.11-1.62(m， 4H)， 1.24(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [1908] 实施例 86

    [1909] (R)-7-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟 乙酸盐 )

    [1910] a)(5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [1911] 将 HATU(0.209g) 加至搅拌的 5- 乙基噻吩 -3- 甲酸 (0.086g)、 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 82， 步骤 a)(0.160g) 和三 乙胺 (0.3mL) 的 DMF(2mL) 溶液中。1h 后， 反应混合物用乙酸乙酯 (25mL) 稀释， 且用盐 水 (2×25mL) 洗涤。真空蒸发乙酸乙酯层。经硅胶色谱 ( 用 10 ∶ 1 乙酸乙酯∶三乙胺 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 0.18g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.52(s， 1H)， 7.20(t， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 7.13-7.05(m， 3H)， 6.90(s， 1H)， 4.60(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.64-3.55(m， 4H)， 3.53-3.46(m， 2H)， 3.31(s， 4H)， 2.81(q， J ＝ 7.3Hz， 2H)， 2.74-2.66(m， 2H)， 2.37-2.23(m， 4H)， 1.75-1.65(m， 2H)， 1.56-1.35(m， 2H)， 1.24(t， J ＝ 7.7Hz， 3H)。

    [1914] b)2-(3-((4-(5- 乙 基 噻 吩 -3- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛

    [1913] 将戴斯 - 马丁高碘剂 (0.232g) 加至搅拌的 (5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(3-(2- 羟 基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 86， 步骤 a) (0.180g) 和三氟乙酸 (0.042mL) 的 DCM(5mL) 溶液中。1h 后， 加入乙酸乙酯 (30mL)， 接着 加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 的混合物。充分振摇反应混合 物， 且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、 水和盐水洗涤。加入乙酸 (0.08mL)， 溶液 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发 ( 浴温为～ 30℃ )， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率 为 0.17g。直接使用。m/z 427(M+H)+(APCI)。

    [1917] c)(R)-7-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二

    [1916] ( 三氟乙酸盐 )

    [1918] 将乙酸 (0.036mL) 加至搅拌的 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.166g) 和 2-(3-((4-(5- 乙基噻 吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施 例 86， 步骤 b)(0.180g) 的甲醇 (8mL) 溶液中。1min 后， 加入氰基硼氢化钠 (0.080g)。1.5h TM 后， 对反应混合物进行过滤， 且经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水 溶液 ) 纯化。合并含有纯产物的馏分， 且真空蒸发。加入乙腈 (200mL)， 且真空蒸发溶液， 得 到胶状物。将该操作重复 2 次。加入乙醚， 收集标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.13g。 1 D6-DMSO， 90℃ )δ11.37(s， 1H)， 7.51-7.30(m， 5H)， m/z 637(M+H)+(APCI)。 H NMR(300MHz， 6.93(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.91-6.86(m， 1H)， 4.94-4.86(m， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.71-3.31(m， 8H)， 3.29-2.93(m， 8H)， 2.81(q， J ＝ 7.9Hz， 2H)， 2.15-1.91(m， 2H)， 1.75-1.51(m， 2H)， 1.25(t， J ＝ 7.6Hz， 3H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [1920] 实施例 87

    [1921] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三 氟乙酸盐 )

    [1919] a) 硫代丁酰胺

    [1925] 将五硫化二磷 (3g) 加至丁酰胺 (5g) 的 MTBE(300mL) 悬浮液中， 且将所得混合物 搅拌 3h。反应混合物通过硅藻土来过滤， 且滤垫用 MTBE(100mL) 洗涤。蒸发合并的滤液 和洗涤液， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 5.2g。1H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ9.32(s， 1H)， 9.12(s， 1H)， 2.43(t， J ＝ 7.4Hz， 2H)， 1.72-1.59(m， 2H)， 0.86(t， J ＝ 7.4Hz， 3H)。

    [1926] b)2- 丙基噻唑 -4- 甲酸乙酯

    [1927] 将 3- 溴 -2- 氧代丙酸乙酯 (6.32mL) 加至硫代丁酰胺 ( 实施例 87， 步骤 a)(5.2g) 的乙醇 (100mL) 溶液中， 且将所得混合物加热回流过夜。蒸发溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯 (100mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (100mL) 之间分配。 分离各层， 且水相用乙酸乙酯 (2×100mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。经硅胶色谱 ( 用 10 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化 1 合物， 其为黄色油状物。收率为 5.24g。m/z 200(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， CDCl3) δ8.05(s， 1H)， 4.42(q， J ＝ 7.2Hz， 2H)， 3.04(t， J ＝ 7.7Hz， 2H)， 1.89-1.78(m， 2H)， 1.40(t， J ＝ 7.2Hz， 3H)， 1.02(t， J ＝ 7.2Hz， 3H)。

    [1929] c)2- 丙基噻唑 -4- 甲酸

    [1928] 将氢氧化锂一水合物 (4.4g) 加至 2- 丙基噻唑 -4- 甲酸乙酯 ( 实施例 87， 步骤 b) (5.24g) 在 THF(80mL) 和水 (20mL) 的混合物中的溶液中。 将所得混合物搅拌过夜。 反应混合 物用浓盐酸酸化， 且蒸发挥发物。 所得含水混合物用氯化钠饱和， 且用乙酸乙酯 (3×100mL) 萃取。合并的有机溶液用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收 1 率为 2.5g。 H NMR(300MHz， D6-DMSO)δ12.91(s， 1H)， 8.31(s， 1H)， 2.97(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 1.81-1.67(m， 2H)， 0.95(t， J ＝ 7.3Hz， 3H)。

    [1932] d)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1931] 在 0 ℃将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.24g) 加至 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实 施例 82， 步骤 a)(0.14g)、 2- 丙基噻唑 -4- 甲酸 ( 实施例 87， 步骤 c)(0.084g) 和三乙胺 (0.27mL) 的 DMF(7mL) 溶液中。 将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 2h。 将混合物在乙酸乙酯 (100mL) 和盐水 (100mL) 之间分配， 有机相用盐水 (2×100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发溶剂。所得胶状物经硅胶色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 加入甲苯 (200mL)， 且减 压蒸发溶剂， 得到副标题化合物， 其为洁净胶状物。收率为 0.14g。m/z 444(M+H)+(APCI)。

    [1934] 244102083839 A CN 1020838471说明书236/380 页HNMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.91(s， 1H)， 7.18(t， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 7.12-7.04(m， 3H)， 4.37-4.30(m， 1H)， 3.69-3.57(m， 8H)， 3.41(s， 2H)， 2.98(t， J ＝ 7.3Hz， 2H)， 2.71(t， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 2.40-2.23(m， 4H)， 1.82-1.64(m， 4H)， 1.59-1.46(m， 2H)， 0.97(t， J ＝ 7.4Hz， 3H)。

    [1935] e)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1936] 在 0℃将 TFA(0.023mL) 加至 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 87， 步骤 d)(0.13g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.19g)。将所得黄色溶液温热 至 RT， 且搅拌 1h。 然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙 酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃 取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸 发。 将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.017mL) 和 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙 基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.077g)， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.028g)， 将混合物温 且将混合物搅拌 5min， 热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶甲醇∶ ‘880’氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 真空蒸发。经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-35 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合并含有产物 的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.09g。 1 m/z652(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.29(s， 1H)， 7.96-7.92(m， 1H)， 7.46-7.32(m， 4H)， 6.98-6.92(m， 1H)， 6.81-6.75(m， 1H)， 4.98-4.90(m， 1H)， 4.34-4.27(m， 2H) ， 3.76-3.62(m ， 6H) ， 3.30-2.94(m ， 12H) ， 2.08-1.98(m ， 2H) ， 1.85-1.70(m ， 4H) ， 1.01-0.92(m， 3H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [1938] 实施例 88

    [1939] (R)-7-(2-(3-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 丙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1937] a)3-(2- 氟苯基 ) 丙 -1- 醇将硼烷 - 二甲硫醚络合物溶液 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 27.6mL) 滴加至 3-(2- 氟 苯基 ) 丙酸 (3.09g) 的四氢呋喃 (25mL) 溶液中， 将所得混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。反 应混合物用甲醇淬灭， 且当不再冒泡时， 蒸发。经硅胶色谱 ( 用 4 ∶ 1 至 1 ∶ 1 异己烷∶ 乙酸乙酯梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄 1 CDCl3)δ7.24-7.13(m， 2H)， 7.09-6.97(m， 2H)， 清油状物。收率为 2.72g。 H NMR(300MHz， 3.67(t， J ＝ 6.3Hz， 2H)， 2.74(t， J ＝ 7.6Hz， 2H)， 1.95-1.83(m， 2H)。1 个可交换的质子没 有观察。

    [1944] b) 叔丁基 (3-(2- 氟苯基 ) 丙氧基 ) 二甲基甲硅烷

    [1943] 将 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氯 (3.19g) 加 至 在 冰 浴 中 冷 却 的 咪 唑 (3.6g) 和 3-(2- 氟苯基 ) 丙 -1- 醇 ( 实施例 88， 步骤 a)(2.72g) 的无水 DMF(30mL) 溶液中。45min 后， 反应混合物用乙酸乙酯 (100mL) 稀释， 用水 (3×100mL) 洗涤， 且蒸发。所得胶状物经 硅胶色谱 ( 用异己烷洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为 1 澄清油状物。收率为 4.4g。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ7.23-7.09(m， 2H)， 7.09-6.94(m， 2H)， 3.64(t， J ＝ 6.3Hz， 2H)， 2.75-2.66(m， 2H)， 1.89-1.76(m， 2H)， 0.91(s， 9H)， 0.05(s， 6H)。

    [1947] c)3-(3-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 丙基 )-2- 氟苯甲醛

    [1946] 在 -78 ℃历时 5min 将叔丁基 (3-(2- 氟苯基 ) 丙氧基 ) 二甲基甲硅烷 ( 实施例 88， 步骤 b)(4.4g) 滴加至仲丁基锂 ( 浓度为 1.4M 的环己烷溶液， 11.7mL) 和 1， 1， 4， 7， 7- 五 甲基二亚乙基三胺 (3.4mL) 的 THF(25mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 2h， 然后小心加入 DMF(6.4mL)， 将所得混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。反应混合物用水 (100mL) 淬灭， 然后 加入乙酸乙酯 (250mL)。分离各相， 且有机相用水 (2×100mL)、 2M HCl 溶液 (2×50mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 然后用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发。经硅胶色谱 ( 用异己烷至 10 ％乙 醚 / 异己烷梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清 1 油状物。收率为 1g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ10.38(s， 1H)， 7.73-7.67(m， 1H)， 7.48(td， J ＝ 7.4， 1.8Hz， 1H)， 7.18(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 3.66(t， J ＝ 6.0Hz， 2H)， 2.82-2.75(m， 2H)， 1.90-1.80(m， 2H)， 0.91(s， 9H)， 0.06(s， 6H)。

    [1950] d)(9-(2- 氟 -3-(3- 羟 基 丙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1951] 将 3-(3-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 丙基 )-2- 氟苯甲醛 ( 实施例 88， 步骤 c)(0.15g) 加至 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.19g) 和乙酸 (0.03mL) 的 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (10mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 15min， 然后在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢 化钠 (0.16g)， 且将混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和水 (100mL) 的混合物中。水层用乙酸乙酯 (3×100mL) 萃取。合并的有机层用水 (50mL) 和盐 水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。将残余物重新溶解在 THF(10mL) 中， 且加入 TBAF 溶液 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 1.52mL)。将所得混合物搅拌 2h， 且蒸发溶剂。残余物 通过柱色谱 ( 用 4 ∶ 1 异己烷∶乙酸乙酯 +5％三乙胺至乙酸乙酯 +5％三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 0.22g。 1 m/z 476(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.99(s， 1H)， 7.24-7.12(m， 2H)， 7.08-7.01(m， 1H)， 4.48(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.74-3.38(m， 10H)， 2.62(t， J ＝ 7.7Hz， 2H)， 2.46-2.13(m， 4H)， 1.74-1.44(m， 6H)， 1.35(d， J ＝ 6.4Hz， 6H)。1 个质子由于水峰而模糊。

    [1953] e)(R)-7-(2-(3-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 丙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1952] 在 0 ℃ 将 三 氟 乙 酸 (0.032mL) 加 至 (9-(2- 氟 -3-(3- 羟 基 丙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 ) 甲 酮 ( 实 施 例 88， 步骤 d)(0.2g) 的 DCM(5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂

    [1955] (0.27g)。将所得黄色溶液温热至 RT， 且搅拌 1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液 (5mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (5mL) 和乙酸乙酯 (20mL) 的混合物， 且将所得混合物剧烈搅拌 10min。 分离水相， 且用乙酸乙酯 (20mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用几滴乙 酸酸化， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入乙酸 (0.024mL) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.11g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然 后加入氰基硼氢化钠 (0.040g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶 色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合 TM 并含有产物的馏分， 且真空蒸发。经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-35 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得 1 到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.14g。m/z 684(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.25(s， 1H)， 7.98-7.89(m， 1H)， 7.52-7.35(m， 2H)， 7.28-7.16(m， 1H)， 6.98-6.86(m， 1H)， 6.82-6.70(m， 1H)， 4.96-4.84(m， 1H)， 4.39-4.24(m， 2H)， 3.77-3.58(m， 6H)， 3.34-2.94(m， 9H)， 2.80-2.66(m， 2H)， 2.10-1.70(m， 6H)， 1.41-1.27(m， 6H) 和 5 个可交 换的质子没有观察。

    [1956] 实施例 89

    [1957] (R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(3-((10-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-7- 氧 杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -3- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1958] a)4-( 氰基甲基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸叔丁酯1- 氧杂 -6- 氮杂螺 [2.5] 辛烷 -6- 甲酸叔丁酯 (2g) 的 DMF(20mL) 溶液用氰化钾 (0.672g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 4 天。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 60％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。 1 收率为 1.18g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ3.95-3.85(m， 2H)， 3.19-3.10(m， 2H)， 2.54(s， 2H)， 1.86(s， 1H)， 1.76-1.61(m， 4H)， 1.46(s， 9H)。

    [1962] b)4-(2- 氨基乙基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸叔丁酯

    [1961] 4-( 氰基甲基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 89， 步骤 a)(1.4g) 在乙醇 (20mL) 和乙酸 (20mL) 的混合物中的溶液在二氧化铂 (IV)(0.25g) 存在下用压力为 4 大气 压的氢气氢化 4 小时。滤出催化剂， 且减压除去溶剂。将残余物在稀 NaOH 水溶液和乙酸 乙酯之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 1.1g。直接使用。

    [1965] c)4-(2-(2- 氯乙酰氨基 ) 乙基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸叔丁酯

    [1964] 历 时 10 分 钟 将 氯 乙 酰 氯 (0.483mL) 滴 加 至 在 0 ℃ 剧 烈 搅 拌 的 4-(2- 氨 基 乙 基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 89， 步骤 b)(1.1g) 的乙酸乙酯 (25mL) 溶液和 碳酸钾 (1.77g) 的水 (20mL) 溶液的混合物中。然后将混合物在 0℃搅拌 45 分钟， 然后用 乙酸乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.9g。m/z 319(M-H) (APCI)。

    [1968] d)9- 氧代 -7- 氧杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -3- 甲酸叔丁酯

    [1967] 历时 6 小时将 4-(2-(2- 氯乙酰氨基 ) 乙基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸叔丁酯 ( 实施 例 89， 步骤 c)(0.3g) 的无水 THF(18mL) 溶液滴加至回流的叔丁醇钾 ( 浓度为 1M 的叔丁醇 溶液， 3mL) 和无水 THF(60mL) 的混合物中。 加完后， 将混合物再加热回流 15 分钟， 然后冷却 至室温。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶 1 剂。用乙醚研磨， 得到副标题化合物。收率为 0.117g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.67(s， 1H)， 4.01(s， 2H)， 3.57(d， J ＝ 13.1Hz， 2H)， 3.11(dd， J ＝ 9.6， 4.2Hz， 2H)， 3.05-2.95(m， 2H)， 1.85-1.76(m， 4H)， 1.38(s， 9H)， 1.37-1.32(m， 2H)。

    [1971] e)7- 氧杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -3- 甲酸叔丁酯

    [1970] 将硼烷 - 二甲硫醚络合物 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 2.88mL) 加至 9- 氧代 -7- 氧 杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -3- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 89， 步骤 d)(0.41g) 的无水 THF(40mL) 溶液中， 然后将反应混合物在 70℃和氮气下加热 30 分钟。将混合物冷却至室温， 且用甲醇淬灭。减压除去溶剂， 且将残余物溶解在甲醇 (100mL) 中。加入 N1， N2- 二甲 基乙 -1， 2- 二胺 (1.0g)， 且将混合物在氮气下加热回流 16h。再加入 N1， N2- 二甲基乙 -1， 2- 二胺 (1.0g)， 且继续回流 16h。减压蒸发溶剂， 且残余物与甲苯共沸。粗产物通过快速硅 胶色谱 ( 使用 6％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发 至干， 得到副标题化合物。收率为 0.176g。m/z 271(M+H)+(APCI)。

    [1974] f)10-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-7- 氧杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -3- 甲酸 叔丁酯

    [1975] 将 HATU(0.322g) 一次性加至 0℃的 7- 氧杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -3- 甲 酸叔丁酯 ( 实施例 89， 步骤 e)(0.176g)、 2- 甲基噻唑 -4- 甲酸 (0.093g) 和三乙胺 (0.36mL) 的 DMF(10mL) 溶液中。然后将混合物在 20℃搅拌 1 小时。将反应混合物在乙酸乙酯和盐 水之间分配。有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过 快速硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率 1 D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.78(s， 1H)， 3.69(s， 4H)， 3.65-3.62(m， 2H)， 为 210mg。 H NMR(400MHz， 3.59-3.53(m， 2H)， 3.11-3.03(m， 2H)， 2.66(s， 3H)， 1.85-1.81(m， 2H)， 1.74-1.67(m， 2H)， 1.39(s， 9H)， 1.38-1.33(m， 2H)。

    [1977] g)(2- 甲基噻唑 -4- 基 )(7- 氧杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -10- 基 ) 甲酮三 氟乙酸盐

    [1976] 10-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-7- 氧杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -3- 甲酸叔 丁酯 ( 实施例 89， 步骤 f)(0.21g) 的 DCM(10mL) 溶液用三氟乙酸 (10mL) 处理， 且将溶液在 20℃静置 25 分钟。加入甲苯 (40mL)， 且减压蒸发溶剂。残余物与乙腈共沸， 得到副标题化 合物。收率为 0.21g。m/z 296(M+H)+(APCI)。

    [1980] h)(3-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-7- 氧杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -10- 基 ) (2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [1979] (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(7- 氧杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -10- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 89， 步骤 g)(0.21g) 的乙腈 (15mL) 溶液用三乙胺 (0.214mL) 处理， 接着 用 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 ( 实施例 6， 步骤 a)(0.121g) 处理。将反应混合物在 20℃ 搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂， 且将残余物在 DCM 和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。水层用 DCM 重新萃取 2 次， 合并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶 色谱 ( 使用 6％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至 干， 得到副标题化合物。收率为 0.21g。m/z 430(M+H)+(APCI)。

    [1983] i)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((10-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-7- 氧杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -3- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1984] (3-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-7- 氧杂 -3， 10- 二氮杂螺 [5.6] 十二烷 -10- 基 ) (2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 89， 步骤 h)(0.21g) 的 DCM(15mL) 溶液用三氟乙酸 (0.038mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.311g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.028mL) 加至该溶液中， 然后减压除去溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.193g) 和乙酸 (0.028mL) 的甲醇 (15mL) 溶液中。 将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.061g) 处理。 移开冷却浴， 且 将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合物用饱 和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减 TM 压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙 腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率 1 为 0.145g。 m/z 638(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.79(s， 1H)， 7.44-7.32(m， 4H)， 6.93(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.94-4.89(m， 1H)， 4.28(s， 2H)， 3.71(s， 4H)， 3.68-3.64(m， 2H)， 3.25(t， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 3.20-2.99(m， 8H)， 2.66(s， 3H)， 2.04-1.95(m， 2H)， 1.91-1.83(m， 2H)， 1.78-1.67(m， 2H)。5 个可交换的质子没 有观察。

    [1986] 实施例 90

    [1987] (R)-7-(2-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [1985] a)2-(2- 氟苯基 ) 乙酸甲酯2-(2- 氟苯基 ) 乙酸 (9.6g) 的甲醇 (200mL) 溶液用三甲基甲硅烷基氯 (10mL) 处 理， 且将混合物加热回流 2 小时。减压除去溶剂， 将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液 之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂， 得到副标题化合物。收率为 9.7g。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.29-7.23(m， 2H)， 7.13-7.03(m， 2H)， 3.71(s， 3H)， 3.68(s， 2H)。

    [1992] b)2-(2- 氟苯基 )-2- 甲基丙酸甲酯

    [1991] 在 0℃向碘甲烷 (3.2mL) 的无水 DMF(80mL) 溶液中加入氢化钠 ( 浓度为 60％的悬 浮液， 2g)， 接着加入 2-(2- 氟苯基 ) 乙酸甲酯 ( 实施例 90， 步骤 a)(2.75g)。 将混合物缓慢温 热至室温， 然后在室温搅拌 5 小时。 反应混合物通过小心加入饱和氯化铵水溶液 (120mL) 来 淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取 3 次， 合并的有机层用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压 除去溶剂。 粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 8％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。 将纯的 1 馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。 收率为 2.6g。H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.46-7.40(m， 1H)， 7.35-7.29(m， 1H)， 7.22-7.11(m， 2H)， 3.58(s， 3H)， 1.48(s， 6H)。

    [1995] c)2-(2- 氟苯基 )-2- 甲基丙酸

    [1994] 将氢氧化钠 (1g) 的水 (50mL) 溶液加至 2-(2- 氟苯基 )-2- 甲基丙酸甲酯 ( 实施 例 90， 步骤 b)(2.6g) 在甲醇 (50mL) 和 THF(50mL) 中的溶液中。将反应混合物在 40℃加热 40 小时。减压除去有机层， 且残留水溶液用乙酸乙酯洗涤。冷却水层， 且通过加入浓 HCl 来 酸化。 混合物用乙酸乙酯萃取， 有机层用盐水洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶 剂， 得到副标题化合物。收率为 1.5g。m/z 181(M-H) (APCI)。

    [1998] d)2-(2- 氟苯基 )-2- 甲基丙 -1- 醇

    [1997] 将硼烷 - 二甲硫醚 ( 浓度为 2M 的 THF 溶液， 12.35mL) 滴加至 2-(2- 氟苯基 )-2- 甲 基丙酸 ( 实施例 90， 步骤 c)(1.5g) 的 THF(30mL) 溶液中。将反应混合物在 20℃搅拌 8 小 时。混合物通过小心加入甲醇来淬灭直到不再放出气体。减压除去溶剂， 且残余物与甲苯 共沸。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 30％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的 馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 1.3g。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.36-7.31(m， 1H)， 7.25-7.19(m， 1H)， 7.13-7.08(m， 1H)， 7.04-6.99(m， 1H)， 3.79(dd， J ＝ 6.4， 1.0Hz， 2H)， 1.39(d， J ＝ 1.0Hz， 6H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [2001] e) 叔丁基 (2-(2- 氟苯基 )-2- 甲基丙氧基 ) 二甲基甲硅烷

    [2000] 在 20℃将叔丁基二甲基甲硅烷基氯 (1.4g) 逐份加至搅拌的 2-(2- 氟苯基 )-2- 甲 基丙 -1- 醇 ( 实施例 90， 步骤 d)(1.3g) 和咪唑 (0.631g) 的 DMF(7mL) 溶液中。 将反应混合物 在室温搅拌 3 小时， 然后在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干 燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。 粗产物通过快速硅胶色谱 ( 洗脱梯度为 100％异己烷至 1％乙醚 / 异己烷 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 1.4g。1H NMR(400MHz， CDCl 3) δ 7.34-7.29(m ， 1H) ， 7.20-7.14(m ， 1H) ， 7.08-7.03(m ， 1H) ， 7.00-6.94(m ， 1H) ， 3.71(s， 2H)， 1.35(s， 6H)， 0.80(s， 9H)， -0.06(s， 6H)。

    [2004] f)3-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2- 甲基丙 -2- 基 )-2- 氟苯甲醛

    [2003] 在氮气下将仲丁基锂 ( 浓度为 1.4M 的环己烷溶液， 3.54mL) 加至无水四氢呋喃 (10mL) 中， 且将溶液冷却至 -78℃。缓慢滴加 N1-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-N1， N2， N2- 三 甲基乙 -1， 2- 二胺 (0.859g)。然后历时 5 分钟滴加叔丁基 (2-(2- 氟苯基 )-2- 甲基丙氧 基 ) 二甲基甲硅烷 ( 实施例 90， 步骤 e)(1.4g) 的无水四氢呋喃 (3mL) 溶液。将反应混合物 在 -78℃搅拌 2 小时。历时 5 分钟滴加 DMF(2.69mL)， 且将混合物在 -78℃搅拌 1 小时， 接着 在室温搅拌 45 分钟。 反应混合物通过加入水来淬灭。 加入乙酸乙酯 (200mL)， 且有机层用水 洗涤 3 次， 接着用 2M HCl 洗涤 2 次， 用水洗涤 2 次， 然后用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 洗脱梯度为 1 至 5％乙酸乙酯 / 异己烷 ) 纯化。 1 将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。 收率为 0.98g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ10.39(s， 1H)， 7.75-7.70(m， 1H)， 7.63-7.58(m， 1H)， 7.19(t， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 3.74(s， 2H)， 1.39(d， J ＝ 1.3Hz， 6H)， 0.79(s， 9H)， -0.05(s， 6H)。

    [2007] g)(9-(2- 氟 -3-(1- 羟基 -2- 甲基丙 -2- 基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5]

    [2006] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2008] 将三乙酰氧基硼氢化钠 (0.502g) 加至在 0℃搅拌的 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.668g)、 3-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2- 甲基丙 -2- 基 )-2- 氟苯甲醛 ( 实施例 90， 步骤 f)(0.49g) 和乙酸 (0.090mL) 的 NMP(20mL) 溶液中。然后将反应混合物在 20℃搅拌 18 小 时。将混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠 干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。将所得胶状物溶解在 THF(20mL) 中， 且用四丁基氟化铵 ( 浓 度为 1M 的 THF 溶液， 3.16mL) 处理。将溶液在 20℃静置 8 小时。减压蒸发溶剂， 且粗产物 通过快速硅胶色谱 ( 洗脱梯度为 0 至 1％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 )) 纯化。将纯 的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.63g。m/z 490(M+H)+(APCI)。

    [2010] h)(R)-7-(2-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2009] (9-(2- 氟 -3-(1- 羟基 -2- 甲基丙 -2- 基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 90， 步骤 g)(0.21g) 的 DCM(15mL) 溶液用三氟乙酸 (0.033mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.273g) 处理， 且将所得混合 物在 20 ℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的 有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.025mL) 加至该溶液 中， 然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙 基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.169g) 且用氰基硼氢化钠 和乙酸 (0.025mL) 的甲醇 (15mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， (0.054g) 处理。移开冷却浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性

    [2012] HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏 分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.125g。m/z 698(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ11.25(s， 1H)， 7.93(s， 1H)， 7.56-7.46(m， 2H)， 7.31-7.25(m， 1H)， 6.89(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.75(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.97-4.91(m， 1H)， 4.31(s， 2H)， 3.70(s， 4H)， 3.65(s， 2H)， 3.50-3.37(m， 2H)， 3.33-3.26(m， 1H)， 3.23-3.15(m， 2H)， 3.12-3.02(m， 4H)， 2.06-1.97(m， 2H)， 1.83-1.72(m， 2H)， 1.50(s， 6H)， 1.34(d， J ＝ 6.8Hz， 6H)。5 个可交换的 质子没有观察。

    [2013] 实施例 91

    [2014] (R)-7-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2015] a)(5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2016] 将 HATU(0.316g) 一次性加至 0℃的 9-(3-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙 基 )-2- 氟苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 ( 实施例 78， 步骤 d)(0.271g)、 5- 乙 基噻吩 -3- 甲酸 (0.1g) 和三乙胺 (0.36mL) 的 DMF(10mL) 溶液中。然后将混合物在 20℃搅 拌 1 小时。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干 燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在 THF(20mL) 中， 且用四丁基氟化铵 ( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 1.921mL) 处理。将反应混合物在 20℃静置 18 小时， 然后减压除去溶剂。粗产 物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将 纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.12g。m/z 447(M+H)+(APCI)。

    [2019] b)(R)-7-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2018] (5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(2- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 91， 步骤 a)(0.12g) 的 DCM(15mL) 溶液用三氟乙酸 (0.021mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.171g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.015mL) 加至该溶液中， 然后减压除去溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.106g) 和乙酸 (0.015mL) 的甲 醇 (15mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.034g) 处理。移开冷却 浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合 物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为

    [2021] 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化 1 合物。收率为 0.095g。m/z 655(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.52-7.41(m， 3H)， 7.25(t， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.89(s， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.95-4.89(m， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.67(t， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 3.53(t， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 3.45(s， 2H)， 3.24(t， J ＝ 7.9Hz， 2H)， 3.18-3.03(m， 8H)， 2.81(q， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 2.05-1.97(m， 2H)， 1.79-1.68(m， 2H)， 1.25(t， J ＝ 7.6Hz， 3H)。5 个可交换的质子没有 观察。

    [2022] 实施例 92

    [2023] (R)-5-(2-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2024] a)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻 唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙基 氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮

    [2025] (9-(2- 氟 -3-(1- 羟基 -2- 甲基丙 -2- 基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 90， 步骤 g)(0.21g) 的 DCM(20mL) 溶 液用三氟乙酸 (0.033mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.236g) 处理， 且将所得混合物 在 20℃搅拌 40 分钟。 反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层 用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.025ml) 加至该溶液中， 然后 减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基 甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.186g) 的甲醇 (15mL) 溶液中。将混合物冷却至 0℃， 且一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.136g)。将反应混合

    [2027] 物在 20℃搅拌 3 小时。 减压除去溶剂， 将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 9％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％‘880’ 氨水 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化 合物。收率为 0.28g。m/z 806(M+H)+(APCI)。

    [2028] b)(R)-5-(2-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2029] 将三乙胺三氢氟酸盐 (0.074mL) 的甲醇 (2mL) 溶液加至 (R)-5-(1-( 叔丁基二甲 基甲硅烷基氧基 )-2-(2-(2- 氟 -3-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 92， 步骤 a)(0.28g) 的 THF(8mL) 溶液中， 且将反应混合物在 20 ℃静置 18 小时。 TM 减压除去溶剂， 且粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶 液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.175g。m/z 1 D6-DMSO， 90℃ )δ8.14(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.93(s， 1H)， 692(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， 7.57-7.50(m， 2H)， 7.29(t， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 7.08(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.98(d， J ＝ 8.2Hz，

    [2030] 1H)， 6.52(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.40-5.34(m， 1H)， 4.34(s， 2H)， 3.69(s， 4H)， 3.65(s， 2H)， 3.56-3.43(m， 2H)， 3.33-3.18(m， 3H)， 3.15-3.06(m， 4H)， 2.06-1.98(m， 2H)， 1.83-1.72(m， 2H)， 1.52(s， 6H)， 1.34(d， J ＝ 7.8Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2031] 实施例 93

    [2032] (R)-7-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 )-5- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2033] a)(5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2034] 将 HATU(0.449g) 一次性加至 0 ℃的 2-(3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 甲 基 )-5- 氟 苯 基 ) 乙 醇 ( 实 施 例 55， 步 骤 c)(0.28g)、 5- 乙 基 噻 吩 -3- 甲 酸 (0.142g) 和三乙胺 (0.506mL) 的 DMF(10mL) 溶液中。然后将混合物在 20 ℃搅拌 1 小时。 将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2 ％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1 ％三乙 胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.21g。m/z 447(M+H)+(APCI)。

    [2037] b)(R)-7-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-5- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2036] (5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 93， 步骤 a)(0.21g) 的 DCM(15mL) 溶液用三氟乙酸 (0.036mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.299g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸氢 钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.027mL) 加至该溶液中， 然后减压除去溶剂。 将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.185g) 和乙酸 (0.027mL) 的甲醇 (15mL) 溶液中。 将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.059g) 处理。 移开冷却浴， 且 将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。混合物用饱 和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减 TM 压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 10-40％乙 腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率 1 为 0.115g。 m/z 655(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.26(s， 1H)， 7.47(s， 1H)， 7.28-7.17(m， 3H)， 6.93(d， J ＝ 8.7Hz， 1H)， 6.89(s， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.95-4.90(m， 1H)， 4.28(s， 2H)， 3.67(t， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 3.53(t， J ＝ 4.9Hz， 2H)， 3.45(s， 2H)， 3.19-3.00(m， 8H)， 2.81(q， J ＝ 7.6Hz， 2H)， 2.07-1.99(m， 2H)， 2H)， 3.27(t， J ＝ 7.9Hz， 1.80-1.68(m， 2H)， 1.25(t， J ＝ 7.4Hz， 3H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [2040] 实施例 94

    [2041] (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙 酸盐 )

    [2042] 将 3-(2-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯甲醛 ( 实施例 10， 步骤 b)(0.24g) 加至 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁 基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.187g) 和乙 酸 (0.032mL) 在甲醇 (2mL) 中的混合物中。将混合物搅拌 30min， 然后在冰浴中冷却。然 后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.178g)， 将混合物搅拌 2h， 且真空浓缩。将残余物在乙酸乙 酯 (50mL) 和缓冲液 (pH 7.2)(50mL) 之间分配。分离出水层， 且用乙酸乙酯 (2×50mL) 萃 取。合并的有机溶液用盐水 (20mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。经硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 92 ∶ 8 ∶ 0.8 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物 的馏分， 真空蒸发， 且溶解在四氢呋喃 (5mL) 中。 加入三乙胺三氢氟酸盐 (0.091mL)， 且将混 合物搅拌过夜。真空蒸发溶剂， 且将残余物溶解在乙腈和水的混合物 (1 ∶ 1， 5mL) 中。经 TM 制备性 HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏

