本发明与从硬骨鱼得来的鱼生长激素和使用鱼生长激素来促进鱼的生长的方法有关。 哺乳动物的生长激素是在脑下线中生成的。哺乳动物生长激素的活性和结构都已经知道。例如，人的生长激素在下列刊物中均有报导：
U.J.Lewis：J.Am.Chem.Soc.，80，4429（1958）
A.S.Hartree：Biochem.J.，100，754（1966）
C.H.Li：Arch.Biochem.Biophys.（Suppl.），1，
327（1962）
已经发表许多有关鱼生长激素的分离的报告如下：
“从Tilapias（一种鱼名-译者）中分离”，S.W.Farmer等人著，Gen.Comp.Endocrin.，30，91（1976）
“从鲟鱼中分离”，S.W.Farmer等人著，
Endocrinology，108，377（1981）
“从鲤鱼中分离”，A.F.Cook等人著，Gen.
Comp.Endocrin.，50，335（1983）
本发明者从鲑鱼的脑下线抽提出一种生长激素，确定它是一种多，并求得其分子量和氨基酸在激素的N-端和C-端的顺序，这是与哺乳动物的生长激素相似的生长激素。此外，本发明者证实本发明的生长激素能促进硬骨鱼类的生长。因此，本发明已经完成。
附图的简要说明
图1 表示从硬骨鱼得来的鱼生长激素的紫外光谱。
图2 表示以盐酸和丙酮的混合液处理O.keta的脑下线，用碱地水溶液抽提处理的脑下线并以交联葡聚糖凝胶G-25分馏柱把脑下线抽提物加以分馏而得来的洗脱图形。
图3是SDS＊聚丙烯酰胺电泳图，根据电泳的迁移距离测定了鲑鱼生长激素的分子量。使用标准蛋白质标记器No44223 2 U（BDH化学公司的产品）。分子量为14.3K＊＊、28.6K、42.9K和57.2K的分别相当于单体、二聚物、三聚物和四聚物。
以下详细叙述本发明。
本发明与从硬骨鱼得来的鱼生长激素和使用鱼生长激素来促进鱼的生长的方法有关。
根据本发明用碱的水溶液从属于鲑鳟亚目的鱼的鱼脑下线中抽提出鱼的生长激素。生长激素的理化性质如下：
（1）氨基酸组成：如表1所示。
＊SDS为Sodium dodecyl sulphate（十二烷基硫酸钠）的缩写-译者
＊＊K＝千
-译者
表1 氨基酸的组成（注1）
氨基酸 鲑鱼的生长激素 Tilapia
鱼的生长激素
天冬氨酸 28.0 19.3
苏氨酸 6.8 12.0
丝氨酸 11.7 21.4
谷氨酸 22.5 29.1
脯氨酸 3.7 6.8
甘氨酸 7.3 7.4
丙氨酸 6.6 8.2
半胱氨酸 3.3 4.6
缬氨酸 10.7 6.0
蛋氨酸 2.7 1.2
异亮氨酸 10.6 9.0
亮氨酸 28.5 27.2
酪氨酸 6.8 7.2
苯丙氨酸 6.8 6.7
色氨酸 -（注2） 1.0
组氨酸 4.2 5.0
赖氨酸 12.6 8.2
精氨酸 8.6 11.0
注1 全部数值都是每摩尔的残基数。
注2 从Tilapia鱼分离出的生长激素，引自Gen.Comp.Endocrin，30，91（1976）。
注3 借紫外吸收作分析结果，每摩尔的色氨酸残基数作1来测定。
（Ⅱ）在N-端的33个氨基酸和C-端的23个氨基酸的顺序如下：
N-端：
H2N-异亮氨酸-谷氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺-精氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-天冬酰胺-异亮氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丝氨酸-精氨酸-缬氨酸-谷氨酰胺-组氨酸-亮氨酸-组氨酸-亮氨酸-亮氨酸-丙氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸-蛋氨酸-苯丙氨酸-天冬酰胺-天冬氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-苏氨酸-亮氨酸-亮氨酸-
