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本发明公开一种用于防止光老化的含有天女木兰提取物作为活性成分的化妆品组合物。本发明还公开一种用于减少皮肤皱纹的含有天女木兰提取物作为活性成分的化妆品组合物。天女木兰提取物可以通过抑制皮肤细胞死亡和细胞DNA损伤而保护皮肤免受紫外光损伤，并可以通过促进胶原的生物合成和抑制胶原酶的合成而减少皮肤皱纹。此外，含有天女木兰提取物的化妆品组合物对于抑制紫外线引起的皮肤损伤具有优异效果，并且对于减少皮肤皱纹具有优异效果。

1.  一种用于防止光老化的化妆品组合物，其含有天女木兰提取物作为活性成分。

2.  一种用于减少皮肤皱纹的化妆品组合物，其含有天女木兰提取物作为活性成分。

3.  如权利要求1或2所述的化妆品组合物，其中，所述天女木兰提取物用于抑制紫外线引起的皮肤细胞损伤和抑制紫外线引起的皮肤细胞DNA损伤，由此保护皮肤和减少皮肤皱纹。

4.  如权利要求1或2所述的化妆品组合物，其中，按所述化妆品组合物总重计，所述天女木兰提取物的含量为0.0001-20.0wt％。

5.  如权利要求1或2所述的化妆品组合物，其中，所述化妆品组合物是选自溶液、悬浮液、乳液、糊剂、凝胶、霜剂、洗剂、皂剂、含有表面活性剂的清洁剂、油、粉底霜、乳液底霜、蜡剂底霜和喷雾剂的制剂形式。