    [2043] 分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.15g。m/z 1 634(M+H)+(APCI)。H NMR(300MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ8.09(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.92(s， 1H)， 7.37(t， J ＝ 7.8Hz， 1H)， 7.20-6.94(m， 5H)， 6.50(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.37(dd， J ＝ 8.2， 4.5Hz， 1H)， 4.37(t， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 4.30-4.16(m， 2H)， 3.76-3.62(m， 6H)， 3.61-3.54(m， 2H)， 3.46-3.35(m， 2H)， 3.31-3.17(m， 2H)， 3.11-3.01(m， 2H)， 2.68(s， 3H)， 2.11-1.98(m， 2H)， 1.94-1.78(m， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2044] 实施例 95

    [2045] (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-(3-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 丙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙 酸盐 )

    [2046] a) 甲磺酸 3-(3- 甲酰基苯氧基 ) 丙基酯将 3- 溴 -1- 丙醇 (3.94mL) 和碳酸钾 (6.22g) 加至 3- 羟基苯甲醛 (5g) 的乙腈 (100mL) 溶液中。将所得混合物在氮气下回流搅拌 5 小时。将反应混合物冷却至室温， 且 在乙酸乙酯和冰冷的稀氢氧化钠水溶液之间分配。有机层用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且减压除去溶剂。将残余物溶解在 DCM(30mL) 中， 且用三乙胺 (5.7mL) 处理。将溶液 冷却至 0℃， 且用甲磺酰氯 (3.2mL) 逐滴处理。将反应混合物在 0℃搅拌 10 分钟， 然后在 室温搅拌 1 小时。混合物用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物 通过快速硅胶色谱 ( 使用 33％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 5.20g。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.98(s， 1H)， 7.50-7.43(m， 2H)， 7.40-7.39(m， 1H)， 7.20-7.16(m， 1H)， 4.46(t， J ＝ 6.2Hz， 2H)， 4.17(t， J ＝ 5.9Hz， 2H)， 3.01(s， 3H)， 2.30-2.23(m， 2H)。

    [2050] b)3-(3-(4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 丙氧基 ) 苯甲醛

    [2049] 将甲磺酸 3-(3- 甲酰基苯氧基 ) 丙基酯 ( 实施例 95， 步骤 a)(0.209g)、 (2- 甲基 噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.32g) 和三乙胺 (0.282mL) 的乙腈 (10mL) 溶液在 65℃加热 18 小时。减压蒸掉溶 剂， 且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。 粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2％甲醇和 1％三乙胺 / 二氯甲烷 ) 纯化。将纯的馏分蒸 发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.157g。m/z 444(M+H)+(APCI)。

    [2053] c)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(3-(3-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 丙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮

    [2052] 将三乙酰氧基硼氢化钠 (0.113g) 一次性加至在 0℃搅拌的 3-(3-(4-(2- 甲基噻 唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 丙氧基 ) 苯甲醛 ( 实施例 95， 步骤 b)(0.157g)、 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.118g) 和乙酸 (0.020mL) 的甲醇 (7mL) 溶液中。将所得 混合物在 20℃搅拌 2 小时。减压蒸发大部分甲醇， 且将残余物在乙酸乙酯和含水磷酸缓冲 液 (pH ＝ 7.2) 之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅 胶色谱 ( 使用 8％甲醇和 1％‘880’ 氨水 / 二氯甲烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至 干， 得到副标题化合物。收率为 0.160g。m/z 762(M+H)+(APCI)。

    [2056] d)(R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-(3-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 丙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙 酸盐 )

    [2055] (R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(3-(3-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 丙 氧 基 ) 苄 基 氨 基 ) 乙 基 )-8- 羟 基 喹 啉 -2(1H)- 酮 ( 实 施 例 95， 步 骤 c)(0.160g) 的 THF(2mL) 溶 液 用 三 乙 胺 三 氢 氟 酸 盐 (0.041mL) 处理， 且将所得混合物在 20 ℃搅拌 18 小时。蒸掉溶剂， 且粗产物经制备性 TM HPLC(Sunfire ， 梯度为 5-35％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 将含有所需化合物的馏分蒸 1 发至干， 得到标题化合物。 收率为 0.081mg。 m/z 648(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO) δ10.75-10.43(m， 2H)， 10.00-9.74(m， 1H)， 9.30(s， 1H)， 9.10(s， 1H)， 8.07(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 8.01(s， 1H)， 7.36(t， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 7.16-7.09(m， 3H)， 7.01-6.94(m， 2H)， 6.54(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 5.35(d， J ＝ 9.5Hz， 1H)， 4.21(s， 2H)， 4.07-4.00(m， 2H)， 3.83-3.16(m， 10H)， 3.08-2.90(m， 4H)， 2.70(s， 3H)， 2.18-2.04(m， 4H)， 1.83-1.66(m， 2H)。1 个可交换的质子没 有观察。

    [2059] 实施例 96

    [2060] (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2058] a)3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯甲醛

    [2062] 将 (2- 甲基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三 氟乙酸盐 ( 实施例 4， 步骤 h)(0.408g)、 3-( 溴甲基 ) 苯甲醛 (0.205g) 和三乙胺 (0.36mL) 的乙腈 (10mL) 溶液在室温搅拌过夜。真空浓缩溶液， 且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸 氢钠之间分配。有机相用水洗涤 2 次， 用盐水洗涤 1 次， 然后用无水硫酸镁干燥， 且通过 快速硅胶色谱 ( 用 5％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色胶状物。 1 收率为 0.325g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ10.01(s， 1H)， 7.85(d， J ＝ 0.8Hz， 1H)，7.80(s， 1H)， 7.76(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 7.61(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 7.52(t， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 3.71-3.46(m， 8H)， 2.68(s， 3H)， 2.44-2.29(m， 4H)， 1.78-1.65(m， 2H)， 1.61-1.46(m， 2H)。

    [2065] b)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苄基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮

    [2066] 将 3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯甲醛 ( 实施例 96， 步骤 a)(0.303g)、 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基 氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.330g) 和乙酸 (0.043mL) 的甲醇 (5mL) 溶液在室温搅拌 30 分钟， 然后在氮气下在冰 - 水浴中冷却， 且用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.243g) 一次性处理。 将混合物在冰 - 水中搅拌 2 小时， 然后真空浓缩。 将残余物在乙酸乙 酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配， 分离各相， 且水相用乙酸乙酯再萃取 2 次。将所有不溶性 胶状残余物溶解在甲醇中。 合并的乙酸乙酯相用盐水洗涤， 用硫酸镁干燥， 且与甲醇溶液合 并。 所有物质通过快速硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 7 ∶ 92 三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到 1 稍有不纯的副标题产物， 其为黄色泡沫状物。 收率为 0.324g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ ) δ8.35(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 8.01(s， 1H)， 7.40-7.30(m， 2H)， 7.30-7.23(m， 2H)， 7.17(d， J＝ 8.2Hz， 1H)， 7.08(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.59(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.30(dd， J ＝ 7.3， 4.7Hz， 1H)， 3.91-3.70(m， 8H)， 3.57(s， 2H)， 3.02(dd， J ＝ 12.3， 7.4Hz， 1H)， 2.91-2.77(m， 4H)， 2.56-2.43(m， 4H)， 1.90-1.80(m， 2H)， 1.74-1.62(m， 2H)， 0.99(s， 9H)， 0.19(s， 3H)， 0.00(s， 3H)。3 个可交换的质子没有观察。

    [2068] c)(R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸 盐)

    [2067] 将 (R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苄基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹 啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 96， 步骤 b)(0.320g) 和三乙胺三氢氟酸盐 (0.15mL) 的 THF(5mL)溶液在室温搅拌过夜， 然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈 (3ml) 和水 (1ml) 的混合物中， 且所得溶液经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 5-50 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。真 空浓缩含有产物的馏分， 且与乙腈共蒸发 3 次， 得到白色泡沫状物。泡沫状物用乙醚研磨， 得到固体， 过滤分离所述固体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 得到标题化合物， 其为白色 1 粉末。收率为 0.264g。m/z 604(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ8.08(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 7.90(s， 1H)， 7.65-7.49(m， 4H)， 7.10(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 6.97(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.52(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.35(dd， J ＝ 8.6， 4.2Hz， 1H)， 4.35-4.21(m， 4H)， 3.74-3.57(m， 6H)， 3.23-2.98(m， 6H)， 2.67(s， 3H)， 2.06-1.91(m， 2H)， 1.85-1.65(m， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2071] 实施例 97

    [2072] (R)-5-(2-(2， 5- 二甲基 -4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2073] 将 2， 5- 二甲基 -4-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯甲醛 ( 实施例 18， 步骤 f)(0.08g) 加至 (R)-5-(2- 氨 基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO2004106333) (0.088g) 和乙酸 (0.010mL) 在甲醇 (2mL) 中的混合物中。 将混合物搅拌 30min， 然后在冰浴 中冷却。 然后加入氰基硼氢化钠 (0.016g)， 且将混合物搅拌 2h。 真空除去溶剂， 且残余物经 硅胶色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 92 ∶ 8 ∶ 0.8 DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合 并含有产物的馏分， 且真空蒸发。将残余物重新溶解在四氢呋喃 (5mL) 中， 加入三乙胺三氢 氟酸盐 (0.028mL)， 且将混合物搅拌过夜。 真空蒸发溶剂。 经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 且残余物用乙醚研 1 磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.07g。 m/z662(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ )δ8.12(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.92(s， 1H)， 7.27(s， 1H)， 7.12(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.86(s， 1H)， 6.51(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 5.38(dd， J ＝ 8.2， 4.6Hz， 1H)， 4.35(t， J ＝ 4.9Hz， 2H)， 4.25-4.13(m， 2H)， 3.76-3.64(m， 6H)， 3.61-3.53(m， 2H)， 3.46-3.36(m， 2H)， 3.33-3.20(m， 2H)， 3.19-3.10(m， 2H)， 2.68(s， 3H)， 2.33(s， 3H)， 2.15(s， 3H)， 2.12-2.01(m， 2H)， 1.95-1.79(m， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2075] 实施例 98

    [2076] (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-((5-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2074] a)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-((5-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基 羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基氨基 ) 乙 基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2078] 5-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 甲醛 ( 实施例 21， 步骤 c)(0.188g) 和 (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基 甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (WO 2004106333)(0.150g) 的甲醇 (10mL) 溶液用乙酸 (0.026mL) 处理， 接着用三乙酰氧基硼氢化钠 (0.143g) 处理。 将混合物在 20℃ 搅拌 18 小时。再加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.143g)， 且在 20℃继续搅拌 2 小时。再加入 三乙酰氧基硼氢化钠 (143mg)， 且继续搅拌 2 小时。减压除去甲醇， 且将残余物在饱和碳酸 氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物通过 快速硅胶色谱 ( 使用 1％浓氨水和 8％甲醇 / 二氯甲烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发 至干， 得到副标题化合物。收率为 0.122g。m/z 738(M+H)+(APCI)。

    [2081] b)(R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-((5-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2080] (R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-((5-(2-(4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基氨基 ) 乙

    [2083] 基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 98， 步骤 a)(0.122g) 的 THF(4mL) 溶液用三乙胺三 氢氟酸盐 (0.035mL) 的甲醇 (1mL) 溶液处理， 且将所得混合物在 20 ℃静置 18 小时。减 压除去溶剂， 且粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶 液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标题化合物。收率为 0.085g。m/z 1 624(M+H)+(APCI)。H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ8.10(d， J ＝ 31.8Hz， 1H)， 7.93(s， 1H)， 7.15(d， J ＝ 12.5Hz， 1H)， 7.10(d， J ＝ 15.7Hz， 1H)， 6.98(d， J ＝ 22.6Hz， 1H)， 6.92(d， J＝ 11.2Hz， 1H)， 6.53(d， J ＝ 30.4Hz， 1H)， 5.37-5.31(m， 1H)， 4.41(dd， J ＝ 17.7， 14.4Hz， 2H)， 3.71(s， 4H)， 3.66(s， 2H)， 3.42-3.33(m， 4H)， 3.27-3.06(m， 6H)， 2.68(s， 3H)， 2.10-1.98(m， 2H)， 1.88-1.75(m， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2084] 实施例 99

    [2085] (R)-7-(2-(5-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2086] a)(5- 乙基噻吩 -3- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐

    [2088] 将 HATU(1.15g) 一次性加至 0 ℃的 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲 酸叔丁酯盐酸盐 (WuXi PharmaTech)(0.682g)、 5- 乙基噻吩 -3- 甲酸 (0.364g) 和三乙胺 (1.3mL) 的 DMF(10mL) 溶液中。然后将混合物在 20℃搅拌 1 小时。将反应混合物在乙酸乙 酯和盐水之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产 物通过快速硅胶色谱 ( 使用 50％乙酸乙酯 / 异己烷 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到经 ‘BOC( 叔丁氧羰基 )’ 保护的中间体。加入 DCM(10mL)， 接着加入三氟乙酸 (10mL)， 且将所得 溶液在 20℃静置 25 分钟。加入甲苯 (30mL)， 且减压蒸发溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次， 得 到副标题化合物。收率为 0.950g。m/z 295(M+H)+(APCI)。

    [2090] b)(5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(4- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2089] 将 2-(5-( 溴甲基 )-2- 氟苯基 ) 乙醇 ( 实施例 47， 步骤 a)(0.171g) 加至 (5- 乙 基噻吩 -3- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 99， 步骤 a)(0.3g) 和三乙胺 (0.410ml) 的乙腈 (15mL) 溶液中， 且将混合物在 20 ℃搅拌 2 小时。减压蒸发溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫 酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 1％三乙胺和 2％甲醇 / 二氯甲烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.2g。m/z 447(M+H)+(APCI)。

    [2093] c)(R)-7-(2-(5-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2092] (5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(4- 氟 -3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 99， 步骤 b)(0.2g) 的 DCM(15mL) 溶液用三氟乙酸 (0.035m1) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.285g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳酸 氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.026ml) 加至该溶液中， 然后减压除去溶 剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.176g) 和乙酸 (0.026ml) 的甲醇 (15mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.056g) 处理。移开 冷却浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。 混合物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干 燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯 度为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得到标 1 题化合物。收率为 0.14g。(M+H)+655(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.49-7.44(m， 3H)， 7.29-7.23(m， 1H)， 6.94(d， J ＝ 7.2Hz， 1H)， 6.89(s， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.94-4.89(m， 1H)， 4.26(s， 2H)， 3.67(t， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 3.53(t， J ＝ 5.0Hz，

    [2095] 2H)， 3.45(s， 2H)， 3.24(t， J ＝ 8.1Hz， 2H)， 3.18-3.02(m， 8H)， 2.81(q， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 2.07-1.98(m， 2H)， 1.79-1.67(m， 2H)， 1.25(t， J ＝ 7.4Hz， 3H)。 5 个可交换的质子没有观察。

    [2096] 实施例 100

    [2097] (R)-7-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 )-4- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2098] a) 叔丁基 (4- 氟苯乙氧基 ) 二甲基甲硅烷在 20℃将叔丁基二甲基甲硅烷基氯 (0.903g) 逐份加至搅拌的 2-(4- 氟苯基 ) 乙 醇 (0.7g) 和咪唑 (0.408g) 的 DMF(20mL) 溶液中。将反应混合物在室温搅拌 3 小时， 然后 在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶 剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分 蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.99g。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.18-7.13(m， 2H)， 6.99-6.93(m， 2H)， 3.77(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.78(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 0.86(s， 9H)， -0.03(s， 6H)。

    [2102] b)5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苯甲醛

    [2101] 在氮气下将仲丁基锂 ( 浓度为 1.4M 的环己烷溶液， 2.78ml) 加至无水四氢呋喃 (10mL) 中， 且将溶液冷却至 -78℃。缓慢滴加 N1-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 )-N1， N2， N2- 三 甲基乙 -1， 2- 二胺 (0.674g)。然后历时 5 分钟滴加叔丁基 (4- 氟苯乙氧基 ) 二甲基甲硅 烷 ( 实施例 100， 步骤 a)(0.99g) 的无水四氢呋喃 (3mL) 溶液。将反应混合物在 -78℃搅拌 2 小时。历时 5 分钟滴加 DMF(2.1ml)， 且将混合物在 -78℃搅拌 1 小时， 接着在室温搅拌 45 分钟。反应混合物通过加入水来淬灭。加入乙酸乙酯 (200mL)， 且有机层用水洗涤 3 次， 接 着用 2M HCl 洗涤 2 次， 然后用水洗涤 2 次。有机溶液用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 减压蒸发。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2％乙酸乙酯 / 异己烷作为溶剂 ) 纯化。将纯 1 的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。 收率为 0.5g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ10.36(s， 1H)， 7.72-7.69(m， 1H)， 7.48-7.43(m， 1H)， 7.11-7.06(m， 1H)， 3.80(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 2.83(t， J

    [2104] ＝ 6.4Hz， 2H)， 0.85(s， 9H)， 0.04(s， 6H)。

    [2105] c)(5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(2- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2106] 将三乙酰氧基硼氢化钠 (0.225g) 加至在 0℃搅拌的 (5- 乙基噻吩 -3- 基 )(1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 99， 步骤 a)(0.289g)、 5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氟苯甲醛 ( 实施例 100， 步骤 b)(0.2g) 和 乙酸 (0.041ml) 的 NMP(20mL) 溶液中。然后将反应混合物在 20℃搅拌 18 小时。再加入三 乙酰氧基硼氢化钠 (0.150g)， 且继续搅拌 4 小时。将混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶 液之间分配， 有机层用盐水洗涤 2 次， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。将所得胶状物 溶解在 THF(20mL) 中， 且用 TBAF( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 1.4ml) 处理。将溶液在 20℃静置 8 小时。减压蒸发溶剂， 且粗产物通过快速硅胶色谱 ( 使用 2％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％ 三乙胺 ) 作为溶剂 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。

    [2108] 收率为 0.18g。m/z 447(M+H)+(APCI)。

    [2109] d)(R)-7-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-4- 氟苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2107] (5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(2- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 100， 步骤 c)(0.18g) 的 DCM(15mL) 溶液用三氟乙 酸 (0.031ml) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.256g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (20mL) 和乙酸乙 酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯萃取 2 次， 合并的有机层用饱和碳 酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 且过滤。将乙酸 (0.023ml) 加至该溶液中， 然后减压除去 溶剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.159g) 和乙酸 (0.023ml) 的甲醇 (15mL) 溶液中。将混合物在冰浴中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.051g) 处理。移开 冷却浴， 且将混合物在 20℃搅拌 3 小时。减压蒸发溶剂至体积为 3mL， 且加入 THF(20mL)。

    [2111] 混合物用饱和盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (1mL) 的混合物洗涤。有机层用硫酸钠 干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸 2 次。粗产物经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.2 ％ TFA 水溶液 ) 纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干， 得 1 到标题化合物。收率为 0.14g。m/z 655(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 90 ℃ ) δ11.27(s， 1H)， 7.48-7.43(m， 2H)， 7.42-7.37(m， 1H)， 7.25(t， J ＝ 9.1Hz， 1H)， 6.93(d， J＝ 8.1Hz， 1H)， 6.89(s， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.94-4.88(m， 1H)， 4.27(s， 2H)， 3.67(t， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 3.53(t， J ＝ 5.0Hz， 2H)， 3.45(s， 2H)， 3.23(t， J ＝ 8.2Hz， 2H)， 3.18-2.97(m， 8H)， 2.81(q， J ＝ 7.8Hz， 2H)， 2.04-1.98(m， 2H)， 1.79-1.69(m， 2H)， 1.25(t， J ＝ 7.6Hz， 3H)。 5 个可交换的质子没有观察。

    [2112] 实施例 101

    [2113] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(6-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 己基硫基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 甲酸盐

    [2114] a)6-(2， 2- 二甲氧基乙基硫基 ) 己 -1- 醇在 0℃向 6- 巯基 - 己 -1- 醇 (2.5mL) 的 MeCN(30mL) 溶液中加入氢化钠 ( 浓度为 60％的矿物油悬浮液， 0.81g)。 将混合物在 0℃搅拌 1h， 然后加入 2- 溴 -1， 1- 二甲氧基 - 乙 烷 (2.4mL)。 将所得混合物在 RT 搅拌 20h， 然后通过加入饱和碳酸氢钠溶液来淬灭。 混合物 用乙酸乙酯 (×3) 萃取， 然后合并的有机层先后用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤， 用硫酸 钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 25％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标 1 题化合物， 其为无色液体。收率为 1.85g。 H NMR(400MHz， D4-MeOH)δ4.49(t， J ＝ 5.5Hz， 1H)， 3.64(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.37(s， 6H)， 2.69(d， J ＝ 5.5Hz， 2H)， 2.59(t， J ＝ 7.4Hz， 2H)， 1.66-1.52(m， 4H)， 1.46-1.32(m， 4H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [2118] b)2-(6- 溴己基硫基 ) 乙醛

    [2117] 在 0 ℃和 N2 下向 6-(2， 2- 二甲氧基乙基硫基 ) 己 -1- 醇 ( 实施例 101， 步骤 a) (1.85g) 的 DCM(75mL) 溶液中加入四溴化碳 (3.31g)， 接着逐份加入三苯基膦 (2.62g)。将 所得混合物在 RT 搅拌 1.25h， 然后真空浓缩。经硅胶色谱 ( 用 0-50％乙酸乙酯 / 环己烷 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色液体。收率为 1.31g。1H NMR(400MHz， CDCl3)

    [2120] δ9.47(t， J ＝ 3.5Hz， 1H)， 3.43-3.36(m， 2H)， 3.18(d， J ＝ 3.5Hz， 2H)， 2.44(t， J ＝ 7.3Hz， 2H)， 1.91-1.81(m， 2H)， 1.64-1.53(m， 2H)， 1.49-1.36(m， 4H)。

    [2121] c)(R)-2-(6- 溴己基硫基 ) 乙基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2122] 在 0 ℃ 和 N2 下 向 2-(6- 溴 己 基 硫 基 ) 乙 醛 ( 实 施 例 101， 步 骤 b)(1.2g) 的 分子筛 ) 溶液中加入 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙DMF(20mL)( 含有乙酸 (0.287mL) 和基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(1.45g)。 将所得混合物在 0℃搅拌 1h， 然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (1.6g)， 且将混合物在 RT 搅拌 2h。加入一缩二碳酸二叔丁酯 (1.1g)， 且继续搅拌 20h。反应混合物通过加入饱和碳酸氢 钠溶液 (40mL) 来淬灭， 然后溶液用乙酸乙酯 (×3) 萃取。合并的有机溶液用盐水洗涤， 用 硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 0-100％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得 1 到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 0.56g。 H NMR(300MHz， D4-MeOH)δ6.89(dd， J ＝ 18.6， 8.3Hz， 1H)， 6.72(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.87(s， 1H)， 3.59-3.39(m， 4H)， 3.33-3.29(m， 2H)， 2.64-2.41(m， 4H)， 1.89-1.80(m， 2H)， 1.66-1.32(m， 15H)。 3 个可交换的质子没有观察。

    [2124] d)4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [2125] 在 0 ℃历时 20min 将三氟乙酸酐 (2.2mL) 的 DCM(14mL) 溶液滴加至 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐 (WuXi PharmaTech)(4.7g) 和三乙胺 (4.9mL) 的 DCM(90mL) 溶液中。将混合物在 0 ℃搅拌 45min， 然后在 RT 搅拌 2h。加入水 (90mL)， 且将混合物剧烈搅拌 10min。分离各层， 且水层用 DCM(50mL) 萃取。合并的有机层 用硫酸钠干燥， 且真空蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 40-50 ％ EtOAc/ 石油醚 (40-60 ℃ ) 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 2.73g。1H NMR(400MHz， CDCl3) δ3.86(d， J ＝ 13.3Hz， 1H)， 3.77(t， J ＝ 4.9Hz， 2H)， 3.74-3.64(m， 2H)， 3.61(t， J ＝ 4.8Hz， 1H)， 3.52(s， 1H)， 3.23-3.15(m， 1H)， 3.07(t， J ＝ 11.4Hz， 1H)， 1.85(d， J ＝ 13.8Hz， 1H)， 1.77(d， J ＝ 13.9Hz， 1H)， 1.52-1.37(m， 12H)。

    [2127] e)2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮三氟乙酸 盐

    [2126] 将三氟乙酸 (66mL) 加至 4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 101， 步骤 d)(4.33g) 的 DCM(66mL) 溶液中， 且将所得混合 物在 RT 搅拌 20min。加入甲苯 (50mL)， 且真空蒸发混合物 (×3)， 得到副标题化合物。收率 1 为 5.52g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ8.73( 宽单峰， 2H)， 3.77(d， J ＝ 5.1Hz， 2H)， 3.72(d， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.65(d， J ＝ 5.0Hz， 1H)， 3.58(s， 1H)， 3.48(s， 1H)， 3.33(s， 2H)， 3.24(s， 2H)， 2.08(t， J ＝ 14.6Hz， 2H)， 1.93-1.75(m， 2H)。

    [2130] f)(R)-2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙 基 (2-(6-(4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 己基硫基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2129] 将 (R)-2-(6- 溴己基硫基 ) 乙基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯 并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 101， 步骤 c)(0.55g) 与 2， 2， 2- 三 氟 -1-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 - 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )- 乙酮三氟乙酸盐 ( 实施例 101， 步 骤 e)(0.25g) 和三乙胺 (0.26mL) 在乙腈 (20mL) 中合并， 且在 80℃加热 48h。 真空蒸发挥发 物。 经硅胶色谱 ( 用 10％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色胶状物。 收率 1 为 0.10g 和 0.074g( 纯度较低 )。m/z 721(M+H)+。 H NMR(400MHz， D4-MeOH)δ6.81(s， 1H)， 6.69(d， J ＝ 8.21Hz， 1H)， 3.80-3.74(m， 2H)， 3.65(s， 2H)， 3.58-3.54(m， 1H)， 3.52-3.47(m， 1H)， 3.11-2.94(m， 4H)， 2.51-2.41(m， 6H)， 2.05-1.95(m， 2H)， 1.80-1.59(m， 8H)， 1.50(s， 9H)， 1.46-1.25(m， 6H)。1 个质子由于溶剂峰而模糊， 且 3 个可交换的质子没有观察。

    [2133] g)(R)-2-(6-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 己基硫基 ) 乙基 (2- 羟 基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2132] 向搅拌的 (R)-2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙 基 (2-(6-(4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 己基硫 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 101， 步骤 f)(0.18g) 的甲醇 (10mL) 溶液中加入碳酸 钾 (0.06g) 的水 (10mL) 溶液。将混合物在 RT 搅拌 17h， 然后在氮气气流下除去甲醇。溶液

    [2135] 用盐水稀释， 用乙酸乙酯 (×3) 萃取， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在甲 醇中， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为褐色玻璃状物。 收率为 0.15g。 m/z 625(M+H)+。 1 H NMR(300MHz， D4-MeOH)δ6.94-6.82(m， 1H)， 6.73(d， J ＝ 2.0Hz， 1H)， 3.66-3.59(m， 2H)， 3.51-3.40(m， 2H)， 2.80-2.69(m， 4H)， 2.66-2.62(m， 2H)， 2.55-2.40(m， 8H)， 2.04-1.94(m， 2H)， 1.62-1.56(m， 8H)， 1.55-1.21(m， 13H)。 1 个质子由于溶剂峰而模糊， 且 4 个可交换的质 子没有观察。

    [2136] h)(R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(2-(6-(4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 己 基 硫 基 ) 乙 基 氨 基 ) 乙 基 ) 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2137] 向 (R)-2-(6-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 己基硫基 ) 乙基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 101， 步骤 g)(0.093g) 的 DMF(3mL) 溶液中加入三乙胺 (0.062mL) 和 2- 异丙基 - 噻 唑 -4- 甲酸 (0.025g)， 接着加入 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六 氟磷酸盐 (0.079g)。将所得混合物在 RT 搅拌 4h， 然后加入 4 滴 ‘880’ 氨水， 且将混合物 搅拌 15min。将盐水和乙酸乙酯加至溶液中， 且分离各相， 然后有机相用乙酸乙酯 (×2) 萃 取。合并的有机相用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将残余物溶解在 DCM(2mL) 中， 然后 加入三氟乙酸 (1mL)。将溶液在 RT 静置 40min， 然后加入甲苯 (20mL)， 且真空浓缩混合物。 再加入一定量甲苯， 且再次浓缩混合物， 然后物质与乙腈共沸。经制备性 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.1 ％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻 1 干燥， 得到标题化合物， 其为无色固体。收率为 0.016g。m/z 678(M+H)+。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 80℃ )δ8.18(s， 1H)， 7.91(d， J ＝ 0.7Hz， 1H)， 6.90(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.72(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.64-4.58(m， 1H)， 3.72-3.62(m， 2H)， 3.62-3.58(m， 6H)， 3.38-3.28(m， 1H)， 2.84-2.74(m， 6H)， 2.62-2.58(m， 2H)， 2.47-2.31(m， 6H)， 1.78-1.69(m， 2H)， 1.60-1.50(m， 4H)， 1.45-1.41(m， 2H)， 1.38(d， J ＝ 6.6Hz， 6H)， 1.32-1.26(m， 2H)。5 个可交换的质子没有 观察。

    [2139] 实施例 102

    [2140] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(7-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-2， 2- 二甲基庚基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2138] a)7- 溴 -2， 2- 二甲基庚酸乙酯在 0℃向二异丙基胺 (5.82mL) 的 THF(30mL) 溶液中加入正丁基锂 ( 浓度为 2.5M 的己烷溶液， 16.4mL)， 且将混合物在该温度搅拌 30min， 然后冷却至 -78℃。滴加异丁酸乙 酯 (5mL)， 且将所得混合物在 -78℃搅拌 1h， 然后加入 1， 5- 二溴戊烷 (5.61mL)。将反应混 合物在 -78 ℃搅拌 1h， 然后在 RT 搅拌 2.5h， 然后倒入饱和氯化铵溶液中。溶液用乙酸乙 酯 (×2) 萃取， 然后合并的有机层用水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色 谱 ( 用 0-25％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色液体。收率为 1 CDCl3)δ4.08(q， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 3.41-3.33(m， 2H)， 1.91-1.77(m， 4.45g。 H NMR(400MHz， 2H)， 1.61-1.44(m， 2H)， 1.52-1.24(m， 2H)， 1.21(t， J ＝ 7.1Hz， 5H)， 1.12(s， 6H)。

    [2145] b)7- 溴 -2， 2- 二甲基庚 -1- 醇

    [2144] 在 0℃和 N2 下向 7- 溴 -2， 2- 二甲基庚酸乙酯 ( 实施例 102， 步骤 a)(1.5g) 的无 水乙醚 (50mL) 溶液中滴加二异丁基氢化铝 ( 浓度为 1M 的甲苯溶液， 12.5mL)。将反应混合 物在 0℃搅拌 1h， 然后通过加入饱和酒石酸钾钠 (150mL) 来淬灭。将混合物搅拌 1h， 然后 用乙酸乙酯 (×3) 萃取。合并的有机层用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经 硅胶色谱 ( 用 0-25 ％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色液体。 1 收率为 1.16g。 HNMR(400MHz， CDCl3)δ3.41(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 3.32(d， J ＝ 5.8Hz， 2H)， 1.93-1.82(m， 2H)， 1.47-1.37(m， 2H)， 1.35-1.20(m， 4H)， 0.91-0.81(m， 6H)。 1 个可交换的质 子没有观察。

    [2148] c)(9-(7- 羟基 -6， 6- 二甲基庚基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2147] 将 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲 酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.5g) 溶解在甲醇中， 且加载至 SCX 柱 ( 用甲醇预润湿 )。柱用甲醇洗涤， 且用 2M 氨 / 甲醇溶液洗脱。真空蒸发洗脱剂， 得到物质， 其为游离 碱 (0.29g)。向该物质中加入 7- 溴 -2， 2- 二甲基庚 -1- 醇 ( 实施例 102， 步骤 b)(0.26g) 的乙腈 (10mL) 溶液， 然后加入三乙胺 (0.27mL)， 且将所得混合物在 60 ℃加热 17h。真空 蒸发挥发物， 且粗产物经硅胶色谱 ( 先后用 0 ％甲醇 /DCM、 5 ％甲醇 /DCM 和 10 ％甲醇 / DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色胶状物。收率为 0.29g。m/z 452(M+H)+。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.87(s， 1H)， 4.01-3.95(m， 2H)， 3.80-3.62(m， 2H)， 3.49(s， 1H)， 3.34-3.28(m， 2H)， 3.16-3.09(m， 1H)， 2.98-2.75(m， 3H)， 2.42-2.20(m， 2H)， 2.09( 宽 多 重 峰， 2H)， 1.95-1.82(m， 2H)， 1.47-1.40(m， 8H)， 1.34-1.21(m， 8H)， 0.85(s， 6H)。 1 个可交换的 质子没有观察。

    [2151] d)7-(4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 )-2， 2- 二甲基庚醛

    [2152] 在 0℃和氩气下将三氟乙酸 (0.048mL) 加至 (9-(7- 羟基 -6， 6- 二甲基庚基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 102， 步骤 c) (0.28g) 的 DCM(15mL) 溶液中， 且将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.39g)。 将反应混合物在 RT 搅拌 1h， 然后通过加入饱和亚硫酸氢钠溶液 (10mL) 和饱和碳酸氢钠溶 液 (10mL) 来淬灭， 然后加入乙酸乙酯， 且将混合物搅拌 5min。分离各层， 且水溶液用乙酸 乙酯 (×2) 萃取。合并的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将乙酸 (0.053mL) 加至有机 相中， 然后所述有机相用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到粗副标题化合物， 其为黄色油 1 状物。收率为 0.33g。m/z 450(M+H)+。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ9.43(s， 1H)， 7.86(s， 1H)， 4.02-3.86(m， 3H)， 3.82-3.67(m， 4H)， 3.36-3.26(m， 2H)， 3.24-2.97(m， 2H)， 2.85-2.66(m， 4H)， 2.03(d， J ＝ 8.4Hz， 2H)， 1.79-1.60(s， 2H)， 1.48-1.35(m， 8H)， 1.34-1.19(m， 4H)， 1.06(s， 6H)。

