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1、10申请公布号CN104045731A43申请公布日20140917CN104045731A21申请号201410292812822申请日20140626C08B37/00200601A24B15/3020060171申请人河南中烟工业有限责任公司地址450000河南省郑州市农业东路29号72发明人陈芝飞刘强芦昶彤赵永振周浩郝辉孙志涛74专利代理机构郑州联科专利事务所普通合伙41104代理人杨海霞时立新54发明名称金针菇多糖、提取纯化方法及其作为烟草保润剂的应用57摘要本发明涉及一种金针菇多糖及其提取纯化方法，具体为将粉碎过的干燥金针菇用乙醚索氏提取后，残渣挥干再用沸水进行提取，沸水提取液浓缩。
2、、离心，取上清液醇沉静置，再次离心收集沉淀物，洗涤后用蒸馏水溶解，再加入12的木瓜蛋白酶于505水浴中放置24H，采用SEVAGE法脱除蛋白，活性炭脱色后减压浓缩，冷却后进行流水透析，透析结束后再次醇沉静置，沉淀于6070干燥得粗多糖。试验证明本发明金针菇多糖对卷烟具有很好的物理和感官保润作用，并且可以降低卷烟的刺激性和杂气，提高卷烟烟气的圆润感和舒适性，可作为一种性能优良的烟草保润剂在卷烟中应用。51INTCL权利要求书1页说明书4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页10申请公布号CN104045731ACN104045731A1/1页21一种金针菇多糖。
3、的提取纯化方法，其特征在于，包括下述步骤将粉碎过的干燥金针菇用乙醚索氏提取后，残渣挥干再用沸水进行提取，沸水提取液浓缩、离心，取上清液醇沉静置，再次离心收集沉淀物，沉淀物洗涤后用蒸馏水溶解，再加入12的木瓜蛋白酶于505水浴中放置24H，采用SEVAGE法脱除蛋白，活性炭脱色后减压浓缩，冷却后进行流水透析，透析结束后再次醇沉静置，沉淀于6070干燥得粗多糖。2如权利要求1所述的金针菇多糖的提取纯化方法，其特征在于，将粗多糖层析分离纯化两次，获得精制多糖；两次分离纯化所用洗脱液分别为05MOL/LNACL溶液和005MOL/LNH4HCO3溶液。3利用权利要求1或2所述提取纯化方法制备所得的金针。
4、菇多糖。4权利要求3所述金针菇多糖作为烟草保润剂的应用。权利要求书CN104045731A1/4页3金针菇多糖、提取纯化方法及其作为烟草保润剂的应用技术领域0001本发明属于保润剂技术领域，具体涉及一种金针菇多糖、提取纯化方法及其作为烟草保润剂的应用。背景技术0002当前，我国卷烟工业中主要采用甘油、丙二醇、山梨醇等多羟基物质作为保润剂，使用此类保润剂的主要目的在于维持加工过程中烟丝的含水率，提高烟丝的耐加工性，但上述保润剂对成品卷烟含水率的维持和吸食舒适度的改善效果并不理想。0003多糖是由大量单糖聚合而成，其大量的羟基与水分子形成氢键，可以使其具有较强的持水能力。目前，国内外尚未有将金针菇。
5、多糖作为烟草保润剂在卷烟中应用的相关报道。发明内容0004本发明目的在于提供一种金针菇多糖、提取纯化方法及其作为烟草保润剂的应用。0005为实现上述目的，本发明采用如下技术方案一种金针菇多糖的提取纯化方法，包括下述步骤将粉碎过的干燥金针菇用乙醚索氏提取（一般按料液比1G58ML添加乙醚）后，残渣挥干再用沸水进行提取，沸水提取液浓缩、离心，取上清液醇沉静置，再次离心收集沉淀物，沉淀物洗涤后用蒸馏水溶解，再加入沉淀物重量12的木瓜蛋白酶于505水浴中放置24H，采用SEVAGE法脱除蛋白，活性炭脱色后减压浓缩，冷却后进行流水透析用以除去小分子杂质，透析结束后再次醇沉静置，沉淀于6070干燥得淡黄色。
