金碧还阳口服液及制备 本发明涉及强身保健口服液，特别涉及治疗心肾阳虚、气血不足而引起的疾病的还阳口服液及制备。
随着社会的发展和科学的进步，人类利用各种手段战胜了一个又一个的疾病，从而保障了自身的健康。然而，作为中老年常见多发的心血管疾病，如心肾阳虚、气血不足引起的疾病至今仍严重地危害着人类。因而需要在预防和治疗心血管疾病方面提供强有力的医药保证。
因此本发明的目的在于提供一种预防和治疗因心肾阳虚、气血不足所引起的疾病的保健口服液，即金碧还阳口服液及制备方法。
实现上述目的以主治心肾阳虚、气血不足而引起的一系列病症，因此以温补心肾，益气养血立法。据“本草经疏”记载，人参为补气生血，助精养神之药，有益气血、健脾胃，兼补肾阳、大补后天作用。三七入肝肾经，活血养血，祛瘀通络，能助人参益气活血，疏通气机。“本草汇言”记载，附子(附片)回阳气、散阴寒、逐冷痰、通关节之猛药。与人参合用，可救治亡阳虚脱。鹿茸为纯阳之质，含生发之气，益精髓，补气血，强筋骨，滋补作用较强。鹿茸能助人参、三七温养血脉，助附片补火状阳，温散寒邪。上述诸药合用，可上温心阳，中益脾上，下补肾命，药效迅速。蜂蜜能调和百药而与甘草同功，可补中、润燥、止痛、解毒、能滋补润肺、健脾开胃，兼有镇静安神，增强记忆等辅助作用，与人参、三七、附片、鹿茸相伍，不但能加强保健作用，且能矫正药物不快气味，改善口感。
本发明的金碧还阳口服液是人参、三七、附片、鹿茸的浸提取物与蜂蜜和水的配剂，为淡黄色澄清液，味甜、微苦，其相对密度为1.08～1.10，PH4.0～7.0，人参、三七总皂甙含量按人参皂甙Rb1计算≮70μg/ml，乌头碱含量2.0～8.0μg/ml，由于药材本身乌头碱含量有差异。细菌总数≤100个/ml，霉菌总数≤100个/ml，大肠杆菌不得检出、活螨不得检出，符合中华人民共和国卫生部颁布的药品卫生标准。
本金碧还阳口服液的制备方法，按处方量将人参1份，三七5-6份，附片21-22份，鹿茸0.4～0.45份，粉碎成细粉，照流浸膏剂下的渗漉法，用75％乙醇作溶剂，浸渍≥24小时后，以每公斤药材每分钟5ml的速度进行渗漉，收集药材10倍量的漉液，浓缩至与生药等重量的浓缩液，回收乙醇，加蜂蜜适量，其量为浓缩液60倍，加水热溶并调整总量至300倍浓缩液体积，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。
所述附片，是将泥附子洗净后与盐卤水一同煮沸，涝出水漂，切成片，用水漂洗至口尝无麻辣感后，出水蒸熟，再烘晒干而成。
上述所用人参、三七、附片、鹿茸是去尽杂质、粉碎成细粉能全部通过五号筛，并含有能通过六号筛≮95％的粉末。
本口服液乌头碱含量测量照高效液相色谱法(中国药典1990年版一部附录61页)。
人参、三七薄层鉴别，参照中国药典1990年版一部人参、三七项下的薄层鉴别试验。
人参、三七总皂甙含量用比色法，以人参皂甙Rb1为对照。
PH值按中国药典1990年版一部附录40页进行。
相对密度按中国药典1990年版一部附录35页进行。
鹿茸和蜂蜜进行氨基酸和肽的鉴别。鹿茸还按中国药典1990年版一部鹿茸项下地薄层层析方法鉴别。
实施例1，取人参35克，三七200克，附片750克，鹿茸15克，按前述方法去杂质、粉碎、过筛、混合后加75％医用乙醇10千克浸渍24小时，浸渍时每隔1-2小时搅拌一次，然后按每公斤药材每分钟5ml的速度进行渗漉，收集漉液10公斤，浓缩至1000ml，回收乙醇，加蜂蜜，其量为浓缩液60倍，加热，加水，调味，调整总量至300000ml，搅匀，过滤，灌装，灭菌得产品。
所得产品经湖北省药品检验所检验其结果是： 项 目 样 品 1样品2样品3 性 状 淡黄色澄清液体 味甜、微苦同左同左 鉴 别 呈正反应同左同左 相对密度 1.081.091.08 PH 5.095.165.13 细菌总数(个/ml) 5105 毒菌总数(个/ml) ＜1055 大肠杆菌 未检出同左同左 活 螨 未检出同左同左 Rb1含量(μg/ml) 70.775.570.4