    [2154] e)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(7-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-2， 2- 二甲基庚基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 甲酸盐

    [2153] 将乙酸 (0.053mL) 加至 7-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-2， 2- 二甲基庚醛 ( 实施例 102， 步骤 d)(0.33g) 和 (R)-7-(2- 氨

    [2156] 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步 骤 d)(0.25g) 及 分子筛在无水甲醇 (10mL) 中的混合物中。将混合物搅拌 5min， 然后 冷却至 0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.13g)， 且将所得混合物在 RT 搅拌 16.5h。过滤 溶液， 然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈和水的混合物中， 且经制备性 HPLC(Phenomenex 梯度为 10-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干 Gemini ， 1 燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.1g。 m/z 660(M+H)+。H NMR(400MHz， D4-MeOH) δ8.50(s， 1H)， 7.89(s， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.71(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.93(dd， J ＝ 9.5， 4.1Hz， 1H)， 3.92-3.56(m， 6H)， 3.37-3.26(m， 1H)， 3.10-2.66(m， 10H)， 2.11-1.96(m， 2H)， 1.84-1.57(m， 4H)， 1.38(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)， 1.29(s， 6H)， 0.96(s， 6H)。5 个可交换的质 子没有观察。

    [2157] 实施例 103

    [2158] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-2， 2- 二甲基壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2159] a)9- 溴 -2， 2- 二甲基壬酸乙酯在 0℃向二异丙基胺 (5.82mL) 的 THF(30mL) 溶液中加入正丁基锂 ( 浓度为 2.5M 的己烷溶液， 16.4mL)， 且将混合物在该温度搅拌 30min， 然后冷却至 -78℃。滴加异丁酸乙 酯 (5mL)， 且将所得混合物在 -78 ℃搅拌 1h， 然后加入 1， 7- 二溴庚烷 (6.4mL)。将反应混 合物在 -78 ℃搅拌 1h， 然后在 RT 搅拌 2h， 然后倒入饱和氯化铵溶液中。溶液用乙酸乙酯 (×2) 萃取， 然后合并的有机层用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色 谱 ( 用 0-10％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色液体。收率为 1 1.27g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ4.11(q， J ＝ 7.1Hz， 2H)， 3.43-3.37(m， 2H)， 1.91-1.80(m， 2H)， 1.56-1.36(m， 4H)， 1.39-1.21(m， 9H)， 1.15(s， 6H)。

    [2163] b)9- 溴 -2， 2- 二甲基壬 -1- 醇

    [2162] 在 0℃和 N2 下向 9- 溴 -2， 2- 二甲基壬酸乙酯 ( 实施例 103， 步骤 a)(1.27g) 的无 水乙醚 (40mL) 溶液中滴加二异丁基氢化铝 ( 浓度为 1M 的甲苯溶液， 9.5mL)。将反应混合 物在 0℃搅拌 1.25h， 然后通过加入饱和酒石酸钾钠溶液 (150mL) 来淬灭。将混合物搅拌

    [2165] 15min， 然后用乙酸乙酯 (×3) 萃取， 然后合并的有机层用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用 0-25％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 1 其为无色液体。收率为 0.56g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ3.41(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 3.31(d， J ＝ 5.2Hz， 2H)， 1.91-1.79(m， 2H)， 1.47-1.39(m， 2H)， 1.34-1.21(m， 8H)， 0.86(s， 6H)。1 个 可交换的质子没有观察。

    [2166] c)(9-(9- 羟基 -8， 8- 二甲基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2167] 将 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三 氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.5g) 溶解在甲醇中， 且加载至 SCX 柱 ( 用甲醇预润湿 )。 柱 用甲醇洗涤， 且用 2M 氨 / 甲醇溶液洗脱。 真空蒸发洗脱剂， 得到物质， 其为游离碱 (0.26g)。 向该物质中加入 9- 溴 -2， 2- 二甲基壬 -1- 醇 ( 实施例 103， 步骤 b)(0.25g) 在乙腈 (10mL) 和三乙胺 (0.23mL) 中的溶液， 且将所得混合物在 60℃加热 15h。真空蒸发挥发物， 且粗产 物经硅胶色谱 ( 用 0-10 ％甲醇 /DCM 洗脱 ) 纯化， 得到不纯的副标题化合物， 其为无色胶 状物， 所述胶状物重新经硅胶色谱 ( 用 0-10％甲醇 /DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 1 其为灰白色固体。收率为 0.37g。m/z 480(M+H)+。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.87(s， 1H)，4.08-3.91(m， 1H)， 3.80-3.75(m， 3H)， 3.45-3.32(m， 2H)， 3.35-3.30(m， 2H)， 3.06-2.84(m， 3H)， 2.48-2.31(m， 2H)， 2.17-2.03(m， 2H)， 1.96-1.83(m， 2H)， 1.66-1.51(m， 4H)， 1.43(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)， 1.39-1.31(m， 4H)， 1.30-1.16(m， 6H)， 0.86(s， 6H)。1 个可交换的质子没有观 察。

    [2169] d)9-(4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 )-2， 2- 二甲基壬醛

    [2170] 在 0℃和氩气下将三氟乙酸 (0.059mL) 加至 (9-(9- 羟基 -8， 8- 二甲基壬基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 103， 步骤 c) (0.37g) 的 DCM(20mL) 溶液中， 且将混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.49g)。 将反应混合物在 RT 搅拌 1.25h， 然后通过加入饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL) 和饱和碳酸氢钠 溶液 (20mL) 来淬灭， 然后加入乙酸乙酯， 且将混合物搅拌 5min。 分离各相， 且水层用乙酸乙 酯 (×2) 萃取。合并的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将乙酸 (0.066mL) 加至有机相

    [2171] 中， 然后所述有机相用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到粗副标题化合物， 其为黄色油状 1 物。 收率为 0.40g。 m/z 478(M+H)+。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.46-9.41(s， 1H)， 7.87(s， 1H)， 4.05-3.89(m， 3H)， 3.82-3.67(m， 5H)， 3.36-3.26(m， 3H)， 2.87-2.79(m， 4H)， 2.09-2.02(m， 2H)， 1.77-1.65(m， 2H)， 1.47-1.36(m， 10H)， 1.32-1.13(m， 6H)， 1.03(s， 6H)。

    [2172] e)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-2， 2- 二甲基壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 甲酸盐

    [2173] 将乙酸 (0.066mL) 加至 9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-2， 2- 二甲基壬醛 ( 实施例 103， 步骤 d)(0.4g) 和 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤

    [2174] d)(0.3g) 及分子筛在无水甲醇 (10mL) 中的混合物中。将混合物搅拌 5min， 然后冷却至0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.16g)， 且将所得混合物在 RT 搅拌 16.5h。过滤溶液， 然 后真空浓缩。 将残余物溶解在乙腈和水的混合物中， 且经制备性 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 10-40 ％乙腈 /0.1 ％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得 到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.10g。m/z 688(M+H)+。1H NMR(400MHz， D4-MeOH) δ8.51(s， 1H)， 7.88(s， 1H)， 6.92(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.70(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.93-4.88(m， 1H)， 3.92-3.53(m， 6H)， 3.32-3.25(m， 1H)， 3.11-2.52(m， 10H)， 1.98(s， 2H)， 1.82-1.48( 宽 多重峰， 3H)， 1.37(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)， 1.38-1.31(m， 5H)， 1.30-1.22(m， 6H)， 0.91(s， 6H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [2175] 实施例 104

    [2176] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(5- 甲基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2177] a)4-(5- 甲基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [2179] 将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (0.91g) 加 至 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐 (WuXiPharmaTech)(0.5g)、 5- 甲基 - 噻吩 -3- 甲酸 (0.243g) 和三乙胺 (0.95mL) 的 DMF(10mL) 溶液中， 且将所得混合物 搅拌 16h。将反应混合物倒入盐水 (40mL) 中， 且用乙酸乙酯 (3×50mL) 萃取。合并的有机 溶液用水 (150mL) 和盐水 (150mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 经硅胶色谱 ( 用 0-10％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 0.34g。 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.23(s， 1H)， 6.81(s， 1H)， 3.72(s， 6H)， 3.46(s， 3H)， 3.15(s， 3H)， 2.49(d， J ＝ 1.1Hz， 3H)， 1.82( 宽二重峰， J ＝ 13.5Hz， 2H)， 1.45(s， 9H)。

    [2181] b)(5- 甲基噻吩 -3- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2180] 将三氟乙酸 (2.5mL) 加至 4-(5- 甲基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 104， 步骤 a)(0.34g) 的 DCM(10mL) 溶液中， 将所得 混合物搅拌 45 分钟， 且静置过夜。真空蒸发溶剂。加入甲苯 (3×25mL)， 且真空蒸发混合 物。将残余物溶解在甲醇 (20mL) 中， 且加载至 SCX 柱 ( 用甲醇预润湿 )。柱用甲醇 (40mL) 洗涤， 且用 2M 氨 / 甲醇溶液 (20mL) 洗脱。真空蒸发洗脱剂， 得到副标题化合物， 其为无色 1 油状物。 收率为 0.25g。H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.50(s， 1H)， 6.88(s， 1H)， 3.67-3.57(m， 2H)， 3.49(s， 2H)， 3.38(s， 4H)， 2.68(s， 2H)， 2.45(d， J ＝ 1.1Hz， 3H)， 1.57(s， 2H)， 1.37(s， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [2184] c)(R)-2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙 基 (4-(2-(4-(5- 甲基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧 基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2183] 将三乙胺 (0.25mL) 加至 (5- 甲基噻吩 -3- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 104， 步骤 b)(0.195g) 的乙腈 (2.5mL) 溶液中。将该溶液加 至甲磺酸 (R)-2-(4-(( 叔丁氧基羰基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基酯 ( 实施例 108， 步骤 c)(0.5g) 的乙腈 (2.5mL) 溶液中。将所得混合物在 80℃加热 48 小时。真空蒸发反应混合物。经硅胶色谱

    [2186] ( 用 0-10％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为霜状固体。收率为 0.33g。 1 H NMR(300MHz， D4-MeOH)δ7.42(s， 1H)， 7.07(d， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 6.85(d， J ＝ 13.0Hz， 4H)， 6.70(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.28(s， 1H)， 4.12(s， 2H)， 3.71(s， 2H)， 3.66-3.48(m， 5H)， 3.38-3.29(m， 5H)， 2.90(s， 2H)， 2.80-2.55(m， 4H)， 2.48(s， 3H)， 1.94-1.89(m， 1H)， 1.44(s， 4H)， 1.37(s， 6H)。3 个可交换的质子没有观察。

    [2187] d)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(5- 甲基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2188] 将三氟乙酸 (1.2mL) 加至 (R)-2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 (4-(2-(4-(5- 甲基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 104， 步骤 c)(0.33g) 的 DCM(5mL) 溶 液中， 且将所得混合物搅拌 10 分钟。加入甲苯 (20mL)， 且真空蒸发混合物。残余物与甲苯 (3×20mL) 共沸。经制备性 HPLC(PhenomenexGemini ， 梯度为 5-40 ％乙腈 /0.1 ％甲酸水

    [2189] 溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 1 0.12g。m/z 639(M+H)+。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.13(s， 1H)， 7.45(s， 1H)， 7.22(d， J＝ 8.34Hz， 2H)， 6.88-6.78(m， 4H)， 6.66(d， J ＝ 8.27Hz， 1H)， 4.65(m， 1H)， 4.09-4.00(m， 2H)， 3.85-3.77(m， 3H)， 3.67-3.60(m， 4H)， 3.56-3.47(m， 2H)， 2.81-2.63(m， 5H)， 2.49-2.36(m， 5H)， 1.77-1.67(m， 2H)， 1.59-1.37(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [2190] 实施例 105

    [2191] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(5- 甲基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2192] a)(9-(9- 羟基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻 吩 -3- 基 ) 甲酮将 9- 溴 - 壬 -1- 醇 (0.335g) 的乙腈 (3mL) 溶液加至 (5- 甲基噻吩 -3- 基 )(1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 104， 步骤 b)(0.28g) 和三乙胺 (0.278mL) 的乙腈 (7mL) 溶液中。将所得混合物在 60℃搅拌过夜。真空蒸发反应混合物， 将残余物吸收到 DCM(30mL) 中， 用盐水 (2×15mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 经硅胶色谱 ( 用 0-10％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收 1 率为 0.3g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ7.54(s， 1H)， 6.91(s， 1H)， 4.32(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.66(s， 2H)， 3.52(s， 2H)， 3.41-3.33(m， 3H)， 2.95(s， 4H)， 2.45(d， J ＝ 1.1Hz， 3H)， 2.02(s， 3H)， 1.64(s， 4H)， 1.40(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 1.26(s， 11H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [2196] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(5- 甲基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2197] 在 0℃和氩气下将三氟乙酸 (0.055mL) 加至 (9-(9- 羟基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻吩 -3- 基 ) 甲酮 ( 实施例 105， 步骤 a)(0.3g) 的 DCM(15mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.45g)。将混合 物在室温搅拌 1h， 然后通过加入饱和硫代硫酸钠溶液 (14mL) 和饱和碳酸氢钠溶液 (14mL) 来淬灭， 然后加入乙酸乙酯 (30mL)， 且将混合物搅拌 5min。分离各层， 且水层用乙酸乙酯 (2×40mL) 萃取。将乙酸 (0.159mL) 加至合并的有机层中， 所述有机层用硫酸镁干燥， 过 滤， 且真空蒸发。将黄色油状物溶解在无水甲醇 (15mL) 中。加入 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO 2007027134， 实 施 例 1， 步 骤 d)

    [2198] (0.28g)， 接着加入乙酸 (0.061mL) 和分子筛。在室温搅拌 5min 后， 将反应混合物冷却至 0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.15g)， 且将混合物在室温搅拌 18h。对反应混合物进 行过滤， 且真空蒸发溶剂。残余物经制备性 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40％乙 腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白 1 色固体。收率为 0.07g。m/z 631(M+H)+。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.24(s， 1H)， 7.45(s， 1H)， 6.85-6.80(m， 2H)， 6.67(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.67(t， J ＝ 6.5Hz， 1H)， 3.63-3.21(m， 6H)， 2.75(d， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 2.63(t， J ＝ 7.3Hz， 2H)， 2.40(d， J ＝ 1.1Hz， 3H)， 2.38-2.16(m， 6H)， 1.70-1.61(m， 2H)， 1.47-1.29(m， 6H)， 1.19(s， 10H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [2199] 实施例 106

    [2200] (R)-7-(2-(4-(2-(4-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸 盐

    [2201] a)4-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [2203] 将 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (1.45g) 加 至 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐 (WuXiPharmaTech)(0.8g)、 1， 3- 苯并噻唑 -2- 甲酸 (0.588g) 和三乙胺 (1.51mL) 的 DMF(15mL) 溶液中， 且将所得混 合物搅拌 16h。真空减少 DMF 的体积， 且将反应混合物在水 (30mL) 和乙酸乙酯 (30mL) 之 间分配。有机层用水 (30mL) 和盐水 (30mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发。经 硅胶色谱 ( 用 0-10 ％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。 收 率 为 0.83g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.23-8.09(m， 2H)， 7.63-7.52(m， 2H)， 4.34(s，

    [2204] 1H)， 4.20(s， 1H)， 3.78(s， 2H)， 3.71(s， 1H)， 3.64-3.51(m， 3H)， 3.08(s， 2H)， 1.76(d， J ＝ 13.7Hz， 2H)， 1.55-1.34(m， 11H)。

    [2205] b) 苯并 [d] 噻唑 -2- 基 (1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2206] 将三氟乙酸 (5mL) 加至 4-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 106， 步骤 a)(0.83g) 的 DCM(15mL) 溶液中， 且将所得 混合物搅拌 25 分钟。真空蒸发溶剂。将残余物溶解在 DCM ∶甲醇 (1 ∶ 1)(5mL) 中， 且加 载至 SCX 柱 ( 用 DCM ∶甲醇 (1 ∶ 1) 预润湿 )。柱用甲醇 (60mL) 洗涤， 且用 2M 氨 / 甲醇溶 液 (40mL) 洗脱。真空蒸发洗脱剂， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。收率为 0.57g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.18-8.13(m， 1H)， 8.10-8.07(m， 1H)， 7.60-7.50(m， 2H)， 4.25(t， J ＝ 4.8Hz， 1H)， 4.17(s， 1H)， 4.04(s， 1H)， 3.70(s， 2H)， 3.65(d， J ＝ 5.5Hz， 1H)， 3.56(s， 1H)， 2.73-2.46(m， 4H)， 1.62-1.54(m， 2H)， 1.50-1.36(m， 2H)。

    [2208] c)(R)-4-(2-(4-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2207] 将 三 乙 胺 (0.25mL) 加 至 苯 并 [d] 噻 唑 -2- 基 (1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 106， 步骤 b)(0.22g) 的乙腈 (2.5mL) 溶液中。将该溶液加 至甲磺酸 (R)-2-(4-(( 叔丁氧基羰基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基酯 ( 实施例 108， 步骤 c)(0.5g) 的乙腈 (2.5mL) 溶液中。将所得混合物在 80 ℃加热 48 小时。真空蒸发反应混合物。经硅胶色 谱 ( 用 0-10％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为霜状泡沫状物。收率 为 0.34g。1H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ11.49(s， 1H)， 9.93(s， 1H)， 8.21(d， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 8.14(d， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 7.64-7.56(m， 2H)， 7.07(s， 2H)， 6.93-6.79(m， 2H)， 6.78-6.67(m， 2H)， 5.68(s， 1H)， 4.73(s， 1H)， 4.35-4.22(m， 3H)， 4.07(s， 4H)， 3.76(s， 2H)， 3.70(s， 1H)， 3.62(s， 1H)， 3.17(s， 6H)， 2.67(s， 2H)， 1.77(s， 1H)， 1.62(s， 1H)， 1.35(s， 3H)， 1.27(s， 6H)。 1 个可交换的质子没有观察。

    [2211] d)(R)-7-(2-(4-(2-(4-( 苯 并 [d] 噻 唑 -2- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 甲酸盐

    [2210] 将三氟乙酸 (1.25mL) 加至 (R)-4-(2-(4-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二 氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 106， 步骤 c)(0.33g) 的 DCM(4mL) 溶液中， 且将所得混合物搅拌 10 分钟。加入甲苯 (20mL)， 且真空蒸发混合物。残余物与甲 苯 (3×20mL) 共沸。经制备性 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率 1 为 0.096g。m/z 676(M+H)+。 H NMR(400MHz， D4-MeOH)δ8.44(s， 1H) ； 8.09-8.00(m， 2H) ； 7.58-7.48(m， 2H) ； 7.37(t， J ＝ 6.6Hz， 2H) ； 7.00(t， J ＝ 9.4Hz， 2H) ； 6.91(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 6.71(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 4.93-4.88(m， 1H) ； 4.43-3.38(m， 1H) ； 4.37-4.34(s， 1H) ；

    [2214] 4.27-4.20(m， 2H) ； 4.14(s， 2H) ； 3.87-3.82(m， 2H) ； 3.81-3.76(m， 1H) ； 3.71(s， 1H) ； 3.20-3.11(m ， 2H) ； 3.12-3.01(m ， 4H) ； 2.96-2.82(m ， 2H) ； 2.10-2.01(m ， 2H) ； 1.88-1.76(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [2215] 实施例 107

    [2213] (R)-7-(2-(9-(4-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 壬基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐a) 苯并 [d] 噻唑 -2- 基 (9-(9- 羟基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2218] 将 9- 溴 - 壬 -1- 醇 (0.335g) 的乙腈 (3mL) 溶液加至苯并 [d] 噻唑 -2- 基 (1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 106， 步骤 b)(0.34g) 和三乙胺 (0.278mL) 的乙腈 (7mL) 溶液中。将所得混合物在 60℃搅拌过夜。真空蒸发反应混合物， 将残余物吸收到 DCM(30mL) 中， 用盐水 (2×15mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 经硅胶色谱 ( 用 0-10％甲醇 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收 1 率为 0.34g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.22(d， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 8.14(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 7.65-7.56(m， 2H)， 4.37(s， 1H)， 4.31(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 4.27(s， 1H)， 3.80(s， 2H)， 3.72(s， 1H)， 3.63(s， 1H)， 3.41-3.33(m， 2H)， 2.99(s， 4H)， 2.10(s， 2H)， 1.86(s， 2H)， 1.64(s， 2H)， 1.40(s， 3H)， 1.27(s， 11H)。

    [2221] b)(R)-7-(2-(9-(4-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2220] 在 0℃和氩气下将三氟乙酸 (0.056mL) 加至苯并 [d] 噻唑 -2- 基 (9-(9- 羟基壬 基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 107， 步骤 a)(0.33g) 的 DCM(15mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.46g)。将 混合物在室温搅拌 1h。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (14mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (14mL) 和 EtOAc(30mL)， 且将混合物搅拌 5min。分离各层， 且水层用 EtOAc(2×40mL) 萃取。将乙酸 (0.159mL) 加至合并的有机层中， 所述有机层用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发。将黄色油状物溶解在无水 MeOH(15mL) 中。加入 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.28g)， 接着加入乙酸 (0.062mL) 和 分子筛。在室温搅拌 5min 后， 将反应混合物冷却至 0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.15g)， 且将混合物在室温搅拌 18h。对反应混合物进行过滤， 且真空蒸发溶剂。残余物 经制备性 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40 ％乙腈 /0.1 ％甲酸水溶液 ) 纯化。合 并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.14g。m/z 668(M+H)+。 1

    [2224] H NMR(400MHz， D6-DMSO)δ8.23(s， 1H)， 8.17-8.14(m， 1H)， 8.09(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 7.60-7.49(m， 2H)， 6.84(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.68(d， J ＝ 8.29Hz， 1H)， 4.74-4.64(m， 1H)， 4.29-4.24(m， 1H)， 4.20(s， 1H)， 3.72-3.62(m， 3H)， 3.56(s， 1H)， 2.79(d， J ＝ 5.5Hz， 2H)， 2.69-2.62(m， 2H)， 2.42-2.13(m， 6H)， 1.74-1.64(m， 2H)， 1.63-1.30(m， 6H)， 1.19(d， J ＝ 9.6Hz， 10H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [2225] 实施例 108

    [2226] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2227] a)4-(2- 羟基乙氧基 ) 苯甲醛将 2- 溴 乙 醇 (5.8mL) 和 碳 酸 钾 (11.3g) 先 后 加 至 4- 羟 基 苯 甲 醛 (5.0g) 的 MeCN(100mL) 溶液中。将所得混合物在氩气下搅拌且加热回流 3 天。将反应混合物冷却至 RT， 且在 EtOAc(100mL) 和 1M NaOH 水溶液 (100mL) 之间分配。有机层用盐水 (100mL) 洗 涤。合并水层， 且用 EtOAc(50mL) 萃取。合并有机层， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得 1 到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 6.4g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.90(s， 1H)， 7.87-7.81(m， 2H)， 7.06-6.98(m， 2H)， 4.18(dd， J ＝ 5.0， 4.0Hz， 2H)， 4.04-3.97(m， 2H)， 2.18-1.96(m， 1H)。

    [2231] b) 甲磺酸 2-(4- 甲酰基苯氧基 ) 乙基酯

    [2230] 在 0℃和氩气下历时 5min 将甲磺酰氯 (3.3mL) 滴加至 4-(2- 羟基乙氧基 ) 苯甲醛( 实施例 108， 步骤 a)(6.4g) 和三乙胺 (6.4mL) 的 DCM(30mL) 溶液中。将所得混合物在 0℃ 搅拌 10min， 然后在 RT 搅拌 1h。 反应混合物用盐水 (2×30mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 真空蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 40-50％ EtOAc/ 石油醚 (40-60℃ ) 洗脱 ) 纯化， 得到副 1 标题化合物， 其为粘性黄色油状物。收率为 8.87g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.92-9.87(m， 1H)， 7.89-7.81(m， 2H)， 7.05-6.98(m， 2H)， 4.62-4.58(m， 2H)， 4.36-4.32(m， 2H)， 3.10(s， 3H)。

    [2234] c) 甲磺酸 (R)-2-(4-(( 叔丁氧基羰基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢 苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基酯

    [2235] 在分子筛存在下将甲磺酸 2-(4- 甲酰基苯氧基 ) 乙基酯 ( 实施例 108， 步骤b)(1.7g)、 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(2.0g) 和乙酸 (0.44mL) 在无水 DMF(40mL) 中的混合物在 RT 搅拌 15min。将反应混合物冷却至 0 ℃， 且分 4 份以 2min 间隔加入三乙酰氧基硼氢化 钠 (2.2g)。将所得混合物在 RT 搅拌 1h。将一缩二碳酸二叔丁酯 (1.8g) 加至反应混合物 中， 将所述反应混合物搅拌 2h。加入饱和碳酸氢钠溶液 (100mL) 和 EtOAc(100mL)， 且将混 合物搅拌 5min。分离各层， 且水层用 EtOAc(×4) 萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥， 过 滤， 且真空蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 0-80％ EtOAc/ 石油醚 (40-60℃ ) 洗脱 ) 纯化， 得 1 到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 2.25g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.05(d， J＝ 7.6Hz， 2H)， 6.80(d， J ＝ 8.0Hz， 3H)， 6.70(d， J ＝ 8.0Hz， 1H)， 4.81( 宽单峰， 1H)， 4.54(t， J ＝ 4.3Hz， 2H)， 4.34-4.26(m， 1H)， 4.24-4.08(m， 3H)， 3.57-3.42(m， 1H)， 3.33-3.23(m， 1H)， 3.07(s， 3H)， 1.49(s， 9H)。3 个可交换的质子没有观察。

    [2237] d)(R)-2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙 基 (4-(2-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙 氧基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2238] 在 RT 和氩气下将甲磺酸 (R)-2-(4-(( 叔丁氧基羰基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧 代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基酯 ( 实施例 108， 步

    [2239] 骤 c)(0.295g) 的 MeCN(1.1mL) 溶液滴加至 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.150g) 和三乙胺 (0.11mL) 的 MeCN(1.1mL) 溶液中。将所得混合物在 60℃和氩气下搅拌 34h。冷却至 RT 后， 真空除去 溶剂。将残余物吸收在 DCM 中， 用盐水 (×2) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。黄色 固体经硅胶色谱 ( 用 0-5％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为绿色固体。收 1 率为 0.135g。m/z 768(M+H)+。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.86(s， 1H)， 6.83( 宽单峰， 2H)， 6.71-6.46(m， 4H)， 4.78( 宽单峰， 1H)， 4.46-2.51(m， 19H)， 1.90( 宽单峰， 4H)， 1.53(s， 9H)， 1.39(s， 3H)， 1.29(s， 3H)。3 个可交换的质子没有观察。

    [2240] e)(R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(4-(2-(4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 乙 氧 基 ) 苄 基 氨 基 ) 乙 基 ) 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2241] 将三氟乙酸 (0.7mL) 加至 (R)-2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙基 (4-(2-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 108， 步骤 d)(0.122g) 的 DCM(1.5mL) 溶液中。将所得混合物在 RT 搅拌 10min。加入甲苯 (15mL)， 且真空蒸发反应混合物。残余 物与 MeCN 共沸 2 次。粘性黄色残余物通过 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色 1 固体。 收率为 0.052g。 m/z 668(M+H)+。H NMR(400MHz， D4-MeOH)δ8.47(s， 1H)， 7.87(s， 1H)， 7.36(d， J ＝ 8.19Hz， 2H)， 6.98(s， 2H)， 6.91(d， J ＝ 8.36Hz， 1H)， 6.71(d， J ＝ 8.30Hz， 1H)， 4.90(dd， J ＝ 9.4， 4.1Hz， 1H)， 4.18(s， 2H)， 4.11(s， 2H)， 3.75(s， 5H)， 3.63(s， 1H)， 3.40(m， 1H)， 3.19-2.80(m， 8H)， 1.95(s， 2H)， 1.75(s， 1H)， 1.65(s， 1H)， 1.38(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。 5个 可交换的质子没有观察。

    [2243] 实施例 109

    [2244] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2242] a)(9-(9- 羟基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻 唑 -4- 基 ) 甲酮将 9- 溴 - 壬 -1- 醇 (0.316g) 的 MeCN(3mL) 溶液加至 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(0.40g) 和三 乙胺 (0.395mL) 的 MeCN(7mL) 溶液中。将所得混合物在 60℃和氩气下搅拌 16h。冷却至 RT 后， 真空除去溶剂。 将残余物吸收在 DCM 中， 用盐水 (×2) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空 蒸发。橙色固体经硅胶色谱 ( 用 0-10％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为灰 1 白色固体。 收率为 0.325g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.87(s， 1H)， 3.97(s， 2H)， 3.76(s， 3H)， 3.63(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.36(s， 3H)， 2.92(s， 4H)， 2.25(s， 2H)， 2.14-2.03(m， 2H)， 1.84(s， 2H)， 1.63(s， 2H)， 1.60-1.50(m， 2H)， 1.42(d， J ＝ 6.8Hz， 6H)， 1.42-1.21(m， 10H)。

    [2249] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2248] 在 0 ℃ 将 三 氟 乙 酸 (0.027mL) 加 至 (9-(9- 羟 基 壬 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 109， 步骤 a)(0.16g) 的 DCM(6.3mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.225g)。将 混合物在 RT 搅拌 45min。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (6mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (6mL) 和 EtOAc(36mL)， 且将混合物搅拌 5min。分离各层， 且水层用 EtOAc(2×40mL) 萃取。合并的有 机层用饱和碳酸氢钠溶液 (40mL) 洗涤， 用乙酸 (0.067mL) 处理， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真 空蒸发。 将粘性橙色油状物溶解在无水 MeOH(6.6mL) 中， 且加入 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.138g)， 接着加入乙酸 (0.03mL) 和 分子筛。 在 RT 搅拌 5min 后， 将反应混合物冷却至 0℃， 且加入 三乙酰氧基硼氢化钠 (0.075g)。 将混合物在 RT 搅拌 1h， 然后加入另一份三乙酰氧基硼氢化 钠 (0.075g)， 且将混合物在 RT 再搅拌 16h。 对反应混合物进行过滤， 且真空蒸发溶剂。 残余 物通过 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。 合并含有 产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.060g。 m/z 660(M+H)+。 1 H NMR(400MHz， D4-MeOH)δ8.52(s， 1H)， 7.86(s， 1H)， 6.94(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.52(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.98-4.89(m， 1H)， 3.90-3.58(m， 6H)， 3.37-3.25(m， 1H)， 3.15-3.02(m， 3H)， 3.01-2.93(m， 3H)， 2.91-2.65(m， 4H)， 2.10-1.96(m， 2H)， 1.83-1.54(m， 6H)， 1.41-1.28(m， 16H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [2252] 实施例 110

    [2253] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2254] a)(R)-2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙 基 (4-(2-(4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧 基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2255] 在 RT 和氩气下将甲磺酸 (R)-2-(4-(( 叔丁氧基羰基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧 代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基酯 ( 实施例 108， 步骤 c)(0.426g) 的 MeCN(2mL) 溶液滴加至 (5- 甲基噻吩 -2- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 9， 步骤 b)(0.154g) 和三乙胺 (0.15mL) 的 MeCN(5mL) 溶液中。将所得混合物在 60℃和氩气下搅拌 16h， 然后在 80℃再搅拌 3h。冷却 至 RT 后， 真空除去溶剂。将残余物吸收在 DCM 中， 用盐水和水 (×2) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。褐色固体经硅胶色谱 ( 用 0-10％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化 1 合物， 其为黄色固体。收率为 0.246g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.11(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 6.89(s， 2H)， 6.70-6.59(m， 4H)， 6.51(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.76(s， 1H)， 4.20-4.10(m， 4H)，

    [2257] 3.74(s， 4H)， 3.59-3.44(m， 4H)， 2.93-2.77(m， 4H)， 2.61(s， 2H)， 2.47(s， 3H)， 1.93-1.84(m， 2H)， 1.74-1.60(m， 2H)， 1.52(s， 9H)。3 个可交换的质子没有观察。

    [2258] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2259] 将三氟乙酸 (0.75mL) 加至甲磺酸 (R)-2-(4-(( 叔丁氧基羰基 (2- 羟基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基酯 ( 实 施例 110， 步骤 a)(0.243g) 的 DCM(3mL) 溶液中。将所得混合物在 RT 搅拌 10min。加入 甲苯 (30mL)， 且真空蒸发反应混合物 (×3)。残余物通过 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40 ％乙腈 /0.1 ％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到 1 D4-MeOH) 标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.65g。m/z 639(M+H)+。 H NMR(400MHz， δ8.44(s， 1H)， 7.40-7.35(m， 2H)， 7.19(d， J ＝ 3.7Hz， 1H)， 7.02-6.97(m， 2H)， 6.92(d， J＝ 8.36Hz， 1H)， 6.78-6..76(m， 1H)， 6.71(d， J ＝ 8.30Hz， 1H)， 4.93-4.88(m， 1H)， 4.21(t， J＝ 5.17Hz， 2H)， 4.13(s， 2H)， 3.76-3.70(m， 4H)， 3.61(s， 2H)， 3.11-3.07(m， 2H)， 3.07-3.01(m， 2H)， 3.03-2.91(m， 2H)， 2.88-2.76(m， 2H)， 2.47(d， J ＝ 1.0Hz， 3H)， 2.02-1.93(m， 2H)， 1.74-1.61(m， 2H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [2261] 实施例 111