6、粗多糖。0006进一步优选，将粗多糖层析分离纯化两次，获得精制多糖；两次分离纯化所用洗脱液分别为05MOL/LNACL溶液和005MOL/LNH4HCO3溶液。0007利用上述提取纯化方法制备所得的金针菇多糖。0008利用上述提取纯化方法制备所得金针菇多糖作为烟草保润剂的应用。0009本发明通过提取纯化获得了高纯度的精制金针菇多糖，并将其进行物理保润性能测试和内在感官质量评价，发现其对卷烟具有很好的物理和感官保润作用，并且可以降低卷烟的刺激性和杂气，提高卷烟烟气的圆润感和舒适性，可以作为一种性能优良的烟草保润剂在卷烟中应用，并确定了其在卷烟中的适宜用量。0010和现有技术相比，本发明的有益效果。
7、1）在金针菇多糖的提取过程中，利用醇沉、蛋白酶水解、SEVAGE除蛋白和透析除小分子相结合的方法，有效地降低了金针菇多糖中的杂质，为进一步的分离纯化奠定基础。2）采用凝胶色谱柱层析分离纯化两次，获得高纯度的精制金针菇多糖。整个提取纯化过程操作简便，使用的原料和试剂价廉易得。3）经试验证明，本发明金针菇多糖对烟草制品的保润效果明显，因此具有显著的工业应用价值和广阔的推广应用前景。说明书CN104045731A2/4页4具体实施方式0011以下通过实施例对本发明做进一步的说明，但本发明的保护范围不限于此。0012试验所用的主要试剂和仪器乙醚、乙醇、丙酮（中国宿州化学试剂有限公司，分析纯），DEAE。
8、CELLUOSE和SEPHADEXG200凝胶（美国SIGMA公司），实验用水为蒸馏水。0013BS200SWE1型电子天平（感量00001G，北京赛多丽丝天平有限公司）；R215型旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）；V700真空泵（瑞士BUCHI公司）；DLSB20/60低温冷却循环泵（上海美强仪器设备有限公司）；KDM型调温电热套（山东华鲁电热仪器有限公司）；852型恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器厂）、ZK82B型电热真空干燥箱（上海申光仪器仪表有限公司），CHRIST冻干机（瑞士BUCHI公司），TSKGELG2000PW高效凝胶色谱柱（美国SIGMA公司），AGILENTLC1100型高效。
9、液相仪及示差折光检测仪（美国AGILENT公司）。0014实施例1一种金针菇多糖的提取纯化方法，包括下述步骤将粉碎过的300G干燥金针菇用1800ML乙醚索氏提取2H用以除去油脂，残渣挥干。挥干后的残渣再用750ML沸水提取3次，合并3次所得的沸水提取液，浓缩、离心，取上清液，加上清液3倍体积量的无水乙醇进行醇沉，静置过夜（12H），再次离心收集沉淀物。沉淀物依次用300ML乙醇、300ML丙酮洗涤3次后用蒸馏水溶解，再加入沉淀物重量1的木瓜蛋白酶于50水浴中放置2H，采用SEVAGE法脱除蛋白。加入8G活性炭置于70水浴中加热3H，过滤除去活性炭，减压浓缩，自然冷却后装入透析袋中流水透析48。
10、H用以除去小分子杂质，透析结束后，再次加入透析后多糖溶液体积3倍量的无水乙醇进行醇沉，静置过夜（12H），沉淀于70干燥得33G粗多糖，收率为11。0015取15G粗多糖用蒸馏水溶解后，用DEAECELLUOSE凝胶色谱柱层析分离（5050CM），以05MOL/LNACL溶液为流动相（即洗脱液），流速为25ML/MIN，采用硫酸苯酚法对层析液显色，收集主要色谱峰，冻干。然后将冻干所得固体用005MOL/LNH4HCO3溶液溶解，用SEPHADEXG200凝胶色谱柱再次层析分离（5050CM），以005MOL/LNH4HCO3溶液为流动相（即洗脱液），流速为20ML/MIN，采用硫酸苯酚法对层析。