实施例2，金碧还阳口服液药效学实验
1、小鼠游泳耐力实验
用同济医科大学实验动物中心提供小鼠，和上述实施例1的金碧还阳口服液实验。
小鼠游泳实验，取雄性成年小鼠，随机分为对照组，低、中、高三个给药剂量组，每组小鼠每天给药剂量分别为0.012、0.036、0.12g/kg，连续一周自由饮服，对照组自由饮服自来水，将小鼠放入水槽中进行游泳试验，水深25cm，水温25-30℃，其结果如下：组 别剂量g/kgn游泳时间 X±SD(min)P值 对照组1063.4±36.7高剂量组0.128146.5±64.7＜0.01中剂量组0.0369125.6±63.8＜0.01低剂量组0.0121079.4±41.2＞0.05
结果表明，本还阳口服液明显延长小鼠的游泳时间，具有抗疲劳作用。
2、小鼠缺氧实验
选择雄性健康小鼠，体重18-22g，随机分组，每组10只，设不同剂量组，对照组，给药方法同小鼠游泳实验，将小鼠单个放入装有钠石灰300ml广口瓶内，瓶盖周围涂以凡士林，以保证密封，观察记录小鼠缺氧死亡时间，其结果如下：组 别剂量g/kg游泳时间 X±SD(分钟) P值 对照组37.0±9.68高剂量组0.1251.6±14.5＜0.05中剂量组0.03648.0±13.1＜0.05低剂量组0.01242.2±10.6＞0.05
从结果可以看出，本口服液对小鼠具有增强耐缺氧的作用。
3、本还阳口服液对家兔急性失血性休克影响实验
家兔15只，体重1.8-2.5kg，随机分为3组，每组灌胃给药，还阳口服液第1组为0.015g/kg，第2组为0.005g/kg，给药时间各组均为3天，于实验前加腹腔注射相同量1次，设生理盐水作对照。失血性休克模型按通常法制作，背位固定，自耳缘静脉注入20％鸟拉坦5ml/kg麻醉，用压力换能器将信号输入RM-6000多导记录仪记录血压，调整输液瓶高度使平均动脉压(MAP)维持于40-50mmHg，持续30分钟后，即将输液瓶中血液快速输回，继续慢速输入生理盐水，分别记录失血后30分钟，复血后即刻，30、60、90分钟时MAP及CVP的变化，观测动物12小时成活率。结果实验组平均动脉压MAP，中心静脉压CVP，心率HR与对照组无明显影响，对家兔因失血引起的休克耐受力增强，明显增高动物存活率。
4、对小鼠免疫功能影响实验
NIH小鼠，20g±2g雌雄各一半，由同济医科大学动物中心提供，按体重随机分组，每组10只，用药9天。
(1)生理盐水对照组，每日灌胃一次，生理盐水0.5ml。
(2)免疫抑制组(环磷酰胺CY组)每日灌胃生理盐水一次0.5ml，隔日腹腔注射一次CY50mg/kg，共五次。
(3)阳性对照组(黄芪+CY组)，每日按5g/kg灌胃黄芪液(200mg/ml)一次，隔日腹腔注射CY50mg/kg一次，共五次。
(4)单用还阳液组
a、还阳液0.05g/kg组，每日每鼠灌胃一次，
b、还阳液0.1g/kg组，每日每鼠灌胃一次，
(5)还阳液+CY组
a、小剂量组，每日每鼠还阳液按0.01g/kg灌胃一次，隔日腹腔注射CY50mg/kg一次，共五次，
b、中剂量组，每日每鼠用还阳液按0.05g/kg灌胃一次，隔日腹腔注射CY50mg/kg一次，共五次，
c、大剂量组，每日每鼠用还阳液按0.1g/kg灌胃一次，隔日腹腔注射CY50mg/kg一次，共五次，