C-端：
-蛋氨酸-组氨酸-赖氨酸-缬氨酸-谷氨酸-苏氨酸-酪氨酸-亮氨酸-苏氨酸-缬氨酸-丙氨酸-赖氨酸-半胱氨酸-精氨酸-赖氨酸-丝氨酸-亮氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬酰胺-半胱氨酸-苏氨酸-亮氨酸-OH
（Ⅲ）分子量：大约22，000。
（Ⅳ）紫外吸光谱：入量大277毫微米（图1）。
（Ⅴ）溶解性：可溶于碱性水溶液中，难溶或不溶于中性和酸性水溶液。
（Ⅵ）按碱性或酸性分类：酸性多肽。
（Ⅶ）等电点：5.6-5.7。
（Ⅷ）物质的颜色和形状：白色粉末。
（ⅸ）聚丙烯酰胺电泳：单频带的
用SDS聚丙烯酰胺电泳（9.9%聚丙烯酰胺/0.1%SDS）检测本发明的鲑鱼生长激素的纯度。
在110℃，于20%的恒沸点盐酸中使物质水解22小时后用LKB4，400型氨基酸自动分析器分析氨基酸的组成。把470A型顺序仪（AppIied Biosystem Co.的产品）和高压液相色谱（Spectra Physics Co.的产品）联合使用，进行生长激素N-端和C-端上氨基酸顺序的分析。
本发明的生长激素，与分离多肽的常规方法相似，是用丙酮抽提的方法，从在河里游泳并升上河来的3-4岁的雌性OnCOrhynchus Keta的脑下腺中制得的。
例如，把35%的浓盐酸和丙酮的混合溶液（10∶90-90∶10）加到脑下腺中，并用均化器在500-2，000转/分下使脑下腺旋转5-10分钟。加入同样盐酸和丙酮的混合溶液，搅拌混合物，并在冷却到-5至5℃时于10，000-20，000转/分下加以离心分离10-60分钟（以下将同样应用）。除去上层清液，并把50-90%的含水丙酮加进残余物中。搅拌混合物并在冷却下加以离心分离。把生成的残余物在悬浮在水中，用饱和的氢氧化钙水溶液调节悬浮液的PH在9-11之间。搅拌悬浮液并在冷却下加以离心分离。使上层清液渗析掉水并冻干以便得到粉末。使粉末悬浮在水中，用NaOH的水溶液调节悬浮液的PH到5-7之间。用离心分离除去不溶物，并以盐酸调节上层清液的PH到5-6之间。用离心分离回收生成的沉淀。
把沉淀溶解在醋酸铵水溶液中（PH8-10，0.05-0.5摩尔）并加以交联葡聚糖凝胶柱色谱分离。以同样的醋酸铵水溶液进行饱和和洗脱。合并活性馏份并冻干以得白色粉末。使白色粉末在TSK凝胶ODS-120T柱上（TOyoSoda Manufacturing Co.Ltd的产品）加以高压液相色谱分离以便最后净化。合并活性馏份并冻干，便得到成白色粉末的本发明的生长激素。本生长激素的纯度大约为100%。
用以下使用霓虹斑鳟鱼（Salmo irideus）的例子中所述的方法测定生长激素的活性。
已经发现本发明的生长激素能促进硬骨鱼类（Osteichthyes）的生长，并对包括斑鳟鱼和鲑鱼在内的（Iupeiformes的培养是有用的。在腹膜内注射的情况下，在4-7天的期间内，每1克体重注入0.01-0.1微克生长激素。
以下例说明本发明的一特别具体情况。
例子
（1）Oncorhynchus Keta的生长激素的抽提和提纯：
在这一步中，把50毫升35%浓盐酸和丙酮（1∶28）加到50克3-4岁雌性Oncorhynchus leta的脑下腺中，并用均化器在1，000转/分下使脑下腺旋转10分钟。然后，加入250毫升上述同样的盐酸和丙酮的混合溶液，在0℃把混合物搅拌一小时，并在冷却到-4℃时于15，000转/分下加以离心分离经30分钟。除去上层清液，把300毫升80%丙酮水溶液加到残余物中。在0℃搅拌混合物一小时，并以上述同样的方式在冷却下加以离心分离。生成的残余物悬浮在300毫升的水中，以饱和的氢氧化钙水溶液调节悬浮液的PH至10。在4℃搅拌悬浮液一小时，并以上述同样的方法在冷却下加以离心分离，以便得到上层清液。把上层清液渗析掉水并冻干，大约得到850毫克的粉末。把粉末悬浮在250毫升水中，并以0.1N NaOH水溶液调节悬浮液的PH至10.3。用离心分离除去不溶物，并以0.1N盐酸调节上层清液的PH至5.66。用离心分离回收生成的沉淀。把沉淀再悬浮在250毫升水中，重复上述同样的连续手续，便得到60毫克的沉淀。