6.  一种化妆方法，包括向人皮肤施用权利要求1～5中任一项所述的化妆品组合物。

用于保护皮肤不受紫外线损伤和改善皮肤皱纹的含有天女木兰花提取物的化妆品组合物
技术领域
本发明涉及一种含有天女木兰(Magnolia sieboldii)提取物作为活性成分的化妆品组合物，更具体而言，涉及一种用于保护皮肤不受紫外线损伤和改善皮肤皱纹(减少皮肤皱纹)的含有天女木兰提取物的化妆品组合物，由此用于保护DNA和皮肤细胞免受紫外线损伤、促进胶原的生物合成并抑制胶原酶的生物合成。
背景技术
对于大多数人来说，在生长阶段皮肤容易受到阳光照射，但是随着年龄增加皮肤组织逐渐变化，因此，由于阳光会发生各种现象，包括皮肤粗糙、皱纹、色斑、不良肤色、腹泻、毛细血管扩张、黑斑、紫癜、容易瘀伤、萎缩、纤维化、变色部位，并且在严重情况下发生恶化前肿瘤和恶性肿瘤。
紫外线分为UVA、UVB和UVC范围，其中只有UVA和UVB能到达地球表面，UVC被臭氧层过滤掉。UVB对皮肤具有最大的影响，并能穿透表皮而损伤皮肤细胞。UVA穿透皮肤真皮而损伤与胶原合成有关的皮肤细胞。这些紫外线直接损伤皮肤或通过产生活性氧而间接损伤皮肤。紫外线对皮肤细胞的影响如下。当皮肤细胞之间的角化细胞受到紫外线照射时，它们分泌炎性细胞因子并诱导氧化应激，从而使各种细胞蛋白激酶和磷脂酶被激活。这些激活的酶水解细胞膜脂质，从而分泌花生四烯酸。分泌的花生四烯酸在环氧化酶的作用下转化为前列腺素E2(PEG2)。形成的花生四烯酸和PGE2与细胞因子一起在皮肤中引起各种炎性反应，包括红斑，从而促进皮肤老化。
此外，皮肤细胞中的纤维原细胞根据与上述角化细胞活化类似的过程被紫外射线激活。在某些情况下，随着紫外线量的增加，纤维原细胞被杀死，或者如果DNA被损坏，其结果会造成皮肤癌并促进皮肤老化。即，因为紫外线可以引起皮肤红斑、免疫抑制、皱纹产生并最终引起皮肤老化和皮肤癌，所以为防止皮肤癌和延迟皮肤老化，阻断和防止紫外线照射是重要的。
近来，由于空气污染和环境污染而使臭氧层破损的原因，到达地球表面的紫外线量增加，并且紫外线的波长范围也改变，使得皮肤老化和皮肤癌增加并且预计未来会进一步增加。因此，在化妆品领域保护皮肤不受紫外线损伤是非常重要的，许多化妆品制造公司已经进行了许多研究来开发相关产品。在目前使用的方法中，简单的紫外线阻断剂或吸收剂被用于保护皮肤不受紫外线损伤，并且最近，据报道，这些紫外线阻断剂本身可以诱导突变而引起皮肤癌。
由于紫外线引起的这些皮肤损伤最终与皮肤老化相关，因此能够防止这些皮肤损伤的方法在化妆品领域受人关注。防止紫外线引起的皮肤损伤的方法包括抑制活性氧或其产生的方法，其他方法包括阻断紫外线。大多数紫外线相关产品的特征在于它们阻断紫外线，并且最近，利用天然物质来抑制紫外线引起的活性氧的方法已被频繁采用。
发明内容
技术问题
本发明人做了许多努力以找到一种生理活性的植物物质，这种物质不仅显示出现有紫外线阻断剂的简单阻断作用，而且没有显示出毒性，并且可以从根本上保护皮肤细胞免受紫外线损伤，从而从根本上防止皮肤老化和皮肤癌。结果，本发明人发现，天女木兰提取物具有保护皮肤免受紫外线损伤的优异效果，从而完成了本发明。
技术方案
因此，本发明的一个目的提供一种用于防止光老化的化妆品组合物，其含有天女木兰提取物作为活性成分。
本发明的另一个目的是提供一种用于改善皮肤皱纹(减少皮肤皱纹)的化妆品组合物，其含有天女木兰提取物作为活性成分。
本发明的再一个目的是提供一种化妆方法，包括向人皮肤施用所述含有天女木兰提取物的化妆品组合物。
从下面的详细说明和所附的权利要求可以更加清楚本发明的其他目的和优点。
有益效果
本发明提供一种用于防止光老化的含有天女木兰提取物作为活性成分的化妆品组合物。在另一方面，本发明提供一种用于减少皮肤皱纹的含有天女木兰提取物作为活性成分的化妆品组合物。根据本发明的天女木兰提取物可以通过抑制紫外线引起的皮肤细胞死亡和皮肤细胞DNA损伤而保护皮肤免受紫外光损伤，并可以通过促进胶原的生物合成和抑制胶原酶的合成而减少皮肤皱纹。此外，本发明的含有天女木兰提取物的化妆品组合物对于抑制紫外线引起的皮肤损伤具有优异效果，并且对于减少皮肤皱纹具有优异效果。
具体实施方式
根据本发明的一方面，提供一种用于防止光老化的含有天女木兰提取物的化妆品组合物。
根据本发明的另一个方面，提供一种用于改善皮肤皱纹(减少皮肤皱纹)的含有天女木兰提取物的化妆品组合物。
天女木兰，其是本发明的化妆品组合物的活性成分，属于木兰科的一种落叶小乔木，从天女木兰的花获得天女木兰提取物。
天女木兰高约7米，其叶子为互生的长椭圆形和玻璃状。其白色的大花在5月和6月向下开放，其果实在9月成熟。它是一种观赏植物，生长在高山的峡谷中，分布在韩国除了咸镜北道(Hamgyeongbuk-do)、日本和中国的各个地区。
用于本发明的天女木兰提取物可以从天女木兰树的花、叶、树枝和根获得，优选从树的花或树枝获得，更优选从花获得。
用于本发明的天女木兰提取物可以通过本领域中已知的各种方法获得。优选地，可以使用以下溶剂作为提取溶剂获得天女木兰提取物：(a)水、(b)具有1-4个碳原子的无水或含水的低级醇(例如，甲醇、乙醇、丁醇等)、(c)丙酮、(d)乙酸乙酯、(e)氯仿或(f)1，3-丁二醇。提取溶剂更优选是乙醇，更优选约70％的乙醇。用于提取工艺的天女木兰可以在干燥后使用或未经干燥使用。优选地，在干燥后使用。干燥工艺可以是自然干燥或热风干燥。
在本发明的一个优选实施方案中，制备本发明的天女木兰提取物的方法包括：向干燥的天女木兰中加入含水乙醇，在室温下提取含有天女木兰的溶液数天，过滤提取溶液，并在真空下浓缩滤液，从而获得干燥的提取物。
此外，对于本领域技术人员显而易见的是，即使使用所述提取溶剂之外的提取溶剂，也可以获得显示出基本上相同效果的天女木兰提取物。
此外，本发明的天女木兰提取物的范围不仅包括通过上述提取方法获得的提取物，而且还包括通过常规纯化工艺获得的提取物。本发明的天女木兰提取物的范围还包括通过各种额外的纯化方法获得的馏分，例如，使用具有规定分子量截留的超滤膜的分离，利用各种色谱系统(根据大小、电荷、疏水性或亲合性制造的用于分离)的分离。
本发明的天女木兰提取物可以通过额外的工艺以粉末形式制备，如真空蒸馏、冷冻干燥或喷雾干燥。
本发明的天女木兰提取物具有防止皮肤受到诸如紫外线等外部因素引起的皮肤损伤的活性。
UVB对皮肤具有最大的影响，并能穿透表皮而损伤皮肤细胞。UVA穿透皮肤真皮而损伤与胶原合成有关的皮肤细胞。这些紫外线直接损伤皮肤或通过产生活性氧而间接损伤皮肤。
外部因素包括紫外线、应激和外部有害化学物质。这些因素产生自由基(例如，羟基自由基、超氧化物自由基、活性氧和过氧化氢)，增加了皮肤的氧化应激，从而引起炎症、皮肤细胞死亡和皮肤细胞DNA损伤，会导致皮肤癌的发生和促进皮肤老化。