    [2262] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2260] a)(9-(9- 羟基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 甲基噻 吩 -2- 基 ) 甲酮

    [2266] 将 9- 溴 - 壬 -1- 醇 (0.314g) 的 MeCN(3mL) 溶液加至 (5- 甲基噻吩 -2- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 9， 步骤 b)(0.263g) 和 三乙胺 (0.261mL) 的 MeCN(7mL) 溶液中。将所得混合物在 60℃和氩气下搅拌 16h。冷却至 RT 后， 真空除去溶剂。将残余物吸收在 DCM 中， 用盐水 (×2) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 真空蒸发。白色固体经硅胶色谱 ( 用 0-10％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其 1 为白色固体。收率为 0.352g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.10(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 6.71(dd， J ＝ 3.6， 1.2Hz， 1H)， 3.73(s， 4H)， 3.66-3.60(m， 4H)， 3.22(s， 2H)， 2.84(s， 3H)， 2.50(d， J＝ 1.0Hz， 3H)， 2.15(s， 1H)， 2.11-1.97(m， 2H)， 1.83(s， 2H)， 1.61-1.50(m， 3H)， 1.32(s， 11H)。 1 个可交换的质子没有观察。

    [2267] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(5- 甲基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2268] 在 0 ℃ 将 三 氟 乙 酸 (0.064mL) 加 至 (9-(9- 羟 基 壬 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(5- 甲 基 噻 吩 -2- 基 ) 甲 酮 ( 实 施 例 111， 步 骤 a)(0.350g) 的 DCM(15mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.527g)。将 混合物在 RT 搅拌 1h。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (14mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (14mL) 和 EtOAc(30mL)， 且将混合物搅拌 5min。分离各层， 且水层用 EtOAc(2×40mL) 萃取。合并的 有机层用饱和碳酸氢钠溶液 (40mL) 洗涤， 用乙酸 (0.159mL) 处理， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 真空蒸发。将黄色油状物溶解在无水 MeOH(15.6mL) 中， 且加入 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙 基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.327g)，

    [2269] 接着加入乙酸 (0.071mL) 和分子筛。在 RT 搅拌 5min 后， 将反应混合物冷却至 0℃， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.176g)， 且将混合物在 RT 搅拌 1h。 加入另一份三乙酰氧基硼氢化钠 (0.075g)， 且将混合物在 RT 搅拌 17h。对反应混合物进行过滤， 且真空蒸发溶剂。残余物通 过 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产 物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.127g。m/z 631(M+H)+。 H NMR(400MHz， D4-MeOH)δ8.49(s， 1H)， 7.20(d， J ＝ 3.7Hz， 1H)， 6.95(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.79-6.76(m， 1H)， 6.73(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.97-4.91(m， 1H)， 3.76-3.72(m， 4H)， 3.62(s， 2H)， 3.20-3.04(m， 4H)， 3.03-2.93(m， 3H)， 2.95-2.84(m， 3H)， 2.47(d， J ＝ 1.0Hz， 3H)， 2.11-2.01(m， 2H)， 1.80-1.62(m， 6H)， 1.40-1.31(m， 10H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [2270] 实施例 112

    [2271] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(2- 苯基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2272] 291

    [2273] a)4-(2- 苯基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [2274] 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐 (WuXiPharmaTech) (0.60g) 的 DMF(11mL) 溶液用三乙胺 (1.1mL) 处理， 接着用 2- 苯基 -1， 3- 噻唑 -4- 甲酸 (0.421g) 处理， 然后用 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 (1.09g) 处理。将所得混合物在 RT 搅拌 7h。真空除去 DMF。将残余物吸收在 EtOAc(50mL) 中， 用饱和碳酸氢钠溶液 (2×30mL)、 水 (30mL) 和盐水 (30mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且 真空蒸发。 褐色油状物经硅胶色谱 ( 用 0-10％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其 1 为褐色固体。 收率为 0.857g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ8.00(s， 1H)， 7.92(s， 2H)， 7.47(d， J＝ 4.1Hz， 3H)， 4.13-3.96(m， 2H)， 3.83(s， 3H)， 3.73(s， 2H)， 3.29-3.13(m， 2H)， 1.94-1.83(m， 2H)， 1.62-1.51(m， 3H)， 1.45(s， 9H)。

    [2276] b)(2- 苯基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2275] 将三氟乙酸 (3.8mL) 加至 4-(2- 苯基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 112， 步骤 a)(0.85mg) 的 DCM(15.2mL) 溶液中。 将所 得混合物在 RT 搅拌 1h。加入甲苯 (30mL)， 且真空蒸发混合物。将黄色残余物溶解在 MeOH 中， 且加载至 SCX 柱 ( 用 MeOH 预润湿 )。柱用 MeOH 洗涤， 且用 2M 氨 /MeOH 洗脱。真空蒸 发洗脱剂， 得到副标题化合物， 其为褐色油状物。收率为 0.629g。1H NMR(400MHz， CDCl3) δ7.98(s， 1H)， 7.95-7.90(m， 2H)， 7.49-7.44(m， 3H)， 4.07( 宽 单 峰， 1H)， 3.99( 宽 单 峰， 1H)， 3.88-3.79(m， 3H)， 3.70( 宽 单 峰， 1H)， 3.02-2.81(m， 3H)， 2.80-2.69(m， 1H)， 1.83(d， J ＝ 13.7Hz， 2H)， 1.70-1.44(m， 2H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [2279] c)(R)-2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙 基 (4-(2-(4-(2- 苯基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧 基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2278] 在 RT 和氩气下将甲磺酸 (R)-2-(4-(( 叔丁氧基羰基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧 代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基酯 ( 实施例 108， 步骤 c)(0.619g) 的 MeCN(3mL) 溶液滴加至 (2- 苯基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 112， 步骤 b)(0.274g) 和三乙胺 (0.22mL) 的 MeCN(7.3mL) 溶液中。将所得混合物在 80℃和氩气下搅拌 16h。冷却至 RT 后， 真空除去溶剂。将残余物 吸收在 DCM 中， 用盐水和水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 0-70 ％ EtOAc/ 石油醚 (40-60 ℃ ) 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色固体。收率 1 为 0.42g。 HNMR(400MHz， CDCl3)δ8.04-7.95(m， 1H)， 7.94-7.79(m， 2H)， 7.50-7.41(m， 2H)， 7.40-7.28(m， 1H)， 7.02-6.81(m， 2H)， 6.70-6.37(m， 3H)， 4.84-4.70(m， 1H)， 4.25-3.92(m， 6H) ， 3.87-3.75(m ， 3H) ， 3.74-3.58(m ， 2H) ， 3.57-3.36(m ， 2H) ， 2.99-2.77(m ， 3H) ， 2.76-2.43(m， 3H)， 2.01-1.86(m， 2H)， 1.84-1.58(m， 2H)， 1.52(s， 9H)。3 个可交换的质子没 有观察。

    [2281] d)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(2- 苯基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2282] 将三氟乙酸 (1.2mL) 加至 (R)-2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 (4-(2-(4-(2- 苯基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 112， 步骤 c)(0.415g) 的 DCM(4.7mL) 溶液中。将所得混合物在 RT 搅拌 15min。加入甲苯 (40mL)， 且真空蒸发反应混合物 (×2)。 残余物通过 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40 ％乙腈 /0.1 ％甲酸水溶液 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.176g。m/z 1 702(M+H)+。 H NMR(400MHz， D4-MeOH)δ8.07(s， 1H)， 7.94( 宽单峰， 2H)， 7.51-7.39(m， 5H)， 7.06( 宽 单 峰， 2H)， 6.93(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.71(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 4.92-4.88(m， 1H)， 4.38( 宽单峰， 2H)， 4.24-4.14(m， 2H)， 4.03-3.49(m， 10H)， 3.38-3.28(m， 2H)， 3.08-3.00(m， 2H)， 2.33-2.22(m， 2H)， 1.87( 宽单峰， 2H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2284] 实施例 113 (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 苯基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2287] a)(9-(9- 羟基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 苯基噻 唑 -4- 基 ) 甲酮将 9- 溴 - 壬 -1- 醇 (0.346g) 的 MeCN(3mL) 溶液加至 (2- 苯基噻唑 -4- 基 )(1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 112， 步骤 b)(0.355g) 和三乙胺 (0.288mL) 的 MeCN(7mL) 溶液中。将所得混合物在 60℃和氩气下搅拌 17h。冷却至 RT 后， 真空除去溶剂。将残余物吸收在 DCM 中， 用盐水 (×2) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸 发。黄色油状物经硅胶色谱 ( 用 0-7％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为白色 1 固体。 收率为 0.378g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ8.02(s， 1H)， 8.00-7.87(m， 2H)， 7.57(s， 1H)， 7.49-7.42(m， 2H)， 4.16-4.08(m， 2H)， 3.81(s， 4H)， 3.72( 宽单峰， 1H)， 3.63(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.33-2.64(m， 6H)， 2.25-2.04(m， 3H)， 1.79(s， 3H)， 1.61-1.50(m， 3H)， 1.39-1.25(m， 9H)。

    [2291] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 苯基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2290] 在 0 ℃ 将 三 氟 乙 酸 (0.059mL) 加 至 (9-(9- 羟 基 壬 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 苯 基 噻 唑 -4- 基 ) 甲 酮 ( 实 施 例 113， 步 骤 a)(0.373g) 的DCM(14mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.489g)。将 混合物在 RT 搅拌 1h。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (14mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (14mL) 和 EtOAc(30mL)， 且将混合物搅拌 5min。分离各层， 且水层用 EtOAc(2×30mL) 萃取。合并的有 机层用乙酸 (0.148mL) 处理， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将黄色油状物溶解在无水 MeOH(15mL) 中， 且加入 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 盐酸盐 (WO2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.303g)， 接着加入乙酸 (0.066mL) 和 分子 筛。在 RT 搅拌 5min 后， 将反应混合物冷却至 0 ℃， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.163g)， 且 将 混 合 物 在 RT 搅 拌 18h。 对 反 应 混 合 物 进 行 过 滤， 且 真 空 蒸 发 溶 剂。 残 余 物 通 过 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物 HPLC(Phenomenex Gemini ， 的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.118g。m/z 694(M+H)+。1H NMR(400MHz， D4-MeOH)δ8.31(s， 1H)， 7.97( 宽 单 峰， 1H)， 7.99-7.91(m， 2H)， 7.51-7.44(m， 3H)， 6.95(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.72(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 4.97-4.89(m， 1H)， 3.99-3.86(m， 2H)， 3.85-3.63(m， 4H)， 3.14-3.01(m， 2H)， 3.00-2.91(m， 3H)， 2.90-2.56(m， 4H)， 2.12-1.97(m， 2H)， 1.85-1.47(m， 6H)， 1.43-1.22(m， 10H)。 1 个质子由于溶剂而模糊， 且 5 个可交换的质子 没有观察。

    [2294] 实施例 114

    [2295] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(2-(4-(2- 异丙基噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2296] a)4-(2- 异丙基噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯

    [2298] 1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯盐酸盐 (WuXiPharmaTech) (0.694g) 的 DMF(13mL) 溶液用三乙胺 (1.3mL) 处理， 接着用 2- 异丙基噻唑 -5- 甲酸 ( 实 施例 55， 步骤 b)(0.406g) 处理， 然后用 O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’ ， N’ - 四甲基 脲鎓六氟磷酸盐 (1.26g) 处理。将所得混合物在 RT 搅拌 16h。真空除去 DMF。将残余物吸 收在 EtOAc(40mL) 中， 用饱和碳酸氢钠溶液 (2×40mL)、 水 (40mL) 和盐水 (40mL) 洗涤， 用 硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。粘性橙色油状物经硅胶色谱 ( 用 0-7％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为粘性橙色油状物。收率为 0.765g。1H NMR(400MHz， CDCl3)

    [2299] δ7.80(s， 1H)， 3.75(d， J ＝ 3.2Hz， 6H)， 3.55(d， J ＝ 4.3Hz， 2H)， 3.36-3.28(m， 1H)， 3.15(s， 2H)， 1.89-1.78(m， 2H)， 1.58(s， 2H)， 1.45(s， 9H)， 1.42(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [2300] b)(2- 异丙基噻唑 -5- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2301] 将三氟乙酸 (3.9mL) 加至 4-(2- 异丙基噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 113， 步骤 a)(0.765g) 的 DCM(14.8mL) 溶液中。 将所得混合物在 RT 搅拌 1h。加入甲苯 (30mL)， 且真空蒸发混合物。将黄色残余物溶解在 MeOH 中， 且加载至 SCX 柱 ( 用 MeOH 预润湿 )。柱用 MeOH 洗涤， 且用 2M 氨 /MeOH 洗脱。真空 蒸发洗脱剂， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 0.552g。1H NMR(400MHz， CDCl3) δ7.81(s， 1H)， 3.79-3.71(m， 4H)， 3.64-3.44(m， 2H)， 3.36-3.26(m， 1H)， 2.96-2.87(m， 2H)， 2.85-2.73(m， 2H)， 1.86-1.75(m， 2H)， 1.59(s， 2H)， 1.42(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。1 个可交换的 质子没有观察。

    [2302] c)(R)-2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙 基 (4-(2-(4-(2- 异丙基噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙 氧基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2303] 在 RT 和氩气下将甲磺酸 (R)-2-(4-(( 叔丁氧基羰基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧 代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基酯 ( 实施例 108， 步骤 c)(0.575g) 的 MeCN(3mL) 溶液滴加至 (2- 异丙基噻唑 -5- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 ) 甲 酮 ( 实 施 例 114， 步 骤 b)(0.229g) 和 三 乙 胺 (0.21mL) 的 MeCN(7.3mL) 溶液中。将所得混合物在 80 ℃和氩气下搅拌 16h。冷却至 RT 后， 真空除去 溶剂。将残余物吸收在 DCM(25mL) 中， 用盐水 (20mL) 和水 (20mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过 滤， 且真空蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 0-8％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 1 其为黄色固体。收率为 0.395g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.69(s， 1H)， 7.01-6.83(s， 2H)， 6.70-6.62(m， 3H)， 6.57-6.47(m， 1H)， 4.79(s， 1H)， 4.25-4.06(m， 3H)， 3.77-3.63(m， 4H)， 3.57-3.39(m， 4H)， 3.34-3.26(m， 2H)， 2.90(s， 4H)， 2.61(s， 2H)， 1.95-1.85(m， 2H)， 1.63(s， 2H)， 1.51(s， 9H)， 1.45-1.37(m， 6H)。3 个可交换的质子没有观察。

    [2306] d)(R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(4-(2-(4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -5- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 乙 氧 基 ) 苄 基 氨 基 ) 乙 基 ) 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2305] 将三氟乙酸 (1.2mL) 加至 (R)-2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙基 (4-(2-(4-(2- 异丙基噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 114， 步骤 c)(0.39g) 的 DCM(4.7mL) 溶液中。将所得混合物在 RT 搅拌 15min。加入甲苯 (30mL)， 且真空蒸发反应混合物 (×3)。 残余物通过 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40 ％乙腈 /0.1 ％三氟乙酸水溶液 ) 纯 化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.201g。 1 m/z 668(M+H)+。 HNMR(400MHz， D4-MeOH)δ7.91(s， 1H)， 7.42(d， J ＝ 8.6Hz， 2H)， 7.06(d， J ＝ 8.6Hz， 2H)， 6.93(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.71(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.91-4.88(m， 1H)， 4.38(t， J ＝ 4.9Hz， 2H)， 4.24-4.15(m， 2H)， 3.82-3.71(m， 5H)， 3.66-3.57(m， 4H)， 3.56-3.48(m， 2H)， 3.38-3.25(m， 1H)， 3.08-3.00(m， 2H)， 2.29-2.17(m， 2H)， 2.12-1.93( 宽 单 峰， 1H)， 1.88-1.73(m， 2H)， 1.38(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2309] 实施例 115

    [2310] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2308] a)(9-(9- 羟基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻 唑 -5- 基 ) 甲酮将 9- 溴 - 壬 -1- 醇 (0.446g) 的 MeCN(3.9mL) 溶液加至 (2- 异丙基噻唑 -5- 基 ) (1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 114， 步骤 b)(0.395g) 和三 乙胺 (0.36mL) 的 MeCN(8.6mL) 溶液中。将所得混合物在 60℃和氩气下搅拌 16h。冷却至 RT 后， 真空除去溶剂。将残余物吸收在 DCM(25mL) 中， 用盐水 (20mL) 和水 (20mL) 洗涤， 用

    [2314] 硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 0-10％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得 1 到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.329g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.81(s， 1H)， 3.74(s， 4H)， 3.63(t， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 3.59(s， 2H)， 3.36-3.26(m， 1H)， 3.10-2.49(m， 5H)， 2.03-1.91(m， 3H)， 1.68(s， 2H)， 1.61-1.50(m， 3H)， 1.43(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)， 1.36-1.29(m， 11H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [2315] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2316] 在 0℃和氩气下将三氟乙酸 (0.055mL) 加至 (9-(9- 羟基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -5- 基 ) 甲酮 ( 实施例 115， 步骤 a)(0.325g) 的 DCM(13mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 5min， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.458g)。将 混合物在 RT 搅拌 1.5h。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (14mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (14mL) 和 EtOAc(28mL)， 且将混合物搅拌 10min。分离各层， 且水层用 EtOAc(2×20mL) 萃取。合并的 有机层用乙酸 (0.16mL) 处理， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。将黄色油状物溶解在无水 MeOH(15mL) 中， 且加入 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮

    [2317] 盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.284g)， 接着加入乙酸 (0.062mL) 和分子筛。在 RT 搅拌 5min 后， 将反应混合物冷却至 0 ℃， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.153g)， 且 将 混 合 物 在 RT 搅 拌 16h。 对 反 应 混 合 物 进 行 过 滤， 且 真 空 蒸 发 溶 剂。 残 余 物 通 过 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物 的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.090mg。m/z 660(M+H)+。 1 H NMR(400MHz， D4-MeOH)δ8.50(s， 1H)， 7.90(s， 1H)， 6.95(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 6.73(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.96-4.90(m， 1H)， 3.79-3.68(m， 4H)， 3.64-3.55(m， 2H)， 3.38-3.26(m， 1H)， 3.11-3.05(m， 2H)， 3.04-2.92(m， 4H)， 2.86-2.69(m， 4H)， 2.07-2.04(m， 2H)， 1.76-1.55(m， 6H)， 1.39-1.36(m， 7H)， 1.36-1.31(m， 9H)。5 个可交换的质子没有观察。

    [2318] pEC50 和 内 在 活 性。 将 内 在 活 性 表 达 为 在 每 项 实 验 中 相 对 于 就 福 莫 特 罗 (formoterol) 而确定的最大活性的分数。

    [2319] 实施例 116-182

    [2320] a)(R)-3- 氟 -5-((4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2322] 2， 2， 2- 三氟 -1-(9-(3- 氟 -5-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮 ( 实施例 41， 步骤 c)(0.8g) 的二氯甲烷 (50mL) 溶液在 20℃用三氟乙 酸 (0.152mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (1.091g) 处理， 且将所得混合物在 20℃搅拌 40 分钟。 反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠水溶液 (20mL) 和乙酸 乙酯 (30mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。 混合物用乙酸乙酯 (×2) 萃取， 合并的有机层用碳酸 氢钠水溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇 (3mL) 中， 且 加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 HCl(WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.780g) 的甲醇 (20mL)( 含有乙酸 (0.113mL)) 溶液中。该混合物用氰 基硼氢化钠 (0.186g) 处理， 且在 20℃搅拌 2 小时。加入三乙胺 (0.69mL)， 接着加入一缩二 碳酸二叔丁酯 (0.689mL)， 且在 20℃继续搅拌 2 小时。减压除去溶剂， 且将残余物在乙酸乙 酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂。粗产物经硅胶色谱 ( 用 10％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％浓氨水 ) 洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化 合物。收率为 0.7g。m/z 713.3(M+H)+。

    [2324] b)(R)-3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-5- 氟苯乙基 (2- 羟 基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2323] 将 (R)-3- 氟 -5-((4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 116-182， 步骤 a)(0.7g) 在 35％氨水溶液 (15mL) 中的溶 液在 20℃静置 40 分钟。减压蒸发反应混合物至其原体积的一半。加入水 (10mL)， 且使该 溶液通过 10g C18 硅胶柱 ( 所述硅胶柱已用水预润湿 )。柱用水 (20mL) 冲洗。然后柱用甲 醇 (50mL) 冲洗以洗下产物。减压蒸发溶剂， 且残余物与乙腈 (×2) 共沸， 得到副标题化合 物。收率为 0.580g。m/z 617(M+H)+。

    [2327] c) 并行合成 - 制备实施例 116-182

    [2328] 将 (R)-3-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 )-5- 氟苯乙基 (2- 羟 基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 116-182， 步骤 b)(496mg) 和三乙胺 (244mg) 的 NMP(2.4mL) 溶液分成总体积为 30μL 的等分 液。 向每份等分液中加入合适的酸 (0.01mmol) 的 NMP(80μL) 溶液， 接着加入 HATU(4.9mg) 的 NMP(30μL) 溶液。将反应混合物在室温静置 18 小时。加入乙腈 (800μL)， 且使溶液通 过 ‘Tosic-65’ 树脂 (350mg)。树脂用乙腈 (800μL) 洗涤， 收集合并的洗涤液， 且再次通过 ‘Tosic-65’ 树脂。然后树脂用乙腈 (3mL) 洗涤。使氨的甲醇溶液 (2.5mL 浓度为 3.5M 的溶 液 ) 通过树脂， 且在氮气气流下蒸发所得洗涤液。 将残余物溶解在甲酸 (250μL) 中， 且将混 合物在室温静置 18 小时。加入乙腈 (600μL)， 且使溶液通过 ‘Tosic-65’ 树脂 (350mg)。树

    [2329] 脂用乙腈 (800μL) 洗涤， 收集合并的洗涤液， 且再次通过 ‘Tosic-65’ 树脂。然后树脂用乙 腈 (3mL) 洗涤。 使氨的甲醇溶液 (2.5mL 浓度为 3.5M 的溶液 ) 通过树脂， 且在氮气气流下蒸 发所得洗涤液。将 DMSO(200μL) 加至残余物中， 且使所得溶液通过 ‘Sunfire’ 制备性 C18 柱 (19×50mm)， 使用乙腈 +0.1％ TFA 水溶液的集中梯度洗脱 (focus gradient elution) 用于纯化。蒸发含有产物的馏分， 得到标题化合物。

    [2330] 分析性 HPLC 条件 ： SunFireTM C18 2.5μm 4.6×30mm 柱 (Waters Corporation)， MeCN/0.1％ TFA 水溶液， 梯度为 5-95％ MeCN。

    [2340] 时间 (min) 0.3 2.7 2.8 2.9

    [2342] ％水溶液 95 5 5 95％ MeCN 5 95 95 5流速 (ml/min) 2.5 2.5 2.5 2.5实施例 183-222

    [2344] a)9- 溴壬醛在 RT 和氩气下将 N- 乙基二异丙基胺 (23mL) 和 DMSO(9.7mL) 加至 9- 溴 - 壬 -1- 醇 (10.0g) 的无水 DCM(230mL) 溶液中。将混合物冷却至 -15 ℃， 且分 4 份以 5min 间隔加入 三氧化硫 - 吡啶络合物 (21.4g)。加完后， 将混合物搅拌 15min， 然后加入水 (200mL)， 且 分离各层。有机层用 1M 硫酸氢钠水溶液 (4×250mL)、 饱和碳酸钾水溶液 (250mL) 和盐水 (2×200mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为橙色油状物。 1 收率为 9.02g。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ9.77(t， J ＝ 1.8Hz， 1H)， 3.40(t， J ＝ 6.8Hz， 2H)， 2.42(td， J ＝ 7.3， 1.8Hz， 2H)， 1.89-1.80(m， 2H)， 1.66-1.57(m， 2H)， 1.58-1.26(m， 8H)。

    [2347] b)(R)-9- 溴壬基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2346] 将 9- 溴 壬 醛 ( 实 施 例 183-222， 步 骤 a)(3.48g)、 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(4.54g) 和 乙酸 (0.99mL) 的无水 DMF(91mL) 溶液在 RT 搅拌 30min。 将反应混合物冷却至 0℃， 且分 4 份 以 2min 间隔加入三乙酰氧基硼氢化钠 (5.00g)。将所得混合物在 0℃搅拌 5min， 然后在 RT 搅拌 1h。 将一缩二碳酸二叔丁酯 (4.12g) 加至反应混合物中， 将所述反应混合物搅拌 1.5h， 然后冷却至 0℃， 且用饱和碳酸氢钠水溶液 (220mL) 淬灭。 加入乙酸乙酯 (200mL)， 且将混合 物剧烈搅拌 15min。 分离各层， 且水层用乙酸乙酯 (3×150mL) 萃取。 合并的有机层用硫酸钠 干燥， 过滤， 且真空蒸发。 残余物经硅胶色谱 ( 用 0-70％ EtOAc/ 石油醚 (40/60℃ ) 洗脱 ) 纯 化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 1.68g。m/z 532(M+H)+。1H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ7.02-6.90(m， 1H) ； 6.78(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 4.92-4.87(m， 1H)， 3.63-3.27(m， 5H)， 3.20-3.04(m， 1H)， 1.89-1.79(m， 2H)， 1.71-1.17(m， 21H)+3 个可交换的质子没有观察。

    [2350] c)(R)-2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙 基 (9-(4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基 ) 氨基甲 酸叔丁酯

    [2349] 将 (R)-9- 溴壬基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 183-222， 步骤 b)(1.68g) 的 MeCN(8mL) 溶液滴加至 2， 2， 2- 三氟 -1-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮三氟乙酸盐 ( 实施例 12， 步骤 d)(1.18g) 和三乙胺 (0.81mL) 的 MeCN(8mL) 溶液中。将所得混合物在 80℃搅拌 18h。将反应混合物冷却至 RT， 且真空除去溶剂。将褐色残余物吸收在 DCM 中， 有机层用水 (×2) 和盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 褐色泡沫状物经硅胶色谱 ( 用 0-10％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 500mg。1H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ6.95(s， 1H)， 6.80(dd， J ＝ 8.3， 4.0Hz， 1H)， 4.93(s， 1H)， 3.79-3.26(m， 10H)， 3.03-2.64(m， 6H)， 2.10-1.98(m， 4H)， 1.78-1.70(m， 2H)， 1.48(s， 9H)， 1.36-0.96(m， 12H)+3 个可交换的质子没有观察。

    [2352] d)(R)-9-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基 (2- 羟基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯将碳酸钾 (165mg) 的水 (24mL) 溶液加至 (R)-2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 (9-(4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 183-222， 步骤 c)(495mg) 的 MeOH(24mL) 溶液中。 将所得混合物在 RT 搅拌 4h。 甲醇如下除去 ： 在氮气气流下蒸发， 保持反 应混合物在 30℃。 加入水 (20mL) 和盐水 (80mL)， 且混合物用 EtOAc(5×60mL) 萃取。 合并的 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 褐色固体残余物经硅胶色谱 ( 用 0-20％ (2M NH3/ MeOH)/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色固体。 收率为 323mg。 m/z 607(M+H)+。 1 H NMR(400MHz， DMSO) ： δ6.80-6.68(m， 1H)， 6.65(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 5.58( 宽 单 峰， 1H)， 4.69-4.56(m， 1H)， 3.44(t， J ＝ 3.9Hz， 2H)， 3.20-3.11(m， 2H)， 3.05-2.94(m， 2H)， 2.57(t， J ＝ 5.2Hz， 2H)， 2.50-2.46(m， 2H)， 2.40-2.31(m， 2H)， 2.25-2.13(m， 4H)， 1.77-1.68(m， 2H)， 1.45-1.02(m， 25H)+3 个可交换的质子没有观察。

    [2356] e) 并行合成 - 制备实施例 183-222

    [2355] 将 (R)-9-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 壬基 (2- 羟基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 183-222， 步骤 d)(292mg) 和三乙胺 (0.20mL) 的 NMP(1.14mL) 溶液分成总体积为 30μL 的等分液。 向每份等分液中加入合适的酸 (0.01mmol) 的 NMP(80μL) 溶液， 接着加入 HATU(4.0mg) 的 NMP(30μL) 溶液。将反应混合物在室温静置过夜。加入乙腈 (800μL)， 且使溶液通过 ‘Tosic-65’树脂 (350mg)。树脂用乙腈 (800μL) 洗涤， 收集合并的洗涤液， 且再次通过 ‘Tosic-65’ 树脂。然后树脂用乙腈 (3mL) 洗涤。使氨 ( 浓度为 3.5M 的甲醇溶液， 2.4mL) 通 过树脂， 且在氮气气流下蒸发所得洗涤液。将残余物溶解在甲酸 (250μL) 中， 且将混合物 在室温静置过夜。加入乙腈 (600μL)， 且使溶液通过 ‘Tosic-65’ 树脂 (350mg)。树脂用乙 腈 (800μL) 洗涤， 收集合并的洗涤液， 且再次通过 ‘Tosic-65’ 树脂。 然后树脂用乙腈 (3mL) 洗涤。 使氨 ( 浓度为 3.5M 的甲醇溶液， 2.4mL) 通过树脂， 且在氮气气流下蒸发所得洗涤液。 将 DMSO(360μL) 加至残余物中， 且使所得溶液通过 ‘Sunfire’ 制备性 C18 柱 (19×50mm)， 使用乙腈 +0.1％ TFA 水溶液的集中梯度洗脱用于纯化。蒸发含有产物的馏分， 得到标题化 合物。

    [2358] 分析性 HPLC 条件 ： SunFireTMC18 2.5μm 4.6×30mm 柱 (WatersCorporation)， MeCN/0.1％ TFA 水溶液， 梯度为 5-95％ MeCN。

    [2365] *时间 (min) 0.3 2.7 2.8％水溶液 95 5 5％ MeCN 5 95 95317流速 (ml/min) 2.5 2.5 2.5102083839 A CN 102083847说2.9 95明5书2.5309/380 页

    [2367] 实施例 223-263a)(R)-2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙 基 (4-(2-(4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2369] 在 RT 和氩气下将甲磺酸 (R)-2-(4-(( 叔丁氧基羰基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧 代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 乙基酯 ( 实施例 108， 步 骤 c)(2.20g) 的 MeCN(8.5mL) 溶 液 滴 加 至 2， 2， 2- 三 氟 -1-(1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮三氟乙酸盐 ( 实施例 12， 步骤 d)(1.18g) 和三乙胺 (0.81mL) 的 MeCN(8.5mL) 溶液中。将所得混合物在 60℃和氩气下搅拌 25h。冷却至 RT 后， 真空除去溶 剂。将褐色残余物吸收在 DCM(35mL) 中， 用水 (2×35mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空 蒸发。黄色固体经硅胶色谱 ( 用 0-10％ MeOH/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄 1 色固体。收率为 729mg。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ6.88-6.50(m， 6H)， 4.86-4.64( 宽单峰， 1H)， 4.34-4.15( 宽 单 峰， 3H)， 4.11-3.87(m， 2H)， 3.70-3.01(m， 11H)， 2.95-2.73( 宽 单 峰， 2H)， 2.04-1.81(m， 2H)， 1.56-1.37(m， 11H)+3 个可交换的质子没有观察。

    [2372] b)(R)-4-(2-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基 (2- 羟 基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2371] 将碳酸钾 (240mg) 的水 (35mL) 溶液加至 (R)-2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 (4-(2-(4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苄基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 223-263， 步骤 a)(725mg) 的 MeOH(35mL) 溶液中。将所得混合物在 RT 搅拌 5h。甲醇如下除去 ： 在氮气气流下蒸发， 保持 反应混合物在 25℃。加入水 (20mL) 和盐水 (30mL)， 且混合物用乙酸乙酯 (7×30mL) 萃取。 合并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 0-20％ (2M NH3/ MeOH)/DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 385mg。1H NMR(400MHz， D6-DMSO) ： δ7.06-6.97(m， 2H)， 6.83(d， J ＝ 8.6Hz， 2H)， 6.78-6.62(m， 2H)， 5.64(s， 1H)， 4.68( 宽 单 峰， 1H)， 4.24(s， 2H)， 3.98(t， J ＝ 5.6Hz， 2H)， 3.50(t， 2H)， 3.24-3.02(m， 2H)， 2.68-2.60(m， 4H)， 2.57(s， 2H)， 2.52-2.47(m， 2H)， 2.32(td， J ＝ 11.9， 3.0Hz， 2H)， 1.76(d， J ＝ 13.0Hz， 2H)， 1.43(td， J ＝ 10.8， 3.7Hz， 2H)， 1.31(s， 3H)， 1.22(s， 6H)+3 个可交换的质 子没有观察。

    [2375] c) 并行合成 - 制备实施例 223-263

    [2374] 将 (R)-4-(2-(1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 乙 氧 基 ) 苄 基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 223-263， 步骤 b)(297mg) 和三乙胺 (0.20mL) 的 NMP(1.24mL) 溶液分成总体积为 30μL 的等分液。 向每份等分液中加入合适的酸 (0.01mmol) 的 NMP(80μL) 溶液， 接着加入 HATU(4.0mg) 的 NMP(30μL) 溶液。 将反应混合物在 RT 静置过夜。 加入乙腈 (800μL)， 且使 溶液通过 ‘Tosic-65’ 树脂 (350mg)。树脂用乙腈 (800μL) 洗涤， 收集合并的洗涤液， 且再 次通过 ‘Tosic-65’ 树脂。然后树脂用乙腈 (3mL) 洗涤。使氨 ( 浓度为 3.5M 的甲醇溶液， 2.4mL) 通过树脂， 且在氮气气流下蒸发所得洗涤液。将残余物溶解在甲酸 (250μL) 中， 且 将混合物在室温静置过夜。加入乙腈 (600μL)， 且使溶液通过 ‘Tosic-65’ 树脂 (350mg)。 树脂用乙腈 (800μL) 洗涤， 收集合并的洗涤液， 且再次通过 ‘Tosic-65’ 树脂。然后树脂用 乙腈 (3mL) 洗涤。使氨 ( 浓度为 3.5M 的甲醇溶液， 2.4mL) 通过树脂， 且在氮气气流下蒸发 所得洗涤液。将 DMSO(360μL) 加至残余物中， 且使所得溶液通过 ‘Sunfire’ 制备性 C18 柱(19×50mm)， 使用乙腈 +0.1％ TFA 水溶液的集中梯度洗脱用于纯化。 蒸发含有产物的馏分， 得到标题化合物。