把沉淀溶解在2毫升0.1M的醋酸铵水溶液中（PH9.0）并通过以0.1M醋酸铵水溶液（PH9.0）饱和过的交联葡聚糖凝胶G-75柱（1.9φ×66cm）。以如上述同样的醋酸铵水溶液进行洗脱，以每个馏份2毫升回收洗脱液。合并图2所示B下的各馏份，渗析和冻干，得20毫克的白色粉末。然后，把0.5毫克的白色粉末溶解在含1M尿素的100微升0.1%的三氟醋酸溶液中，于是注入TSK凝胶ODS-120T柱的凝胶中。在40℃时以1毫升/分的流速用含0.1%三氟醋酸的20-60%（体/体）的乙腈进行洗脱40分钟。在220毫微米下进行生长素的检测。以55%的乙腈洗脱生长激素。冻干洗脱液，大约得0.4毫克的白色粉末，它是纯度约为100%的生长激素多肽。
（2）分子量的测定：
上述生长激素在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（9.9%聚丙烯酰胺/0.1%SDS）上展开。使用BOH Chemicals的标准蛋白质标记器作为标准蛋白质（分子量143，000，286，000，429，000和572，000），得出校准曲线，用图3所示的校准曲线计算出分子量约为22，000。以单频带的形式检测出生长激素。
（3）N-端和C-端氨基酸顺序的分析：
在这一步中，把40微克从Oncorhynchus keta得到的生长激素溶解在0.1%十二烷基硫酸纳溶液中，用470A顺序仪（Applied Biosystem Co）和SP8000高压液相色谱（Specta Physics Co）分析N-端，以测定从第一个至第33个（N-端）的连接顺序，同时在以溴化氰使生长激素降解和使含C-端的碎片提纯后测定C-端氨基酸残基的顺序。
N-端：
H2N-异亮氨酸-谷氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺-精氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-天氨酰胺-异亮氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丝氨酸-精氨酸-缬氨酸-谷氨酰胺-组氨酸-亮氨酸-组氨酸-亮氨酸-亮氨酸-丙氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸-蛋氨酸-苯丙氨酸-天冬酰胺-天冬氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-苏氨酸-亮氨酸-亮氨酸-
C-端：
-蛋氨酸-组氨酸-赖氨酸-缬氨酸-谷氨酸-苏氨酸-酪氨酸-亮氨酸-苏氨酸-缬氨酸-丙氨酸-赖氨酸-半胱氨酸-精氨酸-赖氨酸-丝氨酸-亮氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬酰胺-半胱氨酸-苏氨酸-亮氨酸-OH
（4）紫外吸收光谱的测定：
在0.1M醋酸铵水溶液中（PH9.0），用UVIDECI-型分光镜（Nippon Bunko Co）测量上述生长激素的紫外吸收光谱。最大吸收光谱是在277毫微米处。
（5）鱼生长激素活性的测定：
称量8-10克孵出后4-7个月的霓虹斑鳟鱼（一组含5条霓虹斑鳟鱼）使适应个别需要。在3天的时间内把从Oncorhynchus keta脑下线分离出的生长激素、Oncorphynchus keta PRL（催乳激素）和氯化纳作腹膜内的注射五次，每次1微克。按霓虹斑鳟鱼体重1.5%的重量在早晨和晚上每天把霓虹斑鳟鱼喂两次，并在17L∶7D浅黑周波下（以电灯照射来控制）把水温维持在3.5-7.5℃。从第一次注射起在20天内霓虹斑鳟肉增加的体重如表2所示。
结果证明本发明的生长激素促进霓虹斑鳟鱼的生长。
表2