本文中所使用的术语“皮肤损伤”是指皮肤不能执行其正常功能，它包括对皮肤组成(胶原、弹性蛋白等)的损伤、对皮肤细胞功能的损伤和皮肤细胞的死亡。
本文中所使用的术语“皮肤细胞”是指包括存在于皮肤中的所有细胞，优选角化细胞和纤维原细胞。
本文中所使用的术语“保护皮肤”是指包括防止对皮肤的损伤和改善受损的皮肤。
因此，本文中所使用的术语防止紫外线引起的皮肤损伤和保护皮肤免受紫外线损伤，即“光老化防止”，与通过抑制活性氧的产物、促进胶原合成和抑制胶原酶的产生而引起的减少皮肤皱纹具有相同的含义。
本发明的天女木兰提取物可以去除紫外线造成的皮肤的氧化应激，以抑制皮肤细胞死亡和防止DNA损伤，从而保护皮肤。从长期的角度来看，它可以从根本上防止皮肤癌发展和皮肤老化，并能够有效地改善皮肤皱纹。
本发明的天女木兰提取物可以通过局部涂布或喷洒在皮肤上而表现出其效果。因此，根据本发明的一个优选实施方案，本发明的组合物可以化妆品组合物的形式制备，包括霜剂、润肤乳和皮肤洗剂，或以药物组合物的形式制备，包括喷雾剂和油膏。
按组合物总重计，天女木兰提取物在组合物中的含量为0.0001-20.0wt％，优选0.01-10wt％。
当本发明的组合物配制成化妆产品时，除了作为活性成分的天女木兰提取物之外，化妆品组合物还含有化妆品组合物常规使用的组分(例如，常规的添加剂，如抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、色素和香料)和载体组分。
本发明的皮肤保护用化妆品组合物可以本领域中己知的任何常规制剂形式制备。例如，它可以配制成溶液、悬浮液、乳液、糊剂、凝胶、霜剂、洗剂、粉剂、皂剂、含有表面活性剂的清洁剂、油、粉底霜、乳液底霜、蜡剂底霜和喷雾剂，但本发明的范围不限于此。更具体地说，它可以皮肤洗剂、润肤乳、营养霜、按摩霜、香精、眼霜、清洁霜、清洁泡沫、清洁水、面膜、喷雾剂或粉剂的形式制备。
如果本发明的制剂是糊剂、霜剂或凝胶，其可以含有以下物质作为载体组分：动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、二氧化硅、滑石粉或氧化锌。
如果本发明的制剂是粉剂或喷雾剂，其可以含有以下物质作为载体组分：乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末。特别是，如果其是喷雾剂，它可以额外地含有推进剂，如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚。
如果本发明的制剂是溶液或乳液，其可以含有以下物质作为载体组分：溶剂、增溶剂或乳化剂，例如，水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油类、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇或失水山梨糖醇脂肪酸酯。
如果本发明的制剂是悬浮液，其可以含有以下物质作为载体组分：液体稀释剂(如水、乙醇或丙二醇)、悬浮剂(如乙氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇酯)、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或黄芪胶。
如果本发明的制剂是含有表面活性剂的清洁剂，其可以含有以下物质作为载体组分：脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺化琥珀酸单酯、羟乙磺酸盐、咪唑鎓衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺基甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化的甘油脂肪酸酯。
在另一方面，本发明提供一种化妆方法，包括向人皮肤施用本发明的含有天女木兰提取物的化妆品组合物。
本发明的化妆方法包括所有包括向人皮肤施用本发明的化妆品组合物的化妆方法。即，本领域中已知的所有包括向皮肤施用化妆品组合物的方法均包括在本发明的化妆方法内。
本发明的化妆品组合物可以单独使用或与其他化妆品组合物组合使用。此外，可以根据任何常规方法使用本发明的具有优异皮肤保护作用的化妆品组合物，并且使用次数可以随使用者的皮肤状况或使用者的嗜好变化。
如果本发明的化妆品组合物是皂剂、含有表面活性剂的清洁制剂或不含有表面活性剂的清洁制剂，则可以在施用到皮肤之后抹去、除去或用水洗去。所述皂剂的具体例子包括但不限于液体皂剂、粉末皂剂、固体皂剂和油状皂剂，所述含有表面活性剂的清洁制剂的例子包括但不限于清洁泡沫、清洁水、清洁巾和清洁面膜，所述不含有表面活性剂的清洁制剂的例子包括但不限于清洁霜、清洁水和清洁凝胶。
进行本发明的化妆方法，包括向人皮肤施用本发明的含有天女木兰提取物的化妆品组合物，可以获得光老化防止效果和皮肤皱纹减少效果，包括保护DNA和皮肤细胞免受紫外线损伤、促进胶原的生物合成和抑制胶原酶的生物合成。
下面，结合实施例进一步详细说明本发明。然而，应该理解的是，这些实施例仅是说明性的，本发明的范围不限于此。
制备例1：制备天女木兰的花提取物
将100g的天女木兰的干花(购自Kyung Dong Market，Korea)加到1.0L的70％乙醇(乙醇∶水＝7∶3)中，在室温下提取3天。过滤提取的溶液，在真空下浓缩滤液，从而得到干燥的提取物(提取率：7.8g/100g)。将干燥的提取物溶解在30％1，3-丁二醇溶液中，至浓度为1％(w/v)，然后过滤。然后，得到的提取物用在本发明的实验中。
制备例2：制备天女木兰的全植物提取物
将100g的天女木兰的干全植物(购自Kyung Dong Market，Korea)加到1.0L的70％乙醇(乙醇∶水＝7∶3)中，在室温下提取3天。过滤提取的溶液，在真空下浓缩滤液，从而得到干燥的提取物(提取率：7.0g/100g)。将干燥的提取物溶解在30％1，3-丁二醇溶液中，至浓度为1％(w/v)，然后过滤。然后，得到的提取物用在本发明的实验中。
实验例1：对紫外线引起的角化细胞的细胞死亡的抑制作用
当用紫外线照射角化细胞时，在细胞中产生活性氧。为了人为诱发这种现象，将人正常角化细胞，即Hacat细胞(Korea Cell Line Bank)，接种到48孔微板的每个孔中，密度为1×10⁴细胞/孔，并在DMEM培养基(Sigma，USA)中在37℃下培养24小时。用紫外线(UVB)照射培养的细胞，然后将制备例1的天女木兰提取物加到每个孔的细胞培养物中，浓度为0.1、0.5、1.0和2.0％(v/v)。24小时后，通过MTT检验法来分析细胞的活性。
表1