    [2378] 分析性 HPLC 条件 ： SunFireTMC18 2.5μm 4.6×30mm 柱 (Waters Corporation)， MeCN/0.1％ TFA 水溶液， 梯度为 5-95％ MeCN。

    [2384] *324102083839 A CN 102083847说时间 (min) 0.3 2.7 2.8 2.9 ％水溶液 95 5 5 95明书流速 (ml/min) 2.5 2.5 2.5 2.5316/380 页％ MeCN 5 95 95 51 个可交换的 H 没有观察。

    [2387] 实施例 264

    [2388] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(5-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2386] a)2， 2， 2- 三氟 -1-(9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 乙酮

    [2390] 将 TBAF( 浓度为 1M 的 THF 溶液， 2.96mL) 加至搅拌的 1-(9-((4-(2-( 叔丁基二甲基 甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )-2， 2， 2- 三氟乙酮 ( 实施例 43， 步骤 a)(1.500g， 2.96mmol) 的 THF(5mL) 溶液中。1h 后， 将溶 液蒸发成胶状物。经硅胶色谱 ( 用乙酸乙酯∶三乙胺 10 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合 物， 其为胶状物。收率为 0.25g。m/z 393(M+H)+(APCI+)。

    [2393] b)2-(5-((4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙醛

    [2392] 副标题化合物使用与实施例 43 步骤 (e) 中所述相似的方法来制备， 其中使用 2， 2， 2- 三氟 -1-(9-((4-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -2- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 ) 乙酮 (0.15g)( 实施例 264， 步骤 a)。收率为 0.15g。m/z391(M+H)+(APCI+)。

    [2396] c)(R)-2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙 基 (2-(5-((4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻 吩 -3- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2395] 将 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 HCl(1.020g) (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d) 加至搅拌的 2-(5-((4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙醛 ( 实施例 264， 步骤 b) (0.9g) 和乙酸 (0.198mL) 的 MeOH(20mL) 溶液中。 2min 后， 加入氰基硼氢化钠 (0.290g)。 2h 后， 先后加入三乙胺 (1.1mL) 和 BOC 酸酐 ( 一缩二碳酸二叔丁酯 )(0.845g)。1h 后， 再加入 BOC 酸酐 (0.4g) 和三乙胺 (0.5mL)。2h 后， 将溶液浓缩至～ 5mL， 然后在乙酸乙酯和饱和盐 水之间分配。乙酸乙酯层用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。经硅胶色谱 ( 用甲醇∶二氯甲 烷∶ 880 氨 10 ∶ 90 ∶ 1 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 0.32g。m/ z 701(M+H)+(APCI+)。

    [2399] d)(R)-2-(5-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙 基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁 酯

    [2398] 将 35 ％氨水 (5mL) 加至 (R)-2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻唑 -7- 基 ) 乙基 (2-(5-((4-(2， 2， 2- 三氟乙酰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 264， 步骤 c)(0.2g) 中。 40min 后， 在 20℃将溶液浓缩至～ 1mL， 将浆液加至 C18(10g) 柱中， 用水 (20mL) 洗涤， 然后 用甲醇洗脱产物。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。将所得固体溶解在乙腈中， 且真空蒸 发。收率为 0.11g。m/z 605(M+H)+(APCI+)。

    [2402] e)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(5-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2403] 将 HATU(0.075g) 加 至 搅 拌 的 (R)-2-(5-(1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基甲基 ) 噻吩 -3- 基 ) 乙基 (2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 264， 步骤 d)(0.1g)、 5- 异丙基噻吩 -3- 甲酸 (0.028g) 和三乙胺 (0.092mL) 的 DMF(2mL) 溶液中。 1h 后， 将反应混合物在水和乙酸乙酯之 间分配。 乙酸乙酯层用水 (×2) 和盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。 将所得胶状 物溶解在甲酸 (2mL) 中。16h 后， 真空蒸发溶液。加入乙腈， 且真空蒸发混合物 (×2)。加入 甲苯， 且真空蒸发混合物。将混合物溶解在甲醇中， 过滤， 且经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯度 为 10-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。 合并含有纯产物的馏分， 且真空蒸发。 加入乙腈 (200mL)， 且将溶液真空蒸发成胶状物。将该操作重复 2 次。加入乙醚， 收集标题化合物， 其 1 为固体。 收率为 0.05g。 m/z 657(M+H)+( 多模式 +)。 HNMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ11.29(s， 1H)， 7.49(s， 1H)， 7.41(s， 1H)， 7.16(s， 1H)， 6.96-6.88(m， 2H)， 6.76(d， J ＝ 10.5Hz， 1H)， 4.94-4.86(m， 1H)， 4.47(s， 2H)， 3.71-3.62(m， 2H)， 3.57-3.48(m， 2H)， 3.48-3.40(m， 2H)， 3.31-2.91(m， 11H)， 2.11-1.95(m， 2H)， 1.80-1.63(m， 2H)， 1.28(d， J ＝ 6.6Hz， 6H)+5 个可交 换的质子没有观察。

    [2405] 实施例 265

    [2406] (R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(3-((4-(2-( 戊 -3- 基 ) 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 苯 乙 基 氨 基 ) 乙 基 ) 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2404] a)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2408] 副标题化合物使用与实施例 82 步骤 (b) 中所述相似的方法来制备， 其中使用 1 2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸 (0.12g)( 实施例 71， 步骤 d)。收率为 0.18g。 HNMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ7.92(s， 1H)， 7.18(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 7.11-7.04(m， 3H)， 4.24(dd， J ＝ 5.3， 3.5Hz， 1H)， 3.72-3.57(m， 8H)， 3.41(s， 2H)， 2.71(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.41-2.24(m， 4H)， 1.82-1.66(m， 4H)， 1.59-1.47(m， 2H)， 0.86(t， J ＝ 7.3Hz， 6H)+3H 由于水峰而模糊。

    [2411] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 苯 乙 基 氨 基 ) 乙 基 ) 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2410] 标 题 化 合 物 使 用 与 实 施 例 82 步 骤 (c) 中 所 述 相 似 的 方 法 来 制 备， 其中使用 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲酮 (0.18g)( 实施例 265， 步骤 a)。将粗醛溶解在 DCM 而不是甲醇中。收率

    [2413] 1 为 0.09g。 m/z 680(M+H)+( 多模式 +)。 H NMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ11.36(s， 1H)， 7.98(s， 1H)， 7.44-7.32(m， 4H)， 6.93(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.94-4.86(m， 1H)， 4.34-4.24(m， 2H)， 3.75-2.88(m， 17H)， 2.13-1.96(m， 2H)， 1.79-1.59(m， 6H)， 0.83(t， J ＝ 7.3Hz， 6H)+5 个可交换的质子没有观察。

    [2414] 实施例 266

    [2415] (R)-7-(2-(3-((4-( 苯并呋喃 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟 乙酸盐 )

    [2416] a) 苯并呋喃 -5- 基 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2417] 副标题化合物使用与实施例 82 步骤 (b) 中所述相似的方法来制备， 其中使用苯并 1 呋喃 -5- 甲酸 (0.1g)。 收率为 0.16g。H NMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ7.99(d， J ＝ 2.1Hz， 1H)， 7.67(s， 1H)， 7.60(d， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 7.31(dd， J ＝ 8.6， 1.7Hz， 1H)， 7.16(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 7.10-7.02(m， 3H)， 6.97(t， J ＝ 1.2Hz， 1H)， 4.24(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.68-3.58(m， 4H)， 3.52-3.34(m， 6H)， 2.70(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.38-2.27(m， 4H)， 1.81-1.68(m， 2H)， 1.55-1.42(m， 2H)。

    [2420] b)(R)-7-(2-(3-((4-( 苯并呋喃 -5- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟 乙酸盐 )

    [2419] 标题化合物使用与实施例 82 步骤 (c) 中所述相似的方法来制备， 其中使用苯并呋 喃 -5- 基 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲 酮 (0.15g)( 实施例 266， 步骤 a)。将粗醛溶解在 DCM 而不是甲醇中。收率为 0.07g。m/z 1 643(M+H)+( 多模式 +)。 H NMR(300MHz， DMSO， 90℃ )δ11.38(s， 1H)， 8.02(d， J ＝ 2.1Hz， 1H)， 7.71(s， 1H)， 7.63(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 7.47-7.31(m， 5H)， 6.99-6.90(m， 2H)， 6.77(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.95-4.86(m， 1H)， 4.33-4.25(m， 2H)， 3.72-2.94(m， 16H)， 2.14-1.98(m， 2H)， 1.77-1.53(m， 2H)+5 个可交换的质子没有观察。

    [2423] 实施例 267

    [2424] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(5- 丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三 氟乙酸盐 )

    [2422] a)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (5- 丙基噻吩 -3- 基 ) 甲酮

    [2426] 副标题化合物使用与实施例 82 步骤 (b) 中所述相似的方法来制备， 其中使用5- 丙基噻吩 -3- 甲酸 (0.1g)。收率为 0.15g。1H NMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ7.44(d， J＝ 1.3Hz， 1H)， 7.18(t， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 7.11-7.04(m， 3H)， 6.87(d， J ＝ 1.3Hz， 1H)， 4.24(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.67-3.59(m， 4H)， 3.51-3.47(m， 2H)， 3.40(s， 4H)， 2.77(dd， J ＝ 14.7， 0.9Hz， 2H)， 2.71(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 2.40-2.25(m， 4H)， 1.74-1.59(m， 4H)， 1.55-1.45(m， 2H)， 0.94(t， J ＝ 7.3Hz， 3H)。

    [2429] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(5- 丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2430] 标 题 化 合 物 使 用 与 实 施 例 82 步 骤 (c) 中 所 述 相 似 的 方 法 来 制 备， 其中使用 (9-(3-(2- 羟 基 乙 基 ) 苄 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(5- 丙 基 噻 吩 -3- 基 ) 甲 酮 (0.15g)( 实 施 例 267， 步 骤 a)。 将 粗 醛 溶 解 在 DCM 而 不 是 甲 醇 中。 收 率 为 0.9g。m/z 651(M+H)+( 多 模 式 +)。1H NMR(300MHz， DMSO， 90 ℃ )δ11.38(s， 1H)， 7.51-7.32(m， 5H)， 6.96-6.87(m， 2H)， 6.77(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.94-4.87(m， 1H)， 4.35-4.25(m ， 2H) ， 3.63-2.93(m ， 16H) ， 2.76(t ， J ＝ 7.3Hz ， 2H) ， 2.14-1.98(m ， 2H) ， 1.72-1.56(m， 4H)， 0.93(t， J ＝ 7.3Hz， 3H)+5 个可交换的质子没有观察。

    [2432] 实施例 268

    [2433] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2431] a)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 异丙基噻吩 -2- 基 ) 甲酮

    [2436] 副标题化合物使用与实施例 82 步骤 (b) 中所述相似的方法来制备， 其中使用 1 5- 异丙基噻吩 -2- 甲酸 (0.1g)。 收率为 0.18g。H NMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ7.23-7.15(m， 2H)， 7.13-7.04(m， 3H)， 6.84(d， J ＝ 3.6Hz， 1H)， 4.24(t， J ＝ 4.7Hz， 1H)， 3.69-3.58(m， 6H)， 3.50(s， 2H)， 3.41(s， 2H)， 3.17( 七 重 峰， J ＝ 6.8Hz， 1H)， 2.71(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.39-2.30(m， 4H)， 1.75-1.67(m， 2H)， 1.56-1.47(m， 2H)， 1.29(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)。

    [2438] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -2- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2437] 标 题 化 合 物 使 用 与 实 施 例 82 步 骤 (c) 中 所 述 相 似 的 方 法 来 制 备， 其中使用 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 异丙基 噻吩 -2- 基 ) 甲酮 (0.18g)( 实施例 268， 步骤 a)。将粗醛溶解在 DCM 而不是甲醇中。收 率 为 0.09g。m/z 651(M+H)+( 多 模 式 +)。1H NMR(300MHz， DMSO， 90 ℃ )δ11.37(s， 1H)， 7.45-7.33(m， 4H)， 7.24(d， J ＝ 3.1Hz， 1H)， 6.93(d， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.85(d， J ＝ 3.7Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.96-4.86(m， 1H)， 4.36-4.26(m， 2H)， 3.75-3.63(m， 4H)， 3.56-3.48(m， 2H)， 3.36-2.94(m， 11H)， 2.13-1.96(m， 2H)， 1.81-1.62(m， 2H)， 1.28(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)+5 个可交换的质子没有观察。

    [2441] 实施例 269

    [2442] (R)-7-(2-(2， 3- 二氟 -4-(2-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 乙氧基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2440] 标 题 化 合 物 使 用 与 实 施 例 82 步 骤 (c) 中 所 述 相 似 的 方 法 来 制 备， 其中使用 (9-(2-(2， 3- 二氟 -4-(2- 羟基乙基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 (0.22g)( 实施例 77， 步骤 e)。将粗醛溶解在 DCM 而不是甲醇中。收率为 0.13g。m/z 718(M+H)+( 多模式 +)。1H NMR(300MHz， DMSO， 90 ℃ )δ11.36(s， 1H)， 7.98(d， J ＝ 0.8Hz， 1H)， 7.15-7.00(m， 2H)， 6.93(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.93-4.86(m， 1H)， 4.46-4.38(m， 2H)， 3.74-2.94(m， 19H)， 2.15-1.97(m， 2H)， 1.87-1.69(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)+5 个可交换的质子没有观察。

    [2445] 实施例 270

    [2444] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2-( 三氟甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2446] a)2-(5-( 溴甲基 )-2-( 三氟甲基 ) 苯基 ) 乙醇将过氧苯甲酰 (0.085g) 加至 2-(5- 甲基 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ) 乙酸 (1.12g) 和 N- 溴琥珀酰亚胺 (1.101g) 的氯苯 (18mL) 悬浮液中， 且将所得混合物在 100℃和氮气下加 热 80 分钟， 然后冷却。所得混合物用乙酸乙酯稀释， 用水洗涤 3 次， 用盐水洗涤 1 次， 然后 干燥 (MgSO4)， 过滤， 且真空浓缩， 得到黄色油状物。将油状物溶解在四氢呋喃 (11mL) 中， 且 历时 2 分钟用 2M 硼烷 - 二甲硫醚络合物的 THF(5.1mL) 溶液逐份处理。将所得混合物在室 温搅拌过夜， 然后在冰 - 水中冷却， 且通过加入甲醇来淬灭。从冷却浴中取出冒泡混合物， 在室温搅拌 70 分钟， 然后真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱 ( 用 15％乙酸乙酯 / 异己烷

    [2450] 洗脱 ) 纯化， 得到粗产物， 其为黄色油状物。收率为 0.919g。

    [2451] b)(9-(3-(2- 羟基乙基 )-4-( 三氟甲基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2452] 副标题化合物使用与实施例 6 步骤 (b) 中所述相似的方法来制备， 其中使用 2-(5-( 溴甲基 )-2-( 三氟甲基 ) 苯基 ) 乙醇 (0.38g)( 实施例 270 步骤 a) 的乙腈溶液， 历 时 30 分钟将所述溶液滴加至 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 ) 甲酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22 步骤 b) 中。经硅胶色谱 ( 用 5％三乙胺 / 乙酸乙 酯洗脱 ) 纯化。收率为 0.32g。1H NMR(400MHz， DMSO， 90 ℃ )δ7.90(s， 1H)， 7.56(d， J＝ 8.2Hz， 1H)， 7.39(s， 1H)， 7.29(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 4.44(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 3.71-3.56(m， 6H)， 3.50(s， 2H)， 3.31( 七重峰， J ＝ 6.9Hz， 1H)， 2.90(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.57-2.25(m， 4H)， 1.81-1.66(m， 4H)， 1.62-1.49(m， 2H)， 1.36(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [2453] c)2-(5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -9- 基 ) 甲基 )-2-( 三氟甲基 ) 苯基 ) 乙醛副标题化合物使用与实施例 16 步骤 c) 中所述相似的方法来制备。其中使用 (9-(3-(2- 羟基乙基 )-4-( 三氟甲基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 (0.32g)( 实施例 270， 步骤 b)。加入戴斯 - 马丁高碘剂后， 将 混合物搅拌 90min。收率为 0.38g。

    [2457] d)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2-( 三氟甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2456] 标 题 化 合 物 使 用 与 实 施 例 18 步 骤 g) 中 所 述 相 似 的 方 法 来 制 备， 其中使用 2-(5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )甲基 )-2-( 三氟甲基 ) 苯基 ) 乙醛 (0.3g)( 实施例 270， 步骤 c) 的甲醇 (3mL) 溶液。加 入氰基硼氢化钠后， 将混合物在室温搅拌 3.75 小时。将溶液浓缩至体积为～ 3mL， 用 THF 稀释， 且用盐水和饱和碳酸氢钠水溶液的混合物洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥， 且真 空浓缩。残余物与乙腈共蒸发 2 次， 然后溶解在乙腈∶水 (1 ∶ 1) 中， 过滤， 且经制备性 HPLC(Sunfire， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 真空 浓缩， 且与乙腈共蒸发 3 次， 得到无色残余物。残余物用乙醚研磨， 得到固体， 过滤分离所 述固体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 得到产物， 其为白色固体。收率为 0.115g。m/z 1 720(M+H)+(APCI+)。 H NMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ7.93(s， 1H)， 7.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.61-7.53(m， 2H)， 6.94(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.5Hz， 1H)， 4.91(dd， J ＝ 8.6， 4.7Hz， 1H)， 4.27-4.08(m， 2H)， 3.76-3.59(m， 6H)， 3.48-2.85(m， 11H)， 2.03-1.88(m， 2H)， 1.78-1.63(m， 2H)， 1.35(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2460] 实施例 271

    [2461] (R)-7-(2-(3-((2， 2- 二 甲 基 -4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2462] a)1- 苄基 -4-((2- 甲基烯丙基氨基 ) 甲基 ) 哌啶 -4- 醇将 6- 苄基 -1- 氧杂 -6- 氮杂螺 [2.5] 辛烷 (2g)、 2- 甲基丙 -2- 烯 -1- 胺 HCl(2g) 和许尼希碱 (Hunig’ s Base)(3.44mL) 在乙醇 (30mL) 中的混合物在 70℃加热 18 小时。将 混合物冷却至室温， 且减压蒸发溶剂。将残余物在 DCM 和盐水之间分配， 水层用新鲜 DCM 重 新萃取， 合并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 2.70g。m/z 275(M+H)+(APCI+)。

    [2466] b)9- 苄基 -2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 甲酸叔丁酯

    [2465] 将浓硫酸 (12ml) 加至 1- 苄基 -4-((2- 甲基烯丙基氨基 ) 甲基 ) 哌啶 -4- 醇 ( 实 施例 271， 步骤 a)(2.2g) 中， 且将混合物在室温静置 2 小时。反应混合物用冰 / 水 (100mL) 处理， 接着用固体碳酸氢钠逐份处理直到混合物为碱性。 加入乙腈 (50mL)， 接着加入 BOC 酸 酐 (1.925g)， 且将反应混合物在室温搅拌 18 小时。反应混合物用乙酸乙酯 (×2) 萃取， 合 并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 用 1％甲醇 / 二氯甲烷至 1％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.8g。m/z 375(M+H)+(APCI+)。

    [2469] c)2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 甲酸叔丁酯

    [2468] 9- 苄基 -2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 甲酸叔丁酯 ( 实施 例 271， 步骤 b)(0.8g) 的乙醇 (50mL) 溶液和 10％钯 / 碳 (0.5g) 的混合物用甲酸铵 (0.8g) 处理， 且将反应混合物加热回流 30 分钟。 将混合物冷却至室温， 且通过硅藻土来过滤。 蒸发 1 溶剂， 且残余物与乙腈 (×2) 共沸， 得到副标题化合物。 收率为 0.55g。H NMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ3.25(s， 2H)， 3.19(s， 2H)， 2.84-2.76(m， 2H)， 2.59-2.50(m， 2H)， 1.51-1.42(m， 4H)， 1.41(s， 9H)， 1.13(s， 6H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [2472] d)9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 甲酸叔丁酯

    [2471] 历时 1 小时将 2-(3-( 溴甲基 ) 苯基 ) 乙醇 (0.416g) 逐份加至 2， 2- 二甲基 -1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 271， 步骤 c)(0.55g) 和三乙胺 (0.809mL) 的乙腈 (20mL) 溶液中。将混合物在 20 ℃搅拌 2 小时。减压蒸发溶剂， 将残余 物在饱和碳酸氢钠溶液和 DCM 之间分配， 有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗 产物通过快速硅胶色谱 ( 用 2％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％三乙胺 ) 洗脱 ) 纯化， 得到副 1 标题化合物。收率为 0.78g。 HNMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ7.21-7.04(m， 4H)， 4.24(t， J＝

    [2474] 5.5Hz， 1H)， 3.66-3.59(m， 2H)， 3.43(s， 2H)， 3.25(s， 2H)， 3.19(s， 2H)， 3.00(s， 2H)， 2.71(t， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 2.32-2.24(m， 2H)， 1.64-1.50(m， 4H)， 1.40(s， 9H)， 1.13(s， 6H)。

    [2475] e)2-(3-((2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯 基 ) 乙醇

    [2476] 将三氟乙酸 (5mL) 加至 9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 甲酸叔丁酯 ( 实施例 271， 步骤 d)(0.78g) 的 DCM(20mL) 溶 液中， 且将反应混合物在 20℃静置 30 分钟。加入甲苯 (40mL)， 减压蒸发溶剂， 且残余物与 乙腈 (×2) 共沸。将残余物溶解在水 (30mL) 中， 用乙酸乙酯洗涤， 水层通过加入固体碳酸 钠来碱化， 且在 20℃搅拌 30 分钟。然后含水混合物用 DCM(×6) 萃取， 合并的 DCM 层用硫酸 钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。 收率为 0.4g。 m/z 319(M+H)+(APCI+)。

    [2478] f)(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2477] 副标题化合物使用与实施例 22 步骤 (a) 中所述相似的方法来制备， 其中使用 2-(3-((2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醇 (0.2g)( 实施例 271， 步骤 e) 和 2- 甲基噻唑 -4- 甲酸 (0.09g)。将反应混合物搅拌 18h， 且用于色谱的洗脱溶剂为 2 ％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1 ％三乙胺 )。收率为 0.16g。m/z 444.1(M+H)+(APCI+)。

    [2481] g)(R)-7-(2-(3-((2， 2- 二甲基 -4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2480] 标 题 化 合 物 使 用 与 实 施 例 22 步 骤 (d) 中 所 述 相 似 的 方 法 来 制 备， 其中使用 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 (0.15g)( 实施例 271， 步骤 f)。加入氰基硼氢化钠后， 将混合物 搅拌 3h， 且加入 2- 甲基四氢呋喃而不是 THF。收率为 0.12g。m/z 652(M+H)+( 多模式 +)。 1 H NMR(400MHz， DMSO， 90 ℃ )δ11.27(s， 1H)， 7.93(s， 1H)， 7.43-7.32(m， 4H)， 6.93(d， J＝ 8.5Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.94-4.89(m， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.68(s， 2H)， 3.62(s， 2H)， 3.28-3.10(m， 8H)， 3.06-2.97(m， 2H)， 2.67(s， 3H)， 1.95-1.73(m， 4H)， 1.19(s， 6H)。 5个 可交换的质子没有观察。

    [2484] 实施例 272

    [2485] (R)-5-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2486] a)(5- 乙基噻吩 -3- 基 )(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2487] 副 标 题 化 合 物 使 用 与 实 施 例 271 步 骤 (f) 中 所 述 相 似 的 方 法 来 制 备， 其中 使 用 2-(3-((2， 2- 二 甲 基 -1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 苯 基 ) 乙 醇 (0.2g)( 实 施 例 271， 步 骤 e) 和 5- 乙 基 噻 吩 -3- 甲 酸。 收 率 为 0.22g。m/ z457.1(M+H)+(APCI+)。

    [2490] b)(R)-5-(2-(3-((4-(5- 乙基噻吩 -3- 基羰基 )-2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮 杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 )-1- 羟基乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2489] 标题化合物使用与实施例 23 中所述相似的方法来制备， 其中使用 (5- 乙基噻 吩 -3- 基 )(9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-2， 2- 二甲基 -1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 ) 甲酮 (0.22g)( 实施例 272， 步骤 a)。在步骤 a) 中加入三乙酰氧基硼氢化钠 后， 将混合物搅拌 3h。收率为 0.085g。m/z 659(M+H)+( 多模式 +)。1H NMR(400MHz， DMSO， 90 ℃ )δ8.16(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.48(d， J ＝ 1.5Hz， 1H)， 7.44-7.29(m， 4H)， 7.13(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.91(d， J ＝ 1.0Hz， 1H)， 6.55(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.37-5.32(m， 1H)， 4.24(s， 2H)， 3.52-3.40(m， 4H)， 3.28(t， J ＝ 8.3Hz， 2H)， 3.20-2.99(m， 8H)， 2.81(q， J ＝ 7.4Hz， 2H)， 1.93-1.65(m， 4H)， 1.25(t， J ＝ 7.4Hz， 3H)， 1.18(s， 6H)。6 个 可交换的质子没有观察。

    [2493] 实施例 273

    [2494] (R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 )-2-( 三 氟 甲 基 ) 苯 乙 基 氨 基 ) 乙 基 ) 喹 啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2492] (R)-5-(2- 氨基 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 (0.15g)(WO 2004106333) 的甲醇 (2mL) 溶液用乙酸 (0.021mL) 处理， 且搅拌 10 分钟。然后 加入 2-(5-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 )-2-( 三氟甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 270， 步骤 c)(0.190g) 的甲醇 (3mL) 溶液， 将所 得混合物在室温搅拌 10 分钟， 然后在冰 - 水中冷却， 且用氰基硼氢化钠 (0.038g) 处理。移 开冷却浴， 且将混合物在室温搅拌 2.75 小时。 将溶液浓缩至体积为～ 3mL， 用 THF(20mL) 稀 释， 且用盐水 (10mL) 和饱和碳酸氢钠水溶液 (1mL) 的混合物洗涤。有机相用无水硫酸镁干 燥， 且真空浓缩。残余物与乙腈共蒸发 2 次， 部分溶解在 THF(10mL) 中， 用三乙胺三氢氟酸 盐 (0.12mL) 处理， 且在室温搅拌过夜。 真空浓缩混合物， 将残余物溶解在乙腈∶水 (3 ∶ 2， 10mL) 中， 过滤， 且经制备性 HPLC(Sunfire， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。

    [2496] 真空浓缩含有产物的馏分， 且与乙腈共蒸发 3 次， 得到无色残余物。残余物用乙醚研磨， 得 到固体， 过滤收集所述固体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 得到标题化合物， 其为白色固 1 体。收率为 0.133g。m/z 714(M+H)+(APCI+)。 H NMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ8.17(d， J＝ 10.0Hz， 1H)， 7.93(s， 1H)， 7.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.62-7.53(m， 2H)， 7.14(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.00(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.55(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.34(dd， J ＝ 9.1， 4.0Hz， 1H)， 4.29-4.10(m， 2H)， 3.76-3.59(m， 6H)， 3.49-2.87(m， 11H)， 2.05-1.87(m， 2H)， 1.80-1.62(m， 2H)， 1.34(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2497] 实施例 274

    [2498] (R)-8- 羟 基 -5-(1- 羟 基 -2-(3-((4-(2-( 戊 -3- 基 ) 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2499] a)2-(3-((4-(2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛副标题化合物使用与实施例 16 步骤 c) 中所述相似的方法来制备， 其中使用 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 基 ) 甲酮 (0.16g)( 实施例 265， 步骤 a)。收率为 0.24g。m/z470(M+H)+(APCI+)。

    [2503] b)(R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(3-((4-(2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2502] 标 题 化 合 物 使 用 与 实 施 例 273 中 所 述 相 似 的 方 法 来 制 备， 其中使用 2-(3-((4-(2-( 戊 -3- 基 ) 噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 乙醛 ( 实施例 274， 步骤 a)。收率为 0.097g。m/z 674(M+H)+(APCI+)。1H NMR(400MHz， DMSO， 90 ℃ )δ8.15(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 7.95(s， 1H)， 7.47-7.28(m， 4H)， 7.13(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.99(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 6.55(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 5.39-5.28(m， 1H) ， 4.33-4.11(m ， 2H) ， 3.79-3.56(m ， 6H) ， 3.50-2.84(m ， 11H) ， 2.11-1.90(m ， 2H) ， 1.83-1.58(m， 6H)， 0.84(t， J ＝ 7.3Hz， 6H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2506] 实施例 275

    [2507] (R)-8- 羟 基 -5-(1- 羟 基 -2-(1-(3-((4-(5- 异 丙 基 噻 吩 -3- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨基 ) 乙基 ) 喹 啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2505] a)3-(2-( 叔丁氧基羰基氨基 )-2- 甲基丙基 ) 苯甲酸副标题化合物使用与实施例 53 步骤 b) 中所述相似的方法来制备， 其中使用 3-(2-( 叔丁氧基羰基氨基 )-2- 甲基丙基 ) 苯甲酸甲酯。将反应混合物在 20℃搅拌 18 小 时， 然后在 40℃搅拌 10 小时。将混合物在水和乙醚之间分配， 且无需进行最后研磨。m/z 292(M-H)+(APCI+)。

    [2512] b)1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨基甲酸叔丁酯

    [2511] 副标题化合物使用与实施例 16 步骤 a) 中所述相似的方法来制备， 其中使用 3-(2-( 叔丁氧基羰基氨基 )-2- 甲基丙基 ) 苯甲酸 (2.68g)。在加入期间将反应混合物在 冰浴中冷却， 然后在 20℃搅拌 2 小时。收率为 2.5g。1H NMR(400MHz， DMSO)δ7.23-7.13(m， 2H)， 7.06(s， 1H)， 6.98(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 6.23(s， 1H)， 5.09(t， J ＝ 5.6Hz， 1H)， 4.45(d， J ＝ 5.6Hz， 2H)， 2.89(s， 2H)， 1.42(s， 9H)， 1.14(s， 6H)。

    [2515] c)(3-(2- 氨基 -2- 甲基丙基 ) 苯基 ) 甲醇

    [2514] 将三氟乙酸 (5mL) 加至 1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨基甲酸叔丁 酯 ( 实施例 275， 步骤 b)(0.7g) 的 DCM(20mL) 溶液中， 且将所得溶液在 20℃静置 30 分钟。 加入甲苯 (40mL)， 且减压蒸发溶剂。将残余物在 DCM 和 1M 氢氧化钠水溶液之间分配， 且水 层用 DCM(×2) 萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂， 得到副标题化合 1 DMSO)δ7.23(t， J ＝ 8.0Hz， 物。收率为 0.440g。m/z180(M+H)+(APCI+)。 H NMR(400MHz， 1H)， 7.19-7.12(m， 2H)， 7.04(d， J ＝ 8.6Hz， 1H)， 4.47(s， 2H)， 2.58(s， 2H)， 0.99(s， 6H)。 3个 可交换的质子没有观察。

    [2518] d)(R)-8-( 苄基氧基 )-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(1-(3-( 羟基甲 基 ) 苯基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮

    [2517] 将 (R)-8-( 苄基氧基 )-5-(2- 溴 -1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 喹 啉 -2(1H)- 酮 (0.518g)、 (3-(2- 氨基 -2- 甲基丙基 ) 苯基 ) 甲醇 (0.19g)( 实施例 275， 步 骤 c)、 碘化钠 (0.159g) 和许尼希碱 (0.555mL) 在乙腈 (3mL) 中的混合物在氮气下加热回 流 2 天。再加入 (3-(2- 氨基 -2- 甲基丙基 ) 苯基 ) 甲醇 (0.19g) 和许尼希碱 (0.185mL)， 且继续加热回流 1 天。将反应混合物冷却至室温， 在乙酸乙酯和盐水之间分配， 有机层用 硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱 ( 用 3 ％甲醇和 1 ％三乙 胺 / 二氯甲烷洗脱 ) 纯化。将纯的馏分蒸发至干， 得到副标题化合物。收率为 0.44g。m/z 587(M+H)+(APCI+)。e)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 )-2- 甲 基丙 -2- 基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮将 (R)-8-( 苄基氧基 )-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(1-(3-( 羟基甲 基 ) 苯基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 275， 步骤 d)(0.44g) 和 钯 / 碳 (10％ )(80mg) 在乙醇 (30mL) 中的混合物在压力为 5 巴的氢气下剧烈搅拌 3 小时。 滤出催化剂， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。 收率为 0.37g。 m/z 497(M+H)+(APCI+)。

    [2524] f) 碳酸叔丁酯· (R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨基 ) 乙基 )-2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -8- 基酯

    [2523] 将 (R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 )-2- 甲 基丙 -2- 基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 275， 步骤 e)(0.37g)、 BOC 酸酐 (0.163g) 和三乙胺 (0.208mL) 的乙醇 (20mL) 溶液在室温静置 18 小时。减压除去溶剂， 得 到副标题化合物。收率为 0.44g。m/z 597(M+H)+(APCI+)。