11、液显色，收集主要色谱峰，冻干，即得372MG精制金针菇多糖固体，收率248，经检测LT1糖含量为95。0016实施例2一种金针菇多糖的提取纯化方法，包括下述步骤将粉碎过的300G干燥金针菇用2000ML乙醚索氏提取4H用以除去油脂，残渣挥干。挥干后的残渣再用750ML沸水提取3次，合并3次所得的沸水提取液，浓缩、离心，取上清液，加上清液3倍体积量的无水乙醇进行醇沉，静置12H，再次离心收集沉淀物。沉淀物依次用300ML乙醇、300ML丙酮洗涤3次后用蒸馏水溶解，再加入沉淀物重量2的木瓜蛋白酶于50水浴中放置4H，采用SEVAGE法脱除蛋白。加入8G活性炭置于70水浴中加热4H，过滤除去活性炭，。
12、减压浓缩，自然冷却后装入透析袋中流水透析48H用以除去小分子杂质，透析结束后，再次加入透析后多糖溶液体积3倍量的无水乙醇（透析后溶液体积的3倍）进行醇沉，静置过夜，沉淀于70干燥得31G粗多糖，收率为103。0017取15G粗多糖用蒸馏水溶解后，用DEAECELLUOSE凝胶色谱柱层析分离说明书CN104045731A3/4页5（5050CM），以05MOL/LNACL溶液为流动相（即洗脱液），流速为25ML/MIN，采用硫酸苯酚法对层析液显色，收集主要色谱峰，冻干。然后将冻干所得固体用005MOL/LNH4HCO3溶液溶解，用SEPHADEXG200凝胶色谱柱再次层析分离（5050CM），以。
13、005MOL/LNH4HCO3溶液为流动相（即洗脱液），流速为20ML/MIN，采用硫酸苯酚法对层析液显色，收集主要色谱峰，冻干，即得367MG精制金针菇多糖固体，收率245，经检测LT1糖含量为942。0018应用试验实施例1制备所得精制金针菇多糖作为烟草保润剂的应用研究1、物理保润性能测试为考察金针菇多糖对卷烟的物理保润性能，以黄金叶（大金圆）空白卷烟烟丝为载体，将金针菇多糖同甘油、丙二醇和山梨醇一起分别进行物理保润性能对比测试研究，分别配制质量分数为5的上述化合物水溶液。先将1000G混匀的空白卷烟烟丝置于温度221、相对湿度602环境中平衡48H。然后等量称取五份烟丝，每份100G，分。
14、别向烟丝中均匀施加4G上述化合物水溶液，对照空白样为烟丝均匀施加4G水。然后将五份烟丝分别置于221、相对湿度402的环境下考察其解湿过程，并对即时含水率的变化进行分析，考察其物理保润效果（即添加不同样品后烟丝72H内的干基含水率变化），结果见表1。0019表1金针菇多糖、甘油、丙二醇和山梨醇的物理保润效果对比表1的试验结果表明，添加金针菇多糖、甘油、丙二醇和山梨醇四种化合物的烟丝与空白烟丝相比，水分散失速率较缓慢，这是由于多羟基化合物所含有的亲水基团羟基可以和水形成氢键而将水束缚起来，延缓了水分的散失，提高了烟丝的物理保润性能；其中金针菇多糖的物理保润性能最好，其次是丙二醇和甘油、最后是山梨。
15、醇。00202、感官保润性能测试以20V乙醇水溶液作溶剂，将金针菇多糖配成质量分数为1的溶液。分别取0100G、0500G、1000G、5000G、10000G和20000G上述含金针菇多糖的溶液，然后分别均匀喷加到五份未加香料的100G黄金叶空白卷烟烟丝中，卷制，各挑选出100支同一重量卷烟，置于温度221、湿度602的恒温恒湿箱中平衡48H，评吸。对照样为黄金叶空白卷烟，对照样同样在相同温度、湿度条件下平衡48H。评吸结果见表2。0021表2不同添加量的金针菇多糖评吸结果说明书CN104045731A4/4页6由表2的评吸结果可以看出，金针菇多糖对卷烟的主要作用表现为使烟气明显变得圆润、柔和，口感舒适性提升，杂气和刺激性降低。当金针菇多糖用量较小时，其对卷烟的作用不是很明显；当其用量超过1时，出现尖刺感增加、浓度降低的现象；当其用量为1时吸食品质最好。因此，在100G卷烟中添加01G金针菇多糖时效果最佳，即最适宜用量为1。说明书CN104045731A。