上述各实验组，采用单向琼脂扩散法测定IgG含量，溶菌酶含量，红细胞免疫功能，包括红细胞C3b花环率，RBC-C3b花环率和红细胞免疫复合物花环率RBC-IC花环率，采用红细胞溶血分光度法，即溶血空斑试验PFC改良法测定特异性抗体形成水平，其结果是还阳口服液对正常小鼠的免疫功能无影响，还阳液中剂量组和大剂量组的IgG含量、RBC-C36花环率、RBC-IC花环率与正常对照无显著性差异(P＞0.05)。CY组的IgG的含量、溶菌酶的含量、红细胞花环形成率，特异性抗体形成水平平均显著低于正常对照(P＜0.001)，黄芪+CY组的IgG含量、溶菌酶含量、特异性抗体形成水平的均值，均高于CY组，说明阳性对照药黄芪可有效对抗CY抑制机体免疫功能的作用，还阳液与CY联合组，中剂量和大剂量组IgG含量、溶菌酶含量、RBC花环形成率和特异性抗体形成水平四项指标均显著高于CY组(P＜0.01)，并接近黄芪组水平，还阳液小剂量组与正常对照组无显著差异(P＞0.05)，说明本还阳口服液与苋芪同样具有逆转免疫功能低下的作用。
还阳液对免疫抑制小鼠免疫功能的影响 ( X±SD n＝10)
溶菌酶含量 红细胞花环率(％)
组 别 IgG(mg/ml) (103u/ml) 抗体形成OD值
RBC-C3b花环率 RBC-IC花环率
正常对照组 32.29±8.58 3.41±0.40 0.89±0.04 13.88±3.28 7.38±2.88
CY组 11.68±4.06* 2.09±0.20* 0.15±0.03* 8.17±1.93* 3.35±0.93*
还阳液+CY组 12.53±3.94 2.25±0.41 0.18±0.05 6.31±1.85 3.21±0.84
0.01g/kg
还阳液+CY组 27.84±5.35Δ 2.81±0.47ΔΔ 0.32±0.06ΔΔ 10.63±2.86ΔΔ 6.30±2.27ΔΔ
0.05g/kg
还阳液+CY组 26.71±5.52Δ 3.28±0.29ΔΔ 0.36±0.14ΔΔ 10.77±3.43ΔΔ 5.93±1.88
0.1g/kg
黄芪+CY组 31.68±8.58ΔΔ 3.13±0.49ΔΔ 0.30±0.07ΔΔ —— ——
5g/kg*P＜0.001，与正常对照组比较ΔP＜0.01 ΔΔP＜0.001，与CY组比较
5、本还阳口服液对益寿作用实验，测定对老化相关酶超氧化物歧化酶(SOD)和老化代谢产物血清过氧化脂质(LPC)的影响试验。
12月龄老年昆明纯种小鼠，雌雄各半，随机分为空白对照、维生素E阳性对照及本还阳口服液低、中、高三个剂量组，每只鼠每天给药剂量分别为0.012、0.036、0.12g/kg，维生素E组配制成乳化剂1.35mg/kg，加入饮水中自饮，对照组饮用一般自来水，连续给药两个月。
以小鼠眼底球后静脉丛采血，测红细胞SOD活性及血清LPO的含量，超氧化物歧化酶测定采用邻苯三酚自氧化法，过氧化脂质测定采用八木的硫代巴比妥酸荧光微量法，其结果如下：组 别剂量g/kg BOD活性n/gHb LPO含量(n mol/ml)对照组 1405±225 4.07±0.35高剂量组0.12 2184±327** 2.25±0.885**中剂量组0.036 1855±424* 3.06±1.01*低剂量组0.012 1464±382 3.97±1.14维生素E1.35mg 2065±350** 2.51±1.08**剂量与效应回归方程 Y＝1501+142X r＝0.9359 Y＝3.89-0.34X r＝-0.9414
对照组比较P＜0.05 **P＜0.01
结果表明本还阳口服液具有明显提高小鼠红细胞SOD活性和显著降低血清LP0含量的作用，提示本还阳口服液具有一定还阳益寿作用。
6、本还阳液对异丙肾上腺素致小鼠心率加速的拮抗作用
由同济医科大学实验动物中心提供体重17-21g昆明种小鼠50只，雌雄各半，外观健康，按性别随机分为5组。小鼠以戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射(ip)麻醉，随即各组分别ip给予生理盐水20mg/kg，本还阳液17、34和68mg/kg，普萘洛尔2.5mg/kg。固定小鼠，以50mm/s走纸速度、记录ip给药后10分钟的II导联ECG、以测算基础心率，随即ip异丙肾上腺素0.1mg/kg，并于其后0.5、1、2、4、6、10、20、30和40分钟各记录ECG一次，测算各小组小鼠不同时间的心率，并将还阳液组分别与生理盐水组和普萘洛尔组进行比较。