    [2527] g) 碳酸叔丁酯·(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(1-(3- 甲酰基苯 基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨基 ) 乙基 )-2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -8- 基酯

    [2526] 将二氧化锰 (0.6g) 加至碳酸叔丁酯·(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧 基 )-2-(1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨基 ) 乙基 )-2- 氧代 -1， 2- 二氢喹 啉 -8- 基酯 ( 实施例 275， 步骤 f)(0.44g) 的二氯甲烷 (30mL) 溶液中， 且将混合物在 20℃ 剧烈搅拌 3 小时。反应混合物通过硅藻土来过滤， 且减压除去溶剂， 得到副标题化合物。收 率为 0.42g。m/z 595(M+H)+(APCI+)。

    [2530] h)(R)-3-(2-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(8- 羟基 -2- 氧代 -1， 2- 二氢 喹啉 -5- 基 ) 乙基氨基 )-2- 甲基丙基 ) 苯甲醛

    [2531] 碳 酸 叔 丁 酯·(R)-5-(1-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-2-(1-(3- 甲 酰 基 苯 基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨基 ) 乙基 )-2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -8- 基酯 ( 实施例 275， 步骤 g)(0.42g) 的甲醇 (15mL) 溶液用氨 (35％水溶液 )(2mL) 处理。将反应混合物在 20℃静置 3 小时。在氮气气流下除去溶剂， 且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。水层用乙酸乙 酯萃取， 合并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压蒸发溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.34g。m/z 495(M+H)+(APCI+)。

    [2533] i)(5- 异丙基噻吩 -3- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮

    [2532] 副标题化合物使用与实施例 22 步骤 a) 和 b) 中所述相似的方法来制备， 其中 使用 5- 异丙基噻吩 -3- 甲酸。在步骤 b) 中， 残余物不通过色谱纯化。粗产物与乙腈 (×2) 共沸。将残余物在 DCM 和 1M 氢氧化钠水溶液之间分配， 水层用 DCM(×3) 萃取， 合 并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且减压除去溶剂， 得到副标题化合物。收率为 0.4g。m/z 309(M+H)+(APCI+)。

    [2536] j)(R)-5-(1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(1-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基 羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨 基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮

    [2535] 副标题化合物使用与实施例 14 步骤 b) 中所述相似的方法来制备， 其中使用 (R)-3-(2-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-(8- 羟基 -2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 ) 乙基氨基 )-2- 甲基丙基 ) 苯甲醛 (0.32g)( 实施例 275， 步骤 h) 和 (5- 异丙基噻吩 -3- 基 ) (1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 (0.21g)( 实施例 275， 步骤 i)。粗产 物通过快速硅胶色谱 (8％甲醇 / 二氯甲烷 ( 含有 1％ 880 氨水 )) 纯化。将纯的馏分蒸发 至干， 得到副标题化合物。收率为 0.31g。m/z 787(M+H)+(APCI+)。 k)(R)-8- 羟基 -5-(1- 羟基 -2-(1-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 )-2- 甲基丙 -2- 基氨基 ) 乙基 ) 喹 啉 -2(1H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2539] 标 题 化 合 物 使 用 与 实 施 例 23 步 骤 b) 中 所 述 相 似 的 方 法 来 制 备， 其中使用 (R)-5-(1-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-2-(1-(3-((4-(5- 异 丙 基 噻 吩 -3- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲 基 ) 苯 基 )-2- 甲 基 丙 -2- 基 氨 基 ) 乙 基 )-8- 羟 基 喹 啉 -2(1H)- 酮 (0.31g)( 实 施 例 275， 步 骤 j)。 收 率 为 0.18g。m/ 1 DMSO， 90℃ )δ9.98(s， 1H)， 8.14(d， J ＝ 10.0Hz， z673(M+H)+( 多模式 +)。 H NMR(400MHz， 1H)， 7.47(s， 1H)， 7.44-7.40(m， 2H)， 7.36-7.30(m， 2H)， 7.20(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.01(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.89(s， 1H)， 6.58(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 5.37-5.31(m， 1H)， 4.26(s， 2H)， 3.68-3.63(m ， 2H) ， 3.55-3.51(m ， 2H) ， 3.21-2.98(m ， 11H) ， 2.01(s ， 2H) ， 1.69(s ， 2H) ， 1.31-1.24(m， 12H)+5 个可交换的质子没有观察。

    [2542] 实施例 276

    [2543] 8- 羟基 -5-((R)-1- 羟基 -2-((R)-1-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮

    [2541] 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2544] a)1-(3-(( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 酮将 (3- 溴苄基氧基 )( 叔丁基 ) 二甲基甲硅烷 (16.72g)、 乙酸异丙烯基酯 (9.2mL)、 三正丁基甲醇锡 (24mL)、 二乙酸钯 (II)(0.625g) 和三 ( 邻甲苯基 ) 膦 (1.70g) 在无水甲苯 (65mL) 中的混合物在 100℃加热回流 5 小时， 然后冷却过夜。 混合物用乙酸乙酯 (130mL) 和 4M 氟化钾水溶液 (80mL) 稀释， 且剧烈搅拌 20 分钟。 加入硅藻土， 然后悬浮液通过硅藻土来 过滤， 残余物用乙酸乙酯充分洗涤。合并的滤液和洗涤液用无水硫酸镁干燥， 真空浓缩， 且 通过快速硅胶色谱 ( 用异己烷、 10％二氯甲烷 / 异己烷和 20％乙醚 / 异己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 13.71g。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.30(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 7.23(d， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 7.16(s， 1H)， 7.09(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 4.73(s， 2H)， 3.68(s， 2H)， 2.14(s， 3H)， 0.94(s， 9H)， 0.10(s， 6H)。

    [2548] b)(3-((R)-2-((R)-1- 苯基乙基氨基 ) 丙基 ) 苯基 ) 甲醇盐酸盐

    [2547] 1-(3-(( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 酮 ( 实施例 276， 步骤 a)(6.85g) 的二氯甲烷 (240mL) 溶液用乙酸 (1.27mL)、 (R)-(+)-1- 苯基乙基胺 (2.83mL) 和 三乙酰氧基硼氢化钠 (7.09g) 处理， 且将所得悬浮液在室温搅拌过夜。 混合物通过历时 5 分 钟滴加饱和碳酸氢钠水溶液 (120mL) 来淬灭。 将两相混合物剧烈搅拌 1.75 小时， 然后分离。 水相再用二氯甲烷萃取， 干燥 (MgSO4) 合并的有机相， 过滤， 且浓缩， 得到油状物。油状物通 过快速硅胶色谱 ( 用 10％乙醇 / 异己烷洗脱 ) 纯化， 得到甲硅烷基化的醇， 其为黄色油状物 (7.21g)。将油状物溶解在 HCl/ 甲醇溶液 (1M， 20mL) 中， 在室温保持 25 分钟， 然后真空浓 缩。 所得胶状物用甲醇 / 乙醚研磨， 得到结晶浆液， 将所述结晶浆液搅拌 30 分钟。 过滤除去 固体， 用乙醚充分洗涤， 且从甲醇 / 乙醚中重结晶 3 次， 得到副标题化合物， 其为白色晶体。 1 收率为 1.9g。 m/z 270(M+H)+(APCI+)。H NMR(400MHz， DMSO)δ9.84( 宽单峰， 1H)， 9.21( 宽

    [2550] 单 峰， 1H)， 7.69(d， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 7.53-7.40(m， 3H)， 7.23(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 7.16(d， J ＝ 7.7Hz， 1H)， 6.98(s， 1H)， 6.88(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 5.16(t， J ＝ 5.6Hz， 1H)， 4.69-4.55(m， 1H)， 4.43(d， J ＝ 5.4Hz， 2H)， 3.42-3.30(m， 1H)， 3.04-2.91(m， 1H)， 2.61-2.47(m， 1H)， 1.63(d， J ＝ 6.7Hz， 3H)， 1.10(d， J ＝ 6.7Hz， 3H)。

    [2551] c)(R)-(3-(2- 氨基丙基 ) 苯基 ) 甲醇

    [2552] 将 (3-((R)-2-((R)-1- 苯基乙基氨基 ) 丙基 ) 苯基 ) 甲醇盐酸盐 ( 实施例 276， 步 骤 b)(1.92g)、 20％氢氧化钯 / 碳 (0.757g) 和甲酸铵 (2.28g) 在乙醇 (30mL) 中的混合物在 75℃搅拌 1.5 小时， 然后冷却。悬浮液通过硅藻土来过滤， 残余物用乙醇充分洗涤。真空浓 缩合并的滤液和洗涤液， 得到浅黄色胶状物， 其为所需产物和去羟基类似物的混合物。 收率 为 1.54g。直接使用。

    [2554] d)(R)-1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基氨基甲酸叔丁酯

    [2553] 历时 20 分钟将一缩二碳酸二叔丁酯 (2.034g) 的 THF(5mL) 溶液滴加至不纯的 (R)-(3-(2- 氨基丙基 ) 苯基 ) 甲醇 ( 实施例 276， 步骤 c)(1.54g) 在 THF(10mL) 和水 (10mL) 中的溶液中。将所得混合物在室温搅拌过周末， 然后加入三乙胺 (3.90mL)。历时 30 分钟再 滴加一缩二碳酸二叔丁酯 (2.013g) 的 THF(5mL) 溶液。 将所得混合物在室温搅拌过夜， 然后 真空浓缩以除去 THF。所得含油水相用乙酸乙酯萃取 2 次， 干燥 (MgSO4) 合并的萃取物， 过 滤， 且真空浓缩到快速硅胶上。 残余物通过快速硅胶色谱 ( 用 35％乙酸乙酯 / 异己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.9g。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.29(t， J ＝ 7.6Hz， 1H)， 7.25-7.17(m， 2H)， 7.11(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 4.68(s， 2H)， 4.37( 宽单峰， 1H)， 3.91( 宽单峰， 1H)， 2.85(dd， J ＝ 12.7， 5.0Hz， 1H)， 2.66(dd， J ＝ 13.3， 7.4Hz， 1H)， 1.42(s， 9H)， 1.09(d， J ＝ 6.7Hz， 3H)。1 个可交换的质子没有观察。

    [2557] e)8-( 苄基氧基 )-5-((R)-1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-((R)-1-(3-( 羟基 甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮

    [2556] (R)-1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 276， 步骤 d) (0.78g) 的二氯甲烷 (20mL) 溶液用三氟乙酸 (5mL) 处理， 且在室温搅拌 40 分钟。 加入甲苯， 且真空浓缩溶液。 将残余物在 1M NaOH 水溶液和 DCM 之间分配， 且分离各相。 水相用 DCM 再 萃取 2 次， 然后干燥 (MgSO4) 合并的有机萃取物， 且真空浓缩， 得到 (R)-(3-(2- 氨基丙基 ) 苯基 ) 甲醇， 其为无色油状物， 所述油状物当静置时缓慢结晶成白色固体 (0.442g)。 在氮气 下将 (R)-(3-(2- 氨基丙基 ) 苯基 ) 甲醇 (0.223g)、 (R)-8-( 苄基氧基 )-5-(2- 溴 -1-( 叔 丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮 (0.72g)、 碘化钠 (0.219g) 和许尼希碱 (0.77mL) 在乙腈 (3mL) 中的混合物加热回流过夜。再加入 (R)-(3-(2- 氨基丙基 ) 苯基 ) 且将混合物加热回流过第二夜。冷却的 甲醇 (0.219g)、 许尼希碱 (0.51mL) 和乙腈 (2mL)， 反应混合物用乙酸乙酯稀释， 用水洗涤 2 次， 用盐水洗涤 1 次， 然后干燥 (MgSO4)， 且真空浓 缩到快速硅胶上。所得粉末通过快速硅胶色谱 ( 用 5％三乙胺 / 乙酸乙酯洗脱 ) 纯化， 得到 1 副标题化合物， 其为浅黄色泡沫状物。收率为 0.525g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.37( 宽单 峰， 1H)， 8.46(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 7.69-7.56(m， 5H)， 7.39-7.22(m， 4H)， 7.17(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 7.12(d， J ＝ 6.7Hz， 1H)， 6.82(d， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 5.37(d， J ＝ 2.1Hz， 2H)， 5.26(dd， J ＝ 7.4， 5.6Hz， 1H)， 4.82(s， 2H)， 3.24(dd， J ＝ 11.4， 7.6Hz， 1H)， 3.05(q， J ＝ 6.5Hz， 1H)， 2.93(dd， J ＝ 11.4， 5.5Hz， 1H)， 2.84(dd， J ＝ 13.6， 7.0Hz， 1H)， 2.74(dd， J ＝ 13.2， 6.8Hz， 1H)， 1.25(d， J ＝ 6.2Hz， 3H)， 1.04(s， 9H)， 0.24(s， 3H)， 0.00(s， 3H)。2 个可交换的质子没 有观察。

    [2560] f)5-((R)-1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-((R)-1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮

    [2559] 将 8-( 苄基氧基 )-5-((R)-1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-((R)-1-(3-( 羟 基甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 276， 步骤 e)(0.52g) 和

    [2562] 10％钯 / 碳催化剂 (0.102g) 在乙醇 (36mL) 中的混合物在室温和压力为 5 巴的氢气下氢化 1.5 小时， 然后在室温和压力为 1 巴的氢气下氢化过夜。混合物通过硅藻土来过滤， 催化剂 用乙醇充分洗涤， 且真空浓缩合并的滤液和洗涤液， 得到副标题化合物。收率为 0.42g。物 质直接用于下一步。m/z 483(M+H)+(APCI+)。

    [2563] g)(R)-2-(8-( 叔丁氧基羰基氧基 )-2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 )-2-( 叔丁基 二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ((R)-1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2564] 将 5-((R)-1-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2-((R)-1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基氨基 ) 乙基 )-8- 羟基喹啉 -2(1H)- 酮 ( 实施例 276， 步骤 f)(0.42g) 溶解在乙醇 (25mL) 中， 用三乙胺 (0.26mL) 和一缩二碳酸二叔丁酯 (0.201g) 处理， 且在室温搅拌 1.5 小时。再加入一缩二碳酸二叔丁酯 (0.203g) 和三乙胺 (0.13mL)， 且将混合物在室温搅拌 过夜， 然后将其真空浓缩， 得到副标题化合物。收率为 0.609g。物质直接用于下一步。m/z 683(M+H)+(APCI+)。

    [2566] h)(R)-2-(8-( 叔丁氧基羰基氧基 )-2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 )-2-( 叔丁基 二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ((R)-1-(3- 甲酰基苯基 ) 丙 -2- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2565] 将 (R)-2-(8-( 叔丁氧基羰基氧基 )-2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 )-2-( 叔丁基 二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ((R)-1-(3-( 羟基甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实 施例 276， 步骤 g)(0.609g) 溶解在二氯甲烷 (30mL) 中， 用二氧化锰 (IV)(0.791g) 处理， 且 将所得悬浮液在室温搅拌过周末。再加入二氧化锰 (IV)(0.801g)， 且将悬浮液再搅拌 4 小 时。混合物通过硅藻土来过滤， 残余物用 DCM 充分洗涤， 且真空浓缩合并的滤液和洗涤液， 得到副标题化合物。收率为 0.521g。物质直接用于下一步。m/z 681(M+H)+(APCI+)。

    [2569] i)(R)-2-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-2-(8- 羟 基 -2- 氧 代 -1， 2- 二 氢 喹 啉 -5- 基 ) 乙基 ((R)-1-(3- 甲酰基苯基 ) 丙 -2- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2568] 将 (R)-2-(8-( 叔丁氧基羰基氧基 )-2- 氧代 -1， 2- 二氢喹啉 -5- 基 )-2-( 叔丁基 二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ((R)-1-(3- 甲酰基苯基 ) 丙 -2- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施 例 276， 步骤 h)(0.521g) 悬浮在甲醇 (20mL) 中， 且用 ‘880’ 氨水 (2.5mL) 处理， 得到悬浮 液， 将所述悬浮液在室温搅拌 3 小时。混合物通过用氮气气流吹扫来浓缩， 将残余物在乙酸 乙酯、 水和盐水之间分配， 且分离各相。 水相用乙酸乙酯萃取， 合并的有机相用盐水洗涤， 干 燥 (MgSO4)， 且真空浓缩， 得到副标题化合物。收率为 0.476g。物质直接用于下一步。m/z 581(M+H)+(APCI+)。

    [2572] j)(R)-2-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-2-(8- 羟 基 -2- 氧 代 -1， 2- 二 氢 喹 啉 -5- 基 ) 乙基 ((R)-1-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯

    [2571] (R)-2-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-2-(8- 羟 基 -2- 氧 代 -1， 2- 二 氢 喹 啉 -5- 基 ) 乙基 ((R)-1-(3- 甲酰基苯基 ) 丙 -2- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 276， 步骤 i)(0.476g) 用 (5- 异丙基噻吩 -3- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲 酮 ( 实施例 275， 步骤 i)(0.296g)、 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (20mL)、 乙酸 (0.052mL) 和三乙酰 氧基硼氢化钠 (0.294g) 处理， 且将混合物在室温搅拌过夜。将溶液倒入饱和碳酸氢钠溶液 和水的混合物中， 且用乙醚萃取 3 次。合并的萃取物用水和盐水洗涤， 干燥 (MgSO4)， 且真空 浓缩， 然后通过快速硅胶色谱 ( 用 1 ∶ 5 ∶ 94NEt3 ∶ MeOH ∶ DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题 化合物。收率为 0.471g。m/z 874(M+H)+(APCI+)。

    [2575] k)8- 羟基 -5-((R)-1- 羟基 -2-((R)-1-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基氨基 ) 乙基 ) 喹啉 -2(1H)- 酮 二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2574] 将 (R)-2-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-2-(8- 羟 基 -2- 氧 代 -1， 2- 二 氢 喹 啉 -5- 基 ) 乙基 ((R)-1-(3-((4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯基 ) 丙 -2- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 实施例 276， 步骤 j) (0.465g) 的甲酸 (25mL) 溶液在室温搅拌 4 小时， 然后用甲苯稀释， 且真空浓缩。将残余物 溶解在水和乙腈 (11mL) 的混合物中， 过滤， 且经制备性 HPLC(Sunfire， 梯度为 5-50％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。真空浓缩含有产物的馏分， 且与乙腈共蒸发 3 次， 得到无色残余 物。残余物用乙醚研磨， 得到固体， 过滤收集所述固体， 用乙醚洗涤， 且在室温真空干燥， 得 1 到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.234g。m/z 659(M+H)+(APCI+)。 H NMR(400MHz，

    [2577] DMSO， 90℃ )δ8.20-8.13(m， 1H)， 7.48(d， J ＝ 1.0Hz， 1H)， 7.46-7.31(m， 4H)， 7.20-7.13(m， 1H)， 7.00(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.90(s， 1H)， 6.56(d， J ＝ 9.7Hz， 1H)， 5.37(t， J ＝ 6.4Hz， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.70-3.62(m， 2H)， 3.62-3.50(m， 3H)， 3.49-3.36(m， 2H)， 3.30-2.98(m， 8H)， 2.81-2.71(m， 1H)， 2.12-1.93(m， 2H)， 1.81-1.60(m， 2H)， 1.28(d， J ＝ 6.7Hz， 6H)， 1.20-1.13(m， 3H)。6 个可交换的质子没有观察。

    [2578] 实施例 277

    [2579] (R)-N- 环 己 基 -N-(2-(2- 羟 基 -2-(4- 羟 基 -2- 氧 代 -2， 3- 二 氢 苯 并 [d] 噻 唑 -7- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 )-3-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙氧基 ) 丙酰胺二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2580] a)3-(3-((4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙氧基 ) 丙酸叔丁酯

    [2581] 将 Triton-B(0.094mL) 加至 (9-(3-(2- 羟基乙基 ) 苄基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 甲基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 6， 步骤 b)(1.72g) 的甲苯 (30mL) 溶液中。真空浓缩混合物， 且冷却至 0℃。历时 1 分钟加入丙烯酸叔丁酯 (0.671mL)， 且将 混合物在室温搅拌 20 小时。反应混合物用 DCM(50mL) 稀释， 有机层用饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 和盐水 (50mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物。物质直接用 于下一步。

    [2584] b)3-(3-((4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙氧基 ) 丙酸

    [2583] 将 3-(3-((4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙氧基 ) 丙酸叔丁酯 ( 实施例 277， 步骤 a) 溶解在 DCM(10mL) 中， 且加入 TFA(2mL)。 将所得混合物搅拌 2h， 然后蒸发。 残余物与甲苯共沸， 且重新溶解在 MeCN(10mL) 中。将其加载至 SCX 柱 (50g， Varian)( 用 MeCN 预润湿 )。柱用 MeCN(100mL) 洗涤， 且用 880 氨水 /MeCN(1 ∶ 4， 100mL) 洗脱。蒸发洗脱剂， 得到副标题化合物。物质直接用于下一步。

    [2587] c)N- 环己基 -N-(2， 2- 二甲氧基乙基 )-3-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙氧基 ) 丙酰胺

    [2586] 将 3-(3-((4-(2- 甲 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙氧基 ) 丙酸 ( 实施例 277， 步骤 b) 溶解在 DMF(10mL) 中， 且加入 N-(2， 2- 二甲氧基乙基 ) 环己胺 (WO 2008075025)(0.93g)、 三乙胺 (2.88mL) 和 T3P(3.95mL)。将 反应混合物搅拌过夜， 且在水 (100mL) 和乙酸乙酯 (100mL) 之间分配。分离各层， 且水层用 乙酸乙酯 (2×100mL) 萃取。 合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液 (100mL) 和盐水 (100mL) 洗 涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。残余物通过快速硅胶柱色谱 ( 用 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 乙酸 乙酯∶异己烷∶三乙胺至 95 ∶ 5 乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 1 其为无色油状物。收率为 0.9g。 H NMR(400MHz， DMSO， 90℃ )δ7.85(s， 1H)， 7.26-7.05(m， 4H)， 4.46-4.37(m， 1H)， 3.68-3.55(m， 11H)， 3.43(s， 2H)， 3.33-3.22(m， 8H)， 2.77(t， J ＝ 6.9Hz， 2H)， 2.68(s， 3H)， 2.56(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 2.38-2.32(m， 4H)， 1.78-1.65(m， 4H)， 1.63-1.42(m， 6H)， 1.33-1.19(m， 2H)， 1.15-1.00(m， 2H)。

    [2589] d)N- 环己基 -3-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙氧基 )-N-(2- 氧代乙基 ) 丙酰胺将甲苯磺酸 (1384mg) 加至 N- 环己基 -N-(2， 2- 二甲氧基乙基 )-3-(3-((4-(2- 甲 基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙氧基 ) 丙 酰胺 ( 实施例 277， 步骤 c)(683mg) 的 DCM(10mL) 溶液中， 且将所得混合物在环境温度搅拌 4h。小心加入碳酸氢钠溶液 ( 饱和的， 10mL)， 且对混合物进行搅拌直到不再冒泡 (10min)。 反应混合物用 DCM(50mL) 稀释， 且分离出水层。 有机层用饱和碳酸氢钠溶液 (2×20mL) 和盐 水 (20mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到副标题化合物。m/z 611(M+H)+(APCI+)。

    [2593] e)(R)-N- 环己基 -N-(2-(2- 羟基 -2-(4- 羟基 -2- 氧代 -2， 3- 二氢苯并 [d] 噻 9- 二氮杂 唑 -7- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 )-3-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙氧基 ) 丙酰胺二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2592] 将 N- 环己基 -3-(3-((4-(2- 甲基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 苯乙氧基 )-N-(2- 氧代乙基 ) 丙酰胺 ( 实施例 277， 步骤 d)(0.122g) 的甲醇 (3mL) 溶液加至 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 HCl(WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.079g) 和乙酸 (0.011mL) 的混合物中。将所得混 合物搅拌 5min， 然后冷却至 0℃。 然后加入氰基硼氢化钠 (0.019g)， 将混合物温热至环境温 度， 且搅拌 2h。蒸发溶剂， 且残余物通过快速硅胶柱色谱 ( 用 95 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1 DCM ∶ MeOH ∶ 880 氨水洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 蒸发， 且通过 HPLC(Sunfire， 梯 度为 5-40％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 蒸发， 且用乙醚研磨， 得 1 到标题化合物， 其为白色固体。 收率为 0.085g。 m/z 821(M+H)+( 多模式 +)。 HNMR(400MHz， DMSO， 90 ℃ )δ11.26(s， 1H)， 7.90(s， 1H)， 7.41-7.28(m， 4H)， 6.93(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 6.77(d， J ＝ 8.2Hz， 1H)， 4.89(dd， J ＝ 8.7， 4.1Hz， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.74-3.43(m， 13H)， 3.29-2.98(m， 8H)， 2.83(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 2.71-2.56(m， 5H)， 1.98-1.01(m， 14H)。5 个 可 交换的质子没有观察。

    [2595] 实施例 278

    [2597] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(4-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2598] a) 叔丁基 (2-(5- 氯噻吩 -2- 基 ) 乙氧基 ) 二甲基甲硅烷将 N- 氯琥珀酰亚胺 (0.83g) 逐份加至叔丁基二甲基 (2-( 噻吩 -2- 基 ) 乙氧基 ) 甲硅烷 (1.5g)( 实施例 4 步骤 a) 的氯仿 (50mL) 溶液中， 且加热至回流且保持 3 天。黄色 溶液用 DCM(100mL) 稀释， 用饱和碳酸氢钠溶液 (2×100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠 干燥， 过滤， 且真空蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用异己烷洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏 分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 1g。1H NMR(300MHz， CDCl3) δ6.69(d， J ＝ 3.5Hz， 1H)， 6.57-6.54(m， 1H)， 3.75(t， J ＝ 6.5Hz， 2H)， 2.89(t， J ＝ 6.4Hz， 2H)， 0.87(s， 9H)， 0.01(s， 6H)。

    [2602] b)5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氯噻吩 -3- 甲醛

    [2601] 在 -78 ℃ 历 时 5min 将 叔 丁 基 (2-(5- 氯 噻 吩 -2- 基 ) 乙 氧 基 ) 二 甲 基 甲 硅 烷 (0.8g)( 实施例 278， 步骤 a) 滴加至搅拌的丁基锂 ( 浓度为 2.5M 的己烷溶液， 1.7mL) 和 2， 2， 6， 6- 四甲基哌啶 (0.73mL) 的 THF(25mL) 溶液中。将所得混合物搅拌 2 小时， 且加 入 DMF(0.67mL)。将混合物再搅拌 1 小时， 且温热至 RT。将反应混合物小心倒入 HCl 溶液 (0.5M， 200mL) 中， 且用乙酸乙酯 (3×100mL) 萃取。合并的有机溶液用水 (2×100mL) 和盐 水 (100mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且真空蒸发。所得油状物经硅胶色谱 ( 用异己烷至 5％乙醚 / 异己烷梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 1 其为澄清油状物。收率为 0.8g。 H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.98(s， 1H)， 7.06-7.04(m， 1H)，

    [2604] 3.79(t， J ＝ 6.0Hz， 2H)， 2.95-2.85(m， 2H)， 0.90(s， 9H)， 0.05(s， 6H)。

    [2605] c)5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -3- 甲醛

    [2606] 将 5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 )-2- 氯噻吩 -3- 甲醛 (0.8g)( 实 施例 278， 步骤 b) 在乙醇 (50mL) 和三乙胺 (0.91mL) 的混合物 ( 含有 10 ％钯 / 碳催化剂 (0.28g)) 中的溶液在压力为 4 巴的氢气下剧烈搅拌 18 小时。混合物通过硅藻土来过滤， 且滤垫用乙醇 (50mL) 洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液， 且与甲苯 (20mL) 共沸， 得到黄色油 状物。将油状物溶解在 DCM(100mL) 中， 加入二氧化锰 (2.3g)， 且将所得悬浮液回流过夜。 混合物通过硅藻土来过滤， 且滤垫用 DCM(50mL) 洗涤。真空蒸发合并的滤液和洗涤液， 得 1 到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 0.6g。 H NMR(300MHz， CDCl3)δ9.80(s， 1H)， 7.93-7.90(m， 1H)， 3.80(t， J ＝ 6.2Hz， 2H)， 2.99(t， J ＝ 5.9Hz， 2H)， 0.88(s， 9H)， 0.01(s， 6H)+1H 由于溶剂峰而模糊。

    [2608] d)(9-((5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -3- 基 ) 甲基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2607] 将 5-(2-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -3- 甲醛 (0.6g)( 实施例 278， 步骤 c) 加至 (2- 异丙基噻唑 -4- 基 )(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 (0.94g)( 实施例 22， 步骤 b) 在 N- 甲基吡咯烷 -2- 酮 (5mL) 和乙酸 (0.13mL) 的混合 物中的溶液中， 且搅拌 30min。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠 (0.71g)， 且将混合物搅拌过 夜。 将反应混合物倒入水 (100mL) 中， 使用饱和碳酸氢钠溶液将 pH 调整至 8， 且所得水溶液 用乙酸乙酯 (3×100mL) 萃取。合并的有机溶液用水 (3×100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 用 硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。残余物经硅胶色谱 ( 用 77.5 ∶ 17.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶ 三乙胺至 47.5 ∶ 47.5 ∶ 5 异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的 馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为澄清油状物。收率为 0.8g。564(M+H)+(APCI)。 1 HNMR(400MHz， D6-DMSO， 90℃ )δ7.91(s， 1H)， 6.97(s， 1H)， 6.77(s， 1H)， 3.79(t， J ＝ 6.3Hz， 2H)， 3.69-3.55(m， 4H)， 3.41-3.27(m， 3H)， 2.92(td， J ＝ 6.3， 0.8Hz， 2H)， 2.42-2.23(m，

    [2610] 6H)， 1.75-1.64(m， 2H)， 1.59-1.47(m， 2H)， 1.37(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)， 0.89(s， 9H)， 0(s， 6H)。

    [2611] e)(9-((5-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -3- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2612] 将四丁基氟化铵 ( 浓度为 1M 的四氢呋喃溶液， 2.1mL) 加至 (9-((5-(2-( 叔丁基 二甲基甲硅烷基氧基 ) 乙基 ) 噻吩 -3- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 278， 步骤 d)(0.80g) 的四氢呋喃 (10mL) 溶液中。2h 后， 真空蒸发溶液， 且将残余物在饱和碳酸氢钠溶液 (50mL) 和乙酸乙酯 (50mL) 之间分配。分离各层， 且水相用乙酸乙酯 (2×50mL) 萃取。合并的有机溶液用盐水 (50mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。 残余物经硅胶色谱 ( 用 20 ∶ 1 乙酸乙酯∶三乙胺洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发， 得到副标题化合物， 其为胶状物。收率为 0.61g。 1 D6-DMSO， 90 ℃ )δ7.90(s， 1H)， 6.94(s， 1H)， 6.74(s， 450(M+H)+(APCI)。 H NMR(400MHz， 1H)， 4.41(t， J ＝ 5.1Hz， 1H)， 3.72-3.55(m， 4H)， 3.41-3.24(m， 3H)， 3.00(s， 2H)， 2.88(t， J ＝ 6.7Hz， 2H)， 2.43-2.26(m， 6H)， 1.75-1.30(m， 10H)。

    [2614] f)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(2-(4-((4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 甲基 ) 噻吩 -2- 基 ) 乙基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮二 ( 三氟乙酸盐 )

    [2613] (9-((5-(2- 羟基乙基 ) 噻吩 -3- 基 ) 甲基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 (0.35g)( 实施例 278， 步骤 e) 的二氯甲烷 (10mL) 溶液用三氟乙酸 (0.06mL) 处理， 接着用戴斯 - 马丁高碘剂 (0.56g) 处理， 且将所得混合物 在 RT 搅拌 1 小时。 反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液 (10mL)、 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL) 和 乙酸乙酯 (10mL) 处理， 且剧烈搅拌 5 分钟。混合物用乙酸乙酯 (2×30mL) 萃取。合并的有 机溶液用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 用乙酸 (0.09mL) 处理， 且减压蒸发

    [2616] 溶剂。将残余物溶解在甲醇 (5mL) 中， 然后加入 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯 并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.15g)， 且将混合物搅拌 5min， 然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠 (0.07g)， 将混合物温热至 RT， 且搅拌过 夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱 ( 用 94.5 ∶ 5 ∶ 0.5 至 89 ∶ 10 ∶ 1DCM ∶甲醇∶ ‘880’ 氨水梯度洗脱 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且真空蒸发。经制备性 HPLC(SunfireTM， 梯 度为 10-30％乙腈 /0.2％ TFA 水溶液 ) 来进一步纯化。合并含有产物的馏分， 真空蒸发， 与乙腈共沸， 且残余物用乙醚研磨， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.10g。m/ 1 z 658(M+H)+( 多 模 式 )。 H NMR(500MHz， D6-DMSO)δ11.68(s， 1H)， 10.42-10.01(m， 2H)， 9.06(s， 1H)， 8.86(s， 1H)， 8.04(s， 1H)， 7.59(s， 1H)， 7.03(s， 1H)， 6.92(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)， 6.79(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 6.52(s， 1H)， 4.94-4.86(m， 1H)， 4.42-4.23(m， 2H)， 3.82-3.48(m， 6H)， 3.34-2.91(m， 11H)， 2.14-2.02(m， 2H)， 1.83-1.59(m， 2H)， 1.33(d， J ＝ 6.8Hz， 6H)。