从上表1可以看出，本发明的天女木兰提取物以浓度依赖性方式抑制紫外线照射引起的角化细胞死亡，并且对于抑制角化细胞死亡表现出优异效果。
实验例2：对紫外线引起的纤维原细胞的细胞死亡的抑制作用
当用紫外线照射纤维原细胞时，产生的活性氧损伤细胞。为了人为诱发这种现象，将人纤维原细胞(Korea Cell Line Bank)接种到48孔微板的每个孔中，密度为1×10⁴细胞/孔，并在DMEM培养基(Sigma，USA)中在37℃下培养24小时。用紫外线(UVA)照射培养的细胞，然后将制备例1的天女木兰提取物加到每个孔的细胞培养物中，浓度为0.1、0.5、1.0和2.0％(v/v)。24小时后，通过MTT检验法来分析细胞的活性。
表2

从上表2可以看出，本发明的天女木兰提取物以浓度依赖性方式抑制紫外线照射引起的纤维原细胞死亡，并且对于抑制纤维原细胞的细胞死亡表现出优异效果。
实验例3：对于紫外线引起的纤维原细胞DNA损伤的抑制作用
当用紫外线照射纤维原细胞时，纤维原细胞的DNA受到损伤。防止纤维原细胞DNA损伤是防止皮肤癌和延迟老化的重要因素。因此，为了检验本发明的天女木兰提取物是否具有抑制纤维原细胞DNA损伤的诱导的作用，进行下面的测试。
将纤维原细胞(Korea Cell Line Bank)接种到24孔孔板的每个孔中，密度为5×10⁴细胞/孔。用紫外线(UVA)照射每个孔中的细胞，然后将制备例1的天女木兰提取物加到每个孔的细胞培养物中，浓度为1.0和2.0％(v/v)。24小时后，对各细胞进行单细胞凝胶电泳(Comet检验)(实施例1和2)。为进行比较，使用未用紫外线照射和未用天女木兰提取物处理的对照组以及用紫外线照射但未用天女木兰提取物处理的比较例(比较例1)。使用图像分析仪(Komet，3.1，Kinetic imaging，England)测量细胞的尾长(μm)，并根据测量结果，分析对DNA的损伤程度。
表3