结果本还阳口服液以0.017、0.034、0.068g/kg预防性给药，能有效地抗异丙肾上腺素所致麻醉小鼠窦性心动过速，此作用呈剂量依赖性，表明其对快速心率具有调节作用。
实施例3，本还阳口服液的毒理实验
1、急性毒性试验
体重18-22g昆明种小鼠30只，雌雄各半，外观健康，由同济医科大学医学动物实验中心供应，按体重剂量一天内分3次灌胃本还阳口服液给予受试小鼠，给药容量为0.3ml/10g，给药总量为90ml/kg(相当于生药0.3g/kg)，对照组给予等量生理盐水。给药后即观察动物反应情况共7天，记录动物毒性反应情况和死亡分布。结果给药24小时内，仅见给药组小鼠食欲减退，日平均进食2.8克，24小时后食欲恢复正常，七天内无一小鼠死亡，七天后处死小鼠系统尸检，未发现肉眼可见病理变化，用药前小鼠体重及用药后一周小鼠体重增长与对照组比较均无统计学差异。本还阳口服液予小鼠灌胃的LD50＞0.3g/kg，相当于60kg人每天用量0.5ml/kg或生药0.0016g/kg的180倍以上。
2、长期毒性试验结果表明，本还阳口服液高剂量达0.15g/kg，用药12周，未发现大鼠的形态和功能的改变。本还阳口服液长期灌胃，未发现临床可见毒性症状，且不影响大鼠生长，对大鼠造血功能无不良影响。对肝、肾、胰等脏器官功能无不良影响，不损伤各重要器官系统的形态结构。
实施例4，本金碧还阳口服液稳定性试验
金碧还阳口服液初步稳定性试验按卫生部颁发的“新药审批办法”有关中药部分的修订和补充规定中具体要求进行，考核项目包括性状、鉴别、澄清度、相对密度、PH值、含量测定、卫生学检查。室温留样结果表明，在三个月时间内，药物稳定性试验各项考核指标均无明显变化，药物质量稳定，加速试验(低温考察法)表明，样品在37-40℃，相对湿度75％放置三个月与零月比较，所测数据基本稳定。日光灯光照考察表明，日光灯光照(照射光强度为3000LX下放置三个月与零月比较，薄层层析鉴别图谱、按月取样，三次检查，结果与室温留样考察法零月图谱一致，所测数据基本稳定。
实施例5，金碧还阳口服液治疗阳虚症临床疗效的观察，在武汉钢铁公司二医院进行。
心肾阳虚患者100例，其中男68例，女32例，年龄为28-84岁，所有患者根据脉象，舌象及症状的不同，又分为心阳虚58例(男46例，女12例)，肾阳虚42例(男22例，女20例)，年龄为18岁以上成年人，妇女未有妊娠者。
心阳虚：表现为心悸不安，胸闷气短，形寒肢冷，面色苍白，神倦乏力，舌淡或紫暗，脉细弱或沉迟。
肾阳虚：表现为腰背酸痛，遗精阳痿，面色苍白，畏寒肢冷，浮肿头晕，耳鸣，舌淡苍白，脉沉迟。
全部患者治疗前后均进行血、尿常规、肝、肾功能测定，并观察症状的改善，血阳虚患者加做心电图检查。患者每日口服两次本还阳口服液，每次10毫升，十天为一个疗程，依病情改善程度酌情延长和重复使用，个别重患者每日口服三次，每次10毫升，增为三个疗程，所有患者服药期均停服其它中药。结果效果显著者各种症状消失，舌象脉象恢复正常，精神善良好者共有59例，症状基本消失，舌象、脉象改善，精神明显好转者34例，有7例效果不显著，证明本金碧还阳口服液对阳虚患者不显著疗效，总有效率达93％。对7例无效者对血、尿常规及肝、肾功能测定，均未发现任何损害，无一例患者诉有其它不适。
本金碧还阳口服液中的人参、三七、鹿茸有较强的补气状阳之功能。附片有较强的温阳、改善心功能独特疗效。附子为一有毒性药物，由于组分和饱制合理，所有病例服满三个疗程后，未见有任何肝、肾损害及血、尿常规的改变。
综上所述，本发明的金碧还阳口服液实为一治疗阳虚症有效，而又安全无毒的药物。