    [2617] 实施例 279

    [2618] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-3， 3- 二甲基壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2619] a)8-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2， 2- 二甲基辛酸乙酯在 0 ℃至 5 ℃历时 15 分钟将正丁基锂 (32.8mL) 加至二异丙基胺 ( 浓度为 1M 的 甲苯溶液， 11.64mL) 的 THF(60mL) 溶液中， 且将该混合物搅拌 30 分钟。将反应混合物冷却 至 -78℃， 然后历时 15 分钟滴加异丁酸乙酯 (10mL)。将混合物在 -78℃搅拌 1 小时， 然后 滴加 (6- 溴己基氧基 )- 叔丁基二甲基甲硅烷 (23mL)， 且将反应混合物在 -78℃再搅拌 60 分钟。移开冷却浴， 将混合物在室温搅拌过夜， 然后倒在饱和氯化铵水溶液 (300mL) 上， 且 用乙酸乙酯 (2×300mL) 萃取。合并的有机层用水 (250mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸 发， 得到粗产物。经硅胶色谱 ( 用 0-40％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合 1 物， 其为浅琥珀色液体。收率为 20g。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ4.11(q， J ＝ 7.1Hz， 2H) ； 3.59(t， J ＝ 6.6Hz， 2H) ； 1.54-1.45(m， 4H) ； 1.35-1.18(m， 9H) ； 1.15(s， 6H) ； 0.89(s， 9H) ； 0.05-0.03(m， 6H)。

    [2623] b)8-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2， 2- 二甲基辛 -1- 醇

    [2622] 在氮气下将 8-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2， 2- 二甲基辛酸乙酯 ( 实施例 279， 步骤 a)(20g) 的无水乙醚 (300mL) 溶液在冰浴中冷却至 0℃， 然后滴加二异丁基氢化 铝 ( 浓度为 1M 的甲苯溶液， 133mL)。将反应混合物在 0℃搅拌 1 小时， 然后用饱和酒石酸 钾钠溶液 ( 罗谢尔盐 (Rochelle’ s salt)， 400mL) 淬灭， 且搅拌过夜。混合物用乙酸乙酯 (3×300mL) 萃取， 然后合并的有机层用盐水洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发。经硅胶色 谱 ( 用 0-20％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色液体。收率为 1 10.11g。 HNMR(400MHz， CDCl3) ： δ3.60(t， J ＝ 6.6Hz， 2H) ； 3.31(s， 2H) ； 1.56-1.46(m， 2H) ； 1.38-1.18(m， 8H) ； 0.89(s， 9H) ； 0.86(s， 6H) ； 0.06-0.03(m， 6H)+1 个可交换的质子没有观 察。

    [2626] c)(E)- 叔丁基 (9- 甲氧基 -7， 7- 二甲基壬 -8- 烯基氧基 ) 二甲基甲硅烷和 (Z)- 叔 丁基 (9- 甲氧基 -7， 7- 二甲基壬 -8- 烯基氧基 ) 二甲基甲硅烷的混合物

    [2625] 在 -70 ℃将草酰氯 (5.9mL) 加至二甲基亚砜 (4.98mL) 的无水二氯甲烷 (60mL) 溶液中， 且将混合物搅拌 1 小时。滴加 8-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-2， 2- 二甲基 辛 -1- 醇 ( 实施例 279， 步骤 b)(10.11g) 的二氯甲烷 (20mL) 溶液， 且将混合物搅拌 1 小 时。然后加入三乙胺 (19.4mL)， 且继续搅拌 1 小时。移开冷却浴， 且将混合物温热至室温， 此时加入 DCM(15mL)。滴加 1N HCl 以溶解存在于反应混合物中的盐， 且分离各层。水层用 DCM(2×250mL) 萃取， 然后合并的有机层用饱和碳酸钠水溶液 (250mL) 洗涤， 用硫酸镁干 燥， 过滤， 且真空浓缩， 得到橙色液体。残余物通过短的硅胶塞 ( 使用乙醚作为洗脱剂 ) 来 过滤， 得到 8-( 叔丁基 - 二甲基 - 甲硅烷基氧基 )-2， 2- 二甲基 - 辛醛， 其为黄色液体， 所述 液体无需进一步纯化即使用。

    [2629] 将叔丁醇钾 (15.3g) 和 ( 甲氧基甲基 ) 三苯基氯化鏻 (48g) 的无水 THF(350mL) 溶 液冷却至 0℃， 且搅拌 30 分钟。 将 8-( 叔丁基 - 二甲基 - 甲硅烷基氧基 )-2， 2- 二甲基 - 辛醛 (10.03g) 溶解在无水 THF(150mL) 中， 且加至反应混合物中， 然后将所述反应混合物在 0℃ 搅拌 1 小时。将混合物温热至室温， 且搅拌 30 分钟， 然后加入饱和碳酸氢钠溶液 (300mL)， 接着用乙醚 (3×300mL) 萃取。合并的有机层用盐水 (300mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且 真空蒸发， 得到粗产物。

    [2630] 加入环己烷 (300mL)， 且将混合物搅拌 5 分钟。滗出溶剂， 且重复该操作。蒸发 环己烷层， 得到其中存在一些白色固体的黄色液体。过滤除去固体， 然后滤液经硅胶色谱 ( 用 0-40％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化。进一步纯化如下进行 ： 将物质 (3.2g) 溶解在 丙酮 (50mL) 中， 用碘化钠 (3.05g) 处理， 接着用 Merrifield 树脂 (6.4g) 处理， 且将混合 物搅拌过周末。过滤树脂， 且用丙酮 (100mL)、 DCM(50mL) 和甲醇 (50mL) 洗涤。蒸发滤液， 吸收到 DCM(200mL) 中， 用水 (2×60mL) 洗涤， 有机层用硫酸镁干燥， 且减压蒸发， 得到副标 1 题产物， 其为浅黄色液体， 且为顺式 / 反式异构体的混合物。收率为 2.6g。 HNMR(400MHz，

    [2628] CDCl3) ： δ6.16(d， J ＝ 12.9Hz， 0.6H) ； 5.69(d， J ＝ 7.0Hz， 0.4H) ； 4.73(d， J ＝ 12.9Hz， 0.6H) ； 4.09(d， J ＝ 7.0Hz， 0.4H) ； 3.61-3.56(m， 2H) ； 3.53-3.47(m， 3H) ； 1.56-1.45(m， 2H) ； 1.38-1.16(m ， 8H) ； 1.05(d ， J ＝ 10.1Hz ， 3H) ； 0.97(s ， 3H) ； 0.92-0.86(m ， 9H) ； 0.06-0.02(m， 6H)。

    [2631] d)(E)-9- 甲氧基 -7， 7- 二甲基壬 -8- 烯 -1- 醇和 (Z)-9- 甲氧基 -7， 7- 二甲基 壬 -8- 烯 -1- 醇的混合物

    [2632] 将 (E)- 叔丁基 (9- 甲氧基 -7， 7- 二甲基壬 -8- 烯基氧基 ) 二甲基甲硅烷 ( 实 施例 279， 步骤 c)(2.57g) 溶解在四氢呋喃 (60mL) 中， 加入四丁基氟化铵 (16.4mL)， 且将 反应混合物在室温搅拌 4 小时。反应混合物用水 (50mL) 淬灭， 且用乙醚 (3×100mL) 萃 取。有机层用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空浓缩， 得到副标题化合物， 其为浅黄色液体， 且为顺 式 / 反式异构体的混合物， 所述副标题化合物无需进一步纯化即使用。收率为 1.2g。1H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ6.16(d， J ＝ 12.9Hz， 0.5H) ； 5.70(d， J ＝ 7.0Hz， 0.5H) ； 4.74(d， J ＝ 12.9Hz， 0.5H) ； 4.11(d， J ＝ 7.0Hz， 0.5H) ； 3.68-3.61(m， 2H) ； 3.52(s， 1.5H) ； 3.49(s， 1.07(s， 3H) ； 0.98(s， 3H)+1 个可交换的质子 1.5H) ； 1.62-1.51(m， 2H) ； 1.40-1.21(m， 8H) ； 没有观察。

    [2634] e) 甲磺酸 7， 7- 二甲基 -9- 氧代壬基酯

    [2633] 将 (E)-9- 甲氧基 -7， 7- 二甲基壬 -8- 烯 -1- 醇和 (Z)-9- 甲氧基 -7， 7- 二甲基 壬 -8- 烯 -1- 醇的混合物 ( 实施例 279， 步骤 d)(1.6g) 溶解在二氯甲烷 (15mL) 中， 且加 入三乙胺 (1.33mL)， 然后在氩气下将混合物在冰浴中冷却至 0℃。历时 5 分钟滴加甲磺酰 氯 (0.68mL)， 且将反应混合物在 0 ℃搅拌 15 分钟， 然后在室温搅拌 1 小时。反应混合物 用盐水 (2×30mL) 洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且真空蒸发， 得到粗产物。经硅胶色谱 ( 用 0-100％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。 收率为 1.2g。 1 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ9.85-9.81(m， 1H) ； 4.25-4.18(m， 2H) ； 3.00(s， 3H) ； 2.25(m， 2H) ； 1.80-1.69(m， 2H) ； 1.47-1.37(m， 2H)， 1.31(s， 6H) ； 1.05-1.01(m， 6H)。

    [2637] f)9-(4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 )-3， 3- 二甲基壬醛

    [2636] (9-(7- 羟基 -6， 6- 二甲基庚基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2640] 将 (2- 异丙基 - 噻唑 -4- 基 )-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 - 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )- 甲

    [2639] 酮 (0.262g)( 如实施例 102 步骤 c) 中那样由三氟乙酸盐来制备 ) 溶解在乙腈 (4mL) 中， 且加入三乙胺 (0.22mL)。然后将该溶液加至甲磺酸 7， 7- 二甲基 -9- 氧代壬基酯 ( 实施例 279， 步骤 e)(0.291g) 的乙腈 (4mL) 溶液中， 且将所得混合物在 80℃加热过夜。 真空除去溶 剂。经硅胶色谱 ( 用 0-10％甲醇 /DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。 1 收率为 0.361g。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ9.80-9.77(m， 1H) ； 7.81(s， 1H) ； 4.12-3.80(m， 2H) ； 3.73(s， 3H) ； 3.68-3.58(m， 1H) ； 3.34-3.22(m， 1H) ； 2.90-2.33(m， 6H) ； 2.21(d， J ＝ 3.17Hz， 2H) ； 1.99-1.65(m， 6H) ； 1.63-1.47(m， 2H) ； 1.37(d， J ＝ 6.9Hz， 6H) ； 1.31-1.20(m， 6H) ； 1.00(s， 6H)。

    [2641] g)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-3， 3- 二甲基壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 甲酸盐

    [2642] 将乙酸 (0.035mL) 加至搅拌的 9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 )-3， 3- 二 甲 基 壬 醛 ( 实 施 例 279， 步 骤 f)(195mg) 和 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(161mg) 的甲醇 (10mL) 溶液中， 1 分钟后， 加入氰基硼氢化钠 (51mg)， 且 将反应混合物在室温搅拌 1.5h。浓缩混合物， 然后在盐水和饱和碳酸氢钠溶液的混合物 (10 ∶ 1， 12mL) 和 THF(12mL) 之间分配。分离各层， 且有机相用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。 所得物质经制备性 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯 化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.038g。 1 m/z 688(M+H)+。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 80℃ ) ： δ8.12(s， 1.6H) ； 7.89(s， 1H) ； 6.88(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 6.70(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 4.59(t， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 3.64(d， J ＝ 9.5Hz， 6H) ； 2.75(d， J ＝ 6.7Hz， 2H) ； 2.61-2.53(m， 2H) ； 2.40-2.21(m， 6H) ； 1.72-1.63(m， 2H) ； 1.58-1.47(m， 2H) ； 1.43-1.30(m， 10H) ； 1.29-1.09(m， 8H) ； 0.82(s， 6H)+1 个信号由于溶剂 而模糊且 4 个可交换的质子没有观察。

    [2644] 实施例 280

    [2645] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(10-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 癸 -2- 基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2643] a)10- 溴癸 -2- 醇向 9- 溴 - 壬 醇 (1.7g) 的 DCM(100mL) 溶 液 中 加 入 二 异 丙 基 乙 基 胺 (3.91mL)， 然后加入 DMSO(1.62mL)， 且将混合物冷却至 -14℃， 然后逐份加入三氧化硫 - 吡啶络合物 (3.64g)。将混合物搅拌 30 分钟， 然后静置过夜。加入水， 且分离各相。有机层用 1M 硫酸 氢钠 (×3)、 饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。分离有机相， 且使用疏水釉料 (hydrophobic frit) 来干燥， 然后蒸发， 得到醛， 其为黄色液体 (2.32g)。

    [2650] 在 0℃向醛 (750mg) 的无水乙醚 (20mL) 溶液中滴加甲基锂 ( 浓度为 1.6M 的乙醚 溶液， 2.1mL)。45 分钟后， 将混合物在搅拌下倒在 2M 硫酸上， 且分离各相。有机层用饱和 碳酸氢钠水溶液洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。经硅胶色谱 ( 用 0-30％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到标题化合物， 其为稻草色液体。收率为 0.286g。1H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ3.83-3.75(m， 1H) ； 3.41(t， J ＝ 6.9Hz， 2H) ； 1.90-1.80(m， 2H) ； 1.50-1.37(m， 6H) ； 1.36-1.26(s， 6H) ； 1.19(d， J ＝ 6.2Hz， 3H)+1 个可交换的质子没有观察。

    [2651] b)(9-(9- 羟基癸基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻 唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2649] 将 (2- 异丙基 - 噻唑 -4- 基 )-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 - 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )- 甲 酮三氟乙酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(500mg) 加载至经甲醇润湿的 SCX-2 柱， 用甲醇洗涤， 然 后使用 2N 氨 / 甲醇来洗脱， 且蒸发， 得到游离碱 (276mg)。将该物质与 10- 溴癸 -2- 醇 ( 实 施例 280， 步骤 a， 280mg) 和三乙胺 (0.247mL) 的乙腈 (10mL) 溶液混合， 且在 60℃加热 18h。 蒸发除去溶剂， 且粗物质经硅胶色谱 ( 用 0-20％甲醇 /DCM 洗脱 ) 纯化， 得到标题化合物。 1 收率为 0.298g。 HNMR(400MHz， D6-DMSO) ： δ8.99(s， 1H) ； 8.00(s， 1H) ； 4.23(d， J ＝ 4.7Hz， 1H) ； 3.78-3.44(m， 8H) ； 3.11-2.77(m， 4H) ； 2.08-1.92(m， 2H) ； 1.76-1.48(m， 4H) ； 1.30(d， J ＝ 6.9Hz， 7H) ； 1.26-1.16(m， 12H) ； 0.98(d， J ＝ 6.1Hz， 3H)。

    [2653] c)10-(4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 癸 -2- 酮在 0 ℃ 和 氮 气 下 向 (9-(9- 羟 基 癸 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 280， 步骤 b)(287mg) 的 DCM(10mL) 溶液中 加入三氟乙酸 (0.048mL)。 将混合物搅拌 5 分钟， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (392mg)。 将反 应混合物在室温搅拌 5 小时， 然后在 0℃再加入一定量戴斯 - 马丁高碘剂 (392mg)， 然后在 室温搅拌 1.75h。加入饱和硫代硫酸钠溶液 (20mL)、 饱和碳酸氢钠水溶液 (20mL) 和乙酸乙 酯， 且对混合物进行搅拌， 然后分离各相。水层用乙酸乙酯 (×2) 萃取， 且合并的有机层用 饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。加入乙酸 (0.053mL)， 然后有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 1 得到标题化合物， 其为黄色胶状物。 收率为 0.338g。H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ7.85(s， 1H) ； 4.07-3.72(m， 5H) ； 3.36-3.21(m， 2H) ； 2.96-2.82(m， 3H) ； 2.47-2.37(m， 4H) ； 2.12(s， 3H) ； 2.11-2.02(m， 2H) ； 1.85-1.75(m， 2H) ； 1.62-1.49(m， 3H) ； 1.46-1.36(m， 7H) ； 1.35-1.20(m， 9H)。

    [2657] d)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(10-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 癸 -2- 基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2656] 在室温和氮气下将乙酸 (0.053mL) 加至 10-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 癸 -2- 酮 ( 实 施 例 280， 步 骤 c)(335mg) 和 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134，

    [2659] 实施例 1， 步骤 d)(243mg) 在无水甲醇 ( 含有分子筛 ) 中的混合物中， 且搅拌 5 分钟。将混合物冷却至 0℃， 且加入三乙酰氧基硼氢化钠 (131mg)。对反应混合物进行搅拌， 且温热 至室温过夜。过滤混合物， 且蒸发。经制备性 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 10-40％ 乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为 1 白色固体。收率为 0.032g。m/z 674(M+H)+。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 80℃ ) ： δ8.15(s， 2H) ； 7.88(s， 1H) ； 6.87(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 6.69(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 4.57-4.50(m， 1H) ；3.71-3.58(m， 8H) ； 3.36-3.25(m， 2H) ； 2.79-2.59(m， 3H) ； 2.40-2.31(m， 2H) ； 2.32-2.22(m， 4H) ； 1.73-1.63(m ， 2H) ； 1.59-1.48(m ， 2H) ； 1.44-1.32(m ， 8H) ； 1.31-1.16(s ， 10H) ； 0.99-0.93(m， 2H)+4 个可交换的质子没有观察。

    [2660] 实施例 281

    [2661] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(4-(3-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 丙基硫基 ) 丁基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 甲酸盐

    [2662] a)4-(2-(1， 3- 二氧杂环戊烷 -2- 基 ) 乙基硫基 ) 丁 -1- 醇在氩气下将 4- 巯基丁醇 (4.936g) 的无水乙腈溶液冷却至 0℃， 且逐份加入氢化 钠 ( 浓度为 60％的矿物油溶液， 2.044g)。将混合物在 0℃搅拌 1 小时， 然后加入 2-(2- 溴 乙基 )-1， 3- 二氧杂环戊烷 (9.26g)， 将所得灰色悬浮液温热至室温， 且搅拌过夜。反应混 合物通过加入饱和碳酸氢钠水溶液 (150mL) 来淬灭， 然后用乙酸乙酯 (3×150mL) 萃取。合 并有机层， 用盐水 (150mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且干燥， 得到粗产物。经硅胶色谱 ( 用 0-50％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为黄色油状物。收率为 1 7.3g。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ4.98-4.93(m， 1H) ； 4.01-3.93(m， 2H) ； 3.89-3.83(m， 2H) ； 3.69-3.63(m， 2H) ； 2.65-2.58(m， 2H) ； 2.59-2.53(m， 2H) ； 1.98-1.91(m， 2H) ； 1.73-1.62(m， 4H)+1 个可交换的质子没有观察。

    [2666] b)(9-(3-(4- 羟基丁基硫基 ) 丙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2665] 将 4-(2-(1， 3- 二氧杂环戊烷 -2- 基 ) 乙基硫基 ) 丁 -1- 醇 ( 实施例 281， 步骤 a) (500mg) 溶解在 80％甲酸水溶液 (6mL) 中， 且将反应混合物在室温搅拌过周末。 混合物用水 (10mL) 稀释， 用乙醚 (3×10mL) 萃取， 然后有机层用盐水 (10mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤，

    [2668] 且蒸发， 得到 3-(4- 羟基 - 丁基硫基 )- 丙醛， 其为油状物。将其溶解在无水甲醇中， 且加入 (2- 异丙基 - 噻唑 -4- 基 )-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 - 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )- 甲酮三氟乙 酸盐 ( 实施例 22， 步骤 b)(606mg) 和 分子筛。 加入乙酸 (0.2mL)， 将混合物在氩气下搅拌 5 分钟， 然后冷却至 0℃， 且加入乙酰氧基硼氢化钠 (633mg)。移开冷却浴， 且将反应混合物 在室温搅拌过夜。过滤混合物， 然后直接加载至 SCX-2 柱， 且用甲醇洗涤， 然后产物用 2N 氨 / 甲醇洗脱。 经硅胶色谱 ( 用 10％甲醇 /DCM 洗脱 ) 来进一步纯化， 得到副标题化合物， 其为 1 浅绿色油状物。收率为 0.37g。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ7.85(s， 1H) ； 4.02-3.87(m， 2H) ； 3.80-3.73(m， 3H) ； 3.69-3.63(m， 3H) ； 3.39-3.23(m， 5H) ； 2.86-2.74(m， 2H) ； 2.67-2.59(m， 2H) ； 2.58-2.50(m， 5H) ； 1.96-1.81(m， 4H) ； 1.74-1.63(m， 4H) ； 1.41(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)。

    [2669] c)(R)-4- 羟 基 -7-(1- 羟 基 -2-(4-(3-(4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二 氮 杂 螺 [5.5] 十 一 碳 -9- 基 ) 丙 基 硫 基 ) 丁 基 氨 基 ) 乙 基 ) 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2670] 将 草 酰 氯 (0.068mL) 溶 解 在 无 水 DCM(2mL) 中， 且 将 溶 液 冷 却 至 -78 ℃。 滴 加 DMSO(0.12mL) 的 DCM(0.03mL) 溶液， 且对混合物进行搅拌。 15 分钟后， 滴加 (9-(3-(4- 羟基 丁基硫基 ) 丙基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 281， 步骤 b)(290mg) 的 DCM(1mL) 溶液， 且继续搅拌 15 分钟， 然后滴加三乙胺 (0.44mL)。移开冷却浴， 且将反应混合物温热至室温。1 小时后， 将反应混合物倒在饱和氯 化铵水溶液 (3mL) 上， 且加入 DCM(3mL)。分离各层， 且水相用 DCM(2×5mL) 萃取。合并有机 层， 用盐水 (5mL) 洗涤， 用硫酸钠干燥， 且蒸发， 得到粗醛。

    [2672] 将 所 述 醛 (195mg) 与 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(170mg) 一起在无水甲醇 (8mL)

    [2671] 中搅拌， 且加入分子筛和乙酸 (0.07mL)。搅拌 5 分钟后， 将反应混合物冷却至 0℃， 且加入三乙酰氧基硼氢化钠 (200mg)。移开冷却浴， 且将反应混合物在室温搅拌过周末。过 滤混合物， 且蒸发。经制备性 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸 水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收 1 率为 0.006g。m/z 664(M+H)+。 H NMR(400MHz， D4-MeOH) ： δ8.48(s， 1.8H) ； 7.88(s， 1H) ； 6.95(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 6.73(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 4.97-4.90(m， 1H) ； 3.89-3.56(m， 6H) ； 3.38-3.24(m， 1H) ； 3.13-3.04(m， 2H) ； 3.04-2.96(m， 2H) ； 2.97-2.61(m， 6H) ； 2.60-2.49(m， 4H) ； 2.04-1.91(m， 2H) ； 1.91-1.70(m， 5H) ； 1.70-1.57(m， 3H) ； 1.38(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)+4 个 可交换的质子没有观察。实施例 282

    [2674] 4- 羟 基 -7-((1R)-1- 羟 基 -2-(4-(3-(4-(2- 异 丙 基 噻 唑 -4- 基 羰 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 丙基亚磺酰基 ) 丁基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2675] 在 氩 气 下 将 三 氟 乙 酸 (0.06mL) 加 至 (9-(3-(4- 羟 基 丁 基 硫 基 ) 丙 基 )-1- 氧 杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 281， 步 骤 b)(360mg) 的无水 DCM(14mL) 溶液中。将溶液冷却至 0 ℃， 且搅拌 5 分钟， 然后加入戴 斯 - 马丁高碘剂 (502mg)。将反应混合物在室温搅拌 1 小时， 然后通过加入饱和硫代硫 酸钠 (14mL) 和饱和碳酸氢钠水溶液 (14mL) 来淬灭。加入乙酸乙酯 (30mL)， 且将混合 物搅拌 5 分钟， 然后分离各相。水层用乙酸乙酯 (2×30mL) 萃取。将乙酸 (0.053mL) 加 至合并的有机层中， 然后所述合并的有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发， 得到醛， 其为油 状物。将其与 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐

    [2676] 且加入 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(311mg) 一起溶解在无水甲醇 (15mL) 中，分子筛和乙酸 (0.07mL)。搅拌 5 分钟后， 将反应混合物冷却至 0℃， 加入三乙酰氧基硼氢化 钠 (200mg)， 且在室温继续搅拌过夜。过滤混合物， 且蒸发。经制备性 HPLC(Phenomenex 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干 Gemini ， 1 燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.018g。m/z 680(M+H)+。 H NMR(400MHz， D4-MeOH) ： δ8.40(s， 2H) ； 7.88(s， 1H) ； 6.96(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 6.73(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 4.98-4.92(m， 1H) ； 3.90-3.56(m， 6H) ； 3.36-3.24(m， 1H) ； 3.19-3.03(m， 4H) ； 3.04-2.67(m， 10H) ； 2.15-1.95(m， 4H) ； 1.93-1.56(m， 6H) ； 1.38(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)+4 个可交换的质子没 有观察。

    [2677] 实施例 283

    [2678] 4- 羟基 -7-((1R)-1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-2- 甲基壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2679] a)9- 溴 -2- 甲基壬 -1- 醇在 0℃和氩气下向二异丙基胺 (5.42mL) 的无水 THF(30mL) 溶液中缓慢加入 2.5M 正丁基锂 (15.5mL)， 保持温度低于 10℃。在 0℃， 将溶液搅拌 30 分钟， 然后冷却至 -78℃。 滴加丙酸乙酯 (4.01mL)， 且将溶液在 -78℃搅拌 1 小时。加入 1， 7- 二溴庚烷 (6.63mL)， 且 在 -78℃继续搅拌 1 小时， 然后移开冷却浴， 且将反应混合物在室温搅拌过夜。将饱和氯化 铵水溶液 (30mL) 加至反应混合物中， 接着加入乙酸乙酯 (30mL)。分离各层， 且水相用乙酸 乙酯 (2×30mL) 萃取。合并有机层， 用饱和碳酸氢钠水溶液 (50mL) 和盐水 (50mL) 洗涤， 用 硫酸钠干燥， 且蒸发。经硅胶色谱 ( 用 1-5％乙酸乙酯 / 石油醚 (40-60℃ ) 洗脱 ) 纯化， 得 到 9- 溴 -2- 甲基壬酸乙酯， 其无需进一步纯化即使用。

    [2683] 将该物质 (0.84g) 溶解在无水乙醚 (27mL) 中， 且在氩气下冷却至 0℃。 滴加二异丁 基氢化铝 ( 浓度为 1M 的甲苯溶液， 6.7mL)， 且将反应混合物在 0℃搅拌 1 小时 15 分钟。反 应混合物通过加入饱和酒石酸钾钠水溶液来淬灭， 且将所得混合物搅拌 15 分钟。加入乙酸 乙酯 (60mL) 和水 (20mL)， 且分离各相。水层用乙酸乙酯 (3×30mL) 萃取， 然后合并的有机 层用盐水洗涤， 用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。经硅胶色谱 ( 用 0 至 10％乙酸乙酯 / 环己烷 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。收率为 0.23g。1H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ3.51(dd， J ＝ 10.5， 5.8Hz， 1H) ； 3.46-3.38(m， 3H) ； 1.90-1.80(m， 2H) ； 1.66-1.55(m， 2H) ； 1.47-1.22(m， 9H) ； 0.92(d， J ＝ 6.7Hz， 3H)+1 个可交换的质子没有观察。

    [2684] b)(9-(9- 羟基 -8- 甲基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2682] 将 (2- 异丙基 - 噻唑 -4- 基 )-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 - 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )- 甲 酮二 ( 三氟乙酸盐 )( 实施例 22， 步骤 b)(500mg) 加载至经甲醇润湿的 SCX-2 柱， 用甲醇 洗涤， 然后使用 2N 氨 / 甲醇来洗脱， 且蒸发， 得到游离碱 (279mg)。将其与 9- 溴 -2- 甲 基 壬 -1- 醇 ( 实 施 例 283， 步 骤 a)(220mg) 一 起 溶 解 在 乙 腈 (10mL) 中， 且加入三乙胺 (0.223mL)。 将反应混合物加热至 60℃过夜， 然后浓缩。 经硅胶色谱 ( 用 0 至 10％甲醇 /DCM

    [2686] 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为浅褐色固体。收率为 0.38g。1H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ7.87(s， 1H) ； 4.06-3.90(m， 2H) ； 3.83-3.71(s， 4H) ； 3.52-3.37(m， 4H) ； 3.05-2.85(m， 4H) ； 2.48-2.32(m ， 2H) ； 2.15-2.05(m ， 2H) ； 1.97-1.84(m ， 2H) ； 1.66-1.50(m ， 4H) ； 1.48-1.39(m， 6H) ； 1.38-1.21(m， 8H) ； 0.91(d， J ＝ 6.7Hz， 3H)+1 个可交换的质子没有观察。

    [2687] c)(9-(9- 溴 -8- 甲基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异 丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2688] 将 (9-(9- 羟基 -8- 甲基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 283， 步骤 b)(100mg)、 四溴化碳 (143mg) 和咪唑 (30mg) 溶解在 DCM(5mL) 中。将溶液冷却至 0 ℃， 且滴加三苯基膦 (85mg) 的 DCM(1mL) 溶 液。将反应混合物在该温度搅拌 1 小时， 然后在室温搅拌 2 小时。再加入一定量四溴化碳 (150mg)， 将混合物冷却至 0℃， 且滴加三苯基膦 (114mg) 的 DCM(1mL) 溶液。在室温搅拌 1 小时， 然后加入水， 且分离各相。蒸发有机相， 且产物经硅胶色谱 ( 用 0-10％甲醇 /DCM 洗 CDCl3) ： 脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为橙色胶状物。收率为 0.088g。1H NMR(400MHz， δ7.87(s， 1H) ； 4.03-3.91(m， 2H) ； 3.81-3.70(m， 4H) ； 3.43-3.313(m， 4H) ； 3.06-2.86(m， 4H) ； 2.49-2.34(m ， 2H) ； 2.15-2.05(m ， 2H) ； 1.98-1.86(m ， 2H) ； 1.57-1.50(m ， 2H) ； 1.47-1.39(m， 6H) ； 1.37-1.19(m， 10H) ； 1.00(d， J ＝ 6.6Hz， 3H)。

    [2690] d)4- 羟基 -7-((1R)-1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-2- 甲基壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2689] 将 (R)-7-(2- 氨 基 -1- 羟 基 乙 基 )-4- 羟 基 苯 并 [d] 噻 唑 -2(3H)- 酮 盐 酸 盐 (WO2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(263mg) 溶解在甲醇 (10mL) 中， 加入甲醇钠 (54mg)， 且 将混合物搅拌 25 分钟。过滤收集固体， 用甲醇洗涤， 且风干， 得到游离碱 (150mg)。将一 些该物质 (61mg) 溶解在 DMF(3.5mL) 中， 且与 (9-(9- 溴 -8- 甲基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 283， 步骤 c)(71mg) 和二异丙基乙基胺 (0.023mL) 混合。将反应混合物加热至 50 ℃过夜， 然后冷却， 且在乙 酸乙酯 (10mL) 和水 (10mL) 之间分配。有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且浓缩。经制备性

    [2692] HPLC(PhenomenexGemini ， 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物 的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.002g。m/z 674(M+H)+。 1 H NMR(400MHz， D4-MeOH) ： δ8.51(s， 1H) ； 7.87(s， 1H) ； 6.92(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 6.70(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 3.85-3.55(s， 6H) ； 2.92-2.80(m， 2H) ； 2.76-2.34(m， 8H) ； 1.97-1.82(m， 2H) ； 1.77-1.44(m， 5H) ； 1.37(d， J ＝ 6.9Hz， 6H) ； 1.36-1.17(m， 9H) ； 1.17-1.04(m， 1H) ； 0.92(dd， J ＝ 6.6， 3.2Hz， 3H)+2 个信号由于溶剂而模糊且 4 个可交换的质子没有观察。

    [2693] 实施例 284

    [2694] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(7-(4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 庚基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2695] a)(9-(7- 羟基庚基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 异丙基噻 吩 -3- 基 ) 甲酮将 7- 溴 -1- 庚 醇 (380mg) 的 乙 腈 (3.9mL) 溶 液 加 至 (5- 异 丙 基 噻 吩 -3- 基 ) (1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 275， 步骤 i)(400mg) 和三乙 胺 (0.361mL) 的乙腈 (8.6mL) 溶液中。将所得混合物在 60℃搅拌 16 小时。真空除去溶剂， 将残余物吸收在 DCM(25mL) 中， 用盐水 (25mL) 和水 (20mL) 洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸发。经硅胶色谱 ( 用 0 至 10％甲醇 /DCM 洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为浅褐色 1 固体。收率为 0.305g。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ7.26(s， 1H) ； 6.84(s， 1H) ； 3.74-3.67(m， 4H) ； 3.63(t， J ＝ 6.4Hz， 2H) ； 3.57-3.48(m， 2H) ； 3.35-3.10(m， 2H) ； 2.99-2.70(m， 3H) ； 2.28-1.98(m， 4H) ； 1.92-1.74(m， 2H) ； 1.67-1.47(m， 4H) ； 1.41-1.34(m， 5H) ； 1.34(d， J ＝ 6.9Hz， 6H) ； 1.28-1.23(m， 1H)+1 个可交换的质子没有观察。

    [2699] b)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(7-(4-(5- 异丙基噻吩 -3- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 ) 庚基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲酸盐

    [2698] 将三氟乙酸 (0.054mL) 加至 (9-(7- 羟基庚基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )(5- 异丙基噻吩 -3- 基 ) 甲酮 ( 实施例 284， 步骤 a)(295mg) 的 DCM(7.5mL) 溶液中。将混合物搅拌 5 分钟， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (503mg)， 且继续搅拌 1 小时 50 分钟。反应混合物通过加入饱和硫代硫酸钠溶液 (4mL) 和饱和碳酸氢钠水溶液 (4mL) 来淬 灭。加入乙酸乙酯 (25mL)， 且将混合物剧烈搅拌 5 分钟， 然后分离各相。水层用乙酸乙酯 (5mL) 萃取。合并有机层， 用盐水 (5mL) 洗涤， 然后加入乙酸 (0.080mL)， 溶液用硫酸钠干 燥， 过滤， 且蒸发， 得到醛， 其为油状物 (504mg)。将其溶解在无水甲醇 (5mL) 中， 然后加入 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(202mg)， 且将混合物搅拌 5 分钟。将反应混合物冷却至 0℃， 加入氰基硼 氢化钠 (66mg)， 且在 0℃继续搅拌 2 小时， 然后在室温搅拌过夜。 真空浓缩混合物， 且在盐水 和饱和碳酸氢钠溶液的混合物 (10 ∶ 1， 6mL) 和 THF(6mL) 之间分配。分离各层， 有机相用 硫酸钠干燥， 过滤， 蒸发， 且残余物与乙腈共沸。经制备性 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度

    [2701] 为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。 合并含有产物的馏分， 且冷冻干燥， 得到标题化合 1 物， 其为白色固体。收率为 0.037g。m/z 631(M+H)+。 H NMR(400MHz， D4-MeOH) ： δ8.49(s， 2H) ； 7.45(s， 1H) ； 6.95(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 6.91(s， 1H) ； 6.73(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 4.93(dd， J ＝ 9.1， 4.5Hz， 1H) ； 3.79-3.47(m， 6H) ； 3.20-3.04(m， 3H) ； 3.01-2.94(m， 3H) ； 2.92-2.70(m， 4H) ； 2.08-1.97(m， 2H) ； 1.75-1.56(m， 6H) ； 1.43-1.33(m， 6H) ； 1.30(d， J ＝ 6.9Hz， 6H)+1 个 信号由于溶剂而模糊且 4 个可交换的质子没有观察。

    [2702] 实施例 285

    [2703] (R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二 氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-4， 4- 二甲基壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮甲 酸盐

    [2704] a)2-(5- 溴戊基氧基 ) 四氢 -2H- 吡喃

    [2707] 向 5- 溴戊醇 (10g) 的 DCM(150mL) 溶液中加入对甲苯磺酸吡啶鎓 (1.5g)， 接着加入 3， 4- 二氢 -2H- 吡喃 (8.1mL)， 且将反应混合物在室温和氮气下搅拌 21 小时。溶液用乙 醚稀释， 然后用稀盐水 (1 ∶ 1 盐水∶水， 140mL) 洗涤， 然后有机层用硫酸钠干燥， 过滤， 且 蒸发。经硅胶色谱 ( 用 0 至 50％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为 1 无色液体。收率为 14.14g。 HNMR(400MHz， CDCl3) ： δ4.59-4.56(m， 1H) ； 3.91-3.82(m， 1H) ； 3.79-3.71(m， 1H) ； 3.57-3.47(m， 1H) ； 3.44-3.36(m， 3H) ； 1.94-1.76(m， 3H) ； 1.76-1.66(m， 1H) ； 1.65-1.46(m， 8H)。

    [2708] b)2， 2- 二甲基 -7-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基氧基 ) 庚酸乙酯

    [2709] 二异丙基胺 (1.78mL) 的无水 THF(10mL) 溶液在 0℃和氮气下用正丁基锂 ( 浓度 为 2.5M 的己烷溶液， 5.09mL) 逐滴处理， 得到浅黄色溶液， 将所述浅黄色溶液在 0 ℃搅拌 30 分钟， 然后冷却至 -78℃， 且用异丁酸乙酯 (1.55mL) 逐滴处理。将溶液在 -78℃搅拌 45 分钟， 然后滴加 2-(5- 溴戊基氧基 ) 四氢 -2H- 吡喃 ( 实施例 285， 步骤 a)(3.20g) 的无水 THF(1mL) 溶液。 将反应混合物在 -78℃搅拌 10 分钟， 然后温热至室温过夜。 将反应混合物冷 却至 0℃， 然后用饱和氯化铵水溶液 (3mL) 处理， 且用乙酸乙酯萃取。 水相用乙酸乙酯 (×2) 萃取， 合并的有机相用水、 饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤， 然后用硫酸钠干燥， 过滤， 且蒸 发。经硅胶色谱 ( 用 0-5％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色液 1 体。收率为 2.22g。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ4.59-4.55(m， 1H) ； 4.11(q， J ＝ 7.1Hz， 2H) ； 3.90-3.82(m， 1H) ； 3.72(dt， J ＝ 9.6， 6.8Hz， 1H) ； 3.53-3.45(m， 1H) ； 3.37(dt， J ＝ 9.6， 6.6Hz， 1H) ； 1.88-1.77(m， 1H) ； 1.75-1.67(m， 1H) ； 1.64-1.48(m， 8H) ； 1.40-1.30(m， 2H) ； 1.29-1.20(m， 5H) ； 1.15(s， 6H)。

    [2711] c)2， 2- 二甲基 -7-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基氧基 ) 庚 -1- 醇

    [2710] 2， 2- 二甲基 -7-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基氧基 ) 庚酸乙酯 ( 实施例 285， 步骤 b) (2.22g) 的无水乙醚 (22mL) 溶液在 0 ℃和氮气下历时 5 分钟用二异丁基氢化铝 ( 浓度 为 1M 的甲苯溶液， 17.1mL) 逐滴处理。在 0℃保持 1 小时后， 反应混合物用酒石酸钾钠水 溶液小心处理， 用乙醚稀释， 且将所得混合物剧烈搅拌 1.5 小时。分离各相， 且水相用乙 醚 (×2) 萃取。合并的有机相用水和盐水洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发。经硅胶色谱 ( 用 0 至 50％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。收率为 1 1.83g。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ4.58-4.55(m， 1H) ； 3.91-3.83(m， 1H) ； 3.77-3.69(m， 1H) ； 3.53-3.46(m， 1H) ； 3.39(dt， J ＝ 9.6， 6.6Hz， 1H) ； 3.31(d， J ＝ 4.1Hz， 2H) ； 1.90-1.78(m， 1H) ； 1.76-1.64(m， 1H) ； 1.64-1.48(m， 4H) ； 1.40-1.20(m， 8H) ； 0.86(s， 6H)+1 个可交换的质 子没有观察。

    [2714] d)(E)-4， 4- 二甲基 -9-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基氧基 ) 壬 -2- 烯酸乙酯

    [2713] 草酰氯 (0.78mL) 的无水 DCM(20mL) 溶液在 -78℃用 DMSO(1.26mL) 的 DCM(0.3mL) 溶液逐滴处理。15 分钟后， 滴加 2， 2- 二甲基 -7-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基氧基 ) 庚 -1- 醇 ( 实施例 285， 步骤 c)(1.73g) 的 DCM(10mL) 溶液， 且继续搅拌 15 分钟， 然后滴加三乙胺 (4.93mL)。移开冷却浴， 且将反应混合物温热至室温。1 小时后， 反应混合物用饱和氯化铵 水溶液处理， 且分离各层。水相用 DCM(×2) 萃取， 合并的有机层用盐水洗涤， 用硫酸镁干 燥， 过滤， 且蒸发， 得到粗醛。将其吸收在 DCM 中， 用水洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发， 得 到醛， 其为无色油状物， 所述油状物直接使用。

    [2717] 二乙基膦酰基乙酸乙酯 (triethyl phosphonoacetate)(1.62mL) 的乙腈 (8mL) 溶 液用氯化锂 (0.43g) 处理， 然后冷却至 0℃， 且滴加三乙胺 (1.23mL) 的乙腈 (2.5mL) 溶液。 将反应混合物在 0℃搅拌 15 分钟， 然后加入 2， 2- 二甲基 -7-( 四氢 - 吡喃 -2- 基氧基 )- 庚 醛 (1.65g) 的乙腈 (6mL) 溶液。将所得混合物温热至室温， 且搅拌 3 小时， 然后用饱和氯化 铵水溶液、 乙醚和水处理。分离各层， 水相用乙醚 (×2) 萃取， 合并的有机层用盐水洗涤， 用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸发， 得到粗产物。经硅胶色谱 ( 用 0 至 40％乙酸乙酯 / 环己烷洗 脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。收率为 0.89g。1H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ6.91(d， J ＝ 15.9Hz， 1H) ； 5.71(dd， J ＝ 15.9， 1.9Hz， 1H) ； 4.59-4.55(m， 1H) ； 4.19(q， J ＝ 7.1Hz， 2H) ； 3.90-3.82(m， 1H) ； 3.76-3.68(m， 1H) ； 3.53-3.46(m， 1H) ； 3.40-3.33(m， 1H) ； 1.89-1.77(m， 1H) ； 1.76-1.66(m， 1H) ； 1.64-1.48(m， 6H) ； 1.39-1.19(m， 9H) ； 1.05-1.03(m， 6H)。

    [2718] e)4， 4- 二甲基 -9-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基氧基 ) 壬酸乙酯

    [2716] (E)-4， 4- 二 甲 基 -9-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 氧 基 ) 壬 -2- 烯 酸 乙 酯 ( 实 施 例 285， 步骤 d)(0.89g) 的 IMS( 含有甲醇的工业酒精 (industrail methylated spirits)) (10mL) 溶液在氮气下用钯 / 碳 ( 药匙末梢 (spatula tip)) 处理， 然后烧瓶用氢气 (×3) 冲刷， 然后在氢气气氛下搅拌过夜。再加入一份钯 / 碳， 且再氢化 24 小时。催化剂通过 用硅藻土过滤来除去， 且蒸发滤液， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。收率为 0.86g。 1 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ4.59-4.56(m， 1H) ； 4.12(q， J ＝ 7.1Hz， 2H) ； 3.90-3.83(m， 1H) ； 3.75-3.68(m， 1H) ； 3.53-3.46(m， 1H) ； 3.41-3.34(m， 1H) ； 2.26-2.19(m， 2H) ； 1.88-1.79(m， 2H) ； 1.76-1.66(m， 2H) ； 1.66-1.43(m， 6H) ； 1.40-1.14(m， 9H) ； 0.84(s， 6H)。

    [2721] f)9- 羟基 -4， 4- 二甲基壬酸乙酯

    [2720] 向 4， 4- 二甲基 -9-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基氧基 ) 壬酸乙酯 ( 实施例 285， 步骤 e)(0.86g) 的甲醇 (10mL) 溶液中加入对甲苯磺酸一水合物 (52mg)， 且将反应混合物在室温搅 拌 2 小时。混合物用乙酸乙酯和水稀释， 且分离各相。水层用乙酸乙酯 (×2) 萃取， 合并 的有机相用 10％枸橼酸、 饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤， 然后用硫酸镁干燥， 过滤， 且蒸 发。经硅胶色谱 ( 用 0-50％乙酸乙酯 / 环己烷洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为无色油 1 状物。收率为 0.44g。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ4.12(q， J ＝ 7.1Hz， 2H) ； 3.67-3.61(t， J ＝ 6.4Hz， 2H) ； 2.28-2.20(m， 2H) ； 1.61-1.50(m， 4H) ； 1.49-1.37(m， 1H) ； 1.38-1.22(m， 7H) ； 1.21-1.12(m， 2H) ； 0.85(s， 6H)。

    [2724] g)9- 溴 -4， 4- 二甲基壬酸乙酯

    [2725] 9- 羟基 -4， 4- 二甲基壬酸乙酯 ( 实施例 285， 步骤 f)(0.44g) 的 DCM(19mL) 溶液在 0℃用四溴化碳 (0.76g) 处理， 接着用三苯基膦 (0.60g) 处理， 且将反应混合物在室温搅拌 过夜。再加入一定量四溴化碳 (0.76g) 和一定量三苯基膦 (0.60g)， 且继续搅拌 3 小时。蒸 发除去溶剂， 然后混合物用环己烷研磨， 且过滤除去所得固体。固体用环己烷洗涤， 将滤液 浓缩至约 15mL， 且静置过夜。 过滤除去从溶液中析出的固体， 用环己烷洗涤， 且蒸发滤液， 得 1 CDCl3) ： δ4.12(q， J＝ 到副标题化合物， 其为浅褐色油状物。 收率为 0.56g。H NMR(300MHz， 7.1Hz， 2H) ； 3.41(t， J ＝ 6.8Hz， 2H) ； 2.28-2.20(m， 2H) ； 1.93-1.80(m， 2H) ； 1.59-1.49(m， 2H) ； 1.46-1.34(m， 2H) ； 1.32-1.21(m， 5H) ； 1.22-1.13(m， 2H) ； 0.85(s， 6H)。

    [2727] h)9- 溴 -4， 4- 二甲基壬 -1- 醇

    [2726] 9- 溴 -4， 4- 二甲基壬酸乙酯 ( 实施例 285， 步骤 g)(0.56g) 的无水乙醚 (19mL) 溶液在 0℃和氮气下用二异丁基氢化铝 ( 浓度为 1M 的甲苯溶液， 4.20mL) 处理， 且将反应 混合物在 0℃搅拌 1 小时 15 分钟。反应混合物用酒石酸钾钠水溶液小心处理， 且搅拌 1 小 时。分离各相， 水层用乙醚 (×2) 萃取， 然后合并的有机相用盐水洗涤， 用硫酸镁干燥， 过 1 滤， 且蒸发， 得到副标题化合物， 其为无色油状物。收率为 0.42g。 H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ3.62(t， J ＝ 6.7Hz， 2H) ； 3.41(t， J ＝ 6.9Hz， 2H) ； 1.91-1.82(m， 2H) ； 1.55-1.45(m， 2H) ； 1.46-1.35(m， 2H) ； 1.30-1.15(m， 6H) ； 0.85(s， 6H)+1 个可交换的质子没有观察。

    [2730] i)(9-(9- 羟基 -6， 6- 二甲基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮

    [2729] 将 (2- 异丙基 - 噻唑 -4- 基 )-(1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂 - 螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 )- 甲酮二 ( 三氟乙酸盐 )( 实施例 22， 步骤 b)(0.40g) 加载至经甲醇润湿的 SCX-2 柱， 用甲醇洗 涤， 然后使用 2N 氨 / 甲醇来洗脱， 且蒸发， 得到游离碱 (227mg)。 该物质用 9- 溴 -4， 4- 二甲基 壬 -1- 醇 ( 实施例 285， 步骤 h)(0.11g) 的乙腈 (8.8mL) 溶液处理， 接着用三乙胺 (0.20mL) 处理。 将混合物在 60℃加热 21h， 然后蒸发除去溶剂。 经硅胶色谱 ( 用 75％乙酸乙酯 / 环己 烷 ( 含有 5％三乙胺 ) 至 100％乙酸乙酯 +5％三乙胺洗脱 ) 纯化， 得到副标题化合物， 其为 1 无色胶状物。收率为 0.295g。 H NMR(400MHz， D6-DMSO) ： δ8.00(s， 1H) ； 4.35-4.30(m， 1H) ； 3.76-3.45(m， 6H) ； 3.37-3.28(m， 1H) ； 2.41-2.03(m， 6H) ； 1.72-1.58(m， 2H) ； 1.57-1.44(m， 2H) ； 1.43-1.28(m， 10H) ； 1.27-1.05(m， 9H) ； 0.81(s， 6H)+1 个可交换的质子没有观察。

    [2733] j)(R)-4- 羟基 -7-(1- 羟基 -2-(9-(4-(2- 异丙基噻唑 -4- 基羰基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -9- 基 )-4， 4- 二甲基壬基氨基 ) 乙基 ) 苯并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮 甲酸盐

    [2734] (9-(9- 羟基 -6， 6- 二甲基壬基 )-1- 氧杂 -4， 9- 二氮杂螺 [5.5] 十一碳 -4- 基 ) (2- 异丙基噻唑 -4- 基 ) 甲酮 ( 实施例 285， 步骤 i)(0.255g) 的 DCM(5.3mL) 溶液在 0℃和氮 气下用三氟乙酸 (0.04mL) 处理， 且搅拌 5 分钟， 然后加入戴斯 - 马丁高碘剂 (0.339g)。 将溶 液在室温搅拌 1 小时， 然后再加入一定量戴斯 - 马丁高碘剂 (0.113g)， 且继续搅拌 30 分钟。 反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液和饱和碳酸氢钠水溶液 (1 ∶ 1) 处理， 用 DCM 稀释， 且搅 拌 10 分钟。加入乙酸乙酯， 且分离各相。水层用乙酸乙酯 (×2) 萃取。合并有机层， 用饱 和碳酸氢钠水溶液洗涤， 然后用硫酸镁干燥， 然后加入乙酸 (0.046mL)， 且蒸发溶液， 得到醛 (0.362g)。将其悬浮在无水甲醇 (9mL) 中， 用 (R)-7-(2- 氨基 -1- 羟基乙基 )-4- 羟基苯并

    [2735] [d] 噻唑 -2(3H)- 酮盐酸盐 (WO 2007027134， 实施例 1， 步骤 d)(0.210g)、 分子筛和乙酸 (0.046mL) 处理， 且将混合物搅拌 5 分钟。 将反应混合物冷却至 0℃， 加入三乙酰氧基硼氢化 钠 (113mg)， 且在室温继续搅拌 24 小时。 过滤混合物， 然后真空浓缩。 经硅胶色谱 ( 用 5、 6、 7、 8、 9、 10 和 12％ (10％氨水 / 甲醇溶液 )/DCM 洗脱 ) 纯化， 接着经制备性 HPLC(Phenomenex Gemini ， 梯度为 5-40％乙腈 /0.1％甲酸水溶液 ) 纯化。合并含有产物的馏分， 且冷冻干 1 燥， 得到标题化合物， 其为白色固体。收率为 0.024g。m/z 688(M+H)+。 H NMR(400MHz， D6-DMSO， 80 ℃ ) ： δ8.26-8.13(m， 1H) ； 7.89(s， 1H) ； 6.87(d， J ＝ 8.3Hz， 1H) ； 6.69(d， J＝ 8.3Hz， 1H) ； 4.61-4.53(m， 1H) ； 3.69-3.63(m， 6H) ； 3.37-3.24(m， 1H) ； 2.76-2.66(m， 2H) ； 2.59-2.50(m， 2H) ； 2.40-2.31(m， 2H) ； 2.31-2.20(m， 4H) ； 1.72-1.63(m， 2H) ； 1.58-1.47(m， 2H) ； 1.44-1.29(m， 10H) ； 1.29-1.09(m， 8H) ； 0.80(s， 6H)+4 个可交换的质子没有观察。

    [2736] 本发明化合物的药物活性可使用本领域已知的测定来测试， 诸如 ：

    [2737] 针对由肾上腺素能 β2 介导的 cAMP 产生的测定

    [2738] 制备细胞在 225cm2 烧瓶培养箱 (37℃和 5％ CO2) 中使 H292 细胞在 RPMI 培养基 ( 含有 10％ (v/v)FBS( 胎牛血清 ) 和 2mM L- 谷氨酰胺 ) 中生长。

    [2740] 实验方法

    [2741] 附着的 H292 细胞如下从组织培养烧瓶中取出 ： 用 AccutaseTM 细胞剥离溶液处理 15 分钟。 将烧瓶在加湿培养箱 (37℃和 5％ CO2) 中孵育 15 分钟。 将剥离的细胞以 0.1×106 个细胞 /mL 重新悬浮在 RPMI 培养基 ( 含有 10 ％ (v/v)FBS 和 2mM L- 谷氨酰胺 ) 中。将 10000 个细胞 /100μL 加至用组织培养基处理的 96 孔板的每个孔中， 且将细胞在加湿培养 箱 (37℃和 5％ CO2) 中孵育过夜。除去培养基， 细胞用 100μL 测定缓冲液洗涤 2 次， 且用 50μL 测定缓冲液 ( 含有 10mM HEPES(pH 7.4) 和 5mM 葡萄糖的 HBSS 溶液 ) 代替。 将细胞在 室温保持 20 分钟， 然后加入 25μL 咯利普兰 (rolipram)( 浓度为 1.2mM 的在含有 2.4％ (v/ v) 二甲基亚砜的测定缓冲液中制备的溶液 )。将细胞与咯利普兰一起孵育 10 分钟， 然后加 入测试化合物， 且将细胞在室温孵育 60 分钟。咯利普兰在测定中的最终浓度为 300μM， 且 媒介物的最终浓度为 1％ (v/v) 二甲基亚砜。反应混合物如下终止 ： 除去上清液， 用 100μL 测定缓冲液洗涤 1 次， 且用 50μL 溶胞缓冲液代替。将细胞单层在 -80℃冷冻 30 分钟 ( 或 过夜 )。

    [2742] AlphaScreenTMcAMP 检测

    [2743] cAMP( 环磷腺苷 ) 在细胞溶胞物中的浓度使用 AlphaScreenTM 方法学来确定。 将冷 冻的细胞板在板振荡器上解冻 20 分钟， 然后将 10μL 细胞溶胞物转移到 96 孔白色板中。 将 TM 40μL 与生物素化的 cAMP 一起预孵育的混合的 AlphaScreen 检测珠子加至每个孔中， 且将 TM 板在室温避光孵育 3 小时。AlphaScreen 信号使用 EnVision 分光光度计 (Perkin-Elmer Inc.) 以制造商推荐的设置来测量。cAMP 浓度如下确定 ： 参考在同一实验中使用标准 cAMP 浓度来确定的校正曲线。构建针对激动剂的浓度响应曲线， 且将数据拟合成 4 参数逻辑方 程以确定 pEC50 和内在活性。将内在活性表达为在每项实验中相对于就福莫特罗而确定的 最大活性的分数。

    [2744] 毒蕈碱性受体 3 结合测定

    [2745] 化 合 物 与 M3 受 体 结 合 的 亲 和 力 (pIC50) 以 闪 烁 迫 近 测 定 (scintillation proximity assay， SPA) 方式通过 [3H]N- 甲基东莨菪碱 (NMS) 与 CHO-K1( 中国仓鼠卵巢 ) 细胞膜的竞争结合来确定， 所述细胞膜表达人毒蕈碱性乙酰胆碱 M3 受体 (M3-ACh)。

    [2746] SPA 珠子用膜预涂覆， 然后以 2mg 珠子 / 孔与本发明化合物的系列稀释液、 [3H] NMS(0.1nM 即四分之一 Kd( 实验确定的解离常数 )) 和测定缓冲液 ( 含有 5mM MgCl2 的 20mM HEPES(pH 7.4)) 一起孵育。测定在最终体积为 200μL 且存在 1％ (v/v) 二甲基亚砜 (DMSO) 的情况下进行。[3H]NMS 的总结合在不存在竞争化合物的情况下确定， 且 [3H]NMS 的 非特异性结合在存在 1μM 阿托品的情况下确定。将板在室温孵育 16 小时， 然后在 Wallac TM 3 Microbeta 上使用归一化 H 方案来读取。确定 pIC50， 将所述 pIC50 定义为使特异性 [3H] NMS 结合减少 50％的化合物摩尔浓度的负对数。

    [2747] 本发明化合物在上述测定中测试， 且得到以下结果 ：

    [2748] 实施例编号β2pEC50( 内在活性 )M3 pIC50374102083839 A CN 102083847说1 2 3 4 5 6明书8.5 9.5 9 8.9 8.6 9.5366/380 页7.2(0.8) 7.9(0.8) 8.1(1.0) 7.8(0.9) 7.1(0.9) 8.4(0.9)

    [2749] 7 8 9

    [2750] 8.2(0.8) 7.4(1.0) 8.3(0.9)9.3 8.4 8.7实施例编号 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19β2pEC50 6.5 8.8 8 7.4 8.3 8.6 7.8 7.3 7.2 8.5β2 内在活性 0.9 0.8 1 0.8 0.9 0.9 0.9 0.5 1 0.9M3 pIC50 8.3 10 9 10.1 8.2 8.9 8.1 7.3 8.6 8.8375102083839 A CN 102083847说6.7 6.7 8 7.8 8.3 7.8 7.9 8.9 8 8.8 8.6 8.3 8.5 8.2 8.5 7.9 8.2 8.5 7.7 7 7.9 0.8 0.5 0.9 0.9 1 0.8 0.8 1 1 1 0.9 0.9 1.1 1 1 1 1 0.9 0.8 0.9 1.1明书7.5 9 9.9 9.6 7.6 9 9.2 8.6 8.6 8.4 7.8 7.2 7.4 7.9 7.7 7.6 9.3 8.5 8.6 9.5 9.4367/380 页20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40376102083839 A CN 102083847说8.2 8.1 8.3 8.6 8 7.1 7.8 8.3 8.1 8.1 8.5 8.3 8 8.2 8.2 8.1 1.1 1 0.8 1 0.8 1 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 1 0.9 1 1明书6.9 9.2 7.4 8.5 8.3 8.2 9.3 9.1 7.4 7.4 7.8 8.1 7.9 6.7 7.2 8.6368/380 页41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56

    [2751] 57 58 59 60 618.2 8 7.8 8.3 7.21.1 0.9 1 1 0.99.1 8.2 8.1 8.4 8.3377102083839 A CN 102083847说62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 6.6 8.3 7.3 7 7.8 7.8 8.2 7.8 8.1 7.7 8.1 8.1 7.9 7.6 7.5 7.1 7.8 8.2 8.2 8.1 8.4 7.9 8.3 0.9 1 0.9 0.9 0.9 0.9 0.8 0.9 0.8 0.8 0.8 0.9 0.9 0.8 0.9 1 0.9 0.9 0.8 0.7 0.9 0.8 0.9明书6.6 ＜6 9.7 9.2 9.1 8.5 7.6 7.7 8.5 8.3 8 8.1 7.7 8.7 8.7 8.6 8 6.9 8.3 8.2 9.4 9.3 9.1369/380 页378102083839 A CN 102083847说85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 8.1 8.6 8.5 7.9 8.8 6.7 8.9 6.1 8.6 5.9 NV* NV* ＜ 5.5 5.7 8.1 8.3 6.8 6.7 6.6 7.1 7.8 7 7.4 0.8 0.8 0.9 1 1 0.9 0.7 0.9 0.8 0.7 NV* NV* 1.5 0.4 0.8 0.9 1 0.9 1 0.9 0.8 0.8 0.9明书7.3 9.8 9.3 8.7 7.5 7.1 8.7 6.9 8.6 7.9 8.8 9.6 8.2 8.9 8.8 8.8 9.5 9 9 8.5 9.9 6.7 8.2370/380 页379102083839 A CN 102083847说108 6.9 0.9明书8.4371/380 页

    [2752] 109 110 111 112 113 114 115 118 124 130 141 149 173 178 190 198 201 202 209 210 213 2178.1 7.2 7.5 6.9 7.7 7.2 8.2 8.2 8.4 7.9 8.2 8.1 8.6 8.3 7.9 7.9 7.5 7.7 7.6 7.8 7.9 7.40.9 0.8 0.8 0.9 0.8 0.9 0.8 1 0.9 1 0.9 0.9 0.8 0.8 0.9 0.8 0.9 0.9 0.9 0.8 0.8 0.93809.7 7.7 9.1 6.3 7.7 6.5 8.1 7.7 7.9 7.1 7.6 7.6 8.1 7.5 8.7 8.5 8.2 8.1 8.7 8.1 9.1 9.2102083839 A CN 102083847说7.6 7.3 7.6 7.5 6.7 7.7 7.9 8.1 8 8 7.5 6.6 8.2 8 6.4 7.6 7.3 7.4 7.5 8.4 6.5 8.3 7.5 0.9 0.8 0.8 0.9 0.9 1 1 0.7 0.9 1 1.1 0.7 1 1 0.5 1.0 1 1 0.9 1.0 0.9 1.2 0.8明书9.4 9 9.2 8.9 8.3 8.1 9.1 9.5 8.8 8.8 8.2 7.1 当浓度为 1μM 时抑制 30％ 6.1 7.1 8.6 8.8 8.7 10 9.4 8.1 9.1 8.8372/380 页218 219 220 221 259 264 265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281381102083839 A CN 102083847说7.3 7.1 7.9 7.8 1 1.1 0.9 1明书7.7 8.9 8.7 8.4373/380 页282 283 284 285

    [2753] NV* ＝当测试化合物高达最大浓度即 3.2μM 时仍无活性。

    [2754] 以下实验操作用于测量实施例 116-263 的化合物当浓度为 1μM 时对 β2 的作用 百分数 (％ )。

    [2755] 由肾上腺素能 β2 介导的 cAMP 产生

    [2756] 制备细胞

    [2757] 在 225cm2 烧瓶培养箱 (37℃和 5％ CO2) 中使 H292 细胞在 RPMI 培养基 ( 含有 10％ (v/v)FBS( 胎牛血清 ) 和 2mM L- 谷氨酰胺 ) 中生长。

    [2758] 实验方法 化合物如下准备 ： 首先稀释到 DMSO 中， 得到 1mM 储备浓集物。接着以 1 ∶ 10 对储 备浓集物进行稀释 (10μl 储备化合物 +90μl DMSO)， 得到浓度为 0.1mM 的化合物。

    [2760] 化合物加入板如下准备 ： 进一步以 1 ∶ 25 稀释在含有 4％二甲基亚砜的测定缓冲 液 ( 含有 10mM HEPES(pH 7.4) 和 5mM 葡萄糖的 HBSS 溶液 ) 中。化合物在测定中的最终浓 度为 1μM。

    [2761] 附着的 H292 细胞如下从组织培养烧瓶中取出 ： 用 AccutaseTM 细胞剥离溶液处理 15 分钟。 将烧瓶在加湿培养箱 (37℃和 5％ CO2) 中孵育 15 分钟。 将剥离的细胞以 0.1×106 个细胞 /mL 重新悬浮在 RPMI 培养基 ( 含有 10 ％ (v/v)FBS 和 2mM L- 谷氨酰胺 ) 中。将 10000 个细胞 /100μL 加至用组织培养基处理的 96 孔板的每个孔中， 且将细胞在加湿培养 箱 (37℃和 5％ CO2) 中孵育过夜。除去培养基， 细胞用 100μL 测定缓冲液洗涤 2 次， 且用 50μL 测定缓冲液 ( 含有 10mM HEPES(pH 7.4) 和 5mM 葡萄糖的 HBSS 溶液 ) 代替。将细胞 在室温保持 20 分钟， 然后加入 25μL 咯利普兰 ( 浓度为 1.2mM 的在测定缓冲液中制备的溶 液 )。 将细胞与咯利普兰一起孵育 10 分钟， 然后加入 25μl 测试化合物， 且将细胞在室温孵 育 60 分钟。咯利普兰在测定中的最终浓度为 300μM， 且媒介物的最终浓度为 1％ (v/v) 二 甲基亚砜。反应混合物如下终止 ： 除去上清液， 用 100μL 测定缓冲液洗涤 1 次， 且用 50μL 溶胞缓冲液代替。将细胞单层在 -80℃冷冻 30 分钟 ( 或过夜 )。

    [2762] Alpha ScreenTMcAMP 检测

    [2763] cAMP( 环磷腺苷 ) 在细胞溶胞物中的浓度使用 AlphaScreenTM 方法学来确定。将 冷冻的细胞板在板振荡器上解冻 20 分钟， 然后将 10μL 细胞溶胞物转移到 96 孔白色板中。 将 40μL 混合的 AlphaScreenTM 检测珠子 ( 含有等体积的供体珠子 ( 与生物素化的 cAMP 一起避光预孵育 30 分钟 ) 和受体珠子 ) 加至每个孔中， 且将板在室温避光孵育 3 小时。 AlphaScreenTM 信号使用 EnVision 分光光度计 (Perkin-Elmer Inc.) 以制造商推荐的设置 来测量。所产生的 cAMP 浓度 / 孔参考在同一实验中确定的 cAMP 标准曲线来计算， 且表达 为相对于由 1E-07M 福莫特罗产生的最大响应的百分数。

    [2759] 以下实验操作用于确定实施例 116-263 的化合物当浓度为 1μM 时对 M3 的抑制百 分数 (％ )。

    [2765] 毒蕈碱性受体 3 结合测定

    [2766] 化合物对 M3 受体的活性 ( 对特异性结合的抑制百分数 ( ％ )) 以闪烁迫近测定 (SPA) 方式通过 [3H]N- 甲基东莨菪碱 (NMS) 与 CHO-K1( 中国仓鼠卵巢 ) 细胞膜的竞争结合 来确定， 所述细胞膜表达人毒蕈碱性乙酰胆碱 M3 受体 (M3-ACh)。

    [2767] SPA 珠子用膜预涂覆， 然后以 2mg 珠子 / 孔与 1μM 本发明化合物、 [3H]NMS(0.1nM 即四分之一 Kd( 实验确定的解离常数 )) 和测定缓冲液 ( 含有 5mM MgCl2 的 20mM HEPES(pH 7.4)) 一起孵育。测定在最终体积为 200μL 且存在 1％ (v/v) 二甲基亚砜 (DMSO) 的情况 下进行。[3H]NMS 的总结合在不存在竞争化合物的情况下确定， 且 [3H]NMS 的非特异性结合 在存在 1μM 阿托品的情况下确定。将板在室温孵育 16 小时， 然后在 Wallac MicrobetaTM 上使用归一化 3H 方案来读取。确定化合物当浓度为 1μM 时的活性， 将所述活性定义为对 3 特异性 [ H]NMS 结合的抑制百分数 (％ )。

    [2768] 137 138 139 14013 27 34 76112 92 101 109383102083839 A CN 102083847说141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 91 -3 2 35 7 41 66 4 92 91 71 13 67 28 4 3 13 72 3 5 42 8 25明书105 100 108 101 53 96 102 104 113 100 98 110 98 102 101 106 102 95 90 91 87 91 95375/380 页384102083839 A CN 102083847说164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 35 11 69 8 29 -2 42 11 19 99 41 3 16 1 89 66 51 10 16 97 96 95 95明书99 89 95 100 95 92 102 86 98 93 89 94 87 78 94 95 92 86 88 91 89 81 86376/380 页385102083839 A CN 102083847说187 188 189 190 191 84 96 96 99 94明书92 93 93 77 82377/380 页

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    [2772] 图1： 二 (1S)-(+)-10- 樟脑磺酸盐变化形式 A- 实施例 47B 的 X 射线粉末衍射图。 图2： 富马酸盐变化形式 A- 实施例 47C 的 X 射线粉末衍射图。 图3： 富马酸盐变化形式 B- 实施例 47D 的 X 射线粉末衍射图。